bước đầu tìm hiểu kỹ thuật nuôi và nguyên nhân gây chết mực nang trong quá trình sản xuất giống nhân tạo loài sepia pharaonis

LỜI MỞ ĐẦU Với triệu km2 vùng biển đặc quyền kinh tế, 1.7 triệu mặt nước có khả phát triển nuôi trồng thuỷ sản Việt nam có tiềm lớn khai thác nuôi trồng thuỷ sản khu vực Đông Nam Á Trong năm gần đây, thuỷ sản coi ngành kinh tế có mũi nhọn có vai trò quan trọng trình phát triển kinh tế-xã hội đất nước, góp phần vào nghiệp xoá đói giảm nghèo bước nâng cao mức sống cho cộng đồng ngư dân Động vật thân mềm(ĐVTM) có số lượng lớn, đứng thứ hai sau động vật giáp xác ĐVTM có giá trị dinh dưỡng tương đối cao, chứa nhiều đạm, hàm lượng mỡ thấp, nhiều loại axiamin cần thiết cho người Những năm gần đây, nghề nuôi trồng Động vật thân mềm phát triển với tốc độ cao, giống loài nuôi trồng tăng lên, diện tích nuôi trồng không ngừng mở rộng, sản lượng nuôi trồng tăng lên lớn ĐVTM trở thành đối tượng kinh tế quan trọng, góp phần phát triển kinh tế nhiều quốc gia có biển khu vực châu giới ĐVTM có lớp quan trọng: Lớp chân bụng (Gastropoda), lớp hai mảnh vỏ (Bivalvia) lớp chân đầu (Cephalopoda) Lớp động vật chân đầu (Cephalopoda) theo FAO có khoảng 1000 loài thuộc 43 họ, bao gồm loài mực ống, mực nang, bạch tuộc, tất sống biển Theo thống kê FAO, sản lượng mực đánh bắt hàng năm đứng hàng thứ ba sau cá tôm biển Thịt mực thơm ngon chứa nhiều chất dinh dưỡng Mực khô mặt hàng hải sản xuất khầu có giá trị, thịt mực chứa hàm lượng cao loại vitamin B12, B2, PP Trong công nghiệp, túi mực làm nguyên liệu ấn loát, nang mực chế biến than hoạt tính Trong y học, dùng bột nang để chế biến thuốc cầm máu thuốc chữa đau dày Mục tiêu chung chương trình phát triển giống thuỷ sản phải đảm bảo đủ giống cho nhu cầu phát triển nuôi, phải đa dạng giống, có nhiều loài thuỷ sản cho nhu cầu tiêu dùng xuất Trước yêu cầu Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thuỷ sản III tiến hành nghiên cứu sản suất giống mực nang (Sepia pharaonis) đạt số thành định Tuy nhiên trình sản xuất thử nghiệm có tượng mực chết rải rác mà chưa rõ nguyên nhân Vì thời gian thực tập tốt nghiệp phân công khoa Nuôi Trồng Thuỷ Sản Trường Đại học Thuỷ -1- Sản phân công thực đề tài “Bước đầu tìm hiểu kỹ thuật nuôi nguyên nhân gây chết mực nang trình sản xuất giống nhân tạo loài Sepia pharaonis” Đề tài thực từ ngày 08/08/2005 đến ngày 30/11/2005 Với nội dung sau: Tìm hiểu kỹ thuật sản xuất giống Theo dõi biến động số tiêu môi trường: T0; ppt; pH Nghiên cứu biến đổi tổ chức mô học mực nhiễm bệnh Tìm hiểu thành phần ký sinh trùng Nghiên cứu nấm mực giống Phân lập định danh vi khuẩn từ cá thể nhiễm bệnh Do đối tượng mới, chưa nghiên cứu nhiều Do trình độ thời gian hạn chế, báo cáo không tránh khỏi sai sót Kính mong đóng góp ý kiến quý thầy cô, bạn để báo cáo hoàn thiện Tôi xin chân thành cảm ơn! Nha Trang, tháng 11 năm 2005 Sinh viên thực Phan Thị Luyến -2- Phần II: Tổng Luận 2.1 Vài nét đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Hệ thống phân loại Ngành : Mollusca Lớp: Cephalopoda Cuvier, 1798 Lớp phụ: Coleoidea Bather, 1888 Bộ: Sepiida Naef, 1916 Họ: Sepidae Keferstein, 1866 Giống: Sepia Linnaeus, 1758 Loài: Sepia pharaonis (Enhrenberg, 1831) - Tên đồng danh: Sepia rouxi Oxigny, 1841; Sepia formosana, Berry, 1912; Sepia formosano Sasaki, 1929; Sepia tigris Sasaki, 1929 Tên tiếng Anh: Pharaoh cuttlefish Tên tiếng Việt: Mực nang Vân Hổ 2.1.2 Đặc điểm hình thái mực nang: Mực nang Sepia pharaonis thông thường dài 20-30cm, xúc tay dài ngắn chênh lệch không lớn, đôi xúc tay bụng dài đôi xúc tay lưng ngắn Trên xúc tay giác bám lớn nhỏ gần Mỗi xúc tay có hàng giác bám, vòng sừng giác bám góc xúc tay trơn tru, vòng sừng giác bám đỉnh xúc tay có nhiều sừng đỉnh nhọn Ở cá thể đực xúc tay thứ tư bên trái xúc tay sinh dục, xúc tay sinh dục có 12-15 hàng giác bám Chiều dài xúc tay bắt mồi gấp đôi chiều dài thân Giác bám xúc tay bắt mồi chênh lệch không lớn, phần có 3-5 giác bám đặc biệt lớn Vòng sừng giác bám lớn trơn tru không răng, vòng sừng giác bám nhỏ có đầu nhọn Phần sau vỏ biến thành gai thô Theo Nguyễn Chính (1996), mặt lưng mực nang có nhiều vân hình gợn sóng giống da hổ vằn nên gọi mực nang Vân Hổ Khi nhỏ, thể chúng có -3- màu nâu nhạt, màu trắng vàng hay nâu sẫm khó phân biệt đực Khi trưởng thành, đực có sai khác phân biệt sau: Con đực: Cơ thể dài cái, màu sắc sặc sỡ đầu, súc tay mặt lưng với vân màu xanh trắng sáng sặc sỡ xếp theo chiều ngang thể tạo nên nhiều vân hình gợn sóng giống da hổ Dọc theo hai bên mép vây có đường sáng không liền tạo nên đoạn có màu nâu sáng nối tiếp nhau, màu sắc có thay đổi thành màu xanh nước biển hay màu sáng nhạt Con cái: Phần thân tương đối rộng, không thuôn dài đực Phần lưng có màu nâu nhạt với nhiều chấm nốt màu trắng với đốm ngang dạng yên ngựa màu nâu tái gồm vằn, chấm, đốt đốm dạng vân hổ nhỏ Dọc hai bên mép vây có đường sáng màu xanh không liên tục có nhiều vằn ngang màu sáng Nói chung màu sắc thể mực nang dễ bị thay đổi sang màu khác: màu trắng vàng đục, màu nâu đậm Để chúng thích nghi với điều kiện sống trốn tránh kẻ thù, biến đổi thành gai nhọn, sù xì chúng cặp đôi giao vó, bắt mồi trốn tránh kẻ thù, uốn lượn thành sóng đẩy nước phía sau để đưa thể phía trước Ngoài vây có vai trò bánh lái để chuyển hướng đi, giữ thăng giảm tốc độ 2.1.3 Đặc điểm sinh trưởng Theo kết nghiên cứu Lê Thi Thu Thảo (2005), giai đoạn nhỏ (chiều dài màng áo nhỏ hơn70 mm) tỷ lệ tăng trưởng chiều dài nhanh trọng lượng Chiều dài màng áo lớn 100 mm tỷ lệ tăng trưởng chiều dài chậm trọng lượng Kết phân tích tương quan chiều dài màng áo trọng lượng toàn thân cho thấy nhóm mực có chiều dài màng áo > 100 mm có trọng lượng nặng đực, giai đoạn tích trữ lượng cho trình sinh sản 2.1.4 Môi trường phân bố Mực nang thường sống cách bờ từ 50-500 km, chúng sống đáy cát sỏi, cát pha lẫn mùn bã hữu hay nơi có tầng đá ngầm, đá san hô, độ sâu trung bình 15-17 m phân bố nhiều độ sâu từ 20 -40 m -4- - Môi trường phân bố: Độ mặn từ 32 - 36ppt pH từ 8.0 - 8.5 Hàm lượng oxy hoà tan từ –7 mg/lit 2.1.5 Đặc điểm dinh dưỡng Đặc điểm dinh dưỡng mực nang vân hổ giống số động vật, thay đổi theo giai đoạn phát triển, giai đoạn có đặc điểm khác biệt riêng Khi giai đoạn phát triển bọc trứng ấu trùng chủ yếu dinh dưỡng noãn hoàng Khi ấu trùng thoát khỏi bọc trứng trở thàng mực con, sau – ngày chúng sử dụng thức ăn bên giai đoạn mực dùng tay (các xúc tu) để bắt mồi Thức ăn bao gồm thức ăn sống: Mysis Postlarva tôm, cá hương, giun đỏ, ấu trùng muỗi, thức ăn yêu thích tôm giai đoạn Mysis Postlarva Một tháng sau, thức ăn mực ăn loại như: thịt tôm, cá…thái nhỏ Sau chúng sử dụng loại thức ăn lớn theo thời gian 2.1.6 Đặc điểm sinh học sinh sản - Mực nang loài phân tính rõ ràng Cơ quan thụ tinh đực tua đầu biến đổi, xúc tay thứ tư, có giác bám phát triển có rãnh nằm bên trái, gọi xúc tay sinh dục Tuyến tinh màu trắng đục, có ống dẫn tinh tuyến tạo vỏ Con cái: kết giải phẫu cho thấy, buồng trứng nằm khoang áo – bên túi mực Không có quan sinh dục, tuyến sinh dục buồng trứng màu vàng nhạt Con có tuyến tạo vỏ rõ Kích thước thành thục lần đầu: mực nang phải đạt chiều dài màng áo ≥ 70 mm có khả tham gia sinh sản lần đầu * Hoạt động giao vó thụ tinh Hoạt động sinh sản đực diễn chúng kết cặp với tự 1-3 tuần Con đực lựa chọn để kết cặp chấp nhận đực Thời gian kết cặp kéo dài hay ngắn tuỳ thuộc vào qúa trình chọn lựa đực Quá trình kết cặp đẻ đực sau -5- Đầu tiên, đực bơi song song với cái, sau đực áp phần bụng lên lưng cái, chúng bơi đồng thời kéo dài xúc tu Con đực từ từ xoay phần bụng lại kéo căng xúc tu tiếp cận với xúc tu Con đực kéo căng xúc tu để chuyển sản phẩm sinh dục vào cho Quá trình thụ tinh: Qúa trình thụ tinh tiến hành bên khoang màng áo Khi thụ tinh đực lấy bao tinh từ túi Needham chuyển vào khoang áo tinh gắn chặt vào lỗ sinh dục cái, trình kéo dài khoảng – 20 phút Sau trình kết cặp xong mực bắt đầu đẻ trứng * Quá trình đẻ trứng Quá trình đẻ trứng mực xảy đực cặp đôi giao vó Trước đẻ trứng, bơi chậm quan sát xung quanh giá thể, đồng thời đực hộ tống theo Con tiến tới chỗ giá thể dùng xúc tay ôm lấy giá thể gắn nang trứng vào giá thể, sau bơi lùi lại ø phía sau bơi quanh quẩn nơi đẻ Quá trình sinh sản diễn vào ban đêm Trứng đẻ đính vào giá thể tạo thành chùm giống chùm nho Sau đẻ song nằm nghỉ sát đáy, đực bơi xung quanh chùm trứng, dùng xúc tay ôm lấy trứng vuốt ve làm vệ sinh cho trứng Trong chu kỳ vòng đời, mực thành thục lần đẻ hết toàn trứng chết Chúng đẻ nhiều kỳ trứng phát triển thành thục không đồng pha * Sức sinh sản mực nang - Sức sinh sản tuyệt đối mực nang nhóm khác khác - Sức sinh sản tuyệt đối trung bình cho nhóm kích thước 474,53 trứng Sức sinh sản tương đối trung bình 2,77 trứng/g trọng lượng toàn thân 2.1.7 Tập tính bơi lội Đối với loài mực nhờ có vây lỗ phễu mà chúng vận động Chúng tiến phía trước hay thụt lùi phía sau, vận động phía sau với tốc độ nhiều nhanh phía trước 2.2.Tình hình nghiên cứu mực -6- 2.2.1 Nghiên cứu thành phần loài, phân bố nguồn lợi Theo Roper et al., (1984) Lớp chân đầu giới có khoảng 1000 loài thuộc 43 họ, sống điều kiện khác nhau: rạn đá san hô, bùn, đất đá, sống vịnh, biển sâu xa bờ Vùng biển Ấn Độ Dương có 201 loài (Silas,1986), Vịnh Thái Lan vùng biển Andaman có 25 loài thuộc 10 giống họ Theo Nabhitabhata Nilaphat (1999) Loài mực nang phân bố vùng nhiệt đới từ 35o Bắc đến 30o Nam từ 30o đến 140o Đông Ấn Độ Dương Theo Norman Reid, (2002) tuỳ thuộc vào hình dạng vân hổ thể mực địa lý phân bố mà loài mực nang xếp vào nhóm: - Nhóm I thuộc loài tìm thấy phía Tây vùng biển n Độ (bao gồm biển Đỏ vịnh Arabian) - Nhóm II, phân bố từ Nhật Bản đến vịnh Thái Lan,phía bắc nước c Pilippin - Nhóm III, từ Maldives đến biển Adaman thuộc vùng biển Thái Lan Trong nhóm I II thể đực vân hổ rõ ràng, nhóm III, xúc tay thứ III lại xuất đốm Trong nước ta, vùng biển có loài động vật chân đầu phân bố, nhiều loài có số lượng lớn, đối tượng khai thác hải sản quan trọng Các loài động vật thân mềm lớp chân đầu có khả vận động mạnh, dễ dàng di chuyển đến nơi có điều kiện sống thích hợp, theo thời kỳ Theo Nguyễn Xuân Dục (1999) vùng biển Việt Nam phát có 69 loài động vật thân mềm thuộc lớp chân đầu, vịnh Bắc có 33 loài, biển miền Trung 65 loài biển miền Nam có 40 loài Có loài quý vào sách đỏ Việt Nam cần bảo vệ có mực nang vân hổ Họ mực nang có 15 loài thuộc giống vùng biển vịnh Bắc có 10 loài, vùng biển phía Nam có 14 loài Theo Nguyễn Xuân Dục vịnh Bắc Bộ thời kỳ mùa khô (tháng1, 2, 3) loài mực nang kích thước lớn Sepia pharaonis; S lycida; S essculenta thường tập trung gần đảo Cô Tô (Quảng Ninh), Bạch Long Vó, Cát Bà (Hải Phòng) Các tháng khác loài S latimanus; S madokai; S aculeata… phân bố rải rác khu vực phía Bắc, Tây Bắc phía Tây vịnh Bắc Bộ -7- Vùng biển phía Nam, vào mùa khô mực nang phân bố từ Nam Phan Rang, Phan Thiết khu vực gần bờ Đông Tây Cà Mau Còn vào mùa mưa thường tập trung từ Phan Thiết đến Cà Mau Tây bắc đảo Phú Quốc, có xu hướng dịch chuyển xa bờ Ở vùng biển vịnh Bắc Bộ vùng cửa sông Nam Bộ, mực ống (Loliginidae) mực nang (Sepiidae) tập trung phân bố chủ yếu độ sâu 50 m nước vùng biển miền Trung độ sâu từ 100 – 200 m có mực ống mực nang phân bố nhiều Kết qủa nghiên cứu đề tài KT.0309 (1991-1995) phân tích hàng nghìn mẻ lưới đánh bắt vùng biển Việt Nam tàu điều tra Liên Xô (cũ) năm 1977 – 1988, tàu Biển Đông năm 1978 –1980; tàu Thái Lan năm 1992 – 1993; tàu Hàn Quốc năm 1991; tính toán chi tiết nguồn lợi mực phân bố theo độ sâu vùng biển nước ta Bảng 1: Trữ lượng khả khai thác mực nang theo độ sâu biển Việt Nam (nguồn: đề tài KT.039) Vùng biển Trữ lượng Vịnh -Trữ lượng Bắc Bộ -KN khai thác Biển < 50m khả khai thác 50100m 100200m >200m 1.498,0 394,9 599,2 158,0 -Trữ lượng 3.900,4 3.835,7 4.504,6 1.300,5 13.541,2 M.Trung -KN khai thaùc 1.560,2 1.534,3 1.801,8 520,2 5.416,5 Biển Nam Bộ -Trữ lượng 24.933,3 10.755,9 7.404,1 5.612,5 48.705,8 4.302,4 2.961,6 2.245,0 19.482,3 Cộng -Trữ lượng 30.331,7 14.986.5 11.908,7 6.913,0 64.140,0 -KN khai thác 12.132,7 4.763,5 2.765,2 25.656,0 -KN khai thác 9.973,3 5.994,6 - Cộng - 1.892,9 757,2 Theo Khromov (1996) độ sâu từ 250 – 300 m bắt gặp loài Sepia madokai, S.lorigera, S.vietnamic số lượng Các loài mực thuộc họ Ommastrephidae, Onychoteuthidae, Cycloteuthidae phân bố chủ yếu độ sâu từ 300 – 500 m Ở độ -8- sâu 500 – 700 m gặp loài Ornithoteuthir volatilic Symplectoteuthir oualaniensis Độ sâu từ 50 – 100 m vùng phân bố chủ yếu loài thuộc họ Histioteuthis Còn vùng sườn lục địa tới độ sâu 100m gặp loài Histioteuthis mirandae Cycloteuthis sirventi Với độ sâu 100 m gặp loài thuộc hai họ Octopodidae Bolitaenidae 2.2.2 Nghiên cứu đặc điểm sinh thái học sinh sản mực Theo Lu (1998), Nabhitabhata (1999), Minton cộng (2001), loài mực nang đối tượng thuỷ sản thích hợp chúng phân bố rộng khắp, có kích thước lớn tốc độ sinh trưởng nhanh Chúng thích nghi tốt với chế độ dinh dưỡng khác nhau, dễ dàng chuyển tính ăn từ mồi sống sang mồi chết Loài thích nghi với ngưỡng nhiệt độ độ mặn rộng, hoạt động nhiều trình nuôi không sinh sản liên tục Sự sinh sản xuất điều kiện nuôi nhốt Theo Nabhitabhita Nilaphat (1999) mực nang cặp đôi giao vó đạt 90 ngày tuổi Một đẻ 50-3000 trứng Thời gian sinh sản kéo dài từ 1-24 ngày phụ thuộc vào kích thước số lượng trứng kích thước chúng Trứng ấp bọc trứng, nhiệt độ 28oC mực nở sau khoảng 9-25 ngày (trung bình 14 ngày) Thời giản trứng nở khoảng 3-10 ngày Con đực hộ tống bảo vệ cho suốt thời gian sinh sản Sau sinh sản khoảng 1-3 tuần đực chết Sau trứng nở, mực dinh dưõng noãn hoàng từ 3-7 ngày Sau chuyển sang sống đáy, ăn ấu trùng tôm giai đoạn Mysis Sau 30 ngày (chiều dài thân đạt - cm) chúng bắt mồi chết Thức ăn loài co kích thước nhỏ chúng Mực nang ăn thịt môi trường thiếu thức ăn, chúng thường bơi bắt mồi ban đêm Theo Dunning et al., (1994) cho kích thước loài mực khác vùng biển khác vùng biển phía Bắc nước c, đực trưởng thành đạt chiều dài máng áo 192 mm, 173 mm; vùng biển Nhật Bản kích thước trung bình 420 mm; vùng biển Đài Loan 370 mm; vùng biển Philippin 262 mm Tuy nhiên tác giả cho loài mực tự nhiên có kích thước trọng lượng lớn nhiều điều kiện nuôi giữ Mực mực trưởng -9- thành có tập tính vùi cát sỏi Tập tính kết đàn quan sát chạy trốn kẻ thù săn đuổi mồi Việt Nam công trình nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản đối tượng chưa nhiều Như nghiên cứu số tác giả: Nguyễn Lâm Anh, Nguyễn Văn Long (1996 – 1997) nghiên cứu sinh trưởng số loài mực vùng biển Việt Nam Tác giả nghiên cứu thành phần, kích thước mực nang cho kết sau: chiều dài đo dược từ 60 – 260 mm Kích thước cá thể lớn thường tập trung vào tháng đầu năm (200 – 240 mm) giảm dần vào tháng năm (60 – 160 mm) sau lại tăng dần vào tháng cuối năm (100 – 200 mm) Con có khối lượng lớn đực, khối lượng đực trung bình từ 111 – 1118g 103 – 1223g Nghiên cứu khai thác mực nang lưới rê ba lớp Nguyễn Long Phan Huy Sơn (2000) Kết cho thấy dùng lưới rê ba lớp khai thác mực nang có hiệu qua từ tháng đến tháng hàng năm Theo Trần Định (1998) mực ống đại dương có thân hình ống (Loligo spp) thon dần đến vây Vây hình thoi, khoẻ, chiều dài vây 44- 48% chiều dài thân Mặt lưng thân phủ chấm sắc tố nhỏ xếp tương đối Có đốm sáng lớn hình oval daphần giáp phía mặt lưng áo Khi kích thước màng áo đạt 165 – 175 mm có khả tham gia sinh sản Theo kết nghiên cứu Lê Thị Thu Thảo (2005) Ở giai đoạn nhỏ (chiều dài màng áo nhỏ 70 mm) tỷ lệ tăng trưởng chiều dài nhanh trọng lượng Chiều dài màng áo lớn 100 mm tỷ lệ tăng trưởng chiều dài chậm trọng lượng Kết phân tích tương quan chiều dài màng áo trọng lượng toàn thân cho thấy nhóm mực có chiều dài màng áo > 100 mm có trọng lượng nặng đực Khả sinh sản nhóm kích thước khác khác Nhóm kính thước từ 59 – 70 mm có sức sinh sản tuyệt đối dao động từ 52 – 221 trứng/ cá thể Nhóm kích thước 71 – 90 mm có sức sinh sản tuyệt đối dao động từ 146 – 418 trứng/ cá thể - 10 - dương tính, Hầu hết không sinh Các loài phát triển môi trường nước, đặc biệt nước biển cửa sông Nhiều loài tác nhân gây bệnh động vật thuỷ sản như: V alguilarum, V alginotycus, V parachaemolyticus * Đặc điểm vi khuẩn thuộc giống Pseudomonas Giống Pseudomonas thuộc họ Pseudomonadaceae Là vi khuẩn Gram âm, hình que hay thẳng cong, hiếu khí bắt buộc Phản ứng Catalase, Oxidase dương tính, có khả di động, khả ôxi hoá phản ứng OF âm tính * Đặc điểm vi khuẩn thuộc giống Aeromonas Giống Aeromonas thuộc họ Vibrionacea Đây loài vi khuẩn Gam âm, hình que, kích thước 0.3 –1.0 x1.0 – 3.5 µm Di động, hiếu khí không bắt buộc Nhiệt độ thích hợp từ 22- 28oC, hầu hết loài sinh trưởng tốt 37oC Oxidase Catalase dương tính, arginine dương tính, ornithinin âm tính Có nhiều nước nước biển Đặc điểm sinh vật hóa loài vi khuẩn phân lập trình bày bảng - 31 - Bảng 3:Đặc điểm sinh vật hóa học củavi khuẩn phân lập h que + + Y + + + + + + + + + + + + + h que + + Y + + + + + + + + h que + + G + + + + + + h que + + + + + h que + + Y + + + + + + + + + + h que + + Y + + + + + + - 32 - Proteus morgaii Aeromonas puctata h que + + Y + + + + + + + + + + + + + A hydrophila P cepacia Y + + + + + + + + + + + + + + Pseudomonas putida + Vibrio.sp V cincitatiensis h que + V metschinokovii h que + + G + + + + + + + + V alginotycus h que Oxidase + Cataze + TCBS Y ONPG + Arginine Lysine + Ornithine + Citrate + H2S + Ure desaminase + Indole + Vp Gelatinase + Glucose + Mannitol + Inositol Sorbitol Rhamnose Saccharose + Melibiose Arabinose + Amygdaline + Maniton + NO2 OF + Số chủng phân lập V carchariae Gram Hình dạng V parachaemolyticus Phản ứng V alguilarum Vi khuaån h que + + + + + + + + + - h que + + G + + + + - + + + + Y: màu vàng G: màu xanh Hình nhuộm Gram vi khuẩn Vibrio parachaemolyticus Hình 11: Kết phân lập vi khuẩn mực bệnh - 33 - Qua hình ta thấy loài V parachaemolyticus V cincitatiensis, V alginotycus chiếm tỷ lệ cao (20%) giống Vibrio Còn loài khác giống chiếm tỷ lệ thấp (6.7%) Giống Pseudomonas có loài có tỷ lệ cảm nhiễm tương đối cao Loài P.cepacia chiếm 20% Loài A puctata chiếm tỷ lệ cao loài phân lập chiếm 33% Theo kết nghiên cứu vi khuẩn động vật thân mềm giới cho thấy nhiều loài giống tác nhân gây bệnh gây tỷ lệ chết cao ấu trùng hầu hay ốc hương Tuy nhiên khó kết luận chúng tác nhân gây bệnh cho mực theo kết phân lập cho thấy, loài vi khuẩn có tần số thấp rải rác thể mực * Khi phân lập vi khuẩn mực số tổ chức thu kết sau: tần số phân lập vi khuẩn mô mực bệnh (%) Bảng kết phân lập vi khuẩn từ tổ chức mực 120 mang n=5 100 thận n=5 80 gan n=6 dày n=3 60 vết loét n=1 40 20 V V ib p rio ar al a c gu h i V a e m la ru c o m in ly c t V ita t i cus c ie V a rc n s is V a l r m g i ia et no t e s c yc hi Ps n o us eu k d o V ib ov i r i m on io s p as A P pu er om ce tid on pa a c A as p i a h u P r yd c ta ot ro t a eu ph s m ila or ga ii Hình 12: Tần số vi khuẩn phân lập quan - 34 - vi khuẩn Qua hình nhận thấy kết phân lập vi khuẩn tổ chức gan có số lượng vi khuẩn nhiều tần số bắt gặp cao phận khác Ba loàicó tần số phân lập cao chiếm 33.5% P putata, P cepacia, A puctata mang mực gặp loài vi khuẩn thuộc giống chúng nằm rải rác chiếm tỷ lệ thấp 20% Có mẫu bắt gặp loài vi khuẩn Điều cho thấy gan phận dễ bị xâm nhập tổ chức khác mực bị yếu Chúng phá huỷ làm suy giảm sức khoẻ mực Và kết mô học cho thấy tế bào gan bị phá huỷ rõ tổ chức khác + Từ vết loét phân lập loài thuộc nhóm Vibrio chiếm tỷ lệ thấp 16.7% Trong trình theo dõi thấy mực thường bị lở loét phần đuôi nhiều Tuy nhiên vi khuẩn mà tác nhân khác mà chưa có điều kiện để xác định Như kết phân lập thu giống vi khuẩn Vibrio, Aeromonas, Pseudomonas giống Proteus Trong loài thuộc giống Vibrio, Aeromonas chiếm tỷ lệ cao Nhiều loài vi khuẩn phân lập tác nhân gây bệnh cho động vật thân mềm Tuy nhiên, chưa có điều kiện gây cảm nhiễm loài mực khó kết luận có phải tác nhân gây bệnh cho mực hay không - 35 - PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 5.1 Kết kuận Tại Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản III khép kín qui trình sanû xuất giống nhân tạo mực nang Tuy nhiên tỉ lệ sống không cao khoảng 10% (mực bố mẹ) Trong trình nuôi có tượng mực chết rải rác mà chưa rõ nguyên nhân Tỉ lệ chết không cao có ngày mực lại chết nhiều, yếu tố môi trường thay đổi, thao tác trình nuôi như: thay nước, siphong Quan sát dấu hiệu bệnh lý bên cá thể yếu có đặc điểm như: bỏ ăn, nằm đáy, không định hướng hoạt động bơi nhanh, va đầu vào thành bể Màu sắc thay đổi từ sẫm chuyển sang màu nâu nhạt màu trắng Đầu cúp xuống bơi giật lùi Khi nghiên cứu mô học, phát biến đổi gan cá thể yếu Những thể vùi bắt màu tím màu hồng Hematoxyline Eosin Bên cạnh phát hiện tượng hoại tử, liên kết tế bào bị phá vỡ Ngoài cá thể bệnh có tượng trên, số cá thể khỏe có tượng Quan sát kí sinh trùng bắt gặp loài thuộc giống Argulus Tuy nhiên gặp KST cá thể 20 mẫu thu Vì xác định chúng gây hại cho mực hay không Phân lập loài nấm thuộc giống Fusarium Aspergillus Những loài tập trung chủ yếu vết loét tần số bắt gặp không cao Phân lập vi khuẩn 12 loài thuộc giống Trong Vibrio có số loài nhiều Loài A puctata chiếm tỉ lệ cao tổng số loài phân lập Với kết phân lập khó xác định chúng tác nhân gây bệnh cho mực hay không 5.2 Đề xuất ý kiến Cần tiếp tục nghiên cứu sâu KST, nấm, mô học vi khuẩn để kết luận xác tác động chúng mực Ngoài cần nghiên cứu vi rút Đây tác nhân gây bệnh cho mực - 36 - MỤC LỤC PHẦN I: MỞ ÑAÀU PHẦN II: TỔNG LUẬN 2.1 Vài nét đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Hệ thống phân loại 2.1.2 Đặc điểm hình thái mực nang 2.1.3 Đặc điểm sinh trưởng 2.1.4 Đặc điểm dinh dưỡng 2.1.5 Môi trường phân bố 2.1.6 Taäp tính bơi lội 2.1.7 Đặc điểm sinh học sinh saûn 2.2 Tình hình nghiên cứu mực 2.2.1 Nghiên cứu thành phần loài, phân bố nguồn lợi 2.2.2 Nghiên cứu đặc điểm sinh thái học sinh sản mực 2.2.3 Nghiên cứu bệnh 11 PHẦN III: PHƯƠNG PHÁP MGHIÊN CỨU 13 3.1 Đối tượng, thời gian địa điểm nghiên cứu 13 3.2 Phương pháp nghiên cứu .13 3.2.1 Phương pháp tìm hiểu kó thuật nuôi 14 3.2.2 Phương pháp thu thập, xử lí phân tích mẫu 14 3.2.3 Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn 14 3.2.4 Phương pháp nghiên cứu kí sinh trùng 15 3.2.5 Phương pháp nghiên cứu mô bệnh học 16 3.2.6 Phương pháp nghiên cứu nấm .16 3.2.7 Theo dõi biến động số yếu tố môi trường 17 - 37 - 3.3 Phương pháp xử lí số liệu 17 3.4 Các công thức sử dụng báo cáo .17 PHẦN IV: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .18 4.1 Kó thuật sản xuất giống mực nang vân hổ .18 4.1.1 Nguồn lực bố mẹ 18 4.1.2 Ương nuôi mực từ nở tới tháng tuổi 18 4.1.3 Nuôi mực nang từ tháng tuổi trở lên 18 4.2 Biến động số yếu tố môi trường .21 4.3 Ghi nhận tượng mực chết rải rác trình sản xuất 23 4.4 Đặc điểm hình thái mực bệnh 24 4.5 Đặc điểm nghiên cứu tổ chức mô bệnh học 24 4.6 Quan sát kí sinh trùng .26 4.7 Phân lập nấm 26 4.8 Phân lập vi khuẩn .30 Phaàn V: Kết luận đề xuất ý kiến 36 5.1 Kết luận 36 5.2 Đề xuất ý kiến 36 - 38 - MỤC LỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Trữ lượng khai thác mực nang theo độ sâu biển Việt Nam Bảng 2: Đặc điểm sinh vật hóa nấm 26 Bảng 3: Đặc điểm vi khuẩn phân lập .32 - 39 - MỤC LỤC CÁC HÌNH Hình 1: Biểu đồ tốc độ tăng trưởng chiều dài 20 Hình 2: Biểu đồ tốc độ tăng trưởng khối lượng 20 Hình3: Biến động nhiệt độ bể nuôi vào buổi sáng .21 Hình 4: Biến động nhiệt độ bể nuôi vào buổi chiều 22 Hình 5: Biến động pH bể nuôi vào buổi sáng .22 Hình 6: Biến động pH bể nuôi vào buổi chiều .23 Hình 7: Tỷ lệ chết mực ngày (bể nhà) 23 Hình 8: Tỷ lệ chết mực ngày (bể sân) 24 Hình 9: Tần số bắt gặp nấm mực phân lập .29 Hình 10: Tần số bắt gặp nấm quan 30 Hình 11: Kết phân lập vi khuẩn mực bệnh 33 Hình 12: Tần số bắt gặp vi khuẩn quan 34 - 40 - TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Lâm Anh, Nguyễn Văn Long (1997) Nghiên cứu sinh trưởng số loài mực miền Nam Việt Nam Kỷ yếu hội thảo toàn quốc bảo vệ thân mềm nguồn lợi thủy sản Đỗ Thị Hòa (2003) Bài giảng bệnh học thủy sản, Trường Đại học Thủy sản Nguyễn Văn Chiêm (2005) Chiến lược bảo vệ phát triển nguồn lợi thủy sản đến năm 2010 năm Kỷ yếu hội thảo toàn quốc bảo vệ thân mềm nguồn lợi thủy sản Trần Chu (2003) Đặc điểm sinh học mực ống đại dương Sthenoteuthis oualaniensis vùng biển Việt Nam Tuyển tập báo cáo khoa học hội thảo Động vật thân mềm toàn quốc Nguyễn Kim Độ (1999) Nuôi trồng Động vật thân mềm (Mollusca) giới Việt Nam Tuyển tập báo cáo khoa học hội thảo Động vật thân mềm toàn quốc Nguyễn Long (2005) Nghiên cứu khai thác mực ống đại dương Sthenoteuthis oualaniensis vùng biển xa bờ Tạp chí thủy sản số nghệ Đào Mạnh Sơn (2005) Kết điều tra đánh giá nguồn lợi Hải Sản công khai thác phù hợp nhằm phát triển bền vững nghề cá xa bờ Việt Nam Kỷ yếu hội thảo toàn quốc bảo vệ thân mềm nguồn lợi thủy sản Nguyễn Thị Xuân Thu (2003) Tổng quan tình hình nuôi Động vật thân mềm giới vấn đề thị trường xuất nhập Hội thảo động vật thân mềm toàn quốc lần thứ III Nguyễn Chính (1996) Một số loài Động vật Nhuyễn thể (Mollusca) có giá trị kinh tế biển Việt Nam Nhà xuất Khoa Học Kỹ thuật Trang 82 – 84 10 Nguyễn Xuân Dục (1978) Lớp chân đầu (Cephalopoda) vịnh Bắc Bộ Tuyển tập nghiên cứu nghề cá biển Tập I, phần Trang 73 – 79 11 Nguyễn Hữu Phụng, Đặng Sỹ Tuấn Nguyễn Huy Yết (1994) Phân bố nguồn lợi động vật thân mềm kinh tế thuộc lớp chân bụng lớp hai mảnh vỏ ven biển Việt Nam - 41 - 12 Đỗ Công Thông (2001) Báo cáo tóm tắt hội nghị khoa học biển Đông Việt Nam 2000 13 Nguyễn Xuân Dục (2001) Phân bố nguồn lợi Động vật thân mềm chân đầu (Mollusca, Cephalopoda) biển Việt Nam số ý kiến khai thác, bảo vệ phát triển nguồn lợi Tuyển tập báo cáo khoa học hội thảo Động vật thân mềm toàn quốc lần thứ Nhà xuất nông nghiệp Trang 61 – 69 14 Trần Chu, Trần Định (1994) Một vài đặc điểm sinh học số loài mực ống (Loligo) mực nang (Sepia) vịnh Bắc Bộ Việt Nam Báo cáo đề tài KT.03.09 15 Lê Thị Thu Thảo (2005) Nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản mực nang (sepia pharaonis) vùng biển Nha Trang Khánh Hòa 16 Nguyễn Long Phan Huy Sơn (2000) Nghiên cứu khai thác mực nang lưới rê ba lớp Tuyển tập báo cáo khoa học hội thảo Động vật thân mềm toàn quốc lần thứ II 16 Ngô Thu Hiền, 2004 “Tìm hiểu thành phần ký sinh trùng ký sinh cá Hồng bạc (Lujanus argentimaculatus, Forskal 1775) cá Chẽm (Lates calcaufer, Bloch 1790) Giống Nha Trang – Khánh Hòa” Luận văn tốt nghiệp đại học, Đại học Thủy sản Nha Trang 17 Nguyễn Thị Hải Xuân, 2005 “ Bước đầu tìm hiểu hội chứng đốm vỏ cua biển (Scylla spp) nuôi Khánh Hòa” Luận văn tốt nghiệp đại học, Đại học Thủy sản Nha Trang II Tài liệu tiếng Anh C R Sangster1 and R M Smolowitz2,* (2003) Description of Vibrio alginolyticus Infection in Cultured Sepia officinalis, Sepia apama, and Sepia pharaonis http://wwwrsmol@mbl.edu Jean F MacFADDIN Biochemical tests for identification of medical bacteria second edtion Rayong Coastal Aquaculture Station, Ta-pong, Changwat Rayong 2100, Thailand Tropical Marine Mallusc Programme (TMMP) Phaàn Danakusumah, Edward (1999) Study on cuttlefish culture Tropical Marine Mallusc Programme (TMMP) Phaàn - 42 - Jarawat Nabhitabhat $ Pitiporn Nilaplat (2001) Behaviour of Juvenile Cephalopoda Tropical Marine Mallusc Programme (TMMP) Phaàn Erin R Foster – Aitchison, Jean G Boal, John Forsythe, $Kari L Lavalli.100 Mating behavior in cuttlefish, Sepia pharaonis http://wwwsepia@animal.net John W Forsythe, Roger T Hanlon, and Phillip G.Lee (1988) A formulary for treating Cephalopod Mollusc Diseases Marine Biomedical Institute University of Texas Medical Branch, League Hall H63, Galveston, Texas 77550-2772, U.S.A - 43 - LỜI CẢM ƠN Hoàn thành báo cáo, trước hết cho phép xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo TS Nguyễn Hữu Dũng, TS Nguyễn Thị Xuân Thu, cô Võ Khả Tâm Đã tận tình hướng dẫn giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình học tập, nghiên cứu thực báo cáo Tôi xin chân thành cảm ơn: Ban chủ nhiệmkhoa, quý thầy cô ban nuôi trồng Thuỷ sản trường Đại học Thuỷ sản tận tình hướng dẫn giảng dạy suốt năm qua Các cô chú, anh chị môn động vật thân mềm Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thuỷ sản III hướng dẫn bảo tận tình cho suốt suốt trình thực tập làm báo cáo Anh chị phòng thí nghiệm bệnh Khoa nuôi trồng Thuỷ sản trường Đại học Thuỷ sản, bạn sinh viên thực tập tạo điều kiện giúp đỡ thời gian thực tập vừa qua Cô anh chị làm việc Thư viện Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thuỷ sản III Thư viện Đại học Thuỷ sản nhiệt tình giúp đỡ trình nghiên cứu tìm tài liệu để hoàn thành báo cáo Xin trân trọng gởi lời cảm ơn giúp đỡ quý báu Nha Trang tháng 11 năm 2005 Phan Thị Luyến - 44 - PHỤ LỤC Một số công thức pha môi trường nghiên cứu * Môi trường NA (Nutrient Aga) Môi trường (MT) NA: 23 g Nước cất: 1000 mL Đun nóng MT tan hết nước cất Hấp tiệt trùng nhiệt độ121oC thời gian 15 phút Để nguội 50oC, đổ 15 mL/đóa lồng 5mL/ống nghiệm * Môi trường TCBS (Thiosulphate Citrate Bilesalt sucrose) MT TCBS: 89 g Nước cất: 1000 mL Đun sôi môi trường tan hết, để nguội đến 50oC, đổ đóa lồng 15 mL/đóa (không cần hấp tiệt trùng) * Môi trường O/F Dung dịch 1: MT O/F bản: 9.4 g Nước cất: Dung dịch 2: 1000 mL Glucose: 10 g Nước cất: 1000 mL Đun cho tan hết Tiệt trùng 121oC 15 phút Trộn lẫn dung dịch dung dịch 2, đổ ống nghiệm mL /ống * Công thức Buffered formalin: 37 % - 40 % Nước cất: Formal dehyde: 100 mL 900 mL NaH2PO4 H2O: g Na2HPO4: 6.5 g` - 45 - .. .Sản phân công thực đề tài ? ?Bước đầu tìm hiểu kỹ thuật nuôi nguyên nhân gây chết mực nang trình sản xuất giống nhân tạo loài Sepia pharaonis? ?? Đề tài thực từ ngày... sống mực 4.3 Ghi nhận tượng mực chết rải rác trình sản xuất giống Trong trình nghiên cứu, hàng ngày có số lượng mực chết rải rác hai hệ thống bể nuôi mực nhà sân Số lượng mực chết nghi nhận trình. .. Nuôi trồng Thuỷ sản III Và phòng thí nghiệm bệnh Khoa Nuôi trồng Thuỷ sản – Trường Đại học Thuỷ sản 3.2 Phương pháp nghiên cứu • Phương pháp tiếp cận: Tìm hiểu kỹ thuật nuôi nguyên nhân gây chết