Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học bộ phận trên mặt đất cây cần tây thu hái ở nam định

ĐẶT VẤN ĐỀViệt Nam là một trong những nước thuộc vùng khí hậu nhiệt đới, gió mùa. Vì vậy, nước ta có một thảm thực vật vô cùng phong phú và có nhiều tiềm năng vềcây thuốc. Theo thống kê sơ bộ của Viện dược liệu, nước ta có khoảng 14.000 loài thực vật, nấm và tảo, trong đó có gần 4.000 cây thuốc. Bên cạnh đó, nhân dân ta có truyền thống lâu đời sử dụng cây cỏ làm thuốc chữa bệnh. Theo thời gian, kho tàng kinh nghiệm sử dụng ấy ngày càng lớn và hoàn thiện hơn. Ý thức được thế mạnh đó, trong “Chính sách quốc gia về Dược giai đoạn 20112020, tầm nhìn 2030 ”,Đảng và chính phủ đặc biệt chú trọng tới việc quy hoạch, bảo tồn cũng như nghiên cứu và phát triển các dược liệu. Cây Cần tây có tên khoa học Apium graveolen L., thuộc họ Cần (Apiaceae), có nguồn gốc từ châu Âu, di thực vào Việt Nam và được trồng rộng rãi ở nhiều nơi.Cần tây được dùng chủ yếu dưới dạng rau ăn và gia vị. Trong y học cổ truyền, Cần tây được biết đến với rất nhiều tác dụng chữa bệnh. Ở Trung Quốc, Cần tây dùng làm thuốc giải nhiệt, giảm ho, giúp tiêu hóa, lợi tiểu và hạ huyết áp 22 . Ở Ấn Độ,nước sắc quả Cần tây là thuốc trị thấp khớp 22. Tinh dầu Cần tây dùng làm thuốc chống co thắt và kích thích thần kinh, trị viêm khớp dạng thấp và nhiễm khuẩn ruột 22….Còn ở Việt Nam, nước sắc Cần tây được sử dụng để chữa cao huyết áp, chữa phong thấp, bí tiểu tiện, an thần và tiểu đường 6, 7, 13, 18. Gần đây có nhiều nghiên cứu đã chứng minh được tác dụng hạ huyết áp12, 20, 21, 35,43; hạ mỡ máu 44, 45; kháng khuẩn 11, 12, 33, 48; chống viêm của Cần tây 36….Với rất nhiều công dụng hữu ích, cây Cần tây ngày càng được quan tâm

THU HÁI Ở NAM ĐỊNH

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Hà Nội - 2013

L ỜI CẢM ƠN

Trong suốt quá trình thực hiện đề tài tôi đã nhận được nhiều sự quan tâm, giúp đỡ và hướng dẫn tận tình từ thầy cô, gia đình và bạn bè

Trước hết tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cô giáo mà tôi vô cùng kính trọng

TS.Nguy ễn Thu Hằng (Bộ môn Dược liệu – Trường đại học Dược Hà Nội), người

thầy đã luôn ở bên dìu dắt, động viên và khích lệ tôi trong suốt quãng thời gian tôi thực

hiện khóa luận tốt nghiệp này Cô đã chỉ dạy cho tôi nhiều điều, truyền cho tôi niềm đam mê với công việc và tình yêu với cây cỏ

Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các thầy cô và các anh chị kỹ thuật viên trrong bộ môn Dược liệu – Trường đại học Dược Hà Nội đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quãng thời gian tôi thực hiện nghiên cứu tại bộ môn

Đồng thời, tôi muốn gửi lời cám ơn tới những người thân yêu trong gia đình, bạn

bè Những người đã luôn ở bên cạnh giúp đỡ, cổ vũ và động viên tôi

Trong phạm vi hạn chế của khóa luận, những kết quả thu được mới chỉ là bước đầu

và trong quá trình làm việc khó tránh khỏi những thiếu sót, tôi rất mong nhận được sự góp ý của thầy cô giáo và các bạn bè

Hà Nội tháng 05 năm 2013 Sinh viên

Nguyễn Thị Luyến

M ỤC LỤC

ĐẶT VẤN ĐỀ……….1

Chương I: TỔNG QUAN……… 3

1.1 Đặc điểm thực vật……… 3

1.1.1 Vị trí phân loại của chi Apium L……… 3

1.1.2 Đặc điểm thực vật và phân bố của chi Apium L……… 3

1.1.3 Đặc điểm thực vật và phân bố của loài Apium graveolens L……… 4

1.1.4 Đặc điểm thực vật và phân bố một số thứ của loài Apium graveolens L… 4

1.2 Thành phần hóa học………5

1.2.1 Tinh dầu……… 5

1.2.2 Flavonoid……… 8

1.2.3 Coumarin……… 9

1.2.4 Một số hợp chất khác……….11

1.3 Tác dụng sinh học……… 12

1.4 Công dụng……… 14

Chương II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……… 15

2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị……… 15

2.2 Nội dung nghiên cứu……… 16

Chương III: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN……… 18

3.1 Nghiên c ứu về thực vật……… 18

3.1.1 Mô tả đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu……….18

3.1.2 Thẩm định tên khoa học của mẫu nghiên cứu……… 18

3.1.3 Đặc điểm vi phẫu thân Cần tây……….21

3.1.4 Đặc điểm vi phẫu lá Cần tây……….21

3.1.5 Đặc điểm vi phẫu rễ Cần tây……….23

3.2 Nghiên c ứu về thành phần hóa học của bộ phận trên mặt đất cây Cần tây 3.2.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu……… 24

3.2.2 Định tính các nhóm chất chính bằng phản ứng hóa học……….32

3.2.3 Xác định lượng chất chiết được trong ethanol của bộ phận trên mặt đất cây Cần tây theo phụ lục 12.10 DĐVN IV……… 33

3.2.4 Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết………35

3.2.5 Định tính các nhóm chất chính trong các phân đoạn dịch chiết bằng phản ứng hóa học……… 36

3.2.6 Định tính các phân đoạn dịch chiết bằng SKLM……….39

3.3 Bàn lu ận……… 51

Chương IV : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT……… 53 TÀI LI ỆU THAM KHẢO

PH Ụ LỤC :

Phụ lục 1 : Giấy chứng nhận mã số tiêu bản

Phụ lục 2 : Kết quả sắc ký khí kết hợp khối phổ GC – MS tinh dầu cây Cần tây thu hái

ở Nam Định

DANH M ỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

- ALAT: Alanin amino transferase

- ASAT: Aspartat amino transferase

- HDL : High density lipoprotein

- iNOS : Inducible nitric oxid synthase

DANH M ỤC CÁC BẢNG

1 Bảng 1.1: Hàm lượng tinh dầu trong các bộ phận của cây Cần tây 5

2 Bảng 1.2 : Thành phần hóa học của tinh dầu cây Cần tây 6

3 Bảng 1.3: Các hợp chất flavonoid có trong cây Cần tây 9

4 Bảng 1.4: Các hợp chất coumarin có trong cây Cần tây 9

6 Bảng 3.1: Kết quả phân tích thành phần hóa học tinh dầu của bộ

7 Bảng 3.2: Kết quả định tính các nhóm chất trong cây Cần tây 32

8

Bảng 3.3: % lượng chất chiết được trong ethanol bộ phận trên mặt

9

Bảng 3.4: Kết quả chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ bộ phận

10

Bảng 3.5 : Kết quả định tính các phân đoạn dịch chiết của bộ phận

11 Bảng 3.6: Kết quả SKLM dịch chiết methanol cây Cần tây với hệ

12 Bảng3.7: Kết quả SKLM phân đoạn dịch chiết n- hexan của cây

13 Bảng 3.8: Kết quả SKLM phân đoạn dịch chiết Chloroform cây

14 Bảng 3.9: Kết quả SKLM phân đoạn dịch chiết Ethyl Acetat của

15

Bảng3.10: Kết quả SKLM phân đoạn tủa dịch chiết cồn cây Cần

DANH M ỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ

3 Hình 3.3 : Ảnh chụp vi phẫu thân Cần tây dưới kính hiển vi 21

4 Hình 3.4 :Ảnh chụp vi phẫu phần gân lá Cần tây dưới kính hiển vi 22

5

Hỉnh 3.5 : Ảnh chụp vi phẫu phần phiến lá Cần tây dưới kính hiển

6 Hình 3.6 : Ảnh chụp vi phẫu rễ Cần tây dưới kính hiển vi 23

7 Hình 3.7: Sơ đồ tóm tắt quy trình chiết xuất các phân đoạn dịch

8

Hình 3.8: Ảnh chụp sắc ký đồ dịch chiết toàn phần của cây Cần tây

9 Hình 3.9: Ảnh chụp sắc ký đồ phân đoạn n – hexan của dịch chiết

10 Hình 3.10: Ảnh chụp sắc ký đồ phân đoạn Chloroform của dịch

11 Hình 3.11: Ảnh chụp sắc ký đồ phân đoạn Ethyl Acetat của dịch

chiết cây Cần tây với hệ dung môi I, II, VIII, IX 47

12 Hình 3.12: Ảnh chụp sắc ký đồ tủa dịch chiết cồn của dịch chiết

ĐẶT VẤN ĐỀ

Việt Nam là một trong những nước thuộc vùng khí hậu nhiệt đới, gió mùa

Vì vậy, nước ta có một thảm thực vật vô cùng phong phú và có nhiều tiềm năng về cây thuốc Theo thống kê sơ bộ của Viện dược liệu, nước ta có khoảng 14.000 loài

thực vật, nấm và tảo, trong đó có gần 4.000 cây thuốc Bên cạnh đó, nhân dân ta có truyền thống lâu đời sử dụng cây cỏ làm thuốc chữa bệnh Theo thời gian, kho tàng kinh nghiệm sử dụng ấy ngày càng lớn và hoàn thiện hơn Ý thức được thế mạnh

đó, trong “Chính sách quốc gia về Dược giai đoạn 2011-2020, tầm nhìn 2030 ”,

Đảng và chính phủ đặc biệt chú trọng tới việc quy hoạch, bảo tồn cũng như nghiên

cứu và phát triển các dược liệu

Cây Cần tây có tên khoa học Apium graveolen L., thuộc họ Cần (Apiaceae),

có nguồn gốc từ châu Âu, di thực vào Việt Nam và được trồng rộng rãi ở nhiều nơi

Cần tây được dùng chủ yếu dưới dạng rau ăn và gia vị Trong y học cổ truyền, Cần tây được biết đến với rất nhiều tác dụng chữa bệnh Ở Trung Quốc, Cần tây dùng làm thuốc giải nhiệt, giảm ho, giúp tiêu hóa, lợi tiểu và hạ huyết áp [22] Ở Ấn Độ, nước sắc quả Cần tây là thuốc trị thấp khớp [22] Tinh dầu Cần tây dùng làm thuốc

chống co thắt và kích thích thần kinh, trị viêm khớp dạng thấp và nhiễm khuẩn ruột [ 22]….Còn ở Việt Nam, nước sắc Cần tây được sử dụng để chữa cao huyết áp,

chữa phong thấp, bí tiểu tiện, an thần và tiểu đường [6], [7], [13], [18] Gần đây có nhiều nghiên cứu đã chứng minh được tác dụng hạ huyết áp[12], [20], [21], [35], [43]; hạ mỡ máu [44], [45]; kháng khuẩn [11], [12], [33], [48]; chống viêm của Cần tây [36]….Với rất nhiều công dụng hữu ích, cây Cần tây ngày càng được quan tâm

hơn và đã được tiến hành một số nghiên cứu Hướng tới mục đích tạo cơ sở dữ liệu

về thực vật, hóa học nhằm từng bước xây dựng các chỉ tiêu kiểm nghiệm dược liệu

và định hướng cho các nghiên cứu tiếp theo về thành phần hóa học và tác dụng sinh

học chúng tôi thực hiện đề tài : “Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa

học bộ phận trên mặt đất của mẫu Cần tây thu hái ở Nam Định” với những mục tiêu sau :

1 Nghiên c ứu đặc điểm thực vật của cây Cần tây

2 Nghiên c ứu thành phần hóa học của bộ phận trên mặt đất cây Cần tây

Chương I: TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật

1.1.1 Vị trí phân loại của chi Apium L

Theo hệ thống phân loại Takhtajan (1987) [3], [7], chi Apium L có vị trí

phân loại như sau :

1.1.2 Đặc điểm thực vật và phân bố của chi Apium L

Theo tài liệu [39], chi Apium L được mô tả như sau:

Cây thảo, sống hàng năm, hoặc 2 năm Thân mọc thẳng, nhẵn, có nhiều rãnh nông chạy dọc thân Lá có cuống và có bẹ lá, phiến lá hình lông chim xẻ một đến ba

lần Tán hoa kép, mềm và nhỏ, cuống hoa thường ngắn hoặc không phát triển đầy

đủ, lá bắc và lá bắc con tiêu biến, mỗi tán hoa rất ít hoa Tràng hoa có màu trắng

hoặc vàng xanh, hình trứng hoặc gần tròn, đỉnh cánh hoa hẹp, cụp vào trong Đài hoa tiêu giảm, đế hoa hình nón tù, vòi nhụy ngắn, thẳng đứng Quả hình cầu hoặc hình elip, tròn 2 đỉnh đầu, mặt bên hơi dẹt Lá noãn gần như tròn ở mặt cắt ngang,

bề mặt tiếp giáp giữa các lá noãn khít chặt, nhẵn, gồm 5 gân gồ lên, và nhọn, có 1 ống chứa tinh dầu trong mỗi rãnh và có 2 ống trong mỗi phần tiếp giáp giữa các lá noãn Bề mặt quả nhẵn Cuống lá noãn chắc, liền hoặc nứt đôi ở đỉnh

Trên thế giới, chi Apium L có khoảng 40 loài, phân bố chủ yếu ở vùng ôn đới

ấm và vùng núi cao nhiệt đới Ở Việt Nam, chi Apium L chỉ có một loài Apium

graveolens L., là cây nhập di thực [22]

1.1.3 Đặc điểm thực vật và phân bố loài Apium graveolens L

Cây thảo, cao 15-150cm, có mùi thơm, sống 1-2 năm Thân mọc thẳng đứng,

nhẵn, có nhiều rãnh dọc, phân nhánh nhiều Lá hình thuôn hoặc hình trứng ngược, dài 7-18cm, rộng 3,5-8cm, chia làm 3 thùy hoặc xẻ 3, thùy cuối có hình thoi, kích thước 1.2–2.5 × 0.8–2.5cm, có răng cưa hoặc có khía tai bèo Lá phía trên có cuống

ngắn, phiến lá hình tam giác rộng, xẻ sâu 3 thùy, thùy cuối có hình trứng Lá ở gốc

có cuống, bẹ to rộng, có nhiều sóng, hình tam giác – thuôn hoặc dạng 5 cạnh có gốc

cụt, xẻ 3-5 thùy hình tam giác, đầu tù, mép khía răng to, không lông Cụm hoa tán

mọc đối diện với lá, kích thước 1,5-4,0cm, gồm nhiều tán dài, ngắn không đều, các tán ở đầu có cuống dài hơn các tán bên trong và có kích thước 4-15mm Tán kép mang 8-12 tán, tán hoa có 7-25 hoa kích thước 6-9mm theo chiều ngang Hoa phía ngoài có 3-8 (-16) cánh hoa mảnh, kích thước 0,5-2,5cm [39] Hoa nhỏ màu trắng

Trên thế giới, loài Apium graveolens L bắt nguồn từ Châu Á và châu Âu, được

du nhập và trồng rộng rãi ở khắp nơi trên thế giới Loài Apium graovelens L thích

hợp và phân bố nhiều ở vùng khí hậu ôn đới [39]

Ở Việt Nam, loài A.graveolens L thường gọi là cây Cần tây Cây mới di thực

vào nước ta và được trồng rộng rãi ở nhiều nơi để làm rau ăn [15]

1.1.4 Đặc điểm thực vật và phân bố một số thứ của loài Apium graveolens L

Loài Apium graveolens L có 3 thứ sau:

- A graveolens L var secalinum Alef (Cần tây cho lá): Cây có cuống mảnh, màu xanh, lá phân thùy nông, rất thơm Cây được trồng nhiều ở Trung Quốc, Việt Nam và các nước Đông Nam Á khác Cây được trồng ở vùng nhiệt đới, nhưng thường vào vụ đông- xuân [22]

- A graveolens L var dulce (Miller) Pers (Cần tây cho cuống): Cây cho nhiều lá, cuống mập thường mọc thẳng áp sát vào nhau tạo thành bó, phiến lá xẻ thùy sâu, mép có răng cưa nhỏ, thơm Nhóm giống này được trồng nhiều ở vùng ôn đới ấm của châu Âu hay châu Á (Tây Liên bang Nga, Ucraina ) [22]

- A graveolens L var rapaceum (Miller) Gaudin (Cần tây cho củ) : Phần gốc phình thành củ (thân rễ), cuống lá mảnh, ngắn Loại này chủ yếu được trồng ở châu

1.2 Thành ph ần hóa học

1.2.1 Tinh d ầu

Toàn cây Cần tây có tinh dầu Hàm lượng tinh dầu thuộc các bộ phận của cây được trình bày ở bảng 1.1

B ảng 1.1: Hàm lượng tinh dầu trong các bộ phận của cây Cần tây

 Thành ph ần hóa học của tinh dầu Cần tây

Toàn cây Cần tây có chứa 0.1% tinh dầu trong đó thành phần chính là isobutyliden-3α,4-dihydrophthalid; 3-iso validin-3α,4 dihydrophthalid; 3-isobutidin phthalid; 3-isovaliden phthalid; cis-3-hexen-1-yl pyruvat; α-limonen; myrcen; anhydrid sedanonic, neral [22]

Thành phần chính của tinh dầu thân lá Cần tây: limonen (31,48%), myrcen (31,08%), cis – oximen (16%), β- selinen (3,43%), β-caryophylen (2,47%) và γ – tecpinen (2,65%) [11]

B ảng 1.2 : Thành phần hóa học của tinh dầu Cần tây STT Tên ch ất B ộ phận Hàm lượng (%) Công th ức cấu tạo TLTK

2 Sedanonic

4 Butyliden

5 1,5,8 –p-

8 Miristicin Toàn cây 0.08-0.24 [16]

B ảng 1.3: Các hợp chất flavonoid có trong cây Cần tây STT Tên ch ất B ộ phận Công th ức hóa học TLTK

quả

[22], [36] [46]

2 Apigravin Toàn cây [27]

4

Bergaptene (5-methoxy psoralen)

Thân lá,

quả

[11] [22]

1.2.4 M ột số chất khác

B ảng1.5: Các hợp chất khác phân lập từ cây cần tây

Acid hữu cơ

5-p-trans-coumaroylquinic acid Toàn cây [47]

Đường

1.3 Tác d ụng sinh học

1.3.1 Tác d ụng hạ huyết áp

Dịch chiết phần trên mặt đất (thân, lá) và rễ có tác dụng lợi tiểu trên chuột

cống trắng với liều 1ml/100mg thể trọng Dịch chiết của dược liệu với liều 10g/kg

có tác dụng hạ huyết áp trên mèo [20],[21]

Dung dịch Flavonoid toàn phần 10% từ thân lá Cần tây với liều 4mg/ml có tác

dụng hạ huyết áp trên chó 90 phút sau khi uống [12]

Hoạt chất 3-n-butylphthalid được phân lập từ Cần tây có tác dụng hạ huyết áp trên chuột tăng huyết áp tự nhiên khi tiêm phúc mạc 13 ngày liên tiếp ở 2 mức liều

2.0mg và 4.0mg/ngày Còn ở mức liều 0,5mg/ngày cho tác dụng hạ uyết áp thoáng qua vào ngày thứ 12 Việc xuất hiện tác dụng này có thể là do sự phong tỏa kênh

Ca2+hoặc thông qua điện áp hoạt động và thụ thể trên kênh Ca2+

[43]

1.3.2 Tác d ụng hạ lipid máu

Dịch chiết nước Cần tây có tác dụng giảm đáng kể Cholesterol huyết thanh (TC), cholesterol tỷ trọng thâp (LDL-C), và Triglycerid (TG) Phân tích dung dịch nước Cần tây bằng sắc ký lớp mỏng (TLC) với hai hệ thống dung môi khác nhau cho thấy dịch chiết không chứa 3-n-butylphthalide (BuPh) [45]

Dịch chiết nước Cần tây đã được chỉ ra giúp giảm đáng kể lượng cholesterol toàn phần khi cho chuột uống dịch chiết trong suốt 8 tuần liên tục Ngoài ra sử dụng

một phần nhỏ phân đoạn butanol và phân đoạn nước chiết xuất Cần tây với 7 ngày tiêm phúc mạc có hiệu quả giảm Cholesterol toàn phần trong huyết thanh và lượng Cholesterol HDL trên chuột Rico trưởng thành [48]

Flavonoid toàn phần của thân, lá Cần tây có tác dụng hạ Cholesterol toàn phần

với liều 0,3g/kg chuột [2]

1.3.3 Tác d ụng chống viêm

Dịch chiết nước từ thân cây Cần tây cho thấy có tác dụng đáng kể trong việc

chống viêm trên tai chuột và ức chế Carragenan tác nhân gây phù nề [29].[41]

Dịch chiết Ethanol/nước (1:1) của lá Cần tây (Apium graveolens var dulce) ức

chế enzym tổng hợp các chất trung gian gây viêm Nitric Oxid (Inducible nitric oxide synthase-iNOS) [36]

1.3.4.Tác d ụng giảm đau

Cho chuột dùng các thuốc giảm đau, gây ngủ như: Paracetamol và Aminopyrin

với nước ép Cần tây cho thấy tăng tác dụng gây ngủ của các thuốc trên do ức chế enzym chuyển hóa Cytocrom P450 [32]

Cho những bệnh nhân bị viêm xương khớp, loãng xương hoặc gút có thể bị đau

từng cơn hoặc liên tục sử dụng dịch chiết Cần tây 34mg, 2 lần /ngày Sau 3 tuần,

hiệu quả giảm đau trung bình đạt 68% Đa số các bệnh nhân đạt hiệu quả diều trị tối

đa sau 6 tuần [38]

1.3.5 Tác d ụng giải độc, bảo vệ gan

Dịch chiết nước từ rễ, lá và quả Cần tây có tác dụng làm giảm độc tính của acrylamid Nghiên cứu thực hiện trên 6 lô chuột: lô chứng, lô trắng và các lô sử dụng dịch chiết Cần tây Kết quả được đánh giá qua các thông số hóa sinh: thông số hủy tế bào gan (ASAT, ALAT, lactate dehydrogenase), thông số tổng hợp protein (cholinesterase, protein toàn phần, albumins) Kết quả cho thấy có khả năng giải độc của dịch chiết Cần tây [28]

1.3.6 Tác d ụng chống loét dạ dày

D ịch chiết Cần tây với liều 250mg/kg và 500mg/kg có tác dụng bảo vệ niêm

mạc dạ dày và ức chế sự tiết acid ở dạ dày chuột, có thể thông qua khả năng chống oxy hóa của nó Không có triệu chứng có hại hay gây độc hoặc tử vong trong khoảng thời gian là 14 ngày [25]

1.3.7 Tác d ụng kháng khuẩn, kháng nấm

Các dịch chiết: methanol, chloroform, n-hexan, etyl acetate, tinh dầu thân lá,

tinh dầu quả có tính kháng khuẩn với Gr(-) E.coli, P aeruginosa, Gr(+) B.subtillis,

S.aureus , nấm mốc Asp.niger, F.oxyporum và nấm men S.cererisiae và không có tính kháng khuẩn với nấm men C.albicans [11]

Dịch chiết Flavonoid toàn phần ở nồng độ 1-5mg/ml có tác dụng ức chế sự phát triển của vi nấm [12],[[33]

1.3.8 Tác d ụng chống kết tập tiểu cầu

Apigenin trong Cần tây có tác dụng ức chế sự kết tập tiểu cầu trong máu thỏ gây ra bởi collagen, ADP, acid arachidonic, và các nhân tố hoạt động của tiểu cầu nhưng không tác dụng trong trường hợp đông máu gây ra bởi thrombin hay ionophore [42]

1.4 Công d ụng của phần trên mặt đất

* Trong Y- Dược

- Nước ép từ lá Cần tây có tác dụng bổ dưỡng [1], [20], chữa loét miệng, viêm

họng, khản tiếng [22]

- Lá Cần tây giã đắp vết thương, mụn nhọt [22]

- Nước sắc rau Cần tây, điều trị tăng huyết áp, lợi tiểu, ngâm chân chữa nứt nẻ,

gội đầu để làm bền chân tóc [22]

- Theo y học cổ truyền ở một số nước trên thế giới: Cần tây làm thuốc kích thích

tử cung khi đẻ ở Brazil, giải nhiệt, giảm ho, giúp tiêu hóa, lợi tiểu và hạ huyết áp ở Trung Quốc, lợi tiểu và điều kinh ở Philippin [22]

- Cần tây dùng uống chữa suy nhược cơ thể [3], [8] do làm việc quá sức, trị suy thượng thận, kém tiêu hóa, trạng thái thần kinh dễ bị kích thích, mất chất khoáng (ho lao), tràng nhạc, sốt gián cách, thống phong, sỏi niệu đạo, sỏi thận Dùng ngoài

trị vết thương, mụn nhọt, nứt nẻ [6], [7], [8]

- Tinh dầu Cần tây dùng trong các bệnh phù thũng, có tác dụng an thần, giảm đau, chống co thắt, sử dụng trong các trường hợp đau bàng quang, đau do viêm khớp [23]

* Trong thực phẩm

Cần tây được dùng phổ biến làm rau ăn, hương liệu trong chế biến ( món tráng miệng có sữa lạnh, kẹo bánh, thịt khô, đồ ăn nhẹ, súp, nước sốt [3], [15], [24]

* Trong kỹ nghệ hương liệu

Tinh dầu Cần tây làm hương liệu trong xà phòng, chất tẩy rửa, kem thuốc hoặc nước hoa [24]

Chương II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên v ật liệu, thiết bị

2.1.1 Nguyên li ệu

- Cần tây được thu hái tại xã Hải Nam - Hải Hậu - Nam Định

- Thời gian thu mẫu: Tháng 11 năm 2012

- Xử lý mẫu: Cây Cần tây rửa sạch, cắt bỏ rễ, sau đó cắt thành những đoạn có độ dài

từ 5- 7 cm Dược liệu được chia làm 2 phần

+ Phần 1: Dược liệu tươi để cất tinh dầu

+ Phần 2 : Dược liệu được phơi khô trong bóng râm 1 tuần, sau đó được đem

sấy trong tủ sấy tại bộ môn Dược Liệu ở nhiệt độ 60ºC trong 4h Dược liệu Cần tây sau sấy được bảo quản trong túi nilon kín, để nơi khô ráo, thoáng mát

- Mẫu cây có hoa được ép tiêu bản, lưu giữ tại phòng Tiêu bản bộ môn Thực vật với

số hiệu tiêu bản là : HNIP/17860/13

2.1.2 Hóa ch ất và dụng cụ

Hóa chất dùng cho nghiên cứu đạt tiêu chuẩn phân tích, gồm có:

- Các dung môi hữu cơ: CHCl3, EtOAc, cồn tuyệt đối, toluen, acid formic,

aceton,amoniac, nước cất, acid acetic…

- Hóa chất vô cơ: NaOH, AlCl3, HCl, FeCl3 …

- Các thuốc thử: Mayer, Dragendorff,…

2.1.3 Thi ết bị nghiên cứu

- Cân phân tích Mettler Toledo AB204-S9 (Thụy Sĩ)

- Máy sắc ký khí kết hợp khối phổ AGILENT TECHNOLOGIES 7890A

- Máy cất quay Buchi Rotavapor R-200 (Đức)

- Máy đo độ ẩm SATORIUS

- Tủ sấy Memmert (Đức)

- Kính hiển vi Leica (Đức)

- Máy cắt vi phẫu cầm tay

- Bộ dụng cụ định lượng tinh dầu cải tiến

2.2 N ội dung nghiên cứu

2.2.1 Nghiên c ứu đặc điểm thực vật của cây Cần tây

- Mô tả đặc điểm hình thái và thẩm định tên khoa học của mẫu nghiên cứu

- Mô tả đặc điểm vi phẫn thân, lá, rễ cây Cần tây thu hái ở Nam Định

2.2.2 Nghiên c ứu thành phần hóa học của bộ phận trên mặt đất cây Cần tây

- Nghiên cứu thành phần tinh dầu

- Định tính các nhóm chất bằng phản ứng hóa học

- Xác định các chất chiết được bằng ethanol

- Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ bộ phận trên mặt đất cây Cần tây

- Định tính các phân đoạn dịch chiết bằng phản ứng hóa học và SKLM

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3 1 Phương pháp nghiên cứu về thực vật

- Mô tả đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu, đối chiếu với bản mô tả loài ở

“Thực vật chí Trung Quốc” [39] để xác định tên khoa học

- Mẫu thân, lá, rễ Cần tây được cắt vi phẫu bằng máy cắt cầm tay, tẩy bằng nước Javen, nhuộm vi phẫu theo phương pháp nhuộm kép

- Mô tả và chụp ảnh đặc điểm vi phẫu bằng máy ảnh Canon

- Xử lý ảnh bằng phần mềm Microsoft office access 2007

2.3.2 Nghiên c ứu về hóa học

- Định lượng tinh dầu có trong Cần tây bằng bộ dụng cụ định lượng tinh dầu

cải tiến với ống hứng tinh dầu nhẹ hơn nước

- Nghiên cứu thành phần tinh dầu Cần Tây bằng phương pháp sắc ký khí kết

hợp khối phổ (GC/MS) với sự hỗ trợ các phần mềm INSTRUMENT I và DATA ANALYSIS Xác định hàm lượng tương đối các thành phần của tinh

dầu dựa trên diện tích pic Nhận dạng các thành phần bằng thời gian lưu và đối chiếu thư viện khối phổ FLAVOR 2 và NIST 08

- Xác định các chất chiết được bằng ethanol của bộ phận trên mặt đất cây Cần tây theo phụ lục 12.10 DĐVN IV [5]

- Định tính các nhóm chất có trong cây Cần tây bằng phản ứng hóa học theo phương pháp ghi trong tài liệu Thực tập dược liệu [4]

- Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết

Dược liệu được tán nhỏ và ngâm với cồn 80 ºC ở nhiệt độ phòng Cất thu

hồi cồn dưới áp suất giảm thu được dịch chiết đặc Thêm nước nóng vào, sau đó lắc lần lượt với các dung môi theo thứ tự tăng dần độ phân cực: n- hexan, Chloroform, Ethyl Acetat thu được các phân đoạn tương ứng là: n- hexan, Chlorofom, Ethyl Acetat Các phân đoạn dịch chiết thu được đem cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm thu được các cắn các phân đoạn tương

ứng Cắn các phân đoạn kí hiệu lần lượt : A,B,C,N (phân đoạn nước)

- Định tính các nhóm chất chính trong các phân đoạn dịch chiết bằng phản ứng hóa học và bằng SKLM

Chương III: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Nghiên c ứu về thực vật

3.1.1 Đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu

Cây thảo, mọc thẳng đứng, cao khoảng 1-1,5m, có mùi thơm

Thân rỗng, phân nhánh nhiều, có nhiều gióng và mấu, có nhiều rãnh nông

chạy dọc thân

Lá ba cạnh, mọc so le Lá kép lông chim, có 3-5 lá chét, kích thước lá chét dài 6-9cm, rộng 5-6cm, phiến lá xẻ làm 3 thùy, thùy cuối có hình thoi, có kích thước 2-3cm×1,5-2cm, mép lá có răng cưa Lá ở ngọn cuống ngắn hoặc không cuống có kích thước 5-6cm×5cm Lá ở gốc có bẹ to, cuống lá có màng bao

Cụm hoa tán, mọc đối diện với lá, kích thước 4-6cm, gồm nhiều tán có cuống dài ngắn không đều, tán ở ngoài có cuống dài hơn các tán phía trong Mỗi tán kép

gồm 3 tán đơn và nhiều hoa mọc riêng lẻ Mỗi tán đơn rộng 3- 4mm, khoảng 15-20 hoa Hoa nhỏ, màu trắng, rộng 1-1,5mm Hoa đều lưỡng tính, mẫu 5, 5 cánh hoa, 5

nhị xếp xen kẽ với cánh hoa Đài hoa tiêu biến Tràng hoa màu trắng, bị uốn cong

Nhị hoa có chỉ nhị dài, bao phấn màu trắng gồm 2 ngăn, chỉ nhị đính lưng Nhụy hoa gồm 2 nhụy rời nhau, 2 lá noãn liền tạo bầu dưới Mỗi ô là 1 bầu và đĩa tuyến

mật ở đỉnh bầu

Công thức hoa: *♀ K 5 C 5 A 5 G (2)

Quả đôi, hơi dẹt, màu nâu, có gân chạy dọc quả, kích thước quả rộng 0,5mm

và dài 0,5-1 mm

3.1.2 Th ẩm định tên khoa học của mẫu nghiên cứu

Căn cứ vào đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu, đối chiếu với bản mô tả loài ở “Thực vật chí Trung Quốc” [39], mẫu Cần tây nghiên cứu đã được xác định tên khoa học là Apium graveolens L., họ Cần (Apiaceae)

Ảnh chụp các đặc điểm của mẫu Cần tây nghiên cứu được trình bày ở các hình 3.1

và hình 3.2

Hình 3.1 : Ảnh chụp cây Cần tây

Hình 3.2: Ảnh chụp các đặc điểm cây Cần tây

Ghi chú 1 : C ụm hoa kép 5 : Nh ị hoa

2 : C ụm hoa đơn 6 : Nh ụy hoa

3.1.3 Đặc điểm vi phẫu thân Cần tây

Mặt cắt thân hình vòm, từ ngoài vào trong có : biểu bì trên và dưới gồm các tế bào tròn xếp đều đặn (1), (2) Ở các góc có các mô dày góc là các tế bào thành dày,

xếp xít nhau và bắt màu đỏ tươi (4) Mô mềm gồm các tế bào hình tròn, thành mỏng (5) Vào trong là các bó libe gỗ hình tam giác, libe phía ngoài (2), gỗ phía trong bắt màu xanh (3) Ống tiết tinh dầu nằm rải rác trong mô mềm và các bó libe (a), (b) Ảnh chụp vi phẫu thân Cần tây dưới kính hiển vi được trình bày ở hình 3.3

3.1.4 Đặc điểm vi phẫu lá Cần Tây

Ph ần gân lá: Gân phía trên lồi nhọn, gân phía dưới lồi nhiều hơn Nhìn dưới

kính hiển vi, từ ngoài vào trong có: Biểu bì trên và dưới là các tế bào hình tròn xếp đều đặn (1), (5) Ở góc có các mô dày, gồm các tế bào hình tròn , thành dày, xếp xít

1: Bi ểu bì trên 2: Lile

3: G ỗ 4: Mô dày góc

5: Mô m ềm 6: Bi ểu bì dưới

a : Ống tiết tinh dầu

nhau bắt màu đỏ tươi (6) Dưới lớp biểu bì là lớp mô mềm, gồm các tế bào hình tròn, thành mỏng (2) Ở chính giữa là bó libe gỗ hình tam giác, có libe phía ngoài (4), gỗ phía trong (3) Các ống tiết tinh dầu nằm rải rác trong các mô mềm (b) Ảnh chụp vi phẫu phần gân lá Cần tây dưới kính hiển vi được trình bày ở hình 3.4

Ph ần phiến lá: Phần phiến lá ngắn và nhỏ Nhìn dưới kính hiển vi: Biểu bì

trên và dưới là một hàng tế bào nhỏ hình chữ nhật (1), (5) Dưới biểu bì là lớp mô

mềm, gồm 7-8 lớp tế bào (2) Chính giữa của phiến lá là bó libe gỗ hình tam giác, có libe phía ngoài, gỗ phía trong, bắt màu xanh (3) Các ống tiết tinh dầu nằm sát các

bó libe gỗ (4)

Hình 3.4 : Ảnh chụp vi

ph ẫu phần gân lá Cần tây dưới kính hiển vi Ghi chú

1: Bi ểu bì trên 2: Mô m ềm

3 : G ỗ 4: Libe

Ảnh chụp vi phẫu phần phiến lá Cần tây dưới kính hiển vi được trình bày ở hình 3.5

3.1.5 Đặc điểm vi phẫu rễ Cần tây

Mặt cắt rễ hình gần tròn Từ ngoài vào trong có: Lớp bần gồm những tế bào hình chữ nhật xếp thành các vòng đồng tâm và dãy xuyên tâm (1) Mô mềm vỏ cấu

tạo bởi các tế bào thành mỏng, các tế bào ở phía ngoài thường bị ép bẹp (2) Libe phát triển mạnh, chiếm phần lớn rễ (3) Trong cùng là các mạch gỗ lớn bắt màu xanh (4)

3.2 Nghiên c ứu về hóa học

3.2.1 Nghiên c ứu tinh dầu

1: Bi ểu bì trên

2 : Mô m ềm

3 : Libe- g ỗ 4: Ống tiết tinh dầu 5: Bi ểu bì dưới

3.2 Nghiên c ứu thành phần hóa học của bộ phận trên mặt đất cây Cần tây 3.2.1 Nghiên c ứu thành phần tinh dầu

3.2.1.1 Định lượng tinh dầu bộ phận trên mặt đất của cây Cần tây

• Chuẩn bị: Dược liệu tươi đem rửa sạch, cắt bỏ gốc và cắt thành những đoạn

nhỏ dài 5-7cm Đo độ ẩm của các mẫu dược liệu bằng máy đo độ ẩm SATORIUS

• Phương pháp : Cất kéo hơi nước

• Dụng cụ : Bộ định lượng tinh dầu cải tiến

• Thời gian cất : 8 h

• Hàm lượng tinh dầu được tính trên dược liệu khô tuyệt đối theo công thức

%X=

Trong đó X: Hàm lượng % tinh dầu

a: Thể tích tinh dầu đọc được sau khi cất (2 ml) b: Khối lượng dược liệu (9,995kg)

h: Hàm ẩm của dược liệu

3.2.1.2 Nghiên c ứu thành phần tinh dầu Cần tây bằng phương pháp GC/MS

Tiến hành trên máy sắc ký khí khối phổ Agilent Technologies 7693 với các điều kiện:

+ Cột sắc ký 1909 1 S – 433 HP – 5MS kích thước 30m × 250µm × 0,25 µm + Hệ thống tiêm mẫu tự động

+ Detector : Khối phổ Agilent Technologies 5975C

+ Khí mang : Heli

- Chuẩn bị mẫu: Tinh dầu cây Cần tây được pha loãng ở nồng độ 0,1% trong Chloroform (MERCK) rồi cho vào chai thủy tinh 2ml có nắp chuyên dụng, lắc đều, đậy nắp, đặt vào vị trí chứa mẫu trên khay của hệ thống tiêm mẫu tự động

- Khởi động thiết bị:

+ Mở bình khí Heli: mở van tổng và van bi

+ Bật công tắc điện khởi động GC

+ Bật máy tính

+ Khởi động MS

- Thiết lập phương pháp phân tích:Khởi động phần mềm INSTRUMENT I và cài đặt các thông số:

+ Injector: Thể tích tiêm mẫu: 1µm

Trước khi tiêm mẫu: Rửa kim 3 lần với dung môi B

Rửa kim 3 lần với dung dịch mẫu

Sau khi tiêm mẫu: Rửa kim 3 lần với dung môi A

Rửa kim 3 lần với dung môi B

+ Inlet: Khí mang Heli

Mode: Spilt (tiêm mẫu chia dòng)

Nhiệt độ: 250 ˚C

Áp suất: 8,2317 psi

Tổng dòng: 104 ml/mim

Tỷ lệ chia dòng: 100:1

+ Oven: Nhiệt độ ban đầu 60˚C trong 2 phút, sau đó tăng lên 220˚C với tốc

độ 6°C/min, giữ trong 2 phút Sau khi ngừng phân tích, giữ nhiệt độ 250˚C trong 1 phút Tổng thời gian phân tích mẫu 35 phút

+ Colum: Nhiệt độ: 60˚C

Áp suất: 8,2317 psi

Chế độ chạy đẳng dòng: 1ml/min

+ General Information:

Tune File: Stune u

Acquistion mole: Scan

Chờ GC đạt tất cả các điều kiện cài đặt

Chọn Sequence\ Edit Sequence

Gọi phương pháp đã thiết lập, bấm OK

Chọn Run Sequence

Khai báo các dữ liệu về mẫu phân tích vào bảng, bấm OK để bắt đầu phân tích mẫu

- Xử lý kết quả: Sử dụng phần mềm DATA ANALYSIS

Đối chiếu khối phổ của các pic ghi nhận được với thư viện phổ khối của các pic ghi nhận được với thư viện FLAVOR 2 và NIST 08 để nhận dạng các thành

phần của tinh dầu Hàm lượng % tương đối của các thành phần được tính dựa trên

diện tích pic

- Kết quả: Thành phần hóa học của bộ phận trên mặt đất cây Cần tây thu hái ở Nam Định được trình bày ở bảng 3.1