Định lượng vitamin c và phân lập hợp chất từ lá cây chanh thái (citrus hystrix) tại tỉnh champasack, miền nam lào

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ––––––––––––––––––––– SATHAPANA KHAMPHILA ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C VÀ PHÂN LẬP HỢP CHẤT TỪ LÁ CÂY CHANH THÁI (CITRUS HYSTRIX) TẠI TỈNH CHAMPASACK, MIỀN NAM LÀO LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC THÁI NGUYÊN - 2020 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ––––––––––––––––––– SATHAPANA KHAMPHILA ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C VÀ PHÂN LẬP HỢP CHẤT TỪ LÁ CÂY CHANH THÁI (CITRUS HYSTRIX) TẠI TỈNH CHAMPASACK, MIỀN NAM LÀO Ngành: Hóa học hữu Mã ngành: 8440114 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Cán hướng dẫn khoa học: TS Mai Thanh Nga THÁI NGUYÊN - 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn “Định lượng vitamin C phân lập hợp chất từ chanh Thái (citrus hystrix) tỉnh Champasack, miền Nam Lào” cơng trình nghiên cứu riêng thực Các số liệu luận văn sử dụng trung thực Kết nghiên cứu trình bày luận văn chưa công bố cơng trình khác Thái Ngun, tháng năm 2020 Người viết luận văn Sathapana KHAMPHILA i LỜI CẢM ƠN Luận văn thực Phịng thí nghiệm Hóa hữu khoa Hóa học - Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên Lời đầu tiên, em xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến giáo TS Mai Thanh Nga tận tình hướng dẫn giúp đỡ em thời gian thực luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban chủ nghiệm Khoa Hóa học thầy làm việc phịng thí nghiệm Khoa hóa học - Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện, giúp đỡ cho em q trình học tập, nghiên cứu hồn thiện luận văn Do thời gian nghiên cứu luận văn chưa nhiều nên khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp quý thầy bạn để luận văn hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn Thái Nguyên, tháng năm 2020 Người viết luận văn Sathapana KHAMPHILA ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN .vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chanh Thái (Citrus hystrix) .2 1.1.1 Tên khoa học .2 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Nguồn gốc 1.1.4 Ứng dụng tác dụng chanh Thái 1.2 Tình hình nghiên cứu giới .7 1.2.1 Tình hình nghiên cứu thành phần hóa học chanh Thái 1.2.2 Tình hình nghiên cứu thành phần tinh dầu chanh Thái 15 1.2.3 Tình hình nghiên cứu hoạt tính sinh học chanh Thái .21 1.3 Hoạt tính sinh học vitamin C .23 1.3.1 Chất chống oxy hóa 24 1.3.2 Tổng hợp collagen 24 1.3.3 Ngăn ngừa bệnh ung thư 24 1.3.4 Chống căng thẳng 25 1.3.5 Tăng đề kháng với bệnh nhiễm vi sinh vật 25 1.4 Tổng quan phương pháp HPLC 26 1.4.1 Khái niệm .26 1.4.2 Sơ lược hệ thống HPLC 26 1.4.3 Pha tĩnh 27 1.4.4 Pha động 28 1.4.5 Đánh giá peak 29 1.4.6 Đánh giá kết 30 Chương 2: THỰC NGHIỆM 32 2.1 Đối tượng nghiên cứu 32 2.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị nghiên cứu 32 2.2.1 Hóa chất 32 2.2.2 Thiết bị 32 2.3 Phương pháp chiết phân lập hợp chất hữu 33 2.3.1 Sơ đồ chiết phân lập hợp chất hữu .33 2.3.2 Phương pháp chiết hợp chất hữu 34 2.3.3 Quá trình phân lập chất từ cao ethyl acetate .34 2.4 Phương pháp khảo sát cấu trúc hóa học chất .36 2.5 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao (HPLC) 36 2.5.1 Chuẩn bị dung dịch phân tích xác định đường chuẩn Vitamin C .36 2.5.2 Chuẩn bị dung dịch cần khảo sát hàm lượng Vitamin C 36 2.5.3 Phương pháp xử lý số liệu .37 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Kết phân lập hợp chất chanh Thái 39 3.2 Kết xác định cấu trúc hợp chất 39 3.2.1 Phân tích cấu trúc hợp chất KS1 .39 3.2.2 Phân lập cấu trúc hợp chất KS2 .45 3.3 Xác định hàm lượng vitamin C chanh Thái 48 3.3.1 Khảo sát điều kiện nghiên cứu 48 3.3.2 Kiểm tra tính thích hợp hệ thống 49 3.3.3 Xác định khoảng tuyến tính, xây dựng đường chuẩn 50 3.3.4 Khảo sát độ lặp lại, Xác định hàm lượng vitamin C mẫu Chanh Thái trồng tỉnh Champasack, miền Nam Lào 51 3.4 Khảo sát độ 53 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .55 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO .57 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN Chữ viết tắt ADN Chữ viết đầy đủ tiền Anh Chữ viết đầy đủ tiếng Việt Acid deoxyribonucleic Phân tử mang thông tin di truyền 13 C-NMR 13 C-Nucler Magnetic Resonance DEPT Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13 Distortionless Enhancement C Phổ DEPT by Polarisation Transfer GCMS Gas Chromatography Sắc ký khí khối phổ Mass Spectrometry H-NMR H- Nucler Magnetic Resonance HMBC HPLC Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Heteronuclear multiple-Bond H Phổ tương quan hai chiều Correlation H-C High-Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu nâng cao Chromatography HSQC Heteronuclear Single-Quantum Phổ tương tác C-H Coherrence LLC Liquid-Liquid Sắc ký lỏng lỏng Chromatography LSC Liquid-Solid Chromatography Sắc ký lỏng rắn STT - Số thứ tự TLTK - Tài liệu tham khảo Ultra High-Performance Sắc ký lỏng hiệu suất cực cao UHPLC Liquid Chromatography vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hóa học chanh Thái (Citrus hystrix DC) Bảng 1.2 Thành phần tinh đầu canh Thái (Citrus hystrix) 17 Bảng 2.1 Kết sắc ký cột silica gel cao chiết Ethyl acetate 35 Bảng 2.2 Kết sắc ký cột silica gel phân đoạn ET4 35 Bảng 3.1 Độ dịch chuyển hóa học proton Phổ 1H-NMR chất KS1và quercetin 41 Bảng 3.2 Độ dịch chuyển hóa học proton Phổ 1H-NMR chất KS2 myricetin 47 Bảng 3.3 Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký 50 Bảng 3.4 Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính vitamin C chuẩn bằng phương pháp HPLC 50 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ lặp lại hàm lượng vitamin C 100g chanh Thái 53 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ 54 vii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây chanh Thái Hình 1.2 Sơ đồ hệ thống máy sắc ký lỏng hiệu nâng cao (HPLC) 26 Hình 1.3 Hình ảnh máy HPLC phịng thí nghiệm 27 Hình 2.1 Lá chanh thái bột chanh Thái 32 Hình 2.2 Sơ đồ quy trình chiết phân lập hợp chất từ chanh Thái 33 Hình 3.1 Phổ 1H- NMR hợp chất KS1 40 Hình 3.2 Phổ 13C-NMR hợp chất KS1 40 Hình 3.3 Phổ DEPT hợp chất KS1 41 Hình 3.4 Tương quan phổ HMBC hợp chất KS1 43 Hình 3.5 Phổ HSQC hợp chất KS1 43 Hình 3.6 Phổ HMBC hợp chất KS1 44 Hình 3.7 Cấu trúc hợp chất quercetin 45 Hình 3.8 Phổ 1H- NMR hợp chất KS2 45 Hình 3.9 Phổ 13C- NMR KS2 46 Hình 3.10 Cấu trúc hợp chất myricetin 48 Hình 3.11 Sắc kí đồ 3D khảo sát bước sóng thích hợp hợp chất vitamin C 49 Hình 3.12 Sắc ký đồ vitamin C 49 Hình 3.13 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích peak mẫu vitamin C chuẩn 51 Hình 3.14 Sắc ký đồ vitamin C chiết từ chanh Thái 52 Hình 3.15 Sắc ký đồ vitamin C chiết từ chanh Thái 52 viii Hình 3.10 Cấu trúc hợp chất myricetin Các kết nghiên cứu hợp chất quercetin, myricetin cho thấy hợp chất flavonoid có khả cải thiện sức khỏe tim mạch, chống lỗng xương, chống viêm chất chống oxy hóa tự nhiên có khả hấp thụ gốc tự do, ngồi myricetin cịn dùng để bảo quản thực phẩm, kéo dài thời gian sử dụng cho thực phẩm có chứa dầu chất béo [11], [15] Việc phân lập hợp chất quercetin, myricetin từ chanh Thái góp phần khẳng định thêm tác dụng dân gian sử dụng chanh Thái trồng Champasack, miền Nam Lào 3.3 Xác định hàm lượng vitamin C chanh Thái 3.3.1 Khảo sát điều kiện nghiên cứu Dựa vào kết nghiên cứu tài liệu [4] kết hợp khảo sát với mẫu chuẩn mẫu thực lựa chọn điều kiện tối ưu cho phép xác định vitamin C chanh Thái bằng phương pháp HPLC:  Cột tách: cột C18  Detector UV-Vis: λ = 248,3 nm  Tốc độ dòng chảy: 0,8 mL/phút  Thể tích bơm mẫu: 10 µL  Nhiệt độ phân tích: 300C  Pha động: CH3OH - KH2PO4 1% (v/v =15:85)  Dung môi pha mẫu: nước cất  Thời gian chạy mẫu vitamin C chuẩn 10 phút, với mẫu cần khảo sát 30 phút Hình 3.11 Sắc kí đồ 3D khảo sát bước sóng thích hợp hợp chất vitamin C 3.3.2 Kiểm tra tính thích hợp hệ thống Chúng tơi tiến hành thí nghiệm với dung dịch vitamin C chuẩn (5 lần) Kết thể hình 3.12 bảng 3.3 0.30 0.25 0.15 0.10 Vitamin C - 3.267 AU 0.20 0.05 0.00 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 Minutes 6.00 7.00 Hình 3.12 Sắc ký đồ vitamin C 8.00 9.00 10.00 Các kết sắc ký đồ cho thấy xuất peak có hình ảnh sắc nhọn, cân đối thời gian lưu 3,267 phút, thời gian lưu ngắn nên tiết kiệm thời gian dung mơi q trình phân tích Bảng 3.3 Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký Mẫu Số liệu thống kê Thời gian lưu (phút) 3,267 3,266 3,269 3,267 3,268 ttb=3,267; S =0.01 RSD=0,035% Diện tích peak (mAu x phút) 1010167 1001279 1011810 1011774 994052 Stb=1005816; S=7895,14 RSD=0,785 % Số liệu bảng 3.3 cho thấy hệ thống sắc ký tương thích với mẫu phân tích Độ lệch chuẩn tương đối diện tích peak thời gian lưu nhỏ 1% Vì hệ thống sắc ký đảm bảo tính thích hợp, tính xác 3.3.3 Xác định khoảng tuyến tính, xây dựng đường chuẩn Chúng tơi khảo sát độ tuyến tính nồng độ mẫu vitamin C cần định lượng với diện tích peak tương ứng chất chuẩn vitamin C Chuẩn bị dung dịch vitamin C chuẩn có nồng độ biến thiên khoảng 50 µg/mL, 70 µg/mL, 90 µg/mL, 100 µg/mL, 120 µg/mL, 140 µg/mL Bảng 3.4 Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính vitamin C Nồng độn(g/mL) chuẩ bằng phươngDiện pháptích HPLC peak (mAu x phút) Mẫu 50 115925 70 341667 90 515665 100 715665 120 1011774 140 1224414 Từ kết bảng 3.4 biểu diễn phụ thuộc diện tích peak vitamin C vào nồng dộ bằng đồ thị thể hình 3.13 Diện tích peak (mAu x phút ) Đường chuẩn vitamin C 1400000 1200000 y = 12642x - 546805 R² = 0.9903 1000000 800000 600000 400000 200000 0 50 100 150 Nồng độ (g/mL) Hình 3.13 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích peak mẫu vitamin C chuẩn Trong khoảng nồng độ khảo sát vitamin C từ 50-140 µg/mL xác định độ tuyến tính nồng độ diện tích peak bằng phương trình hồi quy tuyến tính y = 12642x - 546805 có hệ số tương quan R2 = 0,9903 3.3.4 Khảo sát độ lặp lại, xác định hàm lượng vitamin C mẫu Chanh Thái trồng tỉnh Champasack, miền Nam Lào Độ lặp lại phương pháp tiến hành bằng cách định lượng vitamin C mẫu nghiên cứu với lần khảo sát thực nghiệm khác Hình 3.14 Sắc ký đồ vitamin C chiết từ chanh Thái Hình 3.15 Sắc ký đồ vitamin C chiết từ chanh Thái Từ hình 3.14; 3.15 ta thấy có nhiều peak xuất sắc kí đồ, có peak có độ hấp thụ tốt với khoảng thời gian lưu tương ứng với mẫu vitamin C chuẩn đo diều kiện Vì chúng tơi khẳng định peak hấp thụ vitamin C chanh Thái Bảng 3.5 Kết khảo sát độ lặp lại hàm lượng vitamin C 100g chanh Thái Lá Mẫu Quả Hàm lượng Diện tích peak vitamin C (mg) Diện tích Hàm lượng peak vitamin C (mg) 158286 7,41 890728 21,50 156302 7,39 899901 21,63 155224 7,37 902110 21,67 150200 7,32 888202 21,46 158419 7,41 896568 21,58 Số liệu thống kê X = 7,38 X = 21,57 mg S= 0,03 S= 0,09 RSD = 0,43% RSD = 0,41 % Như băng phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao, giúp chúng tơi xác định nhanh chóng, xác quán hàm lượng vitamin C chanh Thái Kết xác định hàm lượng vitamin C có 100g (21,57 mg) lớn nhiều hàm lượng vitamin C 100g chanh Thái (7,38 mg) Kết nghiên cứu hoàn tồn phù hợp với tài liệu cơng bố trước [19] 3.4 Khảo sát độ Độ phương pháp xác định băng phương pháp thêm chuẩn Thêm vào mẫu thử lượng dung dịch chất chuẩn biết nồng độ Dựa vào diện tích peak dung dịch tính tỷ lệ thu hồi lượng chất chuẩn thêm vào Lặp lại thí nghiệm với lần khác Các dung dịch sắc ký điều kiện với dung dịch chuẩn Kết thể bảng 3.6 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ Mẫu CX (µg/mL) CC (µg/mL) CT (µg/mL) Rev (%) 27,89 50 76,42 97,07 27,81 50 77,59 96,56 27,77 50 77,03 98,53 27,57 50 76,82 98,51 27,89 50 76,51 97,24 Trong đó: CX nồng độ (µg/mL) dung dịch vitamin C xác định mẫu chưa thêm chuẩn; CC nồng độ (µg/mL) dung dịch chuẩn vitamin C thêm vào mẫu (đã biết); CT nồng độ (µg/mL) dung dịch vitamin C xác định mẫu sau thêm chuẩn; Rev độ thu hồi Kết cho thấy phương pháp tìm lại có độ cao với phần trăm tìm lại trung bình 98,18% Do kết luận phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao dùng để xác định hàm lượng vitamin C thực vật đạt yêu cầu độ KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau thời gian thực nghiệm nghiên cứu hoàn thành nhiệm vụ đề tài thu kết sau: Đã chiết xuất cao chiết tổng số etanol, n-hexan, etylacetat Đã phân lập 02 chất cao etylacetat Thực nghiệm đo phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT, HSQC HMBC xác định cấu trúc hợp chất SK1 quercetin hợp chất KS2 myricetin Xây dựng điều kiện tối ưu cho phép xác định nhanh, xác hàm lượng vitamin C mẫu nghiên cứu chanh Thái theo phương pháp HPLC Định lượng hàm lượng vitamin C (7,38 mg/100g) chanh Thái (21,57 mg/100g) trồng tỉnh Champasack, miền Nam Lào Kiến nghị Trong chanh Thái chứa nhiều hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học sử dụng sống Vì chúng tơi mong có nghiên cứu thành phần hóa học thử nghiệm hoạt tính sinh học hợp chất có mặt chanh Thái để sử dụng lồi cách có hiệu cho lĩnh vực thực phẩm y dược phục vụ tốt cho đời sống người DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Mai Thanh Nga, Sathapana Khamphila, Nguyễn Thị Thanh Hương, “Phân lập số hợp chất flavonoid từ chanh Thái (Citrus hystrix) thu hái tỉnh Champasack, miền Nam Lào”, Tạp chí phân tích Hóa, Lý Sinh học, tập 25, số 1/2020, tr.73 – 75, 115 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tiếng Việt [1] TS Dương Thị Tú Anh, Giáo trình phương pháp phân tích cơng cụ, NXB giáo dục Việt Nam [2] Nguyễn Tiến Bân (chủ biên) (2003), Danh lục loài thực vật Việt Nam Tập II Nhà xuất Nông nghiệp - Hà Nội, trang 965 [3] Nguyễn Minh Đức (2006), “Sắc ký lỏng hiệu nâng cao số ứng dụng nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu hợp chất tự nhiên”, NXB Y học Thành phố Hồ Chí Minh, Tr.138,148-149 [4] Mai Thanh Nga (2018), “Nghiên cứu hàm lượng vitamin C chùm ngây thành phố Thái Nguyên băng phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao”, Tạp chí phân tích Hóa, Lý sinh học, số 2, (T24), Tr 9-13 [5] Nguyễn Văn Thủ, Đakao, quận 1, TP Hồ Chí Minh, Phịng Phân tích Sắc Ký (CASE), 2008-2019 II Tiếng Anh [6] Arumugam Abirami, Gunasekaran Nagarani and Perumal Siddhuraju (2013), “Antimicrobial activity of crude extract of Citrus hystrix and Citrus maxima”, International Journal of Pharmaceutical Siences and Research, 4(1), PP 296-300 [7] Arumugam Abirami, Gunasekaran Nagarani and Perumal Siddhuraju (2014), “The Medicinal and Nutritional Role of Underutilized Citrus Fruit- Citrus hystrix (Kaffir Lime): A Review”, Drug Invention Today, 6(1), PP 1-5 [8] Arumugam Abirami, Gunasekaran Nagarani and Perumal Siddhuraju (2014), “In vitro antioxidant, anti-diabetic, cholinesterase and tyrosinase inhibitory potential of fresh juice from Citrus hystrix and C maxima fruits”, Food Science and Human Wellness, 3(1), PP 16-25 [9] Arumugam Abirami, Gunasekaran Nagarani and Perumal Siddhuraju (2015), “Hepatoprotective effect of leaf extracts from Citrus hystrix and C maxima against paracetamol induced liver injury in rats”, Food Science and Human Wellness, 4(1), PP 35-41 [10] Ahmadu S., mohammed A A., buhari H., and auwal A (2016), “An Overview of Vitamin C as An Antistress in poultry”, Malaysian Journal of Veterinary Research, 7(2), PP 9-22 [11] Bentz, A.B (2009), “A review of quercetin: Chemistry, antioxidant properties, and bioavailability”, Journal of young investigators, 19 (10), PP 1131-1137 [12] Butryee Chaniphun, Sungpuag Pongtorn & Chitchumroonchokchai Chureeporn (2009), “Effect of Processing on the Flavonoid Content and Antioxidant Capacity of Citrus hystrix Leaf”, International Journal of Food Sciences and Nutrition, 60(2), PP 162-174 [13] Chueahongthong Fah, Ampasavate Chadarat, Okono Siriporn, Tima Singkome and Anuchapreeda Songyot (2011), “Cytotoxic effects of crude kaffir lime (Citrus hystrix DC.) leaf fractional extracts on leukemic cell lines”, Journal of Medicinal Plants Research, 5(14), PP 3097-3105 [14] Chan S W., Lee, C Y., Yap, C F., Wan Aida, W M & Ho, C W (2009), “Optimisation of extraction conditions for phenolic compounds from limau purut (Citrus hystrix) peels”, International Food Research Journal, 16(1), PP 203-213 [15] Deepak Kumar Semwal, Ruchi Badoni Semwal, Sandra Combrinck and Alvaro Viljoen (2016), “Myricetin: A Dietary Molecule with Diverse Biological Activities”, Journal List, Nutrients, 8(2) [16] Doreen S.H NG, Laili C Rose, Hamdan Suhaimi, Habsah Mohamad, Mohd Z H Rozaini and Mariam Taib (2011), “Preliminary evaluation on the antibacterial activities of Citrus hystrix oil emulsions stabilized by tween 80 and span 80”, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3(2), PP 209-211 [17] Elsa Dilla Dertyasasa and Woro Anindito Sri Tunjung (2017), “Volatile Organic Compounds of Kaffir Lime (Citrus hystrix DC) Leaves Fractions and their Potency as Traditional Medicine”, Biosciences Biotechnology research Asia, 14(4), PP 1235-1250 [18] Elzbieta Pawlowska, Joanna Szczepanska and Janusz Blasiak (2019), “Pro- and Antioxidant Effects of Vitamin C in Cancer in correspondence to Its Dietary and Pharmacological Concentrations”, Hindawi Oxidative Medicine and Cellular Longevity, PP 1-18 [19] Fatin Najwa R and Azrina A (2017), “Comparison of vitamin C content in citrus fruits by titration and highperformance liquid chromatography (HPLC) methods”, International Food Research Journal, 24(2), PP 726-733 [20] Fan Siew Loh, Rita Muhamad Awang, Dzolkhifli Omar and Mawardi Rahmani (2011), “Insecticidal properties of Citrus hystrix DC leaves essential oil against Spodoptera litura fabricius”, Journal of Medicinal Plants Research, 5(16), PP 3739-3744 [21] Hongratanaworakit T., P Tapaneeyasin, J Nuamlert, A Chansiri, & N Hongrattanavorakit (2006), “Development of skin whitening preparations from kaffir lime oil (Citrus hystrix)”, 54th Annual Congress on Medicinal Plant Research, 72, PP 1044 [22] Hongratanaworakit Tapanee and Buchbauer Gerhard (2007), “Chemical composition and stimulating effect of Citrus hystrix oil on humans”, Flavour and Fragrance Journal, 22, PP 443-449 [23] Irda Fidrianny, Yurika Johan, Sukrasno, (2015), “Antioxidant activities of different polarity extracts from three organs of Makrut lime (citrus hystrix dc) and correlation with total flavonoid, phenolic, carotenoid content”, Asian Journal of Phamaceutical and clinical Research, 8(4), PP 239-243 [24] Jamilah, B., Abdulkadir Gedi, M., Suhaila, M & Md.Zaidul, I.S.(2011), “Phenolic in Citrus hystrix leaves obtained using supercritical carbon dioxide extraction”, International Food Research Journal, 18(3), PP 941-948 [25] Jean Waikedrea, Annabelle Dugay, Isabel Barrachina, Christine Herrenknecht, Pierre Cabaliona, and Alain Fournet (2010), “Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Essential Oils from New Caledonian Citrus macroptera and Citrus hystrix”, Chemistry & Biodiversity, 7(2010), PP 871-877 [26] Kemthong Mitrakula, Ratchapin Srisatjalukb, Vimol Srisukhc, Kadkao Vongsawana (2016), “Citrus hystrix (makrut oil) oral sprays inhibit Streptococcus mutans biofilm formation”, Sience Asia, 42(2016), PP 12-21 [27] Lilis Siti Aisyah, Yenny Febriani Yun, Tati Herlina, Euis Julaeha, Achmad Zainuddin, Ida Nurfarida, Ace Tatang Hidayat, Unang Supratman and Yoshihito Shiono (2017), “Flavonoid Compounds from the Leaves of Kalanchoe prolifera and Their Cytotoxic Activity against P388 Murine Leukimia Cells”, Natural Product Sciences, 23(2), PP 139145 [28] Mohammad Ali, Rumana Akhter, Syeda Najah Narjish, Mohammad Shahriar and Mohiuddin Ahmed Bhuiyan (2015), “Studies of preliminary phytochemical screening, membrane stabilizing activity, thrombolytic activity and in-vitro antioxidant activity of leaf extract of Citrus hystrix”, International Journal of Pharmaceutical Siences and Research, 6(6), PP 2367-2374 [29] Magdalena Borusiewicza, Danuta Trojanowskab, Paulina Paluchowskab, Zbigniew Janeczkoa, Max W Petitjeanc, Alicja Budakb (2017), “Cytostatic, cytotoxic, and antibacterial activities of essential oil isolated from Citrus hystrix”, Sience Asia, 43(2017), PP 96-106 [30] Megawati Mohd Yunus, Sharipah Ruzaina Syed Aris, Mohd Nasir Taib, Siti Zura A Jalil (2018), “Emotive Responses Evaluation on Human Cognition after Citrus Hystrix Exposure”, Global Journal of Plant Science, 2(1), PP 27-34 [31] Murad S., Grove D., Lindberg K A., Reynolds G., Sivarajah A., and Pinnellt S R (1981), “Regulation of collagen synthesis by ascorbic acid”, Proc Natl Acad Sci USA, 78(5), PP 2879-2882 [32] Nurhani Kasuan, Zuraida Muhammad, Zakiah Yusoff, Mohd Hezri Fazalul Rahiman, Mohd Nasir Taib, Zaibunnisa A Haiyee (2013), “Extraction of Citrus hystrix d.c (kaffir lime) essential oil using automated steam distillation process: analysis of volatile compounds”, Malaysian Journal of Analytical Sciences, 17(3), PP 359 - 369 [33] Sreepian A., Sreepian P.M., Chanthong C., Mingkhwancheep T and Prathit P., (2019), “Antibacterial activity of essential oil extracted from Citrus hystrix (Kaffir Lime) peels: An in vitro study”, Tropical Biomedicine, 36(2), PP 531-541 [34] Si, C L., Huang, X F., An, L L., Fan, S., Liu, C Y., Xie, D N., Hong, Y M., and Chen, J (2015), “Extraction and structural characterization of flavoniods from twigs of Sophora japonica”, BioRes, 10(4), PP 83978404 [35] Sebastian J Padayatty, MRCP, PhD, Arie Katz, MD, Yaohui Wang, MD, Peter Eck, PhD, Oran Kwon, PhD, Je-Hyuk Lee, PhD, Shenglin Chen, PhD, Christopher Corpe, PhD, Anand Dutta, BS, Sudhir K Dutta, MD, FACN, and Mark Levine, MD, FACN (2003), “Vitamin C as an Antioxidant: Evaluation of Its Role in Disease Prevention”, Journal of the American College of Nutrition, 22(1), PP 18-35 [36] Soraya Mousavi, Stefan Bereswill and Markus M Heimesaat (2019), “Immunomodulatory and Antimicrobial Effects of Vitamin C”, European Journal of Microbiology and Immunology, 9(3), PP 73-79 [37] Suhaila Mohd Sauid, Faris Azri Aswandi (2018), “Extraction methods of essential oil from kaffir lime (Citrus hystrix): A review”, Malaysian Journal of Chemical Engineering & Technology, 1(2018), PP 56-64 [38] Tunjung W.A.S, Cinatl Jr.J, Michaelis M, Smales C.M (2015), “Anticancer effect of kaffir lime (Citrus hystrix) leaf extract in cervical cancer and neuroblastoma cell lines”, Procedia Chem, 14, PP 465-468 [39] Wenny Irawaty, Felycia E Soetaredjo, Aning Ayucitra, Martinus E Sianto, Kevin Jonathan, Cynthia D., Cicilia Setyabudi, Stefani Tanda (2014), “Antioxidant and Antidiabetic Activities of Ethanolic Citrus Hystrix Peel Extract: Optimization of Extraction Conditions”, Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 8(14), PP 85-89 [40] Wongsariya Karn, Phanthong Phanida, Bunyapraphatsara Nuntavan, Srisukh Vimol, and Mullika Traidej Chomnawang (2014), “Synergistic interaction and mode of action of Citrus hystrix essential oil against bacteria causing periodontal diseases”, Phramaceutical Biology, 52(3), PP 273-280 [41] Warsito Warsito, Maimunah Hindun Palungan and Edy Priyo Utomo (2017), “Profiling study of the major and minor components of kaffir lime oil (Citrus hystrix DC.) in the fractional distillation process”, Pan African Medical Journal, 27, PP 282 III Trang web [42] http://caygiong365.com/Chanh/Cây-chanh-thái (Trung tâm nghiên cứu phát triển giống học viên nông nghiệp Việt Nam) ... trình nghiên c? ??u thành phần hóa h? ?c có chanh Thái Do đó, chúng tơi lựa chọn đề tài: ? ?Định lượng vitamin C phân lập hợp chất từ chanh Thái (Citrus Hystrix) tỉnh Champasack, miền Nam Lào? ?? M? ?c tiêu đề... H? ?C THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI H? ?C SƯ PHẠM ––––––––––––––––––– SATHAPANA KHAMPHILA ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C VÀ PHÂN LẬP HỢP CHẤT TỪ LÁ C? ?Y CHANH THÁI (CITRUS HYSTRIX) TẠI TỈNH CHAMPASACK, MIỀN NAM LÀO... tài - X? ?c định hàm lượng vitamin C chanh Thái - Chiết, phân lập, x? ?c định c? ??u tr? ?c hợp chất từ chanh Thái Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chanh Thái (Citrus hystrix) 1.1.1 Tên khoa h? ?c - Tên