NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY LẠC TÂN PHỤ

B GIÁO DO B Y T VIC LIU PHM QUC TUN NGHIÊN CU V THC VT, THÀNH PHN HÓA HC VÀ MT S TÁC DNG SINH HC CA CÂY LC TÂN PH (Astilbe rivularis Buch Ham. ex D. Don, h Saxifragaceae) CHUYÊN NGÀNH: c hc c truyn MÃ S: 62 72 04 06 TÓM TT LUN ÁN TIC HC HÀ NI, 2015 c hoàn thành ti: - Vic liu. - i hc Hà Ni. - Vin Sinh thái Tài nguyên sinh vt, Vin Hóa hc - Vin Hàn lâm Khoa hc công ngh Vit Nam. - c - i hc Quc gia Chungnam - Hàn Quc. ng dn khoa hc: - TSKH. Nguyn Minh Khi - PGS. TS. MinKyun Na Phn bin 1:  Phn bin 2:  Phn bin 3:  Lun án s c bo v c Hng chm lun án cp Vin hp ti:  Vào hi gi ngày tháng . Có th tìm hiu lun án tn: - n Quc gia Vit Nam. - n Vic liu. DANH MC CÁC KÝ HIU, T VIT TT A. : Astilbe  : Cao chit bng ethanol t phi mt ca cây Lc tân ph COSY : Correlation Spectroscopy DPPH : 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl ESI-MS : Electron Spray Ionization Mass Spectrometry (Ph khi n t) HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Correlation HMQC : Heteronuclear Multiple Quantum Coherence HR-ESI-MS : High Resolution Electron Spray Ionization Mass Spectrometry (Ph kh      n t phân gii cao) IC 50 : Inhibitory Concentration 50% (Nng  c ch 50%) IR : InfraRed (Hng ngoi) LD 50 : Lethal dose 50% (Liu cht 50%) M : Mean (Trung bình) MeOH : Methanol MPLC : Medium Presure Liquid Chromatography (Sc ký lng áp sut trung bình) MS : Mass Spectrometry (Ph khng) NMR : Nuclear Magnetic Resonance (Cng t ht nhân) NOESY : Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy p : Probability (Xác sut) PTP : Protein tyrosine phosphatase SE : Standard error (Sai s chun) TLC : Thin Layer Chromatography (Sc ký lp mng) UV : Probability (Xác sut) XO : Xanthin oxidase 1 GII THIU LUN ÁN 1. Tính cp thit ca Lun án Cây Lc tân ph có tên khoa hc là Astilbe rivularis Buch Ham. ex D. Don, thuc h     tai h (Saxifragaceae). Theo kinh nghim dân gian ca mt s dân tc  châu Á (, Nepal, Trung Quc): thân r, r ca cây Lc tân ph c s dng làm thuc cha chng bnh phong tê thp nhc mi, cha viêm d dày mãn tính, nhim khung tiêu hóa, l, tiêu chy, sa t cung, chy máu, vô sinh, thuc b ng h   Vit Nam, cây Lc tân ph mc hoang di  Lào Cai và mt vài tnh Tây Bi dân tc vùng cao  các tnh Lào Cai (Sa Pa) và Lai Châu   , thân r cây thu   cha các chng b  c  p, chc dù vy cho n nay,  c ta u v c h thành phn hóa hc ca cây Lc tân ph. Xut phát t tình hình thc t  tài:  u v thc vt, thành phn hóa hc và mt s tác dng sinh hc ca cây Lc tân ph (Astilbe rivularis Buch Ham. ex D. Don, h  c thc hin vi 3 mc tiêu chính. 2. Mc tiêu ca Lun án 1. V thc vt hc: nh tên khoa hm hình thái quan trng, khtính đúngng nghiên cu (cây Lc tân ph). 2. V thành phn hóa hc: nh tính, phân lnh cu trúc mt s hp cht t phn trên mi mt ca cây Lc tân ph. 3. V tác dng sinh hc: c tính cp và mt s tác dng sinh hc ca cao chit và mt s cht phân lc t phi mt ca cây Lc tân ph. 3. Nhi ca Lun án 3.1. V thc vt hc - c tên khoa hc ca cây Lc tân ph thu hái ti xã Bn Khoang, huyn Sa Pa, tnh Lào Cai là Astilbe rivularis Buch Ham. ex D. Don, thuc h  tai h (Saxifragaceae). -  m thc vt mt cách chi tit, lu tiên có d liu v phân tích hoa, qu, h, r ca cây 2 Lc tân ph. 3.2. V hóa hc - c cu trúc 1 hp cht mi (acid 3  -trans- p-coumaroyloxy-olean-12-en-27-oic); 9 hp cht lu tiên phân lc t cây Lc tân ph: aquilegiolid, hyperin, isoquercitrin, engeletin, quercitrin, acid 6  -hydroxy-3-oxoolean-12-en-27-oic, 3  -dihydroxylup- 20(29)-en, acid 3      -trihydroxyolean-12-en-27-oic, acid 3  - dihydroxyolean-12-en-27-oic,     p cht: aquilegiolid, engeletin, acid 6  -hydroxy-3-oxoolean-12-en-27-oic và 3    - dihydroxylup-20(29)-en lu tiên phân lc t chi Astilbe. - Kt qu nghiên cu v thành phn hóa hc khnh các triterpenoid có nhóm carboxylic ti v trí C-27 là thành pha chi Astilbe và ca h Saxifragaceae.  -  an toàn cc lic tính cp trên chut thc nghim nh nh LD 50 : Cao chit ethanol phn i mt cây Lc tân ph không gây cht chut  mc liu cao nht có th ng ung. Li cao gp nhiu ln li cn có tác d ra tính an toàn ca ch phm. - Lu tiên công dng cha các chm dân gian ca Lc tân ph c chng minh bi th nghim tác dng gim ng vt thí nghi ra các thành phn ch yu trong Lc tân ph t có tác dng gi chng viêm. Các hp này cht gm acid astilbic, flavonoid, flavonoid glycosid, bergenin. -   u nghiên c   tác dng sinh hc thông qua thí nghim dn gc t nh hot tính c ch hong xanthin oxidase ci mt cây Lc tân ph. - c tác dng hp thu glucose vào st C2C12 ca các oleanan triterpenoid phân l l u tiên tác d  c tìm thy  các triterpenoid có nhóm carboxylic ti v trí C-27. a Lun án - ng nghiên cu (cây Lc tân phc xnh  giúp kt qu nghiên cu v hóa hc, sinh hc chính xác, tin cy. 3 - m hình thái thc vt và cu to gii phc mô t là nhng dn liu quan trng giúp cho vic nghiên cu, kim nghinh c liu Lc tân ph khi cn thit. - Kt qu nghiên cu v hóa hnh cc 1 cht mi, các oleanan triterpenoid có nhóm carboxylic  v trí C-27, các   ng nhóm ch a chi Astilbe, góp phn tiêu chuc liu, chng minh các tác dng theo kinh nghim ng nghiên cu tác dc lý mi ca các cht phân lc, hy vng tìm ra nhng cht có c, cuc sng. - Kt qu nghiên cc tính cp và các tác dng sinh h gii thích các công dng cha bnh cc liu theo kinh nghim dân gian, m  ng nghiên cu tác dng ch   ng type 2 ca các triterpenoidng ti nghiên cu phát trin thành thuu tr bnh cho cng. 5. Cu trúc ca lun án Lun án g, 31 bng, 40 hình, 20 ph lc, 147 tài liu tham kho. Lun án gm 139 trang, gm các pht v (2 trang); Tng quan (38 trang); Nguyên vt liu, trang thit b    nghiên cu (14 trang), Kt qu nghiên cu (57 trang); Bàn lun (25 trang); Kt lun và kin ngh (3 trang). A. NI DUNG CA LUN ÁN NG QUAN 1.1. THC VT HC 1.1.1. Chi Astilbe Buch Ham. ex D. Don - Chi Astilbe Buch Ham. ex D. Don thuc h i là h C tai h (Saxifragaceae). Có khong 18-24 loài, phân b phân b  châu Á, bao gc Nam Á, ngoi tr loài A. biternata - c hu ca Bc M. - Hin nay có các khóa phân loi chi Astilbe: khóa ca Chung và cs (chi Astilbe  Hàn Quc); khóa cc trng làm cnh); khóa ca Pan J.T. (chi Astilbe  Trung Quc); khóa ca Trader B.W. (da trêm hình thái, và s dng gen plasmid matK  tin hành phân tích s phát sinh loài). 4 1.1.2. Cây Lc tân ph (Astilbe rivularis Buch Ham. ex D. Don) - Tên gi:  Trung Quc gi là Lc tân ph khe sui, H ng hoc, ;  Nepal,  có tên Budho aushadhi,  - Phân b: vùng Nam Á (Kashimir, Nepal, Bhutan,   n Trung Quc và xung ti Thái Lan, Lào, Indonesia, Phillipin, Vit Nam. - Phân loi thc vt:  Trung Quc, loài A. rivularis c chia thành 3 th: A. rivularis var. rivularis, A. rivularis var. angustifoliolata, A. rivularis var. myriantha. -  Vit Nam, cây Lc tân ph ch thy phân b t nhiên  vùng núi cao , thuc huyn Sa Pa, tnh Lào Cai và mt s tnh Tây Bc u v thc vt hc. 1.2. THÀNH PHN HÓA HC 1.2.1. Thành phn hóa hc mt s loài thuc chi Astilbe Tng hp các tài liu tham kh c cho thy, thành phn hóa hc   c phân lp t các loài thuc chi Astilbe là pentacyclic triterpenoid (ch yu khung ursan, oleanan có nhóm carboxylic  v trí C- 27), flavonoid, phytosterol, dn xut ca acid benzoic, 1.2.2. Thành phn hóa hc ca cây Lc tân ph Các công trình nghiên cu trên th gii cho thy: phn trên mt có:  -sitosterol, bergenin các triterpenoid (acid 3  -hydroxyolean-12-en-27-oic, acid astilbic, 3  -hydroxyolean-12-en) và các flavonoid: quercetin, azaleatin; thân r có: bergenin, dimer bergenin, arbutin, các triterpenoid (acid 3  - hydroxyolean-12-en-27-oic, acid astilbic, acid 3  -acetoxyolean-12-en-27- oic).  Viu v thành phn hóa hc ca cây Lc tân ph. 1.3. TÁC DNG SINH HC 1.3.1. Tác dng sinh hc ca mt s loài thuc chi Astilbe - Cao chit t thân r ca mt s loài thuc chi Astilbe có tác dng chng oxy hóa, chng viêm, c ch enzym elastase, tyrosinase và  - glucosidase, có tác dng nhanh lành vt bng, kháng khi u, chng nm. - Acid astilbic phân lc t loài A. chinenis có tác dng chng viêm, ginh. - Mt s triterpenoid (khung ursan, oleanan có nhóm carboxylic  v trí 5 C-27) phân lc t chi Astilbe có tác dc vi t  gây cm y s cht t  1.3.2. Tác dng sinh hc ca cây Lc tân ph Mt s công trình nghiên cu tác dng sinh hc ca cây Lc tân ph trên th gii cho thy, cao chit t thân r có tác dng chng oxy hóa, chng viêm, kháng khuc vi t bào, và chng tiêu hóa.    T LIU, TRANG THIT B VÀ U 2.1. NGUYÊN VT LIU NGHIÊN CU - Cây Lc tân ph (Astilbe rivuralis Buch Ham. ex D. Don), mc t nhiên  vùng núi cao ti xã Bn Khoang, huyn Sa Pa, tnh Lào Cai. Thu hái toàn b cây Lc tân ph vào tháng 8, 11-12/2010; tháng 7, 9/2011; 12/2013 ra sch. - ng vt, t bào, hóa cht, dung môi. U 2.2.1. Nghiên cu v thc vt hc 2.2.1.1. Mu tiêu bn thc vt Mc ly vào 2 thi k  y mu là  xã Bn Khoang, huyn Sa Pa, tnh Lào Cai. nh tên khoa hc - i chiu bi các khoá phân lon loài và th (var.) ca chi Astilbe, h Saxifragaceae trong các tài liu chuyên kho v phân loi thc vt. - Thnh li kt qu bi các chuyên gia phân loi thc vt. - i chiu vi các mnh. 2.2.1.3. Nghiên cu gii phu Các tiêu bn gii phm kép. Quan sát i kính hin vi soi ni và chp nh bng máy nh k thut s. 2.2.2. Nghiên cc  . t xu - c lic chit bn b phân cn. 6 - Phân lp các cht bng sc ký ct (cht hp ph là silica gel pha thun, o YMC RP-18, Sephadex LH20) và MPLC. nh cu trúc hoá hc các hp cht Nhi nóng chy, góc quay cc riêng ([] 20 D : UV, IR, MS, NMR. 2.2.3. Nghiên  - Mu nghiên ct bng ethanol). - c tính cp. - ng chng oxy hóa: dn gc t do DPPH và superoxid. - nh hot tính c ch hong enzym xanthin oxidase. -    ng chng viêm c        ng carrageenan. -    ng chng viêm mn trên mô hình gây u ht thc nghim bng viên bông. - ng gi - ng gii vi trên n bng acid acetic. - Th tác dng hp thu glucose trên t t C2C12. T QU NGHIÊN CU 3.1. THC VT HC nh tên khoa hc Mô t chi ti các b phn cng (lá, thân), n (hoa, qu, ht) ca loài nghiên ci chiu vi các khóa phân loi các loài thuc chi Astilbe Buch Ham. ex D. Don, h Saxifragaceae trong các tài liu chuyên kho v phân loi thc vt và vi các mu có tên khoa hc Astilbe rivularis Buch Ham   ti Bo tàng thc vt - Vin sinh thái Tài nguyên Sinh vt và trên website ca KEW royal botanic gardens. Kt qu các mu Lc tân ph thu thp  Sa Pa, Lào Cai có tên khoa hc ca loài chính xác là Astilbe rivularis Buch Ham. ex D. Don, h  tai h (Saxifragaceae). Kt qu nghiên cc thnh li bi các chuyên gia v phân loi thc vt ca Vin Sinh thái Tài nguyên Sinh vt và Vic liu. m hình thái thc vt m ni bt: Lá kép chm ba, 2-3 ln lông chim l; phin lá 7 chét hình thoi-bu dc, trng, trc hay hình bu dc rng, không có cánh hoa. 3.1.3m gii phu 3.1.3.1. Cu to gii phu lá chét a) Cuống lá chét Gm: mô mm v, mô mm rut, trong t bào mô mm có cha tinh th calci oxalat hình cu gai. Vòng mô cng xp thành mt vòng un. Mt vòng các bó li be - g. Mng có mt bó g và 1 - 3 bó li be. b) Phiến lá chét Cu to ging vi cung lá, nng và vòng các bó li be - g b n  phía trên ca gân gia. 3.1.3.2. Cu to gii phu thân khí sinh Gm: biu bì; mô mm v; vòng mô cng gc; các bó li be - g xp thành vòng un gm 24 - 30 bó, c mt bó to  ch li ca thân, xp  phía ngoài xen k mt bó nh xp  trong, gia li be và g là ng tng. Gia các bó li be - g là tia rut, các tia này có th  trong mô mm run mô mm vn ln b chn bi mô cng. 3.1.3.3. Cu to gii phu thân r Ngoài cùng là lp bn gm 2-3 lp t bào; mô mm v có cha tinh th calci oxalat hình cu gai; các bó li be - g, mi bó có cung mô cng  phía ngoài và bó li be g xp chng  trong. 3.1.3.4. Cu to gii phu r Lp bn: nhiu lp t bào bn; mô mm v u tinh th calci oxalat hình cu gai; Li be cp 2 gm 17 - 22 bó  phía ngoài có 3 - 9 tng si xen k vi mô mm li be, phía trong là mn các t bào mô mm li be; tng phát sinh li be - g; g cu mch g, si g và mô mm g; gia các bó li be - g là tia rut, tia rut có th vào n gn tâm hoc ch có  phn li be.  nh tính các nhóm cht h   kt lun trong phn trên và i m t ca cây Lc tân ph cha: saponin, triterpenoid, phytosterol, flavonoid, tanin, carbohydrat.   nh cu trúc hóa hc ca các hp cht phân lp t phn trên mt [...]... 3-dihydroxyolean-12-en27-oic (Hỡnh 3.32) Cỏc hp cht SR-8, SR-9, SR-10 ln lt c xỏc nh quercetin (SL-5), quercitrin (SL-9) v bergenin (SL-10) ó c phõn lp v xỏc nh cu trỳc phn trờn mt t Lc tõn ph 3.3 TC DNG SINH HC 3.3.1 c tớnh cp ca CDMLTP Khi dựng theo ng ung CDMLTP vi liu 24 g/kg (tng ng 573 g dc liu/kg), l liu cao nht cú th cho chut ung c, khụng th hin c tớnh cp trờn chut nht trng 3.3.2 Tỏc dng chng oxy... (quercetin, quercitrin) Kt qu nghiờn cu v thnh phn húa hc cũn gúp phn lm sỏng t cụng dng cha bnh viờm khp dng thp, gim au,ca Lc tõn ph c s dng trong theo kinh nghim dõn gian mt s nc chõu 4.3 V TC DNG SINH HC 4.3.1 V c tớnh cp Vi liu cao nht cú th cho chut ung c, khụng cú chut cht lụ th nghim nờn cha xỏc nh LD50 ca CDMLTP Nh vy, theo ng ung CDMLTP cú phm vi an ton rng 4.3.2 V tỏc dng chng oxy húa CDMLTP... engeletin, acid 6-hydroxy-3oxoolean-12-en-27-oic, 3-dihydroxylup-20(29)-en ln u tiờn phõn lp c t chi Astilbe 3 hp cht cựng c phõn lp c t phn trờn mt t v phn di mt t l: quercetin, quercitrin, bergenin V tỏc dng sinh hc - Lc tõn ph cú c tớnh thp: liu mc liu th 24 g CDMLTP/kg chut nht trng (tng ng 573 g dc liu/kg), khụng gõy cht tt c chut ca lụ th nghim - CDMLTP cú tỏc dng dn gc t do DPPH vi IC50=21,8 g/ml; dn... y hc, trong cuc sng - Tip tc nghiờn cu sõu v c ch tỏc dng chng viờm, gim au ca phn trờn mt t ca cõy Lc tõn ph lm sỏng t cụng dng ca dc liu c s dng theo kinh nghim dõn gian - Tip tc nghiờn cu tỏc dng sinh hc ca cỏc triterpenoid cú trong cõy Lc tõn ph cú th tỡm ra nhng hng mi v nghiờn cu phỏt trin thuc t mt loi dc liu Vit Nam - Nghiờn cu c tớnh trng din ca Lc tõn ph v nghiờn cu ỏnh giỏ tỏc dng hng . trang, gm các pht v (2 trang); Tng quan (38 trang); Nguyên vt liu, trang thit b    nghiên cu (14 trang), Kt qu nghiên cu (57 trang); Bàn lun (25 trang);. oleanan triterpenoid và d liu ph cng vi ph hp cht SR-4 (acid 3β-hydroxyolean-12-en-27-oic). Hp cht SR-2 có th là acid 3β- hydroxyolean-12-en-27-oic cha mt nhóm trans-p-coumaroyl dng nhanh lành vt bng, kháng khi u, chng nm. - Acid astilbic phân lc t loài A. chinenis có tác dng chng viêm, ginh. - Mt s triterpenoid (khung ursan, oleanan có nhóm