ĐÁNH GIÁ tác DỤNG SINH học của một số DỊCH CHIẾT cây NGỦ sắc

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI esm£o LỜI CẢM -— ƠN Em xin chan thành cảm ưn thầy giáo DS Nguyễn Xuân Bắc - thầy trục liếp hướng dẫn em thực hiên hoàn thành khóa luân Em xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Văn Rư tân Lình giúp dỡ em hoàn thành khoá ỉuận MAI THỊ THU HOÀI Em xin chan thành câm ƠI1 cúc thầy cô giáo, cáil bô kỹ thuật vion ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CÂY NGỦ SẮC Sinh học tận tình giúp cm thơi gian làm thực nghiệm (AGERATUM CONYZOĨDES L.) giảng dạy, làm việc môn Hóa sinh, mồn Dược lực, mởn Vi sinh TRÊN ĐỘNG VẬT THỤC NGHIỆM (KHỐA LUẬN TỐT NGHIỆP Hà Nội.Dược ngàysĩ15KHÓA tháng 2004 năm- 2009) 2009 Sinh viên Người hướng dấn : DS Nguyễn Xuân Bác Nơi thực : Bọ Hỏa sinh HÀ NỘI - 2009 MỤC LỤC Trang ÁC CHỮ VIẾT TẮT DANII MỤC BẢNG số LIỆU DANH MỤC HỈNH MINH HỌA .„ PHẦN - TỒNG QUAN 1.1 Tổng quan bỏng .- ỉ 1.1 Ktìắi niệm bõĩìg .2 1.1.2 .Dịch tẽ bòng 1.1.3 .Phân loại bỏng 1.1.4 Tác nhân gây bỏng ì 1.5 Diễn biến bệnh bỏng 1.1.6 Di chứng bệnh bòng 1.2 MỘI sủ phương pháp áp dụng cho điều trị bỏng 10 1.2.1 .Nguyên tắc diều trị bỏng 10 1.2.2 .Phương pháp điều trị 22 Phương pháp nghỉên cứu .17 CHÚ GIẢI CÁC CHỬVIẾT 2.2.1 Chiết xuất số dịchTẮT chiết cay ngũ sác 17 2.2.2 Xá c định sơ thành phán hóa học tlich chiết ngũ sắc 18 2.2.3 .Nghiên cứu ỉẩc dụng sinh học 18 2.2.4 .Phương pháp xử lý số liệu 21 2.3 Kết thực nghiệmvànhận xét 21 2.3.1 Xác định sơ thành phần hóa học dịch chiết Lá ngũ sắc 2J 2.3.2 Tác dụng chữa bỏng số dịch chiết ngũ sẳc 22 2.3.3 Tá c dụng ức chế vi sinh vật kiểm định dịch chiết ngũ sắc 28 2.4 Bàn luận .- 30 2.4.1 Vé thành phần hóa học dịch chiết ỉá ngũ sác 30 2.4.2 Vé thiết kế nghiên cứu tác dụng điều trị bỏng DANH MỤC BẢNG số LIỆU ột số số sinh học sốc bòng Bảng 1.2 Một số số sinh học suy mồn bỏng Bãng 2.1 Các mòi trường nuòỉ cấy vi khuẩn kiểm định Iỉãng 2.2 Các môi trường nuôi cấy vi nấm kiểm định ức độ giảm thời gian làm lành da ự thay đổi diện tích bỏng chuột thí nghiệm theo thời gian Bâng 2.7 Mức độ giảm diện tích hỏng lỗ thử so với lô chứng Bấng 2.8 Mức độ giảm diện lích bỏng lò thử so với lố so sánh DANH Mưc HÌNH MINH HOA n rrũịt đất ngữ sấc Hình Sơ quy trình chiết xuất DC nước ngũ sắc Sơ đồ quy trinh chiết xuất DC MeOH, EtOH ngũ sắc hị biểu diễn thời gian lành da hoằn toàn lỏ chuột thí nghiệm Hình Đổ thị biểu diễn mức độ giảm diện tích bỏng lô chuột thí nghiệm theo thòi gian ĐẬT VẤN ĐỂ Hiện nay, sản xuất công nghiệp ngày phát triển tai nạn nghe nghiệp, chập điện, cháy nổ binh ga, xăng dầu ngày nhiều Vì vây, số người bị bòng đặc biệt bỏng nặng lớn có xu hướng ngày tâng Việt Nam giới [10] Bỏng thường ảnh hưửng xấu đến thẩm mỹ bệnh nhân Khồng Lhế, bỏng gây tử vong để lại nhiều di chứng nặng nề khác làm ảnh hưởng đến sức khỏe tâm lý bệnh nhân [10] Số lượng thưổc nước để điều trị hỏng ít, nhu câu vẻ thuốc điều trị bỏng người dân ngày nhiều, giá thuốc nhập tăng cao, khiến cho viộc điồu trị bồng tốn thực gánh nặng bênh nhân bỏng, đặc biệt bệnh nhân nghèo mội nước phát triển Việt Nam Vì vậy, viộc nghi ôn cứu tìm nguồn thuốc đáp ứng nhu cầu người dân cấp thiết Cây ngũ sắc có nhiều địa phương nước la đả dược sử dụng điều trị sơ bệnh [20], [21] Hiện nay, nước ta giới có nhiẻu nghiôn cứu tác dụng sinh học cùa ngũ sắc [14], [15] nhiên chưa có tài liệu cồng bố vé tác dụng chữa bỏng Vì vậy, nham gốp phđn lam sáng tỏ khả điểu trị bỏng ngũ sắc thời làm tăng việc sử dụng dược liêu điều tri bỏng, chúng tồi tiến hành đề tài: “Đánh giá PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan ve bỏng 1.1.1 Khái niệm vé bỏng Bỏng lổn thương (Jo tác dụng trực tiếp yến tố vật Lỷ (nhiệt, xạ, điện) hoá học gây trôn thổ Da phận thường bị tổn thương bị bỏng, lớp sâu dưứi da (cản, cơ, xương, khớp, mạch máu, thần kinh) vả số quan (đường hô hấp, ống liêu hoá, phân sinh dục) [10] Khi bệnh nhân có diện từ 10 15% diện tích thể trờ cổ bỏng sâu (từ - 5% diện tích trở lên) xác định bộnh bỏng 1101 1.1.2 Dịch tễ bỏng Tai nạn bỏng ỏ nước cống nghiệp loại chấn thương thường gặp: - Cứ 100 000 dân năm có: Viột Nam hiộn nay, hàng nàm Viện bỏng Ọuỏc Gia nhận điểu trị I 500 người bị bỏng, khoa bỏng Bệnh viện Saint Paul Hà Nội nhận điều trị 900 người bị bỏng, khoa bòng Bệnh viện Chợ Rãv thành phố Hồ Chí Minh nhận điểu trị 600 người bị bỏng khoa bỏng trẻ cm Bệnh viện Nhi thành phố Hổ Chí Minh nhận điều trị 360 trẻ nhỏ bị bỏng [10], 1.1,3 Phản loại bỏng Theo GS TS Lé Thế Trung, bỏng chia thành loại: *♦* Bổng độ Là mức độ bòng nhẹ nông Da khô, sưng, đỏ, đau rát, Được coi tượng ‘■‘Viêm cấp vô khuẩn” Sau 24h đaư đỡ dẩn sau 48h hểt đau Viêm sưng nề kéo dài vài ngà}' (2-3 Iigày), thấy lớp sừng bong rụng [10] ❖ Bỏng độ Trên da đỏ, sưng, Ướt xuất nốt phổng (ngay sau bị bỏng sau vai phút đến vài có tới 24 - 48h) Dịch chứa nốt phổng màu vàng Chất dịch có đủ thành phần hụyết tương (vì thoát từ máu qua thành mạch thấm khoảng khe kẽ) Bỏng độ kèm theo đau rát, đau nhát vùng nổn nốt phổng (các đầu tận thổn kinh ]ộ ra) Khi nốt phổng vở, vòm nốt phổng bong Lô phẩn đỏ, ẩm, tăng cảm xuất tiết trâng, có rỉ máu cảm giác Dịch nốt phổng màu hổng, có máu rĩ Bỏng trung bì thể hình thức đám da hoại lử khò ướt khác với hoại tử khỏ hỏng toàn hộ lớp da điểm sau: Không CỐ hình tĩnh mạch da bị nghẽn mạch, da hoại từ bỏng không nhãn nhúm thường mỏng, thủ cảm giác (chọc kim, thử nóng lạnh) vùng thường vãn mội phán cám giác Rút lỏng vùng hỏng thấy hám chạt người bệnh thấy đau rioi ❖ Bỏng độ Lẫm §àflg thể hiậ« đttôi hmh tkứeỉ - Da hoại tử ướt (xuất nhĩột độ lớp da bòng đạt tới 50 58°C), khám thấy dám da trắng hệch màu dò xám có chỗ trắng chỗ xám đá hoa, có lản vùng da dỏ tfm sẫm Đám da hoại tử ướt gổ cao lên so với vùng da lân cận, sờ vào cố cảm giác bột mịn ướt Quanh đám hoại tử vùng xưng huyết nề rộng - Da hoại tử khỏ (còn gọi khối hoại tử khổ đòng đặc xuất nhiệt độ lớp da bị bỏng đạL tới 65 - 70°C), khám thấy đám da chắc, khổ màu đen, dỏ vàng sẫm Qua lớp da hoại lử khỏ trồng rõ hình lưới tĩnh mạch dưốrỉ da bị nghẽn mạch Quanh vùng da bong hoại Lử khô viền hẹp da màu đỏ nề sưng Nhìn kv thấy vết hoại tử khô lõm xuống so với phần da lành lân cận Đám da bòng hoại tử khô nhãn nhứm, hõậc hứí hể, sờ cống ihô rấp Vung bồng iôần lớp dã cam giấc lì - Khớp: thường gặp tổn thương bao khớp rụng thành cấc lô rò khớp có Thòi kị đẩu chất***■ dịch nhờn chảy o khớp bị viêm nhicm khuân: viêm khớp tiết dịch, viêm mù khớp dẫn tới huỷ sụn khớp, sai khớp Bong khớp gây hạn chế cử phù nề phát triển mạnh tổ chức quanh khớp, đau tăng kéo dài âm ỉ +động, Sốc bỏng: vùng Bảng khcírp,1.1 sốtMột cao líòm theo khuẩn sò' số sinhtriệu họcchúng nhiễm sốc hỏng ch cầu 7,4 - 12 nghìn 6,0 - 30 nghìn 2,3-41 nghìn (tế bào/innr) - Xương: thường gặp mặt trước xương chầy, mắt cá cảng chân, xương sọ, xương mỏm khuỷu, xương bánh chè, xương bả vai Việc chẩn đoán khó xương không bị lộ ngày dầu [101Bình thườngAlbumin tới 150 - 240 CỐ thể thấy nghiệm albumin urobilin nước tiểu Hồng ì.i.4 Tác nhân gây bồng cầu, bạch cầu, trụ hỉnh Gổm loại chính; *> Bòng sức nhiệt: - Bỏng sức nhiệt khô: hay bị bóng lửa cháy với nhiệt dô cao củi gô cháy (1 300 - 400°C), ét Xảng cháy (800 - 200°C), lửa khí acetylene (2 127°C) Liều dùng: 15 - 3ũg khố sắc nưổc uống dùng tươi giẵ lấy nước nhỏ Cũng dùng tươi gilĩ đáp vết thương chảy máu, mụn nhọt, eczema, nâu nước tẳm chữa ghẻ, chốc đầu trẻ em Người ta dùng ngũ Sắc chữa rong huyết sau sinh đẻ, dung phối hợp với bồ kết nấu nước gội đầu cho thơm gầu, trơn tóc Ẩn Độ, người ta dùng nước ép rễ dể chữa bệnh sỏi thận, Lá làm thuốc săn da, dùng chữa cấc vết đứt, vết thương dùng đắp chữa sốt rét [21] 1.3.5 Một sổ hài thuốc từ ngũ sác hay đưưc sử dụng - chưa phụ nữ rong kinh sau dể: dĩmg 30 - 5Ôg iẫ ngu sắc tươi gia nhổ, chế thêm nước, vắt lấy nước cốt uống - Giữa viêm xoang dị ứng: chọn lấy tươi ngâm rửa để ráo, giã nát, vắt lấy nước tẩm vào Dùng bỏng nhét vào lỗ mũi bên đau khoảng 15-20 phút nít bỏng để dịch mií từ xoang mũi giải phóng xì nhẹ nhàne, tránh xì mũi mạnh lúc mủ từ mũi xoang qua đường nối thông mũi tai (vòi nhĩ) gày viêm tai cấp - Trị viôm họng: 20g ngủ sắc, 20g kim ngân hoa, 6g giỏ quạt, 16g cam thảo đất sắc uống ngày thang, chia làm 2-3 lần 14 PHẦN d) Vi sinh vật 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT ỌUẢ 2.1 Nguyên liệukiểm phương nghiên cứu Sính học - Trường Đại Giống vi sinh vật định dotiện Rõ mòn Vi sinh 2.1.1 Hà Nội Nguyên học Dược cung cấpliệu nghiên cứu Nguyên liệu nghiên cứu ngũ sác thu hái lại Ninh Binh tháng 2/2009, Mẫu thu hái Bộ môn Thực vật - Trường Đại học Dược Hà Nội xác định tênkhuẩn khoa học Ageratum conyinídes L.„ họ Cúc - Asteraceae - Vi Gram (+) Nguyên liệuATCC 112£ rửa sạch, phơi khô bóng râm, sau dó nghiền thành Staphyiococcus aureus bột thô 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu a) Động vật nghiên cứu Chuộl nhát trảng đực (Mumua cuiưs, chủng Svviss), trường thành, khỏe mạnh, Cáctrung mổi trưởng nuối cấy vi nấm kiểm định; cân❖nặng bình 25g, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung Ương cung cấp b) Hóa chất, thuốc thử Cấc hba chất, thuốc thử dùng nghiên cứu Rộ môn Hóa Sinh Trường Đại học Dược llà Nội cung cấp dền đạt tiêu chuẩn phân tích hóa 16 15 Alkaloid Lấy 2.2.2 ml DC, Xác chêm sôi,lá lọc,ngũ sắc định sơ5 ml thànhHơ phẩn 1%, hoá họcđun DC 2.2 Phương pháp cứu có tủa màu trắng với mức độ: thêm nghiên TT Mayer Bảng 2.3 Cách xác định thành phần hóa học loại DC ngíi nhẹ (+), rõ (-H-), mạnh (+++) sắc 2.2,1 Chiết xuất số DC cày nigỉì sắc ❖ Quy trình chiết xuất DC nước ngũ sắc: Saponin Dựa trẽn tinh chất í Bột dược liộu ao hột:Tu ấm lây 40n2c/24h, ônggạn,nghiêm, lọc ống chứa ml HCI 0,1N (pH = 1), ống chứa ml DÍĨ 5C NaOH 0,1N (pH = 13), thồm vào ống nghiệm Bã dược liệu ml DC, lắc mạnh ống l5s, để yên, thấy cột bọt củ ống nghiệm cao bền (do liệu chứa saponin nước độ: cất nhẹ (+), rõ (+), triterpenoid) với 3+mức mạnh (+++) Flavonoid Lấy ml DC, thêm giọt dung dịch FeCl % có màu lục với Tủ mức nhẹ (+), ấm độ: 40°c/24h, gạn,rõlọc(++), mạnh (+++') *t* Quy trình chiết xuất DC MeOH, EtOH cấy ngũ sắc: Bõt dược liệu dc t° phỏng/24h gạn, lọc 2.2.3, Nghiên cứu tác dụng sinh học + MeOH/EtOH a) Thử tắc dụng chữa bàng trẽn mô hình gây bảng nhiệtgạn, dể ởbỏng t° phòng/24h, - lọc8 lô (mỗi lồ con) Chuột thí nghiệm chia thành - Dùng dao lam cạo dámDC2 ỉỏng chuột 18 17 Lô 2: bôi DC nước Lô 3: bôi DC McOH Lô 4: bôi DC EtOH Lô 5: bôi thuốc mỡ Tetracyclin 1% Lô 6: bôi thuốc mỡ Tetracyclin 1% trộn với DC McOH LẠ 7: hỏi thuốc mỡ Tetracyclin 1% trộn với DC EtOH nh (Lõ 8): bôi thuốc chữa bỏng Panthenol Chuột diều trị liên tục trên, sau 24h bồi thuốc lần So sánh mức dd giảm thời gian Ịàm lành dạ, mức đô giảm dịẽn tích bỏng ự lộ 19 Mức độ dung giảm chữa diện tích bòng vớisố lồ DC so sánh 2.3.2 Tác hỏng củasomột ỉá ngũtính sốctheo cổng thức : ❖ Mức độ gìdm thời gian làm lành da M2% = X 100% Bảng 2.5 Mức độ giảm thòi gian làm lành da D: Dường kính Lrung bình vùng vố khuẩn (vồ nấm) (mm) -s D,: Đường kính vòng vỗ khuẩn (vô nấm) thứ i (inm) 5w s: Độ lệch thực nghiệm chuẩn có hiệu chỉnh, 1'rong dó: Sssi diện tích hỏng lô so sánh ngày thứ i (cm2) n: Sò' thí nghiệm làm song song s,i diện tích bỏng cùa Jô thử ngày thứ i (ctn2') 2.2.4 Phương pháp xử lỷ sô' ỉiệu b) Thừ tác dụng ức chê’ vi khuẩn hàng phương pháp khuếch tán trẽn liêu đươc mờiSố trường đặc xử lý theo phưưng pháp thống kê phẩn mềm Excel 2003 So sánh trung bình mẫu tiến hành theo t-TEST, khác bíệl có ý nghĩa - Các khoanh giấy lọc đường kính 7,00inm hấp tiệt trùng l2l°C/20 phút, sấy khồf tẩrp lần với DC Ịá ngũ sác, san mõỉ lẩn lẩm khoanh giấy lọc đểu sấy ò 50°c đốn khỗ hết dung rnổi Trong ngữ sắc có alkaloid, tanin, saponin ílavonoid Các DC khác có thành phán hàm lượng nhổm chất hóa học khác mỏihàm trưừng cấy vsvcao kiérn định;DC MeOH cố hàm lượng nhau.- DCChuẩn nướcbịcó lượng tanin saponĩn cao nhát, DC EtOH có hàm lưựng ílavonoid cao 20 21 Bảng 2.7.bỏng Mức độ giảm bỏng lô thử so vói lô chứng Bảng 2.3.2.2 2.8, Mức Mứcđộ độgiảm giảmdiện diệnlích tích bỏngcủa lõdiện thử tích so với lô socủa sánh Bảng 2.6 Sự thay đổi diện tích bỏng chuột thí nghiệm theo thòi gian ELỏl BLỏ2imLô3HLở4HLó5í3Lõ6E3Ló7Bl JỏX Hình thị biểu gian lành hoànda toànhoàn cáctoàn lô chuột nghiệm 4.laĐồ có đổ diẻn thị thời vồ thời gian dalành củathícác lô chuột thí nghiệm sau: Ghi chứ: Lô ỉ; Chuột khủng bôi thuốc; 25 24 Lớ 2; Chuột DC nước; Lô 3; Chuột bồi DC Meũỉỉ; Lô 4; Chuột dược DC EĩOH; Lu 5: Chuột bôi thuốc mưTcVrãcỹcìih }%; Lồ 6; Chuột bôi thuốc mõTetracyclỉn ỉ% trộn lấn với DC MeOH; 22 23 2.3.3 Tác dụng ức chế vsv kỉểm định DC ngũ sắc: Bảng 2.9 Đường kính vòng vô khuẩn loại DC câyGhi ngũchú: sắc Staphylococcus số vs v kiểm định Là J: Chuột không bói títuức; Là 2: Chuội dược bới DC nước; Lở 3: Chu ột hởi DC MeOH; Lô 4: Chuột đtiợc bôi DC EtOH; Lô 5: Chuột dưm: bôi thuốc mữTetracyc Ngày Ngàj Ngàj Ngà> 1'hời gian Ngàj □ LỎI BLOỈ EL63 HI-ứ BL05 0Lũ Ịj QLtì7 10 Li s Hình Đồ thị biểu diễn mức độ giám diện tích bỏng lô chuột thí nghi Nhãn xét: Tổc độ tiền da chuột (tỉnh theo ngày quan sát) tất cà cá( với lỏ chứng có ý nghĩa thđng kè (p < 0,05) (trừ lô có khác biẽt khỏng cổ khác biệt ý nghĩa thổng kè quan sát ngày thứ 2, 4, 5, 6), thấy tầng sau ngày tbií khác hiệt vẽ diện tích hỏng khống cố 27 26 Hình Vòng vỏ khuẩn ức chẽ Escherichia coli ATCC 25922 cùa DC MeOH (1), DC EtOH (2), DC nước (3), Gcntamicin (4) Nhàn xét: Cả loại DC ngũ sắc đểu tác dụng ức chế sư phát triển Síaphylococcus aureus ATCC 1128 Escherichia coli ATCC 29522, Candida albican Hình 8- Vòng vô khuẩn ức chê' Candida albican DC McOH (1), DC EtOH (2), DC nước (3) Hình Vòng vô khuẩn ức chế Sưtpkylococcus aưreus ATCC 1128 DC MeOH (1), DC EtOH (2), DC nước (3), cũa Bcnzaỉhin pcnicillin (4) 28 29 2.4 Bàn luận 2.4.1 Về thành phần hóa học DC ngũ sác Khi xác định thành phẩn hổa học mộT dược liệu, người ta thường sử dụng dung môi khác đổ chiết xuất hoại chất dưực liệu, sau lầm phản ứng hóa học để đinh tính, định lượng hoạt chất Trong đề tài này, chứng tỏi sứ dụng dung môi nước, MeOEI, EtOH đế chiết xuất hoạt chất ngũ sắc, thu loại DC khác DC nước, DC McOH DC ElOH Kết cho thấv mõi duĩig rnôi ưu tiên chiết hoạt cMt: dung mội nước ưư ũên chiết [ầĩììĩỉ, hưng môi MẽỡH ưu liên Sâpomth sòn dung mồi EtOH ưu tiên riavonuiđ Kết tương ứng với độ tan hoạt chất trẽn đối vởi dung môi Hiện trung dược điển Việt Nam chưa [lói vế ngũ sắc kết xác định thành phẩn hóa học DC neii sắc phù hợp với kết nghiên cứu số tác giá khác, nghiên cứu tác dụng dược lý cãy ngũ sắc [15] hay nghiên cứu vé tác dụng Stapkylococcus aureus kháng melhicillin cùa dịch chiết thỏ ngũ sắc [14] Kết nghiôn cứu Bảng 2.4 chì MeOU dung mòi dể chiết xuất lượng hoạt chất ngũ sắc cao Vì vậy, McOH 30 ưu điểm dề thực hiện, có thổ dánh giá sơ tác dụng điểu trị bỏng dịch chiết Tuy nhiên cách tiến hành thí nghiôm có số nhược điổm sau: + Mức độ bùnu chuột thí nghiệm cỏ thể không đồng (Do nhiệt độ bân sắt không mức độ tiếp xúc sát với chuột thí nghiệm không đều), ■+ Chuột thí nghiệm dỗ bị nhiỗm khuẩn vết bỏng (Do điều kiện nuôi chuột không vô trùng) Mức độ bỏng nhiễm khuẩn vết bỏng ảnh hưởng tối thời gian lanh vết bỏng [101, để làm táng độ tin cậy việc dánh giá tác dụng lam lành da dịch chiết nên gây hỏng cho chuột sau chuột gây mê (chuột dã dược gâv mê khổng có phản ứng nẽn dẻ gãy bỏng cho chuột thí nghiệm) nuôi chuột điôu kiộn vô trùng đế theo dõi tiến triển bỏng b) Vê phương pháp đánh giá tiến triển bỏng đánh giá tác dụng dịch chiết Hiện nav chưa có sớ hođ sinh đặc hiệu dể đánh giá liến triển bỏng 31 dỏ, dao rõ rệt Giai đoạn thứ hai la giai đoạn tiêu viêm Cẩc TĐ đạc biệt đưa tới vùng viôm đổ phân hủy yếu tố lạ vi khuẩn hay chất bã Giai đoạn thứ ba giai đoạn tái tạo tế bào Cơ thể sản sinh TB khác để bù đắp tổn thương Các TB phân chia nhanh chóng, sợi collagen tổng hợp liên tục Cuối cùng, lớp TB biểu bì phủ lấp bên tổn thương [20] Bỏng gây tổn ihuơng da trình lành vết bỏng luân theo giai đoạn chung trình lành da Do cẩc thuốc điều tri bòng thường liên t|uan đến cự chế chựng việm lăng skih tệ bàọ Bên nhiễm số loại vi khuẩn làm tang Cạnh dó Iiếụ vệt bọng bị thời gian lành da VI thuốc kháng khuẩn cung dừng đổ làm giảm thời gian Lành vết bỏng Trong loại DC ngũ sắc (DC nước, DC MeOH DC ElOH) DC McOH cố tốc độ làm lành vết bỏng nhanh (2,80 ± 0,20 ngày) (so sánh với lô chứng có p < 0,01), DC EtOH có tốc độ làm lành vết bỏng nhanh thứ (4,80 ± 0,20 ngày) (so sánh với lõ chứng có p < 0,01), chậm DC nước (6,60 ± 0,24 ngày) (so sánh với lô chứng có p < 0,05) Kết nghiên cứu thành phần hoá học chi DC MeOH có chứa saponin nhiều nhất, DC EtOH cố chứa Aavonoiđ nhiêu Như có mối liên quan thành phẩn hoá học tác dụng diều trị bỏng dịch chiết Điéu phù hợp với tác dụng chống viêm saponin tlavonoid Ravonoid có tác dụng chống oxy hoa nôn cỏ thổ 32 tìm hiểu thêm chế diều trị bỏng dịch chiết ngũ sắc Chúng thấy loại DC ngũ sắc tác dụne ức chế loại vsv Tuy nhiên theo nghiên cứu tháng 8/2005 cùa Thực vật trường Đại học Cape Coast (Ghana) DC MeOH cấy ngũ sắc có tác dụng ức chế Staphylacoccus aureus NCTC 6517 Staphylơcơccus aureus NCTC 12493 [17] Sự khác kết nghiên cứu chúng lũi bồ môn Thực vật trường Đại học Cape Coast cố thể số nguyên nhãn: - Nguyên ỊiÊu thu hái vùng khác vào Ịhời điểm khác nện cộ thể nồng dộ hoạt chẩl không giống 33 KẾT LUẬN Kết luận ❖ Đã xác định sư thành phần hóa học cùa ngũ sắc loại DC alkaloiđ, saponi.il, tannin, ílavonoid với mức độ nhẹ (+), rõ (++), mạnh (+++) Trong đó, hàm Urợne tannin DC nước cao (+++X hàm lượng saponin DC MeOH đạt cao (+++) hàm lượng tlavonoid DC EtOH ià cao (+++) ❖ Đã dánh giá dược tác dụng chữa bỏng ngũ sắc loại DC Diện tích gây bỏng ỏ chuột lò thí nghiệm nliir bỏng dược bồi lượng DC ngữ sắc, kết cho thấy: loại DC có tác dụng chữa bỏng DC MeOII có tốc dộ tấc dụng làm lành vết bỏng nhanh (2.80 ± 0,20 ngày), DC EtOH có tốc độ làm Lành vết bỏng nhanh thứ (4,80 ± 0,20 ngày) chậm lã DC nước (6,60 ± 0,24 ngày), 34 PHỤ LỤC Hình Chuột không điểu trị Hình 13 Chuột bồỉ Tetracyclin 1% Hình 10 Chuột bôi DC nước Hình 14 Chuột bôi Tetracyclin ỉ%+ DCMẽOH chuột bồi DC MeÕH Hình 15 chuột bối Tetracycỉỉn i% Hình 12 Chuột bui DC EtOH Hình 16 Chuột bôi Panthenoỉ [...]... định thành phẩn hóa học DC lá cây neii sắc của chúng tôi phù hợp với kết quả nghiên cứu của một số tác giá khác, như nghiên cứu về tác dụng dược lý của cãy ngũ sắc [15] hay nghiên cứu vé tác dụng trên Stapkylococcus aureus kháng melhicillin cùa dịch chiết thỏ cây ngũ sắc [14] Kết quả nghiôn cứu ở Bảng 2.4 đã chì ra rằng MeOU là dung mòi dể chiết xuất được lượng hoạt chất của lá cây ngũ sắc cao hơn cả Vì... tin cậy của việc dánh giá tác dụng lam lành da của các dịch chiết thì nên gây hỏng cho chuột sau khi chuột đã được gây mê (chuột dã dược gâv mê sẽ khổng có phản ứng nẽn dẻ gãy bỏng đổng đều cho chuột thí nghiệm) và nuôi chuột trong điôu kiộn vô trùng đế theo dõi tiến triển của bỏng b) Vê phương pháp đánh giá tiến triển của bỏng và đánh giá tác dụng của dịch chiết Hiện nav chưa có chỉ sớ hođ sinh đặc... thành phần hoá học chi ra rằng DC MeOH có chứa saponin nhiều nhất, DC EtOH cố chứa Aavonoiđ nhiêu nhất Như vậy là có thể có mối liên quan giữa thành phẩn hoá học và tác dụng diều trị bỏng của các dịch chiết Điéu này phù hợp với tác dụng chống viêm của saponin và tlavonoid Ravonoid còn có tác dụng chống oxy hoa nôn cũng cỏ thổ 32 tìm hiểu thêm về cơ chế diều trị bỏng của dịch chiết lá cây ngũ sắc Chúng... MeOH (1), của DC EtOH (2), của DC nước (3), của Gcntamicin (4) Nhàn xét: Cả 3 loại DC lá cây ngũ sắc đểu không có tác dụng ức chế sư phát triển của Síaphylococcus aureus ATCC 1128 Escherichia coli ATCC 29522, Candida albican Hình 8- Vòng vô khuẩn ức chê' Candida albican của DC McOH (1), của DC EtOH (2), của DC nước (3) Hình 6 Vòng vô khuẩn ức chế Sưtpkylococcus aưreus ATCC 1128 của DC MeOH (1), của DC... cây ngũ sắc cao hơn cả Vì vậy, McOH có thể 30 ưu điểm là dề thực hiện, và có thổ dánh giá sơ bộ tác dụng điểu trị bỏng của các dịch chiết Tuy nhiên cách tiến hành thí nghiôm này có một số nhược điổm sau: + Mức độ bùnu của chuột thí nghiệm cỏ thể không đồng đều (Do nhiệt độ của bân sắt không bằng nhau và mức độ tiếp xúc của bản sát với chuột thí nghiệm không đều), ■+ Chuột thí nghiệm dỗ bị nhiỗm khuẩn... (2), của DC nước (3), cũa Bcnzaỉhin pcnicillin (4) 28 29 2.4 Bàn luận 2.4.1 Về thành phần hóa học DC lá cây ngũ sác Khi xác định thành phẩn hổa học của mộT dược liệu, người ta thường sử dụng các dung môi khác nhau đổ chiết xuất hoại chất trong dưực liệu, sau đó lầm các phản ứng hóa học để đinh tính, định lượng các hoạt chất đó Trong đề tài này, chứng tỏi sứ dụng 3 dung môi là nước, MeOEI, EtOH đế chiết. .. của DC 2.2 Phương pháp cứu sẽ có tủa màu trắng với 3 mức độ: thêm nghiên TT Mayer Bảng 2.3 Cách xác định thành phần hóa học chính của 3 loại DC lá cây ngíi nhẹ (+), rõ (-H-), rất mạnh (+++) sắc 2.2,1 Chiết xuất một số DC lá cày nigỉì sắc ❖ Quy trình chiết xuất DC nước lá cây ngũ sắc: Saponin Dựa trẽn tinh chất í Bột dược liộu ao hột:Tu ấm lây 40n2c/24h, ônggạn,nghiêm, lọc ống 1 chứa 5 ml HCI 0,1N (pH... loại DC lá cây ngũ sắc đều không có tác dụne ức chế 3 loại vsv này Tuy nhiên theo nghiên cứu tháng 8/2005 cùa bộ món Thực vật trường Đại học Cape Coast (Ghana) thì DC MeOH lá cấy ngũ sắc có tác dụng ức chế Staphylacoccus aureus NCTC 6517 và Staphylơcơccus aureus NCTC 12493 [17] Sự khác nhau giữa kết quả nghiên cứu của chúng lũi và của bồ môn Thực vật trường Đại học Cape Coast cố thể do 1 số nguyên nhãn:... EĩOH; Lu 5: Chuột được bôi thuốc mưTcVrãcỹcìih }%; Lồ 6; Chuột được bôi thuốc mõTetracyclỉn ỉ% trộn lấn với DC MeOH; 22 23 2.3.3 Tác dụng ức chế vsv kỉểm định của DC lá cây ngũ sắc: Bảng 2.9 Đường kính vòng vô khuẩn của 3 loại DC lá câyGhi ngũchú: sắc trên Staphylococcus một số vs v kiểm định Là J: Chuột không được bói títuức; Là 2: Chuội dược bới DC nước; Lở 3: Chu ột được hởi DC MeOH; Lô 4: Chuột đtiợc... íumarie, acid caleic Cây ngũ sắc ử Việt Nam chứa 0.7 - 2% linh dấu, carolenoiđ, íl phytosterol, tanin, dường khử, saponin, hựp chất uronic 13 Liều dùng: 15 - 3ũg cây khố sắc nưổc uống hoặc dùng cây tươi giẵ lấy nước nhỏ Cũng dùng cây tươi gilĩ đáp vết thương chảy máu, mụn nhọt, eczema, hoặc nâu nước tẳm chữa ghẻ, chốc đầu của trẻ em Người ta còn dùng cây ngũ Sắc chữa rong huyết sau khi sinh đẻ, dung phối ... 30 2.4.2 Vé thiết kế nghiên cứu tác dụng điều trị bỏng DANH MỤC BẢNG số LIỆU ột số số sinh học sốc bòng Bảng 1.2 Một số số sinh học suy mồn bỏng Bãng 2.1 Các mòi trường nuòỉ cấy... chưa [lói vế ngũ sắc kết xác định thành phẩn hóa học DC neii sắc phù hợp với kết nghiên cứu số tác giá khác, nghiên cứu tác dụng dược lý cãy ngũ sắc [15] hay nghiên cứu vé tác dụng Stapkylococcus... đế theo dõi tiến triển bỏng b) Vê phương pháp đánh giá tiến triển bỏng đánh giá tác dụng dịch chiết Hiện nav chưa có sớ hođ sinh đặc hiệu dể đánh giá liến triển bỏng 31 dỏ, dao rõ rệt Giai đoạn