Ảnh hưởng sự giảm biểu hiện protein dkk3 trên con đường tín hiệu EGFR ở dòng tế bào tPH5CH, huh6 clone 5 và RD

LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Hồ Huỳnh Thùy Dương GS.BS Masayuki Noguchi cho hội tham gia thực đề tài Tôi xin chân thành cám ơn TS Junko Kano tận tình hướng dẫn giúp đỡ suốt thời gian thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy, cô truyền thụ cho kiến thức quý báu Cảm ơn anh chị, em phịng thí nghiệm sinh học phân tử (ĐH khoa học tự nhiên TpHCM) thành viên phịng thí nghiệm bệnh học chẩn đoán (ĐH Tsukuba) giúp đỡ, động viên tơi lúc khó khăn Nguyễn Thái Hồng Tâm       MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cảm ơn Mục lục i Danh mục ký hiệu chữ viết tắt iii Danh mục bảng v Danh mục hình vi LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG – TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Họ protein Dickkopf protein Dickkopf 1.1.1 Dkks .3 1.1.2 Protein Dkk3 1.2 Con đường tín hiệu Wnt 1.3 Con đường tín hiệu tế bào thơng qua thụ quan EGF 1.4 EGFR ung thư liệu pháp đích điều trị 12 CHƯƠNG – VẬT LIỆU, PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật liệu 15 2.1.1 Dòng tế bào 15 2.1.2 Hóa chất 16 2.2 Phương pháp 16 i       2.2.1 Nuôi cấy tế bào 16 2.2.2 Biến nạp siRNA vào tế bào nuôi cấy 17 2.2.3 Realtime RT-PCR sử dụng SYBRGreen 17 2.2.4 Western blot 18 2.2.5 RayBio®Phospho-EGFR (Tyr 1086) and Pan EGFR ELISA 21 2.2.6 Phân tích hình ảnh phần mềm Imagine J 21 2.2.7 Phân tích xử lý số liệu 22 CHƯƠNG – KẾT QUẢ, THẢO LUẬN 3.1 Kết khảo sát hình thái tế bào 23 3.2 Kết khảo sát hoạt động tín hiệu đường EGFR 25 3.2.1 Tế bào tPH5CH 27 3.2.2 Tế bào HuH6 clone 28 3.2.3 Tế bào RD 29 3.3 Kết khảo sát hoạt động EGFR 31 3.4 Thảo luận 35 CHƯƠNG – KẾT LUẬN 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ii       DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CÁC TỪ VIẾT TẮT Akt (PKB) : protein kinase B APC : tumor-suppressor protein CKIα : casein kinase Iα Dkk : họ protein Dickkopf EGFR : Epidermal Growth Factor Receptor Erk 1/2 : Extracellular-signal regulated kinase ½ Fz : thụ quan bề mặt Frizzled GSK-3 : Glycogen synthase kinase-3 HuH6 clone : dòng tế bào ung thư gan Hepatoblastoma JNK : c-Jun kinase LEF : lymphocyte enhancer factor (nhân tố phiên mã) LRP : lipoprotein receptor-related protein MAPK : Mitogen-activated protein kinase NF-AT : Nuclear factor of activated T-cells (nhân tố phiên mã) PBS : Phosphate buffer saline PKC : protein kinase C PLC : phospholipase C RD : dòng tế bào ung thư xương (rhabdomyosarcoma) SDS-PAGE : Sodium dodecyl electrophoresis sFRP : secreted Frizzled-related protein) Stat3 : Signal Tranducers and Activators of Transcription iii   sulfate polyacrylamide gel     TCF : T-cell factor (nhân tố phiên mã) tPH5CH : dịng tế bào biểu mơ gan chuyển thành công đoạn gen SV40 large T antigen Wif1 : Wnt inhibitor factor β-actin : sáu đồng phân cấu trúc protein actin βTrCP : β-transducing repeat-containing protein iv       DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 – Sự biểu bất thường Dkks số tế bào ung thư Bảng 1.2 – Một số tác nhân đối kháng với hoạt động cuả EGF 14 Bảng 2.1 – Danh sách kháng thể sử dụng Western Blot 20 Bảng 3.1 – Kết tín hiệu đo p-EGFR EGFR tổng kỹ thuật ELISA 33 v       DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 – Sơ đồ tác động Dkk3 lên hai đường truyền tín hiệu tế bào Hình 1.2 – Mơ hình cấu trúc phân tử protein thuộc họ Dickkopf Hình 1.3 – Cơ chế tác động ức chế tín hiệu Wnt số Dkks Hình 1.4 – Con đường tín hiệu Wnt Hình 1.5 – Sơ đồ vị trí hoạt động phosphoryl hóa EGFR q trình truyền tín hiệu tế bào Hình 1.6 – Sơ đồ hóa số đường hoạt động thơng qua hoạt hóa EGFR 10 Hình 2.1 – Một số dòng tế bào sử dụng 15 Hình 3.1 – Hình thái tế bào khảo sát 24 Hình 3.2 – Tác động việc ức chế protein Dkk3 lên đường tín hiệu thơng qua thụ quan EGF tế bào tPH5CH 27 Hình 3.3 – Tác động việc ức chế protein Dkk3 lên đường tín hiệu thông qua thụ quan EGF tế bào HuH6 clone 28 Hình 3.4 – Tác động việc ức chế protein Dkk3 lên đường tín hiệu thơng qua thụ quan EGF tế bào RD 30 Hình 3.5 – Độ hoạt động tín hiệu Erk1 Erk2 quần thể tế bào RD 31 Hình 3.6 – Hoạt động phosphoryl hóa vị trí Tyr1086 thụ quan EGF quần thể tế bào 32 Hình 3.7 – Biểu mRNA EGFR quần thể tế bào ức chế biểu Dkk3 34 Hình 3.8 – Mối liên hệ đường tín hiệu Wnt EGFR 35 vi     CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU   Chương – Tổng quan tài liệu   Dkk3 thuộc nhóm protein Dickkopf (Dkks) - có vai trị điều hịa hoạt động tín hiệu protein Wnt Tuy nhiên, vai trò điều hịa tín hiệu Dkk3 lại chưa ghi nhận rõ ràng Ảnh hưởng Dkk3 lên đường tín hiệu EGFR chưa đề cập đến (Hình 1.1) Wnt EGFR ?  Dkk3 β-catenin ? Erks Akt Stat3 Hình 1.1 – Sơ đồ tác động Dkk3 lên hai đường truyền tín hiệu tế bào 1.1 Họ protein Dickkopf protein Dickkopf 1.1.1 Dkks [21] Dkks năm họ protein có vai trị đối kháng hoạt động điều hịa đường tín hiệu truyền tín hiệu Wnt biết Ở động vật có xương sống, họ protein Dkks nhóm gồm có bốn thành viên: Dkk-1, -2, -3 -4 Chúng glycoprotein tiết ngoại bào, có trình tự khoảng 255-350 amino acid (aa) Cấu trúc phân tử Dkks (Hình 1.2) chứa vùng tín hiệu (vùng màu đỏ) hai vùng bảo tồn, giàu cysteine, vùng có đặc điểm riêng khoảng cách Cysteine bảo tồn aa khác – vùng DKK-N “colipase fold” Vùng “colipase fold” vùng bảo tồn lồi động vật có xương sống khơng xương sống, đồng thời vùng có hoạt tính ức chế tín hiệu Wnt “Colipase fold” cấu hình đặc trưng nhóm protein kích thước nhỏ; protein có chức chuyên biệt tương tác protein-protein, protein độc tố nhện, bò cạp protein ức chế protease Cấu trúc vùng “colipase fold” tồn chuỗi β ngắn liên kết cấu trúc “loop” ổn định   Chương – Tổng quan tài liệu   cầu nối disulfide tạo thành cấu trúc “giống-ngón tay” (finger-like structure) đóng vai trị việc tương tác với bề mặt Vai trò hoạt động vùng DKK-N chưa biết đến Khoảng cách hai vùng colipase fold DKK-N Dkk-1 -2, -4 khoảng 50-55aa; riêng Dkk-3, khoảng cách vùng ngắn hơn, khoảng 12aa   Hình 1.2 – Mơ hình cấu trúc phân tử protein thuộc họ Dickkopf Hầu hết thành viên Dkks có khả kìm hãm hoạt động truyền tín hiệu Wnt đặc biệt theo đường tín hiệu Wnt/β-catenin, ngoại trừ Dkk2 Dkk2 cịn có khả thay Wnt truyền tín hiệu cho tế bào khơng thực trình phân hủy β-catenin, chức tùy thuộc vào trạng thái tế bào (Hình 1.3.d) Wnt kích hoạt đường truyền tín hiệu nội bào có gắn lên thụ quan Frizzed (Fz) Hoạt động gắn kết dẫn đến việc lôi kéo protein bề mặt tế bào cạnh LRP6 (Lipoprotein receptor-like protein) lại gần Fz kích hoạt đường truyền tín hiệu Wnt (Hình 1.3.a) Dkk1 thành viên Dkks có khả liên kết phân tử với LRP6 dẫn đến việc khóa hoạt động truyền tín hiệu Wnt cách tạo khoảng cách không gian Fz LRP6 (Hình 1.3.b) hay làm nhập bào LRP6 cách tạo liên kết đồng thời LRP6 với thụ quan Krm (Kremen) (Hình 1.3.c)   Chương – Kết quả, thảo luận cứu khác cho thấy trình hình thành cụm xảy liên quan đến việc động EGFR tín hiệu Ras/Erks [2][5][15][19]  Akt tạo thành đường quan trọng tham gia điều hịa tín hiệu nhiếu trình sinh học thiết yếu Akt lôi kéo đến màng tế bào dựa vào PIP3, sản phẩm chuyển hóa PI3K PI3K hoạt hóa thơng qua việc gắn kết trực tiếp protein Ras Những đường MAPK, RalGEF PI3K có tham gia Ras coi cần thiết để khởi trình phát triển khối u Ngược lại, hoạt động đường PI3K/Akt thay cho Ras khối u tạo thành Do đó, tác nhân khác hoạt hóa độc lập với Ras tác nhân từ mơi trường quanh khối u kích hoạt đường PI3K/Akt Những tác nhân khác có phosphoryl hóa phụ thuộc vào Akt GSK3, TSC2 PRAS40 Chúng tham gia điều hịa tăng sinh tế bào thơng qua điều hịa q trình sinh tổng hợp ổn định protein Kết ghi nhận từ quần thể tế bào HuH6 clone (hepatoblastoma), hoạt động Akt bị giảm rõ ràng mạnh sau 48 Dkk3 không biểu Hartmann cộng (2009) có kết chứng minh hoạt động việc truyền tín hiệu PI3K/AKT thiết yếu cho sống hepatoblastoma, đặc biệt dòng tế bào HuH6 clone Ở hepatoblastomas, hoạt động truyền tín hiệu qua PI3K/AKT phụ thuộc vào việc hepatoblastoma bị vùng NST-11p15.5, làm tăng mạnh IGF2 cấp độ mRNA protein IGF2 nhân tố tăng trưởng thiết yếu bào thai, gắn lên thụ quan IGFIR từ kích hoạt tín hiệu đường PI3K/Akt MAPK Hoạt động liên tục PI3K/AKT hepatoblastoma mô tả kết việc tăng biểu IGFII, có số quần thể hepatoblastom hoạt động mạnh đường PI3K/Akt đột biến hoạt động gene PIK3CA Những kết in vitro ức chế PI3K gây tăng apoptosis ức chế tăng sinh tế bào, coi mục tiêu tiềm liệu pháp trị liệu hepatoblastoma [8] Và việc ức chế Dkk3 có khả tác động lên việc truyền tín hiệu thơng qua việc 38 Chương – Kết quả, thảo luận giảm hoạt động Akt quần thể tế bào HuH6 clone thông qua Ras  Stat3 biết đến nhân tố phiên mã có nhiều vai trị khác hoạt hóa số hormone tyrosine kinase nội bào Stat3 thành viên thuộc họ STAT (Signal Tranducers and Activators of Transcription) gồm tác nhân truyền tín hiệu nhân tố hoạt hóa phiên mã cần thiết cho tăng trưởng, sức sống, biệt hóa tính linh động tế bào Stat3 có khả điều hịa tăng biểu gen mã hóa cho protein ức chế trình apoptosis Bcl-xL, Mcl-1 survivin; hay protein điều hịa chu trình tế bào cyclin D1 Myc; nhân tố tăng trưởng tế bào gan; tác nhân hình thành mạch VEGF … Bên cạnh đó, Stat3 cịn có khả kìm hãm phiên mã promoter p53…[25] Những Stat3 không phosphoryl hóa ghi nhận có ảnh hưởng đến biểu gene cách độc lập hay kết hợp với nhân tố phiên mã khác JUN Ở tế bào gan tPH5CH có hoạt động Stat3 bị tác động rõ sau 72 Dkk3 bị ức chế hoạt động Erk1/2 Akt không thay đổi so với quần thể chứng Quần thể tế bào tPH5CH xuất thân từ tế bào gan bình thường khả tái tạo chuyển ổn định vùng gen “large T antigen” SV40 Như vậy, bình thường vai trị Stat3 tế bào tPH5CH có lẽ kích thích biểu số tác nhân ức chế apoptosis Bcl-XL, c-myc, … Khi Stat3 giảm hoạt động đồng nghĩa với việc tác nhân cảm ứng apoptosis kích hoạt Ở tế bà RD, Stat3 giảm hoạt động với Erks (48 giờ) Ở tế bào HuH6 clone 5, Stat3 giảm hoạt động với Akt (48 giờ) Hoạt động Stat3 giảm sau 72 tế bào tPH5CH lúc giống phản ứng cảm ứng apoptosis cho tế bào không biểu Dkk3 kéo dài Do đó, việc giảm hoạt động ba protein Erk1/2, Akt Stat3 hoạt động phosphoryl hóa EGFR (Tyr1086) lại tăng lên giải thích theo hai hướng giả thiết sau: 39 Chương – Kết quả, thảo luận (1) Hoạt động EGFR vị trí Tyrosine 1086 có giảm có ức chế biểu Dkk3 Tuy nhiên, giảm hoạt động không mạnh giảm biểu EGFR tổng số tế bào (2) Việc giảm hoạt động tín hiệu protein Erk1/2, Akt Stat3 ba quần thể tế bào khảo sát chịu ảnh hưởng trực tiếp việc truyền tín hiệu từ thụ quan EGFR vị trí Tyrosine phosphoryl hóa khác Điều có nghĩa có tương tác Dkk3 với thụ quan EGFR gây phosphoryl hóa vị trí Tyr EGFR có khả kích hoạt Erk1/2, Akt thơng qua Ras; Stat3 Vị trí Tyr1068 (3) Dkk3 sau tiết ngoại bào có khả nhập bào thơng qua kênh màng…Dkk3 có khả chi phối hoạt động q trình tín hiệu sinh học tế bào cách tương tác với protein tín hiệu, chẳng hạn protein Ras Ras protein then chốt tham gia vào truyền tín hiệu từ thụ quan bề mặt kích hoạt Ras có cảm ứng tín hiệu cuối dịng thuộc đường truyền tín hiệu khác Những đột biến hoạt động (những đột biến gây hoạt động cho protein mà khơng cần có tác nhân hoạt hóa) Ras đột biến sinh ung thư thường gặp nhiều khối u người, cảm ứng p53 tác nhân ức chế kinase tham gia vao chu trình tế bào (Cdks) p15INK4b, p16INK4a, p19ARF p21WAF1 Ras ghi nhận vai trị kích hoạt hoạt động Erks Akt[3] Việc giảm biểu EGFR dẫn đến việc giảm hoạt động truyền tín hiệu truyền từ ngồi mơi trường vào tế bào thơng qua thụ quan EGF, dẫn đến bất hoạt số protein quan trọng trình sống tế bào Tuy nhiên, tế bào sống có chế bảo đường truyền tín hiệu phụ xảy biến cố đường truyền tín hiệu cho phép tế bào phục hồi chức năng, tế bào khơng có khả phục hồi biến cố sức sống tế bào bị ảnh hưởng mạnh biến cố quan trọng trường hợp thụ quan EGFR bao gồm Ras Trong đề tài này, tế bào không biểu Dkk3 dẫn đến giảm biểu EGFR; tác động đến đường sinh học quan trọng tế bào ung thư hepatoblastoma qua Akt; tế bào ung thư RD qua Erk1/2; tế bào gan bình thường tPH5CH, tác động 40 Chương – Kết quả, thảo luận việc ức chế biểu Dkk3 không ảnh hưởng mãnh liệt đến sức sống tế bào đường tín hiệu quan trọng MAPK hay Akt tế bào Những kết ghi nhận sơ khởi cho thấy khả áp dụng ức chế biểu Dkk3 điều trị Hepatoblastoma biểu Dkk3 có tiềm Dkk3 có hoạt động liên quan đến hoạt động truyền tín hiệu trung gian Ras 41   CHƯƠNG KẾT LUẬN   Chương – Kết luận Từ kết ghi nhận phân tích chương 3, ta đến kết luận tác động việc giảm biểu Dkk3 dòng tế bào biểu mạnh Dkk3 tPH5CH, HuH6 clone RD, sau: Dkk3 bị ức chế biểu dòng tế bào tiết Dkk3 ảnh hưởng đến hình thái tế bào sức sống tế bào Ảnh hưởng Dkk3 lên đường tìn hiệu cùa EGFR có tính chun biệt tế bào, khác tùy theo tế bào tPh5CH hay HuH6 clone hay RD Sự giảm biểu Dkk3 dẫn đến giảm biểu thụ quan EGF ba dòng tế bào tPH5CH, HuH6 clone RD 41     PHỤ LỤC     6.1 Hoạt động phosphoryl hóa Erk1/2, Akt Stat3 tPH5CH c24h si24h c48h si48h c72h si72h HuH6 c24h si24h c48h si48h c72h si72h RD c24h si24h c48h si48h c72h si72h   Lần 1.000 1.634 1.000 0.684 1.000 0.648 p-ERKs/ERKs Lần TB 1.000 1.000 0.696 1.165 1.000 1.000 1.080 0.882 1.000 1.000 2.305 1.476 Lần 1.000 0.947 1.000 0.762 1.000 0.691 p-ERKs/ERKs Lần TB 1.000 1.000 1.140 1.044 1.000 1.000 1.255 1.008 1.000 1.000 0.661 0.676 Lần 1.000 0.799 1.000 0.658 1.000 0.356 p-ERKs/ERKs Lần TB 1.000 1.000 0.924 0.861 1.000 1.000 0.741 0.700 1.000 1.000 0.647 0.502 ttest 0.758 0.612 0.623 ttest 0.695 0.976 0.002 ttest 0.157 0.018 0.075 Lần 1.000 1.442 1.000 1.003 1.000 1.385 p-AKT/AKT Lần TB 1.000 1.000 0.672 1.057 1.000 1.000 0.769 0.886 1.000 1.000 0.304 0.844 Lần 1.000 0.647 1.000 0.383 1.000 0.312 p-AKT/AKT Lần TB 1.000 1.000 1.625 1.136 1.000 1.000 0.418 0.400 1.000 1.000 0.124 0.218 Lần 1.000 1.797 1.000 0.849 1.000 0.845 p-AKT/AKT Lần TB 1.000 1.000 1.247 1.522 1.000 1.000 0.578 0.713 1.000 1.000 0.851 0.848 ttest 0.896 0.432 0.801 ttest 0.807 0.001 0.014 ttest 0.198 0.169 0.000 Lần 1.000 1.732 1.000 0.620 1.000 0.648 p-STAT3/STAT3 Lần TB 1.000 1.000 1.276 1.504 1.000 1.000 0.923 0.772 1.000 1.000 0.573 0.610 Lần 1.000 0.548 1.000 0.391 1.000 0.986 p-STAT3/STAT3 Lần TB 1.000 1.000 1.126 0.837 1.000 1.000 0.480 0.436 1.000 1.000 0.258 0.622 Lần 1.000 0.826 1.000 0.679 1.000 0.583 p-STAT3/STAT3 Lần TB 1.000 1.000 1.238 1.032 1.000 1.000 0.543 0.611 1.000 1.000 0.216 0.399 ttest 0.158 0.270 0.009 ttest 0.629 0.006 0.408 Ttest 0.891 0.029 0.082   6.2 Hoạt động phosphoryl hóa Erk1 Erk2 dòng tế bào RD perk1/erk1 c24h si24h c48h si48 c72h si72h lan 1.00 0.66 1.00 0.31 1.00 0.06 lan 1.00 0.55 1.00 0.23 1.00 0.03 TB 1.00 0.60 1.00 0.27 1.00 0.05 std 0.000 0.073 0.000 0.054 0.000 0.021 ttest perk2/erk2 c24h si24h c48h si48 c72h si72h lan 1.00 0.88 1.00 0.87 1.00 0.78 lan 1.00 0.95 1.00 0.64 1.00 1.48 TB 1.00 0.92 1.00 0.75 1.00 1.13 std 0.000 0.050 0.000 0.159 0.000 0.497 ttest 0.02 0.00 0.00 0.02 0.02 0.55 6.3 Hoạt động EGFR c24h si24h c48h si48h c72h si72h pEGFR/panEGFR tPH5CH RD lan lan lan lan 0.262 0.241 0.648 0.664 0.281 0.251 0.835 0.985 0.210 0.212 0.565 0.535 0.268 0.274 0.815 0.744 0.182 0.172 0.525 0.547 0.248 0.245 0.713 0.633 6.3 Biểu EGFR mRNA tPH5CH ctrl 24h si ctrl 48h si ctrl 72h si   lan lan lan 9.88 6.72 12.74 3.83 2.94 6.93 5.00 4.58 3.24 2.89 1.24 2.65 5.95 4.31 3.38 1.73 1.26 1.24 HuH6 lan lan 0.434 0.426 0.748 0.898 0.296 0.317 0.598 0.598 0.339 0.348 0.571 0.627   RD ctrl si ctrl si ctrl si lan 6.62 4.12 3.03 3.03 3.21 2.33 lan 10.61 3.26 2.27 1.47 4.79 1.03 HuH6 ctrl 24h si ctrl 48h si ctrl 72h si lan 5.40 8.58 2.89 1.95 9.75 4.33 lan 4.23 8.30 5.01 2.53 8.58 6.42 24h 48h 72h     lan 8.13 5.42 6.23 3.22 4.44 2.57   TÀI LIỆU THAM KHẢO   Tài liệu tham khảo [1] Aslan H, Ravid-Amir O, Clancy BM, Rezvankhah S, Pittman D, Pelled G, Turgeman G, Zilberman Y, Gazit Z, Hoffmann A, Gross G, Domany E, Gazit D (2006) Advanced molecular profiling in vivo detects novel function of dickkopf-3 in the regulation of bone formation Journal of bone and mineral research, 21(12): 1935-1945 [2] C Lloyd A (2006) Distinct functions for ERKs? (mini-review) Journal of biology, 5:13 [3] Crespo P and León J (2000) Ras proteins in the control of the cell cycle and cell differentiation (review) Cellular and molecular life sciences, 57: 1613-1636 [4] Fedders H, Augustin R, Bosch TC (2004) A Dickkopf- 3-related gene is expressed in differentiating nematocytes in the basal metazoan Hydra Development genes and evolution, 214(2):72-80 [5] Fefloch R., Pouysségur J., and Lenormand P (2008) Single and combined siliencing of ERK1 ans ERK2 reveals their positive contribution to Growth signaling depending on their expression levels Molecular and Cellular biology, 28 (1): 511-527 [6] Haley J.D., Gullick W.j (2008) EGFR signaling networks in cancer therapy Humana Press, p73-76, p235-242, p343-344 [7] Hartmann W., Kuchler J., Koch A., Friedrichs N., Waha A., Endl E., Czerwitzki J., Metzger D., Steiner S., Wurst P., Leuschner I., Schweinitz D.V., Buettner R., and Pietsch phosphatidylinositol-3’-kinase/AKT T (2009) signaling is Activation of essential in hepatoblastoma survival Clinical Cancer Research, 15: 4538-4545 [8] Hermann M, Pirkebner D, Draxl A, Berger P, Untergasser G, Margreiter R, Hengster P (2007) Dickkopf-3 is expressed in a subset of adult human pancreatic beta cells Histochemistry and cell biology, 127(5): 513-521 42   Tài liệu tham khảo    [9] Hoang BH, Kubo T, Healey JH, Yang R, Nathan SS, Kolb EA, Mazza B, Meyers PA, Gorlick R (2004) Dickkopf inhibits invasion and motility of Saos-2 Osteosarcoma cells by modulating the Wnt-β-catenin pathway Cancer research, 64:2734-2739 [10] Hsieh SY., Hsieh PS., Chiu CT., and Chen WY (2004) Dickkopf3/REIC functions as a suppressor gene of tumor growth Oncogene, 23: 9183-9189 [11] Hu T., Li C (2010) Convergence between Wnt-β-catenin and EGFR signaling in cancer (review) Molecular cancer, 9:236 [12] Jung IL., Kang HJ., Kim KC., Kim IG (2010) Knockdown of the Dickkopf gene induces apoptosis in a lung adenocarcinoma International journal of molecular medicine, 26(1): 33-38 [13] Kang ES., Oh MA., Lee SA., Kim TY., Kim SH., Gotoh N., Kim YN., Lee JW (2007) EGFR phosphorylation-dependent formation of cell-cell contacts by Ras/Erks cascade inhibition Biochimica et biophysica acta, 1773(6):833-843 [14] Kawano Y, Kitaoka M, Hamada Y, Walker MM, Waxman J, Kypta RM (2006) Regulation of prostate cell growth and morphogenesis by Dickkopf-3 Oncogene, 25(49): 6528-6537 [15] Knudsen E.S., Pazzagli C., Born T.L., Bertolaet B.L., Knudsen K.E., Arden K.C., Henry R.R., and Feramisco J.R (1998) Elevated cyclins and cyclin-dependent kinase acivity in the Rhabdomyosarcoma cell line RD Cancer research, 58:2042-2049 [16] Krens SF G., Corredor-adámez M., He S., Snaar-Jagalska B E., and Spaink HP (2008) Erk1 and Erk2 MAPK are key regulators of distinct gene sets in zebrafish embryogenesis BMC Genomics, 9: 196 43   Tài liệu tham khảo    [17] Nakamura RE., Hunter DD., Yi H., Brunken W.J., Hackam AS (2007) Identification of two novel activities of the Wnt signaling regulator Dickkopf and characterization of its expression in the mouse retina BMC Cell Biology, 8:52 [18] Niehrs C (2006) Function and biological roles of the Dickkopf family of Wnt modulators (review) Oncogene, 25: 7469-7481 [19] Noguchi M and Hirohashi S (1996) Model of human hepatocarcinogenesis In vitro cellular & development biology-animal, 32: 135-137 [20] Pei Y, Kano J, Iijima T, Morishita Y, Inadome Y, Noguchi M (2009) Overexpression of Dickkopf in hepatoblastoma and hepatocellular carcinomas Virchows Archiv, 454: 639-646 [21] Pietsch T., Schweinitz D.V (2008) Hepatoblastoma Springer, p1354-1356 [22] Raptis l., Arulanandam R., Vultur A., Geletu M., Chevalier S., and Feracci H (2009) Beyond structure, to survival: activation of Stat3 by cadherin engagement Biochemistry and cell biology, 87:835-843 [23] Schmidt C., McGonnell I., Allen S., and Patel K (2008) The role of Wnt signaling in the development of somites and neural crest Springer, p 1-6 [24] Sebastian S., Settleman J., Reshkin SJ., Azzariti A., Bellizzi A., Paradiso A (2006) The complexity of targeting EGFR signaling in cancer: from expression to turnover Biochimica et Biophysica Acta, 1766: 120139 [25] Suwa T, Chen M, Hawks CL, Hornsby PJ (2003).Zonal expression of Dickkopf-3 and components of the Wnt signaling pathways in the human adrenal cortex Journal of Endocrinology, 178: 149-158 44   Tài liệu tham khảo    [26] Tan X., Apte U., Micsenyi A., Kotsagrelos E., Luo JH., Ranganathan S., Monga DK., Bell A., Michalopoulos GK., and Monga SPS (2005) Epidermal growth factor receptor: a novel target of Wnt/β-catenin pathway in liver Gastroenterology, 129 (1): 285-302 [27] Vantaggiato C., Formentini I., Bondanza A., Bonini C., Naldini L., and Brambilla R (2006) Erk1 and Erk2 mitogen-activated protein kinase affect Ras-dependent cell signaling differentially Journal of biology, 5:14 [28] Yue W., Sun Q., Dacic S., Landreneau R.J., Siegfried J.M., Yu J., and Zhang L (2008) Downregulation of Dkk3 activates β-catenin/TCF-4 signaling in lung cancer Carcinogenesis, 29: 84-92 [29] Zitt M., Untergasser G., Amberger A., Moser P., Stadlmann S., Muller HM., Muhlmann G., Perathoner A., Margreiter R., Gunsillius E., Ofner D (2008) Dickkopf-3 as a new potential marker for neoangiogenesis in colorectal cancer: expression in cancer tissue and adjacent non-cancerous tissue Disease markers, 24(2):101-109 [30] Flynn JF., Wong C., and Wu JM (2009) Anti-EGFR therapy: mechanism and advances in clinical efficacy in breast cancer Journal of Oncology, [31] http://clincancerres.aacrjournals.org/content/12/12/3698/F3.expansion [32] http://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=10723 &pid=10628 45   ... việc giảm biểu Dkk3 dòng tế bào biểu mạnh Dkk3 tPH5CH, HuH6 clone RD, sau: Dkk3 bị ức chế biểu dòng tế bào tiết Dkk3 ảnh hưởng đến hình thái tế bào sức sống tế bào Ảnh hưởng Dkk3 lên đường tìn hiệu. .. tìn hiệu cùa EGFR có tính chun biệt tế bào, khác tùy theo tế bào tPh5CH hay HuH6 clone hay RD Sự giảm biểu Dkk3 dẫn đến giảm biểu thụ quan EGF ba dòng tế bào tPH5CH, HuH6 clone RD 41   ... Tế bào RD - Cũng hiệu nhiễm siRNA hai dòng tế bào tPH5CH HuH6 clone 5, hiệu ức chế biểu protein Dkk3 tế bào RD đạt hiệu 100% sau 24, 48 72 nhiễm siRNA (Hình 3.4.A) - Sau 24 giờ, quần thể tế bào