Nghiên cứu sự thay đổi hàm lượng và thành phần tinh dầu đại bi theo thời gian

PHAN THỊ AN NGHIÊN CỨU SỰ THAY ĐỔI HÀM LƯỢNG VÀ THÀNH PHẦN TINH DẦU ĐẠI BI THEO THỜI GIAN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI-2013... PHAN THỊ AN NGHIÊN CỨU SỰ THAY ĐỔI HÀM LƯỢNG VÀ

PHAN THỊ AN

NGHIÊN CỨU SỰ THAY ĐỔI

HÀM LƯỢNG VÀ THÀNH PHẦN TINH DẦU ĐẠI BI THEO THỜI GIAN

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI-2013

PHAN THỊ AN

NGHIÊN CỨU SỰ THAY ĐỔI

HÀM LƯỢNG VÀ THÀNH PHẦN TINH DẦU ĐẠI BI THEO THỜI GIAN

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Dược Hà Nội và xã Yên Ninh - huyện Phú Lương – tỉnh Thái Nguyên

Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân

thành tới DS Nghiêm Đức Trọng, người thầy đã trực tiếp hướng dẫn, tận tình

chỉ bảo, động viên và tạo điều kiện tốt nhất cho tôi trong quá trình hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này

Tôi cũng xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới:

PGS.TS Trần Văn Ơn, người thầy đã hướng dẫn, chỉ bảo tận tình và

đóng góp những ý kiến quý báu cho tôi trong quá trình thực hiện nghiên cứu khoa học

Cùng các giảng viên Bộ môn Thực vật: TS Hoàng Quỳnh Hoa, TS Nguyễn Quốc Huy, ThS Vũ Vân Anh, ThS Phạm Hà Thanh Tùng và tất

cả các chị kỹ thuật viên Bộ môn Thực vật luôn sẵn sàng chỉ bảo và giúp đỡ tôi hoàn thành nghiên cứu này

Anh Trần Viết Văn – Công ty Cổ phần DKNatura, em Đoàn Thị Phương Thảo – A4K65, bạn Tạ Khắc Công – M1K63 đã giúp đỡ tôi trong quá trình lấy mẫu

Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội – những người thầy đã dìu dắt tôi suốt 5 năm học vừa qua Cuối cùng, tôi xin chân thành cảm ơn gia đình và bạn bè đã luôn bên cạnh, động viên và giúp đỡ tôi trong quá trình hoàn thành khóa luận

Hà Nội, ngày 20 tháng 5 năm 2013 Sinh viên

Phan Thị An

Danh mục kí hiệu, các chữ viết tắt

Danh mục các bảng

Danh mục các hình Trang

ĐẶT VẤN ĐỀ……… 1

PHẦN 1: TỔNG QUAN……….……… 3

1.1 Loài Đại bi Blumea balsamifera (L.) DC 3

1.1.1 Vị trí phân loại loài Blumea balsamifera (L.) DC……….…….3

1.1.2 Đặc điểm thực vật……….… 3

1.1.3 Phân bố, thu hái và chế biến……….……… 4

1.1.4 Những nghiên cứu về tinh dầu Đại bi……… … ………4

1.2 Borneol……… ………7

1.2.1 Công thức phân tử……….……… 7

1.2.2 Nguồn gốc, điều chế……… ……… 8

1.2.3 Tác dụng, công dụng……….12

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……… 15

2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị……….15

2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu………15

2.1.2 Thiết bị và hóa chất nghiên cứu………16

2.2 Nội dung nghiên cứu 16

2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật……… ……… 16

2.2.2 Nghiên cứu hàm lượng Borneol………16

2.3 Phương pháp thực nghiệm………17

2.3.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật ……….… 17

3.1 Kết quả thực nghiệm……… ………19

3.1.1 Đặc điểm thực vật và hàm lượng Borneol của các mẫu Đại bi…… 19

3.1.2 Sự thay đổi hàm lượng Mai hoa băng phiến theo thời gian………… 30

3.2 Bàn luận……… ………32

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ……….34

Kết luận……… ……… 34

Kiến nghị……… ….35

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

Phụ lục 1: Phiếu giám định tên khoa học

Phụ lục 2: Giấy chứng nhận mã số tiêu bản

Phụ lục 3: Pic sắc ký GC-MS của MHBP các mẫu nghiên cứu

GABA Gamma amino butyric acid

GC-MS Sắc kí khí khối phổ

(Gas chromatography-mass spectrometry)

IC50 Nồng độ ức chế 50% đối tượng thử

(Inhibitory Concentration)

MHBP Mai hoa băng phiến

MS Khối phổ (Mass spectrometry)

PTMD Phần trên mặt đất

TD Tinh dầu

TLTK Tài liệu tham khảo

TT Thứ tự

TT Tên bảng Trang

1 Bảng 1.1: Thành phần tinh dầu Đại bi thu hái tại Hà

Giang, Hà Nội, Đắc Lắc

5

2 Bảng 1.2: Hàm lượng và thành phần tinh dầu Đại bi thu

hái tại một thời điểm

6

8 Bảng 1.3: Thành phần tinh dầu Đại bi ở Bangladesh 7

3 Bảng 1.4: Nguồn thực vật chứa tinh dầu có Borneol 9,10,11

5 Bảng 3.1: Các đặc điểm hình thái khác nhau giữa các

7 Bảng 3.3: Hàm lượng Borneol trong các mẫu (tháng11) 29

9 Bảng 3.4: Hàm lượng Mai hoa băng phiến trong các mẫu

nghiên cứu

31

1 Hình 1.1: Công thức cấu tạo của Borneol 8

3 Hình 3.1: Đặc điểm hình thái cơ quan sinh dưỡng 20

16 Hình 3.2: Đặc điểm hình thái cơ quan sinh sản (1) 21

4 Hình3.3: Đặc điểm hình thái cơ quan sinh sản (2) 22

5 Hình 3.4: Sự khác nhau về màu sắc thân gần điểm phân

9 Hình 3.8: Đặc điểm màu sắc đầu tràng hoa lưỡng tính 25

13 Hình 3.12: Biểu đồ hàm lượng Borneol trong dược liệu

khô tuyệt đối của các mẫu (tháng 11)

30

14 Hình 3.13: Biểu đồ sự thay đổi hàm lượng Mai hoa băng

phiến 8 mẫu Đại bi theo thời gian

32

ĐẶT VẤN ĐỀ

Borneol là một dẫn chất chứa oxy của monoterpen Borneol được sử dụng trong Y học cổ truyền của nhiều nước trên thế giới như Trung Quốc, Việt Nam, Ấn Độ, Philippines,…Trong Y học cổ truyền Trung Quốc và Việt nam, Borneol được dùng với tên gọi Mai hoa băng phiến, có 2 công năng là: (i) tiêu tán màng mộng và (ii) khai khiếu tỉnh thần [9] Hiện nay, Borneol là một trong những nguyên liệu có giá trị cao trong ngành dược.Theo Dược điển Trung Quốc, Borneol là thành phần quan trọng của khoảng 63 sản phẩm từ thảo dược [31] Ở Việt Nam, Borneol có trong thành phần của nhiều Dược phẩm thuộc các nhóm thuốc khác nhau như nhóm giảm đau - kháng viêm (cao dán Sinsinpa), nhóm thuốc tim mạch (PC.CARDIO Viên hộ tâm) và các sản phẩm thuốc nhỏ mắt (Osla, Eyelight Cool, Vimaxx, Optamix,…) Hiện nay, trên thị trường hóa chất có hai loại Borneol khác nhau: (i) Borneol tổng hợp là hỗn hợp của DL-Borneol và Isoborneol (có độc tính) [4]; (ii) Borneol tự nhiên

có thành phần chính là D-Borneol Theo một số nghiên cứu, Borneol tổng hợp

bị biến tính, phân hủy trong quá trình bảo quản và biến đổi thành Camphor (có thể tới 45%-97%) là thành phần có độc tính; trong khi Borneol tự nhiên không có độc tính [16], [30] Vì vậy, ngày nay người ta có xu hướng sử dụng Borneol tự nhiên thay vì sử dụng Borneol tổng hợp.Nguồn Borneol thiên

nhiên chủ yếu được lấy từ các cây thuộc họ Dipterocarpaceae (Dryobalanops aromatic C F Gaeth…), họ Asteraceae (Blumea balsamifera (L.)DC.) Hiện

nay nguồn nguyên liệu sản xuất Borneol thiên nhiên đang bi thiếu hụt, giá của Borneol trên thị trường tăng lên Do đó, việc tạo nguồn nguyên liệu sản xuất Borneol thiên nhiên là rất cần thiết

Ở Việt Nam, từ thời chống Pháp, nhân dân ta đã biết khai thác Borneol

từ cây Đại bi [7].Cây Đại bi có đặc tính quý là dễ trồng, dễ chăm sóc, có thể

phát triển ở nhiều nơi, trên các vùng đất khô hạn [24] Tỷ lệ Borneol và Camphor trong tinh dầu Đại bi thay đổi theo từng vùng: Hà Giang: 57,82% Borneol, 1,12% Camphor; Hà Nội: 50,57% Borneol, 18,71% Camphor; Đắc Nông: 5,70% Borneol và 70,05% Camphor [5], [11] Với cùng một thời điểm thu hái, các mẫu Đại bi thu hái tại các địa điểm khác nhau có hàm lượng Borneol trong dược liệu khô tuyệt đối rất thay đổi: Hà Nội: 0,03%; Thái Nguyên: 0,01%; Hà Giang: 1,75%; Nam Định: 0,26% [8] Để khai thác Borneol từ cây Đại bi đạt hiệu quả cao cần phải nghiên cứu tìm ra thời điểm thu hái Đại bi thích hợp, giống Đại bi và vùng trồng Đại bi cho hàm lượng Borneol cao

Với các lý do trên, bước đầu nhằm tạo được nguồn nguyên liệu sản xuất Borneol tự nhiên từ cây Đại bi và tìm ra thời gian thu hái Đại bi thích hợp,

chúng tôi thực hiện đề tài: “Nghiên cứu sự thay đổi hàm lượng và thành phần tinh dầu Đại bi theo thời gian” với các mục tiêu:

1 Đánh giá sự khác nhau về đặc điểm thực vật và hàm lượng Borneol của các mẫu trong cùng một điều kiện sinh thái

2 Nghiên cứu sự thay đổi hàm lượng Mai hoa băng phiến của các mẫu Đại bi theo thời gian

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN

1.1 Loài Đại bi Blumea balsamifera (L.) DC.

1.1.1 Vị trí phân loại loài Blumea balsamifera (L.) DC

Chi Blumea DC có khoảng 55 loài trên thế giới, phân bố ở châu Phi,

Đông Nam Á tới Bắc châu Đại Dương Việt Nam có 30 loài, gặp phổ biến từ đồng bằng, trung du tới miền núi [2]

Loài Blumea balsamifera (L.) DC thuộc phân lớp cúc: Asteridae; Liên bộ Cúc: Asteranae; Bộ cúc: Asterales; Họ cúc: Asteraceae; Chi: Blumea

Tên đồng nghĩa: Conyza balsamifera L.; Baccharis salviaLour.;Blumea balsamifera var microcephala Kitam.; Pluchea balsamifera (L.) Less [2], [3]

Cụm hoa đầu 6-7 mm, có cuống, hình chùy; lá bắc gồm 3-4 vòng ở ngoài, mặt ngoài phủ nhiều lông ốp sát vào nhau, lá bắc ở ngoài nhỏ hơn, tròn nhọn, dài 1-3 mm, lá bắc trong dài hơn, hình dải hẹp dài 5-6 mm; đường kính

đế cụm hoa 2,5-3 mm, có lỗ tổ ong, phủ lông; hoa ngoài hình chùy dài đến 6

mm, xẻ 2-4 thùy; hoa ở giữa hình ống, màu vàng, không cuống, dài 6-7 mm, thùy có gai thịt nhỏ, thưa thớt lông đa bào

Quả bế, màu nâu, thuôn dài khoảng 1 mm; phủ lông thưa hoặc dày; trên

có mào lông hơi đỏ, dài 4-6 mm

1.1.3 Phân bố, thu hái và chế biến

 Phân bố

Đại bi mọc hoang nhiều ở Việt Nam, Trung Quốc và các nước nhiệt đới

Nam Á như Ấn Độ, Indonesia, Philippines,…

Ở Việt Nam, Đại bi phân bố rộng, ở hầu hết các tỉnh miền núi thấp dưới 1000m, trung du, đồng bằng và nhiều đảo lớn, không có trong rừng sâu Cây

dễ trồng, ưa sáng, sống 1-2 năm, có thể nhân giống bằng hạt, cành hoặc cây con [1], [6], [24]

 Thu hái

Lá Đại bi có thể thu hái 4 đợt trong 1 năm với sản lượng 50 tấn/ha, cho khoảng 50-200 kg Borneol [24] Tinh dầu lá Đại bi được khai thác từ lâu đời với tên thương phẩm là Mai hoa băng phiến Nhân dân ta đã sử dụng Mai hoa băng phiến từ thế kỉ X Từ thời kháng chiến chống Pháp, nhân dân ta đã biết khai thác Borneol từ Đại bi, sau đó tạm dừng Mùa thu đông cất Mai hoa băng phiến cho hàm lượng Băng phiến cao nhất Tinh chế Băng phiến bằng cách ép bớt tinh dầu, trộn Băng phiến thô với bột than củi với tỉ lệ vôi bột: than củi: Băng phiến là 3:5:100; cho hỗn hợp thăng hoa, thu lấy Băng phiến tinh chế [6]

1.1.4 Những nghiên cứu về tinh dầu Đại bi

 Những nghiên cứu trong nước

- Trong lá Đại bi thường chứa 0,2–1,8% tinh dầu với thành phần chủ yếu là D-Borneol, L-Camphor, Cineol, Limonen, acid Palmitic, acid Myristic, còn chứa các Sesquiterpen alcol [1], [5]

- Tinh dầu lá Đại bi được thu thập ở 3 tỉnh (Hà Giang, Hà Nội, Đắc Lắc)

có các thành phần chính được trình bày ở bảng 1.1, với tỉ lệ Borneol rất thay

Bảng 1.2: Hàm lượng và thành phần tinh dầu Đại bi

tại một thời điểm thu hái

Địa điểm HLTD trong DL

khô tuyệt đối

HL Borneol trong tinh dầu

HL Camphor trong tinh dầu Đại học Dược Hà

 Những nghiên cứu trên thế giới

Lá Đại bi ở Myanmar chứa 1-9% tinh dầu trong đó 75% Camphor và 25% Borneol Tinh dầu Đại bi ở Philippines có hàm lượng từ 0,1-0,4% Ở Thái Lan, trong tinh dầu, Borneol chiếm tỉ lệ 25%, Camphor chiếm 75% Tinh dầu Đại bi ở Trung Quốc thành phần chủ yếu là Borneol [1]

Tinh dầu lá tươi Đại bi tại Bangladesh có hàm lượng là 0,40%; xác định được 50 thành phần, trong đó thành phần chính là Borneol (Bảng 1.3) [26]

Bảng 1.3: Thành phần tinh dầu Đại bi ở Bangladesh

Hình 1.1: Công thức cấu tạo của Borneol

- Tên IUPAC: endo-1,7,7-Trimethyl bicyclo [2.2.1] heptan-2-ol

- Tên đồng nghĩa: bornanol; camphanol;

endo-2-hydroxycamphane; Bornyl alcohol; Borneo camphor; Dryobalanops camphor; Camphol [21], băng phiến, ngải phiến, long não hương, đại ngải [7]

- Khối lượng phân tử: 154,25 g/mol Tỷ trọng: 1,011 g/cm3 ở 20°C Dễ thăng hoa ở nhiệt độ thường, khả năng thăng hoa kém hơn Camphor; tinh thể không màu, mùi thơm đặc biệt và dễ chịu

- Nhiệt độ sôi: 206°C-212°C Nhiệt độ nóng chảy 204°C-208°C

- Độ tan: Không tan trong nước, tan trong alcol: 176:100, ether (1:6); Benzene (1:5); Toluen; Aceton [21] Cho phản ứng màu với dung dịch Vanilin sulfuric hay Vanilin clohydric [7]

1.2.2 Nguồn gốc, điều chế

 Điều chế từ thiên nhiên

Borneol có thể cất công nghiệp từ: lá cây Đại bi Blumea balsamifera (L.) DC (Asteraceae), quả cây Sa nhân Amomum villosum var xanthioides

(Wall ex Baker) T.L.Wu & S.J.Chen (Zingiberaceae), cây Long não hương

Dryobalanops aromatic C F Gaertn (Dipterocarpaceae), cây Cinnamomum burmannii (Ness & T.Ness) Blume (Lauraceae) [6], [7], [15] Hơn nữa

Borneol còn là thành phần trong tinh dầu của nhiều cây khác (Bảng 3.4)

Bảng 1.4: Nguồn thực vật chứa tinh dầu có Borneol

TT Tên khoa học Họ

Tên Việt Nam

Bộ phận khai thác

Hàm lượng

TD (%)

Tỷ lệ Borneol (%)

2 Amomum villosum var xanthioides

(Wall ex Baker) T.L.Wu & S.J.Chen

lớn, Kim đầu

6 Cinnamomum burmanii (Nees &

T.Nees) Blume

TT Tên khoa học Họ

Tên Việt Nam

Bộ phận khai thác

Hàm lượng

TD (%)

Tỷ lệ Borneol (%)

TL

TK

8 Micromeria cristata (Hampe) Griseb

subsp phrygia P H Davis

9 Origanum vulgare subsp gracile

(K.Koch) Lestw

cành

0,2-1,0 1,1-6,3 [10]

12 Rosmarinus tournefortii (Noe ex Jord

& Fourr.) Jahand & Maire

15 Salvia officinalis subsp lavandulifolia

(Vahl) Gams

TT Tên khoa học Họ

Tên Việt Nam

Bộ phận khai thác

Hàm lượng

TD (%)

Tỷ lệ Borneol (%)

 Điều chế từ tổng hợp hóa học

Borneol tổng hợp bằng cách khử hóa Camphor (Hình 1.2) hoặc Pinen (từ tinh dầu thông) cho hỗn hợp đồng phân Borneol với thành phần chủ yếu là Isoborneol [4], [7]

Hình 1.2: Sơ đồ tổng hợp Borneol từ Camphor

 Trong y học hiện đại

- Tác dụng làm tăng tính thấm, cải thiện sinh khả dụng của thuốc dùng phối hợp:

Borneol làm tăng tính thấm qua giác mạc của thuốc thân lipid: Indomethacin và Dexamethasone là 1,67; 2,00 lần; thuốc thân nước: Ofloxacin, Ribavirin và Tobramycin là 2,15; 2,18 và 3,39 lần Mặt khác, các biểu mô giác mạc không bị tổn thương và suy yếu trước tác động tăng cường của Borneol Borneol là hoạt chất tiềm năng được sử dụng nhằm tăng sự hấp thu của thuốc qua hàng rào máu-mắt [18]

Borneol làm kéo dài thời gian gây mê của 2,6-Diisopropylphenol khi sử dụng kết hợp do Borneol ức chế sự chuyển hóa của 2,6-Diisopropylphenol qua gan bằng con đường liên hợp với acid Glucuronic [14]

Borneol làm tăng sự hấp thu của Gastrodin qua đường tiêu hóa và thúc đẩy phân bố đến não So với việc sử dụng Gastrodin một mình, việc dùng kết hợp với Borneol có thể được hấp thu nhanh qua đường tiêu hóa, thời gian đạt nồng độ lớn nhất của Gastrodin trong huyết tương ngắn hơn là 5 – 15 phút so với bình thường là 30 phút, sinh khả dụng của Gastrodigenin trong não tăng 33,6%-108,8% [37]

- Tác dụng chống viêm, sát khuẩn

Tinh dầu Đại bi có tác dụng ức chế hoạt động của Bacillus cereus ở nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) là 150µg/ml, Staphylococus aureaus và Candida albicans ở nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) là 120µg/ml [35]

- Tác dụng giảm đau, gây mê:

Liên quan đến tác dụng trên các thụ thể GABA: receptors GABA(A) kết hợp α(1) β(2) γ(2L); đáp ứng của GABA ít nhất là tương đương với các thuốc gây mê Etomidate và lớn hơn nhiều so với Diazepam hoặc 5α-pregnan-3α-ol-20-one [29] Mặt khác, Borneol còn có tác dụng ức chế receptor

Nicotinic acetylcholine (nAChR), ức chế nAChR qua chủ vận phenyl piperazinium iodide với IC50= 56 ± 9 µM Tác dụng ức chế nAChR của Borneol mạnh hơn Lidocain, và theo phương thức không cạnh tranh [28]

Hiện nay, Borneol được dùng để hỗ trợ điều trị các bệnh về phổi, dùng bôi tại chỗ kết hợp với các dạng thuốc khác nhằm điều trị các chứng bệnh: sưng họng, lở miệng, nhiễm trùng tai, bệnh vẩy nến, mụn nhọt, bệnh về mắt

và thấp khớp Dung dịch Borneol dùng tiêm, uống để trợ tim và sát khuẩn [4]

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị

2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu

Mẫu cây Blumea balsamifera (L.) DC được thu hái tại Yên Ninh – Phú

Lương – Thái Nguyên Các mẫu cây có nguồn gốc khác nhau, được lấy giống

từ các tỉnh khác nhau ở miền Bắc: Hà Nội, Hà Giang, Điện Biên, Thái Nguyên Bắt đầu từ tháng 3 năm 2011, các mẫu được trồng tại một địa điểm (xã Yên Ninh – huyện Phú Lương – tỉnh Thái Nguyên) với cùng một điều kiện chăm sóc Khoảng cách giữa các mẫu là 2,5 m Tại thời điểm bắt đầu nghiên cứu, các mẫu cao khoảng 2,5 m Thời điểm lấy mẫu trong ngày: 12h-13h

Có tổng cộng 8 mẫu đã được thu, xử lý khô, được giám định tên khoa học và lưu trữ tại Phòng tiêu bản Bộ môn Thực vật – Trường đại học Dược

Hà Nội (HNIP) (Bảng 2.1)

Bảng 2.1 Danh sách mẫu Đại bi

1 A1 Yên Ninh – Phú Lương – Thái Nguyên

3 A3 Đồng Mô – Sơn Tây – Hà Nội

4 A4 Quản Bạ - Hà Giang

5 A5 Thanh Luông – Điện Biên – Điện Biên

6 A6 Yên Bài – Ba Vì – Hà Nội

7 A7 Tùng Bá – Vị Xuyên – Hà Giang

- Các mẫu được mô tả đặc điểm hình thái phần trên mặt đất bao gồm:

Cơ quan sinh dưỡng và cơ quan sinh sản

- Nghiên cứu hàm lượng borneol: lá và cành non các mẫu cây Đại bi được thu hái vào tuần thứ 4 của các tháng 9, 10, 11, 12 năm 2012 và các tháng 1, 2, 3, 4 năm 2013 Nguyên liệu được phơi khô và bảo quản trong túi nylon

2.1.2 Thiết bị và hóa chất nghiên cứu

 Thiết bị:

- Kính hiển vi Leica, kính lúp soi nổi Leica, máy ảnh Canon IXY 30S,

tủ sấy Shellab, kim mũi mác, chổi lông, phiến kính, lamen,

- Bộ định lượng tinh dầu nhẹ hơn nước của Bộ môn Thực vật – Đại học Dược Hà Nội

2.2 Nội dung nghiên cứu

2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật

Nghiên cứu về đặc điểm hình thái và về cấu tạo giải phẫu của 8 mẫu Đại

bi Đánh giá sự khác nhau về đặc điểm thực vật của các mẫu trong cùng một điều kiện sinh thái

2.2.2 Nghiên cứu hàm lượng Borneol

Nghiên cứu sự khác nhau về hàm lượng Borneol của các mẫu Đại bi trong cùng một điều kiện sinh thái và sự thay đổi hàm lượng Mai hoa băng phiến trong lá Đại bi theo thời gian

- Định lượng hàm lượng Borneol trong Mai hoa băng phiến và trong dược liệu khô tuyệt đối của 8 mẫu Đại bi thu hái vào tháng 11 năm 2012

- Định lượng hàm lượng Mai hoa băng phiến trong dược liệu khô tuyệt đối của 8 mẫu Đại bi vào các tháng 9, 10, 11, 12 năm 2012 và các tháng 1, 2,

3, 4 năm 2013

2.3 Phương pháp thực nghiệm

2.3.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật

- Nghiên cứu về đặc điểm hình thái được quan sát bằng mắt thường, kính lúp soi nổi và mô tả theo phương pháp mô tả phân tích

- Nghiên cứu về cấu tạo giải phẫu: sử dụng phương pháp nhuộm kép, quan sát trên kính hiển vi, mô tả theo phương pháp mô tả phân tích

2.3.2 Nghiên cứu hàm lượng Borneol

 Định lượng Mai hoa băng phiến trong Đại bi

Nguyên liệu được cắt nhỏ, cất tinh dầu bằng bộ định lượng tinh dầu nhẹ hơn nước, theo phương pháp cất kéo hơi nước, cho đến khi không còn tinh dầu trong dược liệu, Mai hoa băng phiến thu được dưới dạng rắn, đem cân để xác dịnh hàm lượng MHBP

Song song tiến hành xác định hàm ẩm dược liệu theo phương pháp nhiệt độ, sử dụng máy đo hàm ẩm ở nhiệt độ là 100°C

Hàm lượng Mai hoa băng phiến trong dược liệu khô tuyệt đối được xác định theo công thức:

X: hàm lượng Mai hoa băng phiến (%)

 Xác định hàm lượng Borneol trong dược liệu

Phân tích thành phần tinh dầu bằng phương pháp sắc kí khí khối phổ (GC-MS) tại Viện Pháp y Quân đội Điều kiện phân tích: Tốc độ dòng khí He 0,9 ml/phút, nhiệt độ buồng bơm mẫu 265°C, nhiệt độ detector 280°C, nhiệt

độ MS source 230°C, nhiệt độ quard 150°C Chương trình nhiệt độ của cột là: 70°C giữ 2 phút, tăng 30°C/phút đến 190°C, tăng tiếp 5°C/phút đến 270°C, giữ 15 phút Bơm mẫu theo chế độ chia dòng 10:1, thể tích bơm mẫu 1µl Hàm lượng Borneol trong dược liệu được tính theo công thức:

Y= X.A

Trong đó:

Y: Hàm lượng Borneol trong dược liệu (%)

X: Hàm lượng MHBP trong dược liệu (%)

A: Tỷ lệ Borneol trong MHBP (%)

CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

lỗ tổ ong Đầu mang hoa hình ống, có hai loại hoa: hoa cái rất nhiều xếp 3-4 vòng ở ngoài, hoa lưỡng tính 18-25 hoa ở trong (Hình 3.2) Hoa cái màu vàng nhạt, những hoa ở ngoài cùng thường có hình trụ cong; đài biến đổi thành túm lông dài màu trắng; tràng hoa màu vàng nhạt, dính thành một ống hẹp, dài 4-6mm, trên chia 2-3 thùy tam giác nhỏ, có lông tiết tinh dầu thơm; bầu dưới 1

ô, màu trắng trong mờ, hình trụ hẹp ở gốc; vòi nhụy vàng nhạt, dạng sợi dài khoảng 5–7 mm, tận cùng là 2 nhánh đầu nhụy màu vàng đậm hình máng hẹp dài 1–2 mm Hoa lưỡng tính lớn hơn hoa cái, màu vàng nhạt; tràng hoa hình ống dài, loe dần, trên chia 5 thùy hình tam giác có màu vàng đậm; nhị 5, chỉ nhị rời, dạng sợi, dài khoảng 1–2 mm, màu vàng nhạt, bao phấn dính nhau thành ống dài khoảng 2–3 mm, bao lấy vòi nhụy, màu vàng đậm; vòi nhụy dạng sợi dài khoảng 5–7 mm, đầu nhụy 2, dài khoảng 1–2 mm, màu vàng đậm, dạng máng cạn, thuôn hẹp Quả bế màu vàng nâu, hình trụ dài khoảng 0,5–1mm, mặt ngoài vỏ có lông ngắn màu trắng và có 4-6 gờ dọc, trên mang túm lông mào dài, màu trắng của đài tồn tại, gốc có vòng gờ chỗ gắn với đế hoa; 1 hạt (Hình 3.3)

1: Cành, 2: Chiều dài lá, 3: Chiều rộng lá

Hình 3.1: Đặc điểm hình thái cơ quan sinh dưỡng