Kĩ thuật tách chiết ADN, ARN

11 KyKyѺѺ thuthuââҕҕt t tataғғch chich chiêêғғt t ADN, ARNADN, ARN 22 33 1.1 Tách chiӃt DNA bӝ gen Nguyên lý chung 1. Lҩy máu (tӃ bào hoһc dӏch sinh hóa) 2. Phá vӥ cҩu trúc tӃ bào (EDTA, Chloroform, SDS «) 3. Tӫa DNA 44 55 Phân tích đPhân tích đӏӏnh tính nh tính ƛƛ đđӏӏnh lnh lưӧưӧng DNAng DNA  Đo quang phĐo quang phәә  NhuNhuӝӝm hum huǤǤnh quangnh quang  NhuNhuӝӝm Bm Bҥҥc nitratc nitrat  ĐiĐiӋӋn din di 66 Đo quang phĐo quang phәә Ánh sáng khi đi qua môi trưӡng lӓng sӁ bӏ các phҫn tӱ vұt chҩt trong môi trưӡng đó hҩp thu mӝt phҫn. sӵ hҩp thu ánh sáng gia tăng khi nӗng đӝ các phҫn tӱ vұt chҩt trong môi trưӡng đó gia tăng ĐӍnh hҩp thө các nucleic acid là ӣ 260nm trong vùng tӱ ngoҥi 77 Đo quang phĐo quang phәә Sӵ hҩp thө ӣ dây đưӧc tính bҵng đơn vӏ OD (Optical Density). Mӝt đơn vӏ đơn vӏ hӋ sӕ chuyӇn đәi OD tương ӭng vӟi : 50Qg/ml DNA sӧi đôi 40Qg/ml RNA 33Qg/ml DNA sӧi đơn 88 Đo quang phĐo quang phәә Tính tӹ lӋ OD(260)/OD(280) đӇ ưӟc lưӧng đӝ tinh sҥch cӫa dung dӏch nucleic acid. NӃu tӍ lӋ này nҵm trong khoҧng 1,8 ƛ 2 dung dӏch nucleic acid đưӧc xem là tinh sҥch. Đӕi vӟi dung dӏch DNA sӧi đôi, sӵ hҩp thө bưӟc sóng 260nm tăng lên khi phân tӱ DNA bӏ biӃn tính tӭc là khi hai sӧi đơn tách rӡi nhau => hiӋu quҧ siêu sҳc 99 NhuNhuӝӝm DNAm DNA  NhuNhuӝӝm hum huǤǤnh quang (EtBr nh quang (EtBr ƛƛ Ethidium Ethidium Bromid) : phát quang màu cam khi quan Bromid) : phát quang màu cam khi quan sát dsát dưӟưӟi ánh sáng ti ánh sáng tӱӱ ngongoҥҥi i (302 nm)  NhuNhuӝӝm vm vӟӟi dd Bi dd Bҥҥc:c: 1) Dung dӏch diamine bҥc hoһc ammonical bҥc cho thҩm vào gel 2) Dung dӏch bҥc nitrate vào gel trong môi trưӡng acid yӃu 1010 Đi͏n diĐi͏n di Nguyên lý cӫa điӋn di DNA Trong điӋn trưӡng, do tích điӋn âm nên các phân tӱ DNA dӏch chuyӇn vӅ phía anode và vӟi tӕc đӝ dӏch chuyӇn cӫa chúng khác nhau phө thuӝc vào khӕi lưӧng phân tӱ. Các đoҥn DNA càng lӟn thì dӏch chuyӇn càng chұm. KӃt quҧ là tӯ mӝt điӇm chung (giӃng) các đoҥn DNA khác nhau dӏch chuyӇn phân bӕ ӣ các vӏ trí (các băng - band) tương ӭng vӟi đӝ lӟn cӫa chúng. . 11 KyKyѺѺ thuthuââҕҕt t tataғғch chich chiêêғғt t ADN, ARNADN, ARN 22 33 1.1 Tách chiӃt DNA bӝ gen Nguyên lý chung 1. Lҩy máu (tӃ bào hoһc dӏch sinh hóa) 2. Phá. đôi, sӵ hҩp thө bưӟc sóng 260nm tăng lên khi phân tӱ DNA bӏ biӃn tính tӭc là khi hai sӧi đơn tách rӡi nhau => hiӋu quҧ siêu sҳc 99 NhuNhuӝӝm DNAm DNA  NhuNhuӝӝm hum huǤǤnh quang (EtBr