GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT

GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO Sau lần cấy chuyền đầu tiên, tế bào nuôi cấy sơ cấp được biết như một cell line hay subclone.. Cell line có nguồn gốc từ nuôi cấy sơ cấp có một tuổi thọ gi

Trang 1

GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT

ThS Lê Trầm Nghĩa Thư

Modular laboratory cell culture deviceCELLROLL

Trang 2

GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO

THẾ NÀO LÀ NUÔI CẤY TẾ BÀO?

NUÔI CẤY SƠ CẤP (PRIMARY CULTURE) CELL LINE

CELL STRAIN FINITE VS CONTINUOUS CELL LINE

Trang 3

HÌNH THÁI TẾ BÀO TRONG NUÔI CẤY ỨNG DỤNG CỦA NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY

BẢO QUẢN LẠNH

Trang 4

• THẾ NÀO LÀ NUÔI CẤY TẾ BÀO?

- Tế bào được tách từ động vật hay thực vật

- Tiếp tục tăng trưởng tế bào trong môi trường nhân tạo thuận lợi

- Tế bào được tách trực tiếp từ mô bằng enzyme hay bằng cơ học; hay có thể bắt nguồn từ một cell line hay cell strain

Trang 5

Trang 8

GiỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO

Nuôi cấy sơ cấp liên quan đến gđ nuôi cấy sau khi tế bào được tách ra từ mô và được tăng sinh trong đk thích hợp

cho đến khi tế bào bao phủ hết bề mặt nuôi cấy (hợp

dòng- confluence) Ở gđ này, tế bào được cấy chuyền

(subculture, passage) bằng cách chuyển chúng sang một binh nuôi cấy mới với môi trường tăng trưởng mới

NUÔI CẤY

Trang 9

Sau lần cấy chuyền đầu tiên, tế bào nuôi cấy sơ cấp được biết như một cell line hay subclone Cell line có nguồn gốc

từ nuôi cấy sơ cấp có một tuổi thọ giới hạn (hữu finite) và khi chúng được cấy chuyền, những tế bào với khả năng tăng trưởng cao nhất sẽ chiếm ưu thế, dẫn đến

hạn-sự hình thành những tế bào đồng nhất về kiểu gen và kiểu hình trong quần thể các tế bào nuôi cấy

NUÔI CẤY

Trang 10

Nếu một quần thể nhỏ của một cell line được chọn lựa trong quá trình nuôi cấy bằng cách tạo dòng hay một số phương pháp khác, thì cell line này trở thành một cell strain Một cell strain thường có sự thay đổi di truyền so với dòng bô mẹ (parent line)

NUÔI CẤY

Trang 11

• FINITE VS CONTINUOUS CELL LINE

– Finite cell line: Tế bào bình thường thường phân chia chỉ một số lần giới hạn trước khi chúng mất khả năng tăng sinh (lão hóa)

– Một vài cell line trở nên bất tử qua một quá trình chuyển đổi (tự phát hay được cảm ứng hóa học

hay virus) Khi một finite cell line đã trải qua quá trình chuyển đổi hay có khả năng phân chia vô hạn định, chúng trở thành một continuous cell line

Trang 12

• ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY

– Thay đổi tùy theo loại tế bào nhưng môi trường nhân tạo để nuôi cấy tế bào phải có được:

• Một chất nền hay môi trường cung cấp những chất dinh dưỡng thiết yếu (amino acid, carbohydrates, vitamins, khoáng)

• Yếu tố tăng trưởng

• Hormone

• Khí (O2, CO2 )

• Một môi trường hóa- lý theo quy định (pH, áp lực thẩm thấu, nhiệt độ)

Trang 13

• ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY

– Hầu hết tế bào phụ thuộc vào nơi neo đậu và tế bào nuôi cấy bám vào một chất nền bán rắn hay rắn (nuôi cấy lớp đơn hay bám dính), trong khi

một số tế bào khác có thể phát triển lơ lửng trong môi trường nuôi cấy (nuôi cấy huyền phù)

Trang 14

• BẢO QUẢN LẠNH

– Khi có nhiều tế bào từ quá trình cấy chuyền, tế

bào nên được xử lý với tác nhân bảo vệ thích hợp (DMSO hay glycerol) và được bảo quản ở nhiệt độ dưới -1300 C (bảo quản lạnh) cho đến khi cần

Trang 15

• HÌNH THÁI TẾ BÀO TRONG NUÔI CẤY

– Tế bào trong nuôi cấy có thể được phân chia

thành 3 loại cơ bản dựa trên hình dạng của chúng

Trang 16

- Tế bào giống như

nguyên bào sơi có

đa giác với kích thường đồng đều hơn

- Phát triển bám chặt vào chất nền

Tế bào giống lymphoblast có hạng hình cầu và thường phát

triển ở dạng huyền phù không bám vào bề mặt nuôi cấy

Trang 17

• NHỮNG ỨNG DỤNG CỦA NUÔI CẤY TẾ BÀO

– Một trong những công cụ chính được sử dụng

trong sinh học phân tử và sinh học tế bào

– Cung cấp hệ thống mô hình để nghiên cứu sinh lý

và sinh hóa bình thường của tế bào (nghiên cứu

sự chuyển hóa, lão hóa)

– Tác dụng của thuốc hay những hợp chất độc hại trên tế bào, những đột biến hay chất sinh ung thư

Trang 18

• NHỮNG ỨNG DỤNG CỦA NUÔI CẤY TẾ BÀO

– Sàng lọc thuốc và phát triển thuốc

– Sản xuất ở quy mô lớn các hợp chất sinh học

(vaccine, protein liệu pháp)

Thuận lợi chính: sự đồng nhất và khả năng sinh sản của những tế bào

Trang 19

THIẾT BỊ NUÔI CẤY TẾ BÀO

• Những thiết bị cơ bản

– Tủ thao tác cấy tế bào (cell culture hood)

– Tủ nuôi cấy tế bào (incubator)

– Bể ổn nhiệt (water bath)

– Máy li tâm (centrifuge)

– Tủ lạnh và tủ đông (-200 C) (refrigerator and freezer)

– Máy đếm tế bào (cell counter)

– Kính hiển vi đảo ngược (inverted microscope)

– Hệ thống nitơ lỏng (Liquid nitrogen (N2) freezer or cryostorage container) – Máy khử trùng (sterilizer)

Trang 20

• Những thiết bị mở rộng và hỗ trợ

– Bơm hút (nhu động hay chân không)

– Máy đo pH

– Kính hiển vi đồng pha

– Máy flow cytometer

– Bình nuôi cấy tế bào (e.g., flasks, Petri dishes, roller bottles, multiwell plates) – Pipettes and pipettors

– Syringes and needles

– Đồ chứa chất thải

– Thuốc thử, huyết thanh và môi trường

– Tế bào

Trang 21

Company Logo

www.themegallery.com

ThemeGallery is a Design Digital Content & Contents mall developed by Guild Design Inc.

ThemeGallery is a Design Dig

• Laminar flow hood

– Phân loại

Trang 22

Company Logo

– Đặc điểm dòng khí của Cell culture Hoods

Trang 23

Company Logo

– Cell Culture Hood Layout

Trang 24

Company Logo

AN TOÀN TRONG PTN NUÔI CẤY

• MỨC ĐỘ AN TOÀN (Biosafety Level (BSL)

• THIẾT BỊ AN TOÀN VÀ THIẾT BỊ BẢO VỆ CON NGƯỜI

Trang 25

Company Logo

• MỨC ĐỘ AN TOÀN (Biosafety Level (BSL)

BSL-1

BSL-2

BSL-3

BSL-4

Trang 26

Company Logo

• THIẾT BỊ AN TOÀN VÀ THIẾT BỊ BẢO VỆ CON NGƯỜI

BSL-1

BSL-2

BSL-3

BSL-4

Trang 27

KỸ THUẬT VÔ TRÙNG

• Danh sách kiểm tra kĩ thuật vô trùng

Trang 28

NHIỄM DO TÁC NHÂN SINH HỌC

Trang 29

CELL LINES

• Nuôi cấy tế bào bám dính và tế bào huyền phù

– Đặc điểm của mỗi loại nuôi cấy

Trang 30

CELL LINES

• Nuôi cấy tế bào bám dính và tế bào huyền phù

• Lựa chọn dòng tế bào thích hợp

Trang 31

MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY TẾ BÀO

NUÔI CẤY

TẾ BÀO BÁM DÍNH TẾ BÀO HUYỀN PHÙ NUÔI CẤY

Trang 32

MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY TẾ BÀO

• MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VÀ HUYẾT THANH

• pH và CO2

• Nhiệt độ

Trang 33

Digital Content &

Contents mall developed

by Guild Design Inc.

ThemeGallery is a Design

Digital Content &

ThemeGallery is a Design

Digital Content &

Trang 34

QUY TRÌNH NUÔI CẤY TẾ BÀO

• PHƯƠNG PHÁP VÀ QUY TRÌNH NUÔI CẤY TẾ BÀO

– Concentrating cells

– Dissociation of Cells from Culture Vessels

– Bổ sung yếu tố tăng trưởng cho những tế bào đặc biệt

– Chuẩn bị môi trường từ bột và stock (Media Preparation from Powder and Concentrates)

Trang 35

QUY TRÌNH NUÔI CẤY TẾ BÀO

• PHƯƠNG PHÁP VÀ QUY TRÌNH NUÔI CẤY TẾ BÀO

– Chuẩn bị dung dịch muối từ (Preparing Salts Solutions from Powder Concentrates)

– Cấy chuyền tế bào bám dính (Subculturing Adherent Cells)

– Cấy chuyền tế bào huyền phù (Subculturing Suspension Cells)

– Đông lạnh tế bào (Freezing Cells)

– Giải đông tế bào đông lạnh (Thawing Frozen Cells)

– Trypan Blue Exclusion

– Sử dụng kháng sinh và kháng nấm (Use of Antibiotics and Antimycotics) – Useful Numbers for Cell Culture

Trang 36

NHỮNG VẤN ĐỀ GẶP PHẢI TRONG NUÔI CẤY TẾ

BÀO

Trang 37

SẢN PHẨM CỦA NUÔI CẤY TẾ BÀO

Trang 38

TRANSFECTION & SELECTION

Định dạng
Số trang	38
Dung lượng	745,74 KB