phân tích vi sinh thực phẩm ước tính nồng độ vi khuẩn e.coli trong nông nghiệp, khu vực tại potask brook ở burlington, vermont

- Trong thập kỷ qua, các vi khuẩn đã trực tiếp ảnh hưởng đến chất lượng nước trong các dòng suối , đặc biệt là trong vùng nông nghiệp.. Coliform là chỉ số phân ô nhiễm môi trường và điều

Môn: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM

ƯỚC TÍNH NỒNG ĐỘ VI KHUẨN E.COLI TRONG NÔNG NGHIỆP, KHU VỰC TẠI POTASK BROOK Ở

BURLINGTON, VERMONT

Karoline Rios , Sở Khoa học và Công nghệ , Đại học

Metropolitana , San Juan, PR 00928Edmund ( Ted ) Hart , Khoa Sinh học , Đại học

Vermont , Burlington, Vermont 05.405

1 Tóm tắt

- E coli là một loại vi khuẩn có nguồn gốc chủ yếu

từ phân người

- Trong thập kỷ qua, các vi khuẩn đã trực tiếp ảnh

hưởng đến chất lượng nước trong các dòng suối ,

đặc biệt là trong vùng nông nghiệp Coliform là chỉ

số phân ô nhiễm môi trường và điều này chứng tỏ sự hiện diện tiềm năng của vi khuẩn gây bệnh trong

nước

- E coli là một loại vi khuẩn có nguồn gốc chủ yếu

từ phân người

- Trong thập kỷ qua, các vi khuẩn đã trực tiếp ảnh

hưởng đến chất lượng nước trong các dòng suối ,

đặc biệt là trong vùng nông nghiệp Coliform là chỉ

số phân ô nhiễm môi trường và điều này chứng tỏ sự hiện diện tiềm năng của vi khuẩn gây bệnh trong

nước

- Mục đích của nghiên cứu này là để đánh giá mức độ

vi khuẩn E coli trong các dòng sông gần một khu

vực nông nghiệp ở Burlington

- Sử dụng các phương pháp tiêu chuẩn để so sánh

mức độ của các vi khuẩn phân thay đổi theo thời

gian như thế nào Tiến hành lấy 3 mẫu mỗi ngày ,

phân tích trong phòng thí nghiệm theo một giao thức gọi là : Dự án Tổng Coliform/ Vi khuẩn E Coli

trong dòng suối, đọc kết quả trong 24 giờ và so sánh kết quả của các dữ liệu thu thập được

- Mục đích của nghiên cứu này là để đánh giá mức độ

vi khuẩn E coli trong các dòng sông gần một khu

vực nông nghiệp ở Burlington

- Sử dụng các phương pháp tiêu chuẩn để so sánh

mức độ của các vi khuẩn phân thay đổi theo thời

gian như thế nào Tiến hành lấy 3 mẫu mỗi ngày ,

phân tích trong phòng thí nghiệm theo một giao thức gọi là : Dự án Tổng Coliform/ Vi khuẩn E Coli

trong dòng suối, đọc kết quả trong 24 giờ và so sánh kết quả của các dữ liệu thu thập được

2 Giới thiệu vi khuẩn E.coli

• Escherichia coli (thường được viết tắt là E coli), vi khuẩn gram âm hay còn được gọi là vi khuẩn đại

tràng

• Là loài vi khuẩn sống ký sinh trong đường ruột của người, động vật máu nóng

• Vi khuẩn này cần thiết trong quá trình tiêu hóa thức

ăn và là thành phần của khuẩn lạc ruột Sự có mặt

của E coli trong nước ngầm là một chỉ thị cho biết

nước bị ô nhiễm phân

• Chỉ có một số chủng gây tiêu chảy, điển hình là

E.coli O157:H7, ở vài bệnh nhân vi khuẩn này có thể gây rối loạn máu và suy thận, thậm chí dẫn đến

• Vi khuẩn này cần thiết trong quá trình tiêu hóa thức

ăn và là thành phần của khuẩn lạc ruột Sự có mặt

của E coli trong nước ngầm là một chỉ thị cho biết

nước bị ô nhiễm phân

• Chỉ có một số chủng gây tiêu chảy, điển hình là

E.coli O157:H7, ở vài bệnh nhân vi khuẩn này có thể gây rối loạn máu và suy thận, thậm chí dẫn đến

tử vong

Các triệu chứng nhiễm khuẩn E.coli

- Triệu chứng lâm sàng của bệnh bao gồm đau quặn bụng

và tiêu chảy cấp, phân có thể có máu từ mức độ ít đến nhiều, kèm theo có thể có sốt hoặc nôn

- Bệnh kéo dài trong khoảng 10 ngày Một số trường hợp tiến triển nặng gây hội chứng tan máu suy thận cấp tăng urê huyết, đây là nguyên nhân chính gây tử vong (hay gặp ở trẻ nhỏ và người già).

- Hiện tại chưa có vaccin đặc hiệu để phòng bệnh tiêu

chảy cấp do E.Coli nhóm EHEC

Chủng vi khuẩn E.coli phát hiện ở Đức Siêu vi khuẩn E.coli

Vi khuẩn E.coli -157: H7 siêu vi khuẩn mang gen NDM-1

 Nơi lấy mẫu

Các dòng suối ở các vùng nông nghiệp ở Burlington, Vermont (tiểu bang thứ 43 của Mỹ)

4 Phương pháp lấy mẫu và phân tích

A Phương pháp lấy mẫu

• Lấy ba mẫu mỗi ngày từ 29-6 đến ngày 16-7

• Phân tích mẫu thu được trong phòng thí nghiệm và

đọc kết quả sau 24 giờ

• Sử dụng phương pháp chuẩn và so sánh nồng độ vi

khuẩn E.coli trong tháng 6 và tháng 7-2009

A Phương pháp lấy mẫu

• Lấy ba mẫu mỗi ngày từ 29-6 đến ngày 16-7

• Phân tích mẫu thu được trong phòng thí nghiệm và

đọc kết quả sau 24 giờ

• Sử dụng phương pháp chuẩn và so sánh nồng độ vi

khuẩn E.coli trong tháng 6 và tháng 7-2009

4 Phương pháp lấy mẫu và phân tích

B Phương pháp phân tích:

Phương pháp là lọc màng (MF, số vi khuẩn/100mL)

Lên men ống nghiệm nhân đôi

(MTF, số MPN/100 mL).

1 Phương pháp lọc màng

(MF, số vi khuẩn/100mL)

 Phương pháp MF bao gồm sử dụng môi trường nuôi cấy:

 m-TEC cải tiến , do EPA phát triển

 m-ColiBlue24®, do Hach phát triển.

1 Phương pháp lọc màng

(MF, số vi khuẩn/100mL)

 m-TEC cải tiến là quy trình một bước đơn

giản của phương pháp MF kết hợp một thể

nhiễm sắc đặc biệt để phát hiện và đếm số

lượng E coli

 m-ColiBlue24 là quy trình một bước MF kết hợp với chất ức chế các vi khuẩn không thuộc coliform và có gen chỉ thị chọn lọc cho phép

phát hiện và đếm đồng thời E coli và tổng

coliform

1 Phương pháp lọc màng

(MF, số vi khuẩn/100mL)

 m-tec cải tiến

• Trong phép phân tích này, mẫu nước thải

được lọc qua giấy lọc 0.45μm và đặt lên agar

giờ và sau đó được ủ thêm 23 ± 1 giờ trong bể

xong, các khuẩn lạc màu đỏ hoặc đỏ tươi xuất

hiện chính là E.coli

xanh xuất hiện sẽ là E coli và màu đỏ là các

coliform khác Tổng coliforms sẽ là tổng số

màu đỏ và xanh xuất hiện.

2 Lên men ống nghiệm nhân đôi

(MTF, số MPN/100 mL)

• Quy trình phân tích theo MTF có chứa chất

nhiễm sắc OPNG giúp phát hiện đồng thời E

coli và tổng coliforms Mẫu nước sau khi đưa

vào các ống nghiệm đã chứa sẵn môi trường nuôi cấy sẽ được pha trộn đều và sau đó đổ ra

2 Lên men ống nghiệm nhân đôi

(MTF, số MPN/100 mL)

• Nếu phát hiện còn nghi ngờ thì sau khoảng thời gian ủ nhất định sẽ được để ủ thêm 4 giờ với cùng nhiệt độ Sau khi ủ, mỗi ống

hoặc khe được so sánh màu với bảng màu tham khảo được cung cấp kèm với môi

trường cấy Nếu mẫu có màu vàng đậm hơn hay bằng với màu tham chiếu thì sự hiện

diện của tổng coliforms là rõ ràng

2 Lên men ống nghiệm nhân đôi

(MTF, số MPN/100 mL)

• Khi đó mẫu sẽ được kiểm tra sự hiện diện

của huỳnh quang Nếu ánh sáng huỳnh

quang sáng hơn hay bằng với mẫu tham

chiếu thì mẫu có giá trị dương với test E.coli

Nồng độ MPN/100 mL được tính từ số ống dương tính tương ứng trong bảng giá trị

MPN cung cấp từ nhà sản xuất.

Kết quả mẫu sau 24 giờ

5 Kết quả

Lượng mưaMối quan hệ giữa lượng mưa và E.coli là không đáng kể ở vùng nông nghiệp.

Thời gian thu thập mẫu

Mức độ vi khuẩn E.coli là cao trong khu vực nông nghiệp và cao nhất từ ngày 7 đến ngày 9 tháng 7 năm 2009

Mức độ vi khuẩn E.coli là cao trong khu vực nông nghiệp và cao nhất từ ngày 7 đến ngày 9 tháng 7 năm 2009

6 Kết luận

Ở những vùng nông nghiệp có mức độ cao E.coli,

bởi vì tất cả các chất thải đổ thẳng đến các dòng suối

và đây là nguyên nhân mà các dòng suối gần khu

vực này thực sự bị ô nhiễm bởi ảnh hưởng nồng độ E.Coli tích lũy trong khu vực nghiên cứu

7 Tài liệu tham khảo

•Wheeler, E., Burke, J and Spain A Fecal Indicator Bacteria are abundant in wet sand at Freshwater

beaches Water Research (2003) 3978- 3982

•Nevers, M and Whitman, RL Coastal Strategies

to Predict E coli Concentration for beaches along a

35 km Stretch of Southern Lake Michigan

Environ Science Techno 4454- 4460

•Rychert, RC and Stephenson, GR Atypical

Escherichia coli in streams Environmental

Microbiology 1276-1278

•Frick, E and Gregory, MB Indicator- Bacteria

Concentrations in Streams of the Chattahoochee River National Recreation Area Georgia Water

Resources( 2001) 510-513.

CẢM ƠN CÔ VÀ CÁC BẠN ĐÃ

CHÚ Ý LẮNG NGHE!!!