BÁO CÁO SO SÁNH VÀ ĐÁNH GIÁ BA ĐỊNH DẠNG ELISA PHÁT HIỆN RICIN TRONG SỮA VÀ HUYẾT THANH

ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ HÓA HỌC-THỰC PHẨM MÔN: CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM BÁO CÁO: SO SÁNH VÀ ĐÁNH GIÁ BA ĐỊNH DẠNG ELISA PHÁT HIỆN RICIN TRONG SỮA VÀ HUYẾT THANH GVHD: ThS. Nguyễn Minh Hải Nhóm 11: Ngô Thị Quỳnh Anh 11116002 Lê Thị Chiến 11116008 Phạm Đình Hà 11116024 Phan Văn Luật 11116036 Vanxay phimphone 111160L2 TP HCM, 2014 CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU 3 LỜI MỞ ĐẦU Ricin là một loại protein thực vật không mùi, không vị, có độc tính cao được tìm thấy trong tự nhiên, có nhiều trong các hạt thầu dầu. Nó được hình thành từ chất thải bị bỏ trong quá trình chế biến dầu từ hạt thầu dầu. Ricin phóng thích trong cơ thể ra có thể gây nguy hiểm. Nhưng cho đến bây giờ vẫn không có phương thuốc nào có thể giải được độc Ricin. Vì độc tính cao và dễ dàng lấy được từ cây thầu dầu, Ricin là một tác nhân sinh học nguy hiểm và được liệt kê là một trong những chất cực độc gây bênh. Ở Mỹ, việc khủng bố đã sử dụng Ricin nên nguy cơ chất này nhiễm vào thực phẩm là rất lớn và đang trở thành mối quan tâm của cộng đồng. Vì vậy cần phải có phương pháp nhanh và chính xác để xác định Ricin trong thực phẩm hay các dịch sinh học. Người ta đã đưa ra hàng loạt các phương pháp nhưng khá phức tạp và chi phí cao. Phương pháp xét nghiệm miễn dịch liên kết enzyme (ELISA) đã được sử dụng để phát hiện Ricin trong thực phẩm và dịch sinh học. Tuy không phải là phương pháp nhạy nhất nhưng nó được ứng dụng phổ biến và cung cấp được nhiều thông tin quan trọng. Nhóm 11 Trang 2 CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM Để hiểu rõ hơn về vấn đề này, bài báo mà nhóm đã dịch nói về việc so sánh và đánh giá xét nghiệm ELISA phát hiện Ricin trong sữa và huyết thanh sẽ cung cấp thêm các thông tin cụ thể. Trong quá trình dịch có thể có nhiều sai sót mong thầy và các bạn thông cảm. So sánh và đánh giá ba định dạng xét nghiệm miễn dịch liên kết enzyme (ELISA) để phát hiện chất ricin trong sữa và huyết thanh. Tóm tắt Khi áp dụng để phát hiện ra độc tố protein cụ thể trong thực phẩm hay một chất dịch sinh học nào đó có khả năng mắc một nguy cơ ô nhiễm, điều quan trọng là phải xét nghiệm được độ nhạy và tính chất đặc trưng riêng biệt của nó. Để xác định một xét nghiệm miễn dịch là nhạy, đơn giản và chính xác trong việc phát hiện ra chất ricin trong sữa và huyết thanh, người ta sử dụng ba định dạng của sandwich ELISA (xét nghiệm miễn dịch liên kết enzyme) đã được so sánh và sử dụng cùng cặp kháng thể. ELISA sử dụng biotin kết hợp với kháng thể phát hiện chính và streptavidin liên kết hệ enzyme peroxidase trong cây cải ngựa (HRP) cho thấy đây là xét nghiệm có độ nhạy lớn nhất với giới hạn phát hiện (LOD) của 25pg/ml trong dung dịch phosphate Nhóm 11 Trang 3 CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM buffered saline (PBS), 50pg/ml trong sữa không béo, huyết thanh chuột, và 100pg/ml trong sữa nguyên kem. Hiệu quả tốt thứ hai là ELISA sử dụng streptavidin kết hợp với kháng thể phát hiện chính và hệ thống biotin-HRP, giới hạn phát hiện (LOD) cho ricin là 100pg/ml trong PBS và sữa, 1ng/ml trong huyết thanh. ELISA sử dụng kháng thể phát hiện chính không được gắn thẻ và phức hợp HRP-kháng thể thứ cấp được gắn nhãn thực hiện với độ nhạy thấp nhất trong tất cả các định dạng và LOD của nó là 1ng/mL ở các lần xét nghiệm. So với xét nghiệm ELISA trực tiếp (không sử dụng kháng thể bắt giữ), các xét nghiệm sandwich ELISA nhạy hơn 50-500 lần trong dung dịch đệm PBS. Ước tính chính xác của các xét nghiệm miễn dịch là việc sử dụng hệ số biến thiên (CV) cho thấy rằng định dạng ELISA nhạy nhất có hệ số biến thiên thấp nhất trong liên khảo nghiệm CV (inter-assay CV) (4,28%) và trong nội khảo nghiệm CV (intra-assay CV) (2,15%) mặc dù liên và nội khảo nghiệm CV đối với hai ELISA khác tương ứng thấp hơn 10% và 6%, thấp hơn mức chấp nhận được tối đa. Vậy kết luận, ELISA sử dụng biotin kết hợp kháng thể phát hiện chính và hệ thống streptavidin-HRP là xét nghiệm tốt nhất trong ba định dạng ELISA cho việc phát hiện chất ricin trong dung dịch PBS, sữa và huyết thanh và việc áp dụng xét nghiệm này sẽ có giá trị để nghiên cứu an toàn thực phẩm và chẩn đoán lâm sàng. 1. Giới thiệu Ricin là một loại protein bậc II khử hoạt tính ribosome có nguồn gốc từ hạt của cây thầu dầu (Ricinus communis). Nó bao gồm hai chuỗi polypeptide A và B, với trọng lượng phân tử là 32 và 34 kDa. Ricin A là một chuỗi N-glycosidase dài nó ức chế việc tổng hợp protein làm bất hoạt ribosome kết quả là làm cho tế bào bị chết. Ricin B là một chuỗi lectin gắn với glycoprotein hoặc glycolipid ở trên bề mặt tế bào giúp cho giúp cho ricin đi vào trong tế bào thông qua thụ thể trung gian endocytosis. Ricin là một trong những độc tố mạnh nhất với liều lượng gây chết là 30 mg/kg ở chuột, 1-20 mg/kg trọng lượng cơ thể trong con người. Vì độc tính cao và dễ dàng lấy Nhóm 11 Trang 4 CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM được từ cây thầu dầu, ricin là một tác nhân sinh học nguy hiểm và được liệt kê là một trong những chất cực độc gây bệnh. Ở Mỹ, việc khủng bố đã có sử dụng ricin nên khả năng chất này nhiễm vào lương thực là rất lớn và đây đang là mối quan tâm của công cộng. Vì vậy cần phải có một phương pháp xác định nhanh và chính xác ricin trong thực phẩm hay các dịch sinh học. Người ta đã đưa ra hàng loạt phương pháp để phát hiện chất ricin này nhưng khá phức tạp. Năm 2008 Garber, các cộng sự Halter đã xét nghiệm trên chuột. Năm 2010 Halter và các cộng sự đã dùng phương pháp miễn dịch- PCR để nghiên cứu. Năm 2011 McGrath và các cộng sự đã dùng quang phổ để nghiên cứu. Nhưng hầu hết các phương pháp đều yêu cầu các thiết bị đắt tiền mà các thiết bị này thì có rất ít hoặc không có trong phòng thí nghiệm. Phương pháp xét nghiệm miễn dịch liên kết enzyme ELISA đã và đang được sử dụng phổ biến để định lượng các chất như: peptide, protein, kháng thể và hormone. Mặc dù đây không phải là phương pháp nhạy nhất nhưng nó cung cấp một số thông tin quan trọng. Đáng chú ý là nó chỉ đòi hỏi khối lượng mẫu nhỏ và một ít thuốc thử. Nó dễ dàng lắp vào 96 giếng của tấm vi chuẩn và sử dụng với nhiều hệ thống phát hiện khác nhau. Do đó, nó trở thành một kỹ thuật phổ biến ứng dụng cho nhiều nghiên cứu cơ bản, ứng dụng cao. Nó có thể cố định chất phản ứng với bề mặt vi đĩa, tạo điều kiện tách khỏi sự phụ thuộc nguyên liệu trong quá trình xét nghiệm . Khả năng rửa trôi một cách không đặc hiệu với liên kết vật liệu làm cho ELISA trở thành công cụ hữu hiệu để đo chất phân tích trong ma trận phức tạp. Hơn thế nữa, tất cả các hoá chất và thiết bị cần thiết cho ELISA đều sẵn có ở hầu hết các phòng thí nghiệm. Các ELISA có thể thể hiện bằng những con số sửa đổi từ những quy trình cơ bản. Bước quan trọng là sự cố định của kháng nguyên có thể thực hiện bằng cách hấp thu trực tiếp với đĩa thí nghiệm hoặc gián tiếp thông qua một kháng thể bắt giữ đã được gắn vào đĩa. Sau đó kháng nguyên được phát hiện trực tiếp (có gắn kháng thể chính) hoặc gián tiếp (gắn kháng thể thứ cấp). Nhóm 11 Trang 5 CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM ELISA mạnh nhất là sandwich ELISA. Trong xét nghiệm này, kháng nguyên được kẹp giữa hai kháng thể chính, kháng thể bắt và kháng thể phát hiện. Đây là phương pháp phổ biến do nó rất nhạy và phản ứng mạnh hơn so với xét nghiệm trực tiếp cố định kháng nguyên trên đĩa. Một số định dạng sandwich ELISA đã được phát triển để phát hiện chất ricin (Brandon 2011;Guglielmo-Viret et al., 2007), nhưng không có tài liệu báo cáo việc thực hiện các ELISA trong các định dạng đĩa khác nhau thông qua so sánh trực tiếp. Trong nghiên cứu này, mục đích chính là nhận biết và xác định ELISA đó là đơn giản, nhạy và có tính lặp lại trong việc phát hiện chất ricin có trong sữa và huyết thanh. Thông qua nghiên cứu, việc đánh giá và so sánh ba định dạng ELISA đã được thực hiện. Kháng thể bắt trong ba xét nghiệm không bị điều chỉnh, nhưng kháng thể phát hiện chính được biến đổi theo các dạng khác nhau (Hình 1). Hình 1. Sơ đồ biểu diễn ba định dạng ELISA mô tả các phân tích những vùng phức hợp trên bề mặt của một giếng được xét nghiệm. ELISA-1: sandwich ELISA gián tiếp sử dụng kháng thể phát hiện chính không có nhãn và phức hợp kháng thể thứ cấp- HRP; ELISA-2: sandwich ELISA gián tiếp sử dụng kháng thể phát hiện chính có gắn Nhóm 11 Trang 6 CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM streptavidin (SA) và biotin (B)-HRP; ELISA-3: sandwich ELISA gián tiếp sử dụng kháng thể phát hiện chính có gắn biotin và SA-HRP. ELISA-1. Sử dụng một kháng thể phát hiện chính không có nhãn và phức hợp HRP-kháng thể thứ cấp. ELISA-2. Sử dụng biotin kết hợp kháng thể phát hiện chính và HRP-streptavidin để khuếch đại tín hiệu. ELISA-3. Sử dụng streptavidin kết hợp kháng thể phát hiện chính và HRP-biotin để khuếch đại tín hiệu. Sử dụng cùng cặp kháng thể bắt và phát hiện trong tất cả các định dạng ELISA để đảm bảo rằng sự khác biệt hiệu suất quan sát thấy là hoàn toàn do khả năng phát hiện, không phụ thuộc tính chất của các kháng thể. Tất cả ba định dạng ELISA được tối ưu hóa kỹ lưỡng trước khi được sử dụng trong nghiên cứu này. 2. Phương pháp thực hiện 2.1. Ricin và kháng thể Ricin và kháng thể đa dòng kháng ricin (PAB) ở dê được mua từ Vector Laboratories (Burlingame, CA). Kháng thể đơn dòng ở chuột, mAb1642 (chống lại chuỗi ricin A), đã được cung cấp bởi David Brandon (USDA-ARS-WRRC) (Brandon et al., 2009). Phức hợp Streptavidin-kháng thể (SA-PAB) đã được chuẩn bị. Trong một thời gian ngắn, 100µl kháng thể (1µg/µl) được gắn nhãn và trộn với 10µl LL-Modifier thuốc thử (1µg/µl) và sau đó cho vào một lọ chứa 100µg của lyophilized L- streptavidin. Sau khi ủ hỗn hợp trong 3 giờ ở nhiệt độ phòng, 10µl LL-thuốc thử đã được thêm vào. (SA-PAB) có thể được sử dụng sau khi 30 phút hoặc được bảo quản ở 4 0 C. (Biotin-PAB) được thực hiện bằng cách sử dụng LC-NHS-(+)-Biotin (Pierce, Rockford, IL) theo hướng dẫn của nhà sản xuất.Phức hợp Biotin-HRP và streptavidin được mua từ Invitrogen (Carlsba, CA). Nhóm 11 Trang 7 CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM 2.2. Chuẩn bị mẫu Sữa không béo và sữa nguyên kem được mua từ các cửa hàng tạp hóa địa phương và bảo quản ở 4 0 C đến khi sử dụng. Huyết thanh chuột được thu thập từ 1 con chuột (chuột cái 4.5 tuần tuổi, nặng 19-20g) được lấy từ Charles River Laboratories (Hollister, California). Huyết thanh được pha loãng 1:9 trong dung dịch đệm PBS có pH = 7.3 trước khi cố định với ricin. Các mẫu sữa được spiked (đinh mấu) với chất ricin và xét nghiệm trực tiếp không cần pha loãng. 2.3. ELISA trực tiếp và sandwich ELISA Đối với ELISA trực tiếp, một tấm vi chuẩn NUNC MaxiSorp (Cat No. 12-565- 136 Fisher Scientific) được tráng bằng một tập hợp các độ pha loãng theo thứ tự ricin tinh khiết trong PBS, 100µl/giếng để qua đêm ở 4 0 C. Các giếng được đổ đầy với 300µl BSA 3% trong PBS ở nhiệt độ phòng trong 1 giờ. Sau khi được đổ đầy, các tấm nhựa được rửa sạch 6 lần bằng nước và 100µL/giếng kháng thể phát hiện chính được thêm vào (ELISA-1: thêm pAb; ELISA-2: thêm streptavidin–pAb và ủ ở nhiệt độ phòng trong 1 giờ. Các đĩa được rửa sạch như ở trên sau đó được ủ 1 giờ với phức hợp HRP thích hợp (ELISA-1: thêm donkey-anti-goat IgG-HRP ; ELISA-2: thêm biotin-HRP). Sau được rửa sạch, 100µl cơ chất K-Blue (NeogenCorp.,Lexington, KY) được thêm vào mỗi giếng và ủ ở nhiệt độ phòng trong 5 phút. Phản ứng dừng lại ở 100µl HCL 0.3N và đo ở bước sóng hấp thụ 450nm. Phương thức sandwich ELISA cũng thực hiện tương tự như trên, ngoại trừ các vi đĩa được tráng và để qua đêm với mAb1642 (một loại kháng thể đơn dòng) ở nồng độ 4µg/ml trong dung dịch đệm PBS. Tiếp theo sau giai đoạn đổ đầy và rửa là giai đoạn pha loãng theo thứ tự ricin tinh khiết đã được thêm vào trong dung dịch đệm PBS và ủ Nhóm 11 Trang 8 CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM ở nhiệt độ phòng trong 1 giờ. Sau khi phát hiện ra các kháng thể khác nhau, HRP (enzyme peroxidase trong cây cải ngựa) liên hợp đã được sử dụng để gắn vào các kháng thể này (ELISA-1: non-tagged goat pAb/ donkey-anti-goat IgG–HRP; ELISA-2: SA-pAb/biotin–HRP; ELISA-3: biotin–pAb/SA–HRP). Để xác định thiết lập cho phép độ nhạy lớn nhất, cơ chất sử dụng ít nhất, và sai số tối thiểu, một số sự kết hợp của kháng thể được so sánh như các thiết bị bắt giữ và thiết bị dò tìm. Một số pha loãng của HRP liên hợp kháng thể phát hiện và Bio-HRP và SA-HRP cũng đã được xét nghiệm để xác định nồng độ tối ưu. Dựa trên kết quả tối ưu hóa thu được từ chất ricin trong dung dịch đệm PBS, chúng tôi tiếp tục thực hiện các xét nghiệm với chất ricin tăng vọt trong sữa và huyết thanh. Giới hạn phát hiện (LOD) được định nghĩa là nồng độ thấp nhất được sử dụng cho các đường cong tiêu chuẩn mà tại đó độ hấp thu trung bình đọc tại bước sóng 450nm là cao hơn so với đối chứng âm cộng với ba lần độ lệch chuẩn. LOD là ma trận, phương pháp, và phân tích cụ thể. Các hệ số biến thiên (CV) được định nghĩa là giá trị thu được bằng cách lấy độ lệch chuẩn chia cho giá trị trung bình của một tập hợp các phép đo. The intra-assay CV là thước đo độ chính xác của một xét nghiệm và báo cáo trong nghiên cứu này là một giá trị trung bình tính từ các CV riêng tại mỗi nồng độ chất ricin được biết đến. CV% cho mỗi nồng độ chất ricin được tính toán bằng cách lấy độ lệch chuẩn chia cho giá trị trung bình của 3 lần xét nghiệm và nhân với 100. Điều quan trọng cần lưu ý là độ chính xác của mỗi xét nghiệm có thể khác nhau trên phạm vi tập trung khảo nghiệm. The inter-assay CV là một biểu hiện tính kiên định ngày này qua ngày khác. Trong thí nghiệm này, bộ mẫu tương tự được chạy ba lần mỗi ngày và lặp đi lặp lại trên ba ngày khác nhau để theo dõi sự thay đổi theo từng ngày. Giá trị trung bình cho mỗi nồng độ xét nghiệm được tính toán và sau đó được sử dụng để tính toán giá trị trung bình chung, độ lệch chuẩn, và CV% của3 ngày. Giá trị CV% = độ lệch chuẩn trung bình /trung bình chung x100. Mức trung bình của CV% từ tất cả các nồng độ xét nghiệm được báo cáo là the inter-assay CV. Nhóm 11 Trang 9 CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM 3. Kết quả 3.1. Ước lượng của ba định dạng ELISA trong việc phát hiện chất ricin Nhóm 11 Trang 10 [...]... của ba ELISA phát hiện chất ricin trong sữa và huyết thanh Để xác định độ nhạy của ba phương pháp ELISA cho việc phát hiện chất ricin trong sữa và huyết thanh, với các độ pha loãng nối tiếp chất ricin đã tăng vọt trong sữa không béo và sữa nguyên kem không pha loãng Đối với huyết thanh, pha loãng với tỉ lệ 1:9 trong dung dịch đêm PBS trước khi ricin tăng vọt nhằm mục đích giữa nguyên chúng trong huyết. .. pg/ml trong sữa không béo và huyết thanh, và 100 pg/ml trong sữa nguyên kem Những kết quả này cho thấy ELISA- 3 có độ nhạy nhất trong số ba ELISA được đánh giá mặc dù độ nhạy đã bị ảnh hưởng một chút khi có sự hiện diện của sữa và huyết thanh 4 Bàn luận và đưa ra kết luận Một trong những điều quan trọng nhất khi đánh giá chất lượng của xét nghiệm là độ nhạy Đây là một thước đo có khả năng phát hiện hàm... toán giá trị trung bình chung, độ lệch chuẩn, và CV% của 3 ngày Nhìn chung CV% = độ lệch chuẩn trung bình chia cho trung bình chung và nhân 100 Bảng 4: Giới hạn phát hiện (ng/ml) chất ricin trong sữa và huyết thanh bằng ba định dạng ELISA Giới hạn phát hiện (LOD) đã được đánh giá trong một ngày thí nghiệm với các ma trận khác nhau, và nó thể hiện nồng độ chất ricin (ng/ml) hoặc là tỷ lệ LOD của ELISA- 1... huyết thanh chuột Bảng 4 cho thấy LOD của chất ricin trong sữa và huyết thanh giống như trong dung dịch đệm PBS (1 ng/ml) khi sử dụng ELISA- 1 và không có ảnh hưởng đến kết quả đã được quan sát LOD đo bằng ELISA- 2 là 0,1 ng/ml trong dung dịch đệm PBS và sữa (sữa không béo và sữa nguyên kem), nhưng độ nhạy đã giảm 10 lần khi có sự hiện diện của huyết thanh LOD của chất ricin đo bằng ELISA- 3 là 25 pg/ml trong. .. thể trong các giếng bởi các protein không liên quan nên được giảm đáng kể 3.2 So sánh sự biến đổi intra- and inter- assay của ba định dạng ELISA Để so sánh độ chính xác và tính lặp lại của ba định dạng ELISA, người ta đã pha loãng 10 lần liên tiếp trong một bộ bao gồm bốn nồng độ của chất ricin (0, 100, 1000, và 10.000 pg/mL) trong dung dịch đệm PBS Bảng 3 Hệ số biến thiên CV% của chất ricin trong ba. .. các định dạng ELISA gián tiếp và đánh giá việc sử dụng chúng để phát hiện chất ricin trong các ma trận chất lỏng khác nhau Để phản ánh sự khác biệt thực sự trong công nghệ phát hiện, người ta sử dụng cùng cặp kháng thể bắt và phát hiện, điều kiện đổ đầy, ủ, và rửa cho ba xét nghiệm ELISA- 1 sử dụng kháng thể phát hiện chính không có nhãn, vì vậy khả năng miễn dịch của kháng thể được giữ lại Trong khi các... lại Trong nghiên cứu này, người ta đã so sánh ba phương pháp sandwich ELISA gián tiếp để phát hiện chất ricin So sánh chặt chẽ và tất cả các xét nghiệm đã được tối ưu hóa hoàn toàn, sử dụng cùng cặp kháng thể và điều kiện xét nghiệm như nhau ELISA- 3 sử dụng biotin kết hợp kháng thể phát hiện chính và hệ thống SA-HRP cho thấy đây là phương pháp nhạy cảm nhất và có thể tái sử dụng để phát hiện chất ricin. .. 450nm cho ba lần đo lặp lại của chất ricin trong dung dịch đệm PBS với độ lệch chuẩn Quy mô bán logarit đã được sử dụng để hiển thị dốc của đường thẳng Nhóm 11 Trang 11 CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM Bảng 1 Phát hiện ricin trong PBS bằng ba định dạng sandwich ELISA gián tiếp LOD cho ELISA- 1 là 1000pg/ml, LOD cho ELISA- 2 là 100pg/ml, LOD cho ELISA- 3 là25pg/ml ND, không xác định Bảng 2 Phát hiện ricin trong. .. nghiệm đã khẳng định thành công cùng một kết quả để phát hiện độc tố Shiga bằng cách sử dụng ba định dạng ELISA này Nghiên cứu này sẽ cung cấp cho những hiểu biết và hướng đến việc phát hiện các chất độc khác như độc tố botulinum, độc tố cholera và nội độc tố B staphyloccus Các dữ liệu thu được ở đây xác nhận cho việc sử dụng sandwich ELISA trong việc phát hiện chất ricin trong huyết thanh chuột, nó... phát hiện của ELISA- 3 giảm 2 lần trong sữa không béo và huyết thanh, giảm 4 lần trong sữa nguyên so với trong dung dịch đệm PBS Điều này có lẽ là do sự hiện diện của nhiều protein và chất béo trong các ma trận ảnh hưởng đến tính đặc hiệu kháng nguyên-kháng thể, đặc biệt là khi mức độ kháng nguyên rất thấp Tóm lại, độ nhạy của ELISA- 3 trong các ma trận khác nhau được thử nghiệm vẫn tốt hơn so với hai ELISA . thông tin quan trọng. Nhóm 11 Trang 2 CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM Để hiểu rõ hơn về vấn đề này, bài báo mà nhóm đã dịch nói về việc so sánh và đánh giá xét nghiệm ELISA phát hiện Ricin trong sữa. CRIS5325-42.000-027-00D. Bộ Nông nghiệp Mỹ là một nhà cung cấp cơ hội bình đẳng và sử dụng lao động. Bài dịch “Evaluation and comparison of three enzyme-linked immunosorbent assay formats for the