Xác định đồng thời hàm lượng paracetamol và caffein trong một số dược phẩm bằng phương pháp HPLC

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HCM KHOA HÓA HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: Th.S Nguyễn Ngọc Hưng SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Trinh TP.HCM – 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HCM KHOA HÓA HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD: Th.S Nguyễn Ngọc Hưng SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Trinh TP.HCM – 2013 LỜI CÁM ƠN Trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn đến thầy Nguyễn Ngọc Hưng giao cho em đề tài nghiên cứu Cám ơn thầy tận tình hướng dẫn, hỗ trợ em suốt thời gian nghiên cứu Em xin gửi lời cám ơn đến thầy cô phòng thí nghiệm môn phân tích giúp đỡ em trình làm khóa luận Cám ơn gia đình, tất bạn bè ủng hộ, giúp đỡ chỗ dựa tinh thần, nguồn động viên cho em lúc khó khăn Một lần xin cám ơn tất người Kính chúc thầy cô, tất bạn bè gia đình thật nhiều sức khỏe TP HCM, tháng năm 2013 Sinh viên Nguyễn Thị Ngọc Trinh MỤC LỤC LỜI CÁM ƠN i MỤC LỤC iv MỤC LỤC iv DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH VẼ vii KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT viii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Cơ sở lý thuyết phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) 1.1.1 Giới thiệu 1.1.2 Nguyên tắc cấu tạo hệ thống HPLC 1.1.3 Nguyên tắc trình sắc kí cột 1.1.4 Các đại lượng đặc trưng 1.1.5 Định lượng HPLC 13 1.2 Paracetamol [3, 4] 15 1.3 Caffein [3, 4] 19 1.4 Các phương pháp phân tích paracetamol 20 1.5 Các phương pháp phân tích caffein 21 1.6 Các phương pháp xác định đồng thời paracetamol caffein 21 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 24 2.1 Hóa chất, dụng cụ 24 2.1.1 Hoá chất 24 2.1.2 Dụng cụ, thiết bị 25 2.2 Thực nghiệm 26 2.2.1 Khảo sát điều kiện tối ưu 26 2.2.2 Phân tích mẫu dược phẩm 29 CHƯƠNG KẾT QUẢ- THẢO LUẬN 32 3.1 Khảo sát điều kiện tối ưu 32 3.1.1 Khảo sát thành phần pha động 32 3.1.2 Khảo sát tốc độ pha động 34 3.2 Phân tích mẫu dược phẩm 36 3.2.1 Khảo sát khoảng tuyến tính 36 3.2.2 Ứng dụng quy trình phân tích vào số mẫu dược phẩm 40 CHƯƠNG KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 44 4.1 Kết luận 44 4.2 Đề nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Sự phụ thuộc thơi gian lưu, chiều cao pic sắc kí vào tỉ lệ methanol pha động 32 Bảng 3.2.Mối quan hệ tốc độ pha động chiều cao pic sắc kí 34 Bảng 3.3 Sự phụ thuộc chiều cao pic sắc kí vào nồng độ paracetamol 37 Bảng 3.4.Sự phụ thuộc chiều cao pic sắc kí vào nồng độ caffein 38 Bảng 3.5.Diện tích pic thu sau lần lọc 39 Bảng 3.6 Kết phân tích mẫu dược phẩm 40 Bảng 3.7 Kết phân tích hàm lượng paracetamol caffein viên thuốc Panadol Extra 42 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1.Sơ đồ hệ thống HPLC Hình 1.2.Sơ đồ thể ảnh hưởng lực rửa giải Hình 1.3.Quá trình tách sắc kí chất Hình 1.4.Thời gian lưu HPLC Hình 1.5.Giản đồ tách hai pic sắc kí A B 11 Hình 1.6.Phương trình đường cong Van Deemter 12 Hình 1.7.Mối quan hệ H = f(C) S = f(C) 13 Hình 3.1.Sắc kí đồ paracetamol caffein khảo sát pha động 31 Hình 3.2 Sắc kí đồ hỗn hợp paracetamol caffein với pha động methanol 32 Hình 3.3 Sự phụ thuộc chiều cao pic sắc kí vào tốc độ pha động 34 Hình 3.4 Đường chuẩn paracetamol 37 Hình 3.5.Đường chuẩn caffein 38 Hình 3.6 Sắc kí đồ mẫu thuốc 41 KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT C Nồng độ H Chiều cao pic HPLC Sắc kí lỏng hiệu cao RP – HPLC Sắc kí hấp phụ pha đảo S pic Diện tích pic sắc kí STT Số thứ tự tR Thời gian lưu UV Tử ngoại V Thể tích VIS Khả kiến m Khối lượng MỞ ĐẦU Xã hội ngày phát triển vấn đề sức khỏe người ngày trọng Chính mà sản phẩm ảnh hưởng trực tiếp tới sức khỏe người ngày quan tâm Paracetamol caffein thành phần phổ biến có hầu hết loại thuốc giảm đau, hạ sốt thị trường Paracetamol thuốc có tác dụng giảm đau, hạ sốt xếp vào nhóm thuốc không cần kê đơn Ngoài tác dụng làm giảm cảm giác mệt mỏi buồn ngủ, caffein có khả gây co mạch, làm giảm cường độ thời gian đau Do vậy, phối hợp với paracetamol, caffein làm tăng hiệu giảm đau thuốc mà giúp người bệnh tỉnh táo Tuy nhiên việc sử dụng cách tùy tiện lạm dụng mức loại thuốc chứa paracetamol caffein gây triệu chứng, tác dụng phụ không mong muốn, gây ảnh hưởng đến sức khỏe người Ngày với phát triển khoa học kỹ thuật, nhiều kỹ thuật phân tích đại áp dụng vào việc phân tích, xác định hàm lượng chúng nhằm kiểm soát chất lượng sản phẩm, đảm bảo an toàn sức khỏe người sử dụng HPLC phương pháp phân tích đại, xác nhanh chóng để phân tích hàm lượng loại thuốc đa thành phần nghiên cứu ứng dụng thực tế Tại Việt Nam có công trình nghiên cứu xác định thành phần paracetamol caffein dược phẩm sử dụng phương pháp quang phổ UV-VIS, quang phổ đạo hàm, HPLC,… Trong đó, phương pháp quang phổ UV-VIS, quang phổ đạo hàm thường dùng để xác định đồng thời paracetamol caffein Trong đó, HPLC thường dùng để xác định chất riêng rẽ Vì vậy, chọn đề tài “Xác định đồng thời hàm lượng paracetamol caffein số dược phẩm phương pháp HPLC” với mong muốn tìm phương pháp nhanh, hiệu phù hợp với điều kiện nghiên cứu phòng thí nghiệm với hai mục tiêu: Trang • Xây dựng điều kiện phân tích đồng thời paracetamol caffein phương pháp HPLC sử dụng detector UV-VIS • Áp dụng phương pháp để định lượng paracetamol caffein số dược phẩm thông dụng Trang Phụ lục 2: Sắc kí đồ dung dịch chuẩn khoảng tuyến tính paracetamol Phụ lục 3: Sắc kí đồ dung dịch chuẩn khoảng tuyến tính caffein [...]... hiện của caffein với phương pháp trên là 2 μg/g; 1,5 μg/ml và 2 μg/g đối với trà, cola và cà phê [8] 1.6 Các phương pháp xác định đồng thời paracetamol và caffein H Tavallali và M Sheikhaei đã tiến hành xác định đồng thời paracetamol và caffein bằng phương pháp thêm chuẩn điểm H vào năm 2009 Phương pháp dựa trên sự khác nhau về tỉ lệ oxi hóa của hai chất cần xác định với Cu(II) neocuproine và sự tạo... nm và điều kiện pH là 5,0 với sự có mặt của chất hoạt động bề mặt natri dodecyl sunfat Paracetamol được xác định trong khoảng nồng độ 1,5 – 7,0 µg/ml và caffein được xác định trong khoảng nồng độ 0,1 – 3,0 µg/ml [9] Năm 2010, Vijaya Vichare, Preeti Mujgond và cộng sự sử dụng phương pháp trắc quang để xác định đồng thời paracetamol và caffein trong các sản phẩm dược Khoảng tuyến tính thu được nằm trong. .. (hệ số tương quan r = 0,9999) và giới hạn phát hiện paracetamol là 5,6.10-10 M [6] 1.5 Các phương pháp phân tích caffein Hàm lượng caffein có trong huyết thanh người và thức uống có cola đã được Wenrui Jin và các cộng sự xác định bằng phương pháp điện di mao quảnvào năm 2000 Giới hạn phát hiện của caffein thu được là 2,9.10-4 mM và độ lệch chuẩn của thời gian điện di và diện tích pic thu được của caffein. .. với paracetamol và 2 – 32 µg/ml đối với caffein [10] Paracetamol và caffein trong thuốc đã được M Prodan và cộng sự xác định bằng phương pháp HPLC sử dụng cột C 18 , dung môi pha động là methanol : nước Trang 21 theo tỉ lệ thể tích 40:60, tốc độ pha động là 0,5 ml/phút Bước sóng của đầu dò với mỗi chất là 249 nm và 279 nm [11] M Levent Altun dùng phương pháp HPLC phân tích đồng thời paracetamol, caffein. .. nghiên cứu này để phân tích đồng thời paracetamol và caffein chúng tôi lựa chọn van bơm mẫu 6 chiều và thể tích vòng mẫu là 20 µl 2.2.1.2 Chọn cột Trong đề tài nghiên cứu này, paracetamol và caffein là những chất rất ít phân cực và dựa vào dược điển Mỹ USP 23, 24 quy định về chỉ tiêu phân tích định lượng các thành phần trong dược phẩm, nên ta phải chọn các loại cột RP – HPLC Trên thị trường có rất... nghĩa là tỷ số nồng độ của chất tan i ở trong pha tĩnh và pha động và nó được tính theo công thức: 𝐾= 𝐶𝑖𝑆𝑃 𝐶𝑖𝑀𝑃 (1.4) Trong đó C iSP và C iMP là nồng độ của chất tan i trong pha tĩnh và pha động Hệ số K i cho ta biết khả năng phân bố của chất i như thế nào trong mỗi pha (pha động và pha tĩnh) 1.1.4.3 Hệ số dung lượng Hệ số dung lượng k’cho ta biết tỷ số khối lượng của chất tan i phân bố vào trong mỗi... mẫn cảm với thuốc, suy mạch vành, nhồi máu cơ tim, nhịp tim nhanh, ngoại tâm thu Liều lượng: Ống tiêm: 1ml dung dịch 0,7% Uống: 0,1 – 0,2 g/lần và 2 lần/ngày Quá liều: Triệu chứng là mất ngủ, bồn chồn, kích thích nhẹ 1.4 Các phương pháp phân tích paracetamol Sinan Suzen, Cemal Akay, và các cộng sự sử dụng phương pháp HPLC để xác định hàm lượng paraccetamol trong dược phẩm vào năm 1998 chương trình sử... [12] Viswanath Reddy Pyreddy cùng cộng sự xác định đồng thời paracetamol, caffein, pseudoephedrine và chlorpheniramine maleate trong dược phẩm bằng phương pháp HPLC vào năm 2011.Chương trình sắc kí sử dụng cột C 18 (150mm, 4.6mm và 3µm) với chương trình gradient nồng độ Hệ dung môi pha động gồm dung dịch A là đệm phosphate (1,0g KH 2 PO 4 trong 1000 ml nước) và dung dịch B là acetonitrile với tốc độ... được bơm vào cột tách H = a.C + b (1.17) S = a.C+ b (1.18) Trong đó: + H : Chiều cao pic sắc kí của chất + S : Diện tích pic sắc kí của chất Hình 1.7.Mối quan hệ H = f(C) và S = f(C) Trang 13 Để phân tích định lượng các chất theo kỹ thuật HPLC, chúng ta có thể dùng một trong hai phương pháp chuẩn hoá là phương pháp đường chuẩn và phương pháp thêm chuẩn.Việc chọn phương pháp nào là tuỳ thuộc vào loại... 𝑘′𝑖 = 𝑚𝑆𝑃 𝑚𝑀𝑃 (1.5) Trang 8 Mối quan hệ giữa hệ số dung tích k i ′ và hệ số phân bố K i thể hiện qua phương trình sau: 𝑘′𝑖 = 𝐾𝑖 1.1.4.4 Hệ số tách α 𝑉𝑆 (1.6) 𝑉𝑀 Hệ số tách α (hay còn gọi là thời gian lưu tương đối của hai chất A và B) là đại lượng đánh giá khả năng tách hai chất bằng phương pháp sắc kí Nó phụ thuộc vào hệ số phân bố và là tỉ số của hệ số phân bố của hai chất 𝛼= 𝐾𝐴 𝐾𝐵 𝑘′𝐴 = 𝑘′𝐵 = 𝑡′𝑅𝐴 ... xác định đồng thời paracetamol caffein Trong đó, HPLC thường dùng để xác định chất riêng rẽ Vì vậy, chọn đề tài Xác định đồng thời hàm lượng paracetamol caffein số dược phẩm phương pháp HPLC ... cứu xác định thành phần paracetamol caffein dược phẩm sử dụng phương pháp quang phổ UV-VIS, quang phổ đạo hàm, HPLC, … Trong đó, phương pháp quang phổ UV-VIS, quang phổ đạo hàm thường dùng để xác. .. định đồng thời paracetamol caffein sản phẩm dược Khoảng tuyến tính thu nằm khoảng – 16 µg/ml paracetamol – 32 µg/ml caffein [10] Paracetamol caffein thuốc M Prodan cộng xác định phương pháp HPLC