Đánh giá tác dụng sinh học của một số dịch chiết cây ngũ sắc (agenratum conyzoides l ) trên động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng sinh học của một số dịch chiết cây ngũ sắc (agenratum conyzoides l ) trên động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng sinh học của một số dịch chiết cây ngũ sắc (agenratum conyzoides l ) trên động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng sinh học của một số dịch chiết cây ngũ sắc (agenratum conyzoides l ) trên động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng sinh học của một số dịch chiết cây ngũ sắc (agenratum conyzoides l ) trên động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng sinh học của một số dịch chiết cây ngũ sắc (agenratum conyzoides l ) trên động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng sinh học của một số dịch chiết cây ngũ sắc (agenratum conyzoides l ) trên động vật thực nghiệm
Trang 1BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - cœsElg› -
MAI THỊ THU HOÀI
ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA
MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CAY NGU SAC
(AGERATUM CONYZOIDES L.) TREN DONG VAT THUC NGHIEM
(KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ KHÓA 2004 - 2009)
+, + Người hướng dẫn : DS Nguyễn Xuân Bắc s* Nơi thực hiện : Bộ môn Hóa sinh
s* Thời gian thực hiện : Từ 2/2009 đến 5/2009 HÀ NỘI - 2009
Trang 2
LOI CAM ON
Em xin chân thành cảm ơn thầy gido DS Nguyén Xuan Bac — thay đã trực tiếp hướng dẫn em thực hiện và hoàn thành khóa luận này
Em cũng xin chân thành cảm ơn TS Nguyên Văn Rư đã tận tình giúp đỡ
em hoàn thành khoá luận
Em xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo, các cán bộ kỹ thuật viên đang giảng dạy, làm việc tại bộ môn Hóa sinh, bộ môn Dược lực, bộ môn Vĩ sinh và
Sinh học đã tận tình giúp đỡ em trong thời gian làm thực nghiệm
A wih
Em cũng xin gửi lời cảm on tối Ban giám hiệu cùng toần thể các thầy giáo,
cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội đã dạy đô và tạo điều kiện thuận lợi cho em trong suốt thời gian học tập tại trường
Cuối cùng em xin cảm ơn gia đình, bạn bè, những người đã giúp đỡ và ủng hộ em để có kết quả như hôm nay
Em xin chân thành cảm ơn!
Hà Nội, ngày 15 tháng 5Š năm 2009
Trang 3MUC LUC Trang
CHU GIAI CAC CHU VIET TAT DANH MUC BANG SO LIEU
DANH MUC HINH MINH HOA
ĐẶT VẤN ĐỀ -.«« 1
PHAN 1 - TONG QUAN 2
12T Ông RI VE BOG vesicins csncenennccenncinacnnanseronmnannnmminiaiameninbaseattncnnanee 2 LLL Khai sac na a: TL LH ằ.ằ -Ằằằ-ằằẶằẰằằẰẴẰằẰằẶẰẰằẶằẶĂăẶẽ-.Ặ 2
DT Ps ma i hggguuugaoagdadgbáizasaseoatasseaseevsas 3
Trang 43.2 Phương PBắp nghiền COM sis ccsciciccsiscsawsscsrcccasinessenesnsssansisanscadoncseoes 17 2.2.1 Chiết xuất một số địch chiết lá cây ngũ sắc - - S<- 17
2.2.2 Xác định sơ bộ thành phần hóa học của dịch chiết lá cây ngũ sắc 18
6c DI i6r: 608 c đang Sinh HN eeeiesesennesenssreernsnnesssssassrsessnsra 18 1355 Phu@iherniiển SÙ N' SẼ Lỗ cacsesodceuGicbgHiebdGlEioLSiQy-dGEDEcag 21 2.3 Kết quả thực nghiệm va WG KEE wisissiisiciscsessscansenseanecnscicecsonesesesves 21 2.3.1 Xác định sơ bộ thành phân hóa học dịch chiết lá cây ngũ sắc 21
2.3.2 Tác dụng chữa bỏng của một số dịch chiết lá cây ngũ sắc 22
2.3.3 Tác dụng ức chế vi sinh vật kiểm định của dịch chiết lá cây ngũ sắc 28
2.4 Bàn luận .«.- «- s« ceseeeeeesretrenrrerrrerrrnrrirrenrnreerrairerrernernre 30 2.4.1 Về thành phần hóa học dịch chiết lá cây ngũ sắc .- 30
2.4.2 Về thiết kế nghiên cứu tác dụng điều trị bỏng - -« 30
2.4.3 Về tác dụng chữa bỏng của một số dịch chiết lá cây ngũ sắc 31
Trang 6DANH MUC BANG SO LIEU
Bang 1.1 M6t s6 chi s6 sinh hoc trong séc bong Bảng 1.2 Một số chỉ số sinh học trong suy mòn bỏng Bang 2.1 Các môi trường nuôi cấy vi khuẩn kiểm định Bảng 2.2 Các môi trường nuôi cấy vi nấm kiểm định
Bảng 2.3 Cách xác định thành phần hóa học chính của 3 loại DC lá cây ngũ sắc Bảng 2.4 Thành phần hóa học DC lá cây ngũ sắc
Bảng 2.5 Mức độ giảm thời gian làm lành da
Bảng 2.6 Sự thay đồi diện tích bỏng trên chuột thí nghiệm theo thời gian
Bảng 2.7 Mức độ giảm điện tích bỏng của các lô thử so với lô chứng Bảng 2.8 Mức độ giảm diện tích bỏng của các lô thử so với lô so sánh
Bảng 2.9 Đường kính vòng vô khuẩn của 3 loại DC lá cây ngũ sắc trên một số
Trang 7DANH MUC HINH MINH HOA
Hình ! Phần trên mặt đất cây ngũ sắc
Hình 2 — Sơ đồ quy trình chiết xuất DC nước lá cây ngũ sắc
Hình 3 Sơ đồ quy trình chiết xuất DC MeOH, ELOH lá cây ngũ sắc Hinh4 Đô thị biểu diễn thời gian lành da hoàn tồn ở các lơ chuột thí nghiệm Hình 5 Đồ thị biểu diễn mức độ giảm diện tích bỏng của các lỗ chuột thí
nghiệm theo thời gian
Hình ó Vòng vô khuẩn ức chế Staphylococcus aureus ATCC 1128 cla DC MeOH
(1), cua DC EtOH (2), cla DC nước (3), của Benzathin penicHlin (4) Hinh 7 Vong vo khudn tte ché Escherichia coli ATCC 25922 cia DC
MeOH (1), cla DC EtOH (2), cla DC nước (3), của Gentamicin (4)
Trang 8ĐẶT VẤN ĐỀ
Hiện nay, khi nền sản xuất công nghiệp ngày càng phát triển thì các tai nạn nghề nghiệp, chập điện, cháy nổ bình ga, xăng dâu cũng ngày càng nhiều Vì vậy, số người bị bỏng đặc biệt là bỏng nặng khá lớn và có xu hướng ngày càng tăng ở Việt Nam và trên thế giới [10] Bỏng thường ảnh hướng xấu đến thầm mỹ của bệnh nhân Không những thế, bỏng còn có thể gây tử vong cũng như để lại nhiều di chứng nặng nề khác làm ảnh hưởng đến sức khỏc và tâm lý của bệnh nhân [10]
Số lượng thuốc trong nước để điều trị bỏng còn ít, trong khi đó nhu cầu về thuốc điêu trị bỏng của người dân ngày càng nhiều, hơn nữa giá thuốc nhập khẩu tăng cao, khiến cho việc điều trị bỏng khá tốn kém và thực sự là một gánh nặng đối với bệnh nhân bỏng, đặc biệt là đối với bệnh nhân nghèo ở một
nước đang phát triển như Việt Nam Vì vậy, việc nghiên cứu tìm ra các nguồn
thuốc mới đáp ứng nhu cầu của người dân là rất cấp thiết
Cây ngũ sắc có ở rất nhiều địa phương trong nước ta và đã được sử dụng
trong điều trị một số bệnh [20], [21] Hiện nay, ở nước ta và trên thế giới đã có
nhiều nghiên cứu về tác dụng sinh học của cây ngũ sắc [14], [15] tuy nhiên chưa có tài liệu công bố về tác dụng chữa bỏng Vì vậy, nhằm góp phân làm sáng tỏ khả năng điều trị bỏng của cây ngũ sắc đồng thời làm tăng việc sử
dụng được liệu này trong điều trị bỏng, chúng tôi tiền hành đề tài: “Đánh giá
tác dụng sinh học của một số dịch chiết cây ngũ sắc (Ageratưm
conyzoides L.) trên động vật thực nghiệm” với hai mục tiêu sau: I Xác định sơ bộ thành phân hóa học của một số dịch chiết cây ngũ sắc
2 Đánh giá tác dụng điều trị bỏng, kháng khuẩn của một số dịch
Trang 9PHAN 1: TONG QUAN 1.1 Téng quan vé bong
1.1.1 Khái niêm về bỏng
Bỏng là tổn thương do tác dụng trực tiếp của các yếu tố vật lý (nhiệt, bức xa, điện) và hoá học gây ra trên cơ thể Da là bộ phận thường bị tổn thương nhất khi bị bỏng, kế đến là các lớp sâu dưới da (cân, cơ, xương, khớp, mạch
máu, thần kinh) và một số cơ quan (đường hô hấp, ống tiêu hoá, bộ phận sinh đục) [10]
Khi bệnh nhân có điện bỏng từ 10 - 15% diện tích cơ thể trở lên hoặc khi có hỏng sâu (từ 3 - 5% diện tích trở lên) thì được xác định là bệnh bỏng [10]
1.1.2 Dịch tế bỏng
Tai nạn bỏng ở các nước công nghiệp là loại chấn thương thường gặp: - Cứ 100 000 dan trong | nam co:
+ Trên 23 người bị bỏng (ở nhóm tuổi dưới 65) + Trên 15 người bị bỏng (ở nhóm tuổi trên 65)
- Cứ 100 000 dân cần có 0,2 - 0,5 giường bệnh đành cho chữa bỏng
Ở Mỹ với dân số là 250 triệu người mỗi năm có khoảng 2 triệu người bị
bỏng Trong số 70 000 — 108 000 nạn nhân hỏng phải vào bệnh viện điều trị mỗi năm thì có 6 500 — 12 000 người bị tử vong Nếu so với tử vong do các
thiên tai khác (nhữ bão, lụi, đông đấu) thì số tử vong vì bông gấp 20 lân Nếu
Trang 10Ở Việt Nam hiện nay, hàng năm Viện bỏng Quốc Gia nhận điều trị trên I 500 người bị bỏng, khoa bỏng Bệnh viện Saint Paul Hà Nội nhận điều trị trên 900
người bị bỏng, khoa bỏng Bệnh viện Chợ Rẫy thành phố Hồ Chí Minh nhận điều trị trên 600 người bị bỏng và khoa bỏng trẻ em Bệnh viện Nhi đồng | thành phố Hồ Chí Minh nhận điều trị trên 360 trẻ nhỏ bị bỏng [10]
1.1.3 Phan loại bỏng
Theo GS TS Lê Thế Trung, bong được chia thành § loại: *s* Bảng độ 1
Là mức độ bỏng nhẹ nhất và nông nhất Da khô, sưng, đỏ, đau rát Được coi như một hiện tượng '“*“Viêm cấp vô khuẩn” Sau 24h đau đỡ dần và sau 48h hết
đau Viêm sưng nề kéo đài vài ngày (2 - 3 ngày), có thể thấy lớp sừng bong rung di [10]
“+ Bong dé 2
Trên nên da đỏ, sưng, ướt xuất hiện các nốt phống (ngay sau khi bị bỏng hoặc sau vài phút đến vài giờ có khi tới 24 - 48h) Dịch chứa trong nốt phổng mau vàng trong Chất dịch này có đủ các thành phần của huyết tương (vì thoát
từ máu qua các thành mạch thấm ra khoảng khe kẽ) Bỏng độ 2 kèm theo đau
rát, đau nhất ở vùng nền nốt phổng (các đâu tận cùng thân kinh lộ ra) Khi nốt phổng vỡ, vòm nốt phổống bong đi lộ phân nền đỏ, ẩm, tăng cảm và xuất tiết
sẹp xuống Nếu bị nhiễm khuẩn, dịch nốt phổng trong những ngày sau sẽ đục và hoá mủ, vùng bỏng có các triệu chứng viêm mủ, nồng, đỏ, sưng và đau tang kéo dài Toàn thân có sốt, mệt, không thèm ăn, tại vùng bẹn hoặc nách có hạch viêm [L0]
s Bảng độ 3
Trang 11trắng, hoặc có ri máu và còn cảm giác Dịch nốt phống có thể màu hồng, có
máu rỉ Bỏng trung bì còn thể hiện dưới hình thức đám da hoại tử khô hoặc ướt
nhưng khác với hoại tử khô của bỏng toàn bộ lớp da ở những điểm sau: Không có các hình tính mạch đưới da bị nghến mạch, da hoại tử bỏng không nhăn nhúm và thường mỏng, khi thử cảm giác (chọc kim, thử nóng lạnh) vùng đó thường vẫn còn một phần cảm giác Rút lông vùng hỏng thấy vẫn bám chặt và
người bệnh thấy đau [10]
s* Bỏng đó 4
Lâm sàng thể hiện đưới 2 hình thức:
- Da hoại tử ướt (xuất hiện khi nhiệt độ trong lớp da khi bỏng đạt tới 50 -
58°C), khám thấy đám da trắng bệch hoặc màu đỏ xám hoặc có chỗ trắng chỗ xám như đá hoa, có khi lân những vùng da đỏ tím sâm Đám đa hoại tử ướt
như gồ cao lên so với các vùng da lân cận, sờ vào có cảm giác như bột mịn ướt Quanh đám hoại tử này bao giờ cũng là một vùng xung huyết và nề rộng - Da hoại tử khỏ (còn được gọi là khối hoại tử khô đông đặc xuất hiện khi
nhiệt độ trong lớp da khi bị bỏng đạt tới 65 - 70°C), khám thấy đám da chắc, khô màu den, hoặc dỏ vàng sãm Qua lớp da hoại tử khô trông rõ các hình lưới
tĩnh mạch dưới da bị nghẽn mạch Quanh vùng đa bỏng hoại tử khô là một
viền hẹp đa màu đỏ và nề sưng Nhìn kỹ thấy vết hoại tử khô như lõm xuống
so với các phần da lành lân cận Đám da bỏng hoại tử khô có thể nhăn nhúm,
hoặc nứt né, sở cứng thô rấp Vùng bóng (oàn bộ lốp đa mất cảm giác đau và
các cảm giác khác [10] s* Bong dé 5
- Lớp cơ bị bỏng màu xám hoặc vàng nhạt như thịt thui, thịt luộc, không có
máu chảy và khi cắt các thớ cơ đó không thấy thớ cơ co lại
Trang 12- Khớp: thường gặp tổn thương bao khớp khi rụng thành các lỗ rò khớp có các chất dịch nhờn chảy ra Ổ khớp bị viêm nhiễm khuẩn: viêm khớp tiết dịch, viêm mủ khớp dẫn tới huỷ sụn khớp, sai khớp Bỏng khớp gây hạn chế cử
động, phù nê phát triển mạnh ở tổ chức quanh khớp, đau tăng và kéo dài âm ỉ tại vùng khớp, sốt cao kèm theo các triệu chứng nhiễm khuẩn nặng
- Xương: thường gặp ở mặt trước xương chầy, mắt cá cẳng chân, xương sọ, xương mỏm khuỷu, xương bánh chè, xương bả vai Việc chẩn đoán khó nếu xương không bị lộ ra trong những ngày đầu [ 10]
1.1.4 Tác nhân gây bỏng Gồm 4 loại chính:
“* Bỏng do sức nhiệt:
- Bỏng do sức nhiệt khô: hay bị nhất là bỏng lửa cháy với nhiệt độ cao như củi gỗ cháy (1 300 - 1 400°C), ét xăng cháy (800 - 1 200”C), lửa khí acetylene
(2 127°C)
- Bong do sức nhiệt ướt: nhiệt độ gây bỏng thường không cao như khi bị bỏng sức nhiệt khô Bỏng do nước sôi, thức ăn nóng sôi (từ trên 50 - 100°C), dầu mỡ sôi nóng (180°C)
s* Bỏng do luồng điện: Luồng điện có hiệu điện thế thông dụng (<1000V),
luồng điện có hiệu điện thế cao (>1000V)
s* Bỏng do hóa chất: bao gồm các chat oxy hod(acid cromic, KMnQ, ),
các kiểm mạnh (KOH, NaOH )
s* Bỏng do bức xạ: Tia hồng ngoại, ta tử ngoại, tia Rơghen, tia laze, các hạt cơ bản [9], [10]
1.1.5 Diễn biến của bệnh bỏng
Trang 13Thoi kj dau
+ Sốc bỏng:
Các triệu chứng của sốc bỏng cũng được chia thành 3 mức độ: nhẹ, vừa,
nang va rat nang [10] va được ghi trong bảng sau:
Bang 1.1 M6t s6 chi s6 sinh hoc trong s6c bong Các biểu Mức độ sốc hiện Nhẹ Vừa Nang va rat nang Xét nghiém melt:
- hồng cầu | 3,9 - 6,5 triệu 4,3 - 7 triệu 1,9 - 8,4 triệu, huỷ huyết
(tế bào#nn?) và thiếu máu xuất hiện - huyết cẩu| 65-110 70 - 140 69 - 156 tố (%) - bach cau] 7,4-12nghin | 6,0- 30nghìn 2,3 - 41 nghin (té bao/mm’) ' nước tiểu Xét nghiém Bình thường albumin, urobilin | mg% Có thểthấy | Albumin tới 150 - 240 Hồng cầu, bạch cầu, trụ | hình | Đái ra máu, ra huyết | | cầu tố + Các biển chứng cấp gặp trong thời kỳ đâu: - Suy thận cấp
- Thủng loét cấp ống tiêu hoá
Trang 14s* Thời kỳ thứ hai
+ Nhiệm độc bỏng cấp:
- Rối loạn tính thần
- Sốt cao 38 - 39°C hoặc cao hơn - Da, niêm mạc nhợt, tím tái
- Huyết áp động mạch bình thường hoặc hơi giảm - Nhịp thở nhanh
- Mất cảm giác thèm ăn, nôn, bụng chướng
- Thiểu niệu hoặc võ niệu kèm theo suy thận cấp, ure máu tăng cao [10] + S6t do hap thu mu:
- Rối loạn tỉnh thần (ít gặp)
- Sốt cao kéo đài nhưng ít khi rất cao (trên 400C)
- Ít thấy xuất hiện các đám hồng ban, nếu có thường là ban dị ứng
- Thiếu máu tiến triển dần, bạch cầu tăng, công thức máu chuyển dịch sang trái nhưng không mạnh
- Nước tiểu có albumin, hồng cầu, trụ hình nhưng ở mức độ nhẹ và trong một thời gian ngắn
- Hiện tượng liệt giãn cấp dạ dày ruột ít gặp và thường không nặng
- Không thấy trạng thái truy tim mạch, suy thận cấn
- Các nốt loét điểm tì hình thành muộn [10]
+ Nhiễm khuẩn huyết - nhiễm khuẩn toàn thân:
- Rối loạn tính thần thường gặp
- Sốt cao và rất cao (trên 40°C)
- Xuất hiện các nốt, vết ban đỏ - Mạch nhanh đều (140 - 170 lần/phút)
Trang 15- Nước tiểu có albumin, hồng cầu, bạch cầu bị huỷ, trụ hình, triệu chứng nay kéo dai dai dang
- Thiếu máu sớm phát triển trong 3 tuần đầu, protein máu hạ
- Số lượng bạch cầu ở máu ngoại vi tăng cao tới 30 000 — 80 000 TB/mmẻ Công thức bạch cầu chuyển trái, loét điểm tỳ xuất hiện sớm trong
tháng đầu [10] s* Thời kỳ thứ ba
Là thời kỳ suy mòn hỏng và các hiến chứng
Suy miồn bông được chia thành 3 mức độ: suy mồn nhe, suy mồn vừa, v
suy mòn nặng được phi lại ở bảng sau [10]: ay my Bảng 1.2 Một số chỉ số sinh học trong suy mòn bỏng tế bào!mm`) Mức độ Suy mòn nhẹ Suy mòn vừa Suy mòn nặng Biểu hiện
Trang 16s* Thời kỳ thứ tư
La thời kỳ dưỡng bệnh và di chứng
- Trong 1/2 số trường hợp nặng xét nghiệm thấy bạch cầu mấu còn cao, 1/4 số trường hợp còn thiếu máu
- Tuy mức protem máu đã trở lại gần bình thường nhưng mức albumin huyết thanh vẫn thấp và mức gamma globulin còn cao
- Di chứng cục bộ gồm: sẹo xơ, sẹo phì đại, sẹo lồi, sẹo dính, sẹo co kéo [ 10]
1.1.6 Di chứng của bệnh bỏng
Di chứng bỏng rất đa dạng, phụ thuộc vàa độ sâu và vị trí của bóng Di
chứng bỏng được chia thành 6 nhóm như sau:
+ Nhóm Ï - DI chứng sẹo da đơn thuần: g6m seo xo, seo phi dai, seo lồi + Nhóm 2 - Seo co kéo: gồm co kếo thụ động (do tư thế giảm đau của các chi
bị bỏng bị bất động liên tục, các phần mềm bị co kéo dần) và co kéo hình
thành sau khi vết thương bỏng đã tự liền sẹo hoá
+ Nhóm: 3 - Seo dính: di chứng hình thành trong quá trình điều trị vết thương bỏng sâu ở các vùng tiếp giáp hai hay nhiều bộ phận của cơ thể, khi thay băng
không đặt gạc tách kẽ và vùng tiếp giáp, khi mô hạt hình thành sẹo gây dính
các bộ phận như bàn ngón tay, khuỷu, cổ, cằm
+ Nhóm 4 - Các khuyết phế tật do tổn thương bỏng sâu gây ra: Mỏm cụt chỉ,
khuyết nhãn cầu, mất sẹp vành tai, cứng khớp, dính khớp, mất lông mày, hẹp mồm, sẹp vành mũi
+ Nhóm 5 - Các rối loạn dinh dưỡng vùng seo loét thiểu đưỡng, bỏng buốt, thưa xương, sẹo đổi màu
Trang 171.2 Một số phương pháp áp dụng cho điều tri bỏng 1.2.1 Nguyên tắc điều trị bỏng
Việc điều trị bỏng bao gồm điều trị toàn thân và điều trị tại chỗ vết bỏng Điều trị toàn thân nhằm mục đích dự phòng hay điều trị các biến chứng toàn thân do bỏng gây nên (ví dụ như biến chứng sốc bỏng, nhiễm khuẩn, suy thận cấp ) Ngoài ra, việc điều trị toàn thân còn nhằm cung cấp cho bệnh nhân chế độ đinh dưỡng tốt hơn, nâng cao thể lực, tính thần của bệnh nhân dé giúp họ vượt qua bệnh tật
Điều trị tại chỗ vết bỏng nhằm mục đích tạo điều kiện thuận lợi nhất để vết
bỏng tự khỏi (trong trường hợp bỏng nông) hoặc can thiệp bằng phẫu thuật (trong trường hợp bỏng sâu) để làm liên vết bỏng
Đối với bỏng nông, thuốc điều trị vết bỏng có các nhóm như nhóm chống nhiễm khuẩn, nhóm tạo môi trường thuận lợi (độ ẩm, cung cấp các yếu tế phát triển ) cho việc tái tạo biểu mô của vết bỏng
Đối với bỏng sâu, thuốc tại chỗ có tác dụng thúc đẩy tan rữa hoại tử bỏng và chống nhiễm khuẩn, thuốc không làm vết bỏng sâu tự liền được mà cần phải can thiệp bằng phẫu thuật [I I |
1.2.2 Phương pháp điều trị bỏng bằng thuốc ** Các thuốc dùng ngoài
- Các thuốc làm se khô và tạo màng che phủ vết bỏng:
Dung dịch tanin 5% được dùng phổ biến nhất Tanin có tác đụng làm đông
dịch vết thương, kết tủa protein, tạo thành một mang vẩy Cũng có thể dùng
kết hợp dung dịch tanin với dung dịch bạc nitrat 10% [10]
Bột Alumin, Azosuluamid + Tiriricine, hoặc các chất tạo màng bằng
polyurethan, polytetrafluoroethylen, polyvinyl, nolyvinylalcol, các chất tạo keo đơn phân tử [10]
Cao đặc lá sim, nước sắc đặc vỏ cây xoan trà, bột xoan trà (thuốc bỏng B76)
Trang 18Thuốc bỏng chế từ các cây khác như Kháo nhâm, Kháo vàng, Hu day, Sang
lẻ, Sú, Nâu, Sòi, Sến | 10]
- Nhóm thuốc làm rụng nhanh các hoại tử ở vết bỏng: Cao Mã đề, dịch
nước nghệ, kem nghệ [I0]
- Nhóm thuốc có tác đụng ức chế vi khuẩn, kháng khuẩn: Cao lỏng Vang dang, cao lỏng Lân tơ uyn, bột Bù cu vẽ, địch nước lá Sắn thuyền, cao lỏng Sài đất [ I0]
- Nhóm thuốc ảnh hưởng đến tái tạo mô hạt và biểu mơ hố ở vết bỏng: Cao Hoặc dịch chiết từ nghệ (thân rễ), mỏ qua (toàn thân), rau má (toàn thân) [ I0]
+ Caz thide diing trong
- Thuốc giảm đau: Dung dịch Novocain 0,25%
- Dịch truyền: Ringer lactat, huyết thanh ngọt đẳng trương - Các loại thuốc khác:
Thuốc kháng Histamin, chống nôn: Dimedrol Thuốc trợ tim mạch: Cafein, Oxabain
Thuốc giảm tính tham thanh mach: Vitamin C, CaCl) Thuốc kháng sinh: ding theo khang sinh dé
Thuốc chống toan hóa: Nabica 8,4%; 1,4% [9] 1.2.3 Một số phương pháp điều trị bỏng mới
- Phương pháp nuôi cấy TB sừng trong môi trường có huyết thanh
- Phương pháp nuôi cấy TB sừng trong môi trường không huyết thanh - Một số phương pháp điều trị vết thương mạn tính như: dùng thuốc kích thích sự phát triển của TB, dùng oxy cao áp, dùng ta laze [1 I]
Trang 191.3 Tổng quan về cây ngũ sắc 1.3.1 Tên gọi
- Tên khoa hoc: Ageratum conyzoides L., ho Cúc - Asteraceae
- Tên Việt Nam: Ngoài tên là cây ngũ sắc người ta còn gọi nó với nhiều tên khác như cây hoa cứt lợn, cây hoa ngũ vị, cây cỏ hôi
- Tránh nhầm với cây hoa ngii sic chinh tén - Lantana camara L., ho Cỗ roi ngựa - Verbenaceae [21] Hình 1 Phần trên mặt đất cây ngũ sắc 1.3.2 Đặc điểm hình thái và phân bố + Đặc điểm hình thái
Cây ngũ sắc là một loại cây nhỏ, mọc hàng năm, thân có nhiêu lông mềm, cao chừng 25 - 50 em Lá mọc đối, hình trứng hay 3 cạnh dài 2 - 6 cm, rộng
1 - 3cm, mép có răng cưa tròn, hai mặt đều có lông, mặt đưới của lá mau
nhạt hơn Hoa nhỏ màu tím hoặc màu trắng xếp thành đầu, các đầu này lại tập
hợp thành ngù Quả bế màu đen, có 3 sống dọc [7], [21] s* Phản bố
Trang 20+ Ở Việt Nam: mọc hoang ở khắp nơi trong nước, nhiều nhất ở các vùng nông thôn [7], [21] 1.3.3 Bộ phận dùng và thành phần hóa học ** Bộ phận dùng Người ta thường sử dụng phần cây trên mặt đất để lầm thuốc [7], [21] % Thành phần hóa học
Toàn cây chứa tỉnh đầu (0,16% so với được liệu khô) Lá và hoa chứa 0,02% tỉnh dầu với mùi nồng khó chịu, tính đầu này chứa phenol (eugenol)
5% Thanh phan chủ yếu của tính dầu là g-cardinen, caryo-phyllin,
ageratocromen (precocene II), 7-methoxy-2,2-dimethylcromen (precocene I)
và một số thành phan khác
La chifa stigmast-7-en-3-ol (sterol), quercetin, kaemferol, acid fumaric, acid cafeic
Cây ngũ sắc ở Việt Nam chứa 0,7 - 2% tinh dau, carotenoid, it phytosterol, tanin, đường khử, saponin, hợp chất uronic
Hàm lượng saponin thô trong thân và lá (tính theo dược liệu khô kiệt) là
4,7% Tình dầu cây ngũ sắc hơi sánh đặc, mầu vàng nhạt đến vàng nghệ, mùi
thơm dễ chịu [21]
1.3.4 Công dụng, chỉ định, phối hợp điều trị
Cây ngũ sắc có vị hơi đắng, tính mát, có tác dụng thanh nhiệt giải độc, tiêu sưng và cầm máu Cành và lá vò ra có mùi hôi gây nôn [7], [21]
Cây ngũ sắc thường được sử dụng làm thuốc chống viêm, chống phù nề, chống đị ứng trong các trường hợp:
- Sổ mũi, viêm xoang mũi dị ứng cấp và mạn
- Chay mau ngoai do chấn thương, bị thương sưng đau - Mụn nhọt, lở ngứa, eczema
Trang 21Liều dùng: 15 - 30g cây khô sắc nước uống hoặc dùng cây tươi giã lấy nước
nhỏ Cũng dùng cây tươi giã đấp vết thương chảy máu, mụn nhọi, eczema, hoặc nấu nước tắm chữa ghẻ, chốc đầu của trẻ em Người ta còn dùng cây ngũ sắc chữa rong huyết sau khi sinh đẻ, dùng phối hợp với bỏ kết nấu nước gội
đầu cho thơm và sạch gầu, trơn tóc Ở Ấn Độ, người ta đùng nước ép rễ cây để chữa bệnh sỏi thận Lá làm thuốc săn đa, dùng chữa các vết đứt, vết thương và
dùng đắp chữa sốt rét [21 ]
1.3.5 Một số bài thuốc từ cây ngũ sắc hay được sử dụng
- Chữa phụ nữ rong kính sau đẻ: dùng 3Ô - 50g id cây ngũ sắc tươi giã nhỏ, chế thêm nước, vắt lấy nước cốt uống
- Chữa viêm xoang dị ứng: chọn lấy cây tươi về ngâm rửa sạch rồi để ráo, giã nát, vắt lấy nước tẩm vào bông Dùng bông này nhét vào lỗ mũi bèn đau khoảng 15 - 20 phút thì rút bông ra để dịch mủ từ trong xoang và mũi giải
phóng ra ngoài rồi xì nhẹ nhàng, tránh xì mũi mạnh vì lúc đó mủ từ trong mũi
xoang có thể qua đường nối thông giữa mũi và tai (vòi nhĩ) gây viêm tai giữa
cấp
- Trị viêm họng: 20g cây ngũ sắc, 20g kim ngân hoa, 6g lá giẻ quạt, lôg
cam thảo đất sắc uống ngày | thang, chia lam 2 - 3 lần
- Trị sỏi tiết niệu: 20g cây ngũ sắc, lóg kim tiền thảo, 12g râu ngô, 20 mã dé, 16g cam thảo đất sắc uống ngày | thang, chia lam 2 - 3 lần
- Trị cczema, chốc đầu: lấy lượng cây ngũ sắc vừa phải nấu nước để rửa chỗ bị tổn thương, ngày l - 2 lần [20], [21]
Hiện nay, trên thể giới người ta đã sử dụng cây ngũ sắc trong điều trị bỏng làm lành vết thương nhưng ở Việt Nam cây ngũ sắc được dùng để chữa
viêm xoang là chủ yếu Do đó, chúng tôi hi vọng đẻ tài của chúng tôi sẽ là tiền
đề để các nhà khoa học khác tiếp Lục nghiên cứu đưa cây ngũ sắc vào điều trị bỏng một cách phổ biến
Trang 22PHAN 2: THUC NGHIEM VA KET QUA
2.1 Nguyên liệu và phương tiện nghiên cứu
2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu
Nguyên liệu nghiên cứu là lá cây ngũ sắc được thu hái tại Ninh Bình tháng
2/2009 Mẫu thu hái đã được Bộ môn Thực vật - Trường Đại học Dược Hà Nội
xác định tên khoa học là Á geratfurn eonyzoides L họ Cúc - Asteraceae Nguyên liệu được rửa sạch, phơi khô trong bóng râm, sau đó nghiền thành
bột thô
2.1.2 Phương tiện nghiên cứu
a) Động vật nghiên cứu
Chuot nhat trang duc (Mumus culus, chủng Sw1ss), trưởng thành, khỏe mạnh, cân nặng trung bình 25g, do Viện Vệ sinh Dịch tế Trung Ương cung cấp
b) Háa chất, thuốc thử
Các hóa chất, thuốc thử dùng trong nghiên cứu được Bộ món Hóa Sinh - Trường Đại học Dược Hà Nội cung cấp và đều đạt tiêu chuẩn phân tích hóa học ¢) Dung cụ, thiết bị - Nồi cách thủy (Trung Quốc) - Tủ giữ ấm Cilifton - Đèn cồn - Bản sắt (kích thước 1xlem) - Dao lam - Nồi hấp
- Máy móc và dụng cụ thí nghiệm khác thuộc Bộ môn Hóa Sinh, Bộ môn Dược lực, Bộ môn VI sinh và Sinh học - Trường Đại học Dược Hà Nội
Trang 23d) Vi sinh vật
Giống vi sinh vật kiểm định do Bộ môn Vi sinh và Sinh học - Trường Đại học Dược Hà Nội cung cấp - Vi khuẩn Gram (+) Tu cau vang - Staphylococcus aureus ATCC 1128 - Vi khuẩn Gram (-) Escherichia coli ATCC 25922 - Vị nấm Candida albican
e) Méi trường thử nghiệm
s* Các môi trường nuôi cấy vi khuẩn kiểm định:
Bảng 2.I Các môi trường nuôi cấy vi khuẩn kiểm định Thanh phan : NaCl Cao thịt | Pepton Thach Nước cất (%) %) (%) %) Môi trường " đn ` Canh thang 0,5 0,3 0,5 = Vừa đủ Thạch thường 0,5 0,3 0,5 1,6 - 1,8 100ml
s* Các môi trường nuôi cấy vi nấm kiểm định:
Trang 242.2 Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Chiết xuất một số DC lá cây ngũ sắc s* Quy trình chiết xuất DC nước lá cây ngũ sắc: Bột dược liệu + nước cất Tủ ấm 40°C/24h, gạn, lọc DCI Bã dược liệu | + nước cất Tủ ấm 40°C/24h, gạn, lọc DC2 | + DCI, cô cách thủy Cao long
Hình 2 Sơ đồ quy trình chiết xuất DC nước lá cây ngũ sắc
Trang 252.2.2 Xác định sơ bộ thành phần hoá học của DC lá cây ngũ sắc
Bảng 2.3 Cách xác định thành phần hóa học chính của 3 loại DC lá cây ngũ sắc
ŠTT | Thành phân hóa học Tiến hành
| Lay 5 ml DC, thém 5 ml HCl 1%, dun s6i, loc, Alkaloid thêm TT Mayer sẽ có tủa màu trắng với 3 mức độ:
nhe (+), rd (4+), rat manh (+++)
3 Tanin Lay 5 ml DC, thém TT FeCl, sé thấy màu xanh với |
3 mức độ: nhẹ (+), r6 (++), rét manh (+++)
Đựa trên tính chất tạo bọi: lấy 2 ấng nghiệm, ống
| chita 5 ml HCI 0,1N (pH = 1), ống 2 chứa 5 ml NaOH 0,IN (pH = 13), thêm vào mỗi ống nghiệm
5 ml DC, lắc mạnh 2 ống trong 15s, để yên, thấy
3 Saponin cột bọt trong cả 2 ống nghiệm cao bằng nhau và bên như nhau (do đố dược liệu chứa saponin
trierpenoid) với 3 mức độ: nhẹ (+), rõ (+), rất manh (+++)
Lay 5 ml DC, thém 2 giot dung dich FeCl, 1% sẽ
4 Flavonoid có màu lục với 3 mức độ: nhẹ (+), rõ (++), rất
mạnh (+++)
433, Nghiên cứu tác dụng sinh học
a) Thử tác dụng chữa bỏng trên mô hình gây bảng bằng nhiệt - Chuột thí nghiệm được chia thành 8 lô (mỗi lô 5 con)
- Dùng dao lam cạo một đám lông ở mỗi con chuột
- Dùng bản sất đã hơ nóng trên ngọn lửa đèn côn áp sát vào chỗ đã cạo lông ở chân chuột để gây bỏng với điện tích lcm x lem
- Lô chứng (Lô 1): không bôi thuốc - Lô thử các DC lá cây ngũ sắc:
Trang 26Lô 2: bôi DC nước Lô 3: bôi DC McOH
Lô 4: bôi DC EtOH
Lô 5: bôi thuốc mỡ Tetracyclin 1%
Lô 6: bôi thuốc mỡ Tetracyclin 1% trộn với DC MeOH Lô 7: bôi thuốc mỡ Tetracyclin 1% trộn với DC ELOH - Lô so sánh (Lô 8): bôi thuốc chữa bỏng Panthenol
Chuột được điều trị liên tục như trên, sau 24h bôi thuốc một lần So sánh
mức độ giảm thời gian làm lành da, mức độ giảm diện tích bỏng ở những lô thử thuốc, lô so sánh với lô chuột đối chứng và lô so sánh
Mức độ giảm thời gian làm lành da của các lô so với lô chứng được tính
theo công thức:
11
1% = x 100%
Trong đó: T, là thời gian khỏi hoàn toàn vết thương ở lô chứng (ngày)
T, là thời gian khỏi hoàn tồn vết thương ở lơ thử (ngày)
Mức độ giảm thời gian làm lành da của các lô so với lô so sánh được tính
theo công thức:
7, -T,
1,% = x 100%
Trong đó: T,, 1a thai gian khoi hoan toan vết thương ở lô so sánh (ngày) T, là thời gian khỏi hoàn toàn vết thương ở lô thử (ngày)
Mức độ giảm diện tích bỏng so với lô chứng được tính theo công thức:
M,% = ee x 100%
a
Trong đó: S., là diện tích bỏng của lô chứng ngày thứ i (em?)
S„ là diện tích bỏng của lô thử ngày thứ ¡ (cm?)
Trang 27Mức độ giảm diện tích bỏng so với lô so sánh được tính theo công thức :
M,% = Aes x 100%
Trong đó: S,,, la diện tích bỏng của lô so sánh ngày thứ ¡ (cm*) S, la diện tích bỏng của lô thử ngày thứ ¡ (cin”)
b) Thử tác dụng ức chế vi khuẩn bằng phương pháp khuếch tán trên
môi trường đặc
- Các khoanh giấy lọc đường kính 7,00mm hấp tiệt trùng ở 121°C/20 phút, sấy khô, tấm 3 lần với DC lá cây ngũ sắc, sau mỗi lần tầm các khoanh giấy lọc đều được sấy ở 50°C đến khô hết đung môi
- Chuẩn bị môi trường và cấy VSV kiểm định:
VSV kiểm định được cấy vào môi trường canh thang, Sabouraud rồi
nuôi cấy cho phát triển trong tủ ấm 37°C trong thời gian I8 - 24h đến nồng độ 107 tế bào/ml (kiểm tra bằng pha loãng và dãy dịch chuẩn) Môi
trường thạch thường vô trùng (tiệt trùng ở 118°Œ/30 phút) được làm lạnh về 45 - 50°C và được cấy giống VSV kiểm định vào với tỷ lệ 2,5ml/100ml Lắc
tròn để VSV kiểm dinh phân tan déu trong môi trường thạch thường, rồi đổ
vào đĩa Petri vô trùng với thể tích 20ml/đĩa và để cho thạch đông lại
- Đặt khoanh giấy lọc:
Khoanh giấy lọc đã được xử lý như trên được đặt lên bể mặt môi trường
thạch thường chứa VSY kiểm định thee sơ đồ định sẵn
- Ủ cde dia Petri trong tủ ấm 37°C trong 18 - 24h, rồi sau đó lấy ra đọc kết quả, đo đường kính vòng vô khuẩn (nếu có) bằng thước kẹp Palmer độ chính
xác 0.02 mm
- Cách đánh giá kết quả: đựa trên đường kính vòng vô khuẩn và được đánh giá
theo công thức:
Trang 28_ 3 Dd, lo, ; by D= 4 i= —=
n n-|
D: Đường kính trung bình vòng vô khuẩn (vô nấm) (mm) D: Đường kính vòng vô khuẩn (vô nấm) thứ ¡ (mm) s: Độ lệch thực nghiệm chuẩn có hiệu chỉnh n: Số thí nghiệm làm song song
2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu được xử lý theo phương pháp thống kê bằng phần mềm Excel 2003 So sánh trung bình 2 mẫu được tiến hành theo t-TEST, sự khác biệt có ý nghĩa thống kê khi p < 0,05 2.3 Kết quả thực nghiệm và nhận xét 2.3.1 Xác định sơ bộ thành phần hoá học DC lá cây ngũ sắc Bảng 2.4 Thành phần hóa học DC lá cây ngũ sắc Alkaloid + + + Tanin 44+ ++ + Saponin + +++ ++ STT | Thành phần hoá học | ĐC nước ¡ DC MeOH DC EtOH 1 2 3 4 Flavonoid + a +++
Nhân xét: Trong lá cây ngũ sắc có cả alkaloid, tanin, saponin và flavonoid,
Các DC khác nhau cố thành phần và hàm lượng các nhóm chất hóa học khác nhau DC nước có hàm lượng tanin cao nhất DC MeOH có hàm lượng saponin cao nhất DC EtOH có hàm lượng flavonoid cao nhất
Trang 292.3.2 Tác dụng chữa bỏng của một số DC lá cây ngũ sắc
s* Mức độ giảm thời gian làm lành da
Bảng 2.5 Mức độ giảm thời gian làm lành da
tá Thời gian liền da hồn L(®) L.(%) So sánh với | So sánh với
toàn ( M + SE ngày) lô chứng | lô so sánh l 7,80 + 0,20 5 6,60 + 0,24 15,38 | -153,85 | p<0,05 | p<0(01 3 2,80 + 0,20 64,10 - 7,69 p<0,01 p> 0,05 4 4,80 + 0,20 38,46 - 84,62 p<0.0I1 p<0,01 2 6,80 + 0,20 12,82 | - 161,54 | p<0,05 p<0,01 6 3,80 + 0,20 51,28 - 46,15 p<90,01 p<0.,01 7 5,60 + 0,24 28,21 | -115,38| p<001 | p<001 8 2,60 + 0,24
Từ bảng này ta có đồ thị về thời gian lành đa hoàn tồn của các lơ chuột thí
nghiệm như sau:
Trang 30Thời gian (ngày) vw dbmanwn ese wo — hi |§ Lơ 1 B Lô 2 I Lô 3 B Lô 4 BỊ Lô 5 E8 Lô 6 E1 Lô 7 M Lô 8 | Hình 4 Đồ thị biểu diễn thời gian lành da hoàn toàn ở các lô chuột thí nghiệm Ghỉ chú:
Lô ]: Chuột không được bôi thuốc;
Lô 2: Chuột được bói DC nước; Lô 3: Chuột được bôi DC MeOH;
Lô 4: Chuột dược bôi DC EIOH;
Lâ 5: Chuậit ñiợc bâi thuấc mỡ Teiraeyelin l%;
Lô 6: Chuột được bôi thuốc mỡ Tetracyclin I% trộn lân với DC MeOH; Lô 7: Chuột được bôi thuốc mỡ Teiracychn 1% trén lin vai DC EtOH; Lô 8: Chuột được bôi thuốc Pamthenol
Nhân xét: Tất cả các 16 chuột thử đều có thời gian liên đa hoàn toàn nhỏ hơn so với thời gian liên đa hoàn tồn của lơ chứng có ý nghĩa thống kê (p< 0,05) Trong các lô thử thì lô chuột được bôi DC MeOH có thời gian liền đa hoàn toàn nhỏ nhất So với lô so sánh thì thời gian liên da của các lô thử cao hơn có ý nghĩa thống kê (trừ lô chudt b6i DC MeOH)
Trang 312.3.2.2 Mức độ giảm diện tích bong
Bảng 2.6 Sự thay đổi diện tích bỏng trên chuột thí nghiệm theo thời gian
1 Dién tich bong (M + SE cm’)
Trang 34Ghi chit:
Lé 1: Chuột không được bói thuốc; Lô 2: Chuột được bôi DC nước; L6 3: Chuét được bôi DC MeOH;
Lô 4: Chuột được bôi DC EtOH; Lô 5: Chuật dược bôi thuốc mỡ Tetracyc Lô6: Chuột được bôi thuốc mổ Tetracyclin Ï
L7: Chuột được bôi thuốc mỡ Teracyclin I
La 8: Chuột được bôi thuốc Panthenol
OL61 MLô2 BSL63 OL64 BLôS BLô6 Đ L7 HLa®8
Hình 5 Đỏ thị biểu diễn mức độ giảm điện tích bỏng của các lô chuột thí nghỉ Nhân xét: Tốc độ liên da trên chuột (tính theo từng ngày quan sát) của tất cả các
với lô chứng có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) (trừ lô 2 có sự khác biệt không cố khác biệt không có ý nghĩa thống kê khi quan sát trong các ngày thứ 2, 4, 5, 6)
tôi thấy rằng sau ngày thứ nhất thì sự khác biệt về diện tích bỏng là không có 2) Sau 2 ngày thì lô 2, 4, 5 và 7 so với lô so sánh cố sự khác biệ
Trang 352.3.3 Tac dung ức chế VSV kiểm định của DC lá cây ngũ sắc:
Bảng 2.9 Đường kính vòng vô khuẩn của 3 loại DC lá cây ngũ sắc trên một số VSV kiểm định STT Vi sinh vật Đường kính vòng vô khuẩn (mm) ĐC ĐC DC Kháng sinh nước MeOH | EtOH chuẩn l Staphylococcus =- = 7 15,24 + 0,25 aureus ATCC 1128 2 Escherichia coli _ = _ 22,12 + 0,42 ATCC 25922 3 Candida albican ¬ — = ND
Nhân vét: Cả 3 loại DC lá cây ngũ sắc đều không có tác dụng ức chế sự phát trién cha Staphylococcus aureus ATCC 1128, Escherichia coli ATCC 29522, Candida albican
Hinh 6 Vong vé khuan tic ché Staphylococcus aureus ATCC 1128 cia DC
MeOH (1), cua DC EtOH (2), của DC nước (3), của Benzathin penicillin (4)
Trang 363 2 4 1
Hinh 7 Vong vo khuan tic ché Escherichia coli ATCC 25922 của
DC MeOH (1), cua DC EtOH (2), cua DC nutc (3), cua Gentamicin (4)
Hình 8 Vòng vô khuẩn tc ché Candida albican cia DC MeOH (1), cia DC EtOH (2), của DC nước (3)
Trang 372.4 Bàn luận
2.4.1 Về thành phần hóa học DC lá cây ngũ sắc
Khi xác định thành phần hóa học của một được liệu, người ta thường sử
dụng các dung môi khác nhau để chiết xuất hoạt chất trong dược liệu, sau đó làm các phản ứng hóa học để định tính, định lượng các hoạt chất đó Trong đề tài này, chúng tôi sử dụng 3 dung môi là nước, MeOH, EtOH để chiết xuất
hoạt chất của lá cây ngũ sắc, thu được 3 loại DC khác nhau là DC nước, DC MecOH và DC EILOH Kết quả cho thấy mỗi dung môi ưu tiên chiết một hoạt
chất: dung môi nước ưu tiên chiết tanin, dung môi MeOH tu tiên saponin; còn dung môi ELOH ưu tiên flavonoid Kết quả này tương ứng với độ tan của các hoạt chất trên đối với từng dung môi
Hiện trong dược điển Việt Nam chưa nói về cây ngũ sắc nhưng kết quả
xác định thành phần hóa học DC lá cây ngũ sắc của chúng tôi phù hợp với kết
quả nghiên cứu của một số tác giả khác, như nghiên cứu về tác dụng được lý của cây ngũ sắc [15] hay nghiên cứu về tác dụng trên Staphylococcus aureus kháng methicillin của dịch chiết thô cây ngũ sắc [14] Kết qua nghiên cứu ở Bảng 2.4 đã chỉ ra rằng MeOH là dung môi để chiết xuất được lượng hoạt chất của lá cây ngũ sắc cao hơn cả Vì vậy, McOH có thể trở thành dung môi để chiết tách hoạt chất của cây ngũ sắc để sử dụng trong điều trị bỏng
2.4.2 Về thiết kế nghiên cứu tác dụng điều trị bỏng a) Về phương pháp gảy bỏng thực nghiệm
Trong đề tài này, chúng tôi sử dụng phương pháp gây bỏng bằng nhiệt
để gây bỏng cho chuột: dùng bản sắt đã hơ nóng trên ngọn lửa đèn cồn áp
Trang 38ưu điểm là để thực hiện, và có thể đánh giá sơ bộ tác dụng điều trị bỏng
của các dịch chiết Tuy nhiên cách tiến hành thí nghiệm này có một số nhược điểm sau:
+ Mức độ bỏng của chuột thí nghiệm có thể không đồng đều (Do nhiệt độ của bản sắt không bằng nhau và mức độ tiếp xúc của bản sắt với chuột thí nghiệm không đều)
+ Chuột thí nghiệm dễ bị nhiễm khuẩn tại vết bỏng (Do điều kiện nuôi
chuột không vô trùng)
Mức độ bỏng và sự nhiễm khuẩn vết bổng ảnh hưởng tới thời gian lành
vết bỏng [10], do đó để làm tăng độ tin cậy của việc đánh giá tác dụng làm lành đa của các địch chiết thì nên gây bỏng cho chuột sau khi chuột đã được gây mê (chuột đã được gây mê sẽ không có phản ứng nên dễ gãy
bỏng đồng đều cho chuột thí nghiệm) và nuôi chuột trong điều kiện vô trùng để theo dõi tiến triển của bỏng
b) Về phương pháp đánh giá tiến triển của bảng và đánh giá tác dụng của dịch chiết
Hiện nay chưa có chỉ số hoá sinh đặc hiệu nào để đánh giá tiến triển của bỏng [9], [10] mà chủ yếu vẫn dựa vào quan sát đặc điểm của vết bỏng và các di chứng của bỏng gây ra [10] Do đó để đánh giá tác dụng của các dịch thử trong việc điều trị bỏng, chúng tôi đã theo dõi thời gian lành vết bỏng trên chuột thí nghiệm đồng
thồi xác định sự thay đổi diện tích bỏng theo thồi gian Theo chúng tôi, việc đánh
giá tiến triển bỏng dựa vào thời gian lành da hoàn toàn và điện tích bỏng là phù hợp và đủ để đánh giá tác dụng của các dịch thử trong điều kiện chuột được gây bỏng thực nghiệm theo phương phấp của chúng tôi
2.4.3 Về tác dụng chữa bỏng của một số dịch chiết lá cây ngũ sắc
Quá trình lành da điễn ra qua nhiều giai đoạn Giai đoạn đầu tiên là giai đoạn viêm Cơ thể phản ứng lại sang chấn bằng cách đưa các TB tới để ngăn chặn sự xâm nhập của các TB lạ, bao vây những TB chết Lúc này, vết thương có biểu
Trang 39hiện sưng, nóng, đỏ, đau rõ rệt Giai đoạn thứ hai là giai đoạn tiêu viêm Các TB
đạc biệt được đưa tới vùng viêm để phân hủy các yếu tố lạ như vi khuẩn hay chất bã Giai đoạn thứ ba là giai đoạn tái tạo tế bào Cơ thể sản sinh những TB khác để
bù đắp tổn thương Các TB được phân chia rất nhanh chóng, các sợi collagen
tổng hợp liên tục Cuối cùng, lớp TB biểu bì sẽ được phủ lấp bên ngoài tổn thương [20]
Bỏng gây ra tổn thương da, do đó quá trình lành vết bỏng cũng tuân theo các
giai đoạn chung của quá trình lành da Do đó các thuốc điều trị bỏng thường liên
quan đến cợ chế chống viêm và tăng sinh tế bào Bên cạnh đó nếu vết bỏng bị
nhiễm một số loại vi khuẩn thì có thể làm tăng thời gian lành da Vì vậy các
thuốc kháng khuẩn cũng được dùng để làm giảm thời gian lành vết bỏng Trong
3 loại DC lá cây ngũ sắc (DC nước, DC MeOH và DC EIOH) thì DC McOH có
tốc độ làm lành vết bỏng nhanh nhất (2,80 + 0,20 ngày) (so sánh với lô chứng có p <0,01) DC EIOH có tốc độ làm lành vết bỏng nhanh thứ 2 (4,80 + 0,20 ngày)
{so sánh với lô chứng có p < 0,01), và chậm nhất là DC nước (6,60 + 0/24 ngày)
(so sánh với lô chứng có p < 0,05) Kết quả nghiên cứu thành phần hoá học chỉ ra
rằng DC MeOH có chứa saponin nhiều nhất, DC EtOH có chứa flavonoid nhiều nhất Như vậy là có thể có mối liên quan giữa thành phần hoá học và tác dụng
điều trị hỏng của các dịch chiết Điều này phù hợp với tác dụng chống viêm của
saponin và flavonoid Flavonoid còn có tác dụng chống oxy hoá nên cũng có thể
làm tăng sinh tế bào; tăng tác dụng làm lành da [2]: Do đó nghiên cứu của chúng
tôi mở ra hướng nghiên cứu tác dụng của các chất nhất định (thuộc nhóm saponin, [lavonoid) của cây ngũ sắc trong điều trị bỏng
2.4.4 Về tac dụng ức chế vi sinh vật của dịch chiết lá cây ngũ sắc
Các bệnh nhân bỏng có thể bị nhiễm khuẩn, nhiễm nấm tại vết bỏng và làm kéo đài thời gian lành vết bỏng Do không có điều kiện xác định chủng vi khuẩn, vi nấm nhiễm tại vết bỏng nên chúng tôi đã thử tác dụng ức chế một số
ching VSV thuGng gap la Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida
Trang 40albican để tìm hiểu thêm về cơ chế điều trị bỏng của dịch chiết lá cây ngũ sắc Chúng tôi thấy rằng cả 3 loại DC lá cây ngũ sắc đều không có tác dụng ức chế 3 loại VSV này Tuy nhiên theo nghiên cứu tháng 8/2005 của bộ môn
Thực vật trường Đại học Cape Coast (Ghana) thì DC MeOH lá cây ngũ sắc có
tac dung tte ché Staphyloceccus aureus NCTC 6517 va Staphylococcus
aureus NCTC 12493 [17]
Su khác nhau giữa kết quả nghiên cứu của chúng tôi và của bộ môn Thực vật trường Đại học Cape Coast có thể do 1 số nguyên nhân:
- Nguyên liệu thu hái ở 2 vùng khác nhau va vào thời điểm khác nhau nên có
thể nồng độ hoạt chất không giống nhau
- Chủng giống Sfaphylococcus aureus của 2 nghiên cứu khác nhau cũng có
thể gây khác kết quả (trong nghiên cứu của chúng tôi 14 Staphylococcus aureus
ATCC 1128, còn trong nghiên cứu của trường Đại học Cape Coast là
Staphyviococcws aureus NCTC 6517 và Staphylococcus aureus NCTC 12493) Kết quả nghiên cứu của chúng tôi về tác dụng ức chế một số VSV kiểm định
của DC lá cây ngũ sắc mới chỉ là bước đầu Chúng tôi hy vọng sẽ xác định được
chủng VSV nhiễm tại vết bỏng để đánh giá tác dụng của các dịch chiết lá cây ngũ sắc (với địa điểm và thời gian thu hái khác nhau) trên chủng VSV này