Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm Tổng quan một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ lipip máu của thuốc trên động vật thực nghiệm
Trang 1TRUONG DAI HOC DƯỢC HÀ NỘI
NGUYÊN THỊ HƯƠNG LAN
TỔNG QUAN MỘT SỐ MƠ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG
HẠ LIPID MÁU CỦA THUỐC
TREN DONG VAT THỤC NGHIÊM
KHOA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ
Người hướng dân:
Trang 2LỜI CÁM ƠN MỤC LỤC
DANH MUC CAC CHU VIET TAT DANH MUC CAC BANG VA HINH DAT VAN DE
PHAN 1: HOI CHUNG TANG LIPID MAU VA THUOC DIEU TRỊ 2
Lt i LL Leh 1.1.4 1.13: 1.1.6 1.2 Ld 12
Hoi chitng tang Lipid HẦU ceeeecoeeeeeeeeeeeieeeeeseeeeeeeeeeeree 2 Định nghĩa - << SH nhớ 2 FT TT 6b b2 4g kc4365066c2xavefeccossse04sxxaxs0s56ssvoiea 2 Lipoprotein và sự vận chuyền lipiđ .-. : << <2: 3 VEE MINE sáng Gia G101 G0GL0ERBQSSIDMEGISQEGXISNSEGEESXSGeSagliocBlt€4 6 Tăng lipid máu với bệnh vữa xơ động mạch 8
Freres trees ẽổ cm nnS nan dốn §
Các thuốc điều trị hội chứng tăng lipid máu - 11
Thuốc có nguồn gốc tổng hợp hóa dược .- ‹- 11
THING GO nøiiu pốc đồng đƯỜE cccccccccno có 6 66146336610v56 t5ya8sá se 15
PHAN 2: MOT SO MO HINH NGHIEN CUU TAC DUNG HA LIPID 17
MÁU CỦA THUÓC TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM
2.1, Mơ hình nghiên cứu tác dụng hạ lipid máu của To Ÿ-Ÿ.Ÿve 17 2.1.1 _ Mơ hình gây tăng lipid máu bằng con đường ngoại sinh 17
2.1.2 Mơ hình gây tăng lipid máu bằng con đường nội sinh 24
Trang 33232 Ucehe hidp tia cholestet0l scisssseseveccevezeeacseesaneecsncsveevevnarn 39
223; Lam iin Goan chit ky gan — 0066 sii cwccsaccsessseniventeenaniensaessans 43
B15 Turecl rey Wis THÍ seaaaaaaaaoteeioboaotoaosayeoouassaeotessawevavse 43
su, ĐƠN{HÓNW GC feoeptlor horfton:nHẰM :.s.auoecoeceiocsoeooeeeaes.eee 45
PHAN 3: BAN LUẬN VẺ CÁC MƠ HÌNH NGHIÊN CỨU 51
3,1 Mơ hình nghiên cứu tác dụng hạ lipid máu của thuốc 51
3.2 Mô hình nghiên cứu cơ chế hạ lipid máu của thuốc 55
3.33 Bước đầu lựa chọn mơ hình nghiên cứu phù hợp với thực tế ở 58 VIỆC TNHÙ gu gga vũ Giát001064046446404666G6668519114E03843449034w34s6
Trang 4
ACAT Cholesterol acyltransferase
Al Atherogenic index (chỉ số vữa xơ động mach)
ALAT Alanin amino transferase
ApoLp Apolipoprotein
ASAT Aspartat amino transferase
CH Cholesterol Chyl Chylomicron
ES Embryonic stem cell (té bao phôi)
FXR Farnesoid X receptor
GOT Glutamat-oxaloacetat transminase
GPT Glutamat-pyruvat transaminase
HDL High density lipoprotein (lipoprotein ty trong cao) HDL-C High density lipoprotein cholesterol
HMG-CoA Hydroxyl methyl glutaryl coenzym A
IDL Intermediate density lipoprotein (lipoprotein tỷ trọng trung bình)
LDL Low density lipoprotein (lipoprotein ty trong thap) LDL-C Low density lipoprotein cholesterol
LIF Leukemia inhibitory factor (tác nhân ức chê bệnh bạch câu)
Lp Lipoprotein LXR Liver X receptor
PCR Polymerase chain reaction (phan tmg khuéch dai gen) PPAR Peroxisome proliferator activated receptor
T-C Total cholesterol (cholesterol toan phan) TG Triglycerid
VLDL Very low density lipoprotein (lipoprotein ty trong rat thap) VXDM Vữa xơ động mạch
Trang 5Bang 1.1 Bang 1.2 Bang 1.3 Bang 1.4 Bang 1.5 Hinh 1.1 Hinh 1.2 Hinh 2.1 Hinh 2.2 Hình 2.3
DANH MUC CAC BANG
Phân loại hội chứng tăng lipid máu eee eee eee eee ee eee eee eee ee 8
Chức năng sinh lí của apolipoprotein : - - - - -
Các đạng tăng lipid máu nguyên phát ‘
Cúc dạng từng Hpid máu thử phật ssescrvscscesess crecseseeveeree vere:
Điều trị bằng chế độ ăn uống đối với người có CH huyết cao
(NCEP) eee eee
DANH MUC CAC HINH
Cau tric cua lipoprotein ee
Chuyén hda lipoprotein @eeereeecaeeeeeeeesse ee eweeees ees ee eee eee eee ee ee
Con đường chuyền hóa fructose trong gan
Con đường sinh tơng hợp cholesterol -‹‹ -‹- Mơ hình gây LXR trên chuột apoE” và LDLr ˆ “ c
NY
HD
+
Trang 6Lipid có vai trị rat quan trọng trong cấu tạo tế bào, cung cấp và dự trữ năng
lượng của cơ thể Rối loạn lipid máu sẽ gây nên nhiều bệnh lý về gan, tim mach
trong đó nỗi bật là bệnh vữa xơ động mạch Tỷ lệ mắc vữa xơ động mạch đang có
chiều hướng gia tăng trên toàn thế giới và đây được coi là một trong những bệnh
gây tử vong hàng đầu hiện nay Cá biệt, theo Oliver và Boyd, ở Anh từ 1922 -
1966, trong khoảng 34 năm tỷ lệ mắc bệnh này tăng tới 70 lần Ở Pháp, tỷ lệ tử
vong do các bệnh lý tim mạch khoảng 40%, cao hơn tỷ lệ tử vong do ung thư 23%
Ở Việt Nam, những bệnh này trước đây ít gặp nhưng những năm gân đây đang có
chiều hướng gia tăng theo nhịp độ phát triển của xã hội [7] [12]
Vì những nguyên nhân trên nên việc nghiên cứu các thuốc điều trị bệnh tăng
lipid máu trở nên ngày càng cần thiết và cấp bách Tuy nhiên, một thuốc muốn được
đưa vào sử dụng cần phải được chứng minh tác dụng của chúng, trong đó có bước
thử nghiệm quan trọng cần tiến hành trên động vật thực nghiệm Điều này đòi hỏi
cần phải xây dựng những mơ hình gây tăng lipid máu để nghiên cứu tác dụng hạ lipid máu của thuốc cũng như cơ chế hạ lipid máu của thuốc trên những mơ hình thích hợp Hiện nay, đã có rất nhiều mơ hình nghiên cứu tác dụng hạ lipid máu của thuốc nhưng lại chưa có một tài liệu hay một quy trình nào tổng kết một cách hệ
thống các mơ hình này Chính vì vậy, chúng tơi tiễn hành đè tài: “Tổng quan một
số mơ hình nghiên cứu tác dụng hạ lipidl máu của thuốc trên động vật thực nghiệm”
Mục tiêu của đề tài:
- _ Tổng quan một số mơ hình nghiên cứu tác dụng hạ lipid máu của thuốc trên
động vật thực nghiệm
- Tổng quan một số mơ hình nghiên cứu cơ chế hạ lipid máu của thuốc trên
thực nghiệm
Trang 71.1 HỘI CHỨNG TĂNG LIPID MÁU
1.1.1 Dinh nghia
Hội chứng tăng lipid mau là tinh trạng triglycerid (TG) hoặc cholesterol (CH) hoac ca hai tang cao trong mau
1.1.2 Phan loại
Có 2 cách phân loại hội chứng tăng lipid máu dựa vào các thành phan lipid
mau hay cac thanh phan lipoprotein (Lp) mau
1.1.2.1 Phân loại theo các thành phân lipid máu
De Gennes chia hội chứng tăng lipid máu thành 3 thẻ: - Hội chứng tăng CH máu:
+ Bình thường: CHÍ trong máu < 5,2 mmol/I (< 200 mg/dl)
+ Tăng giới hạn: CH trong mau tur 5,2 — 6,2 mmol/] (200 — 239 mg/dl)
+ Tang CH mau khi > 6,2 mmol/l (> 240 mg/dl) - Hội chứng tăng TG máu:
+ Binh thuéng: TG mau < 2,26 mmol/l (< 200 mg/dl)
+ Tang gidi han: TG tt 2,26 — 4,5 mmol/l (200 - 400 mg/dl)
+ Tang TG: TG tir 4,5 — 11,3mmol/] (400 - 1000mg/dl)
+ Rat ting: TG mau > 11,3 mmol/l (> 1000 mg/dl) - Hội chứng tăng lipid máu hỗn hợp:
Khi CH > 6,2 mmol/l va TG trong khoang 2,26 — 4,5 mmol/l
1.1.2.2.Phân loại dựa vào thành phần lipoprotein máu (phân loại quốc tế)
Nam 1965, Fredrickson dựa vào tiến bộ kỹ thuật tách được các thành phan
Lp nên đề nghị phân loại theo các thành phần Lp máu xếp hội chứng tăng lipid máu
thành 5 typ Bảng phân loại này nhanh chóng được chấp nhận, sau đó người ta chia
Trang 8Typ Il Tang 6 lipoprotein mau
Ila Tang CH mau nguyén phat
IIb Tăng lipid máu hỗn hợp gia đình Typ II Rôi loạn lipoprotein B máu
Typ IV Tăng TG máu nội sinh hay tăng VLDL máu
Typ V Tăng TG máu hỗn hợp hay lipid máu hỗn hợp
1.1.3 Lipoprotein va su van chuyén lipid © Cáu trúc của lipoprotein
Lipid không tan trong nước Trong các tế bào, tổ chức và các dịch sinh vật,
lipid luôn ở dạng phức hợp với protein gọi là lipoprotein (Lp) Lp tan trong nước
nên nó lưu thông được trong máu Các thành phần của protein trong Lp là apolipoprotein (apoLp) [2] Triglyceride LDL HDL Size (A) 750-12 000 300-800 250-350 180-250 50-120 Density (gmi-*) < 1.006 1.006-!019 1018-1063 1.063-1210
Hình 1.1 Cấu trúc của lipoprotein
Về mặt cấu trúc, ngoài thành phần protein, Lp cịn có các thành phần khác
Trang 9quyết định sự nhận diện của một Lp nhất định bởi chất nhận của màng (receptor)
Người ta đặt tên các chữ A, B, C cho các apoLp chính; D và E cho các ApoLp ít
hon ApoLp A va C lai có các nhóm phụ A¡, A; và C¡, C; và C; ApoLp B có chứa
2 dạng phân tử khác nhau B„; và Bọ ApoLp có 3 dạng là Ea, Ea, Ea Bang 1.2 Chức năng sinh lý của apolipoprotein
ApoLp Phân tử lượng Chức năng ApoA¡ 28 300 Hoạt hóa LCAT
ApoB 250 000 Gan LDL véi receptor-LDL
ApoC, 10 000 Hoat héa lipoprotein lipase
ApoE:-a 32 000 — 39 000 Vận chuyên cholesterol
e Nguôn gốc, chức năng của 4 loại lipoprotein và quá trình chuyển hóa lipid [2j[7]
Lipoprotein có 2 nguồn gốc: nội sinh và ngoại sinh Gan tông hợp các Lp nội
sinh từ các sản phẩm cua lipid, glucid, các acid amin Q trình tơng hợp xảy ra trên bề mặt của hệ thống lưới trong chất nguyên sinh của tế bào gan Lp ngoại sinh được
tạo ra từ ruột, có thé chuyén hóa ở gan
Trang 10tương tác với lipoprotein lipase ở mao mạch nội mô để thủy phân TG thành acid
béo tự do hấp thụ ở mô cơ và mỡ, biến Chyl thành Chy! tồn dư ít TG hơn và giàu
CH este hơn, đến gan sẽ được thâu tóm và tiêu hóa trong lysosom cho CH tự do
VLDL được tông hợp ở tế bào ruột, apoLpBiao, C, E và có vat trị chính vận
chuyền TG nội sinh Nó tương tác với Lp lipase để thủy phân bớt TG làm cho kích
thước VLDL giảm dần, được gọi là VLDL tồn dư hoặc IDL Một nửa IDL được
chuyển hóa ở gan, phần cịn lại tiếp tục mất dần TG để trở thành LDL
LDL vận chuyển CH tới mô và tương tác với receptor-LDL trên màng tế
bào Các hạt LDL được tế bào thâu tóm, CH được dùng để tông hợp steroid tham
gia thành phần màng tế bào Các tế bào thâu tóm LDL nhờ các receptor LDL Receptor-LDL có ở hầu khắp mọi tế bào, đặc biệt ở tế bào thâu tóm cholesterol
Receptor-LDL có thể gắn nhiều loại Lp như LDL, IDL và HDL Ở gan nêu có nhiều
receptor-LDL thì đa số các hạt IDL được loại khỏi máu và chỉ một số ít chuyển
thành LDL Nếu có ít receptor-LDL thì sự phân giải IDL ở gan sẽ ít hơn và lượng lớn hơn IDL, sẽ được chuyền thành LDL Như vậy lượng receptor-LDL giảm tạo thành sự tăng LDL trong máu và thối hóa của chúng chậm lợi LDL được thâu tóm theo cơ chế am bào thông qua receptor LDL gắn trên receptor-LDL với ái lực cao thông qua trung gian apoB¡oo của LDL Phức hợp LDL-receptor-LDL được nhắn chìm vào trong bào tương, đồng thời tạo thành túi chứa phức hợp gọi là endosom pH trong endosom thấp hơn làm cho phức hợp phân ly: receptor có thể quay ra mặt
tế bào, còn LDL hòa nhập vào lysosom, giải phóng cholesterol và acid amin Sự
điều hòa receptor-LDL theo cơ chế kiểm soát ngược: Khi nhu cầu cao tế bào tăng
tông hợp receptor để tăng nhận CH từ ngoài vào Ngược lại tổng hợp receptor giảm
khi thừa CH Chính sự điều hòa này tránh cho tế bào không quá tải CH và giữ cho
Trang 11đường mật Trong vữa xơ động mạch (VXĐM), HDL có vai trị bảo vệ, nghĩa là
lượng HDL càng cao thì nguy cơ bị VXĐM càng thấp
1.1.4 Nguyén nhén [8][9]{12][13]
Có nhiều nguyên nhân gây tăng lipid máu, thường được chia thành 2 loại: 1.1.4.1 Tang lipid mau do di truyền (hay tăng lipid máu nguyên phát)
Tăng lipid máu do di truyền thường có mức độ tăng thường rất cao do khuyết
tật di truyền về chuyên hóa hay vận chuyển lipid (ví dụ khơng có receptor LDL)
Các bệnh tiên phát do di truyền hay gặp là tăng CH máu gia đình dạng dị hợp tử
(tần số 1 : 250), loại ít gặp là thiếu hụt lipoprotein lipase gia đình (tần số
1 : 1 000 000) Da sé người bị tăng lipid máu thường thuộc typ đa yêu t6 Người ở dang đơn gen thường có nơng độ lipid cao hơn người ở dạng đa gen Người ở dạng
đa gen thường đáp ứng tốt hơn với chế độ ăn kiêng (Bảng 1.3.)
Bảng 1.3 Các dạng tăng lipid máu nguyên phát
Rồi loạn Khuyéet tat bam
Tang Lp mau Cơ chế
sinh
Đơn gen thiêu hụt Thiếu hụt Lp lipase | chylomicrom Giam thuy phan TG
Lp lipase trong chylomicrom
Tang Lp gia dinh Dang bat thường Chylomicrom eee thối hóa typ IH của apoE tan du va IDL chylomicrom ton du
(rôi loạn B Lp) va IDL
Tang CH huyết gia s Giảm thối hóa LDL,
đình “THIẾU MT THÊ ĐUẤ tăng chuyên IDL sang
(dị hợp tử) nhân LDL
LDE
tang tao VLDL
Tang pido Không rõ VLDL,LDL | Tang tao VLDL
hon hgp gia dinh |
Trang 12thuốc men hay do lối sóng Thiểu năng tuyến giáp, hội chứng thận hư, chế độ ăn
nhiều mỡ bão hòa và CH có thể góp phần làm tăng CH máu Ăn nhiều mỡ, nhiều
glucid, uống nhiều rượu, ít vận động làm tăng hàm lượng TG Đái tháo đường là
nguyên nhân phô biến gây tăng TG huyết Tình trạng này càng nặng thêm nêu bệnh nhân béo phì Một số thuốc, đặc biệt là thuốc điều trị tăng huyết áp có thể làm biến
đổi lượng lipid trong máu Thuốc lợi tiểu thiazid, một số thuốc chẹn B giao cảm làm tang CH mau toàn phần, CH-LDL, TG và giảm HDL (Bang 1.4.) [12][13]
Bang 1.4 Cac dang tang lipid mau thir phat [13]
Bénh Tang lipoprotein Cơ chế
VLDL, Tăng tiết và chậm thoái
Đái tháo đường - ,
thỉnh thoảng chylomicrom | hóa VLDL
: , Giảm thối hóa LIDL, do
Thiêu năng tuyên giáp LDL :
giảm receptor LDL Tăng tiết, giảm thối hóa Hội chứng thận hư VUDL, LDL
VLDL, LDL
Tang uré mau VLDL Giam thoai hoa VLDL
LpX CH va phospholipid & mat Xơ gan mật tiên phát `
(tang CH, phospholipid) | tran vao mau
Tăng tiết VLDL ở người
Tăng lipid do rượu hoặc VLDL, Se me ‘
„ „ có u tơ đi truyện tăng
uông thuôc tránh thai thỉnh thoảng chylomicrom TG mau
Trang 13VXĐÐM vì nguyên nhân của bệnh nảy là do lipid lưu hành trong mau lắng đọng vào
thành động mạch CH là thành phần chính trong các lipid ứ đọng ở mảng vữa xơ CH máu càng cao thì tỷ lệ mặc bệnh VXĐM càng lớn Trong máu CH được vận
chuyển dưới dạng Lp và đóng vai trò quan trọng nhất đối với VXĐM là hai loại
LDL-C và HDL-C Trong bệnh sinh của VXĐM thi HDL-C càng thấp, LDL-C càng
cao thì nguy cơ bị VXÐM càng lớn và các tai biến tìm mạch xảy ra càng nhiều
Ngược lại khi HDL-C cao kèm theo LDL-C thap thi nguy co bi VXDM ít Trên thực tế cho thấy nguy cơ đe dọa VXĐM khi có tăng CH, ting TG, LDL-C tang va
HDL-C giảm
HDL-C được gọi là CH “tốt” vì trong HDL nó được vận chuyền từ các tế bào ngoại bi về gan đề thải ra ngoài băng con đường mật làm cho CH ít ứ đọng ở tế bào, thanh mach Ngugc lai voi HDL-C, CH trong LDL 1a loai gay VXDM Do CH con
được thu nhận vào tế bào theo con đường kém đặc hiệu không tuân theo cơ chế điều
hịa ngược Có nhiều receptor thu dọn là loại chỉ nhận biết được loại LDL biến đôi
Các đại thực bào này thâu tóm LDL đã biến đổi khơng có giới hạn làm cho tế bào bị
quá tải CH Trong tế bào quá tải CH cuối cùng sẽ trở thành tế bào bọt Khi tế bào bọt bị quá tải vỡ ra giải phóng lipid mà chủ yêu là CH — ester hóa vào các tơ chức
xung quanh; lớp nội mạc cũng dầy lên, cản trở việc dinh dưỡng cho các mô làm cho
để bị hoại tử; mô liên kết phát triển, xâm nhập tạo nên mảng vữa xơ Các tế bào bọt
là một trong các chặng đầu tiên hình thành mảng VXĐM
1.16 Điều trị
1.1.6.1 Mục tiêu điêu trị
Theo hướng dẫn của chương trình giáo dục quốc gia Hoa Kỳ (NCEP) đưa ra mục tiêu điều trị cần đạt được là đưới 100 mg/dl đối với HDL-C và < 200 mg/dl déi
Trang 14loạn lipid máu và các yếu tố nguy cơ của bệnh mạch vành
- Điều trị tăng lipid máu cần có kế hoạch điều trị toàn diện, cần chú ý tới các
nguyên nhân và các yêu ton guy co - Điều trị cấp một và điều trị cấp hai:
+ Điều trị cấp một: Khi bệnh nhân có rối loạn lipid máu nhưng chưa có tiền
sử bị bệnh mạch vành Mục tiêu của điều trị cấp một la dua LDL-C mau < 4,1
mmol1 với những bệnh nhân có ít hơn 2 yếu tố nguy cơ hoặc LDL-C < 3,4 mmol/l nếu bệnh nhân có > 2 yếu tố nguy cơ Điều trị phải bắt đầu băng điều chỉnh chế độ
ăn và luyện tập Dùng thuốc khi đã điều chỉnh chế độ ăn một thời gian mà thất bại
hoặc phải bắt đầu ngay khi có quá nhiều yéu tố nguy cơ bệnh mạch vành và lượng LDL-C trong mau cao (> 4,1 mmol/1), hoặc khi lượng LDL-C trong máu quá cao
(> 5 mmol/l)
+ Điều trị cap hai: Khi bệnh nhân đã có biểu hiện bệnh mạch vành Mục dich
điều trị chủ yếu là phải làm giảm được LDL-C < 2,6 mmol/I (<100 mz/dI) Cần điều
chỉnh chế độ ăn thật nghiêm ngặt cho mọi bệnh nhân đồng thời cho thuốc phối hợp ngay khi LDL-C > 3,4 mmol/L
1.1.6.3 Diéu tri cu thé
e Ché độ ăn và sinh hoạt
Chế độ ăn uống là nền tảng của điều trị mọi chứng tăng lipid máu Do đó,
đảm bảo một chế độ ăn hợp lý là một trong các bước cần phải được thực hiện đầu
tiên trong phác đồ điều trị hội chứng tăng lipid máu cũng như các bệnh tim mạch
Ba thói quen ăn uống có thể góp phần tăng CHl là ăn quá nhiều mỡ bão hòa,
ăn nhiều thức ăn giàu CH và lượng calo nhập quá mức cần thiết dẫn đến béo phì Do đó, việc đầu tiên là phải dùng chế độ ăn giảm CH và calo (nếu bệnh nhân béo phì) Chế độ ăn này gồm 2 bước:
Bước 1: thành phần chất dinh dưỡng ăn hàng ngày có lượng acid béo bão
Trang 15dong vat, cac loai phomat, kem Ngoai ra, can tăng cường ăn hoa quả tươi, rau, và
các loại ngũ cốc với lượng tinh bột chiếm khoảng 55 - 60 % khẩu phân, cần tránh
hoặc giảm các chất mỡ động vật, trững, sữa nguyên, phủ tạng động vật
Bảng 1.5 Điều trị bằng ché độ ăn uống đôi với người có CH huyết cao (NCEP)[13]
Thức ăn Ché độ ăn bước 1 Chế độ ăn bước 2
Dưới 30% tổng lượng | Dưới 30% tông lượng
Mỡ toàn phần
calo calo
Chat béo bao hòa Dưới 10% Dưới 7%
Chất béo đa chưa bãohòa | Dưới 10% Dưới 10%
Chất béo đơn chưa bão hòa | Dưới 10— 15% Dưới 10%
Carbohydrat 50 — 60% 50 — 60%
Protein 10 — 20% I0 — 20%
Cholesterol Dưới 300 mg/ngày Dưới 200 mg/ngày
: Đề đạt và duy trì cân Đề đạt và duy trì cân
Tơng lượng calo = ‘ %
nặng mong muôn nặng mong muôn
Bước 2: Được áp dụng khi thực hiện bước trên sau 6 - 12 tuần không kết
quả Trong bước này làm giảm tiếp lượng aeid béo bão hoà xuống < 7% khâu phần
và lượng CHÍ < 200 mg/ ngày
Thời gian điều chỉnh chế độ ăn cũng cần phải lưu ý Thời gian cần ít nhất là
6 tháng Cứ 6 - 8 tuần nên kiểm tra lại lượng CH máu Chế độ ăn phải được duy trì
lâu dài cho dù có dùng thuốc hay không dùng Ở bệnh nhân bị tăng TG, cần hạn chế
mỡ động vật, đường và rượu Giảm cân nặng cho những bệnh nhân béo phì Nên bắt
đầu giảm dần dần lượng calo hàng ngày, thường hạn chế ở mức 500 calo/ngày
Ngoài ra, tập thé lực rất quan trọng nó có thể làm giảm được LDL-C và tăng HDL-C Tập thể lực còn làm giảm cân nặng, giảm huyết áp, và giảm nguy cơ bệnh
Trang 16e Chế độ dùng thuốc
- Chỉ dùng thuốc sau khi đã điêu trị băng chế độ ăn khơng có hiệu quả và khi
CH mau > 250 mg/dl (binh thường 150 — 190 mg/dl); TG máu > 200 mg/dl (bình
thường < 175 mg/dl) Trong khi dùng thuốc vẫn phải duy trì chế độ ăn hợp lý, 2 — 3
tháng một lân phải xét nghiệm lại các thơng sé
- Có thể dùng 2 loại thuốc ở 2 nhóm thuốc điều trị rối loạn lipid máu khác
nhau nếu thấy cần thiết Việc kết hợp 2 loại thuốc với liều thấp sẽ thay thế cho việc
dùng 1 loại với liều cao vì khó dung nạp
- Cần kiểm tra CH và TG máu mỗi 3 - 4 tuần điều trị Nếu không đáp ứng sau 2 tháng điều trị, mặc dù đã dùng liều tối ưu, thì nên thay băng thuốc khác hoặc kết hợp thuốc thứ 2 Lưu ý là việc điều chỉnh chế độ ăn và luyện tập phải luôn luôn
được bảo đảm
1.2 CAC THUOC DIEU TRI HOI CHUNG TANG LIPID MAU
1.2.1 Thuốc có nguồn gốc tơng hợp hóa được [1] [44] [55]
Dựa vào cơ chế hạ Lp máu, các thuốc hạ Lp máu được chia thành các nhóm
sau:
- Thuốc làm giảm hấp thu và tăng thải trừ lipid ở đường tiêu hóa: các resin chelat hóa (cholestyramin, colestipol), neomycin
- Thuốc ức chế tổng hợp lipid: các dẫn xuất của acid fibric, các dẫn xuat statin,
- Các thuốc khác: probucol, dioparin, acid oxiniacic, benfluorex,
1.2.1.1 Các resin chelat hóa
Các thuốc thuộc nhóm tạo chelat với acid mật, cản trở việc nhũ hóa các lipid
ở ruột dẫn đến giảm hấp thu và tăng thải trừ các lipid qua phân
Mặt khác enzym hydroxylase ở gan có tác dụng xúc tác quá trình tổng hợp
acid mật từ CHÍ Khi lượng acid mật ít, hoạt tính của enzym được tăng cường dé
tổng hợp acid mật Các thuốc thuộc nhóm này làm tăng hoạt tính của enzym và ức
chế chu kỳ gan — ruột của acid mật làm tăng tổng hợp acid mật từ CH do đó làm hạ
Trang 17® Cholesfyramin
Thuốc khơng tan trong nước, ít hấp thu qua đường tiêu hóa và có tính base
mạnh Thuốc có tác dụng làm hạ nông độ CH máu Tác dụng xuất hiện chậm (4 — 7 ngày sau khi uống) Tác dụng kéo dài khoảng 2 tuần
Tác dụng không mong muốn thường gặp là rối loạn tiêu hóa (buồn nơn, đầy
bụng, táo bón) và làm giảm hấp thu một số thuốc khi dùng cùng đường uống:
digitoxin, phenylbutazol, phenolbarbital, dan xuất đicoumarin, clorothiazid,
thyroxin,
Chống chỉ định dùng thuốc trong các trường hợp cường tuyến giáp, nhiễm
canxi than, tic mat hoan toan
® Colestipol
Thuốc là polymer của điethylpentamin và epiclohydrin, tan trong nước, it
hấp thu qua ruột Dạng cao phân tử làm hạ CH máu theo cơ chế chung
Khi dùng thuốc có thể gặp tác dụng không mong muốn là rối loạn tiêu hóa,
buồn nơn, đây bụng, táo bón và làm giảm hấp thu một số thuốc khi dùng cùng
đường uống: digitoxin, phenylbutazol, phenolbarbital, dẫn xuất dieoumarin, clorothiazid, thyroxin,
Không dùng thuốc trong các trường hợp mẫn cảm với thuốc, suy tụy, người mang thai và thời kỳ cho thai bú
1.2.1.2 Các dẫn xuất của acid fibric
Gồm: clofibrat, fenofibrat, benzafibrat, ciprofibrat, gemfibrozil
Các thuốc làm hạ Lp máu chủ yếu bằng cách ức chế quá trình sinh tổng hợp CH 6 gan thong qua viée tre ché enzym HMG — CoA reductase trong tế bào Thuốc làm giảm Lp có tỷ trọng thấp và rất thấp (LDL và VLDL), làm tăng Lp có tỷ trọng
cao (HDL) Hai quá trình trên tham gia cải thiện rất nhiều sự phân bố CH ở huyết
tương do giam ty s6 VLDL + LDL/HDL Mat khác, các thuốc cịn làm tăng hoạt tính của lipase trong tế bào, đặc biệt là tế bào cơ do đó tăng thủy phân TG và tăng
Trang 18Tác dụng không mong muốn khi dùng thuốc có thể gặp là rối loạn tiêu hóa
(buồn nơn, khó tiêu, đau bụng tiêu chảy), đau cơ, viêm cơ, teo cơ, rối loạn than
kinh trung ương (đau đầu, chóng mặt, mệt mỏi, loạn nhịp tim), rỗi loạn về máu (giảm bạch câu trung tính, mat bach cau hat, thiéu mau), gay tang nhe transaminase,
giam phosphatase kiém, rung long, toc, giảm khả năng tình dục
Chống chỉ định dùng thuốc khi suy gan, thận nặng, người mang thai và thời
kỳ cho con bú, sỏi mật, trẻ em đưới 10 tuổi
1.2.1.3 Các dẫn xuất statin
Gồm có lovastatin, simvastatin, pravastatin, fluvastatin, atorvastatin
Các thuốc trong nhóm làm hạ Lp máu bằng cách: enzym HMG - CoA
reductase xúc tác cho việc tổng hợp CH từ acetyl CoA Các statin ức chế cạnh tranh với enzym này nên làm giảm lượng CH Mặt khác, các thuốc trong nhóm cũng làm tăng LDL — receptor ở màng tế bào, giúp nhận LDL vào trong tế bào và thải trừ lipid qua enzym ở lysosome Hiệu lực tác dụng của các thuốc trong nhóm khác nhau
và phụ thuộc vào liều dùng Ví dụ: simvastatin hiệu lực gấp 2 lần lovastatin;
fluvastatin hiệu lực bằng nửa lovastatin, Các statin đều làm giảm nồng độ của LDL từ 25 — 45% tùy theo liều Các statin làm tăng nồng độ HDL từ § - 15% do đó làm hạ tỷ số LDL/HDL và CH toàn phần/HDL Các thuốc trong nhóm cũng làm hạ
TG huyết tương khoảng 10 — 30% bang cach lam tang thai trừ VLDL tồn dư nhờ
LDL — receptor
Khi dùng thuốc các tác dung không mong muốn thường gặp là đau, tiêu cơ
vân do tăng phân giải cơ dẫn tới myoglobulin niệu, đau khớp, ban da, rối loạn tiêu
hóa, suy thận, tăng transaminase (cao gấp 3 lần so với bình thường), bình thường trở lại sau | — 2 tháng ngừng thuốc tăng creatininkinase, thần kinh trung ương (đau
đầu, nhìn mờ, mất ngủ, suy nhược, .)
Không dùng thuốc trong các trường hợp mãn cảm với thuốc, người mang thai và thời kỳ cho con bú, trẻ em dưới 18 tuổi, suy gan, thận và tăng cao
Trang 191.2.1.4 Các thuốc khác
® Acid nicotinic (vitamin B;, niacin)
Niacin làm giảm Lp máu rõ, cu thé giam TG 20 — 80%, giảm tỷ lệ LDL — C
khoảng 5 — 7 ngày sau uống, thuốc cũng làm tăng HDL~C
Niacin tác dụng băng cách giảm sản xuất và tăng thải trừ VLDL, giảm cung
cấp acid béo cho gan, giảm tổng hợp TG, giảm vận chuyên TG, VLDL, và giảm sản
xuất LDL
Tác dụng không mong muốn chủ yếu của niacin là đỏ bừng mặt, ngồi ra cịn
gây đau bụng, nôn mửa, loét đa dày, làm tăng transaminase, phosphatase kiềm, tăng glucose, acid uric mau, gay vang da Vi vay, niacin can phai can trong khi dùng cho
người bệnh gan, đái tháo đường, bệnh gout Không dùng cho người có thai
© Acid oxiniacie
Acid oxiniacic có tên khác là dẫn chất olamin (thenolamin của acid ox1acIc),
có biệt dược là Novaeyl Thuốc có tác dụng hạ CHÍ máu, được chỉ định trong bệnh
vữa xơ động mạch, các chứng tăng lipid hoặc CH máu
Chống chỉ định dùng thuốc cho người mang thai
® Dioparin
Dioparin có hoạt chất là iodoheparinat, có tác dụng biến đổi bilan lipid do hoạt hóa và giải phóng lipoproteinase Thuốc được chỉ định trong các thể vữa xơ
động mạch
@ Pentosan polysulfat
Pentosan polysulfat 1a dan chat heparin ban tong hợp dùng qua niêm mạc
miéng, co tac dụng phân hủy fibrin và có hiệu lực giải phóng lipoprotein lipase, lam
giảm tỷ lệ LDL + VLDL/HDL.Thuốc được chỉ định điều trị các chứng rối loạn Lp
máu và phòng ngừa nguy cơ huyết khối nghẽn mạch
Chống chỉ định trong các trường hợp loét dạ day — ta tràng tiến triền, tai biến
Trang 20e Probucol
Probucol lam giảm LDL-C va không gây tích lũy CH ở các mô Thuốc
không hạ TG máu mà làm hạ HDL-C mạnh và kéo đài nên được lựa chọn trong điều
trị sau các thuốc khác Thuốc tác dụng bằng cách ức chế chuyển CH từ ruột vào
máu và tham gia ức chế sự tổng hợp CH trong giai đoạn đầu của quá trình tổng hợp
Tác dụng không mong muốn là rối loạn tiêu hóa (buồn nôn, đau bụng, đầy bụng, tiêu chảy)
Không dùng thuốc trong các trường hợp mẫn cảm thuốc, người mang thai và
thời kỳ cho con bú, trẻ em dưới 16 tuổi, người đang dùng các thuốc chống loạn nhịp
tim nhóm I, II, thuốc chống trầm cảm 3 vòng, dẫn xuất phenothiazin
® Ávasimib
Thuốc làm giảm TG và LDL-C tới 50% do ức chế ACAT; (cholesterol
acyltransferase 1) va lam giảm VLDL, chylomycron do tre chế ACAT; (cholesterol acyltransferase 2)
® Lzctimib
Thuốc ức chế hâp thu CH ở ruột nên lam giam CH va LDL-C trong máu Thuốc có chu kỳ gan - ruột Trong điều trị nên phối hợp với statin liều thấp có tác
dụng hiệp đồng và giảm tác dụng không mong muốn, đặc biệt sự tiêu cơ vân của
dan xuat statin
e Cac acid béo khéng no da hoa tri omega 3
Thuốc có tác dụng làm giảm TG và VLDL; ít ảnh hưởng tới LDL và HDL-C
trong mau Cac acid béo khong no ho omega hay dung 1a acid eicosa — penta — ecoic
(EPA) va acid docosa — hexe — enoic (DHA)
1.2.2 Thuốc có ngn gốc đơng dược
Theo y học cổ truyền khái niệm về tăng CH máu chưa rõ ràng Nhiều lý thuyết cho rằng đó là chứng đàm huyết trong đông y Đến nay, đã có rất nhiều bài thuốc cổ truyền đã được áp dụng để hạ lipid máu góp phần vào việc phòng và điều
Trang 211.2.2.1 Vị thuốc
- Ngưu tất: có tác dụng ha CH huyết ở người có CH cao và giảm tỷ số ⁄œ Lp trên
người có tỷ lệ cao Chỉ định điều trị: các chứng CH huyết cao, vữa xơ động mạch và
tăng huyết áp
- Nghệ, giá đậu xanh: có tac dung ha CH huyết
- Tỏi: có tác dụng hạ CHÍ và tỷ lệ B/o Lp
- Dịch sắc xuyên khung, hy thiêm: có tác dụng làm giảm rõ rệt CH toàn phần, lipid
toàn phan, va ty s6 B/a Lp
- Dịch sắc đương quy: có tác dụng làm gidm ré rét CH huyét, ty s6 B/a Lp va lipid
toan phan
1.2.2.2 Bài thuốc
Bài I: Chủ trị tang lipid huyét
- Công thức: câu kỷ tử (10 g), thủ ô, thảo quyết minh, sơn tra (mỗi thứ 15 g),
dan sam (20 g)
- Cách dùng: sắc thuốc nhỏ lửa khoảng 1500 ml nước, chứa vào phích nóng làm trà uông dân nhiêu lân
ey) Ee: tà : Chủ trị tăng lipid huyết
- Công thức: đan sâm, hà thủ ơ, hồng tinh, trạch tả, sơn tra mỗi thứ 15 g
Trang 22PHÀN 2: MỘT SĨ MƠ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC DUNG HA LIPID MAU
CUA THUOC TREN DONG VAT THUC NGHIEM
2.1 MO HINH NGHIEN CUU TAC DUNG HA LIPID MAU CUA THUOC
2.1.1 Mơ hình gây tăng lipid máu bằng con đường ngoại sinh 2.1.1.1 Bằng chế độ ăn giàu cholesterol
Việc cho động vật ăn chế độ ăn giàu CH làm tăng mức độ hấp thu CH ở lòng
ruột, đẫn đến làm tăng CH máu Chứng tăng CH này có tính ngoại sinh Sự sinh
tổng hợp CH nội sinh thường diễn ra với tốc độ rất chậm để đền bù cho các nồng độ
cao của CH huyết thanh Như vậy, các thuốc có tác dụng chống tăng CH máu gây bởi chế độ ăn tác động do một hoặc nhiều cơ chế có liên quan đến sự ức chế hap thu ở ruột, tăng sự thoái bién CH, anh hưởng đến sự sản sinh Lp hoặc tăng nhanh sự
thai trir Lp [4] [56][70] s* Mơ hình dùng thỏ
- Cơ sở dữ liệu
Có nhiều mơ hình đã gây tăng CH máu và VXĐM thực nghiệm thành công
bằng cách bổ sung CH hoặc CH và mỡ vào chế độ ăn cho thỏ như Aladina và
Sharkov, 1968; Kritchevsky và cộng sự, 1969; Fukushima và cộng sự, 1969 Trong thử nghiệm trên thỏ, việc cho ăn một chế độ ăn có hàm lượng cao CH và mỡ đã làm
tăng dần nông độ CH huyết thanh đến mức đỉnh vào cuối thời gian 2 tuần, nòng độ
CH huyết thanh trung bình đã tăng đến 600 mg% Các thuốc thử nghiệm thường được kết hợp với chế độ ăn cho động vật
- Tiến hành
Thỏ đực giống Gray Giant cân nặng 2,5 — 3,0 kg Nhốt thỏ trong các chuồng
riêng biệt với các điều kiện môi trường có kiểm sốt như nhiệt độ 22 + 2°C, độ âm
55% + 5%, chu ky sang — téi 12 giờ Thỏ được cho ăn và uống nước tự do trong
suốt thời gian làm quen với các điều kiện phịng thí nghiệm
Dé gây tăng CH máu, cho thỏ ăn chế độ ăn chứa 5% mỡ dong vat, 3% CH
trong tổng lượng thức ăn trong 30 ngày Sau đó, chia thỏ thành các lô:
wa, À
Trang 23+ Lé chitng trang: thỏ được cho ăn chế độ thông thường
+ Lô chứng bệnh: thỏ được gây tăng lipid máu theo cách trên
+ Lô thử gồm các con thỏ được gây tăng lipid máu và cho dùng thuộc nghiên cứu
+ Lô so sánh gồm các con thỏ được gây tăng lipid máu và cho dùng thuốc hạ
lipid máu đã biết rõ cơ chế
Cuộc thử nghiệm diễn ra trong 80 ngày
Lấy mẫu máu (3 ml) từ tĩnh mạch tai thỏ vào buổi sáng của các ngày: trước khi tiến hành thí nghiệm và vào ngày 30, 40, 50, 60, 70 và §0 của cuộc thí nghiệm
Cho thỏ nhịn ăn 12 giờ trước khi lấy máu nhưng vẫn cho uống nước tự đo - Đánh giá:
+ Xác định lượng thức ăn tiêu thụ và sự tăng các chỉ số lipid, từ đó xác định
mối liên hệ tương quan giữa 2 yếu tố này
+ Xác định các thông số lipid trong huyết thanh (CH toàn phân, LDL, CH và
TG) vào các thời điểm khác nhau của cuộc thí nghiệm và trên các lơ thí nghiệm
+ Xác định hoạt độ ASAT, ALAT để đánh giá mức độ tổn thương gan
s* Mơ hình dùng chuột cơng
e Chuột cơng trắng cịn bú
Chuột cơng trắng cịn bú có nịng độ CH huyết thanh thường cao gấp 2 — 3
lần so với nồng độ chuột trưởng thành Điều này do hàm lượng mỡ cao trong sữa vì
các con vật còn bú được nuôi với chế độ ăn chuân thay vì bú sữa có nồng độ CH
huyết thanh gần với nồng độ bình thường ở chuột trưởng thành Mơ hình này được
m6 ta boi Berger va cong su (1969), Hawkins va cong su (1965) [4][8]
- Tién hanh
Chuột cống trắng còn bú giống Harlan-Wistar, nặng 60 — 95 g, được nuôi
Trang 24Sau 5 ngày cho chuột làm quen với các điều kiện phịng thí nghiệm, chia
chuột ngẫu nhiên thành các lô:
+ Lô chứng bệnh: cho chuột bú mẹ bình thường
+ Lô thử: chuột bú mẹ và cho dùng thuốc nghiên cứu
+ Lô so sánh: chuột bú mẹ và cho dùng thuốc hạ lipid máu đã biết rõ cơ chế
Thuốc được đưa bằng đường uống ngay từ ngày đầu Cuộc thử nghiệm
diễn ra trong 2 tuần Sau 2 tuần thử thuốc, giết chuột, lấy máu để làm xét nghiệm
- Đánh giả
+ Xác định hàm lượng CHl trong máu vào các thời điểm trước và sau khi
dùng thuốc
e Chuột công trưởng thành [21][56]
- Tiến hành
Chuột đực FIB 13 tuần tuổi Nhốt chuột riêng biệt trong chuồng giành cho
loai gim nham bằng thép không gỉ kích thước 21 x 10 x 7 em và cung cấp cho chúng chế độ ăn dành cho loài gặm nhấm Duy trì chế độ chăm sóc với các điều
kiện tối ưu, áp suất môi trường được kiểm soát (nhiệt độ 23°C, độ ẩm 55%), chu kỳ
sáng - tối 12 giờ Cho chuột ăn và uống nước tự do Hàng ngày cần theo dõi các dấu
hiệu lâm sàng về bệnh tật trên tất cả các con chuột
Sau 6,5 tuần cho chuột ăn chế độ ăn thơng thường đề thích nghỉ với điều kiện
môi trường, chia chuột ngẫu nhiên thành các lô thực nghiệm mỗi lô gồm 12 con
(nhốt 4 con 1 chuông) và tiễn hành thử nghiệm thuốc trong 12,5 tuân
+ Lô chứng trắng: cho ăn với chế độ ăn dành cho lồi gặăm nhấm có hàm
lượng chất béo thấp (5,5%, không cé CH)
+ Lô gây bệnh: cho ăn với chế độ ăn giàu chất béo bão hòa (dầu dừa, 10%
kl/kl) và CH (15% chất béo, 0,05% CH)
+ Lô thử: cho ăn chế độ ăn giàu chất béo trong 2,5 tuần và bổ sung thêm thuốc nghiên cứu trong 10 tuân tiếp theo
+ Lô so sánh: cho chuột ăn chế độ ăn giàu chất béo trong 2,5 tuần và có bổ
Trang 25Thức ăn và nước uống đều được cung cấp tự do
- Đánh giá
+ Xác định lượng thức ăn tiêu thụ và trọng lượng cơ thể, trọng lượng gan và
xác định mỗi liên hệ tương quan giữa các thông số này
+ Lấy máu chuột và xác định các thông số lipid máu: CH toàn phần, HDL-C,
Non — HDL-C, TG vao cac thời điểm: trước khi tiễn hành thử thuốc, sau 2,5 tuần, sau 8
tuần và sau khi kết thúc thí nghiệm Nong độ HDL-C được xác định băng enzym
dựa theo sự kết tủa có chon loc cia lipoprotein giau TG béi dextran sul fat Nông độ
Non-HDL~C được tính tốn dựa trên sự khác biệt gifta HDL-C va CH toan phân + Xác định enzym gan: Bilirubin, GOT, GPT trong huyết tương
+ Đánh giá sự tạo thành té bao bot: Công việc này được tiến hành vào phần
cuối của cuộc thí nghiệm Giết chuột, ngâm xác chuột trong hệ đệm formalin trung
tính 10% trong 20 phút Trước khi định lượng tế bào bọt, tách phần động mạch ra
khỏi tim Phân động mạch nằm giữa động mạch cô thứ 3 và l mm trên van động
mạch được sử dụng để đánh giá tế bào bọt
% Một số mơ hình khác (4][21]43]
- Gà con, chim bồ câu, gà tây rất nhạy cảm với việc cho ăn CH và phát triển
tăng CH máu rõ rệt trong thời gian tương đối ngắn (Fukushima và cộng sự, 1969:
Simpson và Harms, 1969) Tennent và cộng sự (1960) mô tả một thí dụ điển hình về
tang CH mau gay boi CH Dung gà trống Lognor non (9- 11 tuần tuổi) được nuôi
với chế độ ăn thường quy có bố sung CH (2%) và dầu hạt bông (5%) 4 ngày sau,
nòng độ CH huyết tương đã tăng 3.5 lần, từ khoảng 70 mg% lúc ban đầu lên khoảng
250 mg% vào ngày thứ tư
- Harman (1969) đã gây tăng CH máu ở lợn băng cách cho ăn các chế độ ăn được bỗổ sung với bơ, lòng đỏ trứng và mỡ bão hòa Wissler (1968) đã gây tăng CH
máu ở linh trưởng băng cách cho chế độ ăn thực nghiệm chứa CH và bơ
- Malmros và Sternby (1968), Mc Curdy và cộng sự (1969), Bevans và cộng
Trang 262.1.1.2 Bằng chế độ ăn khơng có cholesterol %% Gây bdi ché dé dn tang fructose
Chuột chuyền từ chế độ ăn với ít carbohydrat và liều lượng cao protein sang
liều cao fructose làm tăng sự thải trừ VLDL khỏi gan, dẫn đến làm giảm độ thanh
thải của chúng khỏi huyết tương gây cơn tăng TG cấp tính và tăng CH mức độ vừa
phải Các thuốc nghiên cứu được dùng để ức chế hiện tượng này [47][67][77]
Fructose Fructokinase r Fructose l-P Glyceraldehyd
Dihydroxyaceton phosphat l4 Glyceraldehyd 3-P
r bá
Gycerol 3-P Pyruvat
Lipogenes
Y | Acyl-CoA = Gycerol 3-P Lactat
4 ¥
Triglycerid CO, + ATP
ApoB MTP
ỶỲ
VLDL
Trang 27
e Mơ hình dùng chuột Sprague Dawly
Chuột đực giống Sprague - Dawly cân nặng 200 — 250 g được nhốt riêng biệt
trong các chuồng có nhiệt độ 22 - 23°C, chu kỳ sáng — tôi 12 giờ Cho chuột ăn và
uống nước tự do trong 1 tuần đẻ thích nghỉ với điều kiện phịng thí nghiệm Sau đó, chia chuột ngẫu nhiên thành các lô, mỗi lô gồm 10 con và tiến hành thử thuốc
+ Lô chứng trăng: cho chuột ăn thức ăn thông thường và cho chuột uống
nước muối sinh lý
+ Lô chứng bệnh: cho chuột ăn chế độ ăn giàu fructose, cho dùng nước mudi
sinh lý giống lô chứng
+ Lô thử: cho chuột ăn thức ăn giàu fructose và cho chuột dùng thuốc nghiên cứu
+ Lô so sánh: cho chuột ăn thức ăn giàu fructose và cho chuột dùng thuốc có
tác dụng hạ lipid máu đã biết rõ cơ chế
Việc dùng thuốc cho chuột thực hiện trong 3 ngày lién tiép Fructose cho
chuột uống dạng dung dịch 20%
- Đánh giá
Phân tích huyết thanh băng thiết bị đo màu để tìm ra CH toàn phân, TG và
glycerol dùng trong chân đoán lâm sàng
@ M6 hinh ding Syrian golden hamsters - Tién hanh
Các con chuột đồng cái giống Syrian Golden từ 4— 6 tháng tuổi, cân nặng ~
100 ø được nhốt thành từng nhóm 4 con trong các điều kiện tiêu chuẩn được kiểm
soát chặt chẽ vẻ nhiệt độ, chu kỳ sáng — tối Cho chuột ăn theo một chế độ ăn tiêu
chuẩn thông thường và cho uống nước tự do trong 5 tuần để làm quen với điều kiện
thí nghiệm
Trang 28+ Lô chứng trắng: cho chuột ăn chế độ ăn thông thường chứa carbohydrat
55%, chat béo 15%, protein 25 — 30%
+ Lô chứng bệnh: cho chuột ăn chế d6 An giau fructose va uỗng nước cất hoặc nước muỗi sinh lý
+ Lô thử: Cho chuột ăn chế độ ăn giàu fructose và cho uống thuốc nghiên
cứu
Cuộc thí nghiệm diễn ra trong 3 tháng
- Đánh giả
+ Xác định lượng thức ăn tiêu thụ và trọng lượng cơ thể, từ đó xác định mối liên hệ tương quan giữa 2 yếu tô này
+ Xác định đường huyết lúc đói, test dung nạp glucose bằng đường uống, độ
nhay cam insulin
+ Chi sé TG, CH và mức độ vữa xơ dong mach
Mức độ vữa xơ động mạch (AI) được xác định dựa theo công thức:
HDL-C AI=T-C — Toe s* Chế độ ăn bán tổng hợp không có cholesterol
Có thể dùng chế độ ăn bán tổng hợp có mỡ bão hịa, khơng có CH gây chứng
tăng CH máu Chứng tăng này có liên quan chặt chẽ hơn với chứng tăng CH máu trên người (Kritchevsky và Tepper, 1968) Thỏ được nuôi băng chế độ ăn bán tổng
hợp có tăng CH máu mức độ vừa và thường phát triển chậm hơn chứng bệnh này ở
động vật cho ăn CH Mơ hình này thường sử dụng đề nghiên cứu sàng lọc thuốc tác
dụng trên sự chuyển hóa lipid vì CH huyết tương được tổng hợp nội sinh, và có
nồng độ trong phạm vi giới hạn của nồng độ thường gặp trong tăng CH máu của
người Bất lợi của mơ hình này là độ dài của thời gian cần thiết cho sự phát triển
tăng CH mau (it nhất là § tuân), trong khi thỏ cho ăn CH phát triển nồng độ cao của
Trang 292.1.2 Mơ hình tạo động vật tăng lipid máu bằng con đường nội sinh
2.1.2.1 Gay boi estrogen e Neuyén tắc và cơ sở dữ liệu
Dùng estrogen liều cao cho động vật làm tăng sinh tông hop VLDL trong
gan, dẫn đến làm tăng nồng độ VLDL trong huyết tương
Việc dùng estrogen tác dụng chậm (estradiol cyclopentylpropionat) gay trạng
thái tăng lipid máu trạng thái này cuối cùng dẫn đến phát triển các thương tốn vữa
xơ động mạch Các nồng độ CH máu tăng gấp 10 lần so với đối chứng (908 mg% so
với 133 mg%⁄) trong vòng một tuần, sau một liều tiêm duy nhất -estradiol tác dụng
chậm cho gà con (Fukushima và cộng sự, 1969) Sự tăng lipid này có tính nội sinh và không phụ thuộc vào sự có mặt của mỡ trong chế độ ăn (Steinberg, 1962) Mơ
hình này dùng để phát hiện các thuốc ức ché sinh tổng hợp CH
Tương tự, Klebanov đã xây dựng mơ hình gây tăng CH máu cho gà con bằng
cach tiém diethyl stylboesterol và dùng mơ hình này để thử các thuốc có tác dụng ức chế tổng hợp CH hoặc các thuốc tăng thoái hóa CH va tang sy vận chuyển của
phospholipid nhu thyroxin va dan chat [4][31][42] e Tiến hành
Thỏ cái màu trắng giống New Zealand khoảng 12 tuần tuổi, cân nặng 2,6 +
0,3 kg Nhốt riêng biệt các con thỏ trong điều kiện mơi trường có chu kỳ sáng - tối 12 giờ
+ Lô chứng trắng: tiêm nước muối sinh lý
+ Lô chứng bệnh: chuột được gây tăng lipid máu bằng cách tiêm bắp
estradiol valerat liều 1 mg/kg thẻ trọng/tuần, sau đó dùng nước muối sinh lý hay
dung môi đồng thê tích
+ Lơ thử: chuột được gây tăng lipid máu bằng estradiol và dùng thuốc nghiên cứu
+ Lô so sánh: chuột được gây tăng lipid máu bằng estradiol và dùng thuốc có
Trang 30® Đánh giá
- Xác định các chỉ số lipid huyết tương và hormon huyết tương
2.1.2.2 Gây bởi trifon © Nguyên tắc
Việc dùng toàn thân chất diện hoạt triton WR-1339 (isooctyl-polyoxy- ethylene phenol) cho chuột nhất và chuột công trắng nhịn đói và khơng nhịn đói dẫn đến sự tăng nồng độ CH và TG huyết tương Chứng tăng CH này có hai giai đoạn: giai đoạn đầu có sự tăng lên đột ngột nồng độ CH huyết thanh, có thể đạt mức đỉnh
gấp 2 — 3 lần so với trị số của nhóm đối chứng vào thời điểm 24 giờ sau khi dùng
triton; giai doan hai CH mau giảm xuống gần với trị số của nhóm đối chứng trong
vịng 24 giờ tiếp theo (giai đoạn 2) Các thuốc ức chế sinh tông hợp TG và CH ở gan cho thấy có tác dụng rất rõ trong pha I, trong khi các thuốc ức chế sự thải trừ,
bài tiết và chuyền hoá CH lại rất hiệu quả trong pha II
Cơ chế của tăng CH máu do triton giai đoạn I được coi là tăng sinh tổng hợp CH ở gan do triton tác động đến sự tiếp nhận lipid huyết tương ở các mô (ức chế hoạt động của enzym lipoprotein lipase va thai trir VLDL) [4][32]
e Tiến hành
Chuột nhắt trưởng thành, cân nặng 27 — 30 g, nuôi trong lồng chuột ở khu
vực sinh vật học, cho uống nước tự do trong suốt thời kỳ thí nghiệm (24 giờ) Đặt
lồng chuột trong môi trường có nhiệt độ 22 + 02°C và chu kỳ sáng - tối 12 giờ
Hòa tan triton WR-1339 trong nước muối sinh lý (pH 7.4) rồi cho chuột
dùng triton liều 200 mø/kg cân nặng đề gây bệnh tăng lipid máu cấp trên chuột
Sau thời gian cho chuột làm quen với điều kiện phòng thí nghiệm, cho chuột
nhịn đói qua đêm rồi chia ngẫu nhiên thành các lô, mỗi lô 8 con:
+ Lô chứng trắng: cho chuột uống nước muối sinh lý và nước cất + Lô chứng bệnh: tiêm màng bụng triton và cho chuột uống nước cất
+ Lô thử: tiêm màng bụng triton và cho chuột uống thuốc nghiên cứu (được
Trang 31+ Lô so sánh: tiêm màng bụng triton và cho chuột dùng thuốc hạ lipid máu đã biết rõ cơ chế
Sau khi dùng thuốc lay máu từ tĩnh mạch tai chuột, ly tâm các mẫu máu (tốc
độ 2500 vòng/phút trong 10 phút), sử dụng huyết tương để phân tích các chỉ số
lipid |
® Đánh giá
+ Tiến hành các phép phân tích nồng độ trong huyết thanh của TG và CH
toàn phan, HDL-C va LDL-C huyét tương vào lúc 0, 2, 4, 6, 8 giờ sau khi tiêm
triton dé nghiên cứu các thuốc ức chế quá trình tong hop TG; vao luc 0, 6, 24, va 48
giờ sau khi tiêm triton để nghiên cứu các thuốc có tác dụng ức chế quá trình tổng
hợp CH LDL-C được tính tốn dựa theo công thức của Friedwald (Friedwald,
Levy, & Fredrickson, 1972): LDL-C = CH toan phần - [HDL-C + (TG/5)|
+ Xác định chỉ số vữa xơ động mạch (AI) và tỷ sô LDL-C/HDL-C:
AI = (T-C 0 HDL-C)/HDL-C va tỷ số LDL-C/HDL-C được tính tốn theo
tỷ số của nòng độ trong huyết tương của LDL-C và HDL-C 2.L2.3 Gây bởi teen 80
e Nguyên tắc và cơ sở dữ liệu
Cheymol và các cộng sự (1965) đã dùng tween 80 để gây tăng CH máu trên thỏ Tween 80 gây sự tăng CH huyết tương nhanh nhưng trong thời gian ngăn chủ
yếu do tăng CHÍ nội sinh Nồng độ tối đa của CH đạt được sau 4 giờ rưỡi hoặc 6 giờ,
hiếm hơn sau 3 giờ hoặc 7 giờ rưỡi [4][77]
e Tiến hành
Thỏ cái màu trăng giống New Zealand khoảng 12 tuần tuôi, cân nặng 2,6 + 0,3 kg Nhốt riêng biệt các con thỏ trong điều kiện mơi trường có chu kỳ sáng - tối
12 giờ Thỏ được cho ăn với chế độ ăn thường quy và uống nước tự do
Sau thời gian làm quen với điều kiện phịng thí nghiệm, chia các con thỏ ngẫu nhiên thành các lô và tiến hành thử thuốc Gây tăng lipid máu cho thỏ bằng
cach tiém tinh mach tai tho 2,5 ml/kg tween 80 (dung dich 20% trong dung dich
Trang 32+ Lô chứng trăng: thỏ không được gây tăng lipid máu, được tiêm dung dịch nước muỗi sinh lý
+ Lô chứng bệnh: thỏ được gây tăng lipid máu băng tween 80 sau đó dùng
nước muỗi sinh lý
+ Lô thử: thỏ được gây tăng lipid máu bằng tween 80 sau đó dùng thuốc nghiên cứu
+ Lô so sánh: thỏ được gây tăng lipid máu và cho dùng thuốc hạ lipid máu đã
biết rõ cơ chê
Sau 4 giờ rưỡi hoặc 6 giờ, lấy máu thỏ, ly tâm thu huyết thanh và thực hiện
các phép phân tích lipid máu e Danh gia
+ Xác định CH toàn phần trước và sau khi thí nghiệm
2.I.2.4 Gây bởi poloxamer 407 ® Nguyên tắc
Poloxamer là một chất diện hoạt tổng hợp ở khắp nơi gây nên bệnh tăng lipid
mau va VXPM nặng trên các loài gặm nhắm Bước đầu tiên trong quá trình biến
đổi của các Lp ở gan là sự di chuyển qua các lỗ nhỏ kích thước 100 — 200 nm ở màng trong các tế bào gan trước khi hấp thu các receptor trung gian Giả thuyết về
lưới lọc ở gan nhắn mạnh vai trò của những lỗ nhỏ này trong việc điều tiết sự sắp xếp các Lp Poloxamer 407 (P-407) gây nên tình trạng mở lỗ 6 at & màng trong tế
bào gan in vivo Khoảng 24 giờ sau khi tiêm màng bụng P-407 cho chuột, những lỗ
này giảm xuống khoảng 80% tương ứng với sự tăng lên khoảng 10 lần lipid huyết
tương [7S5][78]
e Tiến hành
Trang 33trong thời gian làm quen với điều kiện phịng thí nghiệm Sau đó, chia chuột ngẫu
nhiên thành các lô và tiến hành thí nghiệm
+ Lơ chứng trắng: chuột không được gây tăng lipid máu, tiêm nước muối
sinh lý
+ Lô chứng bệnh: chuột được gây tăng lipid máu bằng cách tiêm màng bụng P-407 liéu 1g/kg, sau đó cho dùng nước muối sinh lý
+ Lô thử: chuột được gây tăng lipid máu băng P-407 và cho dùng thuốc thử nghiệm
+ Lô so sánh: chuột được gây tăng lipid máu bằng P-407 và cho dùng thuốc
ha lipid máu đã biết rõ cơ chế
Sau đó giết chuột, lấy máu đề phân tích các chỉ số lipid
® Đánh giá
+ Xác định các chỉ số lipid: CH toàn phần, CH và TG
+ Thu mẫu gan và xác định CH gan
2.1.3 Mô hình tạo động vật tăng lipid máu do di truyền
Một trong những nguyên nhân gây bệnh tăng lipid máu đó là đo đi truyền Do đó, bên cạnh những mơ hình tạo động vật tăng lipid mau băng chế độ ăn (con đường ngoại sinh) và bằng con đường nội sinh thì người ta cịn xây dựng mơ hình
gây động vật tăng lipid máu do đi truyền dé nghiên cứu về cơ sở di truyền bệnh và
tác dụng của thuốc hạ lipid máu
2.1.3.1 Mô hình dùng chuột
Những con chuột hoang đã có khả năng đề kháng tương đối với bệnh VXĐÐM
bởi chúng có hàm lượng HIDL cao và lượng LDL, VLDL thấp Chính vì vậy các
mơ hình dùng chuột trong nghiên cứu bệnh VXĐÐM dựa trên việc làm xáo trộn q
trình chuyển hóa Lp bằng chế độ ăn cũng như vận dụng nguồn gen trong thí nghiệm
Trong các mơ hình thực nghiệm dùng chuột được sử dụng rộng rãi có chuột thiếu hụt apoLpE (apoE) bdi su thiéu hut gen apoE làm tang CH mau rat cao va
Trang 34triển bệnh VXĐM nhất là khi chuột được cho ăn chế độ ăn giàu lipid Gần đây có
mơ hình dùng chuột biến đổi gen apoE;Leiden (E3L) (biến đổi gen người apoE:)
làm tăng nhanh lipid máu, phát triển VXĐÐMI khi được cho ăn chế độ ăn giàu CH, và nhạy cảm với các thuốc hạ lipid máu hơn so với các con chuột apoE” và LDLr“
[14][26][45][72][73][74]
“+ Chuột biến đổi gen apoE;Leiden (E3L)
- Đặc điểm
ApoE;Leiden (E3L) là sự thay đổi trên gen apoEa người Nó được tạo thành
từ sự sao chép bộ đôi của các codon từ 120 đến 126 và có mối liên hệ chặt chẽ với
bệnh tăng J-lipoprotein huyết gia đình Chuột đột biến gen E3L được tạo ra từ sự
kết hợp của gen apoEaLeiden người với C57B1/6 chuột Những con chuột này có độ
nhạy cảm cao với chế độ ăn giàu chất béo, đường và CH, kết quả làm tăng mạnh
nông độ TG và CH huyết tương Những chỉ số này có thê điều chỉnh về nòng độ
mong muốn bằng cách thay đổi lượng CH và đường có trong chế độ ăn Thêm nữa,
nông độ CH và TG huyết tương lại có mỗi liên quan rất chặt chẽ với lượng VLDL
trong gan Vì vậy, những thuốc và chế độ ăn có ảnh hưởng đén Chyl và VLDL sẽ có những tác dụng tương tự trên nồng độ CH và TG huyết tương Ngoài ra, chuột E3L
cũng phát triển các tổn thương VXĐÐM với những đặc tính giống bệnh lý tim mạch
trên người, với các mảng vữa xơ thay đỗi từ mức độ nhẹ đến trung bình và nặng
[20}[37][49][50][73] - Tién hanh
Tiêm một đoạn DNA (2.5 g/ml) vao tién nhan dire cia tritng chudt da thu tinh của chuột cái FI (chuột CS7BL/61) Phân lập DNA từ những đoạn đuôi dai chừng lem Phân tích phản ứng của chuỗi polymerase trên đoạn DNA đuôi nối với
đoạn đột biến E3L Những con chuột tìm thây gen biến đổi đem lai với những con
chuột C57BL/6J để tạo ra chuỗi gen biễn đổi Những con chuột biến đổi gen có chứa chuỗi 2, 181, 195 và những con chuột cùng lứa không chứa gen biến đổi thé hệ
Trang 35Nhốt chuột trong các chuồng phù hợp với các điều kiện tiêu chuẩn và được
cho chuột ăn chế độ ăn thông thường, uống nước tự do đề làm quen với điều kiện
thí nghiệm Sau đó, cho chuột 6 tuân tuổi ăn chế độ ăn bán tổng hợp giàu CH có
chứa 40,5% sucrose, 15% bo cacao, 1% CH va 0,5% Natri cholat trong 9 tuần rồi
chia chuột thành các lô:
+ Lô chứng: chuột dùng nước muối sinh lý
+ Lô thử: chuột dùng thuốc nghiên cứu
+ Lô so sánh: chuột dùng thuóc hạ lipid máu đã biết rõ cơ chế
- Đánh giá
+ Xác định nòng độ CH huyết tương trước và sau khi dùng thuốc, so sánh sự
khác biệt giữa các nhóm
Ngồi ra, trên thực nghiệm cịn có một số mơ hình khác như:
s* Chuột thiếu hụt apoLpE (apoE
ApoE được tổng hợp ở gan, trong đại thực bào và có một vai trò rất quan
trọng trong việc chóng lại bệnh VXĐM Là một thành phần của Lp huyết tương, nó
đóng vai trị như một cầu nối giữa tế bào và các receptor Lp bề mặt (LDLr) và LDLr với các protein liên kết (LRP) Do đó chuột thiếu hụt gen apoE đồng hợp tử có sự
tăng nhanh nồng độ LDL và VLDL trong huyết tương mà biểu hiện rõ ràng nhất
trên những con chuột apoE^ này là phát triển các thương tổn VXĐÐM ngay cả khi
chúng được cho ăn chế độ ăn tiêu chuẩn có hàm lượng chất béo ít, thậm chí khơng
có CH Ở những con chuột phong bế apoE dị hợp tử thì mARN apoE giảm khoảng 50% Như vậy, ngay cả khi chuột ăn chế độ ăn thông thường hoặc ăn chế độ ăn có ít
CH thì với sự thiếu hụt protein apoE vẫn vẫn dẫn đến rối loạn trên chuyên hóa lipid
và làm tăng CH máu Chuột cái dễ mắc bệnh hơn chuột đực
[14][17][37][40][49] [73]
s* Chuột thiếu hụt receptor LDL (LDLr ˆ)
Ở người, sự biến đổi gen LDLr gây bệnh tăng CH máu gia đình Những con
Trang 36Nhưng khi được cung cấp chế độ ăn giàu chất béo thì những con chuột LDLr“ có
nồng độ CH máu tăng rất nhanh và mức độ phát triển VXĐM rất mạnh mẽ Các chỉ
số Lp huyết tương của những con chuột này tương đối giống trên người [14][73]
s* Mơ hình tổ hợp gen ® ApoBEC-I”” xLDLr“
Như đã nói ở trên, những con chuột LDLr™ chi gây tăng CH máu mức độ trung bình khi được cho ăn chế độ ăn thông thường Nguyên nhân của sự tăng nồng
độ CH huyết tương mức độ vừa phải là do có q trình tổng hợp apoBas trong gan
chuột thúc đẩy việc hình thành dạng apoB trong vịng tuần hồn LDL.Trên người,
toàn bộ độ dài apoB (ví dụ apoB¡o;) được sinh tổng hợp ở gan, nhưng dạng rút gọn
là apoBa¿s lại chỉ được sản xuất ở ruột Sự có mặt của dạng rút gọn apoB trên LDL
làm tăng liên kết của apoE và thải trừ cuối cùng theo nhiều cơ chế hơn LDL
receptor, ví dụ như các receptor liên kết LDL
Dạng rút gọn của apoB sinh ra bởi cơ chế hình thành RNA mà trên đó có sự
di chuyển một cặp amin trên phân tử cytosin 6666 làm ngừng phiên mã codon Quá
trình này được điều chỉnh bởi apoBEC-I Việc loại bỏ enzym này không ảnh hưởng
đến nồng độ CH huyết tương Tuy nhiên, khi thiếu hụt apoBEC-I lại làm thiểu hụt
các receptor LDL, kết quả là làm tăng rất nhanh nồng độ CH huyết tương mà ở đây
là tăng LDL-C
Những con chuột này phát triển thương tổn mức độ rộng trên các động mạch
Những thương tốn này xảy ra trên nhiều mức độ từ thương tổn đơn giản về mặt hình thái học trên các tế bào bọt thuộc đại thực bảo đến những thương tôn phức tạp
hơn bao gồm các tế bào cơ trơn và hệ thống ngoài tế bào Cho chuột ăn chế độ ăn giàu chất béo bão hòa làm tăng nhanh mức độ phát triển của bệnh [14] [26]
e Biến đổi gen apoB\oo x LDLr“
Các mơ hình nghiên cứu VXĐÐM dùng chuột biến đồi gen apoB¡oo và LDLr ˆ
đã được mô tả ở trên đều được cho ăn chế độ ăn thay đổi theo yêu cầu để phát triển
các thương tổn VXĐM Tuy nhiên, sự kết hợp của gen biến đổi apoBioo và LDL"
Trang 37biệt khi chúng được duy trì chế độ ăn thông thường Cùng với sự tăng lipid máu nội
sinh trên những con chuột biến đổi gen apoB¡o x LDLr” thì nó cịn làm xuất hiện
các tôn thương VXĐM trên bề mặt màng trong động mạch [14][26][66]
e Biến đổi gen apoCa xLDLr“
Tăng lipid máu có tính chất gia đình là tình trạng rối loạn lipid pho biến và có mơi liên quan chặt chẽ đến các bệnh VXĐM Mơ hình dùng chuột có mang một số đặc điểm của bệnh tăng lipid máu có tính chất gia đình được sinh ra bằng cách
tạo các con chuột có mang apoLpCa người giao phối với chuột thiếu hụt LDLr Để hình thành các thương tổn VXĐM cần cho chuột ăn chế độ giàu chất béo bão hòa
va CH [14]
2.1.3.2 Mơ hình dùng thỏ
Bệnh tăng CH máu gia đình là một bệnh liên quan đến rối loạn gen gây nên
bởi sự thiếu hụt các receptor bè mặt của LDL, kết quả làm tăng nồng độ CH va
LDL trong huyết tương, thúc đây bệnh VXĐM và bệnh u vàng trên da Dòng thỏ
tăng lipid máu di truyền Watanable (WHHL) được coi là một mô hình động vật tiêu biéu cho bệnh tăng CH máu tính chất gia đình Do có những rối loạn bất thường của
một đoạn đơn gen dẫn dến sự thiểu hụt LDL receptor trên màng nguyên bào sợi,
gan và tuyến thượng thận, kết quả thỏ WHHL đồng hợp tử thường có chỉ số CH cao
từ 650 đến 950 mg/dl (trong dé cé chtra 90% LDL) [15][18][27][34][46][51]
Các con thỏ đực và cái WHHL đồng hợp tử được thu nhận từ sự giao phối
của các cặp thỏ WHHL, đồng hợp tử được sử dụng cho thí nghiệm này Cho thỏ ăn
chế độ ăn thông thường và cho thỏ uống nước tự do Chế độ ăn này có chứa 2,7%
chất béo, 1,2 mg CH/100 g thức ăn Lượng CH ăn vào hàng ngày không quá 2 mg
Sau đó, chia thỏ thành các lô tiền hành thử thuốc:
+ Lô chứng: cho thỏ uống nước cất hoặc nước muối sinh lý
+ Lô thử: cho thỏ dùng thuốc nghiên cứu
+ Lô so sánh: cho thỏ dùng thuốc hạ lipid máu đã biết rõ cơ chế
Trang 38- Danh gia:
+ Xác định các chỉ số lipid huyết tương trước và sau khi dùng thuốc, so sánh tác dụng hạ lipid mâu giữa lô thử và lô chứng
+ Làm mô bệnh học đẻ xác định mức độ tốn thương VXĐM
2.2 MO HINH NGHIEN CUU CO CHE HA LIPID MAU CUA THUOC:
2.2.1 Ức chế sinh tổng hợp CH Acetyl CoA ‘ HMG - CoA HMG-CoA reductase Ƒ Mevalonat r Mevalonat pyrophosphat v [sopentenyl pyrophosphat Geranyl pyrophosphat y Farnesyl pyrophosphat | Squalene synthetase | 4
Ubiquinon Squalen Dolichol
+ Cholesterol
Trang 39s* Nguyên tắc
Quá trình sinh tổng hợp cholesterol là được chia thành nhiều giai đoạn, với
sự xúc tác của rất nhiều enzym trong đó quan trong phai ké dén HMG-CoA
reductase, squalen synthetase, squalen epoxidase Chính vì vậy, về nguyên tắc để ức chế sinh tổng hợp cholesterol tiến hành ức chế một trong cắc enzym trên
2.2.1.1 Úc chế sinh tổng hợp cholesterol ex vivo mô gan phân lập từ chuột ® Nguyên tắc
Sự ức chế sinh tông hợp CH trên gan chuột có thể xác định được trên thực
nghiệm ex vivo bằng cách định lượng CH tổng hợp từ natri octanoat đã đánh dâu sau khi cho chuột uống các tác nhân ức chế HMG-CoA reduetase [23][62][65][79]
e Tiến hành
Các con chuột đực giống Sprague Dawley cân nặng từ 110 — 130 g được
nuôi giữ trong chu kỳ sáng tối 12 giờ trongl4 ngày trước khi sử dụng Trong suốt
quá trình làm quen với điều kiện thí nghiệm, cho các con chuột ăn uống tự do theo
chế độ ăn có lượng CH thấp và uống nước cất Chuột được chia thành 3 lô:
+ Lô chứng: chuột được cho uống nước cất
+ Lô thử: chuột được cho uống thuốc đang nghiên cứu
+ Lô so sánh: chuột được cho uống thuốc đã biết rõ tác dụng trên chuyển hóa
CH
Cho chuột uống thuốc vào khoảng thời gian từ 9:00 đến 11:00 sáng dưới dạng hỗn dịch trong methyl cellulose 0,5% Sau 1 giờ, giết chuột, lấy gan và chuyển
vào trong hệ đệm oxy hóa đã được làm lạnh Krebs-Ringer-bicarbonate (pH 7,4) Chia nhỏ gan thành các miéng 0,8 mm? va phan tan trong hé dém trén Dinh lugng 1 phần hệ phân tán trên trong các ống trao đổi có chứa natri octanoat [“C] (00 uM/1, 6,67 Ci/M) Thể tích thực nghiệm 1a 1 ml Suc khi các ống nghiệm với 95% Oz/5% CO; trong 10 giây, nút lại bằng nút huyết thanh, ủ 4m & 37°C trong thiét bi
rung lắc trao đôi chất với tốc độ 150 vòng/phút trong 90 phút Phản ứng dừng lại
Trang 40nòng độ protein Thêm [H]CH chuẩn nội tại để xác định mức độ hỏi phục ( khoảng 70 — 80%) Xà phịng hóa các ống nghiệm ở 75°C trong vòng 1 gid, sau đó đem
chiết với 10 ml ether dầu hỏa trong 30 phút Pha đưới đem làm lạnh trong hỗn hợp
đá khô/rượu, loại bỏ pha ether, rửa sạch bằng 2 ml nước cất, sau đó làm bay hơi đến
khô ['“C]CH tổng hợp đem phân lập trên bản mỏng sắc ký silicagel đã được hoạt hóa bởi chloroform Cho hiện màu bằng hơi iod, các vết CH được hiện ra và đo hoạt tính phóng xạ bằng dung dịch phát quang
® Đánh giá
Các kết quả được trình bày dưới dạng tỷ lệ phần trăm ức chế, so sánh với các
giá trị chứng Các giá trị ức chế ED‹o có thể được tính tốn dựa trên đường cong đáp ứng liều khi sử dụng các liều lượng khác nhau
Ngoài ra, Koga và các cộng sự (1990) đã tiến hành thử nghiệm tác dụng ức
chế chọn lọc tông hợp cholesterol in vivo bởi pravastin trên chuột Cho chuột uống
thuốc 2 giờ trước khi tiêm màng bụng ['“C]acetat Sau đó 1 giờ, giết chuột và xác định sự tông hợp CH trong các cơ quan khác nhau
2.2.1.2 Úc chế HMG-CoA reductase in vivo
® Cơ sở dữ liệu
Giống thỏ WHHL với bệnh tăng lipid máu di truyền đã được mô tả bởi Watanable và các cộng sự (1980, 1985, 1988) Những con thỏ này phát triển bệnh u
vàng và bệnh VXĐM từ khi còn rất nhỏ Đây được coi là một mơ hình thích hợp để đánh giá tác dụng phòng và điều trị bệnh của thuốc đối với bệnh tăng lipid máu và
VXDM [39][56][60][79]
® Tiến hành
Các con thỏ đực WHHL dị hợp tử cân nặng từ 1,8 — 2,5 kg, tr 8 — 20 tuần
tuổi được sử dụng trong thí nghiệm này Nhốt riêng các con thỏ này trong chuồng ở
điều kiện tiêu chuẩn, cho thỏ ăn và uống nước tự do để giúp thỏ thích nghi với môi
trường 2 tuần trước khi tiền hành thí nghiệm