Bộ môn vi sinh chủ đề báo cáo vi khuẩn lao

Bộ môn vi sinh chủ đề báo cáo vi khuẩn lao

Khoa Y Bộ môn Vi Sinh

Chủ Đề Báo Cáo:

Vi Khuẩn Lao

Mục Lục

1.Tóm tắt lịch sử nghiên cứu bệnh Lao.

2.Tình hình mắc lao thế giới và Việt Nam.

3 Chương trình phòng chống Lao Quốc Gia

2014

4.Tác nhân và cơ chế gây bệnh.

5.Đặc điểm vi khuẩn Lao.

6.Cơ chế gây bệnh

7.PP Nhuộm Ziehl-Neelsen.

8.̉Chuẩn Đoán-Điều trị-Phòng bệnh

Company Logo

www.themegallery.com

•Công cuộc đấu tranh của

loài ngưòi với bệnh lao đã

trải qua nhiều thế kỉ, căn

bệnh này xuất hiện cùng

loài người.

•Thời Hippocrate đã miêu

tả đó là bệnh làm tiêu hủy

cơ thể (Phtisie), làm cơ thể

suy sụp dần rồi đưa đến cái

chết.

Tóm Tắt lịch Sử Nghiên Cứu Bệnh lao

• 1865 Laennec mô tả khá chính xác

tổn thương cơ bản của lao.

 1865 – 1868 Villeman chứng

minh được lao là bệnh truyền nhiễm.

khuẩn lao, BK-Bacille de Koch sau đó ông định dùng các

kháng nguyên của BK để dự

phòng nhưng không thành công

mà chỉ tìm được phản ứng

Tuberculine, để đánh giá sự

còn gọi trực khuẩn Koch).

 1908: Calmette và Guerin nghiên cứu

nhằm tìm ra vaccin BGD vào năm 1921

 Gần 50 năm sau khi tìm ra vk lao thì năm 1944: thuốc có tác dụng chống lao Streptommycin ra đời

 Rimifon(1952),Rifampicine (1965),

Rifampin(1972)…

Tình hình mắc Lao TG

 Sau nửa thế’ kỉ có thuốc chống lao, loài ngưòi tưởng rằng có thể thanh toán bệnh lao một cách dễ dàng, nhưng thực tế” đã trả lời không phải như vậy Năm 1993, Tổ chức

Y tế” Thế’ giới (TCYTTG) đã công bố” mang tính khẩn cấp toàn cầu là “„.Bệnh lao đang quay trở lại với tương lai ”.

 Vậy cái gì khiến cho bệnh lao không những không bị tiêu diệt mà còn bùng phát trở

lại?

 Có nhiều nguyên nhân, song có thể kể ra 5 nguyên nhân chính trong 2 thập kỉ cuối của thế’ kỷ 20, đó là:

 (1) Sự xuất hiện của đại dịch HIV/AIDS.

 (2) Tình trạng nghèo đói và phân hoá giàu nghèo trong các cộng đồng dân cư.

 (3) Sự lãng quên mang tính chủ quan của loài người tưởng rằng có thể không chế được bệnh lao khi có các thuốc chống lao mới.

 (4) Tình trạng di dân tự do giữa các vùng miền trong nhiều lãnh thổ.

 (5) Sự xuống cấp của hệ thống y tế” do chiến tranh, khủng hoảng kinh tế, thiên tai… đã khiến cho bệnh lao gia tăng.

www.themegallery.com

Company Logo

www.themegallery.com

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

TÌNH HÌNH MẮC LAO

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

Company Logo

www.themegallery.com

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

Company Logo

www.themegallery.com

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

Company Logo

www.themegallery.com

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

Trong năm 2012, ước tính

có khoảng 8,6 triệu người

lao phát triển và 1,3 triệu

chết vì căn bệnh này (bao

gồm 320 000 trường hợp

tử vong trong số những

người nhiễm HIV dương

tính)

 Ước tính cứ 4 giây là có

1 người mắc lao.

Cứ 10 giây thì có 1 người

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

Company Logo

www.themegallery.com

 Lao đa kháng thuốc đang là một thách thức rất lớn đối với nhân loại, ước tính khoảng 0,5 triệu bệnh nhân mắc lao đa kháng thuốc với tỷ lệ 3,3% trong số bệnh nhân lao mới mắc

 kháng nhiều loại thuốc (MDR TB) xảy ra khi vi khuẩn lao trở nên kháng ít nhất hai loại kháng sinh, hay thuốc chống lao hiệu quả nhất (thuốc đầu tay)

 Bệnh lao kháng trị (XDR TB) là một dạng hiếm của MDR TB mà kháng hai loại thuốc kháng sinh tốt nhất điều trị lao và tiếp tục kháng hai trong các loại kháng sinh có hiệu quả nhất trong số các kháng sinh được lựa chọn tiếp theo (lựa chọn thứ 2 sau khi kháng các thuốc đầu tay

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

Company Logo

www.themegallery.com

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

1 Tình hình mắc lao trên thế giới

1 Tình hình mắc lao trên thế giới (tt)

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam

180.000 bệnh nhân

(khoảng 6000 bệnh nhân lao đa kháng

và khoảng 7400

lao/HIV)

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam (tt)

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam

nhân mỗi năm.

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam (tt)

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam

Theo WHO tại

Việt Nam năm

2011 có 98804

case mắc lao trên

toàn quốc

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam (tt)

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam (tt)

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam (tt)

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam

Company Logo

www.themegallery.com

Như vậy, mỗi năm nước ta có 18.000 người tử vong do lao, tức

là cứ 1 giờ có 2 người chết vì lao.

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam (tt)

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam

Tỉ lệ mắc lao tại Việt Nam chỉ giảm có 2,8% trong giai đoạn

2007 - 2011

Nếu tính theo mức giảm trung bình mỗi năm là 0,8% (giai đoạn 2000-2010) thì

từ nay đến năm

2030, cũng chỉ giảm

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam (tt)

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam

vào năm 2015 và xa hơn

là “chung tay vì 1 Việt

Nam không có bệnh lao”

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam

2 Tình hình mắc lao tại Việt Nam (tt)

Việc đầu tư cho

phòng chống lao

mang tính quốc gia

trong giai đoạn

CHƯƠNG TRÌNH CHỐNG LAO QUỐC GIA

 Muc tiêu cơ bản: Để giảm tỷ lệ mắc bệnh, tỷ lệ chết và tỷ lệ nhiễm lao, giảm tối đa nguy cơ phát sinh tình trạng kháng thuốc của vi khuẩn lao Chương trình Chống lao Việt Nam phấn đấu đạt mục tiêu toàn cầu do TCYTTG đề ra:

 + Phát hiện ít nhất 70% số” bệnh nhân lao phổi AFB(+) mới (theo ước tính) xuất hiện hàng năm.

 + Điều trị khỏi cho ít nhất 85% số” bệnh nhân lao phổi AFB(+) đã phát hiện được bang hóa trị liệu ngắn ngày có kiểm soát.

3.2. Đường lối chiến lược của chương trình chống lao quốc gia

 Là chiến lươc DOTS – hoá trị liệu ngắn ngày có kiểm soát (Directly Observed Treatment Short

Course)

 3.2.1 Chiến lươc DOTS là gì?

 Là chiến lược xuyên suôt các hoạt động của Chương trình Chông lao quôc gia DOTS được xem

là một chiến lược chông lao có hiệu quả nhất do Tổ chức Y tế Thế giới khuyến cáo áp dụng trên toàn cầu.

 Có 5 yếu tố cấu thành chiến lược:

 - Có sự cam kết chính trị của các cấp chính quyền, đảm bảo tạo mọi điều kiện cho công tác chông lao.

 - Phát hiện thụ động nguồn lây bằng soi đòm trực tiếp.

 - Điều trị bệnh lao có kiểm soát bằng hoá trị liệu ngắn ngày.

 - Cung cấp thuôc chông lao đầy đủ với chất lượng tôt.

 - Có hệ thông ghi chép và báo cáo tôt, chính xác.

Company Logo

www.themegallery.com

CHIẾN LƯỢC QUỐC GIA PHÒNG, CHỐNG LAO

ĐẾN NĂM 2020 VÀ TẦM NHÌN 2030

Qua văn bản trên , phòng và điêù trị bệnh lao mang tính

cấp thiết Với sự quan tâm , phối hợp của nhiều ban

ngành cũng như giải quyết trên nhiều phương diện mới có thể phòng tránh được

www.themegallery.com

Company Logo

www.themegallery.com

1.Tác nhân gây bệnh:

Tác nhân và cơ chế gây bệnh

- Năm 1884, Robert

Koch-Bác sĩ người Đức phát

hiện vi khuẩn lao bằng

phương pháp nhuộm đặc

biệt, phân lập vi khuẩn và

cấy được các vi khuẩn này

trên các môi trường nhân

tạo, tái tạo bệnh lao bằng

mầm cấy trực khuẩn lao .

Tác nhân gây bệnh

Một số đặc điểm chung của giống Mycobacteria:

• Có một lượng lớn Lipid trong tế bào

• Có tốc độ tăng trưởng chậm hoặc rất chậm

• Tế bào vi khuẩn có hình dài , mãnh, đôi khi phân nhánh hoặc có dạng sợi Điều này chứng tỏ vi khuẩn Mycobacteria có mối quan hệ gần với vi nấm

• Trong các Mycobacteria gây bệnh, vi khuẩn gây bệnh lao ở người được biết tới nhiều nhất với 2 loại

Mycobacteria tuberculosis và Mycobacterium bovis (gây bệnh lao ở bò) Ngoài ra M.avium (vi khuẩn lao

Company Logo

www.themegallery.com

• Những loại Mycobacteria khác gây bệnh giống lao ở

người nhưng lại có những khác biệt về phân loại nên được gọi là vi khuẩn lao không điển hình (Atypical Mycobacterium), chúng được coi là những vi khuẩn

cơ hội thường gây bệnh trên những bệnh nhân có sự suy giảm miễn dịch như bệnh nhân AIDS

• Nhóm Mycobacteria gây bệnh thứ 3 bao gồm

Mycobacterium leprae (gây bệnh phong ở người) và Mycobacterium lepraemurium (gây bệnh phong ở

môi trường nhân tạo trong phòng thí nghiệm

Tác nhân gây bệnh

• Vi khuẩn lao có hình que dài, mãnh dẻ, có khi hơi cong,

kích thước 0.2 – 0.6 x 1 – 1.4 µm Các vi khuẩn này thường đứng riêng lẻ một mình hay xếp thành đám lớn rất khó phân biệt từng con vi khuẩn

Hình Thể & Kích Thước

Company Logo

www.themegallery.com

• Vi khuẩn lao người có thể dài

và mảnh hơn vi khuẩn lao bò nhưng nói chung hình dạng

cả 2 đều rất thay đổi

• Dạng phân nhánh rất hiếm

thấy từ các vi khuẩn gây bệnh lao ở động vật hữu nhủ Dạng thường thấy trong mô

• Trong môi trường nuôi cấy

đôi khi thấy dạng sợi dài và que ngắn, phồng trông giống

vi khuẩn bạch hầu

• Vi khuẩn lao không di động,

không có lông, không sinh nha bào.

Tác nhân gây bệnh

• Các vi khuẩn lao không nhuộm được bằng các phương

pháp nhuộm thông thường như đối với các loại vi khuẩn khác

• Do trong tế bào vi khuẩn chứa một lượng lớn chất Lipid

nên chúng có đặc tính kháng lại sự xâm nhập của các loại phẩm nhuộm vào tế bào.

• Mycobacteria nói chung có thể nhuộm bằng

Carbonfuchsin đun nóng hoặc để trong phẩm nhuộm tiếp xúc trực tiếp với vi khuẩn trong thời gian 5 – 10 phút

• Một khi đã bắt màu phẩm nhuộm, vi khuẩn rất khó bị tẩy

màu bởi hỗn hợp alcool – acid và do đó được gọi là kháng cồn – acid

Tác nhân gây bệnh

Company Logo

www.themegallery.com

• Mycobacteria là vi khuẩn hiếu khí tuyệt đối, lấy năng lượng từ phản ứng

oxy hóa các phức hợp Carbon đơn giản

• C02 có tác dụng kích thích sự tăng trưởng của vi khuẩn

• Thời gian nhân đôi của vi khuẩn rất dài, từ 15 đến 22 giờ, so với các vi khuẩn thường khác từ 20 đến 30 phút

• Do đó các mẫu cấy vi khuẩn lao phải ủ khoảng 6 tới 8 tuần.

• Khả năng gây bệnh phụ thuộc vào số lượng BK Độc tính của BK là ở khả năng sinh sản, nhân lên trong tổ chức tế bào (đại thực bào).

• + BK có khả năng đột biến kháng thuốc Niacin test (+) tính khử Nitrat (+)

tính.

• + BK có thể thay đổi dưới tác động của môi trường Nhờ đặc điểm này người ta nuôi cấy BK trong môi trường có mật để tạo ra BCG (Bacillus- Canmette-Guerin) là loại trực khuẩn không gây bệnh, dùng để tiêm chủng phòng lao

• + BK có sức đề kháng cao với các thuốc khử trùng thông thường

Đặc Điểm Vi Khuẩn Lao (BK)

Đặc Điểm Vi Khuẩn Lao (BK)

Lớp vỏ ngoài của trực khuẩn lao gồm 3 lớp như sau:

- Lớp trong cùng là cấu trúc màng, có thành phần chủ yếu là các phospholipid Các phần

tử phopholipid có hai nhóm: nhóm ưa nước hướng về phía bên trong, nhóm kỵ nước

hướng quay ra phía vỏ Cấu trúc này tạo nên những màng sinh học có tác dụng giúp trực khuẩn điều hoà sự thẩm thấu của vỏ ngoài trực khuẩn.

- Lớp tiếp theo là lớp peptidoglycan như một màng polyme sinh học Các peptidoglycan liên kết với đường arabinose và các phân tử acid mycolic tạo nên bộ khung định hình cho trực khuẩn, đảm bảo cho vỏ trực khuẩn có độ cứng của lớp vỏ như khung xương của trực khuẩn.

- Lớp phía ngoài là lớp tạo nên bởi sự liên kết giữa các acid mycolic và các chất lipid

phức tạp (mycozid C, sulpholipid, yếu tố thừng cord factor và các chất sáp) Lớp này tạo nên độc tính của trực khuẩn lao và có cấu trúc làm tăng khả năng ít thấm nước của vỏ trực khuẩn, giúp trực khuẩn tồn tại bền vững với môi trường bên ngoài, chống khả năng

bị huỷ diệt bởi đại thực bào và các tế bào miễn dịch của cơ thể.

- Đối với các trực khuẩn phát triển bên trong tế bào , ngoài 3 lớp nêu trên còn có lớp

peptidoglycolipid phủ ngoài cùng trực khuẩn Nó có tác dụng như chiếc áo giáp tăng

www.themegallery.com

Đặc Điểm Vi Khuẩn Lao (BK)

(4) Lớp peptidoglycan (5) Lớp màng plasma (6).Lớp

lipoarabinomannan (LAM) (7).Lớp

phosphatidylinositol mannoside

(8) Lớp khung vách tế bào

Đường xâm nhập vk vào cơ thể

• Vi khuẩn lao xâm nhập qua cơ thể chủ

yếu qua đường ho hấp và tiêu hóa.

• Đường hô hấp là đường lây nhiễm

thường xuyên và quan trọng nhất (lao

phổi chiếm 90% tổng số lao).

• Đường tiêu hóa gây lao ruột…

Vi khuẩn cũng có thể lây nhiễm sang

thai nhi bằng đưòng máu qua tĩnh

mạch rốn, nếu mẹ bị lao cấp tính

(như lao kê), hoặc qua nước ối (khi

chuyển dạ), nếu mẹ bị lao niêm mạc

tử cung, âm đạo Trong thực tế con

không khí, phân tán xung

quanh người bệnh, người

lành hít phải các hạt này

khi thở có thể bị bệnh

Cơ chế gây bệnh

Cơ chế gây bệnhwww.themegallery.com

PP nhuộm Ziehl-Neelsen

 Do tế bào VK kháng acid có lớp vỏ sáp bao bọc nên khi

đã nhuộm được phức hợp màu carbolfuchsin, phức hợp này sẽ không bị tẩy màu bởi dung dịch tẩy màu mạnh

( acid, ancool acid) tuy nhiên để phức hợp màu này có thể thấm xuyên qua lớp vỏ sáp của VK có 2 cách :

 1 Đun nóng phết nhuộm với dd màu carbolfuchsin thấm

qua vỏ sáp của VK để nhuộm màu VK.Đây là PP nhuộm nóng Ziehl Neelsen.

 2.Dùng dd màu carbolfuchsin đậm đặc phết nhuộm với thời gian lâu vẫn thấm qua vỏ sáp để nhuộm VK.Đây là

PP nhuộm nguội Kinyoun

Company Logo

www.themegallery.com

PP nhuộm Ziehl-Neelsen

 Phương pháp nhuộm Ziehl Neelsen phổ biến nhất, rẻ

tiền, dễ thực hiện có thể tiến hành ở mọi nơi, mọi chỗ, rất thích hợp với các nước nghèo, các nước đang phát triển.Phương pháp này có những ưu điểm sau đây:

 Ưu điểm: Phương pháp này nhanh, đơn giản, dễ thực

hiện Cơ sở y tế nào có phòng xét nghiệm, có kính hiển

vi quang học tốt, có thuốc nhuộm Zin-nen-xen và kỹ

thuật viên được huấn luyện thành thạo về kỹ thuật

nhuộm và soi tìm vi khuẩn lao là nơi đó có khả năng

phát hiện vi khuẩn lao trong đờm (phương pháp này

cũng có thể áp dụng để phát hiện vi khuẩn lao trong dịch

www.themegallery.com

CÁC THÔNG TIN CHUNG CẦN BIẾT

VỀ PCR

 I.1 Nguyên lý của PCR

PCR là kỹ thuật khuyếch đại số lượng ADN dựa trên trình tự ADN

khuôn mẫu với quy trình tiến hành gồm 3 giai đoạn: biến tính, gắn mồi và tổng hợp kéo dài với sự trợ giúp của ADN polymerase chịu nhiệt, primers và deoxy-nucleotide triphosphates (dNTPs)

 I.2 Thông số chu kỳ PCR

PCR được thực hiện với các chu trình ủ bệnh phẩm đã xử lý ở 3 nhiệt

độ khác nhau tương ứng với 3 giai đoạn cần thiết cho việc tổng hợp ADN Mỗi chu kỳ bao gồm 3 giai đoạn: Biến tính ở 90-95 o C, gắn mồi

ở 40-65 o C và tổng hợp kéo dài ở 70-75 o C Tuỳ theo nồng độ ADN đích có trong bệnh phẩm mà xác định số lượng chu kỳ cần thực

hiện, số lượng trình tự khuyếch đại càng nhiều nếu số chu kỳ càng tăng

Company Logo

www.themegallery.com