Nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng và chất hữu cơ tự nhiên đến khả năng nhân nhanh chồi lan kim tuyến (anoectochilus roxburghii) bằng kỹ thuật in vitro

 B3 : Nicotinic acid B5 : Gamborg B6 : Pyridoxine BA : 6-Benzylaminopurine CV : Coefficient of Variation Đ/C : Đối chứng IAA : Indol axetic acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Significant Difference MS : Murashige and Skoog NAA : Napthalene axetic Acid TN : Thí nghiệm TDZ : 1,2,3-Thiadiazol-5-yl WPM : Woody Plant Medium   Hình 2.1. Sơ đồ phân hóa tế bào 7 Hình 2.2. Sơ đồ phản phân hóa tế bào 7 4    !" Lan Kim Tuyến - Anoectochilus roxburghii (Wall.) thuộc họ Lan - Orchidaceae, được phân bố rộng ở hầu hết các tỉnh của Việt Nam [4].Chi Lan Kim Tuyến Anoectochilus ở Việt Nam hiện thống kê được 12 loài, trong đó có loài Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall). Là một loại thảo dược có giá trị dược liệu, Lan Kim Tuyến có khả năng chữa trị các bệnh ung thư, chống tăng huyết áp, lưu thông khí huyết, kháng khuẩn, làm thuốc trị lao phổi, ho do phế nhiệt, phong thấp, đau nhức xương khớp, viêm dạ dày mãn tính, viêm khí quản, suy nhược thần kinh, giúp tăng cường sức khoẻ, v.v [4]. Ngoài tác dụng chữa bệnh Lan Kim Tuyến còn được dùng làm cảnh [1]. Hiện nay với nhu cầu sử dụng dược liệu ngày càng tăng Lan Kim Tuyến đã bị thu hái nhiều đến mức cạn kiệt ngoài tự nhiên [1]. Lan Kim Tuyến được xếp trong nhóm IA của Nghị định 32/2006/NĐ-CP, nghiêm cấm khai thác sử dụng vì mục đích thương mại và nhóm thực vật đang nguy cấp EN A1a,c,d trong Sách đỏ Việt Nam (2007), phần thực vật [5], [4].Xuất phát từ tình hình thực tiễn nhằm bảo tồn loài Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii việc ứng dụng nuôi cấy mô tế bào thực vật là một phương pháp hữu hiệu cho hệ số nhân chồi cao, chất lượng tốt, độ đồng đều cao và giữ được các đặc tính di truyền của cây mẹ. Xuất phát từ tính cấp thiết trên, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài:            ! "#  $% &'()(* (+,-,./0(12 #$%!&%'%()!"*+ Nghiên cứu phương pháp nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) bằng kỹ thuật in vitro. , /%0/%()!"*+ Xác định ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng BAP, Kinetin và NAA đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến. Xác định ảnh hưởng của một số chất hữu cơ tự nhiên đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến. 5 12 3'4)%()!"*+ - Ý nghĩa khoa học Kết quả nghiên cứu của đề tài đưa ra kĩ thuật nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến bằng phương pháp in vitro phục vụ cho các nghiên cứu tiếp theo. Giúp sinh viên tiếp cận được với công tác nghiên cứu khoa học, qua đó nâng cao trình độ chuyên môn và tạo cho sinh viên có tác phong làm việc nghiêm túc, sáng tạo. - Ý nghĩa thực tiễn Kết quả của đề tài góp phần bổ sung quy trình kỹ thuật nhân giống lan Kim Tuyến nhằm cung cấp cây giống với số lượng lớn, có chất lượng đồng đều đồng thời giữ được đặc tính di truyền của cây chọn lọc. Bảo tồn được loại dược liệu quý đang có nguy cơ tuyệt chủng. 6 # 56789 #+:+'+;/%'/ 3"%<=>) ?+@/=A 3242425*(60 Lan Kim Tuyến có tên khoa học là Anoectochilus roxburghii (Wall.) [4]. Giới (regnum) : Plantae Ngành (Phylum) : Magnoliophyta Lớp (Class) : Liliospida Bộ (ordo) : Asparagales Họ (Family) : Orchidaceae Chi (genus) : Anoectochilus Loài (species) : roxburghii [7]. 324232789#0:%*"#$% Lan Kim Tuyến là cây thảo, có thân rễ mọc dài, thân trên đất mọng nước mang 2-6 lá mọc xoè sát đất. Lá hình trứng, gần tròn ở gốc, chóp hơi nhọn và có mũi ngắn, cỡ 3,5-4,5 x 2,5-3,5 cm. Lá có màu nâu đỏ ở mặt trên. Hệ gân lá mạng lưới lông chim, thường có 5 gân gốc. Các gân này thường có màu hồng ở mặt trên và nổi rất rõ. Đôi khi gân ở giữa có màu vàng nhạt. Mặt dưới lá có màu nâu đỏ nhạt, nhẵn với 5 gân gốc nổi rõ. Các gân bên ở phía rìa lá nổi rõ, gân ở giữa lá ở mặt dưới không rõ. Cuống lá dài 0.6-1.2 cm, thường nhẵn và có màu trắng xanh, đôi khi hơi đỏ tía ở bẹ lá. Bẹ lá nổi rõ và nhẵn. Hoa tự chùm mọc ở đầu ngọn thân, trục hoa dài từ 5-20 cm, thường phủ lông màu nâu đỏ, mang từ 4-10 hoa. Mùa hoa nở tháng 9-12. Mùa quả chín tháng 12-3 năm sau. Hoa có cánh môi màu trắng. Hai bên rìa mang từ 6-8 râu mỗi bên [10]. - Về mặt cấu tạo, Lan Kim Tuyến có các đặc điểm sau: + Thân rễ: Thân rễ nằm ngang sát mặt đất, đôi khi hơi nghiêng, bò dài. Chiều dài thân rễ từ 5-12cm, trung bình là 7,87cm. Đường kính thân rễ từ 3- 4mm, trung bình là 3,17mm. Số lóng trên thân rễ từ 3-7 lóng, trung bình là 4,03 lóng. Chiều dài của lóng từ 1-6cm, trung bình là 1,99cm. Thân rễ thường có màu xanh trắng, đôi khi có màu nâu đỏ, thường nhẵn, không phủ lông [10]. + Rễ: Rễ được mọc ra từ các mấu trên thân rễ. Đôi khi rễ cũng được hình thành từ thân khí sinh. Rễ thường đâm thẳng xuống đất. Thông thường mỗi mấu chỉ có một rễ, đôi khi có vài rễ cùng được hình thành từ một mấu trên thân rễ. Số 7 lượng và kích thước rễ cũng thay đổi tuỳ theo cá thể. Số rễ trên một cây thường từ 3-10 rễ, trung bình là 5,4 rễ. Chiều dài của rễ thay đổi từ 0,5-8cm, rễ dài nhất trung bình là 6,07cm và ngắn nhất trung bình là 1,22cm, chiều dài trung bình của các rễ trên một cây là 3,82cm [10]. + Thân khí sinh: Thân khí sinh thường mọc thẳng đứng trên mặt đất, ít khi mọc nghiêng. Chiều dài thân khí sinh từ 4-6cm, trung bình 5,4cm. Đường kính thân khí sinh từ 2,5-3,5cm, trung bình là 2,98cm. Thân khí sinh mang nhiều lóng, các lóng có chiều dài khác nhau. Số lóng trên thân khí sinh thay đổi từ 2-4 lóng, trung bình là 3,6. Chiều dài mỗi lóng từ 1-4cm, trung bình 1,52cm. Thân khí sinh thường mọng nước, nhẵn, không phủ lông; thường có màu xanh trắng, đôi khi có màu hồng nhạt [10] . + Lá: Lá mọc cách xoắn quanh thân, xoè trên mặt đất. Lá hình trứng, gần tròn ở gốc, đầu lá hơi nhọn và có mũi ngắn, thường dài từ 3-4cm, trung bình là 4,03cm và rộng từ 2-3cm, trung bình là 3,12cm. Lá có màu nâu đỏ ở mặt trên và phủ lông mịn như nhung. Hệ gân lá mạng lưới lông chim, thường có 5 gân gốc. Các gân này thường có màu hồng ở mặt trên và nổi rất rõ. Đôi khi gân ở giữa có màu vàng nhạt. Mặt dưới lá có màu nâu đỏ nhạt, nhẵn với 5 gân gốc nổi rõ. Các gân bên ở phía rìa lá nổi rõ, gân ở giữa lá mặt dưới không rõ. Cuống lá dài 0,6- 1,2cm, thường nhẵn và có màu trắng xanh, đôi khi hơi đỏ tía ở bẹ lá. Bẹ lá nổi rõ và nhẵn. Số lá trên một cây thay đổi từ 2-6, thông thường có 4 lá. Kích thước của lá cũng thay đổi, các lá trên một cây thường có kích thước khác nhau rõ rệt [10]. + Hoa: Cụm hoa dài 10-15cm, mang 4-10 hoa mọc thưa. Lá bắc hình trứng, hoa thường màu trắng, dài 2,5-3cm, các mảnh bao hoa dài khoảng 6mm, môi dài 1,5cm, ở mỗi bên gốc mang 6-8 dải hẹp, chóp phiến rộng, chẻ hai sâu, hốc chứa mật dài 7mm, bầu dài 1,3cm màu lục có nhiều lông mềm [4], [10]. 3242;2789#<,=!"#$% - Phân bố theo kiểu rừng: Lan Kim Tuyến hầu hết phân bố ở rừng kín lá rộng, rừng thường có cấu trúc 2 tầng cây gỗ [10]. - Phân bố theo trạng thái rừng: Đặc điểm của cây bụi và thảm tươi ở khu vực Lan Kim Tuyến phân bố là thưa thớt, độ che phủ khoảng 15-30%, độ cao của lớp cây bụi và thảm tươi khoảng từ 0,1-0,5m tuỳ từng khu vực. Lan Kim Tuyến thường ít phân bố ở những nơi cây bụi, thảm tươi dày đặc. Chúng có thể nằm ngay trên lớp thảm mục của rừng đang bị phân huỷ [10]. 8 - Phân bố theo sinh cảnh: Lan Kim Tuyến chủ yếu phân bố trên đất, chúng mọc sát ngay bề mặt đất, nơi đất giàu mùn, độ ẩm, độ xốp cao, thoáng khí, thậm chí ngay trên lớp thảm mục của rừng đang phân huỷ. Đôi khi chúng mọc trên các tảng đá ẩm, trên các đoạn thân cây gỗ mục, trong gốc cây trên các đoạn thân cây gỗ mục, trong gốc cây. Có thể bắt gặp Lan Kim Tuyến ở trong rừng nơi ẩm ướt, ven các khe suối, dưới tán rừng cây gỗ lớn, hoặc dưới rừng trúc, rừng sặt, trên đường mòn đi lại trong rừng [10]. - Phân bố theo địa lý, địa hình:Phân bố ở hầu hết các dạng địa hình, như chân núi, sườn núi, đỉnh núi [10]. - Phân bố theo đai cao: Lan Kim Tuyến thường phân bố ở đai cao trên 735m, tập trung chủ yếu ở độ cao trên 970m [10]. Ở Việt Nam, Lan Kim Tuyến có phổ phân bố khá rộng bao gồm các tỉnh: Lào Cai (Sapa), Hà Giang (Quảng Bạ), Yên Bái, Vĩnh Phúc (Tam Đảo), Hà Tây (Mỹ Đức: Chùa Hương), Quảng Trị (Đồng Chè), Kom Tum (Đắc Tô: Đăc Uy), Gia Lai (Kbang: Kon Hà Nừng), Lâm Đồng, Ninh Thuận, Bình Thuận, Hà Tĩnh, Quảng Trị, Đắk Lăk [4]. Thế giới: Ấn Độ, Nhật Bản, Butan, Trung Quốc, Mi-an-ma, Thái Lan, Lào, Cam-pu-chi-a, Ma-lay-xi-a, In-đô-nê-xi-a [4]. 3242>2?@A*"#$% - Giá trị kinh tế Hiện nay Lan Kim Tuyến ngoài tự nhiên đã bị thu hái đến mức cạn kiệt [16] do có rất nhiều tác dụng dược liệu và làm cây cảnh. Giá bán trên thị trường thế giới của Lan Kim Tuyến khô là 3.200USD/kg [29], cây tươi có giá từ 300- 320USD/kg, nếu được thu hái trong tự nhiên, đặc biệt có nấm cộng sinh ở rễ thì giá này sẽ cao gấp 3 hoặc nhiều hơn nữa [17], [29]. Cây giống Lan Kim Tuyến có thể tạo từ nhân in vitro các mắt đốt thân, hạt giống và các bộ phận sinh dưỡng của cây. Tuy nhiên sự sinh trưởng các của cây Lan Kim Tuyến in vitro chậm, kéo dài thời gian nhân giống. Hiện nay nhiều nước chủ yếu sản xuất cây Lan Kim Tuyến từ nuôi cấy hạt in vitro.Trung Quốc, Đài Loan, Nhật bản đã trồng và xuất khẩu Lan Kim Tuyến mang lại nguồn thu lớn. - Giá trị dược liệu Lan Kim Tuyến có rất nhiều tác dụng dược liệu do có chứa axit 4- hydroxycinnamic, β-sitosterol, β-D-glucopyranoside, 3-glucosides butanoic axit, kinsenoside nên được sử dụng trong điều trị bệnh [29]. 9 Theo y học cổ truyền Đài Loan, Lan Kim Tuyến tươi hoặc khô nấu nước uống trị các chứng bệnh đau ngực, đau bụng, tiểu đường, viêm thận [21], [26], sốt, huyết áp cao, liệt dương, rối loạn gan, lá lách, tim, phổi [16], [17], [26], [27]. Cây tươi sử dụng để chữa các vết thương do rắn cắn [16], [29]. Dịch chiết Lan Kim tuyến có khả năng kháng virus, kháng sưng viêm, bảo vệ gan và sử dụng để chữa các bệnh về gan [25], [26], [19] chống khối u, ung thư và tính chống virus [18], điều trị bệnh tim mạch, chống loãng xương, chống mệt mỏi [27]. Gần đây, một hợp chất 3(R)-3- β-D-glucopyranosyloxy butanolide tên thương mại là kinsenoside được chiết xuất từ Lan Kim Tuyến có tác dụng chống tăng huyết áp hiệu quả và hợp chất chuyển hoá arachidonic acid liên quan đến chức năng tim mạch [25]. Lan Kim Tuyến chứa các nguyên tố vi lượng (Fe, Co, Cu, Mn, Zn, Cr) đóng vai trò quan trọng trong việc chống lão hóa, chuỗi polysaccharide nâng cao hiệu lực của miễn dịch trong cơ thể con người [19]. Cây Lan Kim Tuyến sau khi thu hoạch có thể xuất khẩu ở dạng thô, sản phẩm gồm thân, rễ và lá phơi khô để chế biến trà dược, thực phẩm chức năng, thạch Lan và đặc biệt là chiết xuất chất 3(R)-3-β-D-glucopyranosyloxy butanolide từ Lan Kim Tuyến để sản xuất biệt dược kinsenoside [29]. ##?'B+C/B" /D+%=@DAE*F'G%H 323242"@B#C%#C,(0 Nuôi cấy mô tế bào thực vật là phạm trù khái niệm chung cho tất cả các loại nuôi cấy nguyên liệu thực vật hoàn toàn sạch các vi sinh vật trên môi trường dinh dưỡng nhân tạo, trong điều kiện vô trùng [6]. Nhân giống vô tính in vitro được tiến hành trên nguyên tắc cắt nuôi đoạn thân có mang chồi ở nách lá, đoạn rễ hay mảnh củ, cánh hoa, có kích thước nhỏ phù hợp với điều kiện vô trùng của ống nghiệm [3]. Phương pháp nhân giống in vitro đã bổ sung cho các kỹ thuật nhân giống vô tính cổ điển như giâm, chiết, ghép tách dòng một kỹ thuật tiến bộ với những ưu điểm như tốc độ nhân giống cao từ 33 đến 1012 một năm; Chủ động sản xuất, không phụ thuộc vào điều kiện thời tiết, mùa vụ; Có khả năng công nghiệp hóa cao do nuôi cấy trong điều kiện ổn định về môi trường dinh dưỡng, nhiệt độ, ánh sáng, do đó có thể công nghiệp hóa hoàn toàn từ khâu nhân cây giống với số lượng lớn đến khi ươm trồng trong nhà lưới [3]. 323232D(:C%#C,(0 - Tính toàn năng của tế bào 10 Năm 1902, Nhà Sinh lý thực vật học người Đức Haberlandt, đã tiến hành nuôi cấy các tế bào thực vật để chứng minh tế bào là toàn năng[13]. Haberlandt cho rằng mỗi tế bào của bất kỳ sinh vật nào cũng đều có khả năng tiềm tàng để phát triển thành một cơ thể hoàn chỉnh. Ông nhận thấy, mỗi tế bào của cơ thể đa bào đều phát sinh từ hợp bào thông qua quá trình phân bào nguyên nhiễm. Điều đó có nghĩa là mỗi tế bào của một sinh vật sẽ chứa toàn bộ thông tin di truyền cần thiết của một cơ thể hoàn chỉnh. Khi gặp điều kiện thuận lợi nhất định, những tế bào đó có thể sẽ phát triển thành một cơ thể hoàn chỉnh [13]. Năm 1953, Miller và Skoog (Notingham. Unio) đã thành công khi thực nghiệm tái sinh cây con từ tế bào lá, chứng minh được tính toàn năng của tế bào. Thành công trên đã tạo ra công nghệ sinh học ứng dụng trong nhân giống vô tính, tạo giống cây trồng và dòng chống chịu [13]. Tính toàn năng của tế bào là cơ sở khoa học của phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật. Hiện nay, người ta đã thực hiện được khả năng tạo ra một cơ thể hoàn chỉnh từ một tế bào riêng rẽ [6]. - Sự phân hóa và phản phân hóa Sự phân hoá tế bào là sự chuyển các tế bào phôi sinh thành các tế bào của mô chuyển hoá, đảm nhận các chức năng khác nhau trong cơ thể. Ví dụ: Mô dậu làm nhiệm vụ quang hợp, mô bì làm nhiệm vụ bảo vệ, nhu mô làm nhiệm vụ dự trữ, mô dẫn làm nhiệm vụ vận chuyển nước và chất dinh dưỡng [6]. Quá trình phân hoá tế bào được biểu diễn ở sơ đồ sau: Tế bào phôi sinh → Tế bào dãn → Tế bào phân hoá có chức năng riêng biệt I '#JKL!MN'< 'O)AE*F Tuy nhiên, khi tế bào đã phân hóa thành các tế bào có chức năng chuyên, chúng không hoàn toàn mất khả năng biến đổi của mình. Trong trường hợp cần thiết, ở điều kiện thích hợp, chúng có thể trở về dạng tế bào phôi sinh và phân chia mạnh mẽ, quá trình đó gọi là phản phân hóa tế bào, ngược lại với sự phân hóa tế bào [13]. Phân hóa tế bào Tế bào phôi sinh Tế bào dãn Tế bào chuyên hóa Phản phân hóa tế bào [...]... dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng (BAP, Kinetin, NAA) đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP tốt nhất kết hợp với Kinetin đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP và Kine tốt... NAA đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất hữu cơ tự nhiên (khoai tây, nước dừa, chuối xanh) đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP, Kinetin và NAA tốt nhất kết hợp với khoai tây đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP, Kinetin và NAA... chuối xanh đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP, Kinetin và NAA tốt nhất kết hợp với nước dừa đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến 21 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 3.4.2.1 Phương pháp nghiên cứu nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng (BAP, Kinetin, NAA) đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii). .. số nhân chồi và chất lượng chồi cao nhất Với mục đích nhân nhanh chồi cây Lan Kim Tuyến sau tái sinh, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ chất kích thích sinh trưởng (BAP, Kinetine, NAA) và chất hữu cơ tự nhiên (khoai tây nước dừa chuối xanh) đến sự nhân nhanh của chồi cây Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii sau tái sinh Kết quả thu được như sau: 4.1.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng. .. bào Kinetine có vai trò quan trọng trong phân chia tế bào và kích thích sự hình thành chồi Trong thí nghiệm này đề tài đã nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP (1,5mg/l) kết hợp với kinetine nồng độ từ 0,1 đến 0,5mg/l Kết quả nghiên cứu được thể hiện ở bảng 4.2 và hình 4.2: Bảng 4.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ BAP (1,5mg/l) kết hợp với Kinetin đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến. .. sinh trưởng ngoại sinh tác dụng độc lập với hoocmon sinh trưởng nội sinh Phân chia tế bào, phân hoá và biệt hoá được điều kiển bằng sự tác động tương hỗ giữa các hoocmon ngoại sinh và nội sinh Tác động phối hợp của Aaxin và cytokinin có tác động quyết định đến sự phát triển và phát sinh hình thái của tế bào và mô Những nghiên cứu của tác giả Skoog cho thấy tỷ lệ auxin/cytokinin cao thì thích hợp cho sự... thái và phân bố của loài Lan Kim Tuyến Anoectochilus setaceus Blume ở Vườn Quốc gia Tam Đảo, tỉnh Vĩnh Phúc [10] Năm 2010, Phùng Văn Phê và cs tiến hành nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh chồi in vitro loài Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl Kết quả cho thấy: Môi trường phù hợp nhất để nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến in vitro là Knud Thể chồi 8 tuần tuổi từ phôi hạt chín và chồi từ thể chồi. .. số liệu - Các số liệu được tính toán bằng phần mềm Excell 2007 - Quá trình xử lý thực hiện trên máy tính theo chương trình IRRISTAT 5.0 26 PHẦN 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Nhân nhanh là giai đoạn kích thích sự phân hóa các mầm chồi từ một hay vài chồi ban đầu Đây là giai đoạn không... tăng khả năng nhân chồi chúng tôi tiến hành nuôi cấy chồi trên môi trường nền bổ sung 2,0mg/l BAP, Kinetine 0,3mg/l (nồng độ BAP, Kinetine tốt nhất tìm được ở thí nghiệm 1và 2) và NAA ở các nồng độ khác nhau Kết quả nghiên cứu được thể hiện ở bảng 4.3 và hình 4.3: Bảng 4.3 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l và Kinetine (0,3mg/l) kết hợp với NAA đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến. .. sung tổ hợp BAP 1,5mg/l, Kinetine 0,3mg/l, NAA 0,3mg/l cho hệ số nhân chồi cao nhất, chất lượng chồi tốt, đồng đều, lá xanh đậm được chọn để nhân nhanh chồi cho các thí nghiệm tiếp theo 4.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng của khoai tây, nước dừa, chuối xanh đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến 4.2.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetinen(0,3mg/l), NAA (0,3mg/l) . BAP đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến. - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP tốt nhất kết hợp với Kinetin đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến. - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm. %Q/ ;2>242NO _+`/ 3: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng (BAP, Kinetin, NAA) đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii). - Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng. thích sinh trưởng BAP, Kinetin và NAA đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến. Xác định ảnh hưởng của một số chất hữu cơ tự nhiên đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến. 5 12 3'4)%()!"*+ -