khảo sát thu nhận chế phẩm enzyme protease

lượng formol N-tươ ng ng gứ... lượ ngN-formol tươ ng ng gứ... lượ ngN-formol tươ ng ng gứ.

1 KH O SÁT HI U SU T THU NH N CH PH M ENZYME Ả Ệ Ấ Ậ Ế Ẩ PROTEASE T CANH TR Ừ ƯỜ NG VI KHU N Ẩ BACILLUS SUBTILIS V I CÁC LO I TÁC NHÂN T A KHÁC NHAU Ớ Ạ Ủ

B ng 1.1: ả Lượng ch ph m enzyme protease thu đế ẩ ược và hi u su t thuệ ấ

trường (g)

Kh i lố ượng t a (g)ủ Kh iố

lượng t aủ trung bình (g)

Hi u su tệ ấ thu nh n ậ(%)

2.1 Đ ườ ng chu n Tyrosin : ẩ

B ng 2.1: ả Đường chu n Tyrosin ẩ

Lượ ng

0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1

Hình 2.1 : Đường chu n Tyrosin.ẩ

2.2 Kh o sát ho t đ protease trong canh tr ả ạ ộ ườ ng vi khu n ẩ Bacillus subtilis:

Cân 20 g canh trường vi khu n ẩ Bacillus subtilis, ti n hành nh m c II.3.1, ph nế ư ụ ầ

d ch thu đị ược 200 ml, pha loãng 2 l n, đem 0,5ml ti n hành xác đ nh ho t đ theoầ ế ị ạ ộ

phương pháp Anson c i ti n nh m c II.3.2ả ế ư ụ

B ng 2.2: ả Ho t đ protease c a canh trạ ộ ủ ường vi khu n ẩ Bacillus subtilis.

L nầ ODM ODĐC ∆OD = ODM - ODĐC

µmol Tyrosin

Ho t đạ ộ(UI/g CT)

Ho t đạ ộ trungbình(UI/g CT)

2.3 Kh o sát ho t đ protease c a ch ph m enzyme đ ả ạ ộ ủ ế ẩ ượ ủ c t a b ng c n ằ ồ

96 0 :

Cân 1g ch ph m enzym protease hòa tan trong 100ml nế ẩ ước c t, sau đó phaấloãng 2 l n, l y 0,5ml ti n hành xác đ nh ho t đ theo phầ ấ ế ị ạ ộ ương pháp Anson c iả

ti n nh m c II.3.2ế ư ụ

B ng 2.3: ả Ho t đ protease c a ch ph m enzyme đạ ộ ủ ế ẩ ượ ủc t a b ng c n 96ằ ồ 0

L nầ ODM ODĐC ∆OD = ODM - ODĐC

µmol Tyrosin

Ho t đạ ộ(UI/g CPE)

Ho t đạ ộ trung bình(UI/g CPE)

22,61

Nh n xétậ : Ho t đ c a ch ph m enzyme protease đạ ộ ủ ế ẩ ượ ủc t a b ng c n 96ằ ồ 0

là 22,61 UI/g CPE (giá tr trung bình) ị

2.4 Kh o sát ho t đ protease c a ch ph m enzyme đ ả ạ ộ ủ ế ẩ ượ ủ c t a b ng aceton : ằ

Cân 1g ch ph m enzym protease hòa tan trong 100ml nế ẩ ước c t, sau đó phaấloãng 2 l n, l y 0,5ml ti n hành xác đ nh ho t đ theo phầ ấ ế ị ạ ộ ương pháp Anson c iả

ti n nh m c II.3.2ế ư ụ

B ng 2.4: ả Ho t đ protease c a ch ph m enzyme đạ ộ ủ ế ẩ ượ ủc t a b ng acetone.ằ

L nầ ODM ODĐC ∆OD = ODM - ODĐC

µmol Tyrosin

Ho t đạ ộ(UI/g CPE)

Ho t đạ ộ trung bình(UI/g CPE)

B ng 2.5: ả Ho t đ protease c a ch ph m enzyme đạ ộ ủ ế ẩ ượ ủc t a b ng Amoni sulfat.ằ

L nầ ODM ODĐC ∆OD = ODM - ODĐC

µmol Tyrosin

Ho t đạ ộ(UI/g CPE)

Ho t đạ ộ trung bình(UI/g CPE)

2.6 S so sánh ho t đ các CPE protease t a b i các tác nhân khác nhau: ự ạ ộ ủ ở

B ng 2.6: ả So sánh ho t đ c a các CPE protease v i tác nhân t a khác nhau.ạ ộ ủ ớ ủ

Tác nhân t aủ Ho t đ (UI/g CPE)ạ ộ Ho t đ trung bình (UI/g CPE)ạ ộ

C n 96ồ 0

22,24

22,6120,80

24,80Acetone

14,56

14,2915,84

12,48Amoni sulfat

10,24

6,934,32

6,24

Nh n xétậ : Trong các lo i ch ph m protease, ch ph m có ho t đ cao nh tạ ế ẩ ế ẩ ạ ộ ấ

là ch ph m enzyme đế ẩ ượ ủc t a b ng c n (22,61 UI/g CPE).ằ ồ

LOWRY

3.1 Đ ườ ng chu n Albumin : ẩ

B ng 3.1: ả Đường chu n Albuminẩ

N ng đồ ộ

OD (750 nm) 0 0,208 0,404 0,598 0,795 0,988

0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2

Hình 3.1: Đường chu n Albuminẩ

3.2 Kh o sát hàm l ả ượ ng protein trong canh tr ườ ng vi khu n ẩ Bacillus subtilis :

Cân 20 g canh trường vi khu n ẩ Bacillus subtilis, ti n hành nh m c II.3.1,ế ư ụ

ph n d ch thu đầ ị ược 200 ml, pha loãng 50 l n, đem1ml ti n hành thí nghi m theoầ ế ệ

phương pháp Lowry nh m c II.3.3ư ụ

B ng 3.2: ả Hàm lượng protein c a canh trủ ường vi khu n ẩ Bacillus subtilis :

L nầ ODM ODĐC ∆OD

= ODM - ODĐC

N ng đồ ộ protein

tương ngứ (µg/ml)

Hàm lượ ngprotein (mg/g CT)

Hàm lượ ngprotein trung bình(mg/g CT)

3.3 Kh o sát hàm l ả ượ ng protein c a CPE protease đ ủ ượ ủ c t a b ng c n 96 ằ ồ 0 :

Cân 1g ch ph m enzyme protease hòa tan trong 100ml nế ẩ ước c t, sau đó phaấloãng 20 l n, l y 1ml xác đ nh hàm lầ ấ ị ượng protein theo phương pháp Lowry như

tương ngứ (µg/ml)

Hàm lượ ngprotein (mg/g CPE)

Hàm lượ ngprotein trung bình

Nh n xétậ : Hàm lượng protein c a ch ph m enzyme protease đủ ế ẩ ượ ủ c t a

b ng c n 96ằ ồ 0 là 318,60 mg/g CPE (giá tr trung bình) ị

3.4 Kh o sát hàm l ả ượ ng protein c a CPE protease đ ủ ượ ủ c t a b ng aceton: ằ

Cân 1g ch ph m enzyme protease hòa tan trong 100ml nế ẩ ước c t, sau đó phaấloãng 20 l n, l y 1ml xác đ nh hàm lầ ấ ị ượng protein theo phương pháp Lowry như

m c II.3.3ụ

B ng 3.4: ả Hàm lượng protein c a ch ph m enzyme đủ ế ẩ ượ ủc t a b ng c n Acetone.ằ ồ

L nầ ODM ODĐC ∆OD

= ODM - ODĐC

N ng đồ ộ protein

tương ngứ (µg/ml)

Hàm lượ ngprotein (mg/

g CPE)

Hàm lượ ngprotein trung bình

Nh n xétậ : Hàm lượng protein c a ch ph m enzyme protease đủ ế ẩ ượ ủ c t a

b ng aceton là 284,63 mg/g CPE (giá tr trung bình) ằ ị

3.5 Kh o sát hàm l ả ượ ng protein c a CPE protease đ ủ ượ c t a b ng ủ ằ

mu i amoni sulfat : ố

Cân 1g ch ph m enzyme protease hòa tan trong 100ml nế ẩ ước c t, sau đó phaấloãng 20 l n, l y 1ml xác đ nh hàm lầ ấ ị ượng protein theo phương pháp Lowry như

m c II.3.3ụ

B ng 3.5: ả Hàm lượng protein c a ch ph m enzyme đủ ế ẩ ượ ủc t a b ng amoni sulfat.ằ

L nầ ODM ODĐC ∆OD

= ODM - ODĐC

N ng đồ ộ protein

tươ ng

ng (µg/

ứml)

Hàm lượ ngprotein (mg/

g CPE)

Hàm lượ ngprotein trung bình

Nh n xétậ : Hàm lượng protein c a ch ph m enzyme protease đủ ế ẩ ượ ủ c t a

b ng aceton là 203,44 mg/g CPE (giá tr trung bình) ằ ị

3.6 S so sánh hàm l ự ượ ng protein c a ch ph m protease t a b i các tác ủ ế ẩ ủ ở nhân khác nhau :

B ng 3.6: ả So sánh hàm lượng protein c a các lo i ch ph m enzymeủ ạ ế ẩprotease v i tác nhân t a khác nhau.ớ ủ

Tác nhân t aủ Hàm lượng protein

285,49

284,63

283,44284,97Amoni sulfat

212,67

203,44

191,13206,51

Nh n xétậ : Hàm lượng protein cao nh t ch ph m enzyme protease đấ ở ế ẩ ượ c

t a b ng c n 96ủ ằ ồ 0 là 307,85 mg/g CPE (giá tr trung bình )ị

4 HO T Đ RIÊNG C A PROTEASE Ạ Ộ Ủ

B ng 4.1: ả Ho t đ riêng c a canh trạ ộ ủ ường vi khu n.ẩ

Ho t đ proteaseạ ộ(UI/g CT)

Hàm lượng protein(mg protein/g CT)

Ho t đ riêngạ ộ(UI/mg Pr)

B ng 4.2: ả So sánh ho t đ riêng c a t ng lo i ch ph m enzyme proteaseạ ộ ủ ừ ạ ế ẩ

v i tác nhân t a khác nhau.ớ ủ

Tác nhân t aủ Ho t đ proteaseạ ộ

(UI/g CPE)

Hàm lượng protein(mg Pr/g CPE)

Ho t đ riêngạ ộ(UI/mg Pr)

Nh n xétậ : Ho t đ riêng c a ch ph m enzyme protease đạ ộ ủ ế ẩ ượ ủc t a b ng c nằ ồ

là cao nh t 0,072 UI/mg CPE (giá tr trung bình)ấ ị

5 KH O SÁT S PH THU C HO T Đ C A CÁC CH Ả Ự Ụ Ộ Ạ Ộ Ủ Ế

PH M ENZYME PROTEASE VÀO NHI T Đ Ẩ Ệ Ộ

5.1 Kh o sát s ph thu c ho t đ c a CPE protease (t a b ng c n) ả ự ụ ộ ạ ộ ủ ủ ằ ồ theo nhi t đ : ệ ộ

Cân 1g ch ph m enzym hòa tan trong 100ml nế ẩ ướ ấc c t, sau đó pha loãng 2 l n,ầ

m i nhi t đ kh o sát t 30

ở ỗ ệ ộ ả ừ 0 C đ n 80ế 0 C, l y 0,5ml ti n hành xác đ nh ho t đấ ế ị ạ ộ theo Anson c i ti n nh m c II.3.2ả ế ư ụ

B ng 5.1: ả Kh o sát s ph thu c ho t đ protease c a CPE (t a b ng c n)ả ự ụ ộ ạ ộ ủ ủ ằ ồ theo nhi t đ ệ ộ

Ho t đạ ộ(UI/g CPE)

Ho t đạ ộ trung bình(UI/g CPE)

Nh n xétậ : 55Ở 0C, ch ph m enzyme protease đế ẩ ượ ủc t a b ng c n 96ằ ồ 0 có

ho t đ cao nh t là 63,40 UI/g CPE (giá tr trung bình).ạ ộ ấ ị

đ nh ho t đ theo Anson c i ti n nh m c II.3.2ị ạ ộ ả ế ư ụ

B ng 5.2: ả Kh o sát s ph thu c ho t đ enzyme vào nhi t đ đ i v i CPEả ự ụ ộ ạ ộ ệ ộ ố ớ(t a b ng aceton) :ủ ằ

Ho t đạ ộ(UI/g CPE)

Ho t đạ ộ trung bình(UI/g CPE)

Nh n xétậ : 55Ở 0C, ch ph m enzyme protease đế ẩ ượ ủc t a b ng aceton cóằ

ho t đ cao nh t là 42,88 UI/g CPE (giá tr trung bình).ạ ộ ấ ị

-1001020304050

5.3 Kh o sát s ph thu c ho t đ enzyme vào nhi t đ đ i v i CPE ả ự ụ ộ ạ ộ ệ ộ ố ớ (t a b ng amoni sulfat) : ủ ằ

Cân 1g ch ph m enzym protease hòa tan trong 100ml nế ẩ ước c t, sau đó phaấloãng 2 l n, m i nhi t đ kh o sát t 30ầ ở ỗ ệ ộ ả ừ 0 C đ n 80ế 0 C, l y 0,5ml ti n hành xácấ ế

đ nh ho t đ theo Anson c i ti n nh m c II.3.2ị ạ ộ ả ế ư ụ

B ng 5.3: ả Kh o sát s ph thu c ho t đ c a CPE protease (t a b ngả ự ụ ộ ạ ộ ủ ủ ằ amoni sulfat) theo nhi t đ ệ ộ

Ho t đạ ộ(UI/g CPE)

Ho t đạ ộ trung bình(UI/g CPE)

T Ừ BACILLUS SUBTILIS THEO pH.

Cân 1g ch ph m enzym hòa tan trong 100ml nế ẩ ướ ấc c t, sau đó pha loãng 2 l n,ầ nhi t đ 55

ở ệ ộ 0C, m i pH kh o sát t 3 đ n 10, l y 0,5ml ti n hành xác đ nh ho tỗ ả ừ ế ấ ế ị ạ

đ theo Anson c i ti n nh m c II.3.2ộ ả ế ư ụ

B ng 6.1: ả S bi n đ i ho t đ c a CPE protease theo pH.ự ế ổ ạ ộ ủ

pH L n ầ ODM ODĐC ∆ OD

= ODM - ODĐC

µmol Tyrosin

Ho t đ ạ ộ (UI/g CPE)

Ho t đ trung ạ ộ bình(UI/g CPE) 3

Nh n xétậ : pH = 6,0; ch ph m enzyme protease đở ế ẩ ượ ủc t a b ng c n 96ằ ồ 0

có ho t đ cao nh t là 78,45 UI/g CPE (giá tr trung bình )ạ ộ ấ ị

pH

HOẠT ĐỘ

(UI/g CPE)

Hình 6.1: S ph thu c ho t đ c a ch ph m protease (t a b ng c n) theo pH.ự ụ ộ ạ ộ ủ ế ẩ ủ ằ ồ

7 KH O SÁT QUÁ TRÌNH TH Y PHÂN PROTID C A CH PH M Ả Ủ Ủ Ế Ẩ PROTEASE

7.1 Kh o sát quá trình th y phân albumin : ả ủ

V i đi u ki n nhi t đ 55ớ ề ệ ệ ộ 0C ; pH = 6,0

B ng 7.1: ả S bi n đ i lự ế ổ ượng NF theo th i gian th y phân albumin b i CPEờ ủ ởprotease

lượng formol

N-tươ ng

ng (g)ứ

Nh n xétậ :

V i c ch t là albumin, quá trình th y phân có v n t c tăng nhanh trongớ ơ ấ ủ ậ ốkho ng t 0 – 5 gi Gi th 6 và th 7, lả ừ ờ ờ ứ ứ ượng N-formol có tăng nh ng lư ượng cóchi u hề ướng gi m T gi th 8, quá trình th y phân g n nh n đ nh.ả ừ ờ ứ ủ ầ ư ổ ị

7.2 Kh o sát quá trình th y phân casein : ả ủ

V i đi u ki n nhi t đ 55ớ ề ệ ệ ộ 0C và pH = 6,0

B ng 7.2: ả S bi n đ i lự ế ổ ượng NF theo th i gian th y phân casein b i CPEờ ủ ởprotease

lượng formol

N-tươ ng

ng (g)ứ

Nh n xétậ :

V i c ch t là casein, quá trình th y phân có v n t c tăng nhanh trong kho ngớ ơ ấ ủ ậ ố ả

t 0 – 9 gi Gi th 10 và th 11, lừ ờ ờ ứ ứ ượng N-formol có tăng nh ng lư ượng cóchi u hề ướng gi m T gi th 12, quá trình th y phân g n nh n đ nh.ả ừ ờ ứ ủ ầ ư ổ ị

7.3 Kh o sát quá trình th y phân protid đ u nành h t : ả ủ ậ ạ

V i đi u ki n nhi t đ 55ớ ề ệ ệ ộ 0C và pH = 6,0

B ng 7.3: ả S bi n đ i lự ế ổ ượng NF theo th i gian th y phân đ u nành h t b iờ ủ ậ ạ ở CPE protease

lượ ngN-formol

tươ ng

ng (g)ứ

Nh n xétậ :

V i c ch t là đ u nành h t, quá trình th y phân có v n t c tăng nhanh trongớ ơ ấ ậ ạ ủ ậ ốkho ng t 0 – 10 gi Gi th 11, lả ừ ờ ờ ứ ượng N-formol có tăng nh ng lư ượng có chi uề

hướng gi m T gi th 12, quá trình th y phân g n nh n đ nh.ả ừ ờ ứ ủ ầ ư ổ ị

7.4 Kh o sát quá trình th y phân protid n m r m : ả ủ ấ ơ

V i đi u ki n nhi t đ 55ớ ề ệ ệ ộ 0C và pH = 6,0

B ng 7.4: ả S bi n đ i lự ế ổ ượng NF theo th i gian th y phân n m r m b i CPEờ ủ ấ ơ ởprotease

lượ ngN-formol

tươ ng

ng (g)ứ

B ng 7.5: ả S bi n đ i lự ế ổ ượng NF theo th i gian th y phân th t heo n c b iờ ủ ị ạ ở CPE protease

lượ ngN-formol

tươ ng

ng (g)ứ

0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35

Hình 7.1: S bi n đ i hàm lự ế ổ ượng NF theo th i gian trong quá trình th y phânờ ủcác c ch t khác nhau b i ch ph m protease.ơ ấ ở ế ẩ