nghiên cứu xác định terpin hydrat và paracetamol trong một số dược phẩm bằng phương pháp trắc quang

Năm 1948, Brodie và Axelrod kết nối việc sử dụng acetanilide với met-hemoglobin và xác định được rằng, tác dụng giảm đau của acetanilide là do paracetamol - chất chuyển hóa của nó gây ra

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN

NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS HOÀNG THỌ TÍN

Hà Nội - 2011

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU 1

TỔNG QUAN 2

PHẤN 1: NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH PARACETAMOL 2

1.1 Đặc điểm và tính chất vật lý của Paracetamol 2

1.2 Tính chất dược học của Paracetamol 2

1.2.1 Dược lý và cơ chế tác dụng 2

1.2.2 Dược động học 3

1.3 Vai trò và ứng dụng của Paracetamol 4

1.4 Sự tương tác của Paracetamol với các loại thuốc 6

1.5 Một số phương pháp xác định Paracetamol 8

1.5.1 Phương pháp trắc quang 8

1.5.2 Phương pháp điện hóa 10

1.5.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) 12

PHẦN 2 NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TERPIN HYDRAT 13

2.1 Đặc điểm tính chất của Terpin hydrat (TEP) 14

2.2 Ứng dụng của TEP 14

2.3 Thành phần và tác dụng của thuốc 14

2.4 TEP tương tác với các loại thuốc khác 17

2.5 Dược lý và cơ chế tác dụng 17

2.5.1 Dược lực học 17

2.5.2 Dược động học 17

2.6 Các phương pháp xác định TEP 17

2.6.1 Phương pháp GC 17

2.6.2 Phương pháp UV – VIS 18

THỰC NGHIỆM 19

PHẦN 1: HÓA CHẤT - DỤNG CỤ - THIẾT BỊ 19

PHẦN 2: TIẾN HÀNH THỰC NGHIỆM 21

1 Xác định Paracetamol bằng phương pháp trắc quang 21

1.1 Quét phổ khảo sát bước sóng cho cực đại hấp thụ 21

1.2 Khảo sát thứ tự cho thuốc thử và nồng độ thuốc thử 21

1.3 Khảo sát độ bền của phức theo thời gian .22

1.4 Khảo sát ảnh hưởng của một số ion 23

1.5 Khảo sát sự tuân theo định luật Lambert – Beer 24

1.6 Lập đường chuẩn xác định PA 25

1.7 Độ lặp lại 28

1.8 Xác định PA trong mẫu thuốc 29

1.8.1 Xác định PA trong mẫu thuốc Pacemin 30

1.8.2 Xác định PA trong mẫu thuốc Panadol Extra 33

1.8.3 Xác định PA trong mẫu thuốc Tiffy FU 35

1.8.4 Xác định PA trong mẫu thuốc Efferalgan 38

1.8.5 Xác định PA trong mẫu thuốc Siro Tiffy 40

2 Sử dụng phương pháp HPLC để xác định PA 43

2.1 Khảo sát sự xuất hiện peak của PA 43

2.2 Khảo sát ảnh hưởng đệm 44

2.3 Khảo sát ảnh hưởng tốc độ dòng 44

2.4 Khảo sát ảnh hưởng thể tích tiêm 45

2.5 Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ pha động 46

2.6 Khảo sát ảnh hưởng pH pha động 47

2.7 Lập đường chuẩn xác định PA 49

2.8 Độ lặp lại 53

2.9 Xác định PA trong mẫu thuốc 56

2.9.1 Xác định PA trong mẫu thuốc Pacemin 56

2.9.2 Xác định PA trong mẫu thuốc Panadol Extra 56

2.9.3 Xác định PA trong mẫu thuốc Tiffy FU 63

2.9.4 Xác định PA trong mẫu thuốc Efferalgan 66

2.9.5 Xác định PA trong mẫu thuốc Siro Tiffy 69

2.10 Kiểm chứng kết quả bằng hai phương pháp 72

3 Xác định TEP bằng phương pháp trắc quang 73

3.1 Khảo sát bước sóng cực đại của phức TEP 73

3.2 Khảo sát thứ tự cho thuốc thử 73

3.3 Khảo sát thời gian đun tạo phức 74

3.4 Khảo sát độ bền của phức 75

3.5 Khảo sát ảnh hưởng của một số ion 76

3.6 Khảo sát sự tuân theo định luật Lambert – Beer 77

3.7 Lập đường chuẩn xác định TEP 78

3.8 Độ lặp lại 81

3.9 Xác định TEP trong một số mẫu thuốc 82

3.9.1 Cách tiến hành 82

3.9.2 Xác định TEP trong mẫu thuốc Pharcoter 83

3.9.3 Xác định TEP trong mẫu thuốc Khaterban 86

3.9.4 Xác định TEP trong mẫu thuốc Acodine 88

KẾT LUẬN 92

TÀI LIỆU THAM KHẢO 93

DANH MỤC BẢNG

11 Bảng 11: kết quả mật độ quang xác định PA trong mẫu Panadol Extra 33

13 Bảng 13 : kết quả mật độ quang xác định PA trong mẫu Tiffy FU 35

15 Bảng 15: kết quả mật độ quang xác định PA trong mẫu Efferalgan 38

17 Bảng 17: kết quả mật độ quang xác định PA trong mẫu Siro Tiffy 41

20 Bảng 20: kết quả khảo sát ảnh hưởng thể tích tiêm 45

22 Bảng 22: kết quả ảnh hưởng pH pha động 47

24 Bảng 24: Các giá trị thống kê được xử lý bằng phần mềm Excel 52

25 Bảng 25: Kết quả khảo sát độ lặp lại ở 3 nồng độ PA 53

28 Bảng 28: kết quả diện tích peak xác định PA trong mẫu Pacemin (HPLC) 56

30 Bảng 30 : kết quả diện tích peak xác định PA trong mẫu Panadol Extra 60

32 Bảng 32: kết quả diện tích peak xác định PA trong mẫu Tiffy FU 63

34 Bảng 34: kết quả diện tích peak xác định PA trong mẫu Efferalgan 66

36 Bảng 36: kết quả diện tích peak xác định PA trong Siro Tiffy 69

40 Bảng 40: Ảnh hưởng của thời gian đun nóng đến sự hình thành phức 75

41 Bảng 41: khảo sát sự ảnh hưởng của các ion tới độ hấp thụ quang của TEP 76

42 Bảng 42: Khảo sát sự tuân theo định luật Lambert – Beer của TEP 77

44 Bảng 44: Các giá trị thống kê được xử lý bằng phần mềm Excel 80

45 Bảng 45: kết quả khảo sát độ lặp lại của TEP ở 3 nồng độ 81

47 Bảng 47: kết quả mật độ quang xác định TEP trong mẫu PCT 83

48 Bảng 48: hiệu suất thu hồi của quá trình xác định TEP trong mẫu thuốc PCT 86

49 Bảng 49: kết quả mật độ quang xác định TEP trong mẫu KTB 86

50 Bảng 50: hiệu suất thu hồi của quá trình xác định TEP trong mẫu thuốc KTB 88

51 Bảng 51: kết quả mật độ quang xác định TEP trong mẫu ACD 89

52 Bảng 52: hiệu suất thu hồi của quá trình xác định TEP trong mẫu thuốc ACD 91

DANH MỤC HÌNH

1 Hình 1: đồ thị khảo sát bước sóng hấp thụ cực đại của PA 21

2 Hình 2: đồ thị sự phụ thuộc mật độ quang của PA vào nồng độ thuốc thử 22

4 Hình 4: đồ thị khảo sát sự ảnh hưởng của các ion tới mật độ quang của PA 24

5 Hình 5: đồ thị khảo sát tuân theo định luật Lambert – beer 25

7 Hình 7: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA trong Pacemin 31

8 Hình 8: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA trong Pacemin 31

9 Hình 9: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA trong mẫu Panadol Extra 33

10 Hình 10: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA trong Panadol Extra 34

11 Hình 11: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA trong mẫu Tiffy FU 35

12 Hình 12: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA trong Tiffy FU 36

13 Hình 13:đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA trong mẫu Efferalgan 38

14 Hình 14: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA trong Efferalgan 39

15 Hình 15: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA trong Siro Tiffy 41

16 Hình 16: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA trong Siro Tiffy 42

19 Hình 19: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA trong mẫu Pacemin 57

20 Hình 20: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA trong Pacemin 58

21 Hình 21: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA trong Panadol Extra 61

22 Hình 22: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA trong Panadol Extra 61

23 Hình 23: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA trong Tiffy FU 64

24 Hình 24: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA trong Tiffy FU 64

25 Hình 25: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA trong Efferalgan 67

26 Hình 26: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA trong Efferalgan 68

27 Hình 27: đồ thị đường thêm chuẩn xác định PA trong Siro Tiffy 70

28 Hình 28: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA trong Siro Tiffy 71

29 Hình 29: khảo sát bước sóng hấp thụ cực đại của TEP 73

30 Hình 30: đồ thị sự phụ thuộc độ hấp thụ quang của TEP vào nồng độ

32 Hình 32: khảo sát độ bền của phức TEP theo thời gian 76

33 Hình 33: đồ thị khảo sát sự ảnh hưởng của các ion đến độ hấp thụ quang

34 Hình 34: đồ thị biểu diễn sư tuân theo định luật Lambert – Beer của TEP 78

36 Hình 36: đồ thị đường thêm chuẩn xác định TEP trong PCT 84

37 Hình 37: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ TEP trong PCT 84

38 Hình 38: đồ thị đường thêm chuẩn xác định TEP trong KTB 86

39 Hình 39: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ TEP trong KTB 87

40 Hình 40: đồ thị đường thêm chuẩn xác định TEP trong ACD 89

41 Hình 41: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ TEP trong ACD 90

MỞ ĐẦU

Từ xưa, người ta đã sử dụng cây liễu làm thuốc hạ sốt, mà sau này đã chiết xuất được aspirin Thế kỷ 19, cây canh ki na và chất chiết xuất từ nó là quinin được sử dụng để làm hạ sốt trong bệnh sốt rét [16]

Khi cây canh kina dần khan hiếm vào những năm 1880, người ta bắt đầu đi tìm các thuốc thay thế Khi đó 2 thuốc hạ sốt đã được tìm ra là acetanilide năm 1886 và phenacetin năm

1887 Năm 1878 Harmon Northrop Morse đầu tiên đã tổng hợp được paracetamol từ nguyên liệu ban đầu p-nitrophenol cùng với thiếc trong giấm đóng băng [18] Tuy nhiên, paracetamol đã không được dùng làm thuốc điều trị trong suốt 15 năm sau đó Năm 1893, paracetamol đã được tìm thấy trong nước tiểu của người uống phenacetin, và đã được cô đặc thành một chất kết tinh màu trắng có vị đắng Năm 1899, paracetamol được khám phá

là một chất chuyển hóa của acetanilide Khám phá này đã bị lãng quên vào thời gian đó

Năm 1946, Viện nghiên cứu về giảm đau và thuốc giảm đau (the Institute for the Study of

Analgesic and Sedative Drugs) đã tài trợ cho Sở y tế New York để nghiên cứu các vấn đề

xung quanh các thuốc điều trị đau Bernard Brodie và Julius Axelrod được chỉ định nghiên cứu tại sao các thuốc non-aspirin lại liên quan đến tình trạng gây met-hemoglobin, (tình trạng làm giảm lượng oxy được mang trong hồng cầu và có thể gây tử vong) Năm

1948, Brodie và Axelrod kết nối việc sử dụng acetanilide với met-hemoglobin và xác định được rằng, tác dụng giảm đau của acetanilide là do paracetamol - chất chuyển hóa của nó gây ra Họ chủ trương sử dụng paracetamol trong điều trị và từ đó đã không xuất hiện các độc tính như của acetanilide nữa [10] Sản phẩm paracetamol đầu tiên đã được McNeil Laboratories bán ra năm 1955 như một thuốc giảm đau hạ sốt cho trẻ em với tên Tylenol Children's Elixir [8] Sau này, paracetamol đã trở thành thuốc giảm đau hạ sốt được sử dụng rộng rãi nhất với rất nhiều tên biệt dược được lưu hành

Terpin hydrat là một loại hoạt chất có nguồn ngốc từ các nguồn như nhựa thông, thyme, oregano, bạch đàn và được nghiên cứu sinh lý lần đầu tiên bởi Lepine năm 1855 terpin hydrat tác động trực tiếp lên các tế bào tiết phế quản trong đường hô hấp để hóa lỏng và tạo điều kiện thuận lợi cho việc loại bỏ các chất tiết phế quản chống viêm phế quản cấp và mãn tính Nó cũng tạo nên một tác dụng sát trùng yếu vào nhu mô phổi [33] terpin hydrat được phổ biến rộng rãi tại Mỹ kể từ cuối thế kỷ XIX Và hiện nay phổ biến trong tất cả các dược phẩm tân dược trị ho

TỔNG QUAN

PHẦN 1: NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH PARACETAMOL

1.1 Đặc điểm và tính chất của Paracetamol (PA)

Tên theo IUPAC: N-(4-hydroxyphenyl) acetamide

+ Nhóm dƣợc lý: Thuốc giảm đau, hạ sốt

+ Tên biệt dƣợc: Paracetamol, acetaminophen

+ Dạng thuốc và hàm lƣợng:

Uống: nang 500mg

Nang (chứa bột để pha dung dịch): 80mg

Gói để pha dung dịch: 80mg, 120mg, 150mg/5ml

Dung dịch: 26 mg/ml, 32 mg/ml, 48mg/ml, 100mg/ml

Dịch treo: 32mg/ml, 100mg/ml

Viên nén có thể nhai: 80mg, 100mg, 160mg

Viên nén giải phóng kéo dài, bao phim: 650mg

Viên nén, bao phim: 160mg, 325mg, 500mg

Thuốc đạn: 80mg, 120mg, 125mg, 150mg, 300mg, 325mg, 650mg

+ Thành phần: paracetamol

1.2.1 Dƣợc lý và cơ chế tác dụng:

Paracetamol (acetaminophen hay N - acetyl – p – aminophenol) là chất chuyển hóa

có hoạt tính của phenacetin, là thuốc giảm đau - hạ sốt hữu hiệu có thể thay thế

aspirin Tuy vậy, khác với aspirin, paracetamol không có hiệu quả điều trị viêm Với liều ngang nhau tính theo gam, paracetamol có tác dụng giảm đau và hạ sốt tương tự như aspirin

Paracetmol làm giảm thân nhiệt ở người bệnh sốt nhưng hiếm khi làm giảm thân nhiệt ở người bình thường Thuốc có tác động lên vùng dưới đồi gây hạ nhiệt, tỏa nhiệt tăng do giãn mạch và tăng lưu lượng máu ngoại biên

Paracetamol, với liều điều trị, ít tác động đến hệ tim mạch và hô hấp, không làm thay đổi cân bằng axit – bazơ, không gây kích ứng, xước hoặc chảy máu dạ dày như khi dùng salicylat, vì paracetamol không tác dụng trên cyclooxygenase toàn thân, chỉ tác động đến cyclooxygenase/prostaglandin của hệ thần kinh trung ương Paracetamol không có tác dụng trên tiểu cầu hoặc thời gian chảy máu

Khi dùng quá liều paracetamol một chất chuyển hóa là N–acetyl– benzoquinonimin gây độc nặng cho gan Liều bình thường, paracetamol dung nạp tốt, không có nhiều tác dụng phụ của aspirin Tuy vậy, quá liều cấp tính (trên 10g) làm tổn thương gan gây chết người, và những vụ ngộ độc và tự vẫn bằng paracetmol đã tăng lên một cách đáng lo ngại trong những năm gần đây Ngoài ra, nhiều người trong đó có cả thầy thuốc dường như không biết tác dụng chống viêm kém của paracetamol

1.2.2 Dược động học:

+ Hấp thu: Paracetamol được hấp thu nhanh chóng và hầu như hoàn toàn qua

đường tiêu hóa Thức ăn có thể làm viên nén giải phóng kéo dài paracetamol chậm được hấp thu một phần và thức ăn giàu carbon hydrat làm giảm tỷ lệ hấp thu của paracetamol Nồng độ đỉnh trong huyết tương đạt trong vòng 30 đến 60 phút sau khi uống với liều điều trị

+ Phân bố: Paracetamol phân bố nhanh và đồng đều trong phần lớn các mô của cơ

thể Khoảng 25% paracetamol trong máu kết hợp với protein huyết tương

+ Thải trừ: Nửa đời huyết tương của paracetamol là 1,25 – 3giờ, có thể kéo dài

thời gian với liều gây độc hoặc ở người bệnh có thương tổn gan

Sau liều điều trị, có thể tím thấy 90 đến 100% thuốc trong nước tiểu trong ngày thứ nhất, chủ yếu sau khi liên hợp trong gan với axit glucoronic (khoảng 60%), axit sulfuric (khoảng 35%) hoặc cystein (khoảng 3%), cũng phát hiện thấy một lượng nhỏ những chất chuyển hóa hydroxyl – hóa và khử acetyl Trẻ nhỏ ít khả năng glucuro liên hợp với thuốc hơn so với người lớn

Paracetamol bị N – hydroxyl hóa bởi cytochrom P450 để tạo nên N – acetyl –

benzoquinonimin một chất trung gian có tính phản ứng cao Chất chuyển hóa này bình thường phản ứng với các nhóm sulfhydryl trong glutathion và như vậy bị khử hoạt tính Tuy nhiên, nếu uống liều cao paracetamol, chất chuyển hóa này được tạo thành với lượng đủ để làm cạn kiệt glutathion của gan trong tình trạng đó, phản ứng

của nó với nhóm sulfhydryl của protein gan tăng lên, có thể dẫn đến họai tử gan

1.3 Vai trò và ứng dụng của Paracetamol [6]

1.3.1 Chỉ định:

Paracetamol được dùng rộng rãi trong điều trị các chứng đau và sốt từ nhẹ đến vừa

+ Đau: Paracetamol được dùng làm giảm đau tạm thời trong điều trị trứng đau nhẹ

và vừa Thuốc có hiệu quả nhất là làm giảm đau cường độ thấp có nguồn gốc không phải là nội tạng

Paracetamol không có tác dụng trị thấp khớp Paracetamol là thuốc thay thế salicylat (được ưa thích ở người bệnh chống chỉ định hoặc không dung nạp salicylat) để giảm đau nhẹ hoặc hạ sốt

+ Sốt: Paracetamol thường được dùng để giảm thân nhiệt ở người bệnh sốt, khi sốt

có thể có hại hoặc khi hạ sốt người bệnh sẽ dễ chịu hơn Tuy vậy, liệu pháp hạ sốt nói chung không đặc hiệu, không ảnh hưởng đến tiến trình của bệnh cơ bản và có

thể che lấp tình trạng bệnh của người bệnh

1.3.2 Chống chỉ định:

- Người bệnh nhiều lần thiếu máu, bệnh tim, phổi, thận hoặc gan

- Người quá mẫn với paracetamol

- Người thiếu hụt glucose – 6- phosphat dehydrogenase

1.3.3 Thời kỳ mang thai:

Chưa xác định được tính an toàn của paracetamol dùng khi tha nghén liên quan đến tác dụng không mong muốn

1.3.4 Thời kì cho con bú:

Nghiên cứu ở người mẹ dùng paracetamol sau khi đẻ cho con bú, không thấy có tác dụng không mong muốn ở trẻ nhỏ bú mẹ

1.3.5 Tác dụng không mong muốn:

Ban da và những phản ứng dị ứng khác thỉng thoảng xảy ra Thường là ban đỏ hoặc mày đay, nhưng đôi khi nặng hơn và có thể kèm theo sốt do thuốc và thương tổn

niêm mạc Người bệnh mẫn cảm với salicylat kiêm mẫn cảm với paracetamol và những thuốc có liên quan Trong một số trường hợp riêng lẻ, paracetamol dễ gây giảm bạch cầu trung tính, giảm tiểu cầu và giảm toàn thể huyết cầu

1.3.6 Liều lượng và cách dùng:

- Khi sử dụng paracetamol để trị liệu thường được dùng uống Đối với người bệnh không uống được, có thể dùng dạng thuốc đạn đặt trực tràng, tuy vậy liều trực tràng cần thiết để có cùng nồng độ huyết tương có thể cao hơn liều uống

- Không được dùng paracetamol để tự điều trị giảm đau quá 10 ngày ở người lớn

hoặc quá 5ngày ở trẻ em, vì đau nhiều và kéo dài như vậy có thể là dấu hiệu của một tình trạng bệnh lý cần thầy thuốc chuẩn đoán và điều trị có giám sát

- Không dùng paracetamol cho người lớn và trẻ em để tự điều trị sốt cao (trên 39,50C), sốt kéo dài trên 3ngày, hoặc sốt tái phát, trừ khi do thầy thuốc hướng dẫn

và sốt như vậy có thể là dấu hiệu của một bệnh nặng cần được thầy thuốc chuẩn đoán nhanh chóng

- Để giảm thiểu nguy cơ quá liều, không nên cho trẻ em quá 5 liều paracetamol để giảm đau hoặc hạ sốt trong vòng 24 giờ, trừ khi do thầy thuốc hướng dẫn

- Để giảm đau hoặc hạ sốt cho người lớn và trẻ em trên 11 tuổi, liều paracetamol thường dùng uống hoặc đưa vào trực tràng là 325 – 650mg, cứ 4 -6 giờ một lần khi cần thiết, nhưng không quá 4g một ngày, liều một lần lớn hơn (ví dụ 1g) có thể hữu ích để giảm đau ở một số người bệnh

- Để giảm đau hoặc hạ sốt, trẻ em có thể uống hoặc đưa vào trực tràng cứ 4 -6 giờ một lần khi cần thiết, liều xấp xỉ như sau: trẻ em 11 tuổi, 480mg; trẻ em 9-11 tuổi 400mg; trẻ em 6-8 tuổi 320mg; trẻ em 4-5 tuổi 240mg và trẻ em 2-3 tuổi 160mg Trẻ em dưới 2 tuổi có thể uống liều sau đây, cứ 4 - 6giờ một lần khi cần: trẻ em 1 -

2 tuổi 120mg; trẻ em 4 -11 tháng tuổi 80mg, trẻ em tới 3 tháng tuổi 40mg Liều trực tràng cho trẻ em dưới 2 tuổi dùng tùy theo mỗi bệnh nhi

- Liều uống thường dùng của paracetamol dưới dạng viên nén giải phóng kéo dài 650mg, để giảm đau ở người lớn và trẻ em 12 tuổi trở lên là 1,3g cứ 8 giờ một lần khi cần thiết, không quá 3,9g mỗi ngày Viên nén paracetamol giải phóng kéo dài, không được nghiền nát, nhai hoặc hòa tan trong chất lỏng

1.4 Tương tác Paracetamol với các thuốc khác [6]

Thuốc ít độc tính và hầu như không có tác dụng phụ, được bán tự do tại Việt Nam, tuy nhiên khi sử dụng cần chú ý một số trường hợp sau đây, đặc biệt khi dùng các chế phẩm kết hợp với các dược chất khác:

+ Các chế phẩm kết hợp với chlorpheniramin gây buồn ngủ, không dùng cho những người mà yêu cầu cần độ tập trung cao trong công việc hoặc sinh hoạt

+ Các chế phẩm kết hợp với phenyl propanolamin, là chất gây co mạch, không dùng cho người tăng huyết áp

+ Các chế phẩm kết hợp với codein hoặc dextro - propoxyphen không dùng cho trẻ

em, phụ nữ có thai, phụ nữ cho con bú và người suy hô hấp

+ Một số chế phẩm kết hợp với sulfit có thể gây phản ứng dị ứng, gồm cả phản vệ

và những cơn hen đe doạ tính mạng hoặc ít nghiêm trọng hơn cả là ở một số người quá mẫn

- Người bị phenylceton - niệu (nghĩa là thiếu hụt gan xác định tình trạng của phenylalamin đưa vào cơ thể phải được cảnh báo là một số chế phẩm paracetamol

chứa aspartam, sẽ chuyển hoá trong dạ dày ruột thành phenylalamin sau khi uống

- Uống dài ngày liều cao paracetamol làm tăng nhẹ tác dụng chống đông của coumarin và dẫn chất indandiol

- Tác dụng này có vẻ ít hoặc không quan trọng về lâm sàng, nên paracetamol được

ưa dùng hơn salicylat khi cần giảm đau nhẹ hoặc hạ sốt cho người bệnh đang dùng coumarin hoặc dẫn chất indandion

- Cần phải chú ý đến khả năng gây hạ sốt nghiêm trọng ở người bệnh dùng đồng thời phenọthiazin và liệu pháp hạ nhiệt

- Uống rượu quá nhiều và dài ngày có thể làm tăng nguy cơ paracetamol gây độc cho gan

- Thuốc chống co giật (gồm phenytoin, barbitutar, carbar - mazepin ) gây cảm ứng enzym ở microsom thể ganm có thể làm tăng tính độc hại gan của paracetamol do tăng chuyển hóa thuốc thành các chất độc hại với gan

1.4.1 Quá liều:

Nhiễm độc paracetamol có thể do dùng một liều độc duy nhất, hoặc do uống lặp lại liều lớn paracetamol (ví dụ 7,5 – 10g mỗi ngày, trong 1 - 2 ngày), hoặc do uống thuốc dài ngày Hoại tử gan là do tác dụng độc cấp tính nghiêm trọng nhất do quá liều và có thể gây tử vong

+ Buồn nôn, nôn và đau bụng thường xảy ra trong vòng 2 - 3 giờ sau khi uống liều độc của thuốc Methemoglobin – máu, dẫn đến chứng xanh tím da, niêm mạc và móng tay

là một dấu hiệu đặc trưng nhiễm độc cấp tính dẫn chất p – aminophenol

+ Khi bị ngộ độc nặng, ban đầu có thể có kích thích hệ thần kinh trung ương, kích động và mê sảng Tiếp theo có thể có là ức chế hệ thần kinh trung ương; sững sờ, hạ thân nhiệt, mệt lả, thở nhanh; mạch nhanh, yếu, không đều; huyết áp thấp và suy tuần hoàn Trụy mạch do giảm oxy huyết tương đối và do tác dụng ức chế trung tâm, tác dụng này chỉ xảy ra với liều rất lớn Thường hôn mê xẩy ra trước khi chết đột ngột hoặc sau vài ngày hôn mê

+ Dấu hiệu lâm sàng thương tổn gan trở nên rõ rệt trong vòng 2 đến 4 ngày sau khi uống liều độc Amino – transferase huyết tương tăng (đôi khi tăng rất cao) và nồng

độ bilirubin trong huyết tương cũng có thể tăng; thêm nữa, khi tổn thương gan lan rộng, thời gian prothrombin kéo dài

1.4.2 Xử trí:

- Chuẩn đoán sớm rất quan trọng trong điều trị quá liều paracetamol Có những phương pháp xác định nhanh nồng độ thuốc trong huyết tương Tuy vậy, không được trì hoãn điều trị trong khi chờ kết quả xét nghiệm nếu bệnh sử gợi ý là quá liều nặng Khi nhiễm độc nặng điều quan trọng là phải điều trị hỗ trợ tích cực

- Cần rửa dạ dày trong mọi trường hợp, tốt nhất trong vòng 4 giờ sau khi uống

- Liệu pháp giải độc chính là dùng hợp chất sulfhydryl, có lẽ tác động một phần do

bổ sung dự trữ glurathion ở gan N – acetylcystein có tác dụng khi uống hoặc tiêm tĩnh mạch Phải cho thuốc ngay lập tức nếu chưa đến 36 giờ kể từ khi uống paracetamol Điều trị với N – acetylcystein có hiệu quả hơn khi cho thuốc trong thời gian dưới 10 giờ sau khi uống paracetamol

- Tác dụng không mong muốn của N – acetylcystein gồm ban da (gồm cả mày đay, không yêu cầu phải ngừng thuốc), buồn nôn, nôn, ỉa chảy và phản ứng kiểu phản

vệ Nếu không có N – acetylcystein có thể dùng methionin, ngoài ra có thể dùng than hoạt tính hoặc thuốc tẩy muối, chúng có khả năng làm giảm hấp thụ paracetamol

1.5 CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH PARACETAMOL

1.5.1 Phương pháp trắc quang (UV – VIS):

Trong những năm gần đây các phương pháp phân tích hiện đại [14, 20, 36, 37] đã được ứng dụng để xác định paracetamol Mặc dù phương pháp trắc quang không còn mới mẻ trên thế giới trong việc xác định các mẫu dược phẩm Tuy nhiên nó vẫn được ứng dụng rộng rãi vì khả năng hấp thụ màu của các hoạt chất trong dược phẩm là rất lớn, phương pháp nhanh, đơn giản và cho kết quả khá chính xác, phù hợp với yêu cầu thực tiễn trong sản xuất cũng như nghiên cứu Có nhiều tác giả đã nghiên cứu xác định PA bằng nhiều phương pháp khác nhau được báo cáo trên các công trình nghiên cứu

Theo tác giả [15] đã nghiên cứu phương pháp xác định đồng thời paracetamol và aspirin bằng phương pháp UV – VIS Với nhiều dung môi như nước cất, HCl 0,1N, đệm phosphat pH 6,8 và pH 7,4, methanol tạo ra các hỗn hợp dung môi như nước cất : methanol (1:1), HCl 0,1N : methanol (1:1), đệm phosphat pH 6,8 : methanol (1:1) và đệm phosphat pH 7,4 : methanol (1:1) đã được thử nghiệm và hỗn hợp dung môi phù hợp nhất và bền nhất là HCl 0,1N : methanol (1:1) vì cả hai đều tan tốt trong hỗn hợp dung môi này Tiến hành quét phổ từ 200 – 400nm thu được hấp thụ cực đại của paraccetamol tại  = 257nm, và aspirin là  = 265 nm, khoảng nồng

độ cho cả paracetamol và aspirin là 2 – 64 g.ml-1, giá trị R2

cho aspirin và paracetamol lần lượt là 0,9925 và 0,9905 Phương trình hồi qui và giới hạn phát hiện (limit of detection – LOD) của aspirin, paracetamol lần lượt là Y = 0.042X – 0.004; Y = 0.036.X + 0.0679 và 0,730g.ml-1 0,591g.ml-1 Giới hạn định lượng (limit of quantity – LOQ) của cả hai là 2 g.ml-1 Hàm lượng xác định được paracetamol là 99,09  1,87 (%), aspirin là 99,16  0,92 (%)

Các tác giả [11] nghiên cứu phương pháp quang phổ tử ngoại khả kiến (UV –VIS) để xác định paracetamol bằng cách cho PA tạo phức màu với 1 – naphthol hoặc resorcinol cho hợp chất azo Hợp chất azo tạo ra với hai thuốc thử trên tuân theo định luật Lambert – Beer với khoảng tuyến tính 2 – 10 g.ml-1 Độ lệch chuẩn tương đối của 5 mẫu nằm trong khoảng 2,2 – 6,4%, độ tin cậy 95% Hiệu suất thu hồi từ 97,8 – 103,4 (%) Phương pháp định lượng xác định PA dựa vào sự thủy phân tạo ra p - aminophenol và kết hợp với một chất khử phù hợp để tạo ra nhóm azo mang màu Cơ chế được nghiên cứu thông qua phản ứng Griess

diazonium salt

OH

N=N HO

OH

OH

1 napthol

azodye I N=N.Cl

azodye II

Sự hấp thụ quang lớn nhất của hợp chất azo tạo ra trong kiềm yếu của PA với 1 –naphthol ở bước sóng  = 505 nm Azo được tạo ra bền trong 45 phút Với kết quả thu được ở 5 mẫu khác nhau: 101.8±5.8 (%), 100.2 ± 6.0 (%), 105.4±6.4 (%), 100,6±4.2 (%), 100.2±2.2 (%) Hiệu suất thu hồi từ 98,6% - 103,3%

Mặt khác, mật độ quang cực đại của azo được tạo ra trong kiềm yếu của PA 10ppm với thuốc thử resorcinol được đo tại bước sóng  = 485 nm Kết quả với 5 mẫu trên thu được như sau: 102.0±2.4 (%), 100.8 ± 4.6 (%), 104.8±6.0 (%), 101.6±2.8 (%), 99.0±2.2 (%) Hiệu suất thu hồi từ 102% - 103,4%

Các tác giả [31] đã nghiên cứu xác định PA trong dược phẩm bằng cách dùng Ce (IV) sulfat để oxi hóa PA trong axit sulfuric 5M tạo thành p – benzoquinon Sau đó đem đo mật độ quang tại bước sóng 410nm p – benzoquinon chỉ hấp thụ quang cực đại trong dải phổ từ 300 – 750nm Sự hình thành sản phẩm oxi hoá này phụ thuộc vào nồng độ axit sulfuric, phản ứng chỉ xảy ra khi nồng độ axit phải lớn hơn 2M Tốc độ phản ứng tăng nhanh hơn hay giảm đi chính là sự tăng hay giảm nồng độ axit sulfuric Ở nồng độ axit cao Ce(SO4)2 rất dễ bị oxi hóa trong trường hợp này sẽ acetyl hóa PA tạo ra p–aminophenol Sản phẩm này bị oxi hóa bởi Ce (IV) tạo

thành p – benzoquinon Một số tác giả đã sử dụng Fe(III) như là một tác nhân oxi hoá trong dung dịch axit sulfuric 8M Nồng độ tuân theo định luật Lambert – Beer nằm trong khoảng 30 - 160 g.ml-1, R2 = 0,9967, slope = 811,21 lmol-1cm-1

Quá trình xác định được biểu hiện qua sơ đồ sau:

Chúng tôi tiến hành nghiên cứu xác định PA trong dược phẩm bằng phương pháp trắc quang dựa vào sự hòa tan PA trong môi trường kiềm, rồi tiến hành khảo sát sự hấp thụ quang ở bước sóng từ 300 – 220 nm thì PA cho hấp thụ quang cực đại tại bước sóng  = 257 nm Sau đó lập đường chuẩn trong khoảng nồng độ tuyến tính

và dùng phương pháp thêm chuẩn, dựng đường thêm chuẩn xác định hàm lượng

PA trong các mẫu thực tế, độ đúng của phương pháp, độ lệch chuẩn tương đối

1.5.2 Phương pháp điện hóa

1) Xác định PA bằng điện cực rắn:

Kể từ khi phát hiện điện hóa của PA có lợi thế vì chi phí thấp, phân tích nhanh dụng cụ đơn giản, độ nhạy cao, độ chính xác cao Phương pháp điện hóa được nhiều tác giả quan tâm

Theo tác giả [30] chế tạo một điện cực màng bằng cách phủ một lớp vàng nano lên

bề mặt phim phát điện làm bằng polypyrrole (ppy) Ở đây dùng điện cực thionine – MWCNT (multiwall carbon nanotube) [32], trong hydroquinon sulfonic axit 0,02M Bằng phương pháp Vol – Ampe hòa tan sử dụng kỹ thuật xung vi phân đã xác định PA khi có mặt axit ascorbic và codein Sử dụng môi trường đệm phosphat

pH 7 Ứng với 7 mẫu liên tiếp ta có dải thế từ 0,00  + 0,75(V) Thời gian khuấy là 120s, các đường cong hiệu chuẩn thu được qua hai dãy nồng độ 2.10-7 – 6.10-6M và

4.10-5 – 1.10-4M của PA, với hệ số tương quan tuyến tính lần lượt là 0,9959 và 0,9947, slope (độ dốc) lần lượt là 22,01 A/M và 0,7257A/M Lý do cho sự thay đổi độ dốc là do sự tạo một lớp PA lên bề mặt điện cực biến tính Kết quả thu được dựa trên đường nội suy của dải được xác định ở [22] Giới hạn phát hiện là 5.10-8M, độ lệch chuẩn tương đối là 0,98% với độ tin cậy 95%

2) Phương pháp Vol – ampe vòng:

Theo các tác giả [19] sử dụng kỹ thuật vol – ampe vòng để xác định hàm lượng PA

có trong viên nén paracetamol sử dụng điện thế 0,0005 (V) và tốc độ quét 0,10 (V/s) đã được lựa chọn để khảo sát các bước tiếp theo vì ở giá trị này cho các đường vol – ampe vòng mịn và cho peak dòng tối đa Đuổi O2 bằng khí nitơ trong khoảng 0 - 420 giây Oxy hoà tan trong dung dịch không ảnh hưởng đến các peak điểm anot trong khoảng điện thế - 0,30 ÷ 1,50 (V) Một dòng khí nitơ sục trong thời gian 180 giây đã được sử dụng với mục đích khuấy Số lượng các điện tử tham gia vào quá trình oxy hóa của acetaminophen, peak điện thế anot, Ep, đường vol – ampe vòng của acetaminophen được đo ở độ pH khác nhau có một mối quan hệ tuyến tính đã được tìm thấy giữa Ep, độ pH ở khoảng 3 - 11 Có thể thấy rằng quan

hệ Ep,(V) = - 0.0315pH + 0,8175 (R2

= 0,99) với độ dốc của đơn vị mV/pH là

- 0,0315 mà độ dốc lý thuyết là 0,0295 cho quá trình hai electron và hai proton bởi các nghiên cứu trước đó của phương pháp đo màu [27] Trong phản ứng điện hóa, quá trình khử PA để tạo ra N – acetyl – p–quinoneimine phụ thuộc vào pH Điều kiện tối ưu là pH = 7.0, sử dụng đệm phosphate 0,01 mol.L-1

Mối quan hệ giữa nồng độ và chiều cao peak anot là tuyến tính với khoảng nồng độ PA là

3 - 240 (g.ml-1) Một dải nồng độ PA được chuẩn bị trong khoảng từ 27 – 135 (g.ml-1) để xây dựng đường cong chuẩn với hệ số tương quan (R2

= 0,9990) Khi s ử d ụng cá c đ iệ n c ực t rê n c ho giá t r ị p eak t heo p hươ ng t r ình

i(μA) = 1,1788.10-7.C – 1,665.10-6 (với nồng độ C là g.ml-1) Đối với việc xác định PA 30 g.ml-1, độ lệch chuẩn tương đối là 0,80% (dựa trên 15 kết quả) và hiệu suất thu hồi với việc thêm chuẩn là 99,10% (dựa trên 5 kết quả) Giới hạn phát hiện là 3,0 g ml-1

1.5.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

Phương pháp HPLC có ưu điểm rõ rệt là xác định được nồng độ chất ở nồng độ rất nhỏ Phương pháp này ngày nay ứng dụng rất rộng rãi trong việc xác định các hoạt chất trong dược phẩm nói chungvà paracetamol là một trong số đó, ngoài ra còn phân tích các dịch lỏng trong cơ thể, dung môi tồn dư, huyết thanh, thậm chí cả huyết tương Thông thường sử dụng các chất hấp phụ khác nhau như ODS (Octadecylsilan), C8, CN, phenyl , và dung môi rửa giải thường là acetonitril, methanol, nước, dung dịch đệm phosphat, acetat Có rất nhiều các bài báo đã công bố mới nhất về việc xác định PA như tác giả [13] xây dựng phương pháp xác định đồng thời paracetamol và aspirin và các tạp chất nguy hiểm trong dược phẩm bằng HPLC thu được khoảng tuyến tính trong dải từ 0,5 – 4,0(g.ml-1) và 0,75 – 6,0(g.ml-1) tương ứng với paracetamol và aspirin Độ lệch chuẩn tương đối nhỏ hơn 2% Hay các tác giả [7] phát triển một phương pháp tách và định lượng pyridostigmine bromide, acetaminophen, aspirin và caffeine trong huyết tương và nước tiểu chuột bằng phương pháp HPLC giá trị LOD nằm trong khoảng 100 –

200 (ng.ml-1) và LOQ là 150 – 200 (ng.ml-1) Kết quả (%) tìm thấy trong huyết tương là: 70.9 9.5; 73,3 9.8; 88.6  9.3; 83.9 7.8 và trong nước tiểu là: 69.1 8.5; 74.5

8.7; 85.9 9.8; 83.2  9.3 tương ứng với pyridostigmine bromide, acetaminophen, aspirin và caffeine

Theo [24] nghiên cứu xác định PA và dipyrone và caffeine với điều kiện sắc ký:

Sử dụng cột C8, pha động KH2PO4 0,01M – methanol – acetonitril – isopropyl alcohol (420:20:30:30) (v/v/v/v), thể tích tiêm 10l, tốc độ dòng 1ml/phút, detector

UV – VIS đo tại bước sóng 215nm vì ở bước sóng này phát hiện đồng thời cả 3 hoạt chất Thời gian lưu của PA, caffeine và dipyrone lần lượt là 4,88; 5,845 và 8,093 phút, tổng thời gian thực hiện ít hơn 9 phút Quan hệ giữa nồng độ và diện tích peak là tuyến tính với khoảng nồng độ 25 g ml-1 - 400 g ml-1

(Y= 20491.74X + 150586.1, R2 = 0,9987, RSD% = 0.192, hệ số chặn 2.031, LOQ = 1,226gml-1, LOD = 0,409gml-1), nồng độ từ 12,5 - 200g ml-1 (Y= 53717,01.X + 197602.2, RSD% = 0.150, LOQ = 0.502gml-1, LOD = 0.151gml-1, R2 = 0,9999)

và nồng độ từ 37.5gml-1 – 600gml-1 (Y= 19043,82.X + 111528.5, RSD% = 0.058 LOQ = 0.776gml-1, LOD = 0.233gml-1, R2=0,9993) tương ứng với PA, caffeine

và dipyrone Độ lặp của phương pháp ở giới hạn định lượng (tiến hành 9 lần) thu được kết quả độ lệch chuẩn tương đối 2,02%, 2,51%, 5,54% tương ứng với

PA, caffeine, dipyrone Sau khi tiến hành phân tích mẫu bằng phương pháp thêm chuẩn thu được giá trị của PA (105.28  0.63gml-1, hiệu suất thu hồi đạt 101,62%), caffeine là (49.43  0.249 gml-1, hiệu suất thu hồi đạt 100,11%), dipyrone là (154.94

 0.742gml-1, hiệu suất thu hồi đạt 100,86%)

Theo [29] xác định đồng thời PA và nimesulide (một loại thuốc chống viêm, với tên gọi là N – (4 – nitrophenoxyphenyl)) sử dụng cột C18 (5, 150 x 4,6 mm), pha động acetonitril : methanol : nước (40:20:20) điều chỉnh pH 4,5 bằng axit phosphoric, tốc độ dòng 1ml/phút, thể tích tiêm 20l, detector UV – VIS 276nm, thời gian lưu của PA và nimesulide là 2,04 phút và 4,67 phút Độ tuyến tính trong khoảng nồng độ 1,7 – 4,2 gml-1 cho nimesulide và 9 – 20 gml-1 cho PA tương ứng với hệ số R2

= 0,9996 và R2 = 0,9999 Độ chính xác của phương pháp được xác định bằng phương pháp thêm chuẩn (n = 3), nồng độ chuẩn thêm vào mẫu của nimesulide là 2,3 – 3,5 gml-1, nồng độ chuẩn của PA thêm vào mẫu là 12 – 15

gml-1 Hiệu suất thu hồi từ 99 – 101%, hệ số phương sai của PA là 0,6% và của nimesulide là 0,8% Giá trị LOD và LOQ tương ứng nimesulide là 0.05(gml-1), 0,15 (gml-1) và PA là 0.025(gml-1), 0.09(gml-1)

Các tác giả [34] nghiên cứu phương pháp xác định PA bằng HPLC với việc sử dụng pha tĩnh là cột ODS, pha động là đệm phosphat pH 2,7 : acetonitril (90:10), tốc độ dòng 1,0 ml/phút, detector UV – VIS 244 nm Với điều kiện như trên các tác giả tiến hành xây dựng đường chuẩn với nồng độ trong khoảng từ 10 - 130(gml-1) Sau đó sử dụng phương pháp thêm chuẩn để xác định hàm lượng của mẫu (5 mẫu trong phương pháp xác định theo UV – VIS), độ đúng của phương pháp (hiệu suất thu hồi và độ lặp lại) và độ lệch chuẩn tương đối cao

PHẦN 2 NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TERPIN HYDRAT

2.1 Đặc điểm tính chất của terpin hydrat (TEP)

Công thức cấu tạo:

- Nhiệt độ nóng chảy: 115-1170C; thăng hoa ở khoảng 100°C khi làm nóng từ từ

- Tính chất : Có mùi nhẹ, đặc trưng; vị hơi đắng; ở dạng bột, xốp trong không khí khô

- Độ tan: 1 gam tan trong 34 ml nước sôi, 13 ml cồn, 3 ml cồn sôi, 135 ml cloroform, 140 ml ete, ~1 ml axit axetic (dạng băng) sôi Ở 200C, 1 g tan trong 13ml metanol, 13 ml etyl axetat, 250 ml nước, 77 ml benzen, 290 ml CCl4, 250 ml

CS2 Không tan trong ete dầu

- Nhiệt độ sôi : khoảng 2580C

+ Trans-terpin hydrat: - Tinh thể dạng lăng trụ đơn tà

- Nhiệt độ nóng chảy : 158-1590C

- Độ tan: Ở 200C 1 gam tan trong 11 ml metanol, 20 ml etyl axetat, 100 ml nước, 250 ml benzen, 250 ml CCl4, 500 ml CS2

2.2 Ứng dụng [4]

- Terpin hydrat được sử dụng trong điều trị các chứng viêm phế quản cấp và mãn tính

- Dùng hỗn hợp với codein, viên terpin codein làm thuốc ho long đờm, chữa viêm loét, các niêm mạc thuộc đường hô hấp

- Dạng cis hydrat thường được sử dụng trị ho long đờm

- Thường được kết hợp với codein, natri benzoate có tác dụng chữa ho, long đờm trong điều trị viêm phế quản cấp hay mãn tính

- Tăng tiết dịch khí quản (long đờm)

- Dùng để sản xuất ra terpinneol, cineol (là sản phẩm rất có giá trị điều trị trong y học)

- Có thể sản xuất ra các tinh dầu làm hương liệu trong sản xuất nước hoa

2.3 Thành phần và tác dụng của thuốc [4]

Thuốc giảm ho có nhiều loại, bao gồm các thuốc đông dược và tân dược Cơ chế tác dụng của thuốc giảm ho thường là do ức chế phản xạ và làm giảm độ keo dính

của dịch viêm Một trong những loại thuốc giảm ho hay được sử dụng là: terpin codein, thuốc bao gồm hai thành phần terpin hydrat 200mg, có tác dụng làm loãng đờm do đó dễ khạc ra ngoài và codein phosphat 5mg, có tác dụng ức chế trung tâm

ho ở não, làm giảm ho hiệu quả Thuốc thường được dùng để kết hợp điều trị bệnh viêm phế quản cấp và mãn tính Những trường hợp ho nhẹ không nên dùng thuốc giảm ho terpin codein, thay vào đó nên dùng các loại thuốc giảm ho đông dược như hoa hồng bạch, húng chanh, thuốc ho bổ phế Thuốc không được dùng cho trẻ em dưới 5 tuổi vì do tác dụng gây ức chế hô hấp có thể gây ngạt cho trẻ Không được dùng thuốc cho phụ nữ đang mang thai, cho con bú Người bệnh ho do hen suyễn, suy hô hấp, nếu dùng thuốc sẽ gây tình trạng suy hô hấp nặng hơn do co thắt phế quản Những người lái xe và vận hành máy móc nếu dùng thuốc rất dễ gây buồn ngủ

2.3.1 Tác dụng không mong muốn của thuốc

- Khi dùng thuốc có thể gây táo bón, buồn nôn, chóng mặt dị ứng da và gây ức chế hô hấp Thuốc gây nguy cơ lệ thuộc thuốc khi dùng quá liều hoặc dùng dài ngày, gây hội chứng cai nghiện khi dừng thuốc đột ngột Thận trọng khi dùng thuốc terpin codein với các chất ức chế thần kinh trung ương hoặc các dẫn chất khác của morphin vì sẽ làm tăng tác dụng ức chế thần kinh trung ương đặc biệt là trung khu hô hấp Tuy nhiên, liều lượng, thời gian sử dụng thuốc giảm ho terpin codein cũng giống như các loại thuốc khác đều phải căn cứ vào tình trạng bệnh và thể trạng chung của từng người bệnh cụ thể về tuổi, cân nặng, giai đoạn bệnh, các bệnh kết hợp toàn thân khác vì vậy rất cần có sự chỉ định và theo dõi của bác sĩ

- Không được uống rượu khi dùng thuốc

- Tránh kết hợp với các thuốc chống ho khác và các thuốc có tác dụng làm khô dịch tiết loại atropin

- Lưu ý khi phối hợp với các thuốc ức chế thần kinh trung ương khác (gây tăng ức chế thần kinh trung ương), các dẫn xuất khác của morphin (gây ức chế hô hấp)

2.3.2 Thận trọng:

- Bệnh nhân suy giảm chức năng gan thận hoặc có tiền sử nghiện thuốc

- Thận trọng trong các trường hợp tăng áp lực nội sọ

- Tránh dùng chung với thuốc có chứa atropin, cồn và các thuốc ho khác Thuốc gây buồn ngủ, lưu ý khi vận hành máy móc, tàu xe

- Khi dùng liều trên 1 gram/ngày tính theo terpin, thuốc có tác dụng làm giảm tiết chất nhày

- Trong chế phẩm có chứa codein có thể cho phản ứng dương tính khi làm test kiểm tra chống doping

- Thuốc trị ho chứa hoạt chất là thuốc kháng histamin cần lưu ý về tác dụng gây buồn ngủ Người lớn khi dùng thuốc cần tránh làm việc đòi hỏi sự tỉnh táo như lái

xe, vận hành máy móc Với trẻ em, không nên lạm dụng cho trẻ uống như thuốc ngủ để không quấy, khóc đêm và dùng dài ngày, từ tháng này sang tháng khác (dùng dài ngày rất có hại cho sức khỏe của trẻ)

- Loại thuốc này cũng không nên dùng trong trường hợp ho có đàm vì thuốc làm khô quánh đàm, khó tống đàm sẽ cản trở đường thở

- Với thuốc làm loãng đàm, thuốc làm lỏng chất nhày sẽ có hại cho niêm mạc dạ dày Vì vậy, thuốc loại này cần tránh dùng cho người bị loét dạ dày - tá tràng.

2.3.3 Liều lượng và cách dùng:

- Người lớn: 85 – 170mg Terpin hydrat /lần, ngày 3 - 4 lần

- Trẻ em từ 5 - 15 tuổi: 100 – 200mg Terpin hydrat/lần, ngày 1 - 2 lần, hoặc tham khảo ý kiến bác sĩ

- Dạng viên uống với nước đun sôi để nguội

- Dạng dung dịch lỏng: uống ngày 2 -3 lần mỗi lần 25 – 30ml, tùy theo hàm lượng

2.3.4 Quá liều và xử trí:

- Triệu chứng: suy hô hấp, lờ đờ hoặc hôn mê, mềm cơ, đôi khi mạch chậm và hạ huyết

áp Trong trường hợp nặng: ngừng thở, trụy tim mạch, ngừng tim và có thể tử vong

- Xử trí: điều trị triệu chứng, phục hồi hô hấp bằng cách cung cấp dưỡng khí và hô hấp hỗ trợ có kiểm sốt Trường hợp quá liều nghiêm trọng, cần chỉ định naloxon bằng đường tiêm tĩnh mạch để giải độc codein (trong thành phần thuốc có kết hợp với codein)

2.4 Terpin hydrat tương tác với các dạng hoạt chất khác [4]

Thuốc có tác dụng ức chế phản xạ ho gồm có:

- Thuốc kháng histamin trị dị ứng nhưng có thêm tác dụng làm dịu và giảm ho, có dạng thuốc viên và dạng sirô: phénergan, théralène, atussin, toplexil, pulmofar

- Thuốc ức chế ho gây nghiện: codein

- Thuốc ức chế ho không gây nghiện: dextromethorphan

- Thuốc làm loãng đàm, giảm độ quánh đặc của đàm nhày để dễ ho khạc: acetylcystein, carbocystein, bromhexin, serratiopeptidase, terpin hydrat

Trường hợp ho là triệu chứng của nhiễm khuẩn đường hô hấp hoặc có bội nhiễm, bác sĩ sẽ cho dùng kháng sinh để trị ho Hoặc trong trường hợp bị viêm đường hô hấp nặng, có khi bác sĩ cho dùng thuốc loại glucocorticoid Đây là các thuốc cần được bác sĩ chỉ định và ghi đơn.

2.5 Dược lý và cơ chế tác dụng [6]

2.5.1 Dược lực học:

- Terpin hydrat: có tác dụng long đờm với liều lượng thấp (dưới 600mg/ngày) Nếu

dùng liều cao (800 - 1500 mg/ngày) sẽ làm giảm tiết dịch do co mạch phế quản

2.5.2 Dược động học:

Thuốc được hấp thu qua đường tiêu hóa Nửa đời thải trừ của terpin là 3 giờ Thuốc được chuyển hóa chủ yếu ở gan Thải trừ chủ yếu qua nước tiểu, một phần rất ít chuyển hóa bài tiết qua phân Thuốc qua được nhau thai và sữa mẹ

2.6 Các phương pháp xác định TEP

2.6.1 Xác định TEP bằng phương pháp sắc ký khí:

Một vài tác giả [26] nghiên cứu xác định TEP trong hỗn dịch bằng phương pháp sắc ký khí Định lượng TEP bằng hai kỹ thuật [21] với cùng điều kiện sắc ký là: Cột thép không gỉ (1,8288m x 3,175mm) nhồi hạt Carbowax 20M 10% đã silan hóa với cỡ hạt 80 – 100 mesh Nhiệt độ cột 1700C, bộ khuyếch đại đạt được 5.108

ohms, tốc độ dòng He là 40 ml/phút, H2 là 44 ml/phút, không khí là 360ml/phút, detector ion hóa ngọn lửa, thể tích mẫu 0,5 l Kỹ thuật 1 là dùng dung môi hòa tan mẫu là alcohol, kỹ thuật 2 là dùng pyridin Tách TEP ra khỏi hỗn dịch bằng muối

và sau đó chiết bằng cloroform vì TEP khó tan trong nước và chloroform Sử dụng muối acetat bão hòa vì nó có khả năng hoàn nguyên sau định lượng Quá trình xác định được kết quả: hàm lượng TEP theo hai phương pháp là 99,7  0,2 % (kỹ thuật 1), 99,8  0,27 %(kỹ thuật 2) Hiệu suất thu hồi TEP ở các mẫu 102,4% - 102,6%(kỹ thuật 1) và 103,1% - 100,9% (kỹ thuật 2)

2.6.2 Xác định TEP bằng phương pháp trắc quang

Trước đó đã có nhiều nghiên cứu xác định TEP bằng phương pháp như xác định tỷ trọng [12, 17, 25], phương pháp đo màu [23, 28, 35], sự hấp thụ màu được

xác định là do sự hình thành màu xanh molybden với chất khử là axit phosphomolybdic

Việc xác định TEP trong dược phẩm bằng phương pháp đo quang được sử dụng thuốc thử là vanalin 1% trong axit hydrocloric đậm đặc, dung môi hòa tan terpin hydrat là ethanol 960 Sử dụng vanilin làm chất oxi hoá TEP nhằm tạo phức màu (màu xanh) Khi khảo sát ở bước sóng từ 800 – 450 nm, thì ta thấy phức hình thành hấp thụ quang cực đại ở bước sóng 662nm Phản ứng giữa TEP và vanilin 1% được giải thích như sau:

OH OCH3

Sau đó dựng đường chuẩn trong khoảng nồng độ tuyến tính (tuân theo định luật Lambert – Beer) Sử dụng phương pháp thêm chuẩn và dựng đường thêm chuẩn để xác định TEP trong mẫu dược phẩm Xác định giá trị LOD, LOQ, độ đúng của phương pháp (độ lặp lại, hiệu suất thu hồi) và hàm lượng đo được của mẫu

THỰC NGHIỆM PHẦN 1: HOÁ CHẤT - DỤNG CỤ - THIẾT BỊ

* Thiết bị:

- Máy sắc ký lỏng Hitachi - Nhật Bản

- Máy quang phổ UV - VIS 1700 (Zhimadu - Nhật Bản)

- Máy đo pH Jenway – Anh

- Các thiết bị khác: Cân phân tích, cân kỹ thuật, máy lắc siêu âm

+ Các dung dịch đệm phosphat có pH khác nhau:

- Dung dịch đệm phosphat pH 2: cân 8,95g Na2HPO4 khan và 3,4g K2HPO4, hòa tan trong nước, thêm nước vừa đủ 1000ml

- Dung dịch đệm phosphat pH 2,7: cân 2,72g KH2PO4 hòa tan trong 800ml nước, thêm 3ml triethylamin, điều chỉnh về pH = 2,7 bằng axit phosphoric Thêm nước đến 1000ml

- Dung dịch đệm phosphat pH 2,87: cân 7,8g NaH2PO4, hòa tan trong 900ml nước điều chỉnh pH bằng axit phosphoric

- Dung dịch đệm phosphat pH 3,0: cân 3,4g KH2PO4, hòa tan trong 250ml nước, điều chỉnh pH bằng axit phosphoric

- Dung dịch đệm phosphat pH 3,5: cân 68g KH2PO4, hòa tan trong nước vừa đủ 1000ml, điều chỉnh pH bằng axit phosphoric

- Dung dịch đệm phosphat pH 4,0: cân 6,8g KH2PO4 hòa tan trong 700ml nước, điều chỉnh pH bằng axit phosphoric 10% thêm nước vừa đủ 1000ml

- Dung dịch đệm phosphat pH 5,0: cân 2,72g KH2PO4, hòa tan trong 800ml nước, điều chỉnh pH bằng KOH 1M

- Dung dịch đệm phosphat pH 6,0: cân 6,8g NaH2PO4.2H2O trong 1000ml nước, điều chỉnh pH bằng NaOH 10M

- Dung dịch đệm phosphat pH 7,0: cân 5,0g KH2PO4 + 11g K2HPO4, hòa tan trong 900ml nước, điều chỉnh pH bằng axit phosphoric 2M hoặc NaOH 2M

- Dung dịch đệm phosphat pH 8,0: dùng 50ml dung dịch KH2PO4 0,2M + 46,8ml NaOH 0,2N (dung dịch chuẩn độ) thêm nước vừa đủ 200ml

- Dung dịch đệm Acetat pH 3,0: cân 4,2g Natri acetat khan, hòa tan trong 840ml nước, điều chỉnh pH bằng axit acetic băng, thêm nước vừa đủ 1000ml

- Dung dịch đệm borat pH 8,4: điều chế dung dịch axit boric và KCl 0,2N: hòa tan 12,37g axit boric và 14,91g KCl trong nước vừa đủ 1000ml Lấy 50ml dung dịch vừa pha + 8,6ml dung dịch NaOH 0,2N, thêm nước vừa đủ 200ml

- Dung dịch đệm Citrat pH 3,5: trộn 26ml natri citrat và 24ml HCl 1M ta thu được dung dịch đệm citrat – HCl pH 3,5

+ Pha dung dịch NaOH 0,1M: cân 4g NaOH viên hòa tan và định mức thành 1000ml + Pha dung dịch vanilin 1% trong axit hydrocloric đặc: cân 1g vanilin hòa tan trong 100ml dung dịch axit hydrocloric đặc thu được dung dịch vanilin 1% (dung dịch chỉ pha trước khi dùng)

+ Pha cồn 96% từ cồn tuyệt đối (dựa vào bảng độ cồn biểu kiến)

* Dung dịch mẫu chuẩn:

+ Dung dịch chì chuẩn 1000ppm: hòa tan 0,400g chì (II) nitrat trong nước vừa đủ 250ml

+ Dung dịch đồng chuẩn 1000ppm: cân 0,393g CuSO4.5H2O trong nước vừa đủ 100ml + Dung dịch sắt chuẩn 1000ppm: hòa tan 0,1g Fe trong một lượng tối thiếu dung dịch đồng thể tích axit hydrocloric đặc và nước Thêm nước vừa đủ 100ml

* Chuẩn bị mẫu:

+ Pha mẫu chuẩn:

- Dung dịch chuẩn PA 200ppm (dùng cho UV – VIS): cân 49,73mg PA (chất chuẩn đối chiếu phòng KTCL – CTCP Dược Phẩm Hà Nội, hàm lượng 100,55%) pha trong 50ml NaOH 0,1M, định mức bằng nước cất đến 250ml thu được dung dịch PA chuẩn có nồng độ 200 ppm Dung dịch PA 200ppm dùng trong ngày

- Dung dịch chuẩn PA 200ppm (dùng cho sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC): cân 49,73mg PA chất chuẩn pha trong pha động (đệm phosphat pH 2,7: acetonitril = 90:10) vừa đủ 250ml Thu được dung dịch PA chuẩn có nồng độ 200ppm

- Dung dịch TEP 500ppm: cân 53,21mg TEP (chất đối chiếu phòng KTCL – CTCPDP

Hà Nội, hàm lượng 93,96%) hòa tan và định mức vừa đủ 100ml bằng ethanol 96% thu được dung dịch chuẩn TEP 500ppm, dung dịch dùng trong ngày

PHẤN 2: TIẾN HÀNH THỰC NGHIỆM

1 Xác định Paracetamol bằng phương pháp trắc quang

1.1 Quét phổ khảo sát bước sóng cho cực đại hấp thụ:

Chuẩn bị dung dịch gốc 200ppm, tiến hành lấy chất theo thứ tự: Hút chính xác 2,5ml dung dịch paracetamol 200ppm vào bình định mức 100ml, thêm 10ml dung dịch NaOH 0,1M, thêm nước đến vạch Lắc trộn đều Đem đo dải phổ trong khoảng 300 – 220nm ta thu được phổ có cực đại tại bước sóng 257nm

Hình 1: đồ thị khảo sát bước sóng hấp thụ cực đại của PA

1.2 Khảo sát thứ tự cho thuốc thử và nồng độ thuốc thử:

Khảo sát thứ tự cho thuốc thử của 4 dung dịch với cùng một lượng thuốc thử

là 10ml dung dịch NaOH 0,1M và lượng chất là 5ml paracetamol 200ppm vào bình định mức 100ml Kết quả mật độ quang thu được khi thứ tự thuốc thử trước hay sau không ảnh hưởng nhiều, tuy nhiên chúng tôi chọn cho thuốc thử sau Do thuốc thử

là dung dịch NaOH 0,1M nên pH trong dung dịch đem đo quang lớn hơn 7 nên chúng tôi không khảo sát pH của thành phần nền mà chỉ khảo sát nồng độ nền hay nồng độ của thuốc thử

Tiến hành chuẩn bị 11 bình định mức 100ml chứa lần lượt dung dịch theo thứ tự sau và đo hấp thụ quang ở 257nm, với các mẫu trắng có nồng độ thuốc thử tương ứng, ta thu được kết qủa dưới đây:

Bảng 1: khảo sát ảnh hưởng nồng độ thuốc thử tới độ hấp thụ quang của PA

Thứ tự Vthuốc thử (ml) Vparacetamol 200ppm (ml) A(Abs)

Hình 2: đồ thị sự phụ thuộc mật độ quang của PA vào nồng độ thuốc thử

Như vậy trên đồ thị ta thấy độ hấp thụ quang A tăng theo sự tăng nồng độ thuốc thử (thể tích thêm vào) nhưng từ giá trị 10ml thuốc thử trở đi thì hầu như độ hấp thụ quang không thay đổi tương đối ổn định do đó chúng tôi chọn giá trị thể tích thuốc thử lấy là 10ml dung dịch NaOH 0,1M cho các lần khảo sát tiếp theo

1.3 Khảo sát độ bền của phức theo thời gian

Tiến hành khảo sát độ bền của phức PA với thuốc thử, mang đo dung dịch chứa 5ml PA 200ppm với 10ml NaOH 0,1M trong bình định mức 100ml Sau đó tiến hành đo quang thì ta thấy phức tạo thành tương đối bền vững trong thời gian

khảo sát, sự thay đổi độ hấp thụ quang không đáng kể

Hình 3: đồ thị khảo sát đồ bền của phức PA

1.4 Khảo sát ảnh hưởng của một số ion

Khảo sát sự ảnh hưởng của một số ion kim loại đến cường độ hấp thụ quang được tiến hành với một số ion sau: Pb2+, Fe2+, Cu2+ Chuẩn bị lần lượt 3 dãy bình định mức 100ml chứa dung dịch các ion trên với lượng chất chung mỗi bình là 10ml NaOH 0,1M + 5ml PA 200ppm, lượng ion ảnh hưởng được thêm từ dung dịch gốc Pb2+

1000ppm, Fe2+ 1000ppm, Cu2+ 1000ppm theo bảng 2 sau (xem bảng 2)

Bảng 2: khảo sát sự ảnh hưởng của các ion tới mật độ quang của PA

Đồ thị ảnh hưởng

0.5 0.55 0.6 0.65 0.7 0.75 0.8 0.85 0.9 0.95

Pb Fe Cu

Hình 4: đồ thị khảo sát sự ảnh hưởng của các ion tới độ hấp thụ quang của PA

Từ kết quả trên cho thấy (xem bảng 2, hình 4) các ion đều làm tăng mật độ quang của PA, Pb làm tăng mật độ quang nhiều nhất so với hai ion còn lại Tuy sự hấp thụ quang của cả 3ion này chỉ đáng kể trong trường hợp tỷ lệ của chúng so với PA tương đối lớn, mà trong dược phẩm thì hàm lượng những kim loại này không lớn do

đó không cần dùng chất che các ion này, khảo sát này hướng tới xác định PA trong các đối tượng khác khi đó ảnh hưởng của các ion kim loại cần chú ý nhiều hơn

1.5 Khảo sát sự tuân theo định luật Lambert – Beer

Chúng tôi tiến hành với 10 dung dịch chứa PA theo hàm lượng tăng dần từ 0,5-12 ppm để xác định khoảng tuyến tính của PA trong phương pháp đo quang này ở bước sóng 257nm Lấy lần lượt mỗi dung dịch 10ml thuốc thử NaOH 0,1M

và thêm các thể tích dung dịch gốc PA 200ppm tăng dần sau đó định mức thành 100ml, tiến hành đo mật quang thu được kết quả sau:

Bảng 3: Khảo sát sự tuân theo định luật Lambert – Beer

Đồ thị khảo sát định luật Lamber - Beer

y = 0.0721x + 0.006

R 2

= 0.9998

0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1

Hình 5: đồ thị khảo sát tuân theo định luật Lambert - beer

Kết quả trên cho thấy (xem bảng 3, hình 5) trong khoảng nồng độ khảo sát (từ 0,5 – 12ppm) tuân theo định luật Lambert – Beer Như vậy đường chuẩn được lập và pha chế mẫu cần định lượng trong khoảng nồng độ này để xác định hàm lượng PA

1.6 Lập đường chuẩn xác định PA:

Để lập đường chuẩn xác định PA bằng phương pháp trắc quang được tiến hành đo quang gồm một dãy dung dịch có nồng độ từ 0,5 – 12 pppm Cũng tiến hành như phần khảo sát theo định luật Lambert – Beer nhưng với khoảng cách đều nhau hơn thì ta thu được kết quả sau (xem bảng 4, hình 6):

Bảng 4: Kết quả xác định đường chuẩn PA

0 2 4 6 8 10 12 0.0

0.2 0.4 0.6 0.8

Nên phương trình hồi qui đầy đủ của đường chuẩn có dạng:

Y = (A ± t.SA) + (B ± t.SB) X

(với X là nồng độ PA (ppm), Y là mật độ quang)

Y = (0,0032 ± 0,0030) + (0,0726 ± 0,00044).X (1)

Kiểm tra sự khác nhau giữa hằng số A của phương trình hồi qui với giá trị 0

Sử dụng phần mềm Excel thu được ở bảng sau (xem bảng 5)

Bảng 5: Các giá trị thống kê được xử lý bằng phần mềm Excel

Với phương trình hồi qui trên cho thấy rằng hệ số của phương trình đáng tin cậy

vì P-value bằng 0,033174 và 1,49.10-22 nhỏ hơn 0,05 (mức ý nghĩa đã chọn) nên các

hệ số đều có ý nghĩa Hay sự khác nhau giữa hệ số A và 0 không có ý nghĩa thống kê nên phương pháp không mắc sai số hệ thống

Khi đó giới hạn phát hiện PA theo đường chuẩn là:

= 0,99993), phương pháp không mắc sai số hệ thống Chúng tôi sử dụng đường chuẩn này để xác định hàm lượng PA

có trong mẫu dược phẩm bằng cả phương pháp thêm chuẩn và phương pháp đường chuẩn

1.7 Độ lặp lại:

Để đảm bảo độ chính xác và tin cậy của phép đo cũng như độ lặp lại, dung dịch

PA được tiến hành đo lặp lại 10 lần với 3 nồng độ 1ppm, 5ppm, và 10ppm với cách chuẩn bị mẫu tương ứng lấy 10ml NaOH 0,1M + 0,5ml PA 200ppm (nồng độ 1ppm) và 10ml NaOH 0,1M + 2,5ml PA 200ppm (nồng độ 5ppm) và 10ml NaOH 0,1M + 5ml PA 200ppm (nồng độ 10ppm) vào bình định mức 100ml, thêm nước tới vạch, lắc trộn đều, tiến hành đo hấp thụ quang ở bước sóng 257nm Thu được kết quả như sau (xem bảng 6):

Bảng 6: Kết quả khảo sát độ lặp lại ở 3 nồng độ của PA

+ Hệ số biến động :   100 %

X

S V

+ Độ lệch chuẩn 2

S

S d 

Trong đó Xi là mật độ quang thứ i được đo

X : giá trị trung bình của N lần đo

N : số lần đo lặp lại

Từ bảng trên (bảng 6) ta tính được độ lệch chuẩn và độ lệch chuẩn tương đối hay hệ số biến động ở bảng dưới đây:

Bảng 7: kết quả độ lặp lại ở 3 nồng độ của PA

C (ppm) Độ lệch chuẩn Sd Hệ số biến động V

Giá trị độ lệch chuẩn và độ lệch chuẩn tương đối nhỏ chứng tỏ độ lặp lại của phép

đo đáp ứng được yêu cầu phân tích

1.8 Xác định PA trong mẫu thuốc:

- Đặc điểm: Dạng viên nén đóng vỉ, 10 viên/vỉ

- Thành phần: paracetamol 325mg, chlorpheniramin maleat 2mg, còn lại là tá dược

- Số đăng ký: VD – 11592 – 10 Số lô SX: 07040510

- Nơi SX: CÔNG TY CỔ PHẦN DƯỢC PHẨM HÀ TÂY

3) Tiffy FU

- Đặc điểm: Dạng viên nén, vỉ 4 viên

- Thành phần: paracetamol 500mg, chlorpheniramin maleat 2mg, pseudoephedrin HCl 30mg, còn lại là các tá dược vừa đủ một viên

- Số đăng ký VNB – 4672 – 05 Số lô SX: 3381110

- Nơi SX: CÔNG TY TNHH THAI NAKORN PATANA (VIỆT NAM)

4) Panadol Extra Extra

- Đặc điểm: dạng viên nén, vỉ 10 viên

- Thành phần: paracetamol 500mg, caffein 65mg, còn lại là tá dược

* Chuẩn bị mẫu phân tích:

+ Các mẫu viên: Cân chính xác một lượng bột viên đã nghiền mịn tương ứng với

khoảng 40mg PA Hòa tan trong 50ml NaOH 0,1M trong bình định mức 250ml Lắc siêu âm 15 phút, thêm nước tới vạch, lắc đều, lọc qua giấy lọc, bỏ 20ml dịch lọc đầu Thu được dung dịch định lượng (A1)

+ Mẫu lỏng: Hút chính xác 2ml dung dịch mẫu hòa tan trong 50ml NaOH 0,1M

trong bình định mức 250ml, lắc siêu âm 15phút Thêm nước cất tới vạch, lắc trộn đều, lọc qua giấy lọc, bỏ 20ml dịch lọc đầu Thu được dung dịch mẫu định lượng (A2)

Bảng 8: chuẩn bị mẫu phân tích

Mẫu chất phân tích Lượng cân mẫu Đơn vị

PA 200ppm tăng dần, định mức tới vạch bằng nước cất rồi tiến hành đo mật độ quang Dựng đường thêm chuẩn rồi ngoại suy từ đồ thị xác định được nồng độ dung dịch Cx của dung dịch mẫu thuốc

Công thức tính nồng độ trong mẫu thuốc rắn (1) và lỏng (2):

6

10 100

250





1.8.1 Xác định PA trong mẫu thuốc Pacemin

Tiến hành đo dãy 6 dung dịch chuẩn bị như trên với thể tích mẫu Pacemin lấy ban đầu là 1ml ta thu được kết quả như sau:

0 2 4 6 8 10 0.0

0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8

Hình 8: đồ thị ngoại suy xác định nồng độ PA trong Pacemin

Từ đường thêm chuẩn ở trên ngoại suy ra đồ thị và tính toán từ đường thêm chuẩn

ta tính được nồng độ Cx của PA trong mẫu Pacemin lúc đầu thêm vào là: