Xây dựng một số tiêu chuẩn định tính và đánh giá độ độc tính cấp của cao đặc xấu hổ

57 447 0
Xây dựng một số tiêu chuẩn định tính và đánh giá độ độc tính cấp của cao đặc xấu hổ

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Xấu hổ (Mimosa pudica L.) đƣợc phân bố ở nhiều vùng trên nƣớc ta và đƣợc sử dụng nhiều trong YHCT Việt Nam, chủ yếu với tác dụng an thần. Một số nghiên cứu gần đây cho thấy, bên cạnh tác dụng an thần, một hƣớng ứng dụng khác có thể khai thác là tác dụng theo hƣớng điều trị hen phế quản của Xấu hổ. Các nghiên cứu ban đầu cho thấy dịch chiết nƣớc và dịch chiết cồn Xấu hổ với liều 5,6 gkg thể trọng chuột có tác dụng chống co thắt phế quản trên mô hình gây co thắt cơ trơn phế quản chuột lang bằng histamin. Xấu hổ còn có tác dụng chống viêm, làm giảm thâm nhiễm rõ rệt các tế bào viêm vào trong tổ chức phổi. Tuy nhiên việc sử dụng dƣợc liệu vẫn theo phƣơng pháp sắc hãm truyền thống gây khó khăn và tâm lý ngại sử dụng. Việc có thể tạo ra một dạng bào chế phù hợp có thể giúp phát triển hơn việc sử dụng Xấu hổ trong điều trị bệnh. Dạng cao đặc có thể là một bƣớc trung gian cho một chế phẩm bào chế khác. Vì vậy, để đảm bảo chất lƣợng, an toàn và hiệu quả sử dụng, dạng cao đặc này cần đƣợc đánh giá độc tính và đƣợc tiêu chuẩn hóa. Do vậy, đề tài “Xây dựng một số tiêu chuẩn định tính và đánh giá độc tính cấp của cao đặc Xấu hổ” đƣợc thực hiện với 2 mục tiêu sau: 1. Chiết xuất và xây dựng một số tiêu chuẩn định tính cao đặc Xấu hổ. 2. Đánh giá độc tính cấp của cao đặc Xấu hổ.

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN QUANG CHẨN XÂY DỰNG MỘT SỐ TIÊU CHUẨN ĐỊNH TÍNH VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA CAO ĐẶC XẤU HỔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI - 2014 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN QUANG CHẨN XÂY DỰNG MỘT SỐ TIÊU CHUẨN ĐỊNH TÍNH VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA CAO ĐẶC XẤU HỔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Ngƣời hƣớng dẫn: 1. TS. Nguyễn Quỳnh Chi 2. TS. Phƣơng Thiện Thƣơng Nơi thực hiện: 1. Bộ môn Dƣợc liệu 2. Bộ môn Dƣợc lực HÀ NỘI - 2014 LỜI CẢM ƠN Khóa luận đƣợc hoàn thành tại phòng thí nghiệm Bộ môn Dƣợc liệu và Bộ môn Dƣợc lực - Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội. Trƣớc tiên, tôi xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới TS. Nguyễn Quỳnh Chi, TS. Phương Thiện Thương, ThS. Lê Thanh Bình những ngƣời thầy cô đã trực tiếp hƣớng dẫn, chỉ bảo, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực hiện khóa luận Tôi cũng xin đƣợc cảm ơn TS. Nguyễn Hoàng Anh, TS. Nguyễn Thùy Dương, thầy cô đã quan tâm, giúp đỡ tôi trong thời gian làm thực nghiệm tại bộ môn Dƣợc lực. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo, các anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dƣợc liệu và Bộ môn Dƣợc lực đã tạo điều kiện thuận lợi để tôi hoàn thành khóa luận. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến toàn thể thầy cô giáo và cán bộ trong trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội đã nhiệt tình chỉ bảo, giúp đỡ và mang lại cho tôi những kiến thức cùng kinh nghiệm quý báu trong suốt 5 năm học vừa qua. Tôi xin trân trọng cảm ơn ban giám hiệu, phòng đào tạo và các phòng ban khác trong trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội đã tạo mọi điều kiện thuận lợi để tôi hoàn thành tốt chƣơng trình học tại trƣờng. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lời cảm ơn và sự yêu thƣơng tới gia đình, bạn bè, những ngƣời đã luôn ở bên và là chỗ dựa tinh thần cho tôi những lúc khó khăn trong học tập cũng nhƣ trong cuộc sống. Hà Nội, ngày 07 tháng 05 năm 2014 Sinh viên Nguyễn Quang Chẩn MỤC LỤC TRANG BÌA PHỤ LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƢƠNG 1-TỔNG QUAN 2 1.1. Cây Xấu hổ (Mimosa pudica L.) 2 1.1.1. Đặc điểm thực vật, phân bố, sinh thái 2 1.1.2. Bộ phận dùng, thu hái, chế biến 3 1.1.3. Thành phần hóa học của cây Xấu hổ Mimosa pudica L. 3 1.1.4. Tác dụng dƣợc lý của Xấu hổ Mimosa pudica L. 6 1.1.5. Sử dụng loài Mimosa pudica L. trong YHCT 12 CHƢƠNG 2-ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1. Nguyên vật liệu và thiết bị 13 2.1.1. Nguyên vật liệu nghiên cứu 13 2.1.2. Các trang thiết bị nghiên cứu 14 2.2. Nội dung nghiên cứu 15 - Chiết xuất dạng cao đặc Xấu hổ 15 - Xây dựng tiêu chuẩn định tính bằng phản ứng hóa học và sắc ký lớp mỏng cao đặc Xấu hổ. 15 - Đánh giá độc tính cấp của cao đặc Xấu hổ 15 2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu 15 2.3.1. Chiết xuất dạng cao đặc Xấu hổ 15 2.3.2. Xây dựng tiêu chuẩn định tính bằng phản ứng hóa học và sắc ký lớp mỏng cao đặc Xấu hổ. 16 2.3.3. Đánh giá độc tính cấp của cao đặc Xấu hổ 17 CHƢƠNG 3-THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 19 3.1. Chiết xuất dạng cao đặc Xấu hổ 19 3.1.1. Chiết xuất 19 3.1.2. Xác định hàm ẩm và hàm lƣợng cao đặc thu đƣợc 19 3.2. Xây dựng tiêu chuẩn định tính bằng phản ứng hóa học và sắc ký lớp mỏng cao đặc Xấu hổ 20 3.2.1. Định tính các nhóm hợp chất trong cao đặc thu đƣợc bằng các phản ứng hóa học. 20 3.2.2. Định tính bằng sắc ký lớp mỏng 28 3.3. Kết quả đánh giá độc tính cấp của cao đặc Xấu hổ 34 3.4. Bàn luận 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT HMC-1 Human mast cell line-1 HPTLC High performance thin layer chromatography IC 50 Half maximal inhibitory concentration IgE Immunoglobulin E IL Interleukin LD 50 Lethal dose 50% MCP Monocyte chemotactic protein NP/PEG Natural product / Polyethylenglycol OVA Ovalbumin P/ƣ Phản ứng TT Thuốc thử UV Ultraviolet YHCT Y học cổ truyền DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 3.1 Hàm ẩm các mẫu dƣợc liệu. 19 3.2 Kết quả xác định hàm ẩm và hàm lƣợng cao đặc 3 mẫu dƣợc liệu. 20 3.3 Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ trong 3 mẫu cao đặc Xấu hổ bằng phản ứng hóa học. 27 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình Tên hình Trang 1.1 Công thức cấu tạo một số C - glycosyl flavonoid trong Xấu hổ 5 1.2 Công thức cấu tạo một số O - glycosyl flavonoid trong Xấu hổ 6 1.3 Công thức cấu tạo một số sterol trong Xấu hổ 6 2.1 Cây Xấu hổ (Mimosa pudica L.) 13 3.1 Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng 3 mẫu cao đặc Xấu hổ quan sát ở UV 254 nm (A), 366 nm (B) và sau khi hiện màu bằng thuốc thử vanillin - acid sulfuric (C) 29 3.2 Mô tả sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng cao đặc Xấu hổ sau khi hiện màu bằng thuốc thử vanillin - acid sulfuric (Hệ dung môi 1) 30 3.3 Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng 3 mẫu cao đặc Xấu hổ quan sát ở UV 254 nm (A), 366 nm (B); sau khi hiện màu bằng thuốc thử NP/PEG quan sát ở ánh sáng thƣờng (C) và quan sát ở UV 366 nm (D) 32 3.4 Mô tả sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng cao đặc Xấu hổ sau khi hiện màu bằng thuốc thử NP/PEG (Hệ dung môi 2) 33 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Xấu hổ (Mimosa pudica L.) đƣợc phân bố ở nhiều vùng trên nƣớc ta và đƣợc sử dụng nhiều trong YHCT Việt Nam, chủ yếu với tác dụng an thần. Một số nghiên cứu gần đây cho thấy, bên cạnh tác dụng an thần, một hƣớng ứng dụng khác có thể khai thác là tác dụng theo hƣớng điều trị hen phế quản của Xấu hổ. Các nghiên cứu ban đầu cho thấy dịch chiết nƣớc và dịch chiết cồn Xấu hổ với liều 5,6 g/kg thể trọng chuột có tác dụng chống co thắt phế quản trên mô hình gây co thắt cơ trơn phế quản chuột lang bằng histamin. Xấu hổ còn có tác dụng chống viêm, làm giảm thâm nhiễm rõ rệt các tế bào viêm vào trong tổ chức phổi. Tuy nhiên việc sử dụng dƣợc liệu vẫn theo phƣơng pháp sắc hãm truyền thống gây khó khăn và tâm lý ngại sử dụng. Việc có thể tạo ra một dạng bào chế phù hợp có thể giúp phát triển hơn việc sử dụng Xấu hổ trong điều trị bệnh. Dạng cao đặc có thể là một bƣớc trung gian cho một chế phẩm bào chế khác. Vì vậy, để đảm bảo chất lƣợng, an toàn và hiệu quả sử dụng, dạng cao đặc này cần đƣợc đánh giá độc tính và đƣợc tiêu chuẩn hóa. Do vậy, đề tài “Xây dựng một số tiêu chuẩn định tính và đánh giá độc tính cấp của cao đặc Xấu hổ” đƣợc thực hiện với 2 mục tiêu sau: 1. Chiết xuất và xây dựng một số tiêu chuẩn định tính cao đặc Xấu hổ. 2. Đánh giá độc tính cấp của cao đặc Xấu hổ. 2 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1. Cây Xấu hổ (Mimosa pudica L.) Xấu hổ còn có tên gọi khác ở Việt Nam là: cây trinh nữ, cây thẹn, hàm tu thảo, cây mắc cỡ [10]. Vị trí phân loại của cây Xấu hổ [5], [43] Giới: Thực vật (Plantae) Ngành: Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lớp: Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân lớp: Hoa Hồng (Rosidae) Bộ: Đậu (Fabales) Họ: Đậu (Fabaceae) Phân họ: Trinh nữ (Mimosoideae) Chi: Mimosa Loài: Mimosa pudica L. 1.1.1. Đặc điểm thực vật, phân bố, sinh thái Cây nhỏ, mọc hoang lòa xòa ở ven đƣờng cái, thân có gai hình móc. Lá 2 lần kép lông chim, nhƣng cuống phụ xếp nhƣ hình chân vịt; khẽ động vào lá cụp xuống. Cuống chung gầy, mang nhiều lông, dài 4cm, cuống phụ 2 đôi, có lông trắng cứng. Lá chét 15-20 đôi nhỏ, gần nhƣ không có cuống. Hoa màu tím đỏ, tụ thành hình đầu trái xoan. Quả giáp dài 2cm, rộng 3mm, tụ thành hình ngôi sao, ở phần giữa các hạt quả hẹp lại, có lông cứng ở mép. Hạt gần nhƣ hình trái xoan, dài 2mm, rộng 1,5mm [10]. Cụm hoa mọc ở kẽ lá gồm rất nhiều hoa nhỏ xếp thành đầu tròn, màu tím hồng; đài nhỏ hình đấu; tràng 4 cánh dính nhau ở nửa dƣới; nhị 4, rất mảnh, bầu 4 noãn. Mùa hoa quả: tháng 6-8. [...]... - hàm ẩm của dƣợc liệu (%) 2.3.2 Xây dựng tiêu chuẩn định tính bằng phản ứng hóa học và sắc ký lớp mỏng cao đặc Xấu hổ 2.3.2.1 Định tính bằng phản ứng hóa học Xác định sự có mặt của các nhóm chất trong 3 mẫu cao đặc Xấu hổ theo phƣơng pháp ghi trong tài liệu [4] Từ kết quả định tính đề xuất một số tiêu chuẩn định tính cao đặc Xấu hổ bằng phản ứng hóa học 2.3.2.2 Định tính bằng sắc ký lớp mỏng Lựa chọn... lƣợng cao đặc thu đƣợc (gam) H - hàm ẩm cao đặc thu đƣợc (%) X - hàm lƣợng cao đặc thu đƣợc tính theo dƣợc liệu khô tuyệt đối (%) Nhận xét: Hàm lƣợng cao đặc thu đƣợc của 3 mẫu khác nhau Mẫu Hà Nội có hàm lƣợng cao nhất, mẫu Phú Thọ thấp nhất Hàm ẩm của các mẫu cao đặc Xấu hổ dao động từ 9% đến 15% 3.2 Xây dựng tiêu chuẩn định tính bằng phản ứng hóa học và sắc ký lớp mỏng cao đặc Xấu hổ 3.2.1 Định tính. .. xác định hàm ẩm SARTORIUS - Bếp đun cách thủy, bếp điện - Hệ thống máy chấm sắc ký tự động Linomat V - Buồng chụp sắc ký gắn máy ảnh Camag reprostar 3 - Máy ảnh Canon ISUS 115 - Máy vi tính với phần mềm VideoScan 1.01 2.2 Nội dung nghiên cứu - Chiết xuất dạng cao đặc Xấu hổ - Xây dựng tiêu chuẩn định tính bằng phản ứng hóa học và sắc ký lớp mỏng cao đặc Xấu hổ - Đánh giá độc tính cấp của cao đặc Xấu hổ. .. dịch đậm đặc Tiếp tục đem bay hơi cách thủy thu đƣợc 68,51 g cao đặc (hàm ẩm 15,99 %) * Chuẩn bị 3 mẫu thử: - Dịch thuốc 1: cao đặc (1ml cao đặc tƣơng đƣơng 1,23 g cao đặc) - Dịch thuốc 2: pha 20 g cao đặc thành 18 ml bằng nƣớc nóng (nồng độ 1,11 g cao đặc/ ml) - Dịch thuốc 3: pha loãng 5ml dịch thuốc 2 thành 10 ml bằng nƣớc nóng (nồng độ 0,56 g cao đặc/ ml) 2.3.3.2 Phương pháp xác định độc tính cấp Phƣơng... H2SO4 đậm đặc - - - 13 Sterol + P/ƣ Liebermann + + + Kết quả định tính bằng các phản ứng hóa học trên cho thấy trong cả 3 mẫu cao đặc Xấu hổ đều có mặt các nhóm chất: sterol, flavonoid, alcaloid, saponin, tanin, đƣờng khử, acid hữu cơ Trong đó các phản ứng định tính sterol và flavonoid cho kết quả dƣơng tính rõ nhất Từ kết quả các phản ứng định tính, dự kiến 1 số tiêu chuẩn định tính cao đặc Xấu hổ nhƣ... đến dịch đậm đặc Đổ dịch đậm đặc thu đƣợc vào cốc có mỏ, tiếp tục đem bay hơi cách thủy ở 950C đến dạng cao đặc dẻo, dính Xác định hàm ẩm và khối lƣợng cao đặc thu đƣợc Mỗi mẫu đƣợc làm lặp lại 3 lần 3.1.2 Xác định hàm ẩm và hàm lƣợng cao đặc thu đƣợc Kết quả xác định hàm ẩm và hàm lƣợng cao đặc mỗi mẫu đƣợc trình bày trong bảng 3.2 20 Bảng 3.2 Kết quả xác định hàm ẩm và hàm lƣợng cao đặc 3 mẫu dƣợc... sánh các vết trên sắc ký đồ của 3 mẫu và so sánh với chất chuẩn Bƣớc đầu đƣa ra hình ảnh “dấu vân tay” của cao đặc Xấu hổ 2.3.3 Đánh giá độc tính cấp của cao đặc Xấu hổ 2.3.3.1 Chuẩn bị mẫu thử: * 700 gam dƣợc liệu khô - mẫu Xấu hổ Mimosa pudica L thu hái tại Hà Nội (hàm ẩm 11,78 %) đã tán nhỏ cho vào bình cầu, chiết hồi lƣu bằng ethanol 90% trong 1h Sau 1h, lọc lấy dịch chiết Bã dƣợc liệu đƣợc đem... Định tính các nhóm hợp chất trong cao đặc Xấu hổ bằng các phản ứng hóa học Mỗi mẫu cao đặc Xấu hổ làm tất cả các phản ứng định tính sau:  Định tính alcaloid Cho 1 g cao đặc cho vào ống nghiệm, thêm 10ml dung dịch acid sulfuric 1N, hòa tan Lọc qua giấy lọc lấy dịch lọc, dịch lọc của mỗi mẫu đem chia đều vào các ống nghiệm nhỏ, mỗi ống 1ml 21 Nhỏ vào mỗi ống nghiệm của mỗi mẫu lần lƣợt các thuốc thử... selen cao Hàm lƣợng selen có sự dao động lớn theo mùa và theo vùng thu hái Xấu hổ mọc ở các tỉnh khác nhau ở Việt Nam có hàm lƣợng selen khác nhau Hàm lƣợng selen trong một số mẫu thu hái ở Đà Nẵng là lớn nhất [3] Đặc biệt, nghiên cứu mẫu Xấu hổ thu hái ở Đồng Nai không cho thấy sự có mặt của hợp chất selen [12] - Một số nguyên tố vô cơ khác cũng đã đƣợc xác định là có trong cả lá, thân và rễ Xấu hổ: ... barbituric nhƣ hexanbarbital và cả meprobamat [13]  Tác dụng giải độc arsen Uống cao toàn cây Xấu hổ trƣớc 24h hoặc uống cùng một lúc với một liều asen trioxid độc gây chết cho chuột nhắt trắng, thấy cao có tác dụng bảo vệ và làm giảm số chuột chết so với lô chứng [13]  Tác dụng kích thích tình dục Dịch chiết ethanol rễ Xấu hổ có khả năng làm tăng hoạt động tình dục ở chuột đực, đặc biệt có tác dụng đáng . đánh giá độc tính và đƣợc tiêu chuẩn hóa. Do vậy, đề tài Xây dựng một số tiêu chuẩn định tính và đánh giá độc tính cấp của cao đặc Xấu hổ đƣợc thực hiện với 2 mục tiêu sau: 1. Chiết xuất và. Chiết xuất và xây dựng một số tiêu chuẩn định tính cao đặc Xấu hổ. 2. Đánh giá độc tính cấp của cao đặc Xấu hổ. 2 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1. Cây Xấu hổ (Mimosa pudica L.) Xấu hổ còn có tên. - Chiết xuất dạng cao đặc Xấu hổ 15 - Xây dựng tiêu chuẩn định tính bằng phản ứng hóa học và sắc ký lớp mỏng cao đặc Xấu hổ. 15 - Đánh giá độc tính cấp của cao đặc Xấu hổ 15 2.3. Phƣơng

Ngày đăng: 28/07/2015, 17:55

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan