Tiểu luận môn Sinh Học Phân Tử AND vệ tinh (Satellite ADN) và những ứng dụng của nó

Năm 1984, Alec Jeffreys và các cộng sự ở trường đại học Leicester Anh khi nghiêncứu các đoạn ADN mã hoá cho haemoglobin trong máu người đã phát hiện ratrình tự của các bazơnitơ được lặp

MỤC LỤC

PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1

I Lí do chọn đề tài 2

II Đối tượng nghiên cứu 3

III Giới hạn nghiên cứu 3

IV Phương pháp nghiên cứu 3

PHẦN 2: NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 4

CHƯƠNG 1: TÌM HIỂU AND VỆ TINH (Satellites) 4 I.1 Khái quát chung về AND vệ tinh 4

I.2 AND tiểu vệ tinh(Minisatellite hay VNTR) 6

I.2.1 Đặc điểm 6

I.2.2 Vị trí 6

I.2.3 Phân loại 7

I.2.4 Kĩ thuật RFLP 7

I.3.ADN vi vệ tinh (Microsatellite hay STR) 9

I.3.1 Những trình tự lặp lại của Microsatellite 9

1.3.2 Đặc điểm 10

I.3.3 Vai trò của Microsatellite 11

I.3.4 Cơ chế đột biến của Microsatellite 12

I.3.5 Phương pháp xác định Microsatellite 14

I.3.6 Xét nghiệm PCR 16

CHƯƠNG 2: ỨNG DỤNG CỦA AND VỆ TINH (Satellites) II.1 Ứng dụng 21

II.2 Những khó khăn gặp phải khi xét nghiệm ADN 24

PHẦN 3: KẾT LUẬN 27

TÀI LIỆU THAM KHẢO 28

PHẦN 1: MỞ ĐẦU

I Lí do chọn đề tài:

Nếu như bạn là fan hâm mộ thường xuyên theo dõi những bộ phim hình

sự, hẳn bạn sẽ không còn xa lạ gì với cảnh tượng một tên cướp đột nhập vào căn

hộ, vô tình để rơi lại một vài cọng tóc, và bất hạnh thay cho hắn, cọng tóc này lạitrở thành một chứng cứ quý hơn vàng để tống hắn vào thẳng xà lim Nhưng làmcách nào mà những nhà điều tra có khả năng nhận diện tên cướp chỉ thông quamột sợi tóc? Làm sao họ có thể biến chúng thành tang chứng đủ khả năng đưahắn ra trước vành móng ngựa?

Câu trả lời nằm ở công nghệ nhận diện qua ADN Không chỉ tồn tại trênphim ảnh, công nghệ này đã phát triển với tốc độ như vũ bão trong một vài thập

kỷ trở lại đây Như đã biết, ADN được cấu trúc nên từ 4 loại nucleotide, vàchính cách sắp xếp rất đa dạng của những nucleotide này làm cho ADN của bạntrở nên độc nhất vô nhị - nó chỉ có thể là của bạn chứ không phải của ai khác(chỉ trừ những trường hợp bạn có một người em song sinh nào đó) Thế nhưng,trong cơ thể chúng ta có tới 3.2 tỷ cặp base, việc xác định, tìm thấy sự khác biệt

về trình tự base của gen giữa các cá nhân thật không hề đơn giản Năm

1984, Alec Jeffreys và các cộng sự ở trường đại học Leicester (Anh) khi nghiêncứu các đoạn ADN mã hoá cho haemoglobin trong máu người đã phát hiện ratrình tự của các bazơnitơ được lặp lại một số lần với chiều dài đoạn lặp từ 10-15

bp (base pair), các đoạn lặp này được gọi là tiểu vệ tinh (minisattelite) Các tiểu

vệ tinh được phát hiện thấy trong mọi tế bào và ở những vị trí khác nhau trong

hệ gen người Điều đáng chú ý là số lần lặp lại các đoạn lặp này ở các cá thểkhác nhau thì khác nhau Đây chính là đặc điểm quan trọng có thể phân biệtđược cá nhân này với các nhân khác, không những thế, có thể giúp tìm xem họ

có quan hệ huyết thống với nhau hay không?

Các trình tự base lặp lại này được gọi là các dấu ấn ADN Có hai loại dấu

ấn ADN hiện đang được dùng trong xét nghiệm dấu ấn ADN là: Các tiểu vệtinh(Minisatellite hay VNTR) và vi vệ tinh (Microsatellite hay STR)

Phương pháp xét nghiệm dấu ấn ADN còn gọi là giám định gen hay làtruy nguyên ADN (DNA-profiling) Giám định gen ra đời không chỉ khắc phụcđược những hạn chế của các phương pháp huyết thanh học trước đây mà còngiải quyết được những vụ án bế tắc trước đó- những vụ án mà ADN là bằngchứng duy nhất Tính ưu việt của giám định gen là truy nguyên được cá thểngười, xác định quan hệ huyết thống cha con, hóa giải các mối quan nhệ đặcbiệt, xác định hài cốt Cho đến nay nó được áp dụng rộng rãi trong nhiều lĩnhvực khác nhau như: giám định pháp y, xác định tội phạm, lập bản đồ gen người,động vật, nghiên cứu về di truyền loài người những gen liên quan đến bệnh ditruyền, xác định hệ phả, xác định cấu trúc quần thể, nghiên cứu tiến hóa…

Với tất cả những lí do trên, tôi chọn đề tài tìm hiểu của mình là “AND vệ tinh (Satellite ADN) và những ứng dụng của nó”

II Đối tượng nghiên cứu:

AND vệ tinh (Satellite ADN).

III Giới hạn đề tài:

Nghiên cứu AND tiểu vệ tinh (Minisatellite hay VNTR) và ADN vi vệtinh (Microsatellite hay STR)

IV Phương pháp nghiên cứu:

Phương pháp nghiên cứu lý thuyết: Thu thập, tổng hợp các tài liệu, giáotrình về sinh học phân tử, di truyền học và các website có liên quan

Phần 2: NỘI DUNG

Chương 1: TÌM HIỂU AND VỆ TINH (SATELLITE ADN)

I Khái quát chung về ADN - AND vệ tinh (Satellite ADN).

Sinh vật nói chung đều được cấu tạo bởi đơn vị căn bản là tế bào, từnguyên thuỷ là hợp tử được thụ tinh bởi trứng và tinh trùng Về phương diệnsinh học phân tử, mỗi tế bào của cơ thể (trừ hồng cầu) đều có nhân, trong nhânchứa các vật liệu di truyền, nhiễm sắc thể (chromosome) quyết định cấu tạo, đặctính riêng cho từng loài, cá thể riêng biệt Ở người, trong nhân tế bào thể (tế bàolưỡng bội) có 46 nhiễm sắc thể được xếp thành 23 cặp tương đồng: 22 cặpnhiễm sắc thể thường và một cặp nhiễm sắc thể giới tính Riêng tế bào trứng vàtinh trùng chỉ có 23 nhiễm sắc thể (tế bào đơn bội) Các nhiễm sắc thể mangthông tin di truyền DNA (viết tắt của từ Deoxyribo Nucleic Acid) thừa kế 50%

từ cha và 50% từ mẹ

Xét về cấu trúc, AND được tạo thành từ: đường deoxyribose, acid

phosphoric và một gốc base nitơ (có 4 gốc base: adenine, cytosine, guanine,thymine) Ba thành phần trên sắp xếp theo thứ tự đường luân phiên với acid và

cứ mỗi gốc đường đính với một trong bốn loại base tạo thành cặp trình tự đãđược mã hóa từ trước, gồm hai chuỗi xoắn kép sắp xếp theo trình tự nhất địnhtheo mã rất đặc trưng Một bộ ba (đường, acid, base) này được gọi là mộtnucleotide, nhiều mẩu nucleotide đính kết lại gọi là polynuleotide Thể nhiễmsắc của tế bào được cấu tạo từ ADN, và gen là một đoạn nhỏ của phân tử ADN

Trong tổng số khoảng 3 tỷ đôi base hình thành bộ gen con người thì chỉ

có khoảng 5% là những gen có biểu lộ ra ngoài gọi là exon (nghĩa là có mã chonhững protein có chức năng nào đó) Trong số không biểu lộ người ta hay nóiđến các ADN vê tinh (Satellite ADN), nó chiếm khoảng 10% genome

ADN vệ tinh là những đoạn ADN mang các trình tự lặp lại nối tiếp cóthành phần khác với hệ số trung bình ADN hệ gen Sở dĩ có tên như vậy bởi vìtrong siêu ly tâm chúng không nằm trong phần chính của ADN mà lại có mộttốc độ lắng vệ tinh đối với phần chính, lơ lửng bên cạnh tạo nên những đỉnh

biệt với băng của phần lớn ADN do có tỷ trọng nhỏ hơn Chúng thường có cấutrúc là những trình tự đơn vị cơ bản (monome) nhắc đi nhắc lại và nối liên tiếpvới nhau (nên tiếng Anh gọi là tandem repeats) và không tham gia làm nhiệm

vụ mã hóa thông tin di truyền Bản sao ADN vệ tinh lặp lại hàng triệu lần, vàchính số lần lặp đi lặp lại đã tạo nên sự khác biệt giữa cá thể này với cá thể kháctạo nên Sự khác biệt đó gọi “dấu vân tay AND” Xét nghiệm dấu vân tay ANDđầu tiên được nhà khoa học người Anh- Jeffereys thực hiện năm 1985 là xétnghiệm phát hiện các tiểu vệ tinh đa vị trí Dấu vân tay AND được vận dụngrộng rãi: xác định được mối quan hệ huyết thống, hình sự, y pháp học… ANDlặp lại thường xuất hiện thành một khối các đoạn lặp lại liên tiếp nhau:

- Đoạn lặp đơn giản: bao gồm một, hai (di), ba (tri), bốn (tetra) nucleotide

tự base có ý nghĩa chức năng (gen), các trình tự base lặp lại này được di truyền

từ mẹ sang con cái theo quy luật phân ly độc lập của Mendel

ADN vệ tinh được chia thành 3 loại nhỏ:

- ADN vệ tinh alpha: có kích thước 171 bp, lập đi lập lại nhiều lần với

chiều dài hàng triệu bp hoặc hơn Loại này được thấy cạnh tâm động của NST

- ADN tiểu vệ tinh (minisatellite ADN): có kích thước từ 14 - 500 bp, lập

đi lập lại với chiều dài khoảng vài ngàn bp

- ADN vi vệ tinh (microsatellite ADN): có kích thước từ 1 - 13 bp, lập đi

lập lại với tổng chiều dài không quá vài trăm bp Hai loại ADN tiểu và vi vệ tinh có sự khác nhau rất lớn trong chiều dàigiữa người này với người khác và điều này làm chúng trở nên rất hữu ích trongviệc lập bản đồ gene ADN tiểu vệ tinh và vi vệ tinh được gặp với tần số trungbình là 1 trên mỗi 2 kb trong genome và chúng chiếm khoảng 3% genome

Bảng 1: Một số loại DNA satellites ở người

Loại Kích thước 1 đơn vị

“dấu vân tay” ở người AND Minisatellitae có mặt ở trên 1000 vị trí trong hệgen của người

Một số Minisatellite có trình tự lõi cơ bản là :

GGGCAGGGAXG (alphoid X có thể là một nucleotide bất kì )

I.2.2 Vị trí của ADN Minisatellitae

ADN Minisatellitae được tìm thấy trên được tìm thấy trên vùng đầu mút(telomer) và vùng tâm động (centromer), hoặc vùng dị nhiễm sắc của NST

Tại đầu mút NST có những trình tự ADN ngắn (AND telomere) lặp lạingẫu nhiên từ 5-350 lần và có trình tự đặc trưng là: 5’ TTAGGG 3’ Trình tựnày có tác dụng bảo vệ NST không bị phân hủy.

Hình 1 : Vị trí của ADN Minisatellitae I.2.3 Phân loại

ADN Minisatellite được chia làm 2 loại :

- ADN tiểu vệ tinh đa vị trí (multi-locus minisatellite) : hiện diện rải ráctại nhiều vị trí trên bộ gen Các tiểu vệ tinh đa vị trí được phát hiện vào năm

1895 bởi Jeffereys

- ADN tiểu vệ tinh đơn vị trí (single-locus minisatelite) : chỉ có tại một vịtrí trên bộ gen Nhiều tiểu vệ tinh đơn vị trí có giá trị dấu ấn AND

I.2.4 Kỹ thuật RFLP

Vì chứa nhiều nucleotide hơn và độ lặp nhiều hơn (dài hơn) nên để xác

định ADN Minisatellitae người ta dùng kĩ thuật RFLP

Hình 2: Quy trình kĩ thuật RFLP

Quy trình kĩ thuật RFLP được tóm tắt như sau:

Cụ thể:

Bước 1: Lấy mẫu thử nghiệm tách bạch cầu  tách chiết toàn bộ bộ gen

nguyên vẹn của bạch cầu trong mẫu thử nghiệm

Bước 2: Cắt nhỏ AND genome bằng các ezim cắt giới hạn Enzim cắt

nhận diện được 4 trình tự base đặc hiệu, nhờ đó cắt được bộ gen thành nhữngmảnh AND dài ngắn khác nhau, trong đó có chứa những mạch chứa các trình tựbase lặp lại (VNTR)

Tách chiết ADN

Bước 4

Bước 3 Điện di mẫu thử nghiệm để phân tách các đoạn

AND này trên thạch agarose 1%

Bước 1

Chuyển các đoạn AND trên thạch sang màng nylon bằng kĩ thuật southernblot

Bước 2 Cắt AND thành nhiều đoạn nhỏ trong đó có chứa

đoạn có trình tự lặp nhờ enzim cắt giới hạn

Bước 5 Phát hiện vị trí trình tự base lặp lại trên màng

Bước 3: Điện di mẫu thử nghiệm để phân tách các đoạn AND này trên

thạch agarose 1% Quá trình điện di được thực hiện như sau: AND được rót vàogiếng gen, sau đó bản gen được đặt vào một điện trường sao cho các giếng chứacác AND nằm ở phía cực âm Đoạn AND càng nhỏ thì sẽ di chuyển càng nhanh

và do đó sau cùng một thời gian di chuyển thì sẽ đi được một quãng đường xahơn so với những đoạn lớn hơn Như vậy trên điện di đồ người ta có thể phântách được các trình tự AND theo kích thước

Bước 4: Sau đó chuyển các đoạn AND trên thạch sang màng nylon bằng

kĩ thuật southernblot

Bước 5: Phát hiện vị trí trình tự base lặp lại trên màng bằng cách lai với

một trong những dò AND Ta chiếu tia X và khi đó chỉ có những vùng có mẫu

dò bám vào mới hiển thị trên phim Từ đó xác định các trình tự base lặp lạiVNTR

Ưu điểm:

- Phương pháp đơn giản, dễ thực hiện

- Cho kết quả nhanh chóng, chính xác

- Kết quả có thể đại diện cho từng cá nhân

Nhược điểm:

- Mẫu xét nghiệm phải đủ lớn

- Mẫu cần phải sạch, không lẫn nhiều mảnh DNA do mẫu bị phân hủy

I.3 ADN Microsatellite

I.3.1.Những trình tự lặp lại Microsatellite

- Khối các đoạn lặp 1 nucleotide :

+ Poly A/ poly T là những trình tự phổ biến nhất trong hệ gen người,nhưng nó lại không phù hợp để sử dụng bản đồ, phân tích quần thể bởi vì nó

không bền vững và ổn định trong quá trình phân tích PCR Trong quá trình này,

dưới tác động của enzime Taq-polymerase nó có thể làm cho kích thước allen bịthay đổi bằng cách thêm một nucleotide A vào cuối đoạn hoặc chèn vào vùnglặp lại của allen

+ Còn G và C thì rất hiếm trong hệ gen.

- Khối các đoạn lặp 2 Nu (Dinucleotide) là loại phổ biến nhất (0,5% genome ) : ở động vật có vú chủ yếu là GT/AC gấp đôi so với AT và gấp

ba so với AG/TC; còn cặp CG/GC thì hiếm gặp ; ở thực vật là AA/TT, AT/TA Chúng có thể phân ra 3 loại:

+ Hoàn hảo : không có sự ngắt quãng trong trình tự phối hợp

+ Ngắt quãng bao gồm kết hợp nhiều loại lặp lại

+ Ngắt quãng bị chèn bởi một hoặc nhiều base

Ví dụ :

-CACACACACACA - (Hoàn hảo)

-CACACACAGAGAGA - (Phối hợp giữa CA và GA)

Xác định kích thước của alen Microsatellite trên gel điện di có khả năngphân giải cao cho phép xác định được số lần lặp lại và sự sai khác các đơn vị lặplại ở các alen

Được xét nghiệm bằng kỹ thuật PCR

Khi 1 STR được nhân bản trong ống nghiệm sẽ có 1 trong 3 kiểu hình vềkích thước STR tùy thuộc vào STR trong mẫu AND thử nghiệm là đồng hợp tử

vì nhận đoạn lặp từ bố mẹ có kích thước giống nhau hay dị hợp tử vì nhận STR

từ bố khác mẹ

 Đồng hợp tử (alphoid Homozygous ) : Số lần lặp ở locus satellite là giống

nhau do đó chiều dài đoạn lặp là như nhau

…CGTAGCCTTGCATCCTTCTCTCTCTCTCTCTATCGGTACTACGTGG…

…CGTAGCCTTGCATCCTTCTCTCTCTCTCTCTATCGGTACTACGTGG…5’ flanking region microsatellite locus 3’ flanking region

 Dị hợp tử (alphoidHeterozygous): Hai alen ở locus satellite có số lần lặp lại

khác nhau Chiều dài đoạn lặp khác nhau ở hai NST tương đồng

…CGTAGCCTTGCATCCTTCTCTCTCTCTCTCTATCGGTACTACGTGG…

…

CGTAGCCTTGCATCCTTCTCTCTCTCTCTCTCTCTATCGGTACTACGTGG…

I.3.3 Vai trò của ADN Microsatellite

ADN Microsatellite được dùng như một marker (chỉ thị) về di truyền đểnghiên cứu về di truyền quần thể, quan hệ tiến hoá, lập bản đồ gen Tuy nhiên córất nhiều nhân tố cho rằng ADN Microsatellite cũng đóng vai trò là yếu tố mang

mã di truyền hoặc nhân tố điều hòa Như nhân tố điều hoà, Microsatellite đượctìm thấy ở khắp nơi ở phần trước của vùng bắt đầu phiên mã của trình tự mã hoá

và một số đã được tìm thấy nó được bảo toàn có quan hệ với vùng mã hoá.Vùngđiều khiển có chứa Microsatellite hoạt động như một nhân tố thúc đẩy quá trìnhphiên mã Rất nhiều Microsatellite đã được tìm ở vùng phía trên của các vùngkhởi đầu sao mã của vùng mang mã Chúng cũng được tìm thấy ở các vùngtương ứng ở cùng gen ở các loài khác nhau Ví dụ : đoạn Poly (TG) ở vùng trêncủa gen tổng hợp lên tiểu đơn vị RNA Ribosom transcription ở chuột nhắt, chuộtcống và người giống nhau, và vùng phía trên của gen Somatostatin của người,chuột cống rất nhiều tài liệu đã công bố sự bảo tồn của Microsatellite ở các bộ

gen của các loài động vật có vú ở? trâu, bò, hươu, cừu, dê rất nhiềuMicrosatellite giống nhau do vậy rất nhiều nhà nghiên cứu có thể áp dụng kếtquả nghiên cứu từ trâu sang bò và các loài khác và ngược lại, tất nhiên họ phảikiểm tra tính đa hình của các allen.

Như một trình tự mang mã di truyền, ADN Microsatellite đã được tìmthấy biểu hiện ở rất nhiều protein và sự khác nhau ở số lần lặp lại của một đoạnaminoacide giống nhau liên quan đến chức năng tác động của sản phẩm protein

đó Sở dĩ có nhận định này là do : các đoạn nucleotid ngắn ở vùng phía trướcvùng mã hóa hoạt động như vị trí bám cho rất nhiều protein điều hòa đặc biệtbám vào Người ta đã phát hiện ra rất nhiều loại protein bám vào các trình tựkhác nhau của Microsatellite Những protein này đóng góp vào các trình tự khácnhau mà đã được biết là mối tương tác với các yếu tố phiên mã Sự thay đổi về

số lượng lặp lại của các trình tự trong Microsatellite ở vùng phía trước Promotor

có thể dẫn đến sự khác nhau về chức năng protein và hoạt động của gen và cóthể ảnh hưởng tới chức năng sinh lý cũng như hình thái, sự phát triển của cơ thể

Cụ thể những đột biến mất đoạn Microsatellite đã làm giảm chức năng của gen

Ví dụ: Thay đổi chiều dài trong tandemly lặp đi lặp lại các khu vực ở gen

Runx2 dẫn đến sự khác biệt trong chiều dài mặt ở chó thuần (Canis Familiaris),với mối liên quan giữa độ dài chuỗi dài hơn và khuôn mặt dài hơn (Fondon2004) Thay đổi chiều dài ở những vùng polyalanine trong gen HoxA13 gây nênrối loạn phát triển ở người (Utsch 2002)

ADN Microsatellite được coi như là một yếu tố chức năng của hệ gen.Những tính chất đặc biệt của ADN Microsatellite như sự đột biến điểm dẫn đếnnhững giả thuyết cho rằng ADN Microsatellite có thể là một nguồn chủ yếu tạonên sự đa dạng về di truyền số lượng và quá trình tiến hoá thích nghi ( Kashi et

al 1990.1997) Nó cho phép một quần thể có thể khôi phục lại? nguồn đa dạng ditruyền đã bị mất trong quá trình chọn lọc hoặc trôi dạt, nó hoạt động như một

"núm điều chỉnh" mà qua đó những gen đặc biệt có thể điều chỉnh nhanh chóngcác phản ứng thay đổi ít hay nhiều trong quá trình đòi hỏi của tiến hoá (King et

al 1997,1998)

I.3.4 Cơ chế đột biến thay đổi ở Microsatellite

Hiện nay, mặc dù các trình tự ADN microsatellite và ADN minisatelliteđược ứng dụng rất rộng rãi nhưng cơ chế đột biến của chúng vẫn chưa được biếtchính xác Tuy nhiên, nghiên cứu đã chỉ ra rằng tần số đột biến ở các trình tựnày cao hơn các vùng khác trên NST là khoảng 10-2 – 10-6 ở mỗi locus.

Có hai giả thuyết được đưa ra về cơ chế đột biến cao của các đoạn lặp nàyđược nhiều người chấp nhận là:

 Cơ chế trao đổi chéo trong giảm phân

Trong quá trình giảm phân, sự trao đổi chéo giữa các NST không tươngđồng đã tạo nên những đoạn có trình tự lặp của các microsatellite thay đổi.Trong đó có 1 NST tăng chiều dài đoạn lặp ( NST A ) và một NST giảmchiều dài đoạn lặp ( NST B )

Hình 3: Đột biến do cơ chế trao đổi chéo trong giảm phân

 Sự trượt lỗi của enzym ADN polymerase trong quá trình sao chép

Phân tử enzym ADN polymerase trượt lỗi trong quá trình sao chép đã tạo

nên một đoạn phình nhất thời, có thể bị loại bỏ trong quá trình sửa lỗi hoặc cóthể kéo dài thêm ở mạch đối diện Kết quá tạo thành đoạn lặp lại dài hơn

Tương tự, sự hình thành những chỗ phình cũng có thể tạo ra sự giảm củacác đoạn lặp

Quá trình này thường xảy ra trên mạch chậm Do đó thường tạo ra cácđoạn lặp dài hơn

Hình 4: Đột biến trượt lỗi của enzym ADN polymerase trong quá trình

sao chép I.3.5 Các phương pháp phát hiện Microsatelite (STR)

I.3.5.1 Phương pháp phát hiện nhờ đồng vị phóng xạ

Phương pháp hiệu quả và xuất phát điểm được dùng đó là dùng đồng vịphóng xạ, người ta có thể đánh dấu phóng xạ vào một đầu của primer (end-labelling) hoặc trộn lẫn một trong bốn thành phần nucleotide A,T,G,C đượcđánh dấu ( incorporation-labelling) nhưng phương pháp (end-labelling) thườngđược dùng hơn vì nó có nhiều ưu điểm hơn Phương pháp dùng đồng vị phóng

xạ ngày nay rất ít được sử dụng vì nguy hiểm đến sức khoẻ con ngươì và việc xử

lý chất thải

I.3.5.2 Phương pháp phát hiện không dùng phóng xạ.

Phương pháp nhuộm bạc : phương pháp này rẻ,không hại nhưng độ nhạy

cao, đòi hỏi một số thủ tục rắc rối khi nhuộm

Phương pháp lai ghép phân tử : ở đây cho phép xác định chính xác kiểu

Microsatellite bằng cách chuyển qua màng lai cùng một lúc có thể xác địnhđược nhiều kiểu Microsatellite bằng các mẫu dò khác nhau thậm chí cả hai đoạn