Nghiên cứu về thực vật và thành phần hóa học củ một loài thuộc chi stephania lour ở ninh thuận

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯƠNG THỊ LAN NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA MỘT LOÀI THUỘC CHI STEPHANIA LOUR... BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯƠNG THỊ LAN

BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

LƯƠNG THỊ LAN

NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA MỘT

LOÀI THUỘC CHI STEPHANIA LOUR

Ở NINH THUẬN

KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI – 2015

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

LƯƠNG THỊ LAN

NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA MỘT

LOÀI THUỘC CHI STEPHANIA LOUR

LỜI CẢM ƠN

Đầu tiên, tôi xin dành lời cảm ơn chân thành và sâu sắc nhất tới TS Nguyễn Quốc Huy – người thầy tôi vô cùng kính trọng – người đã theo sát, tận tình hướng dẫn và chỉ dạy cho tôi những kiến thức chuyên môn và bài học cuộc sống quý báu; người khởi nguồn cho những đam mê khoa học và đam mê công việc trong tôi Tôi cũng xin chân thành cảm ơn các thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên của bộ môn Thực vật, bộ môn Dược liệu, phòng thí nghiệm Trung tâm đại học Dược Hà Nội, những người đã tạo mọi điều kiện giúp đỡ tôi hoàn thành khoá luận này

Tôi xin cảm ơn DS Nguyễn Thị Thuỳ Linh, các bạn Phạm Thị Việt Hồng, Quách Thị Thuý Nga lớp M2K65, Tống Xuân Quang lớp A1K65, em Nguyễn Thị Mai Hạnh lớp M3K66 đã cùng trao đổi kinh nghiệm và hỗ trợ tinh thần cho tôi trong suốt thời gian cùng nghiên cứu khoa học

Tôi xin chân thành cảm ơn gia đình bác Đỗ Ngọc Sâm tại Ba Vì, Hà Nội đã giúp tôi trồng trọt, thu hái và lưu mẫu

Tôi xin chân thành cảm ơn các anh chị khu vực Ninh Thuận, Bình Thuận đã tận tình giúp tôi thu hái, vận chuyển mẫu và cung cấp những thông tin cực kỳ quý báu về công dụng của loài cây này

Cuối cùng, xin được cảm ơn gia đình và bạn bè tôi đã luôn luôn bên cạnh động viên, cổ vũ, giúp tôi có được ngày hôm nay

Hà Nội, tháng 4 năm 2015

Sv Lương Thị Lan

MỤC LỤC Trang DANH MỤC KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ

ĐẶT VẤN ĐỀ

Chương 1.TỔNG QUAN

1.1 Đặc điểm thực vật của chi Stephania Lour

1.1.1 Vị trí phân loại chi Stephania Lour

1.1.2 Đặc điểm chung của chi Stephania Lour

1.1.3 Một số khoá phân loại chi Stephania Lour

1.1.3.1 Khoá phân loại chi Stephania Lour ở Thái Lan

1.1.3.2 Khoá phân loại chi Stephania Lour ở Việt Nam

1.4.1 Công dụng dược liệu bình vôi

1.4.2 Công dụng một số alcaloid phân lập từ các loài thuộc chi bình vôi

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị

2.2.2 Nghiên cứu về hoá học

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Phương pháp nghiên cứu về thực vật

2.3.2 Phương pháp nghiên cứu về hoá học

2.3.2.1 Định tính các nhóm chất bằng các phản ứng hoá học

2.3.2.2 Định tính các alcaloid bằng SKLM

2.3.2.3 Chiết phân đoạn và định hướng phân lập

Chương 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

3.1.2.2 Định tính các alcaloid trong dược liệu củ bằng sắc ký lớp mỏng

3.1.2.3 Chiết phân đoạn alcaloid và định hướng phân lập các alcaloid

DANH MỤC KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT

AcOH Acid acetic

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.3 Một số alcaloid được phân lập từ các loài thuộc chi Stephania

Lour

11

Bảng 3.2.Giá trị Rf và màu sắc các vết khi quan sát dưới bước sóng

Bảng 3.7 Bảng so sánh các đặc điểm mô tả với đăc điểm trong khóa phân

loại của Nguyễn Chiều

38-39

Bảng 3.8 Bảng so sánh các đặc điểm mô tả với đăc điểm trong khóa

phân loại của Thái Lan

39-40

Hình 3.8 Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch C1 khai triển bằng hệ H4 khi

quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và

sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3)

32

Hình 3.9 Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch C2 khai triển bằng hệ H2 khi

quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và

sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3)

33

Hình 3.10 Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch C3 khai triển bằng hệ H2 khi

quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và

sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3)

34

Hình 3.11 Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch chiết C4 khai triển bằng hệ H2

khi quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2)

và sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3)

35

Hình 3.12 Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch C5 khai triển bằng hệ H2 khi

quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và

sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3)

36

Hình 3.13 Sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng dịch C6 khai triển bằng hệ H1 khi

quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và

sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3)

37

quan sát dưới ánh sáng tử ngoại có bước sóng 366nm (1), 254nm (2) và sau khi phun thuốc thử Dragendorff dưới ánh sáng thường (3)

ĐẶT VẤN ĐỀ

Ngày nay với xu hướng chung, con người hướng đến việc sử dụng các sản phẩm từ thiên nhiên nhiều Nước ta có lợi thế lớn về nguồn dược liệu, và kinh nghiệm sử dụng thuốc từ dân gian từ 54 dân tộc anh em với 4000 loài thực vật có thể làm thuốc trong các nền Y học dân gian, 800 loài thường được dùng trong Y Học cổ truyền chính thống và 300 loài dùng trong công nghiệp Dược [44] Thực tế hiện nay phát triển sản xuất thuốc tân dược còn nhiều khó khăn cho nênviệc sản xuất các sản phẩmtừ cây cỏ đang là định hướng quan trọng cho các công ty Dược nước ta

Chi bình vôi (Stephania Lour.), thuộc họ Tiết dê (Menispermaceae), là một

chi lớn với khoảng hơn 100 loài trên thế giới [36], Việt Nam có khoảng18 loài [19]

Ở Việt Nam các loài bình vôi là nguồn nguyên liệu chính để chiết xuất, phân lập rotundin cho công nghiệp dược sản xuất thuốc an thần, hiện nay nhiều hoạt chất khác đang được quan tâm nghiên cứu để có thể ứng dụng trong ngành Dược như: cepharanthin [31], [35],oxostephanin [18]

Một số loài bình vôi đã được nghiên cứu thường tập trung ở phía bắc và

miền trung như: Stephania glabra (Roxb.) Miers (ở Ninh Bình, Hà Nội [36]),

Stephania brachyandra Diels (ở Lào Cai [20]), Stephania dielsiana Y C Wu (ở Hà

Nội [18]), Stephania sinica Diels (ở Quảng Bình [14]) Các loài bình vôi phân bố ở

Nam Trung bộ và các tỉnh phía Nam chưa được nghiên cứu nhiều nhất là về thực vật Gần đây, chúng tôi đã thu hái một loài bình vôiở tỉnh Ninh Thuận, loài này có nhiều đặc điểm thực vật khác biệt với các loài đã nghiên cứu ở Việt Nam Để góp phần chuẩn hóa dược liệu, bảo tồn, định hướng phát triển và sử dụng loài bình vôi này, đề tài “Nghiên cứu về thực vật và thành phần hoá học của một loài thuộc chi

Stephania Lour ở Ninh Thuận” đã được thực hiện với những mục tiêu sau:

1 Mô tả đặc điểm thực vật và giám định tên khoa học cho loài nghiên cứu

2 Định tính các nhóm chất chung trong dược liệu củ

3 Định tính alcaloid trong dược liệu củ bằng SKLM

4 Chiết phân đoạn và định hướng phân lập các alcaloid trong các phân đoạn

Chương 1: TỔNG QUAN

1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CỦA CHISTEPHANIALOUR

1.1.1 Vị trí phân loại chi Stephania Lour

Theo các tài liệu [2], [3], [8], [13], [21], [22], chi Stephania Lour được xếp

vào họ Tiết dê (Menispermaceae), bộ Hoàng liên (Ranunculales), phân lớp Hoàng liên (Ranunculidae), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), ngành Ngọc lan (Magnoliophyta)

1.1.2 Đặc điểm chung của chi Stephania Lour

Chi Stephania Lour được mô tả như sau:

Dây leo sống lâu năm hoặc hằng năm, hầu hết mảnh khảnh Thân non thường nhẵn, xanh nhạt, xanh bóng hoặc xanh thẫm Thân già thường có rãnh dọc, mụn cóc sần sùi màu nâu xám, nâu đen hoặc màu nâu đất [28] Thân gỗ hay thân cỏ [40] Rễ dạng sợi phình to thành rễ củ Rễ củ thường có dạng hình cầu, hình trứng, hình trụ hay có hình dạng bất định Màu sắc vỏ củ có nhiều thay đổi tùy vào loài, tuổi cây và điều kiện môi trường sống (nhẵn, xù xì, màu nâu sáng nhạt, xám tro hay đen…) Thịt củ nạc, lẫn vằn xơ, màu trắng ngà, vàng tươi, vàng nhạt, đỏ nâu hoặc đỏ tươi [28]

Lá mọc cách Cuống lá thường mảnh, dài 2(-5) – 15(-20), hai đầu phình lên [28], có khi gấp khúc ở gốc [40], [36] Cuống lá đính vào phiến lá thường ở những

vị trí cách xa mép dưới của gốc lá ở những khoảng cách nhất định tùy từng loài (1/15 – 1/3) chiều dài phiến lá Phiến lá mỏng hoặc dày, nhẵn bóng hoặc rải rác có lông, hình kiên, hình lọng, hình tam giác tròn hoặc gần tròn, hình trứng hay hình tam giác, mép lá nguyên hoặc chia thùy, gân lá dạng chân vịt gồm 8 – 13 gân lá xuất phát từ đỉnh cuống lá Màu sắc phiến lá tùy thuộc vào từng loài [28], [42] Hoa đơn tính khác gốc Cụm hoa thường mọc từ kẽ lá hay trên thân cây già không lá [42], thường có dạng tán đơn, tán kép, xim tán kép, hình đầu đến tán ngù [28], có cuống, đơn độc hay xếp theo kiểu chùm ít nhất ở các nhánh của tán cấp 1 (2), các nhánh cuối cùng đôi khi không đều, hoặc đôi khi các xim tụ họp thành đầu hình đĩa [36] Hoa đực thường có cấu tạo đối xứng tỏa tròn; đài 6 – 8, rời, xếp thành

2 vòng, bằng nhau hay không bằng nhau, hoặc chỉ 2 – 3 ở loài S capitata [40], đài

ít nhiều hình trái xoan ngược; cánh hoa rời nhau, 3 hay 4, hình trứng ngược, mép

bên nhiều khi gập vào trong (hình vỏ sò) (S brachyandra), màu vàng hay trắng

xanh Nhị 2 – 6, thường 4, chỉ nhị dính nhau tạo thành ống hình trụ, bao phấn dính nhau thành hình đĩa Hoa cái đối xứng hay bất đối xứng, đài thường 1, cánh hoa 2 (ít khi đài, cánh hoa 3 – 4), hình dạng giống như hoa đực Bầu hình trứng, lá noãn 2 (nhưng chỉ có 1 phát triển thành hạt, 1 lá noãn bị thoái hóa); vòi rất ngắn hoặc không có; núm nhụy từ 4 – 6 (7) chia thùy ngắn hoặc rách, choãi ra hình dùi [36], [42]

Quả hạch, hình gần tròn, hình trứng, hình trứng ngược, trứng bầu, 2 bên dẹt Quả trưởng thành cuống quả lệch về một phía gần với dấu vết còn lại của núm nhụy Quả chín màu vàng đậm hay đỏ tươi nhẵn bóng Hạt (= vỏ quả trong) hình móng ngựa, trứng dẹp hoặc hơi tròn, lưng mang một dải hình móng ngựa gồm 2 hoặc 4 dãy dọc các bướu (gai) hay những gờ ngang (vân) Giá noãn có lỗ thủng

hoặc không (S subpeltata) Đặc điểm hình thái của hạt đặc trưng cho từng loài [28]

Cây mầm có lá mầm ít nhiều bằng rễ mầm, bao quanh bởi nội nhũ [36]

1.1.3 Một số khóa phân loại chi Stephania Lour

1.1.3.1 Khóa phân loại chi Stephania Lour ở Thái Lan

Thực vật chí Thái Lan [40] đã phân loại 15 loài thuộc chi Stephania:

1a Cuống đính vào khoảng dưới 2mm tính từ gốc phiến lá Lá gần hình tam giác

2b Cây leo Có cánh hoa

3a Lá có lông hay những lông nhỏ ở mặt dưới

4a Lá có dày đặc lông măng ở phía dưới

(3) S tomentella

4b Lá không có lông măng ở phía dưới

5a Lá mép quăn, lông nhỏ lên phía dưới Cụm hoa tán kép, với các tán phân biệt rõ ràng Hoa đực không cuống hoặc cuống rất ngắn Không có củ

(4) S.japonica var discolor

5b Lá có những lông nhỏ lên phía dưới Hoa tụ tập thành đầu, xim không rõ các tán Hoa có cuống rõ Cây có củ to

(5) S suberosa

3b Lá nhẵn hay có ít lông nhỏ phía dưới

6a Hoa tập trung thành đầu dạng đĩa Lá nhọn ở đuôi

7b Toàn thân có nhựa không màu

8a Đài của hoa đực có tuyến nhỏ nhô lên bên ngoài về phía đỉnh, hình trứng có móng, dài 2 – 3 mm

11a Vỏ quả trong dài từ 7 – 9mm, sống lưng có các hàng gai nhỏ nhọn như mũi kim tiêm

13b Lá rộng hình trứng đến trứng tam giác, dài 9 – 22 (25) cm

14a Cụm hoa nhô lên rõ Đài của hoa đực không đều nhau, 3 cánh đài trong rộng ra ở đỉnh

14b Cụm hoa không nhô lên rõ Đài hoa đực gần bằng nhau, hình trứng hẹp

(15) S glabra

1.1.3.2 Khóa phân loại chi Stephania Lour ở Việt Nam

Nguyễn Chiều xây dựng khóa phân loại 11 loài bình vôi ở nước ta [10] dựa vào các cơ quan theo thứ tự ưu tiên: hình dạng rễ củ, lá; sau đó mới đến hoa, cụm hoa, vỏ quả trong, hạt, tuyến trong cánh hoa, cuống cụm hoa, màu của dịch chiết trong cây… như sau:

1a Cây không có rễ củ, rễ chính dạng sợi

2a Lưng lá có lông Cụm hoa đực và cái đều là xim tán kép Lá hình trứng dài, rộng gần bằng nhau Trên lưng vỏ quả trong có 4 hàng gai đầu dẹp và rộng Giá noãn có lỗ

(1) S hernadifolia

2b Lưng lá không lông Cụm hoa đực và cái xim tán kép, cụm cái dày đặcthành dạng đầu Cụm hoa có lông rất nhỏ, sớm rụng Lá hình tam giác dạng trứng Trên lưng vỏ quả trong có vân dạng vách ngang Giá noãn có lỗ ở giữa

3b Rễ củ gần như hình cầu, bất quy tắc

4a Đỉnh cuống cụm hoa không phình to, không có đế dạng đĩa Hoa

có cuống

5a Cây ra hoa sau khi ra lá

6a Cụm hoa tán đơn Hoa đực 5 đài, không cánh hoa, chân có chấm tím Lá nhỏ dạng tam giác tròn

(4) S pierrei

6b Cụm hoa khác trên (6) 7a Cụm hoa đực và cái đều do các xim tán nhỏ xếp thành ngù Hoa đực 6 lá đài, 3 cánh hoa Hoa cái lá đài 2 cánh hoa Vỏ quả trong có vân dạng móc dài Giá noãn

có lỗ

(5) S.kwangsiensis

7b Cụm hoa đực và cái đều là xim tán kép 8a Mặt trong gốc cánh hoa có 2 tuyến nhỏ Cụm hoa gốc cái dạng đầu Vân trên lưng vỏ quả trong dạng vách Giá noãn không có lỗ

(6) S sinica

8b Mặt trong gốc cánh hoa không có tuyến

9a Cành, cuống lá, lá non, cum hoa

có màu tím, dứt dứt có dịch tím hồng chảy ra Cánh hoa màu vàng cam Cụm hoa đực xim tán kép Cụm hoa cái dạng đầu Trên lưng vỏ quả trong có 4 hàng gai cong dạng móc Giá noãn có lỗ

(7) S dielsiana

9b Cành, cuống lá, lá con và cụm hoa không tím

10a Cành cuống lá có dịch màu vàng nhạt hay trắng đục Khi khô gân lá có màu vàng Vỏ quả trong có vân dạng móc câu Giá noãn có lỗ

(8) S.hainanensis

10b Cành non, cuống lá không có dịch vàng nhạt hay trắng đục Cành nhỏ khi khô có màu nâu Mép cánh hoa cong vào phía trong Đầu gai trên lưng vỏ quả trong phồng to thành dạng đầu hay dạng mũ đinh Giá noãn có lỗ

(9) S.brachyandra

5b Cây ra hoa trước khi ra lá Cuống cụm hoa dài hơn cuống lá Cuống tán nhỏ dài

4b Đỉnh cuống cụm hoa phòng to hoặc có đế dạng mũ Cụm hoa đực

và cái đều dạng đầu Hoa có cuống cực ngắn hoặc không cuống Vân trên lưng vỏ quả trong dạng vách Giá noãn không có lỗ

1.2 PHÂN BỐ CHISTEPHANIA LOUR

1.2.1 Trên thế giới

Chi Stephania Lour phân bố ở vùng nhiệt đới, á nhiệt đới ở các nước châu Á

là chủ yếu, có các nước: Campuchia, Việt Nam, Indonesia, Myanma, Malaysia,

Thái Lan, Philippin, Ấn Độ, Banglades, Sri Lanka, quần đảo Slomon, Trung Quốc, Đài Loan, Papua New Guinea, Nhật Bản Ngoài ra còn Nigeria, Ethiopia (châu Phi), Australia (châu Úc) [36]

1.2.2 Tại Việt Nam

Các loài bình vôi ở nước ta có diện phân bố rất rộng trên cả ba miền Bắc, Trung, Nam Thường tập trung ở vùng núi đá vôi như Tuyên Quang, Cao Bằng, Thái Nguyên, Phú Thọ, Lạng Sơn, Quảng Ninh, Thanh Hoá, Lâm Đồng, Bà Rịa

Vũng Tàu Riêng loài Stephania pierreiDiels tập trung chủ yếu ở các tỉnh ven biển

Bình Định, Phú Yên, Ninh Thuận [27]

Phân bố của các loài Stephania Lour ở Việt Nam được trình bày ở Bảng 1.1

Bảng 1.1.Phân bố các loài thuộc chi Stephania Lour ở Việt Nam

Nguyên, Sơn La, Hòa Bình, Phú Thọ, Bắc Giang, Bắc Ninh

[7], [9], [19], [34], [23]

[34]

Tuyên Quang, Nam Định, Hà Nam, Ninh Bình, Cao Bằng, Lạng Sơn, Thanh Hóa, Côn Đảo

[19], [25], [27]

[34]

Stt Tên loài Phân bố TLTK

(Willd.) Walp

Lào Cai, Hà Nội, Ninh Bình, Đà Nẵng, Quảng Nam, Ninh Thuận, Lâm Đồng, Đồng Nai

[7], [11], [19]

et M.Yang

Sơn tới Thừa Thiên Huế

[7], [11], [19], [27]

Khánh Hòa, Bình Thuận, Ninh Thuận, Bà Rịa – Vũng Tàu

[7], [11], [16], [34]

Hòa Bình, Hà Nam, Ninh Bình tới

Bà Rịa – Vũng Tàu

[7], [11], [34]

Giang, Hà Tây, Quảng Ninh

[7], [19], [27]

Các loài thuộc chi Stephania được nghiên cứu nhiều không chỉ về thực vật mà

còn về hóa học Nhiều hợp chất đã được phân lập có các tác dụng dược lý quan trọng Trong đó alcaloid là thành phần chính được quan tâm nghiên cứu nhiều nhất

1.3.1 Một số nghiên cứu về alcaloid trong chi Stephania Lour

Trên thế giới:Các alcaloid đã được phân lập từ các loài trong chi bình vôi

trên thế giới có thể xếp vào 9 nhóm [19], được trình bày trong Bảng 1.2

Bảng 1.2.Các nhóm chất chính trong chi StephaniaLour

1 Benzylisoquinolin Gồm 6 chất được phân lập từ 6 loài khác

nhau, trong đó có chất Papaverin (C20H21NO4)

2 Bis benzyl isoquinolin Gồm 47 chất được phân lập từ 14 loài,

trong đó có chất Cepharanthin (C37H38N2O6)

3 Aporphin Gồm 75 chất được phân lập từ 33 loài,

6 Morphinan Gồm 21 chất được phân lập từ 17 loài,

trong đó có chất Sinoacutin (C19H21NO4)

7 Hasubanan Gồm 49 chất được phân lập từ 11 loài,

trong đó có chất Cepharamin (C19H23NO4)

8 Eribidin Có 1 chất là Protostephanin (C21H27NO4)

9 Stephaoxocan Gồm 2 chất, trong đó có chất

Stephaoxocanin (C18H21NO4)

Ở Việt Nam: Ngay từ những năm 1940, các alcaloid trong chi bình vôi đã

được các nhà khoa học quan tâm nghiên cứu Một số các alcaloid được phân lập từ

chi bình vôi được trình bày trong bảng 1.3

Bảng 1.3 Một số alcaloid được phân lập từ các loài thuộc chi Stephania Lour

1 Cycleania S sp 3 , S viridiflavens [36], [15]

2 Palmatin S sp 3 , S brachyandra [36], [20]

3 Roemetin S glabra Mies., S kuinanensis H.S.Lo et

M Yang, bình vôi Việt Nam

[36], [33]

4 Rotundin S viridiflavens, S.glabra, S kuinanensis

H.S.Lo et M.Yang, S.sp3 , S.brachyandra

Diels, S.sinica Diels, S.dielsiana

Y.C.Wu

[15], [17], [36], [32], [14], [18], [28]

6 Stepholidin Bình vôi ở Mộc Châu – Sơn La [1]

1.3.2 Một số nghiên cứu về alcaloid trong loàiStephaniapierrei Diels

Thế giới:

Các nhà khoa học trên thế giới đã phân lập được rất nhiều alcaloid từ loài

Stephania pierrei Diels ( bảng 1.4)

Bảng 1.4 Các alcaloid được phân lập từ loài Stephania pierrei Diels

1 Cycleanin, Staluraridin, Xylopin, Reticulin [38]

2 Roemerolin, Phanostenin, Nor – dicentrin, Magnoflorin,

Isolaurelin, Isocorydin, Dicentrin, Asimilobin 2 – O – β – D –

glucosid, Anonain

[41]

Việt Nam:

Năm 1991, Ngô Thị Tâm đã định tính bằng SKLMalcaloid toàn phần có 6

vết alcaloid;phân lập và xác định cấu trúc Cepharanthin (1%) từ củ loài Stephania

pierrei Diels thu hái ở Nghĩa Bình [30]

Năm 2001, Lê Ngọc Liên, Phạm Gia Điền, M Pais đã phân lập được

Cepharanthin vàStephibaberin từ củ loài Stephania pierrei Diels thu hái ở Phú Yên,

Nha Trang [24]

1.4 CÔNG DỤNG

1.4.1 Công dụng dược liệu củ bình vôi

Trong dân gian từ lâu củ bình vôi (đã cạo bỏ vỏ đen, thái lát, sấy khô) đã được sử dụng phổ biến để làm thuốc chữa bệnh Dược liệu củ bình vôi có:

Tính vị, quy kinh: Khổ, cam, lương, quy vào hai kinh can, tỳ

Công năng, chủ trị: An thần, dưỡng huyết, thanh nhiệt, giải độc, giảm đau, tán ứ, hành huyết, hóa đàm, tán kết, khu phong hoạt lạc Chủ trị: mất ngủ, sốt nóng, nhức đầu, đau dạ dày, ho nhiều đờm, hen suyễn khó thở, phối hợp với các thuốc khác để trị ho, sốt rét, kiết lỵ, ngoài da: lở ngứa, mụn nhọt

Cách dùng, liều lượng: Ngày 3 – 6g, dạng thuốc sắc, thuốc bột hoặc rượu thuốc [25], [29]

1.4.2 Công dụng một số alcaloid phân lập từ chi bình vôi

L-tetrahydropalmatin: Rotundin hydroclorid được dùng làm thuốc trấn kinh, dùng trong các trường hợp mất ngủ, sốt nóng nhức đầu, đau tim, đau dạ dày, hen Ngày dùng 0,05 g-0,10 g dưới dạng thuốc bột, thuốc viên Có thể chế thành dạng tiêm 0,05% rotundin clohydrat hay sulfat trong ống 5 ml Trẻ

em dùng với liều lượng 0,02-0,025 g đối với trẻ em 1-5 tuổi, 0,03-0,05 g đối với trẻ em 5-10 tuổi [27] Trung Quốc dùng dạng thuốc tiêm Rotundin sulfat 3%, mỗi ống 2 ml, làm thuốc giảm đau, an thần gây ngủ trong điều trị loét dạ dày, hành tá tràng, đau dây thần kinh, đau kinh nguyệt, mất ngủ lo âu, căng thẳng tinh thần Tiêm bắp, mỗi lần 1 ống 2 ml, ngày 1-2 lần [34]

Cepharanthin: là một thuốc sử dụng nhiều ở Nhật Bản, có tác dụng điều trị lao phổi, lao da, bệnh phong, ho gà, nhiễm độc do côn trùng,

động vật cắn (rắn độc, cá độc, ong, sâu róm, bọ chét) dùng dưới hình thức đắp thuốc vào vết thương hay tiêm dưới da có tác dụng giải độc cao Cepharanthin

có tác dụng tăng cường sinh sản kháng thể, phòng chống tác dụng phụ do sử dụng các thuốc chống ung thư, tia xạ [36], [43]

Roemetin: Roemerin có tác dụng an thần, gây ngủ ở liều thấp nhưng lại có tác dụng kích thích hệ thần kinh trung ương, gây co giật và chết khi dùng ở liều cao Roemerin có tác dụng giãn mạch, hạ huyết áp, làm giảm cả huyết áp tối

đa và huyết áp tối thiểu [26], [39]

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ

2.1.1 Nguyên liệu

Mẫu được thu hái tại Ninh Thuận vào năm 2012, lấy củ làm nguyên liệu nghiên cứu, lấy mẫu trồng tại Ba Vì – Hà Nội và vườn thực vật, trường Đại học Dược Hà Nội để theo dõi sự phát triển của cây, thu hoa, quả, hạt để mô tả và xácđịnh tên khoa học Mẫu được lưu tại Phòng tiêu bản trườngĐại học Dược Hà Nội với mã số tiêu bản là: HNIP/18075/14

2.1.2 Thiết bị

- Vi phẫu được chụpảnh trực tiếp trên kính hiển vi tại bộ môn Thực vật trườngĐại học Dược Hà Nội

- Bột dược liệu được chụp ảnh trên kính hiển vi có trắc vi vật kính Kruss

- Phân tích hoa bằng kính lúp soi nổi Nikon của Nhật tại bộ môn Thực vật trườngĐại học Dược Hà Nội

- Cất thu hồi dung môi trên máy Buchi Rotavapor tại bộ môn Thực vật trường Đại học Dược Hà Nội

- Sắc ký lớp mỏng được thực hiện bằng hệ thống phun mẫu lên bản mỏng Linomat 5, hệ thống triển khai bản mỏng ADC2, quan sát bản mỏng trước và sau phun thuốc thử ở các bước sóng trên máy soi UV Camag TLC Visualizer

2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

2.2.1 Nghiên cứu về thực vật

- Mô tả đặcđiểm hình thái thực vật

- Mô tả đặc điểm vi phẫu thân cây, cuống lá, gân lá

- Xácđịnh đặcđiểm bột dược liệu

2.2.2 Nghiên cứu về hoá học

- Định tính các nhóm chất bằng phản ứng hoá học

- Định tính alcaloid bằng SKLM

- Chiết xuất, chiết phân đoạn, định hướng phân lập các alcaloid trong các phân đoạn

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.3.1 Phương pháp nghiên cứu về thực vật

- Nghiên cứu đặcđiểm thực vật: Quan sát bằng mắt thường, kính lúp soi nổi, chụpảnh và mô tả theo phương pháp mô tả phân tích[6]

- Nghiên cứu cấu tạo giải phẫu: Sử dụng phương pháp nhuộm kép, quan sát trên kính hiển vi, chụpảnh và mô tả theo phương pháp mô tả phân tích[6]

2.3.2 Phương pháp nghiên cứu về hoá học

2.3.2.1 Định tính các nhóm chất bằng các phản ứng hoá học

Định tính các nhóm chất trong dược liệu theo tài liệu “Thực tập dược liệu”[5]

2.3.2.2 Định tính alcaloid trong dược liệu củ bằng SKLM

Định tính alcaloid trong dược liệu củ bằng SKLM theo tài liệu “Bài giảng dược liệu” [4]

2.3.2.3 Chiết xuất và định hướng phân lập

Chiết xuất vàđịnh hướng phân lập các alcaloid trong dược liệu theo tài liệu

“Bài giảng dược liệu” [4]

- Chiết xuất alcaloid toàn phần

Dược liệu đượcthành tán bột mịn, thấmẩm dược liệu bằng methanol đã được acid hoá đến pH 4 – 5 bằng acid acetic 5%, để qua đêm Chuyển toàn bộ dược liệu này vào bình chiết ngấm kiệt và tiến hành chiết với dung môi methanol đã acid hoá

ở trên liên tục với tốc độ dòng 0,5ml/ phút Cất thu hồi methanol thu đượcdịch chiết alcaloid trong nước - acid

- Chiết phân đoạn alcaloid

Bột dược liệu đã thấm ẩm

Bột dược liệu

Thấm ẩm bằng methanol pH 4 – 5 (acid hoá bằng acid acetic 5%)

Dịch chiết nước – acid trên lần lượt lắc với các dung môi n – hexan, dichloromethan, n – buthanol được 3 phân đoạn n – hexan acid, dichloromethan acid, n – buthanol acid Dịch chiết nước còn lại đem kiềm hoá đến pH 9 – 10 bằng

Dịch chiết methanol – nước acid

Chiết ngấm kiệt bằng methanol pH 4 – 5

Dịch chiết nước acid

Cất thu hồi methanol

Dịch chiết n – hexan acid Dịch chiết nước acid

Dịch chiết

dichloromethan acid

Dịch chiết nước acid

Dịch chiết n – buthanol acid Dịch chiết nước acid

Dịch chiết nước base

NH3 đặc, rồi tiếp tục lắc lần lượt với các dung môi trên thu được các phân đoạn n – hexan base, dichoromethan base, n – buthanol base

Cô các phân đoạn thu được đến cắn

Lựa chọn dung môi methanol để hoà tan các cắn các phân đoạn thu được, cắn tan hết Các cắn được hoà trong methanol nhằm đồng nhất các điều kiện giữa các phân đoạn, và do dung môi này có khả năng hoà tan nhiều chất tan ở các độ phân cực khác nhau Dịch hoà tan cắn của các phân đoạn trong methanol được dùng để chấm sắc ký, ký hiệu dịch hoà tan cắn của các phân đoạn trong methanol như sau:

Phân đoạn n – hexan acid trong methanol: C1

Phân đoạn dichloromethan acid trong methanol: C2

Phân đoạn n – buthanol acid trong methanol: C3

Phân đoạn n – hexan base trong methanol: C4

Phân đoạn dichloromethan base trong methanol: C5

Phân đoạn n – buthanol base trong methanol: C6

Phân đoạn nước trong methanol: C7

Lựa chọn hệ dung môi chạy sắc ký qua tham khảo các nghiên cứu đã có [14], [19], [20] về các loài bình vôi khác và thay đổi độ phân cực qua thay đổi thành phần pha động

Lựa chọn thuốc thử hiện màu là Dragendorff là thuốc thử đặc hiệu của alcaloid

Chương 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

3.1 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

3.1.1 Kết quả về thực vật

3.1.1.1 Mô tả đặc điểm thực vật, giám định tên khoa học

Thân leo cuốn mọc từ củ, mảnh khảnh, màu xanh nhạt hoặc tím, toàn cây không có lông Rễ phình thành củ, một nửa hoặc cả củ nổi lên trên mặt đất, có vết thắt ở lưng củ, màu xám, vỏ có nốt sần Lá mọc so le, cuống màu xanh nhạt hoặc tím, dài khoảng 1 – 10 cm, mảnh, mọc ở 1/3 phiến lá tính từ gốc lá; 8 – 9 gân tỏa tròn mọc ra từ điểm đính của cuống lá; lá nhỏ, gần tròn, đơn, nguyên; lá già dài 4 –

10 cm, mặt trên màu xanh rất đậm, mặt dưới màu lợt, ngọn lá lõm; lá non dài 1 – 3

cm, màu xanh nhạt hơn, có khi có đốm màu xanh nõn chuối, ngọn lá nhọn

Hoa đơn tính khác gốc Cụm hoa mọc ở kẽ lá

Cụm hoa đực dạng tán đơn, có 3 – 5 hoa, thường là 5 Cuống chung dài 2 – 3cm, màu xanh nhạt Một cụm hoa có 2 lá bắc màu xanh nhạt Cuống một hoa dài 1 – 1.5cm Đài 4 – 5 – 6, hàn liền, màu xanh nhạt Không có cánh hoa Chỉ nhị hàn liền thành hình ống, rất ngắn; bao phấn hàn liền thành hình đĩa, đường kính 1 mm Cụm hoa cái dạng xim tán kép, có 1 hoặc 2 cụm hoa mọc ở một kẽ lá, gồm khoảng 10 hoa, mỗi cụm hoa có 1 lá bắc chung Cấp 1 dạng tán; cuống chung dài 2cm Cấp 2 dạng xim; cuống chung dài 0.5 – 2mm, màu xanh nhạt; gồm 1 – 2 – 3 hoa; mỗi xim có 1 lá bắc chung dài 0.5 – 1mm, màu xanh nhạt Cuống hoa dài 2mm; lá đài 1 hoặc 2, đều, rời, màu xanh nhạt, kích thước 1 – 1.2mm; không có cánh hoa; bầu trên, gần tròn, mọc lệch, dài 1mm

Quả hạch, hình gần tròn, dẹt hai bên, nhẵn bóng, quả trưởng thành cuống quả mọc lệch về một phía gần với dấu vết còn lại của núm nhụy, màu xanh khi còn xanh

và màu đỏ khi chín Hạt hình móng ngựa, có 14 vân nổi lên trên mặt hạt, chia thành

Cành mang hoa cái

Hình 3.2.Hoa cái và quả

3.1.1.2 Đặc điểm vi phẫu

Đặc điểm vi phẫu thân (Hình 3.3):

Mặt cắt thân có thiết diện gần tròn

Biểu bì (1): cấu tạo bởi 1 hàng tế bào hình chữ nhật đều, phía ngoài phủ cutin

Mô mềm vỏ (2): bắt màu đỏ khi nhuộm bằng đỏ son phèn, phân thành hai

phần bởi cung mô cứng uốn lượn thành hình hoa thị 8 cánh, gồm 6 – 7 hàng tế bào

hình trứng kích thước không đều nhau, thành mỏng bằng cellulose , kích thước nhỏ

hơn so với mô mềm vỏ phía trong mô cứng

Đám mô mềm trong cung mô cứng (2): gồm 1 – 2 hàng tế bào, gồm những

tế bào thành mỏng bằng cellulose, hình đa giác, không đều nhau, có kích thước lớn hơn tế bào mô mềm vỏ ngoài cung mô cứng

Cung mô cứng (3) : gồm 3 – 6 hàng tế bào, thành dày hoá gỗ, bắt màu xanh,

tế bào hình đa giác, kích thước không đều nhau, càng gần tâm tế bào mô cứng càng lớn Mỗi cung mô cứng ứng với mỗi bó libe gỗ Các cung mô cứng xếp liền nhau tạo thành vòng cung hình hoa thị, có 8 cung

Bó libe gỗ cấp I (4): gồm 8 bó, kích thước không đều nhau libe ở ngoài, bắt màu

đỏ, gỗ ở trong, bắt màu xanh, gồm các tế bào hình tròn hoặc hình trứng, kích thước rất không đều nhau, giữa là một hàng tế bào thượng tầng (tầng phát sinh libe-gỗ)

Mô mềm ruột (5) : thành mỏng, hình tròn, kích thước không đều nhau, bắt màu đỏ

1 Biểu bì 2 Mô mềm vỏ 3 Cung mô cứng

4 Bó libe – gỗ.` 5 Mô mềm ruột 6 Tia ruột

Hình 3.3.Vi phẫu thân

Đặc điểm vi phẫu cuống lá (Hình 3.4)

Biểu b ì (1): cấu tạo bởi 1 hàng tế bào hình chữ nhật, đều, phía ngoài phủ cutin

Mô mềm vỏ (2): bắt màu đỏ, gồm 4 hàng tế bào hình đa giác, kích thước không đều,xếp xít nhau

Vòng mô cứng (3): gồm 1 - 4 hàng tế bào nhiều cạnh, thành hoá gỗ, bắt màu xanh, mỗi cung mô cứng tương ứng với một bó libe, gỗ, các tế bào mô cứng xếp liền nhau tạo thành một vòng tròn uốn lượn hình hoa thị gồm 6 cung

Bó libe gỗ (4): các bó không đều nhau, có 6 bó Libe ở ngoài, bắt màu đỏ, xếp lộn xộn, hình bầu dục Gỗ ở trong, bắt màu xanh, mạch bé dần vào ruột, tạo bó hình tam giác đỉnh quay vào trong

Mô mềm ruột (5): bắt màu đỏ, tế bào thành mỏng, bằng cellulose, hình tròn không đều nhau

1 Biểu bì 2 Mô mềm vỏ 3 Cung mô cứng

4 Bó libe – gỗ 5 Mô mềm ruột

Mô dày (2): gồm 2 – 3 hàng tế bào,các tế bào thành dày, bắt màu đỏ

Bó libe – gỗ (3): tạo thành bó nhỏ nằm chính giữa gân lá Gỗ ở phía trên, gồm các tế bào hình tròn, thành dày, bắt màu xanh Libe ở dưới, gồm các tế bào xếp xít nhau, bắt màu đỏ

Tế bào tiết (4): gồm các tế bào nhú lên khỏi bề mặt lá, bắt màu đỏ Có cả ở