Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên

Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột MỤC LỤC MỞ ĐẦU…………………………………………………………………………… 3 NỘI DUNG …………………………………………………………….………… 4 Chương 1. CƠ SỞ LÝ THUYẾT VỀ SẮC KÝ …………………………………… 4 1. Lịch sử sắc ký …………………………………………………………………. 4 2. Định nghĩa sắc ký……………………………………………………………… 4 3. Các nguyên tắc cơ bản của kỹ thuật sắc ký …………………………………… 5 4. Phân loại sắc ký……………………………………………………………… 6 4.1. Phân loại theo bản chất của hai pha sử dụng ……………………………… 6 4.2. Phân loại theo bản chất tương tác………………………………………… 7 4.3. Phân loại theo cấu hình ……………………………………………………. 8 Chương 2: SẮC KÝ CỘT HỞ ……………………………………… ………… 10 1. DỤNG CỤ - HÓA CHẤT …………………………………………………… 10 1.1. Cột………………………………………………………………………… 10 1.2. Các loại pha tĩnh dùng nhồi cột ……………………………………………. 10 1.2.1. Silica gel …………………………………………………………… 10 1.2.2. Alumina …………………………………………………………… 14 1.2.3. Kieselguhr – Celite ………………………………………………… 14 1.2.4. Gel …………………………………………………………………….14 1.3. Dung môi ………………………………………………………………… 15 1.3.1. Các dung môi thường dùng cho sác ký cột ………………………… 15 1.3.2. Cách chọn dung môi thích hợp……………………………………… 15 1.4. Mẫu sắc ký ………………………………………………………………….15 2. KỸ THUẬT TIẾN HÀNH ……………………………………………………. 16 2.1. Chuẩn bị cột ……………………………………………………………… 16 2.2. Nạp mẫu cần tách lên cột sắc ký ……………………………………………17 2.2.1. Nạp mẫu dạng dung dịch …………………………………………… 17 2.2.2. Nạp mẫu dạng bột khô ……………………………………………… 18 2.3. Giải ly chất ra khỏi cột …………………………………………………… 19 2.3.1. Các phương pháp giải ly …………………………………………… 19 2.3.2. Dung môi giải ly và kỹ thuật tăng dần tính phân cực cho dung môi giải ly …………………………………………………………………………………… 20 1 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột 2.3.3. Vận tốc giải ly ……………………………………………….………. 21 2.3.4. Theo dõi quá trình giải ly cột …………………………………………22 2.3.5. Ghi nhận kết quả sắc ký ………………………………………………23 2.4. Xác định cấu trúc hóa học của một hợp chất ……………………………… 23 3. ƯU, NHƯỢC ĐIỂM VÀ ỨNG DỤNG CỦA SẮC KÝ CỘT HỞ …………… 24 3.1. Ưu điểm ……………………………………………………………………. 24 3.2. Nhược điểm ……………………………………………………………… 24 3.3. Ứng dụng ………………………………………………………………… 24 Chương 3: MỘT VÀI KỸ THUẬT SẮC KÝ CỘT KHÁC ……………………… 25 1. Sắc ký cột khô ………………………………………………………………… 25 2. Sắc ký cột nhanh ……………………………………………………………….27 3. Sắc ký nhanh cột khô ………………………………………………………… 29 KẾT LUẬN …………………………………………………………………………32 TÀI LIỆU THAM KHẢO ……………………………………………………… 33 2 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột MỞ ĐẦU Thực vật là kho tàng vô cùng phong phú các hợp chất thiên nhiên, hàng trăm nghìn các hợp chất thiên nhiên đã được tìm ra và được nghiên cứu để phục vụ cho nhiều lĩnh vực của cuộc sống. Thiên nhiên không chỉ là nguồn nguyên liệu cung cấp các hoạt chất quí hiếm để tạo ra các biệt dược mà còn cung cấp các chất dẫn đường để tổng hợp ra các loại thuốc mới. Từ những tiền chất được phân lập từ thiên nhiên, các nhà khoa học đã chuyển hóa chúng thành những hợp chất có khả năng trị bệnh rất cao. Vì vậy việc tách chiết, cô lập hợp chất thiên nhiên là công việc thật sự cần thiết. Có nhiều phương pháp để tách chiêt, cô lập các hợp chất thiên nhiên từ cây cỏ. Một trong những phương pháp thường hay dùng nhất là phương pháp sắc ký. Phương pháp sắc ký ra đời đã cung cấp cho hóa học một công cụ tách chiết hiệu quả và nhanh chóng, mở ra một giai đoạn phát triển rực rỡ của ngành hóa học, đặc biệt là hóa học các hợp chất thiên nhiên. Một đặc điểm của phương pháp sắc ký là tính đa dạng, cho phép ta ứng dụng nó ở mọi hoàn cảnh, mọi điều kiện. Ngày nay, phương pháp sắc ký được sử dụng để tách tất cả mọi hợp chất dù có màu hay không màu, dù trọng lượng phân tử nhỏ hay lớn. Do các phân tử sinh học rất thiên hình vạn trạng với trọng lượng phân tử lớn nhỏ khác nhau, tính phân cực nhiều ít khác nhau nên không thể nào có một kỹ thuật sắc ký chung cho các loại hợp chất khác nhau. Trong bài báo cáo này, tôi xin giới thiệu một phương pháp sắc ký thường dùng trong phòng thí nghiệm đó là Phương pháp Sắc ký cột. Đối với người nghiên cứu về hóa học hợp chất thiên nhiên thì việc tìm hiểu sơ bộ về sắc ký cột cũng như việc ứng dụng kỹ thuật sắc ký cột là một việc vô cùng cần thiết, có thể sử dụng hiệu quả vào trong công tác nghiên cứu của mình. 3 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột NỘI DUNG Chương 1: CƠ SỞ LÝ THUYẾT VỀ SẮC KÝ 1. Lịch sử sắc ký Từ ngữ sắc ký trong tiếng Anh là “chromatography” có xuất xứ từ chữ “chroma” trong tiếng La Tinh có nghĩa là chất màu. Năm 1903 nhà thực vật học người Nga Mikhail Semyonovich Tsvett đã dùng cột nhôm oxit (có tài liệu nói cột canxi cacbonat) làm pha tĩnh và pha động là ete dầu hoả tách thành công chlorophyl từ lá cây. Ông đã giải thích hiện tượng bằng ái lực hấp phụ khác nhau của các sắc tố và đặt tên phương pháp này là phương pháp sắc ký (chromatography), sắc ký nghĩa là ghi màu vì đã tách được những chất có màu. Kỹ thuật sắc ký phát triển nhanh chóng trong suốt thế kỉ 20. Các nhà nghiên cứu nhận thấy nguyên tắc nền tảng của sắc ký Tsvet có thể được áp dụng theo nhiều cách khác nhau, từ đó xuất hiện nhiều loại sắc ký khác nhau. Đồng thời, kĩ thuật thực hiện sắc ký cũng tiến bộ liên tục, cho phép phân tích các phân tử tương tự nhau. Sự phát triển phong phú của sắc ký đã làm cho danh từ “sắc ký” không còn đúng theo ý nghĩa ban đầu của nó. Tuy nhiên tất cả các phương pháp sắc ký đều có những nét chung nhất: quá trình tách dựa trên sự chuyển dịch của hỗn hợp chất phân tích qua lớp chất bất động (pha tĩnh) là chất rắn hoặc chất lỏng mang trên chất rắn hoặc giấy và sự chuyển dịch đó được thực hiện bằng một chất khí hoặc chất lỏng (pha động). Trong những năm 1930, hàng loạt các nhà hóa học đã được vinh danh bằng giải thưởng Nobel về Hóa học các hợp chất thiên nhiên nhờ vào những thành công trong việc sử dụng kỹ thuật sắc ký cột hấp phụ: - 1937, P. KARRER (Thụy Sĩ) về hóa học Carotenoid đặc biệt là vitamin A và vitamin B. - 1938 R.KUHN (Đức) hóa học Carotenoid và Vitamin. - 1939 L.RIZICKA (Thụy Sĩ) hóa học Polymetylen và Terpenoid. - 1940 MARTIN và SYNGE (Anh) bắt đầu nghiên cứu về sắc ký phân bố trên lớp silica gel và về sau phát triển sang sắc ký giấy. Hai ông được giải thưởng Nobel năm 1952 về sắc ký phân bố. - 1948 TISLIUS (Thụy Điển) được giải Nobel về kỹ thuật điện di và sắc ký hấp phụ. 4 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột 2. Định nghĩa sắc ký - Định nghĩa của Mikhail S. Tsvett (1906): sắc ký là một phương pháp tách trong đó các cấu tử của một hỗn hợp được tách trên một cột hấp thụ đặt trong một hệ thống đang chảy. - Định nghĩa của IUPAC (1993): sắc ký là một phương pháp tách trong đó các cấu tử được tách được phân bố giữa hai pha, một trong hai pha là pha tĩnh đứng yên còn pha kia chuyển động theo một hướng xác định. Trong sắc ký cột, pha tĩnh được giữ trong một cột ngắn và pha động được cho chuyển động qua cột bởi áp suất hoặc do trọng lực. - Hiện nay: sắc ký là quá trình tách liên tục từng vi phân hỗn hợp các chất do sự phân bố không đồng đều của chúng giữa pha tĩnh và pha động đi xuyên qua pha tĩnh. 3. Các nguyên tắc cơ bản của kỹ thuật sắc ký Sắc ký là một phương pháp vật lý để tách riêng các thành phần trong một hỗn hợp bằng cách phân chia chúng thành 2 pha: pha động và pha tĩnh. § Đối với các chất riêng biệt trong hỗn hợp, tùy theo khả năng hấp phụ và khả năng hòa tan của nó đối với dung môi rửa cột để được lấy ra lần lượt trước hoặc sau. 5 Pha động (Mobile phase) Pha tĩnh (Stationar phase) Lúc khởi đầu Các thành phần của hỗn hợp phân bố khác nhau vào hai pha Trạng thái cân bằng, các thành phần của hỗn hợp đã phân bố giữa hai pha theo một tỉ lệ nhất định Nhận xét:Hợp chất ( ) có ái lực mạnh hơn đối với pha tĩnh Hệ số phân chia là sự phân bố thí dụ: của 2 loại hợp chất ( ) và ( ) trong một hệ thống gồm có hai pha: pha động và pha tĩnh Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột Sắc ký hấp phụ được thực hiện trên một ống trơ về mặt hóa học đới với các chất trong quá trình sắc ký, cợt có thể là: thủy tinh, kim loại, nhựa thẳng đứng gọi là “cột” với chất hấp phụ đóng vai trò pha tĩnh, dung mơi rửa cột đóng vai trò pha động chảy qua chất hấp phụ . Chất hấp phụ trong sắc ký cột thường dùng là oxid nhơm, silica gel, CaCO 3 , than hoạt tính, polyamid, các loại có gắn nhóm ion,… Các chất này phải được tiêu chuẩn hóa. Dung mơi dùng có thể là mợt hoặc hỗn hợp nhiều loại dung mơi có tỉ lệ thích hợp. Quy trình rửa giải nói chung là sử dụng dung mơi có tính chất hướng về mợt phía hoặc tăng hoặc giảm về tính chất. Với các chất hấp phụ pha tḥn cổ điển, dung mơi sử dụng có độ phân cực tăng dần. Việc tách hai hợp chất nào đó ra riêng có đạt kết quả tốt hay khơng là tùy thuộc vào hệ số phân chia (partition coeffiicient). Bất kỳ một hợp chất nào khi được đặt vào một hệ thống gồm có 2 pha (thí dụ: hai pha lỏng-lỏng hoặc rắn-lỏng), lúc đạt đến trạng thái cân bằng, hợp chất đó sẽ phân bố vào mỗi pha với một tỉ lệ nồng độ cố định, tỉ lệ này thay đổi tùy vào các tính chất động học của các hợp chất và của cả hai pha Hệ số phân chia K được biểu diễn như sau: s m C Nồng độcủacáchợpchấttrong phatónh K C Nồng độcủahợpchấttrong phộng = = Mỗi hợp chất sẽ có ái lực riêng của nó đối với hai pha, vì thế sẽ có tương tác mạnh/yếu khác nhau đối với pha tĩnh. Hệ quả là mỗi hợp chất sẽ di chuyển ngang qua pha tĩnh với một vân tốc khác nhau, nhờ vậy kỹ thuật sắc ký có thể tách riêng các loại hợp chất. 4. Phân loại sắc ký 4.1. Phân loại theo bản chất hai pha sử dụng Tùy thuộc vào bản chất của pha tĩnh và pha động, người ta phân biệt một số kỹ thuật sắc ký khác nhau. - Pha tĩnh: có thể là chất rắn hoặc chất lỏng. Pha tĩnh tách riêng các hợp chất trong một hỗn hợp nào đó là nhờ vào tính chất hấp phụ của nó. + Pha tĩnh là chất rắn: thường là alumina hoặc silica gel đã được xử lý, có thể được nạp nén vào trong một cột hoặc được tráng thành một lớp mỏng, phủ lên trên bề mặt một tấm kiếng, tấm nhơm hoặc tấm nhựa. 6 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột + Pha tĩnh là chất lỏng: có thể là một chất lỏng được tẩm lên bề mặt một chất mang rắn hoặc một chuỗi dây cacbon dài được gắn lên trên chất mang rắn. - Pha động: có thể là chất lỏng hoặc chất khí + Pha động là chất khí: ví dụ trong kỹ thuật sắc ký khí + Pha động là chất lỏng: ví dụ trong kỹ thuật sắc ký giấy, sắc ký lớp mỏng, sắc ký cột. 4.2. Phân loại theo bản chất tương tác  Sắc ký phân chia: * Pha động: chất lỏng hoặc chất khí (trong sắc ký khí) * Pha tĩnh là chất lỏng, đó là một lớp chất lỏng với chiều dài thật mỏng, chất lỏng này được nối hóa học lên bề mặt của những hạt rắn, nhuyễn mịn, có trơ.  Sắc ký hấp phụ: * Pha động là chất lỏng hoặc chất khí. * Pha tĩnh là chất rắn, đó là những hạt rắn nhuyễn mịn, có tính trơ, được nhồi trong một cái ống. Những hạt rắn trơ này cũng giống như những hạt rắn trong sắc ký phân chia, nhưng không có phủ chất lỏng bên ngoài, bản thân hạt rắn là pha tĩnh. Tiêu biểu của sắc ký hấp phụ. Pha tĩnh rắn là những hạt rắn, nhuyễn, trơ 7 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột  Sắc ký trao đổi ion: Tiêu biểu của sắc ký trao đổi ion * Pha động là chỉ có thể là chất lỏng * Pha tĩnh là chất rắn, là những hạt hình cầu rất nhỏ, có cấu tạo hóa học gọi là polyme, nên được gọi là các hạt nhựa. Bề mặt của các hạt mang nhóm chức ở dạng ion.  Sắc ký lọc gel: * Pha động chỉ có thể là chất lỏng * Pha tĩnh là chất rắn, đó là những hạt hình cầu bằng polyme, trên bề mặt của các hạt có nhiều lỗ rỗng. Mỗi loại nhựa có một kích cỡ nhất định, biết trước. Tiêu biểu của sắc ký lọc gel 8 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột 4.3. Phân loại theo cấu hình  Sắc ký giấy và sắc ký lớp mỏng: Phương pháp sắc kí lớp mỏng bao gồm pha tĩnh là một lớp mỏng các chất hấp phụ, thường là silica gel, aluminium oxide, hoặc cellulose được phủ trên một mặt phẳng chất trơ. Pha động bao gồm dung dịch cần phân tích được hòa tan trong một dung môi thích hợp và được hút lên bản sắc ký bởi mao dẫn, tách dung dịch thí nghiệm dựa trên tính phân cực của các thành phần trong dung dịch. Chế phân tách của sắc ký giấy chủ yếu là phân bố, trong đó pha tĩnh (thường là nước) được thấm trên một tờ giấy thấm đặc biệt gọi là giấy sắc ký. Nhờ các xoang rỗng trong sợi cellulose của tờ giấy sắc ký khác nhau, phân biệt theo độ thấm dung môi và mức độ dày mỏng của giấy, với các mã hiệu tùy thuộc vào hãng sản xuất. Khi tiến hành sắc ký cần chọn loại giấy thích hợp.  Sắc ký cột Sắc ký cột hở cổ điển là tên gọi để chỉ loại sắc ký sử dụng một ống hình trụ, được đặt dựng đứng, với đầu trên hở và đầu dưới có gắn một khóa, dụng cụ này giống như cái buret định phân trong phòng thí nghiệm. Có thể nói sắc ký cột là một dạng của sắc ký giấy hoặc sắc ký lớp mỏng nhưng ở đây pha tĩnh được nhồi vào cột, nhờ vậy có thể triển khai một cách liên tục với nhiều hệ dung môi khác nhau từ phân cực yếu đến phân cực mạnh. Trong sắc ký cột pha tĩnh là chất rắn được nhồi thành cột. Tùy theo tính chất của chất dùng làm cột mà sự tách trong cột xảy ra chủ yếu theo cơ chế hấp phụ (cột hấp phụ) hoặc theo cơ chế phân bố (cột phân bố). Sắc ký cột được tiến hành ở điều kiện áp suất khí quyển. Pha tĩnh thường là những hạt có kích thước tương đối lớn (50-150μm), được nạp trong một cột bằng thủy tinh. Mẫu chất cần phân tích được đặt phía trên đầu pha tĩnh, có một lớp bông thủy tinh đặt lên trên bề mặt để không bị xáo trộn lớp mặt. Dung môi giải ly được đưa ra và hứng trong những lọ nhỏ ở phía dưới cột, rồi đem cô quay đuổi dung môi, dùng sắc lý lớp mỏng để theo dõi quá trình giải ly. 9 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột Trong sắc ký cột với pha tĩnh là silica gel loại thường thì hợp chất không hoặc kém phân cực được giải ly ra khỏi cột trước, hợp chất phân cực được giải ly ra sau. Còn trong sắc ký cột với pha tĩnh là silica gel pha đảo thì những hợp chất phân cực sẽ giải ly ra khỏi trước và những chất phân cực kém sẽ giải ly sau. 10 [...]... 20 phút) Cho phép phân lập mẫu 0.01-10g 29 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột trong10-15 phút Có thể tách rất tốt hỗn hợp có khoảng 4 chất - Thiết bị đơn giản, rẻ tiền so với HPLC ₪ Nhược điểm: - Độ phân giải trung bình (lớn hơn 0.15) - Không tách được hỗn hợp phức tạp hay tách riêng chất cần phân lập mà chỉ thu được các phân đoạn chứa chất cần phân lập - Để thực hiện... tách chậm và hiệu quả thấp so với sắc ký lỏng cao áp 3.3 Ứng dụng - Phân lập các alkaloid, kháng sinh, hormon tăng trưởng steroid, hormon sinh dục và các hợp chất liên quan - Tách các chất lipid, các hợp chất chứa nitro từ các hydrocarbon, các hợp chất vòng thơm từ hỗn hợp mạch thẳng – vòng thơm - Rửa giải và tách các thuốc trừ sâu - Làm tinh khiết dược liệu - Phân tích các vitamin - Khử màu dầu, chất. .. - Không tách ngay thành chất tinh khiết được (trừ những hỗn hợp đơn giản hay các vết cách xa nhau) - Phải có dụng cụ thích hợp (phễu lọc xốp; hệ thống hút) Ứng dụng: - Tách hỗn hợp thành vài phân đoạn có độ phân cực khác nhau, mỗi phân đoạn gồm ít chất hơn để dễ dàng phân lập tiếp bằng sắc ký cột cổ điển - Hoạt động đơn giản nên được ứng dụng rộng trong lĩnh vực hợp chất thiên nhiên Thích hợp đối... không phân cực Dây alkyl R thường là C-1, C-2, C-4, C-6, C-8, và C-18 Tuy nhiên, thường hay chế tạo dây C-8 và C-18 Silica gel pha đảo có ái lực mạnh với các hợp chất kém phân cực và giữ chặt các hợp chất này lại trong cột Pha động thường là nước, sau đó thêm vào các dung môi hữu cơ để làm giảm độ phân cực của dung môi giải ly, như thế chất phân cực sẽ giải ly ra khỏi cột trước, và những chất kém phân. .. Năng lực triền quang - Khối phổ 24 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột - Phân tích nguyên tố - Phổ hồng ngoại IR - Phổ tử ngoại: λmax (chỉ đo khi hợp chất có chứa nối đôi liên hợp) - Phổ 1H –NMR - Phổ 13C-NMR Sau khi biện luận các tín hiệu của các loại phổ, so sánh với các số liệu trong tài liệu sẽ đề xuất cấu trúc hóa học của hợp chất cô lập được Cấu trúc này phải đáp ứng... trọng lượng mẫu cần sắc ký Tuy nhiên với những hỗn hợp các hợp chất khó tách riêng thì cần sử dụng số lượng chất hấp phụ nhiều hơn (lớn hơn 100-200 lần), còn với các hỗn hợp dễ tách thì có thể sử dụng lượng chất hấp phụ ít hơn - Tỉ lệ giữa chiều cao chất hấp phụ và đường kính trong của cột vào khoảng 10:1 Muốn biết lượng chất hấp phụ có phù hợp với cột thì cho chất hấp phụ khô vào cột để quan sát 1.2 Các.. .Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột Chương 2: SẮC KÝ CỘT HỞ 1 DỤNG CỤ - HÓA CHẤT 1.1 Cột Cột là những ống hình trụ bằng thủy tinh dài 30-70 cm, đường kính 1-5 cm, đầu dưới có một vòi thủy tinh và 1 khóa để điều chỉnh tốc độ chảy Kích cỡ của cột tùy thuộc vào số lượng mẫu chất cần phân tách - Trọng lượng chất hấp phụ phải lớn hơn 2550 lần... môi chảy qua, hứng dung môi vào một becher trống, dung môi này được sử dụng lại để rót lên đầu cột 17 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột Rót chất sệt vào cột cho đến khi hết số lượng, vừa rót vừa dùng 1 thanh cao su gõ nhẹ vào bên ngoài thành cột để chất hấp phụ nén đều trong cột Sau khi nạp xong, cho dung môi chảy ra và rót trở lại đầu cột vài lần để việc nạp cột được... hoá chất Vì vậy, với từng mục đích sử dụng mà ta có thể chọn một phương pháp sắc ký phù hợp để phân tích mẫu tương ứng./ 33 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột TÀI LIỆU THAM KHẢO 1 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1986), Phương pháp nghiên cứu hóa học cây thuốc, Nhà xuất bản Y học chi nhánh Thành phố Hồ Chí Minh 2 Nguyễn Ngọc Hạnh (2002), Giáo trình tách chiết và cô lập. .. màu dầu, chất béo và sáp bằng phương pháp thấm lọc 25 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột Chương 3: MỘT VÀI KỸ THUẬT SẮC KÝ CỘT KHÁC 1 Sắc ký cột khô (Dry column chromatography – DCC) - Chất hấp phụ: sử dụng alumina hoặc silica gel loại dùng cho sắc ký lớp mỏng, có thể trộn thêm chất chỉ thị phát huỳnh quang Liều lượng sử dụng: 1g mẫu chất cần 300g chất hấp phụ khô - . ……………………………………………………… 33 2 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột MỞ ĐẦU Thực vật là kho tàng vô cùng phong phú các hợp chất thiên nhiên, hàng trăm nghìn các hợp chất thiên nhiên đã. pha tĩnh Hệ số phân chia là sự phân bố thí dụ: của 2 loại hợp chất ( ) và ( ) trong một hệ thống gồm có hai pha: pha động và pha tĩnh Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp. với mặt thoáng của chất hấp phụ trong cột. 18 Tách chiết và phân lập hợp chất thiên nhiên Phương pháp sắc ký cột - Đóng khóa lại, dùng pipette hút dung dịch mẫu chất và nạp vào đầu cột. Muốn