đề tài môn phân tích thực phẩm quang phổ tử ngoại và nhìn thấy

Hơn nữa, các phương pháp đo phổ cung cấp những công cụ được sử dụngrộng rải trong việc so sánh cấu trúc của các loại phân tử cũng như phân tích địnhtính và định lượng của các hợp chất vô

Khoa Công Nghệ Hóa Học - Thực Phẩm

Mục lụ

I MỞ ĐẦU 1

II NỘI DUNG 2

CHƯƠNG 1: KHÁI QUÁT VỀ QUANG PHỔ 2

1.1 GIỚI THIỆU VỀ QUANG PHỔ 2

1.2 Tính chất chung của bức xạ điện từ 2

1.3 Phổ bức xạ điện từ 3

1.4 Sự tương tác giữa vật chất và bức xạ điện từ 4

1.5 Định luật Lambert – Beer 6

1.6 Phổ 6

1.7 Tóm lại 7

CHƯƠNG 2: QUANG PHỔ TỬ NGOẠI VÀ NHÌN THẤY 8

2.1 Giới thiệu 8

2.2 Quang phổ hấp thụ trong vùng tia tử ngoại và ánh sáng nhìn thấy 9

2.2.1 Cơ sở của phương pháp định lượng quang phổ hấp thụ 9

2.2.2 Sự sai lệch của định luật Beer 11

2.2.3 Xem xét phương pháp tiến hành 12

2.2.4 Xác định đường chuẩn 15

2.2.5 Ảnh hưởng dụng cụ đến độ chính xác của sự đo lường hấp thụ 17

2.2.6 Thiết bị đo đạc 18

2.2.6.1 Nguồn sáng 18

2.2.6.2 Thiết bị đơn sắc (monochromator) 18

2.2.6.3 Máy dò (detector) 21

2.2.6.4 Readout Device 23

2.2.7 Cấu tạo thiết bị 23

2.2.8 Tính chất của mẫu hấp thụ trong vùng UV-VIS 25

III Tóm lại 28

Tài liệu tham khảo 28

I MỞ ĐẦU

Phân tích thực phẩm là một mảng lớn trong nghành công nghệ thựcphẩm Có rất nhiều phương pháp để xác định nồng độ của các thành phầndinh dưỡng có trong các loại thực phẩm Trong đó, các phương pháp phântích quang phổ được quan tâm đến như một trong những phương phápđược ứng dụng rất rộng rãi với độ chính xác tương đối cao, khi các máychỉ thu nhận photon đến từ vật chất mà không cần thực hiện đo đạc trựctiếp trên vật

Một ví dụ trong phân tích hóa học, có thể xác định nồng độ của mộtchất trong một dung dịch, bằng cách tạo ra phức màu của chất cần xácđịnh hay một chất mà có khả năng xác định gián tiếp chất cần xác định vớithuốc thử hữu cơ, rồi quan sát quang phổ của hệ Phương pháp này dựatrên sự hấp thụ bức xạ điện từ của các dung dịch của chất phân tích Ởcùng một điều kiện, độ hấp thu hay mật độ quang sẽ tỷ lệ thuận với nồng

độ chất hấp thụ Điều kiện để làm thuốc thử là phức tạo thành bền, cường

độ màu mạnh, cho các phức chiết tốt, đặc biệt là chiết trong môi trườngacid mạnh

Trong bài báo cáo này, chúng em sẽ giới thiệu về nguyên tắc đối vớiviệc dùng phương pháp quang phổ tử ngoại và nhìn thấy, các bộ phận cấutạo nên một hệ thống thiết bị dùng trong phương pháp phân tích này

Sau khi đọc kĩ bài báo cáo này, chúng ta sẽ hiểu hơn về phương pháp

và từ đó sẽ có những kĩ năng thực hành hiệu quả, giúp đạt được nhữngkết quả thuận lợi trong quá trình phân tích thực phẩm

CHƯƠNG 1: KHÁI QUÁT VỀ QUANG PHỔ

1.1 GIỚI THIỆU VỀ QUANG PHỔ

Về mặt lịch sử, “quang phổ (spectroscopy)” là một nhánh của khoa học trong

đó ánh sáng được phân giải thành các bước sóng thành phần của nó để tạo ra phổquang học, là một đồ thị của một vài hàm của cường độ bức xạ với bước sóng hoặctần số Hiện nay, nghĩa của quang phổ được mở rộng bao gồm những nghiên cứukhông chỉ với các bức xạ khả kiến mà còn với những loại khác của bức xạ điện từnhư tia X, tử ngoại, hồng ngoại, vi sóng và bức xạ tần số radio

Quang phổ đóng một vai trò cốt yếu trong sự phát triển của thuyết nguyên tử hiệnđại Hơn nữa, các phương pháp đo phổ cung cấp những công cụ được sử dụngrộng rải trong việc so sánh cấu trúc của các loại phân tử cũng như phân tích địnhtính và định lượng của các hợp chất vô cơ và hữu cơ

Ngày nay phương pháp phổ được sử dụng rộng rãi để nghiên cứu các hợp chất hóahọc cũng như các quá trình phản ứng hóa học Những phương pháp này đặc biệt có

ý nghĩa đối với việc xác định các hợp chất hữu cơ Cơ sở của phương pháp phổ làquá trình tương tác của các bức xạ điện từ đối với các phân tử vậ chất Khi tươngtác với các bức xạ điện từ, các phân tử có cấu trúc khác nhau sẽ hấp thụ và phát xạnăng lượng khác nhau Kết quả của sự hấp thụ và phát xạ năng lượng này chính làphổ, từ phổ chúng ta có thể xác định ngược lại cấu trúc phân tử

Có 5 phương pháp phổ:

- Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử:

+ Phương pháp phổ quay và dao động: phương pháp quang phổ hồng ngoại

+ Phương pháp phổ Raman

+ Phương pháp electron UV-VIS

- Phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR

- Phương pháp phổ khối lượng

Mỗi phương pháp phổ có một ứng dụng riêng Thông thường, chúng ta kết hợp cácphương pháp với nhau để giải thích cấu tạo của một hợp chất hữu cơ

1.2 Tính chất chung của bức xạ điện từ

Bức xạ điện từ là một dạng năng lượng mà dễ thấy nhất là ánh sáng khả kiến

và bức xạ nhiêt Những loại khác gồm tia gamma, tia X, tia tử ngoại, vi sóng và sóng

radio Nhiều tính chất của bức xạ điện từ được mô tả một cách thuận tiện bởi kiểusóng hình sin cổ điển sử dụng nhiều thông số như bước sóng, tần số, vận tốc vàbiên độ Khác với nhiều hiện tượng sóng khác như âm thanh, bức xạ điện từ khôngđòi hỏi môi trường hỗ trợ cho sự lan truyền của nó và nhờ vậy nó có thể đi qua mộtmôi trường chân không.

Mô hình sóng thất bại trong việc giải thích những hiện tượng gắn liền với sự hấpthụ và bức xạ của năng lượng bức xạ Để hiểu những quá trình này cần thiết phảinhờ đến một mô hình kiểu hạt trong đó bức xạ điện từ được xem như là một dònghạt rời rạc gọi là photon, với năng lượng của một photon tỉ lệ với tần số của bức xạ.Quan niệm về lưỡng tính sóng hạt này của ánh sáng không loại trừ lẫn nhau mà cótính chất bổ sung cho nhau Thực vậy, lưỡng tính này được thấy trong những dòngelectron và những hạt cơ bản khác như proton và được hoàn toàn lý giải bởi cơ họcsóng

1.3 Phổ bức xạ điện từ

Quang phổ của bức xạ điện từ bao gồm một dải rất lớn các bước sóng (và lànăng lượng) Trong đó phần của bức xạ khả kiến mà mắt người có thể thấy được làrất nhỏ khi so với những vùng phổ khác Cũng cần phải chú ý là các phương phápquang phổ sử dụng không chỉ ở vùng khả kiến mà còn tử ngoại, hồng ngoại vàthường được gọi là phương pháp đo quang mặc dù mắt người không nhạy với hailoại sau

Bảng liệt kê các dải bước sóng và tần số của những vùng phổ quan trọng trongmục đích phân tích và cũng kèm theo tên của những phương pháp phổ liên quan.Các cột cuối cùng liệt kê các loại chuyển dịch lượng tử của hạt nhân, nguyên tử vàphân tử, là cơ sở cho các kỹ thuật quang phổ khác nhau

Bảng 1.1: Một số thống kê về các loại quang phổ

Loại quang phổ Dải bước sóng Dải số sóng(cm-1) Kiểu dịch chuyển lượng

tửPhát xạ tia gamma 0.005 – 1,4 A0 Hạt nhân

hòa/quay của phân tửHấp thu vi song 0.75-3.75 mm 13-27 Dao động quay phân tửCộng hưởng từ spin 3 cm 0.33 Spin của electron trong

từ trườngCộng hưởng từ

Năng lượng E được đo bằng đơn vị eV, kcal/mol, cal/mol

Khi các bức xạ điện từ tương tác với các phân tử vật chất, có thể xảy ra theo haikhả năng: trạng thái năng lượng của phân tử thay đổi hoặc không thay đổi Khi có

sự thay đổi năng lượng thì phân tử có thể hấp thụ hoặc bức xạ năng lượng

Nếu gọi trạng thái năng lượng ban đầu của phân tử là E1, sau khi tương tác là E2thì có thể viết: ΔE = EE = E2 – E1

ΔE = EE = 0 : năng lượng phân tử không thay đổi khi tương tác với bức xạ điện từ

ΔE = EE > 0 : phân tử hấp thụ năng lượng; ΔE = EE < 0 : phân tử bức xạ năng lượng

Theo thuyết lượng tử thì các phân tử và bức xạ điện từ trao đổi năng lượng vớinhau không phải bất kỳ và liên tục mà có tính chất gián đoạn Phân tử chỉ hấp thụ

hoặc bức xạ 0,1, 2, 3…n lần lượng tử h.ν Khi phân tử hấp thụ hoặc bức xạ sẽ làmthay đổi cường độ của bức xạ điện từ nhưng không làm thay đổi năng lượng củabức xạ điện từ, bởi vì cường độ bức xạ điện từ xác định bằng mật độ các hạt photon

có trong chùm tia còn năng lượng của bức xạ điện từ lại phụ thuộc vào tần số ν củabức xạ Vì vậy, khi chiếu một chùm bức xạ điện từ với một tần số duy nhất đi quamôi trường vật chất thì sau khi đi qua năng lượng của bức xạ không hề thay đổi màchỉ có cường độ của bức xạ thay đổi

Khi các phân tử hấp thụ năng lượng từ bên ngoài có thể dẫn đến các quá trìnhthay đổi trong phân tử (quay, dao động, kích thích electron phân tử…) hoặc trongnguyên tử (cộng hưởng spin electron, cộng hưởng từ hạt nhân)

Hình 1.2: Các trạng thái kích thích của phân tử

Mỗi một quá trình như vậy đều đòi hỏi một năng lượng ΔE = EE > 0 nhất định đặctrưng cho nó, nghĩa là đòi hỏi bức xạ điện từ có một tần số riêng gọi là tần số quay

νq, tần số dao động νd và tần số kích thích điện từ νđ

Vì thế khi chiếu một chùm bức xạ điện từ với các tần số khác nhau vào thì các phân

tử chỉ hấp thụ được các bức xạ điện từ có tần số đúng bằng các tần số trên (νq, νd

và νđ) để xảy ra các quá trình biến đổi trong phân tử như trên Do sự hấp thụ chọnlọc này mà khi chiếu chùm bức xạ điện từ với một dải tần số khác nhau đi qua môitrường vật chất thì sau khi đi qua, chùm bức xạ này sẽ bị mất đi một số bức xạ cótần số xác định nghĩa là các tia này đã bị phân tử hấp thụ

1.5 Định luật Lambert – Beer

Khi chiếu một chùng tia sáng đơn sắc đi qua một môi trường vật chất thì cường

độ của tia sáng ban đầu I0 sẽ bị giảm đi chỉ còn là I

Năng lượng ánh sáng: E = h.ν = h.c/λ

Năng lượng của ánh sáng phụ thuộc vào ν

Cường độ ánh sáng I phụ thuộc vào biên độ dao động a

Hình 1.3: sự giảm cường độ của ánh sáng khi đi qua một môi trường vật chất

Với hai tia sáng có cùng năng lượng nhưng có cường độ ánh sáng khác nhau

T = I/I0.100%: độ truyền qua

+ Trên trục hoành: tần số bức xạ ν, số sóng ν, bước sóng bức xạ kích thích λ

Thu được đồ thị có dạng Dλ = f(λ), lgε = f(λ), T = f(ν), A = f(ν)… đồ thị này gọi làphổ Các đỉnh hấp phụ cực đại gọi là dải (band) hay đỉnh hấp thụ (peak), chiều caocủa đỉnh

peak gọi là cường độ hấp thụ

Riêng với phổ NMR và phổ MS thì đại lượng trên trục hoành được mở rộng hơnthành độ chuyển dịch hóa học (ppm) hay số khối m/e

1.7 Tóm lại

Phân tích Phổ, một nhánh của quang phổ, bao gồm một loạt các kỹ thuật được

sử dụng trong các phòng thí nghiệm phân tích để phân tích định tính và định lượngcác thành phần hóa học của thực phẩm Phương pháp phân tích Phổ thông thường

bao gồm UV, Vis, và IR hấp thụ quang phổ; phân tử quang phổ huỳnh quang; vàNMR Trong mỗi phương pháp , người phân tích cố gắng để đo lượng bức xạ hoặchấp thụ hoặc phát ra bởi các chất phân tích Các phương pháp trên khác nhau ở cácbước sóng bức xạ được sử dụng trong phân tích, bản chất nguyên tử so với phân

 phân tích định lượng những chất phân tứ lượng lớn ( vd : định lượng tổnghàm lượng tinh bột bằng phương pháp phenol-sulfuric acid )

 phân tích định lượng những chất phân tứ lượng nhỏ ( vd : định lượng thiaminbằng phương pháp thiochrome huỳnh quang )

 Đánh giá độ ôi hóa của dầu mỡ

 phát hiện kháng thể hay kháng nguyên trong mẫu phân tích

Trong những trường hợp trên , dấu hiệu phân tích được dựa trên sự hấp thụhoặc phát xạ của bức xạ điện từ UV – VIS Dấu hiệu này phụ thuộc vào bản chấtvốn có của chất phân tích ( độ hấp thụ của bức xạ điện từ trong vùng ánh sáng nhìnthấy ) hoặc kết quả của phản ứng hóa học liên quan đến chất phân tích ( phươngpháp so màu Lowry nhằm phân tích protein tan trong nước )

Bức xạ điện từ trong khoảng tia tử ngoại và ánh sáng nhìn thấy có bước sóngdao động từ 200-700 nm , tia tử ngoại : từ 200-350 nm và ánh sáng nhìn thấy : 350-

700 nm ( bảng 2.1 ) Không thể quan sát tia tử ngoại UV bằng mắt thường , trongkhi mỗi bước sóng của ánh sáng nhìn thấy cho ta 1 màu quan sát khác nhau , đó là

1 dãy màu liên tục gồm 7 màu cơ bản ( đỏ , cam , vàng , lục , lam , chàm , tím ) Ánh sáng đỏ có bước sóng lớn nhất , ánh sáng tím có bước sóng nhỏ nhất Phântích quang phổ trong UV – VIS được chia thành 2 nhóm chính : quang phổ hấp thụ

và quang phổ huỳnh quang , nhờ vào mối quan hệ giữa bức xạ điện từ và vấn đề tđang phân tích Mỗi nhóm nhỏ trong 2 nhóm trên lại được chia thành 2 nhóm nhỏnữa : kỹ thuật định tính và kỹ thuật định lượng

Bảng 2.1 : bước sóng của 1 số màu cơ bản

Nói chung , phương pháp quang phổ hấp thụ định lượng là phương pháp phổbiến nhất trong phân tích quang phổ trong vùng tia tử ngoại và ánh sáng nhìn thấy

2.2 Quang phổ hấp thụ trong vùng tia tử ngoại và ánh sáng nhìn thấy

2.2.1 Cơ sở của phương pháp định lượng quang phổ hấp thụ

Mục đích của phương pháp trên nhằm xác định nồng độ của mẫu phân tích dựatrên sự hấp thụ ánh sáng khi truyền qua 1 dung dịch mẫu Trong 1 vài trường hợp ,mẫu phân tích sẽ tự động hấp thụ bức xạ UV-VIS , như vậy , bản chất hóa học củachất phân tích không bị thay đổi trong quá trình phân tích Trong các trường hợp

còn lại , chất phân tích nếu không hấp thụ bức xạ UV-VIS tức là chúng đã bị thay đổibản chất hóa học , dẫn đến chỉ hấp thụ những bức xạ có bước sóng thích hợp Do

đó , sự truyền cũng như hấp thụ của dung dịch mẫu có thể được dùng để xác địnhnồng độ chất phân tích

Trong thực tế , dung dịch mẫu được cho vào một ống hấp thụ nhỏ và được đặtchắn ngang đường đi của bức xạ có bước sóng xác định Lượng bức xạ truyền quamẫu sẽ được ghi nhận lại Lượng ánh sáng truyền qua sẽ là căn cứ để ta xác địnhnồng độ chất phân tích Quá trình trên được mô tả qua hình 2.1 Bức xạ truyền đến

P0 có năng lượng lớn hơn bức xạ truyền qua P , sự giảm năng lượng trên xảy ra do

sự hấp thụ photon của chất mẫu Mối quan hệ về năng lượng của tia tới và tiatruyền qua được biểu thị bằng đại lượng độ truyền suốt T (Transmittance) hay độhấp thụ A (Absorbance)

Ta có : T = P/ P0 [1]

T% = (P/ P0) × 100 [2]

Trong đó :

T = độ truyền suốt

P0 = năng lượng tia tới

P = năng lượng tia truyền qua

%T = phần trăm độ truyền suốt

Tuy nhiên , T và T% không trực tiếp tỉ lệ với nồng độ nên gây ra sự khó khăntrong quá trình tính toán , đại lượng thứ 2 dùng để biểu thị mối quan hệ giữa P và P0

b = quãng đường truyền qua mẫu (cm)

a = hệ số hấp thụ ( phụ thuộc vào bản chất môi trường ) (cm)-1(nồng độ)−1

Hình 2.1: Sự biến đổi năng lượng của tia bức xạ khi truyền qua một môi trường vật chất

Trường hợp khi đơn vị nồng độ là M ( mol/l ) thì công thức Beer sẽ được viết lại :

xạ làm giảm năng lượng của chùm tia tới được trình bày ở hình 2.2 Rõ ràng ,những quá trình này phải được xem xét nhằm mục đích giảm sai số đến mức thấpnhất Trong thực tế , mẫu trắng sẽ được sử dụng cho những quá trình này Mẫutrắng ( mẫu đối chứng ) theo lý thuyết định nghĩa có thành phần hoàn toàn giống vớimẫu phân tích nhưng không chứa chất phân tích Mẫu trắng thường là một cuvette

có chứa nước cất Mẫu này sau đó được đặt ngang đường truyền của chùm sáng ;năng lượng của bức xạ ra khỏi mẫu trắng được đo lại và là giá trị P0 cho mẫu phântích Phương pháp này giả định rằng ngoại trừ sự hấp thụ có chọn lọc các bức xạbởi mẫu phân tích , tất cả các quá trình khác là tương đương cho mẫu phân tích vàmẫu trắng

Hình 2.2 : những yếu tố ảnh hưởng đến sự giảm năng lượng chùm bức xạ khi

chúng truyền qua cuvette chứa mẫu hấp thụ dạng lỏng

Độ hấp thụ được tính xấp xỉ trong phòng thí nghiệm qua phương trình [6] :

A = log(Pdung môi / Pdung dịch phân tích )= log(P0 /P) [6]

Trong đó :

Pdung môi = năng lượng bức xạ của chùm tia ra khỏi mẫu trắng

Pdung dịch phân tích = năng lượng bức xạ của chùm tia ra khỏi dịch mẫu

P0 và P = như phương trình [1]

A = như phương trình [3]

Ta không nên áp dụng tuyệt đối định luật Beer trong tất cả trường hợp Thậtvậy, có một số lý do dễn đến độ hấp thụ và nồng độ có thể không quan hệ tuyến tínhvới nhau Nói chung , định luật Beer chỉ áp dụng với các mẫu pha loãng có nồng độtối đa 10mM cho hầu hết các chất phân tích Nồng độ thực tế mà định luật Beer sailệch sẽ phụ thuộc vào bản chất hóa học của chất phân tích Khi nồng độ chất phântích tăng , khoảng cách giữa các phân tử trong một dung dịch mẫu nhất định sẽgiảm , cuối cùng , khi đạt đến một giá trị mà tại đó , các phân tử cạnh nhau sẽ sắpxếp lại trật tự của nhau Việc xáo trộn này có thể ảnh hưởng đáng kể khả năng thunhận photon của chất phân tích ở một bước sóng nhất định , nghĩa là , nó có thểthay đổi hằng số hấp thụ của chất phân tích ( a ) Việc này dẫn đến phá vỡ mốiquan hệ giữa tuyến tính giữa nồng độ và độ hấp thụ Những quá trình hóa học kháccũng có thể gây ra sai lệch cho định luật Beer , ví dụ : sự kết hợp – phân ly các phân

tử trong chất phân tích hoặc sự phân ly ion của acid yếu trong dung môi không chấtđệm Trong các trường hợp trên , nếu những dạng phân ly khác nhau của 1 chất

phân tích ( ví dụ : ion và nguyên tử trung hòa ) có hằng số hấp thụ khác nhau ( a )thì mối quan hệ giữa tuyến tính giữa nồng độ và độ hấp thụ không tồn tại

Một nguyên nhân nữa dẫn đến sự sai lệch của định luật Beer có thể phát sinh

từ những hạn chế trong các thiết bị sử dụng để đo độ hấp thụ Định luật Beer chỉ cóthể áp dụng cho những trường hợp bức xạ truyền qua mẫu là bức xạ đơn sắc , bởi

vì ở những điều kiện này , một giá trị hấp thụ thể hiện sự liên quan của chất phântích với tất cả bức xạ truyền qua mẫu Nếu bức xạ đi qua một mẫu là đa sắc và có

sự thay đổi trong các hằng số hấp thụ cho các bước sóng thành phần khác nhau thìđịnh luật Beer không còn đúng nữa Một ví dụ điển hình cho điều này : khi bức xạ

có bước sóng lý tưởng và bức xạ có bức sóng ko bị hấp thụ đồng thời đi qua mộtmẫu và đến thiết bị lọc (detector) Trong trường hợp này , sự truyền dẫn sẽ tuântheo phương trình [7] Lưu ý rằng 1 giá trị hấp thụ giới hạn sẽ đạt đến P0 >> P ,tương ứng với một nồng độ tương đối cao của chất phân tích

Nói chung , mục tiêu của định lượng quang phổ là xác định nồng độ của chấtphân tích với độ chính xác cao nhất trong khoảng thời gian ngắn nhất và chi phíthấp nhất Để đạt được điều này , người phân tích phải xem xét sai số có thể xảy rađồng thời kết hợp các phương pháp phân tích cụ thể Những sai số xảy ra trongphân tích quang phổ có thể do : kỹ thuật chuẩn bị mẫu không đúng , điều khiển thiết

bị không đúng , rối loạn trong thiết bị , và những điều kiện không phù hợp cho việcxác định độ hấp thụ

Việc chuẩn bị mẫu đo độ hấp thụ rất đa dạng Ở những trường hợp đơn giảnnhất , dịch mẫu có thể được đo trực tiếp sau khi đã đồng hóa và để trong Ngoàinhững trường hợp đặc biệt , đồng hóa mẫu là việc bắt buộc trước khi tiến hành bất

cứ phép phân tích nào nhằm đảm bảo một mẫu tốt Làm trong mẫu cũng là việc cầnthiết trước khi phân tích nhằm hạn chế hiện tượng tán xạ tia sáng Loại mẫu trắngđơn giản nhất là dung môi của chất cần phân tích , dung môi này thường là nướchoặc dung dịch đệm trong nhiều trường hợp Với những tình huống phức tạp hơn ,chất phân tích cần phải được biến đổi hóa học trước khi xác định độ hấp thu Ởnhững trường hợp này , chất phân tích không hấp thụ bức xạ ở một vùng quang phổ

sẽ được biến đổi , tạo nên 1 mẫu mới với tính chất hấp thụ thích hợp với vùngquang phổ được chọn Những phản ứng như vậy được dùng trong rất nhiều phép

phân tích so màu dựa trên sự hấp thụ của bức xạ trong vùng nhìn thấy Mẫu trắngcho những phép phân tích này được chuẩn bị bằng cách xử lý dung môi giống vớimẫu phân tích Mẫu trắng do đó sẽ giúp điều chỉnh độ hấp thụ nhờ vào việc thay đổithuốc thử chứ không phải chất phân tích

Việc lựa chọn vật chứa mẫu ( cuvette ) phụ thuộc vào vùng quang phổ được đo Các loại cuvette khác nhau có thành phần hoặc ( và ) kích thước khác nhau Khi sửdụng , ta phải đảm bảo cuvette chứa mẫu không được làm từ chất liệu có hằng sốhấp thụ bức xạ trong vùng phổ cần đo Cuvette đáp ứng yêu cầu trên trong vùng tửngoại có thể được làm từ thạch anh hoặc hợp chất silicate Cuvette làm từ thủy tinhsilicate phù hợp để đo quang phổ trong vùng ánh sáng nhìn thấy và cuvette nhựa rẻtiền cũng thường được sử dụng cho 1 vài mục đích Kích thước của cuvette rấtquan trọng vì nó liên quan đến lượng dung dịch cần đo và đại lượng quãng đường

( b ) trong định luật Beer Cuvette tiêu chuẩn có diện tích 1cm 2 , dài khoảng 4.5 cm

Quãng đường truyền cho loại cuvette truyền thống này là 1cm và lượng dung dịchtối thiểu cần dùng khoảng 1.5 ml Các loại cuvette được bán trên thị trường cóquãng đường đo dao động từ 1 đến 100mm Ngoài ra còn có một số sản phẩmcuvette hẹp với chiều rộng 4mm sử dụng để đo mẫu với thể tích nhỏ hơn 1ml Trong nhiều trường hợp , người phân tích cần phải chọn 1 bước sóng thích hợp đểxác định quang phổ Nếu có thể , tốt nhất ta chọn bước sóng mà tại đó , giá trị độhấp thụ đo được là lớn nhất và độ hấp thụ không thay đổi nhiều khi ta điều chỉnhbước sóng ( hình 2.3 ) Trường hợp này tương ứng với vị trí đỉnh của đồ thị hình2.3 , thực hiện việc xác định ở vị trí này có 2 điểm lợi : (1) độ nhạy tối đa ( sự thayđổi độ hấp thụ khi ta thay đổi nồng độ cơ chất ) và (2) định luật Beer được nghiệmđúng hơn vì chùm bức xạ gồm các bước sóng có hằng số hấp thụ phân tử khôngkhác biệt nhiều đối với chất phân tích ( hình 2.3 ) Khoảng bandwidth bao gồm cácbước sóng có giá trị gần bằng nhau ứng với giá trị độ hấp thu cực đại