Báo cáo thực tập tại Trung tâm Y tế Dự Phòng Hà Tĩnh

 Danh mục các dụng cụ thường dùng trong lấy mẫu thực phẩm:Trang thiết bị, dụng cụ Số lượng bi, bút dạ, bút chì… - Nhãn mác dùng cho mẫu kiểm tra - Nhiệt kế - Lượng cần thiết - Lượng cần

PHẦN I : KHÁI QUÁT VỀ TT Y TẾ DỰ PHÒNG HÀ TĨNH 1

I) Giới thiệu về trung tâm Y tế Dự phòng Hà Tĩnh 1

1> Khái quát về trung tâm Y Tế Dự phòng Hà Tĩnh 1

II> SƠ ĐỒ HOẠT ĐỘNG CỦA 2

PHẦN II NỘI DUNG THỰC TẬP 3 PHẦN I : KHÁI QUÁT VỀ TT Y TẾ DỰ PHÒNG HÀ TĨNH

I) Giới thiệu về trung tâm Y tế Dự phòng Hà Tĩnh 1> Khái quát về trung tâm Y Tế Dự phòng Hà Tĩnh

Trung tâm Y tế Dự Phòng Hà Tĩnh là một đơn vị trực thuộc ngành Y tế tỉnh Hà Tĩnh Được thành lập ngày 29 / 10 / 1991, theo quyết định 234/TCQĐ của UBND tỉnh Hà Tĩnh trên cơ sở sát nhập 3 bộ phận Vệ Sinh Phòng Dịch, Bướu cổ và truyền thông Trung tâm có chức năng xây dựng kế hoạch triển khai thực hiện các chuyên môn về Y tế Dự Phòng và hướng dẫn, giám sát chuyên môn kỹ thuật đối với các trung tâm Y tế dự phòng Huyện, thị, thành phố; nghiên cứu và tham gia nghiên cứu khoa học Bác sỹ Nguyễn Thái Hoạch được cử làm giám đốc trung tâm, bác sỹ Nguyễn Văn Hiến làm phó giám đốc, sau này bổ sung thêm bác sỹ Nguyễn Thanh Hồ làm phó giám đốc trung tâm

Đầu năm 1995, bác sỹ Thái Hoạch nghỉ hưu Bác sỹ Nguyễn Văn Hiến được cử làm giám đốc trung tâm Lần lượt Tiến sỹ Đường Công Lự, Thạc sỹ Nguyễn Lương Tâm được bổ nhiệm làm phó giám đốc trung tâm

Sau 20 năm tách tỉnh Trung tâm y tế dự phòng đã không ngừng lớn mạnh

cả về quy mô lẫn chất lượng chuyên môn Ban đầu chỉ có 14 cán bộ trong đó

có 7 bác sỹ, đến nay Trung tâm hiện có 50 cán bộ, trong đó có:

- 01 Bác sỹ chuyên khoa 2

- 02 Thạc sỹ

- 12 Bác sỹ

- Đại học khác : 12 nhân viên

- Cao đẳng : 2 nhân viên

- Y sỹ và trung cấp khác : 18 nhân viên

- 02 nhân viên lái xe

- 01 nhân viên phục vụ

Toàn cơ quan hiện có 19 Đảng viên, có 24/50 nhân viên nữ.

Trung tâm được bố trí thành 9 khoa phòng: khoa kiểm soát dịch bệnh và

vắc xin sinh phẩm, Khoa sức khoẻ cộng đồng và trường học, Khoa an toàn

vệ sinh thực phẩm và dinh dưỡng, Khoa nội tiết, Khoa vệ sinh lao động và

bệnh nghề nghiệp, Khoa kiểm dịch Y tế và xét nghiệm, phòng tổ chức hành

chính và phòng kế hoạch tài chính

II> SƠ ĐỒ HOẠT ĐỘNG CỦA

TRUNG TÂM Y TẾ DỰ PHÒNG TỈNH

BGĐ GIÁM ĐỐC PHÓ GIÁM ĐỐC

PHÒNG

TỔ CHỨC - HÀNH CHÍNH

PHÒNG TÀI VỤ - KẾ TOÁN

KHOA KIỂM DỊCH YT

KHOA NỘI TIẾT

KHOA SKCĐ

KHOA SK NGHỀ NGHIỆP

KHOA ATVSTP VÀ DD

PHẦN II NỘI DUNG THỰC TẬP.

KHOA XÉT NGHIỆM:

 Phòng xét nghiệm vi sinh:

I Vi Sinh Thực Phẩm (Vệ sinh an toàn thực phẩm).

QUY TRÌNH VÀ PHƯƠNG PHÁP LẤY MẪU THỰC PHẨM ĐỂ XÉT

NGHIỆM VI SINH

(Lấy mẫu giò chả, bún, thịt heo quay, …)

1) Mục đích của việc lấy mẫu thực phẩm để kiểm nghiệm vi sinh vật.

- Để xác định vi sinh vật có trong thực phẩm có thể làm ảnh hưởng tớisức khoẻ người sử dụng thực phẩm đó hoặc làm hư hỏng thực phẩm

- Bên cạnh các điều tra dịch tễ học thì việc xác định tác nhân gây nêncác vụ ngộ độc thực phẩm là hết sức quan trọng

2) Cỡ mẫu:

- Thông thường từ 250 – 500g, ít nhất là 100g mẫu

- Tỷ lệ lượng mẫu lấy trong một lô hàng chiếm khoảng 0,5 - 1‰

3) Dụng cụ dùng để lấy mẫu thực phẩm.

 Dụng cụ lấy mẫu thực phẩm phải đảm bảo các yêu cầu sau:

- Làm bằng vật liệu trung tính, an toàn, vô trùng, không thôi nhiễm cácchất độc hại vào thực phẩm hoặc làm ôi nhiễm thêm

- Không bị thực phẩm ăn mòn, hư hỏng, dẽ cọ rửa, dễ khử trùng

- Dụng cụ đựng mẫu phải có dung tích chứa ít nhất 250g hoặc 250 mlthực phẩm, có nắp đậy kín, tránh rò rỉ ra ngoài

 Danh mục các dụng cụ thường dùng trong lấy mẫu thực phẩm:

Trang thiết bị, dụng cụ Số lượng

bi, bút dạ, bút chì…)

- Nhãn mác dùng cho mẫu kiểm tra

- Nhiệt kế

- Lượng cần thiết

- Lượng cần thiết

- 01Dụng cụ phục vụ cho

việc vận chuyển mẫu

- Dây cao su buộc

4) Kỹ thuật lấy mẫu:

- Mỗi loại thực phẩm phải được lấy và chứa đựng trong một dụng cụ vôtrùng riêng biệt

- Trộn đều từng loại trước khi lấy mẫu

- Lượng mẫu lấy đúng theo quy định

- Dán nhãn có ghi đầy đủ các thông tin về mẫu như: tên mẫu, ngày lấymẫu, tên và địa chỉ của bên yêu cầu kiểm nghiệm, các yêu cầu kiểmnghiệm, tình trạng khi lấy mẫu

- Lấy mẫu trong tình trạng không làm tạp nhiễm thêm vào mẫu

5) Bảo quản và vận chuyển

- Mẫu phải được bảo quản và vận chuyển trong điều kiện không làmthay đổi số lượng vi khuẩn có trong thực phẩm

- Mẫu phải được bảo quản trong hộp xốp, bình cách nhiệt có chứa đáhoặc đá khô trong suốt quá trình vận chuyển Riêng đối với thực phẩmkhô, đồ hộp không cần bảo quản lạnh.

- Mẫu sau khi lấy phải được chuyển ngay về phòng kiểm nghiệm vàbảo quản theo các quy định về lưu giữ mẫu ở phòng kiểm nghiệm

6) Yêu cầu đối với phòng kiểm nghiệm:

6.1: Tiếp nhận và lưu giữ mẫu:

- Nhân viên phòng kiểm nghiệm phải kiểm tra trạng thái của mẫu khi tiếpnhận Nếu trạng thái không đảm bảo hoặc mẫu không đầy đủ, thông thườngphòng kiểm nghiệm không được nhận mẫu đó Trong trường hợp đặc biệtnhân viên phòng kiểm nghiệm có thể phân tích chúng nhưng phải ghi chú lạitình trạng mẫu khi báo cáo kết quả

- Ở phòng kiểm nghiệm mẫu thực phẩm phải được tiếp tục bảo quản ở ngay

ở nhiệt độ thích hợp đối với từng loại mẫu

- Thực phẩm đông lạnh phải được bảo quản ở nhiệt độ <-5oC

- Thực phẩm tươi, thực phẩm chế biến sẵn phải được giữ ở nhiệt độ 0 – 5oC

- Thực phẩm khô, đồ hộp không cần bảo quản lạnh ( chỉ cần bảo quản ởnhiệt độ phòng)

6.2 Lấy mẫu thử:

- Để tránh xảy ra tạp nhiễm giữa môi trường và mẫu thử nên tiến hành lấymẫu thử trong phòng vô trùng Các sản phẩm được dự đoán là có rất vi sinhvật ( ví dụ sản phẩm đã tiệt trùng, món ăn đã nấu ) bao giờ cũng kiểm tratrước tiên, tiếp theo mới kiểm tra mẫu dự đoán bị nhiễm cao hơn

- Việc bảo vệ môi trường khỏi bị tạp nhiễm là đặc biệt quan trọng trong quátrình cân và lấy mẫu thử từ các sản phẩm dạng bột bị nhiễm cao Các bướctiến hành này phải thực hiện trong tủ an toàn sinh học

- Phải lấy mẫu sao cho tránh được bất kỳ lây nhiễm nào Để đạt được điều

đó phải chú ý như sau:

 Khi không làm việc trong tủ an toàn: tiến hành lấy mẫu trong tầmngọn lửa đèn cồn

 Đối với sản phẩm đã bao gói sẵn: lau sạch bên ngoài bằng cồn sátkhuẩn tại vị trí sẽ mở, nếu có thể thì đốt bằng ngọn lửa

 Dùng dụng cụ để mở bao gói ( cái mở hộp, mở nút chai, kéo.) dụng cụlấy mẫu ( thìa, kẹp, pipet ) phải vô trùng

 Đánh dấu cẩn thận số ký hiệu của mẫu thử trên vật chứa, túi ni lonchứa mẫu thử

KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH TỔNG SỐ COLIFORMS TRONG THỰC PHẨM

1) Nguyên lý kỹ thuật:

Coliform là những vi khuẩn hình thành các khuẩn lạc đặc trưng trênthạch lactoza và lên men đường lactoza và có sinh khí Phương pháp sửdụng kỹ thuật đổ đĩa, nuôi cấy một lượng mấu quy định trên môi trườngthạch VRBL ở nhiệt độ 37oC trong 24 giờ Đếm những khuẩn lạc đặc trưngđược khẳng định bằng lên men đường lactoza

2) Dụng cụ, môi trường, thuốc thử:

+ Môi trường khẳng định: canh thang mật lactoza lục sáng BGBL

( Brillian green bile lactose)

3.1 Đồng nhất và pha loãng mẫu: Cân 25g mẫu trong điều kiện vô trùng,

cho vào túi đựng mẫu vô trùng Cho thêm 225 ml dung dịch Pepton đệm.Nghiền mẫu bằng máy nghiền Stomacher trong 1 phút Thu được dung dịchmẫu thử 10-1 Tiếp tục pha loãng để thu được dung dịch mẫu thử 10-2, 10-3 ,

10-4…

3.2 Nuôi cấy:

- Với mỗi mẫu phải nuôi cấy ít nhất ở 2 độ pha loãng liên tiếp Việc quyếtđịnh nuôi cấy ở độ pha loãng nào tuỳ thuộc mức độ nhiễm bẩn dự kiến củamẫu sao cho không quá 150 khuẩn lạc trong mỗi đĩa Mỗi độ pha loãng nuôicấy 2 đĩa Phải dùng pipet riêng cho mỗi độ pha loãng và thời gian từ khipha loãng mẫu đến khi nuôi cấy xong không quá 20 phút

- Dùng pipet vô trùng hút 1 ml dung dịch mẫu thử 10-2 cho vào 2 đĩa petri vôtrùng Dùng một pipét vô trùng khác hút 1ml dung dịch mẫu 10-3 cho vào 2đĩa petri khác

- Thạch VRBL đun tan chảy để nguội khoảng 45±0,5oC, rót vào mỗi đĩa 15

ml thạch, lắc trộn đều mẫu và môi trường Để đông ở nhiệt độ phòng thí

nghiệm trên mặt phẳng ngang Rót tiếp 4 ml thạch VRBL lên lớp thạch đãđông, láng đều mặt.

- Đổ một đĩa để kiểm tra độ vô khuẩn của môi trường VRBL và thao táctương tự nhưng không có dịch cấy

- Ủ trong tủ ấm 37oC trong 24-48 giờ

3.3 Đếm các khuẩn lạc và khẳng định:

- Sau thời gian nuôi cấy, nếu có thể, chọn các đĩa petri có từ 10 đến 150khuẩn lạc, đếm các khuẩn lạc có màu đỏ ánh tía có đường kính 0,5mmhoặc lớn hơn ( đôi khi có vùng mật tủa hơi đỏ bao quanh) Các khuẩnlạc này được coi là các coliforms điển hình và không cần phải thửkhẳng định

- Đếm và khẳng định các khuẩn lạc điển hình có kích cở nhỏ hơn và tất

cả các khuẩn lạc có nguồn gốc từ các sản phẩm sữa và có chứa đườngkhông phải là đường lactoza Việc chuyển hoá đường không phải làđường lactoza có thể làm cho khuẩn lạc có hình dạng nhìn tương tựnhư coliform điển hình

- Khẳng định: cấy 5 khuẩn lạc của từng loại không điển hình vào cácống BGBL Ủ các ống nghiệm này trong tủ ấm 37oC trong 24h±2h.Các ống Durham cho thấy có sinh khí thì dược coi là có chứacoliform

được trên các đĩa

V: thể tích dung dịch mẫu cho vào mỗi đĩa petri

n1: số đĩa được giữ lại để đếm ở nồng độ thứ nhất

n2: số đĩa được giữ lại để đếm ở nồng độ thứ hai

d: hệ số pha loãng thấp nhất được sử dụng

* Làm tròn kết quả tính được tới số hàng trăm và biểu thị kết quả theo biểu

thức: n.10 x

Trong đó: n: số thập phân tương ứng từ 1,0 đến 9,9

x: số mũ phù hợp của 10

d n n V

C N

) 2 1

- Nếu cả hai đĩa chứa huyền phù ban đầu (ứng với độ pha loãng 10-1) đều chứa ít hơn 15 khuẩn lạc, lấy trung bình số học của chúng và khi

đó kết quả được tính:

= 10m vi khuẩn hiếu khí/g

(d là hệ số pha loãng của dịch

huyền phù ban đầu, bằng 10-1)

Ví dụ:

mẫu Sữa: - Ở nồng độ 10-1 đếm được 1 đĩa có 143 khuẩn lạc

- Ở nồng độ 102 đếm được 1 đĩa có 12 khuẩn lạc

m 1





d n n V

C N

) 2 1

1

10 ).

1 1 ( 1

KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH TỔNG SỐ E.COLI TRONG THỰC PHẨM

A Kỹ thuật xác định tổng số E coli trong thực phẩm.

- Bông, cồn sát khuẩn, viết dạ kính

Chuẩn bị môi trường:

2.1 môi trường tăng sinh chọn lọc: Canh thang tryptose lauryl sulfat.

Hoà tan các thành phần hoặc môi trường hoàn chỉnh khô trong nướcbằng cách đun nóng nếu cần Chỉnh pH sao cho sau khi khử trùng pH bằng6,8± 0,2 ở 25oC, nếu cần.

Phân phối từng lượng 9ml môi trường này vào các ống nghiệm có kíchthước 16 mm x 160 mm chứa các ống Durham đối với môi trường nồng độđơn là 10 ml vào các ống thử có kích thước 18 mm x 180 mm hoặc 20 mm x

200 mm chứa các ống Durham với môi trường nồng độ kép Khử trùng 15phút trong nồi áp lực ở nhiệt độ 121oC

2.2 Môi trường chọn lọc: Canh thang EC

2.3 Nước pepton, không chứa Indol

Hoà tan các thành phần hoá học hoặc môi trường hoàn chỉnh khô trongnước bằng cách đun nóng nếu cần Chỉnh pH sao cho sau khi khử trùng pHbằng 7,3± 0,2 ở 25oC, nếu cần

Phân phối từng lượng 10ml môi trường này vào các ống nghiệm có kíchthước 16 mm x 160 mm Khử trùng 15 phút trong nồi áp lực ở nhiệt độ

121oC

2.4 Dung dich đệm pepton.

3.1 Đồng nhất và pha loãng mẫu: Cân 25g mẫu trong điều kiện vô trùng,

cho vào túi đựng mẫu vô trùng Cho thêm 225 ml dung dịch Pepton đệm.Nghiền mẫu bằng máy nghiền Stomacher trong 1 phút Thu được dung dịchmẫu thử 10-1 Tiếp tục pha loãng để thu được dung dịch mẫu thử 10-2, 10-3 ,

10-4…

việc quyết định nuôi cấy ở độ pha loãng nào tuỳ thuộc mức độ nhiễm bẩn dựkiến của mẫu.Phải dùng pipet riêng cho mỗi độ pha loãng và thời gian từ khipha loãng mẫu đến khi nuôi cấy xong không quá 20 phút

3.2 Nuôi Cấy:

- Dùng pipep vô khuẩn chuyển vào bộ 3 ống nghiệm chứa canh thangtryptoza lauryl sulfat lỏng nồng độ kép 10ml mẫu thử nếu sản phẩm ban đầu

là chất lỏng hoặc 10 ml huyền phù ban đầu nếu các sản phẩm ở dạng khác

- Dùng pipep vô trùng chuyển vào 3 ống canh thang tryptoza lauryl sulfatnồng độ đơn 1ml mẫu thử nếu sản phẩm ban đầu là chất lỏng hoặc 1 mlhuyền phù ban đầu nếu các sản phẩm ở dạng khác

- Đối với độ pha loãng tiếp theo, tiếp tục như mô tả ở trên Sử dụng mỗipipet vô trùng cho mỗi độ pha loãng Trộn kỹ dịch cấy với môi trường

- Nuôi cấy trong tủ ấm với nhiệt độ 37oC trong 24h±2h Nếu ở giai đoạn nàykhông sinh khí cũng như không bị mờ đục làm cản trở việc quan sát sự sinhkhí thì ủ tiếp đến 48h± 2h

- Từ các ống đã ủ ấm có biểu hiện sinh khí hoặc đục mờ, cấy truyền mộtvòng cấy sang ống nghiệm đựng canh thang EC Ủ các ống nghiệm ở nhiệt

độ 44oC trong 24h±2h Nếu giai đoạn này không thấy sinh khí trong canhthang EC thì kéo dài thời gian ủ đến 48h± 2h

- Nếu quan sát thấy sinh khí ở canh thang EC, thì cấy chuyển một vòng dịchcấy vào nước pepton ( đã được làm ấm đến 44oC), ủ ở 44oC trong 48h

- Kiểm tra sự sinh Indol bằng cách thêm 0,5 ml thuốc thử Kovacs vào cácống chứa pepton, trộn kỹ và kiểm tra sau 1 phút Nếu trong pha cồn có màu

đỏ, chứng tỏ có Indol

4 Tính kết quả

Đếm toàn bộ số ống canh thang nuôi cấy dương tính, tra bảng MPN 3 hàng ống tính ra số vi khuẩn có trong 1ml/ 1g thực phẩm

Thí dụ lựa chọn các kết quả dương tính đối với việc tính toán MPN:

Mẫu Số ống dương tính nhận được từ 3 ống

được ủ ấm đối với số mẫu được nuôi cấy

trên ống

MPN

Sp lỏng 10ml 1ml 10-1ml 10-2ml 10-3ml Các SP khác 1g 10-1g 10-2g 10-3g

10-4g Sản phẩm lỏng Các dạng sản phẩm khác 1 2 3 4 3 3 3 0

2 2 1 1 0

3 3 0 0 0

2 2 0 1 0

2,4

2,4 102 7

7 101 2,4

2,4 101 2,1 10-1 2,1

II Vi Sinh Nước:

Xét nghiệm Coliform, E.coli trong nước

PHƯƠNG PHÁP LẤY MẪU NƯỚC ĐỂ XÉT NGHIỆM

VI SINH

1) Chuẩn bị lấy mẫu nước

1.1 Chuẩn bị dụng cụ :

- Chai thuỷ tinh hoặc chai nhựa có nút 200ml-1000ml tuỳ nhu cầu

Yêu cầu 1: Dụng cụ lấy nước phải vô khuẩn.

Chai lấy mẫu là chai thuỷ tinh trung tính, chịu được nhiệt độ cao khi khửtrùng, dung tích từ 300-1000ml, có miệng rộng, chiều cao của chai trên 15

cm chai lấy mẫu phải được ngâm hoá chất khử khuẩn rồi súc rửa sạch, súcrửa lần cuối cùng với nước cất, để khô ráo, khử khuẩn ở nhiệt độ 121oC/15phút

Nút chai là bông không thấm nước hoặc nút mài thuỷ tinh văn vừa khít,hoặc nút nhựa, bên ngoài được bọc bởi một lớp giấy bạc không thấm nước.tất cả các chai và nút chai cần được hấp và sấy vô khuẩn chỉ trong vòng 2tuần trước khi lấy mẫu

1.2 Khử clo dư trong nước.

Yêu cầu 2: khử clo dư trong nước để loại trừ khẳ năng vi khuẩn tiếp tục bị

tiêu diệt

Nước được khử trùng bằng các hợp chất Clo, lượng clo có thể tồn lưutrong nước sau khi lấy mẫu Lượng Clo dư này sẽ tiếp tục tác động lênnhững vi khuẩn còn sống trong mẫu nước làm cho kết quả xét nghiệm visinh sau này không thể hiện chính xác số lượng vi khuẩn còn sống va tồn tạitrong mẫu nước vào thời điểm lấy mẫu Muốn phát hiện số vi khuẩn còn

sống tại thời điểm lấy mẫu, cần cho thêm Natri thiosulfit (Na 2 S 2 O 3 )

để khử clo dư trong nước

Thêm (Na 2 S 2 O 3 ) vào chai định lấy mẫu nước có clo dư, trừ khi chai

đựng mẫu có chứa sẵn môi trường nuôi cấy vi khuẩn thì không cho thêm

(Na 2 S 2 O 3 ).

Thêm đủ (Na 2 S 2 O 3 ) vào chai đã được khử khuẩn để có được nồng độ

100 mg/l trong mẫu nước Đối với chai có dung tích trên 120ml thì thêm

10ml 10% (Na 2 S 2 O 3 ) ( cho phép trung hoà một mẫu chứa khoảng 15 mg/l

clo dư.)

Cần dán nhãn lên chai mẫu để biết đã cho (Na 2 S 2 O 3 ).

Riêng đối với các mẫu nước có chứa nồng độ cao kẽm hoặc đồng, cácmẫu nước thải có chứa kim loại nặng cao thì dùng chất gắn đặc hiệu đểtrung hoà chúng Nhất là đối với các mẫu nước được vận chuyển trong thờigian quá 4 tiếng đồng hồ, việc trung hoà rất cần

2) Kỹ thuật lấy mẫu nước về vi sinh

2.1 Cách thức lấy một mẫu nước:

Lấy mẫu vào chai và chừa ít nhất 2,5 cm chiều cao của chai để dễ lắc trộnmẫu sau này Dù bất cứ loại nước nào, cách lấy mẫu cũng như nhau, nghĩa làphải tuyệt đối vô khuẩn Cách lấy mẫu liên quan tới kết quả kiểm nghiệmsau này

2.2 Lấy nước vòi

Trước khi lấy mẫu phải dùng khăn lau sạch chất bẩn bám vào đầu vòinước, đốt vòi bằng ngọn lữa đèn cồn trong 1 phút Mở vòi, để cho nước chảy2-3 phút để làm sạch đường ống mở giấy bọc chai thuỷ tinh, dùng kẹp/pince rút nút bông hoặc nút thuỷ tinh, hơ miệng chai trên ngọn lữa đèn cồn

va hứng nước chảy vào chai Không để nước bắn tung toé khi lấy nước vòi.Lấy đủ nước xong lập tức hơ miệng chai trên ngọn lữa đèn cồn, đậy nútngay

2.3 Lấy nước ao, hồ, sông suối

Tuỳ theo mục đích mà vị trí lấy mẫu và số lượng mẫu cần lấy được quyđịnh khác nhau Để đánh giá chất lượng nước dùng làm nguồn cung cấp chotrạm xử lý nước sinh hoạt người ta có thể phải lấy nhiều mẫu trên nhiều mặtcắt khác nhau của ao, hồ

Trong trường hợp chỉ lấy một mẫu đại diện thì ta chọn vị trí lấy mẫu nhưsau:

- Nước ao hồ: Giữa ao hồ

- Sông suối: Giữa dòng chảy của sông

Chiều sâu lấy mẫu bằng ½ chiều sâu lớp nước tại nơi đó nhưng phải cáchmặt nước ít nhất 30cm để tránh ảnh hưởng diệt khuẩn do ánh sáng mặt trời

Để lấy mẫu nước sông, hồ ta dùng dụng cụ lấy mẫu nước gọilà quang lấymẫu trước hết khử khuẩn quang bằng ngọn lửa đèn cồn, lắp chai lấy mẫuvào

Dùng kẹp / pince rút nút bông hoặc nuts thuỷ tinh, hơ miệng chai trênngọn lửa đèn cồn rồi thả nhanh xuống nước đến độ sâu cần thiết khi nướcvào đầy chai, kéo quang lên, đổ bớt nước trong chai rồi hơ miệng chai trênngọn lữa đèn cồn, đậy nút ngay

2.4 Nước giếng đào, nước trong bể chứa không có vòi.

Mẫu nước được lấy giữa giếng, bể thao tác lấy mẫu giống như nước sông

3) Thể tích mẫu nước

Yêu cầu 4 :

Lấy nước đủ cho xét nghiệm va lưu trữ, không lấy đầy dễ làm nhiễmmẫu nước Nếu xét nghiệm 3 chỉ tiêu, cần 100ml nước cho 1 chỉ tiêu thì nênlấy trên 600ml, trrong đó:

- 300ml để xét nghiệm lần thứ nhất

- Lượng nước còn lại đủ để xét nghiệm lần 2, hoặc lần 3

3.1 Ghi nhãn ở chai nước

Yêu cầu 5: Mỗi mẫu nước gửi đi kiểm nghiệm phải có nhãn ghi đầy đủ.

Gồm:

- Tên đơn vị, cá nhân gửi mẫu

- Địa điểm lấy nước

- Loại nước ( nước bề mặt, nước giếng, nước máy, nước lọc quabình…)

- Ngày giờ, tháng, năm lấy nước ( phải ghi giờ)

- Yêu cầu xét nghiệm vi sinh ( từng chỉ điểm cụ thể)

- Mục đích xét nghiệm ( dùng cho ăn uống, sinh hoạt, kỹ thuật)

- Tên người lấy mẫu nước

- Cách thức bảo quản mẫu

3.2 Bảo quản và cất giữ mẫu.

Yêu cầu 6: Lưu mẫu đảm bảo số lượng vi khuẩn trong nước không

thay đổi

Bắt đầu xét nghiệm vi sinh một mẫu nước ngay lập tức sau khi thu thậpmẫu, tránh những thay đổi về số lượng vi sinh vật

Nếu chưa thể xét nghiệm ngay, nên bảo quản mẫu trong thùng lạnh, túinước đá ở 2-4oC trong suốt qua trình vận chuyển đến phòng thí nghiệm Nếukhông có nước đá để bảo quản thì phải gửi về phòng thí nghiệm trong vòng

1 giờ sau khi lấy nước Giữ lạnh mẫu nước trong phòng thí nghiệm trongvòng không quá 24 giờ

XÁC ĐỊNH COLIFORM TỔNG SỐ, COLIFORM CHỊU NHIỆT,

ESCHERICHIA COLI Phương pháp lên men nhiều ống – Phương pháp MPN

1) Nguyên lý

1.1 Khái niệm về phương pháp lên men nhiều ống.

Do vi khuẩn không phân tán đều trong nước, cho nên trong cùng một thểtích nước, số lượng vi khuẩn tronh những thể tích đó thường khác nhau.Giả sử trong 1000ml nước có 10.000 vi khuẩn A, khi lấy 1ml từ mẫunước này, không chắc chắn trong đó đã có 10 vi khuẩn A mà có thể có nhiềuhơn hoặc ít hơn 10 Do v

B ậy, nếu định lượng vi khuẩn (đếm vi khuẩn ) từ một thể tích nước nhấtđịnh lấy ra từ mẫu rồi nhân lên với hệ số pha loãng để có kết quả vi khuẩntrong 100ml hoặc 1000 ml mẫu thì ta sẽ mắc sai lầm, do sự phân tán khôngđồng đều của vi khuẩn trong mẫu gây nên

Để giảm thiểu sự sai lệnh này, người ta áp dụng phương pháp xác suấtthống kê kết hợp với kỹ thuật vi sinh vật học để định lượng vi khuẩn Theo

đó, người ta nuôi cấy vi khuẩn trong nhiều ống môi trường với nhiều lượngthử thập phân khác nhau Dựa vào số ống dương tính trong mỗi bậc phaloãng, tra vào bảng thống kê tính sẵn, người ta sẽ tính được số lượng vikhuẩn có trong 100ml nước thử Một phối hợp gồm 3 hàng ống ( 3 bậc nồngđộ), mỗi hàng 5 ống là phối hợp thường được dùng nhất

Phương pháp này, do vậy được gọi là Phương pháp lên men nhiều ống Phương pháp này thường được gọi tắt là phương pháp MPN ( the Most Probable Number ) do kết quả tìm được từ bảng thống kê là con số có lẽ đúng nhất về số lượng vi khuẩn có trong 100ml thể tích mẫu.

1.2 Nguyên lý của thử nghiệm coliform tổng số, coliform chịu nhiệt, E.coli:

Dựa trên đặc tính của nhóm Coliform là có khả năng lên men đườnglactose, tạo ra sản phẩm hoá học trung gian là aldehyt, axit và sinh hơi ở 35-

370C trong vòng 24-448 giờ, người ta tăng sinh mẫu nước vào ống canhthang CLP, có chứa lactose và chỉ thị đỏ phenol với 1 phao Durham Sau khi

ủ ở nhiệt độ và thời gian thích hợp, ống canh thang nào có Coliform sẽ lênmen lactose, sinh axit làm canh thang từ màu đỏ (PH=7-7,4) sẽ chuyển sangmàu vàng (PH=6,8); đồng thời, coliform sinh hơi được giữ lại trong ốngDurham (úp ngược) những ống chuyển màu như vậy, được đọc là ốngdương tính sơ bộ.

Để khẳng định, người ta dựa vào tính chất sinh aldehyt của coliform bằngcách lấy các ống CLP dương tính trên thạch EMB hoặc ENDO chứa hợpchất fuchsin – sulfite Aldehyt sinh ra sẽ kết hợp với sulfite và giải phóngfuchsin trên mặt thạch, thạch có màu hồng đỏ và ánh kim

Để xác định coliform chịu nhiệu, ta cũng làm như trên, nhưng dùng nhiệt

độ ủ là 44,5 ± 0,20C

2 Dụng cụ môi trường

2.1 Dụng cụ:

- Pipet 1-2ml: ít nhất 2 cái, tuỳ số lượng vi khuẩn có trong 1ml nước mà

số pipet sẽ tăng lên

- Pipet 5 ml : 2 cái

- Pipet 10 ml hoặc 20 ml hoặc 25 ml : 1 cái

- Ống nghiệm 18x180mm chứa 10 ml canh thang lactose đậm đặc, có ốngDurham : 10

- Ống nghiệm 16x 160mm chứa 5-10 ml canh thang lactose loãng, có ốngDurham: 20

- Ống nghiệm 16x 160mm chứa đúng 9ml NaCl 9‰, nếu chưa đủ 9ml phảithêm đủ

- Đĩa Petri d = 75 hoặc 90 mm : 2 -4 cái

Các dụng cụ trên đã được hấp sấy vô khuẩn

2.2 Môi trường ( dùng cho 1 mẫu)

- Nước muối sinh lý (Nacl 9‰), chỉnh dung 9ml/ ống nghiệm 18: 1 ống

- Ống CLP ( canh thang latose có chỉ thị màu đỏ phenol), pH = 7,2 – 7,4 vàphao Durham

Có 2 loại:

 Canh thang đâm đặc ( gấp 2 lần bình thường) ; 5 ống

 Canh thang loãng ( bằng 1 lần bình thường) : 10 ống

- Thạch ENDO hoặc thạch EMB đỗ sẵn ra đĩa: 2 đĩa d = 75 – 90 mm

- Lắc đều chai mẫu Rút giấy bọc các ống nghiệm, dùng kẹp rút 2/3 nútbông.

- Dùng pipet 10ml vô khuẩn hút 10 ml nước ban đầu cho vào mỗi ống CLPđậm đặc

- Dùng pipet 5ml vô khuẩn lấy 1 ml nước ban đầu cho vào ống nghiệm CLPloãng ở hàng thứ 2

- Tiếp tục cho 1ml nước ban đầu cho vào ống NaCl 9‰ 9 ml để có lượngthử 1/10 ( 10-1)

- Dùng pipet 5 ml khác trộn đều và hút 1ml nước 1/10ml cho vào mỗi ốngCLP loãng ở hàng thứ 3

Một phối hợp lượng thử như trên được gọi là phối hợp 10-1-0,1 hoặc 10– 1 – 10-1

- Cầm giá ống nghiệm lắc đều cho vào tủ ấm 37oC và ủ trong 48 ± 3giờ

Đọc kết quả của test sơ bộ: sau khi ủ những ống canh thang CLP chuyển

màu vàng và có bọt khí trong phao thì được ghi nhận là dương tính ở bướcthử sơ bộ

* Test khẳng định:

- Dùng bút viết kính kẻ trên mặt đáy đĩa thạch EMB hoặc ENDO một số ôứng với số ống CLP dương tính sơ bộ, ghi thông tin về lượng thử các ô,thông tin về mẫu, ngay giờ cấy

- Dùng que cấy, cấy ria từng que cấy riêng biệt từ mỗi ống canh thang dươngtính của test sơ bộ vào mỗi ô kẻ sẵn ứng với lượng thử đã ghi trên đó

- Đặt úp các đĩa thạch vào tủ ấm 37oC/24 giờ

Đọc kết quả khẳng định:

Các ô nào xuất hiện khuẩn lạc màu hồng đỏ, có ánh kim được ghi nhận lầ

ô dương tính với Coliform Đếm số ô dương tính ở các lượng thử và ghi lại

Ví dụ : hàng 10 ml mẫu có 5 ô dương tính, hàng 1ml mẫu có 3 ô dương tính,

hàng 10-1 có 1 ô dương tính, ta sẽ ghi nhận kết quả là 5-3-1

Tra bảng MPN ứng với phối hợp 3 hàng ống mỗi hàng 5 ống ta được kết quảbằng 110 vậy, kết quả coliform tổng số ( đơn vị tính là MPN/100ml) là :110/100ml

2.1.2 Thử nghiệm đối với nước bẩn.

Đối với những mẫu nước bẩn hơn nếu dùng phối hợp lượng thử nhưtrên có thể sẽ dẫn đến kết quả 15 ống thử đều dương tính Khhi tra bảngMPN, kết quả của phối hợp trên sẽ là 5-5-5 cho ta giá trị coliform/100ml sẽ

> 2.400 mà không biết được con số chính xác hơn của coliform

Muốn có kết quả rõ ràng hơn, ta cần phải dùng phối hợp các lượng thửnhỏ hơn

Ví dụ :

Trường hợp 1 : 1 – 0,1 – 0,01ml hay viết là: 1 – 10-1 – 10-2

Trường hợp 2 : 0,1 – 0,01 – 0,001ml hay viết là 10-1 – 10-2 – 10-3

Trường hợp 3: 0,01 – 0,001 – 0,0001ml hay viết 10-2 - 10-3 – 10-4

Còn có thể pha loãng hơn nữa nước càng bẩn càng phải pha loãng nhiềuhơn nữa

Trong thực hành, để có lượng thử 0,01ml (10-2) ta dùng pipet vô khuẩnhút lấy 1ml nước thử đã pha loãng 10-1 rồi cho vào ống chứa 9ml nước muối9‰ và hút trộn đều dùng pipet khác, lấy 1ml dung dịch này cho vào mỗiống của hàng ống có lượng thử 0,001 (hay 10-2)

Làm tương tự cho các bậc pha loãng khác

Vì không dùng đen lượng thử 10ml nên 15 ống CLP được sử dụng đều làCLP loãng

Các bước thử nghiệm sơ bộ và khẳng định đều làm giống như mục2.1.1

Khi tính kết quả, nếu pha loãng mẫu đi bao nhiêu lần, phải nhớ nhânlên bấy nhiêu lần tuỳ theo mức pha loãng đã thực hiện so với mức cơ bản(10-1-10-1)

Ví dụ: đã dùng phồi hợp lượng thử: 0,1 - 0,01- 0,001ml (10-1 – 10-2 –

10-3) và kết quả số ống dương tính là 5 – 3 – 1 Sauk hi tra bảng MPN đượcgiá trị 110, để có kết quả về độ đậm của Coliform /100ml ta phải nhân với100

Vậy, kết quả Coliform tổng số (MPN/100ml) sẽ là: 11.000

(hay 11 x 103 )

2 2 Coliform chịu nhiệt

Để định lượng Coliform chiuh nhiệt ta thực hiện quy trình giống như đã

trình bày trong phần Coliform tổng số ngoại trừ trong bước test sơ bộ nhiệt

độ ủ sẽ là 44,5 ± 0,2 giờ.

ESCHERICHIA COLI

E.coli là dạng coliform cĩ nguồn gốc từ phân phát triển được ở44±0,2oC ( một số chủng cĩ thể phát triển ở 37oC chứ khơng phát triển ở44±0,2oC), lên men đường lactose, sinh indol từ tryptophan, sinh hơi và acid( cĩ một số chủng khơng sinh hơi ), phản ứng Oxydase và Urea âm tính.khơng sinh aceoin và khơng dùng citrate làm nguồn carbon duy nhất

Nguyên tắc: E.coli được phát hiện do khả năng lên men lactose sinh hơi

ở 44±0.2oC và cĩ kết quả nghiệm pháp IMVIC phù hợp

1 Vật liệu

- Pipette khắc vạch 10 ml – 1 ml vơ trùng

- Que cấy, đèn cồn

- Nước muối sinh lý 9‰ đĩng ống 9 ml vơ trùng

- Canh thang Lactose lỗng đĩng ống cĩ ống sinh hơi

- Canh thang BGBL (Brilliant Green Bile Lactose 2%)

- Thạch EMB Agar

2 Mơi trường nuơi cấy:

+ Canh thang lactose broth (g.l-)

- Lắc đều chai mẫu Rút giấy bọc các ống nghiệm, dùng kẹp rút 2/3 nútbông.

- Dùng pipet 10ml vô khuẩn hút 10 ml nước ban đầu cho vào mỗi ống CLPđậm đặc

- Dùng pipet 5ml vô khuẩn lấy 1 ml nước ban đầu cho vào ống nghiệm CLPloãng ở hàng thứ 2

- Tiếp tục cho 1ml nước ban đầu cho vào ống NaCl 9‰ 9 ml để có lượngthử 1/10 ( 10-1)

- Dùng pipet 5 ml khác trộn đều và hút 1ml nước 1/10ml cho vào mỗi ốngCLP loãng ở hàng thứ 3

Một phối hợp lượng thử như trên được gọi là phối hợp 10-1-0,1 hoặc 10– 1 – 10-1

- Cầm giá ống nghiệm lắc đều cho vào tủ ấm 37oC và ủ trong 24 - 48 giờ

Đọc kết quả của test sơ bộ: sau khi ủ những ống canh thang CLP chuyển

màu vàng và có bọt khí trong phao thì được ghi nhận là dương tính ở bướcthử sơ bộ

- Dùng que cấy cấy chuyển các ống dương tính vào môi trường canh thangBGBL có phao Durham

- Để tủ ấm 37oC trong 24-48h

Đọc kết quả: Những ống dương tính là những ống làm đục môi trường, sinh

hơi trong phao

- Để tủ ấm 37oC trong 24h lấy ra đọc kết quả.

* Đọc kết quả:

- Trên môi trường EMB, ENDO, chọn các khuẩn lạc rời, có ánh kim trên bềmặt của từng ô để thực hiện phản ứng IMVIC cho mỗi ô đó

- Trên môi trường Chromocul chon 1-5 khuẩn lạc cố màu tím, xanh trên mỗi

ô, thực hiện phản ứng IMVIC cho mỗi ô đó

- Tra bảng MPN (10 – 1 – 0,1 ): kết quả E.coli/100ml

- Nếu có pha loãng, nhớ nhân kết quả với số lần đã pha loãng, kết quảcuối cùng phải được tính trên 100ml đã được thử nghiệm

So sánh QCVN 01-2009/BYT đánh giá kết quả kết quả mẫu nước.



III XÉT NGHIỆM VIRUT VIÊM GAN B

Định nghĩa: Vi rút gây viêm gan là những vi rút có ái tính với tế bào gan,

đây là tế bào đích mà vi rút xâm nhập, nhân lên và gây tổn thương Tuy cócùng tế bào đích, nhưng các vi rút viêm gan có cấu trúc, đường xâm nhập,

cơ chế lan truyền khác nhau Do vậy, đến nay các vi rút viên gan chính đượcchia làm 5 loại: A, B, C, D, và E

Test chẩn đoán nhanh virut Viêm Gan B

1.1Nơi chọc lấy mẫu

Tĩnh mạch nếp gấp khuỷu tay nơi rỏ nhất và nổi nhất, nên chọc vào mộttrong những nhánh của chữ Y, hơi cao hơn điểm nối tiếp nếu cần,… bằngcách dặt garro phía trên cổ tay

1.2Chuẩn bị bơm kim tiêm và dụng cụ đựng mẫu

Ghi nhãn mẫu xét nghiệm: số xét nghiệm, tên bệnh nhân, hoặc dán mã sốxét nghiệm ( đã in sẵn) vào mẫu xét nghiệm của bênh nhân

Xé vỏ bơm kim tiêm, kéo pittong vài lần để kiểm tra bơm tiêm, đồngthời để dễ lấy máu

Lấy máu tĩnh mạch bằng bơm kim tiêm sử dụng một lần:

- Sát trùng nơi lấy mẫu bằng miếng bông thấm cồn 700.

- Dùng ngón tay trỏ tìm điểm chính xác để chọc Nếu khó xác định cóthể nói bệnh nhân gập tay lên xuống vài lần để nỗi tĩnh mạch lên )

Không bao giờ tiếp xúc với tĩnh mạch từ phía cạnh, không bao giờ chọcvới đầu vát của mũi kim quay xuống dưới

Kim tiêm được đặt ở tư thế hơi hướng lên trên một góc 200 so với cánhtay Tỳ chắc ngón trỏ vào đốc kim và chọc kim vào giữa tĩnh mạch bằng mộtđộng tác thật là nhanh, không ngập ngừng ( nếu trúng veine sẽ có cảm giácnặng tay hơn và sẽ thấy máu chảy vào đốc kim.)

Chọc kim vào trong veine khoảng 1-1,5 cm đồng thời hạ thấp kim so vớicánh tay

Bằng cách kéo nhẹ nhàng pittong của bơm kim tiêm, máu sẽ vào bơmtiêm Tiếp tục rút từ từ pittong để lấy đủ số lượng máu cần cho xét nghiệm.Đặt miếng bông tẩm cồn lên chỗ chọc kim Rút kim từ dưới miềng bôngbằng một động rác nhanh

Nói bệnh nhân giữ nguyên và ấn chặt miếng bông trong 3 phút, khôngnên gập cánh tay vì có thể làm hỏng veine

Lấy kim tiêm ra khỏi bơm tiêm, bơm máu vào tube hoặc lọ đựng máu.Đậy chặt nắp và lắc trộn lên trộn xuống vài lần ( nếu mẫu máu toàn phần).Nếu muốn làm xét nghiệm từ huyết tương ta cho vào tube một lượng chấtchống đông thích hợp với lượng máu đã lấy lắc nhẹ rồi để yên khoảng 30phút hoặc ly tâm 2000 - 3000 vòng / phút khoảng 5 - 10 phút Phần dịch phíatrên là huyết tương phần màu đỏ phía dưới là hồng cầu

Nếu làm xét nghiệm từ huyết thanh thì ta không cho chất chống đông vàkhông lắc, các bước còn lại tương tự như cách lấy huyết tương

TIẾN HÀNH TEST CHẨN ĐOÁN NHANH VGB

HBsAg – kháng nguyên bề mặt vi rút siêu vi B là phức hợp khángnguyên (complex antigen) có trên bề mặt của vi rút siêu vi B (HBV) Sự cómặt của HBsAg trong máu của bệnh nhân được coi là bằng chứng chắc chắn

để kết luận bệnh nhân đã bị lây nhiễm vi rút siêu vi B cấp hoặc mãn tính.Kit chẩn đoán Viên gan B (HBsAg) là dụng cụ xét nghiệm sắc ký miễndịch, dùng để định tính phát hiện sự có mặt của HBsAg trong huyết thanhhoặc huyết tương

Trong quá trình xét nghiệm, mẫu phẩm ( huyết thanh hoặc huyết tương)

di chuyển dọc theo màng thấm kit thử nhờ mao dẫn HBsAg nếu có trongmẫu bệnh phẩm, trên đường đi sẽ gặp và phả ứng với các phần tử màgkháng thể Anti-HBsAg, tạo thành hỗn hợp tiếp tục thấm hướng lên Tại vùnghiển thị kết quả (T), hỗn hợp này sẽ phản ứng két tủa tạo màu với các khángthể Anti-HBsAg phủ cố định sẵn tại đó, tạo thành vach đỏ (T) nhìn thấyđược, thông báo kết quả là dương tính Ngược lại nếu trong mẫu bệnh phẩmnếu không có HBsAg, vạch màu (T) sẽ không xuất hiện và kết quả sẽ là âmtính

Nhằm mục đích kiểm tra quy trình thao tác xét nghiệm, một vạch màukhác luôn luôn xuất hiện tại vùng chứng (C), gọi là vạch chứng (C) nếu quytrình thao tác xét nghiệm xét nghiệm đúng, lượng mẫu bệnh phẩm đủ

và lớp màng đã thấm tốt

- Kit chẩn đoán Viêm gan B (HBsAg) là dụng cụ chỉ chuyên sử dụngcho việc xét nghiệm chẩn đoán Khi sử dụng Kit thử khi đã hết hạn sửdụng

- Không ăn uống, hút thuốc trong khu vực bảo quản, làm xét nghiệm

- Thận trọng khi tiếp xúc và tuân thủ các quy định về tiêu huỷ bệnhphẩm, tránh những rủi ro lây nhiễm trong suốt quá trình xét nghiệm

- Mặc đồ bảo hộ y tế nhu áo choàng, găng tay sử dụng một lần, bảo vệmắt trong quá trình xét nghiệm

Mẫu bệnh phẩm dùng để xét nghiệm có thể là huyết thanh hoặc huyếttương.

Lượng máu toàn phần vừa đủ từ tĩnh mạch vào ống nghiệm Tách lấyhuyết thanh hoặc huyết tương càng nhanh càng tốt để tránh hiện tượng tanhuyết ( hemolysis ) Chỉ các mẫu bệnh phẩm sạch, không bị hiện tượng tanhuyết (non-hemolyzed) mới được sử dụng để làm xét nghiệm

- Xét nghiệm phải được tiến hành ngay sau khi lấy mẫu Không được

để mẫu bệnh phẩm ở nhiệt độ phòng trong thời gian dài

- Mẫu huyết thanh và huyết tương có thể bảo quản ở nhiệt độ 2-80Ctrong vòng 3 ngày Muốn bảo quản lâu hơn mẫu bệnh phẩm phải đượcgiữ ở nhiệt độ âm thấp hơn 200C

- Máu toàn phần lấy từ tĩnh mạch không bị đông có thể bảo quản ở nhệt

độ 2-80C trong vòng 2 ngày

- Các mẫu bệnh phẩm phải được để ở nhiệt độ phòng trước khi làm xétnghiệm các mẫu đông băng phải để cho tan ra hoàn toàn và được lắcđêu trước khi làm xét nghiệm Không lặp lại việc đông băng và làmtan đối với các mẫu bệnh phẩm

- Nếu mẫu bệnh phẩm cần phải di chuyển, chúng phải được đóng gói vávận chuyển phù hợp với các quy định an toàn về vận chuyển các chất

có nguy cơ lây nhiễm cao

VI) TIẾN HÀNH XÉT NGHIỆM

Để kit thử và mẫu bệnh phẩm ở nhiệt độ phòng (15-300C) trước khi làmxét nghiệm

1) Lấy kit thử ra khỏi túi kín đựng sản phẩm và sử dụng kit thử càng nhanh càng tốt

Lưu ý: Để đạt kết quả tốt, toàn bộ quá trình xét nghiệm phải được hoàn

thành trong vòng 1 giờ kể từ khi mở túi đựng sản phẩm

2) Cầm Kit thử sao cho mũi tên trên kit thử hướng chỉ xuống:

Nhúng Kít thử theo phương thẳng đứng vào mẫu bệnh phẩm ( huyếtthanh hoặc huyết tương ) đựng trong ống nghiệm và ngâm ít nhất 10-15giây Tiếp theo, đặt Kit thử trên mặt phẳng nằm ngang không hút nước vàbắt đầu tính thời gian

Chú ý: không nhúng Kit thử sâu quá vạch tối đa (Max line- đầu mũi

tên) trên Kit thử

3) Chờ cho đến khi các vạch đỏ xuất hiện trên Kit thử Đọc kết quả trong vòng 15 phút.

Lưu ý: nồng độ kháng nguyên bề mặt HBsAg thấp có thể cho kết quả là

một vach mờ ở vùng kết quả (T) sau khi đã kéo thêm thời gian chờ kết quả.Tuy nhiên không sử dụng kết quả sau 30 phút

ĐỌC KẾT QUẢ

+ Dương tính: trên Kit thử xuất hiện 2 vạch đỏ rõ rệt: một ở vùng chứng gọi

là vạch chứng (C) còn vạch kia ở vùng kết quả (T)

Lưu ý; Độ đậm màu đỏ của vạch kết quả (T) sẽ khác nhau phụ thuộc vào

nồng độ của HBsAg có trong mẫu bệnh phẩm Vì vậy, bất cứ độ mờ nào củavạch kết quả (T) cũng đều được gọi là dương tính

+ Âm tính: trên Kit thử xuất hiện chỉ một vạch chứng (C) Không thấy xuất

hiện vạch kết quả (T) dug đậm hay mờ

+ Kết quả không có giá trị: trên Kit thử không thấy xuất hiện vạch chứng

(C) Nguyên nhân thường gặp la do lượng mẫu bệnh phẩm không đủ hoặcthao tác xét nghiệm sai Đọc lại hướng dẫn và làm lại xét nghiệm bằng Kitthử mới khác

Ví dụ kết quả xét nghiệm Viên Gan B:

Yªu cÇu xÐt nghiÖm KÕt qu¶ xÐt nghiÖm

Hµ TÜnh, ngµy 21 th¸ng 06 n¨m 2012

Phô tr¸ch khoa XN C¸n bé xÐt nghiÖm

IV.- XÉT NGHIỆM TÌM VI RÚT HIV

1.Khái niện HIV/AIDS

Vi rút HIV thuộc nhóm Lentivirus của họ Retroviridae.

Nhóm Lentivirus gồm 3 loại: HIV-1, HIV-2 gây ra AIDS ở người và SIVgây suy giảm miễn dịch ở khỉ

HIV-1: phân lập năm 1983, HIV-2 phân lập năm 1986, cả hai đều do LucMontagnir ( Viện pasteur Paris) phân lập từ những bệnh nhân mắc bệnh do

Pneumocytis carinii hoặc bị Sarcoma Kaposi, và đều bị suy giảm miễn dịch

mắc phải (nên tên bệnh AIDS xuất hiện)

HIV là virút gây suy giảm miễn dịch ở người, viết tắt từ tiếng Anh:

của nhiều bệnh nhiễm trùng (ví dụ: lao, viêm phổi, nấm), mà người nhiễmHIV gặp phải do hệ miễn dịch của cơ thể bị tổn thương hoặc bị phá hủynặng nề Các bệnh này được gọi là các bệnh nhiễm trùng cơ hội AIDS đượccoi là giai đoạn cuối của quá trình nhiễm HIV

AIDS viết tắt từ tiếng Anh: Acquired Immuno Deficiency Syndrom Trướcđây, bệnh này được gọi là SIDA (viết tắt từ tiếng Pháp: Syndromed`Immuno Deficience Acquise), nhưng do tên này trùng với tên của Tổ chứcphát triển quốc tế Thụy Điển SIDA và tên của Tổ chức CIDA (Canađa) cũnggọi là "Si đa" nên thống nhất gọi là AIDS để tránh nhầm lẫn và phù hợp vớitên quốc tế

Xét nghiệm HIV bằng test nhanh Determine.

 Các bước tiến hành:

1.3Nơi chọc lấy mẫu

Tĩnh mạch nếp gấp khuỷu tay nơi rỏ nhất và nổi nhất, nên chọc vào mộttrong những nhánh của chữ Y, hơi cao hơn điểm nối tiếp nếu cần,… bằngcách dặt garro phía trên cổ tay

1.4Chuẩn bị bơm kim tiêm và dụng cụ đựng mẫu

Ghi nhãn mẫu xét nghiệm: số xét nghiệm, tên bệnh nhân, hoặc dán mã sốxét nghiệm ( đã in sẵn) vào mẫu xét nghiệm của bênh nhân

Xé vỏ bơm kim tiêm, kéo pittong vài lần để kiểm tra bơm tiêm, đồngthời để dễ lấy máu

Lấy máu tĩnh mạch bằng bơm kim tiêm sử dụng một lần:

- Sát trùng nơi lấy mẫu bằng miếng bông thấm cồn 700

- Dùng ngón tay trỏ tìm điểm chính xác để chọc Nếu khó xác định cóthể nói bệnh nhân gập tay lên xuống vài lần để nỗi tĩnh mạch lên )

Không bao giờ tiếp xúc với tĩnh mạch từ phía cạnh, không bao giờ chọcvới đầu vát của mũi kim quay xuống dưới

Kim tiêm được đặt ở tư thế hơi hướng lên trên một góc 200 so với cánhtay Tỳ chắc ngón trỏ vào đốc kim và chọc kim vào giữa tĩnh mạch bằng mộtđộng tác thật là nhanh, không ngập ngừng ( nếu trúng veine sẽ có cảm giácnặng tay hơn và sẽ thấy máu chảy vào đốc kim.)

Chọc kim vào trong veine khoảng 1-1,5 cm đồng thời hạ thấp kim so vớicánh tay

Bằng cách kéo nhẹ nhàng pittong của bơm kim tiêm, máu sẽ vào bơmtiêm Tiếp tục rút từ từ pittong để lấy đủ số lượng máu cần cho xét nghiệm.Đặt miếng bông tẩm cồn lên chỗ chọc kim Rút kim từ dưới miềng bôngbằng một động rác nhanh

Nói bệnh nhân giữ nguyên và ấn chặt miếng bông trong 3 phút, khôngnên gập cánh tay vì có thể làm hỏng veine

Lấy kim tiêm ra khỏi bơm tiêm, bơm máu vào tube hoặc lọ đựng máu.Đậy chặt nắp và lắc trộn lên trộn xuống vài lần ( nếu mẫu máu toàn phần).Nếu muốn làm xét nghiệm từ huyết tương ta cho vào tube một lượng chấtchống đông thích hợp với lượng máu đã lấy lắc nhẹ rồi để yên khoảng 30

phút hoặc ly tâm 2000 - 3000 vòng / phút khoảng 5 - 10 phút Phần dịch phíatrên là huyết tương phần màu đỏ phía dưới là hồng cầu.

Nếu làm xét nghiệm từ huyết thanh thì ta không cho chất chống đông vàkhông lắc, các bước còn lại tương tự như cách lấy huyết tương

Tiến hành thử test:

- Ly tâm mẫu máu 2000 vòng / phút khoảng 5 phút

- Chuẩn bị que thử Determine

- Lấy mẫu máu ra hút 50µl cho vào que thử nhanh Determine

- Chờ 15 phút đọc kết quả

* Cách đọc kết quả:

Vạch 1: kết quả thử nghiệm của mẫu

Vạch 2: vạch màu đỏ chứng dương (+)

Kết quả: khi đủ thời gian đọc kết quả nếu ở số (1) có 1 vạch đỏ gống vạch

chứng dương ở ô số (2) thì kết quả là dương tính

Nếu ở ô số (1) không xuất hiện vạch đỏ thì kết quả là âm tính.



Patien(1) (2) Control

Control

Cân 40g môi trường bột khô trong 1 lít nước khử khoáng Hòa tanhoàn toàn Đổ vào tube Hấp tiệt trùng ở nhiệt độ 1210C/15 phút.



 Phòng xét nghiệm hoá - Lý

I HOÁ NƯỚC

Phương pháp lấy mẫu nước để xét nghiệm Hoá – Lý:

Nếu mẫu nước được lấy và bảo quản không đúng thì kết quả xét nghiệm

hoá - lý không có giá trị Điều này quan trọng đối với chế độ lấy mẫu, kỹthuật lấy mẫu và phương pháp bảo quản mẫu

Các bình bằng polyethylen (PE), teflon, PP hoặc thuỷ tinh bosilicat,

thuỷ tinh trung tính là thích hợp cho lấy mẫu thông thờng để xác định cácthông số lý – hoá của nước tự nhiên Bình bằng chất dẻo thích hợp cho mẫuphóng xạ Chai hoặc bình được súc sạch bằng chất tẩy rửa tổng hợp ( khôngđược dùng xà phòng), súc lại vài lần với nước sạch, sau cùng tráng nước cất

và để khô Chai phải sạch nhưng không cần vô khuẩn Khi lấy mẫu cần trángchai vài lần bằng chính nguồn nước sẽ dùng lấy mẫu

Một số chỉ tiêu xét nghiệm hoá lý cần kỹ thuật lấy mẫu và bảo quảnriêng,

Lấy mẫu phân tích các mẫu chứa khí hoà tan như carbonic, oxy … cầnchai hẹp miệng có nút thuỷ tinh vát một bên Lấy nước đầy chai, không cóbọt khí trong chai

Khoảng thời gian giữa lúc lấy mẫu và xét nghiệm được giữ ở mức tốithiểu khuyến cáo đối với điều kiện bảo quản mẫu là ở nhiệt độ thấp (4oC)trong bóng tối

Phải tiến hành đo clo dư, pH và độ đục ngay sau khi lẫy mẫu vì các chỉtiêu này sẽ thay đổi trong quá trình bảo quản và vận chuyển mẫu

XÉT NGHIỆM CÁC CHỈ TIÊU HOÁ HỌC TRONG NƯỚC

BẰNG MÁY PALINTEST 8000

HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG MÁY:

1) Các chú ý trước khi sử dụng:

- Sử dụng đúng nguồn điện yêu cầu

- Tránh để hóa chất, nước hay các chất lỏng khác dính vào máy (đặc biệt làmàn hình)

- Để máy ở vị trí có đủ khoảng trống để làm việc, không để ở những nơiquá chật chội và gần những vị trí phát ra nhiệt

- Trong quá trình đưa mẫu vào phải tránh không để mãu rớt ra ngoài máy

- Luôn đậy nắp ống mẫu và đưa ống mẫu ra khỏi máy sau khi đã test xong,tuyệt đối không để lại trong máy, không di chuyển ống qua lai trongbuồng đo

- Lau sạch buồng đo sau khi đã sử dụng xong

- Không dùng tay ướt hoặc vật có đầu nhọn, cứng ấn vào màn hình

- Bảo quản máy trong điều kiện sạch khô

2) Hướng dẫn sử dụng nhanh

- Bật máy: ấn và giữ phím nguồn ( ở bên cạnh phải của thiết bị)cho đến khi nghe thấy một tiếng bíp thì thả tay ra, sau quá trình

tự kiểm tra hệ thống màn hình sẽ hiển thị các chỉ số:

Choose a test help

system

User ALL

- Chọn test: chạm vào để chọn test đã hiển thị trên màn hình

hoặc và để chon 1 test hoặc chạm vào test dang hiển thịtrên màn hình để xem chi tiết đặc điểm của test này Sau khi chon xong, màn

hình sẽ hiển thị ‘ Insert Blank `, đưa mẫu Blank vào sau đó chạm vào nút BLANK, màn hình sẽ hiển thị ‘ Blanking `, sau khi xong sẽ hiển thị ‘ Insert sample `, lúc này đưa mẫu Blank ra và đưa mẫu cần đọc vào.

- Sau khi đưa mẫu vào chạm READ, màn hình sẽ hiển thị READING cho đến khi mẫu được đọc xong, kết quả sẽ hiển thị

trên màn hình và tự động lưu lại Lấy ống mẫu ra

- Tắt máy: ấn và giữ phím nguồn cho đến khi màn hình khônghiển thị gì thì thả tay ra

3) Hướng dẫn sử dụng chi tiết

3.1 Bật và tắt máy

- Để bật thiế bị ấn và giữ

nguồn cho đến khi Nghe 1

tiếng bíp, sau quá trình tự

kiểm tra màn hình sẽ hiển

3.2 Chọn một chương trình trong bộ nhớ máy

Trong máy có lưu sẵn một số chương trình test, mỗi test được

hiển thị bằng 2 con số gọi là số PHOT Chạm vào và để tìm đến số PHOT muốn sử dụng hoặc chạm vào giữa của bảng nơi mà tên

của test được hiển thị để chọn

- Chọn một test bằng số PHOT : sử dụng phím và để nhập vào số PHOT của phương pháp test cần sử dụng sau đó chạm vào OK.

- Chọn một test từ chương trình có sẵn trong máy:

+ Chạm vào để hiển thị tất cả những test có sẵntrong máy

+ Chọn một test theo yêu cầu sử dụng và ấn OK

3.3 Chọn đơn vị

Máy cung cấp các đơn vị sử dụng như: g/l, mg/l, ppm, mmol/l,

umol/l và đơn vị đo độ cứng Chạm vào để muốn sử dụng

3.4 Chọn dạng hiển thị kết quả

Kết quả có thể được hiển thị dưới nhiều dạng Form hóa chất khác

nhau, ví dụ : như kết quả của test Nitrate có thể được hiển thị như

Nitrogen ( N) hoặc Nitrate ( NO3) , chạm vào để chọn dạnghiển thị kết quả

3.5 Nhập vào độ pha loãng của mẫu

Khi chọn một mẫu pha loãng thì nó sẽ kích hoạt một hệ số để nhậpvào độ pha loãng của mẫu Ví dụ : thực hiện pha loãng một mẫu 10 lầnthì hệ số

pha loãng nhập vào là X10 thiết bị sẽ tính toán và đưa ra kết quả

chính xác của mẫu ban đầu

Nếu như mẫu không pha loãng thì nhập vào là X1 thông thường

mẫu không nên pha loãng nếu thực hiện một PH test

Trên màn hình có 2 dãy phím cảm ứng bên trái và bên phải, với dãy

bên trái thì dùng để nhập số như bình thường, với dãy bên phải ví dụ : ấn

phím x2 hai lần thì sẽ cho kết quả là x4.

3.6 Đặt tên mẫu

Sử dụng 4 con số cho mỗi mẫu

- Để nhập số chọn Sample Number

- Sử dụng phím số để nhập số vào, dùng < và > để di chuyển con

trỏ

- Chọn OK để chấp nhận số vừa nhập vào hoặc ấn CANCEL để nhập lại.

3.7 Đặt tên người sử dụng.