Đang tải... (xem toàn văn)
PHÂN TÍCH CHẾ PHẨM BACILLUS THURINGIENSIS 1
CHƯƠNG 1: LỜI MỞ ĐẦU 1.1. Đặt vấn đề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`P4H@D$@0BDHEN$E/ %VHE,-?M"+22=065&# 2+ ) 4=$ + a2 *. >$ > !12$ HE & # )B E$BD4L?M--H4CB$B"1$ B52E-'!5>/%8G4C28&7!`P 4H@DHEN*5,GB#$&%=P4H B 4 &T B & &' *> C &% = P 4H 4 C Bacillus thuringiensis]^_%2=P4HB4%%< &72 &= BHE N B &=B 2+ )&' < )*>C X 5EB`;CJ=P4H4C^/BD &02 @0 5 *' # !12 = P 4H 4 C Bacillus thuringiensis ]^_ * # 4K ; C$ E / BD "72 5 *'DEBW`:!<"%"(B<!.!-!>D S B EE/ &< “phân tích chế phẩm Bacillus thuringiensis” &' >DI2HE?>&';S"725*'B!. !-!#"72#!12 1.2. Mục đích bHE?>!.!-!-&5*'40!12J=P 4H4C^%&8E/3/5*'J& E"+N2 O cHG&*'d4=@LBacillus thuringiensis# !12 cb-&D;0/?D4H8J#!12^ e CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1. Thuốc trừ sâu sinh học Bt 2.1.1. Lịch sử &/B(2fgh$@-C4)-!&T!- D 2 * B "1 HE@D I2 B &: /* Bacillus bombycis&%B(2i$+YC)ZK*^* &T!-D*B"1E/*4H-26 BYZ 0B&:/*Bacillus thuringiensis]B#9*^_&%&# "0,# "jbb$)&T !-D<J^"k 4 /<*4H"-4H$4H"$4H%2+P &%B"1^&T&'#8=P4H4L?M+ D!6<$26&+D=P4H4C^ *&/&'!-DB(2ih8X ^0@64B Cl4m$"+S2E/HHE -#& J 2 4= 4H .l4m& /!H * ! B"1 n Bacillus thuringiensis$ C &% * Bacillus sotto X(2 i$ ^? o )ZK$S25E26@2S6$2=B "1"k 4 . 7+Y$% 4KP 4H528$C * "1ThuringX(2ig$#!12^&T&'/K, >J?E<CB+D4C$)&T!-D <J^%"0("k428$405,#!12 %2*'&=BGd&&7(D*>?D4HB26 !d -?M/<*4H8<@ +Y6 <BY"G "-ZT-&%/nh*4H8 @a2-J^$&% @N2@-*4H 8%6DX2DE=P4HPB"1^&T#2! *)=P4H4C/#V6 XBD?Y*2=P4H$DE)&T-24= PB"1^p!BD =JHE&7 8-=HE "-4H=@+"-4H$=*F"-4H&MH$ 4H=*-$=+"-4HQqDX2$#!12^]Bacillus thuringiensis_ &T &' / K P (2 ig.\h#!12^ !"1B&&T"#;0=!`GD2B &N&=B24=4H8G/&N4H$@2 9$4H-2$4H.$4H8@+$4H&R-*C40!12. 28 % / ) "- < o^ O\hhhr$shhhrt ^ bEOnr$u@?8@$u@R?8?+&: s Hình 2.1. Sản phẩm Bt trên thị trường 2.1.2. Phân loại %2P 4H 4C$ % N= B 4B ] Bacillus thuringiensis_$!d?DB,DB-*84H4H=*-$ 4H.$4H$4H"$4H(8!QR%<*8= Bacillus thuringiensis / ) # o Bacilus thuringiensis B vm"74E!$856?8@LB7$#@# ??&:$?YP5Y2C8"Bacillus thuringiensis B4*44]/"-"_856?87+o? 8 ; */ 2 ^**4 44 ^* B 4*44$ !]oe_=&'+6<?8?$@52 Q?YP2w$5YN Bacillus thuringiensisB"4"]/"-^"$*$^ 4!!*4$^*_$856?8@LB7+o? &'8;*/2Bacillus thuringiensis Berliner$B"4"$ E!oOO@=&'+<?8@52 $4,E<!Y$??&:?YP5Y@!?! 4H"$4H.$4HB<*84H"-8$2B g HE(-Bacillus thuringiensisB24$856?8@L B 7 +o? &' 8 ; */ 2 ^**4 thuringiensis BerlinerB24$4E!ff@=&'+ ?8@"+B@52$?YP5Y@ !?!82$HE(-$HE0$HE+D!Bacillus thuringiensisB]/"-xEfnh_$?Y&7P@C- K"HE$$HE 2.1.3. Tính an toàn của thuốc sinh học Bt R-40!12^&'4L?MT/#$#2&#\y d40*')=P4H/)#B, (2iihRE%G&:D-*+Y%J &GR-!REG:"+06-*4B "- eh(2&'4L?MT/#$F S25E065JF4K"A)E2+) ]z$iiftxR*"tiin_{7P(2is&#(2iif 8{|D%G5fh40!12B4^&T&'&("k"72 &8H}%.\h40!12"04-&HEJ r~B<GJ40!12B4^B&T"•&I €{+N82=E72J40!12^)$& B % . 4= "- : - 4 B "+ J &G "-• ]lR$\hhh_ 2.1.3.1. Sức khỏe con người f R-/KB<GJ=P4HB4^. eh(2&TK2I"+S25E?5D06 BD(H$"-2D2*H24E/L]xR*"*$ iin_ RM ^0 BD x+ ) "| ]‚ zB2* + E‚oz_&T7",&--&=B 2G- !^&T&'L6*<*'.z4*E Xm"]z_$-?>-B<+=P4H624=) &8CJ"|5E€{#;0LD2/f)2w E(2^.28B`nE$B-E"- Q"+HE K@DS X,) ( 2^ƒE OE*/M`"+@&Ea2@D•. ,$62K!HL!%@!HJE@6?B?8?E ]&<"D!`GD2_]z$iis_ 2.1.3.2. Ảnh hưởng đến môi trường X 2 B D 4 - &5 X 2 ! ^N8 .&=@<&5B&'!H*8B?8@5&BS%"+ %"0(?E7:52;2E"+@< B,&<"D&5$B@!HJE%"!.? -4-2:)$?-&J‚R-E/&T# ,/K&* !I2&<-06JHEN^ &=B4B &5B-*+Y"-&'2*%G +D!{#;05E$F"+HE06@5*'&= B-4B &5"+!0*&G5+JF$ 2GE 0"-4B E&'L*k^B*<*'.<4B >#%70E&<"DNC>5E"+%4> i E&d;7B4B &5,--&N%E/ *D > B ^ B - &N % E/ *D > B E< = ]B4>$iin_$V"+;4-5E4>"-@D ,--&NNHE^BHE"+E7^] B4>$iis_ 2.1.3.3. Động vật và côn trùng R-LD2#/%$$*$A$-$#$"| +B25E!^"+HE,06%8 RV528I$&=V"+HE06 &#-*+Y%G:&B (24=*B @C-K]z$iis_X(2iii$%2@--B<06 %8J8!5PHE+^YJ*@2 Monarch ^--E&THE2=;H2B*8B<,J2> B ^%7HE&=B4B "+?DE/$, /K&HE5E+^HE06"+&-"7&= B;7@2Monarch/-&NXw*>/K'!- ,-"C{|BR?&T5!,+&7 HE?>;-S&--J/1B<06J+^ &=B;7@2 MonarchC&&#"#* I$#- =*.28$!^&'@7DBN&5! 8!5B/K!`GD2V/-&N 5E2C2 &8!5&<"+HE06%8/&N 2.1.3.4. Tính an toàn của cây trồng được bảo vệ bởi Bt được chứng minh nhờ các đặc tính sau h [...]... được ở cả 2 đĩa tính ra cho 1g hoặc 1ml sản phẩm Nếu tất cả các đĩa không có khuẩn lạc nào mọc, đánh giá kết quả như sau: - Ít hơn 1 khuẩn lạc Bacillus trong 1 ml sản phẩm - Ít hơn 1/ d khuẩn lạc Bacillus trong 1g sản phẩm trong đó d là hệ số pha loãng của nồng độ pha loãng ban đầu (10 -1) 3.2 Xác định hiệu quả tiêu diệt sâu hại của chế phẩm Bt 3.2 .1 Vật liệu thí nghiệm - Sản phẩm thuốc trừ sâu sinh học... mất tính độc của tinh thể vi khuẩn GVHD: ThS Trịnh Thị Lan Anh Page 21 Hình 2 .13 Sâu chết do trúng độc từ thuốc trừ sâu Bt GVHD: ThS Trịnh Thị Lan Anh Page 22 CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CHẾ PHẨM Bt GVHD: ThS Trịnh Thị Lan Anh Page 23 3 .1 Phân tích định lượng tổng số bào tử Bacillus thuringiensis trong chế phẩm 3 .1. 1 Nguyên tắc Trên môi trường đặc, mỗi vi sinh vật hoặc mỗi bào tử đứng... sâu chết ở công thí nghiệm GVHD: ThS Trịnh Thị Lan Anh Page 33 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4 .1 Kết luận Hoàn thành qui trình phân tích tổng số bào tử có trong sản phẩm Hương pháp đánh giá hiệu quả diệt sâu của chế phẩm Bt Đã xây dựng được quy trình phân tích chế phẩm Bacillus thuringiensis Qui trình này đơn giản hóa qui trình kiểm tra chất lượng GVHD: ThS Trịnh Thị Lan Anh Page 34 của chế phẩm. .. Trịnh Thị Lan Anh Page 26 - Bình nón Ống nghiệm Pipet, dung tích 1 ml và 10 ml Ống đong, dung tích 10 0 ml và 250 ml Micropipet, dung tích 10 00 µl Bông không thấm nước 3 .1. 4 Lấy mẫu và bảo quản mẫu 3 .1. 4 .1 Yêu cầu chung - Lấy mẫu theo nguyên tắc ngẫu nhiên Lượng thuốc trong mẫu phân tích cũng như trong mẫu lưu ít nhất phải đủ cho ba lần phân tích hoặc phải đủ để thực hiện các phép thử đảm bảo thu được... Máy đếm khuẩn lạc Máy đo pH Cân phân tích, có khả năng cân chính xác đến 0,1mg Kính hiển vi quang học Lò vi sóng Bể điều nhiệt, có thể duy trì nhiệt độ ở 45oC ± 1oC và 80oC GVHD: ThS Trịnh Thị Lan Anh Page 25 Hình 3 .1 Các thiết bị dùng trong phân tích A Autoclave B Máy đo pH E Máy lắc C Cân phân tích - D Máy đếm khuẩn lạc F Tủ ấm 3 .1. 3.2 Dụng cụ Bình định mức, dung tích 10 00 ml (loại A) GVHD: ThS Trịnh... học Bacillus thuringiensis Giúp việc quản lí chất lượng chế phẩm dễ dàng hơn 4.2 Kiến nghị Cần phải chú trọng đầu tư hơn nữa về mặt kĩ thuật phân tích đánh giá chất lượng sản phẩm Tiếp tục nghiên cứu xây dựng hoàn thiện kĩ thuật phân tích đánh giá chất lượng chế phẫm Bt Thường xuyên kiểm tra đánh gia chất lượng các sản phẩm Bt thường xuyên hơn GVHD: ThS Trịnh Thị Lan Anh Page 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. .. nhiệt độ 12 1oC trong 15 phút GVHD: ThS Trịnh Thị Lan Anh Page 28 Nếu môi trường sử dụng ngay, để nguội đến 45 oC ± 1oC ở bể điều nhiệt, nếu chưa sử dụng ngay thì cần bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ từ 2 đến 8oC không quá 30 ngày 3 .1. 5.3 Chuẩn bị mẫu thử Cân vô trùng khoảng 10 g (10 ml), chính xác đến 0,1mg, mẫu thử cho vào bình nón đựng 90ml dung dịch pha loãng đã tiệt trùng được độ pha loãng 10 -1 Cho... thể tích của dịch nghiên cứu Ưu điểm của phương pháp này là không phát hiện nhầm các vi sinh vật chết hoặc các mảnh xác hữu cơ Sử dụng phương pháp đếm thạch đĩa, đếm số khuẩn lạc trên môi trường thạch sau khi ủ hiếu khí ở nhiệt độ 37 oC ± 1oC trong 24h Tổng số bào tử Bacillus trong 1g hoặc 1ml mẫu chế phẩm kiểm nghiệm được tính từ số khuẩn lạc đếm được từ các đĩa nuôi cấy ở các nồng độ pha loãng 3 .1. 2... độ 12 1oC trong 15 phút Bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ 2 đến 8 oC, sử dụng trong 15 ngày 3 .1. 5.2 Chuẩn bị môi trường Cân các thành phần môi trường PCA theo bảng 1 hoặc lấy 22,5g môi trường tổng hợp, chỉnh pH sao cho sau khi khử trùng là 7,0 ± 0,2 bằng dung dịch HCl 0,1N và NaOH 0,1N Lắc đều và đun cách thủy hoặc trong lò vi sóng đến khi sôi (môi trường trong) Rót vào bình 250ml lượng môi trường 10 0ml... các chủng B thuringiensis phân lập ở Việt Nam và nguồn gen quý từ những chủng này nhằm tạo ra các chủng tái tổ hợp mới có phổ diệt sâu rộng hơn đối với một số loài côn trùng quan trọng là rất cần thiết.Đã thử nghiệm hoạt tính diệt sâu của 10 chủng B thuringiensis var kurstaki phân lập có tinh thể hình quả trám, trong đó 9 /10 GVHD: ThS Trịnh Thị Lan Anh Page 11 chủng có hoạt tính diệt 90 - 10 0% đối với