DANH MỤC CÁC BẢNG
DANH MỤC CÁC HÌNH
Hình 2.1. Sơ đồ phân hóa tế bào.......................................................................7
Hình 2.2. Sơ đồ phản phân hóa tế bào...............................................................7
+ Thân rễ: Thân rễ nằm ngang sát mặt đất, đôi khi hơi nghiêng, bò dài. Chiều dài thân rễ từ 5-12cm, trung bình là 7,87cm. Đường kính thân rễ từ 3-4mm, trung bình là 3,17mm. Số lóng trên thân rễ từ 3-7 lóng, trung bình là 4,03 lóng. Chiều dài của lóng từ 1-6cm, trung bình là 1,99cm. Thân rễ thường có màu xanh trắng, đôi khi có màu nâu đỏ, thường nhẵn, không phủ lông [10].
+ Rễ: Rễ được mọc ra từ các mấu trên thân rễ. Đôi khi rễ cũng được hình thành từ thân khí sinh. Rễ thường đâm thẳng xuống đất. Thông thường mỗi mấu chỉ có một rễ, đôi khi có vài rễ cùng được hình thành từ một mấu trên thân rễ. Số lượng và kích thước rễ cũng thay đổi tuỳ theo cá thể. Số rễ trên một cây thường từ 3-10 rễ, trung bình là 5,4 rễ. Chiều dài của rễ thay đổi từ 0,5-8cm, rễ dài nhất trung bình là 6,07cm và ngắn nhất trung bình là 1,22cm, chiều dài trung bình của các rễ trên một cây là 3,82cm [10].
+ Lá: Lá mọc cách xoắn quanh thân, xoè trên mặt đất. Lá hình trứng, gần tròn ở gốc, đầu lá hơi nhọn và có mũi ngắn, thường dài từ 3-4cm, trung bình là 4,03cm và rộng từ 2-3cm, trung bình là 3,12cm. Lá có màu nâu đỏ ở mặt trên và phủ lông mịn như nhung. Hệ gân lá mạng lưới lông chim, thường có 5 gân gốc. Các gân này thường có màu hồng ở mặt trên và nổi rất rõ. Đôi khi gân ở giữa có màu vàng nhạt. Mặt dưới lá có màu nâu đỏ nhạt, nhẵn với 5 gân gốc nổi rõ. Các gân bên ở phía rìa lá nổi rõ, gân ở giữa lá mặt dưới không rõ. Cuống lá dài 0,6-1,2cm, thường nhẵn và có màu trắng xanh, đôi khi hơi đỏ tía ở bẹ lá. Bẹ lá nổi rõ và nhẵn. Số lá trên một cây thay đổi từ 2-6, thông thường có 4 lá. Kích thước của lá cũng thay đổi, các lá trên một cây thường có kích thước khác nhau rõ rệt [10].
+ Hoa: Cụm hoa dài 10-15cm, mang 4-10 hoa mọc thưa. Lá bắc hình trứng, hoa thường màu trắng, dài 2,5-3cm, các mảnh bao hoa dài khoảng 6mm, môi dài 1,5cm, ở mỗi bên gốc mang 6-8 dải hẹp, chóp phiến rộng, chẻ hai sâu, hốc chứa mật dài 7mm, bầu dài 1,3cm màu lục có nhiều lông mềm [4], [10].
- Giá trị kinh tế
Hiện nay Lan Kim Tuyến ngoài tự nhiên đã bị thu hái đến mức cạn kiệt [16] do có rất nhiều tác dụng dược liệu và làm cây cảnh. Giá bán trên thị trường thế giới của Lan Kim Tuyến khô là 3.200USD/kg [29], cây tươi có giá từ 300-320USD/kg, nếu được thu hái trong tự nhiên, đặc biệt có nấm cộng sinh ở rễ thì giá này sẽ cao gấp 3 hoặc nhiều hơn nữa [17], [29]. Cây giống Lan Kim Tuyến có thể tạo từ nhân in vitro các mắt đốt thân, hạt giống và các bộ phận sinh dưỡng của cây. Tuy nhiên sự sinh trưởng các của cây Lan Kim Tuyến in vitro chậm, kéo dài thời gian nhân giống. Hiện nay nhiều nước chủ yếu sản xuất cây Lan Kim Tuyến từ nuôi cấy hạt in vitro. Trung Quốc, Đài Loan, Nhật bản đã trồng và xuất khẩu Lan Kim Tuyến mang lại nguồn thu lớn.
- Giá trị dược liệu
Lan Kim Tuyến có rất nhiều tác dụng dược liệu do có chứa axit 4-hydroxycinnamic, β-sitosterol, β-D-glucopyranoside, 3-glucosides butanoic axit, kinsenoside nên được sử dụng trong điều trị bệnh [29].
Theo y học cổ truyền Đài Loan, Lan Kim Tuyến tươi hoặc khô nấu nước uống trị các chứng bệnh đau ngực, đau bụng, tiểu đường, viêm thận [21], [26], sốt, huyết áp cao, liệt dương, rối loạn gan, lá lách, tim, phổi [16], [17], [26], [27]. Cây tươi sử dụng để chữa các vết thương do rắn cắn [16], [29]. Dịch chiết Lan Kim tuyến có khả năng kháng virus, kháng sưng viêm, bảo vệ gan và sử dụng để chữa các bệnh về gan [25], [26], [19] chống khối u, ung thư và tính chống virus [18], điều trị bệnh tim mạch, chống loãng xương, chống mệt mỏi [27].
Gần đây, một hợp chất 3(R)-3- β-D-glucopyranosyloxy butanolide tên thương mại là kinsenoside được chiết xuất từ Lan Kim Tuyến có tác dụng chống tăng huyết áp hiệu quả và hợp chất chuyển hoá arachidonic acid liên quan đến chức năng tim mạch [25]. Lan Kim Tuyến chứa các nguyên tố vi lượng (Fe, Co, Cu, Mn, Zn, Cr) đóng vai trò quan trọng trong việc chống lão hóa, chuỗi polysaccharide nâng cao hiệu lực của miễn dịch trong cơ thể con người [19].
Cây Lan Kim Tuyến sau khi thu hoạch có thể xuất khẩu ở dạng thô, sản phẩm gồm thân, rễ và lá phơi khô để chế biến trà dược, thực phẩm chức năng, thạch Lan và đặc biệt là chiết xuất chất 3(R)-3-β-D-glucopyranosyloxy butanolide từ Lan Kim Tuyến để sản xuất biệt dược kinsenoside [29].
- Tính toàn năng của tế bào
Năm 1902, Nhà Sinh lý thực vật học người Đức Haberlandt, đã tiến hành nuôi cấy các tế bào thực vật để chứng minh tế bào là toàn năng[13].
Haberlandt cho rằng mỗi tế bào của bất kỳ sinh vật nào cũng đều có khả năng tiềm tàng để phát triển thành một cơ thể hoàn chỉnh. Ông nhận thấy, mỗi tế bào của cơ thể đa bào đều phát sinh từ hợp bào thông qua quá trình phân bào nguyên nhiễm. Điều đó có nghĩa là mỗi tế bào của một sinh vật sẽ chứa toàn bộ thông tin di truyền cần thiết của một cơ thể hoàn chỉnh. Khi gặp điều kiện thuận lợi nhất định, những tế bào đó có thể sẽ phát triển thành một cơ thể hoàn chỉnh [13].
Năm 1953, Miller và Skoog (Notingham. Unio) đã thành công khi thực nghiệm tái sinh cây con từ tế bào lá, chứng minh được tính toàn năng của tế bào. Thành công trên đã tạo ra công nghệ sinh học ứng dụng trong nhân giống vô tính, tạo giống cây trồng và dòng chống chịu [13].
- Sự phân hóa và phản phân hóa
Sự phân hoá tế bào là sự chuyển các tế bào phôi sinh thành các tế bào của mô chuyển hoá, đảm nhận các chức năng khác nhau trong cơ thể. Ví dụ: Mô dậu làm nhiệm vụ quang hợp, mô bì làm nhiệm vụ bảo vệ, nhu mô làm nhiệm vụ dự trữ, mô dẫn làm nhiệm vụ vận chuyển nước và chất dinh dưỡng [6].
Quá trình phân hoá tế bào được biểu diễn ở sơ đồ sau:
Năm 2009, Phùng Văn Phê và cs đã đưa ra kết quả nghiên cứu về đặc điểm hình thái và phân bố của loài Lan Kim Tuyến Anoectochilus setaceus Blume ở Vườn Quốc gia Tam Đảo, tỉnh Vĩnh Phúc [10].
Năm 2010, Phùng Văn Phê và cs tiến hành nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh chồi in vitro loài Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl. Kết quả cho thấy: Môi trường phù hợp nhất để nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến in vitro là Knud. Thể chồi 8 tuần tuổi từ phôi hạt chín và chồi từ thể chồi cao từ 2-3cm là phù hợp nhất để nhân nhanh trong môi trường thích hợp Knud bổ sung BAP 0,5mg/l + Kinetin 0,3mg/l + NAA 0,3mg/l + nước dừa 100ml/l + dịch chiết khoai tây 100g/l + sucrose 20g/l + agar 7g/l + AC 0,5g/l [9].
Chồi tái sinh từ mẫu cấy khoảng 4-6 tuần sinh trưởng và phát triển bình thường có đầy đủ thân, lá được sử dụng làm mẫu cấy chuyển sang môi trường nhân nhanh.
PHẦN 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
Hình 4.3. Biểu đồ thể hiện ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l và Kinetine (0,3mg/l) kết hợp với NAA đến khả năng nhân nhanh chồi
Ghi chú: Môi trường nền (MT nền) được sử dụng là MS bổ sung saccharose 20g/l + agar 6g/l + Inositol 0,1g/l, pH = 5,7.
Hình 4.4. Biểu đồ thể hiện ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l,
Kinetine (0,3mg/l), NAA (0,3mg/l) kết hợp với khoai tây đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy)
Ghi chú: Môi trường nền (MT nền) được sử dụng là MS bổ sung saccharose 20g/l + agar 6g/l + Inositol 0,1g/l, pH = 5,7.
Ghi chú: Môi trường nền (MT nền) được sử dụng là MS bổ sung saccharose 20g/l + agar 6g/l + Inositol 0,1g/l, pH = 5,7.
Hình 4.6. Biểu đồ thể hiện ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l,
1. Môi trường nhân nhanh chồi sử dụng môi trường MS + BAP 1,5mg/l + saccharose 20g /l + agar 6g /l + Inositol 0,1g/l, pH = 5,7 cho hệ số nhân chồi đạt 4,1 lần, chất lượng chồi trung bình.
2. Môi trường nhân nhanh chồi sử dụng môi trường MS + BAP 1,5mg/l + Kinetine 0,3mg/l + saccharose 20g /l + agar 6g /l + Inositol 0,1g/l, pH = 5,7 cho hệ số nhân chồi cao nhất đạt 4,7 lần, chất lượng chồi tốt.
3. Môi trường nhân nhanh chồi sử dụng môi trường MS + BAP 1,5mg/l + Kinetine 0,3mg/l + NAA 0,3mg/l + saccharose 20g /l + agar 6g /l + Inositol 0,1g/l, pH = 5,7 cho hệ số nhân chồi cao nhất đạt 5,4 lần, chất lượng chồi tốt.
4. Môi trường nhân nhanh chồi sử dụng môi trường MS + BAP 1,5mg/l + Kinetine 0,3mg/l + NAA 0,3mg/l + khoai tây 30g/l + saccharose 20g /l + agar 6g /l + Inositol 0,1g/l, pH = 5,7 cho hệ số nhân chồi cao nhất đạt 6,1 lần, chất lượng chồi tốt.
5. Môi trường nhân nhanh chồi sử dụng môi trường MS + BAP 1,5mg/l + Kinetine 0,3mg/l + NAA 0,3mg/l + chuối xanh 40g/l + saccharose 20g /l + agar 6g/l + Inositol 0,1g/l, pH = 5,7 cho hệ số nhân chồi cao nhất đạt 5,9 lần, chat lượng trung bình.
6. Môi trường nhân nhanh chồi sử dụng môi trường MS + BAP 1,5mg/l + Kinetine 0,3mg/l + NAA 0,3mg/l + nước dừa 100ml/l + saccharose 20g /l + agar 6g /l + Inositol 0,1g/l, pH = 5,7 cho hệ số nhân chồi cao nhất đạt 6,4 lần, chất lượng chồi tốt.
1. Cần nghiên cứu các loại môi trường khác để nhân giống Lan Kim Tuyến để đạt được hiệu quả cao hơn.
2. Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhân nhanh giống Lan Kim Tuyến để áp dụng vào sản xuất bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào.
2. Lê Trần Bình (1997), Công nghệ thực vật trong cải tiến giống cây trồng, Nxb nông nghiệp, Hà Nội.
3. Ngô Xuân Bình, Bùi Bảo Hoàn, Nguyễn Thị Thuý Hà (2003), Giáo trình công nghệ sinh học, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội.
4. Bộ Khoa Học và Công Nghệ (2007), Sách đỏ Việt Nam (phần thực vật), Nxb Khoa học tự nhiên & công nghệ, Hà Nội.
5. Chính Phủ Nước Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam (2006), Nghị định số 32/ 2006/NĐ-CP.
6. Trịnh Đình Đạt (2009), Công nghệ sinh học (công nghệ di truyền), tập 4, Nxb giáo dục.
7. Trần Hợp (1990), Phong lan Việt Nam, tập 2, Nxb Nông nghiệp, Tp HCM.
11. Nguyễn Quang Thạch, Phí Thị Cẩm Miện (2012), “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống loài lan Kim Tuyến (Anoectochilus setaceusBlume) invtro bảo tồn nguồn dược liệu quý”, Tạp chí Khoa học và Phát triển, 10(4), 597-603.
12. Đỗ Năng Vịnh(2005). Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng. NXB Nông Nghiệp.
14. Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tân (2009), Sinh lý học thực vật, Nxb Giáo dục.
II. Tài liệu tiếng anh
27. Wen-Chuan Lin and Chang-Chi Hsieh (2005), “Commercial Application of Anoectochilus formosanus: Immunomodulating Activities”, International Journal of Applied Science and Engineering, 3(2005), 175-178.
28. Yang Bai-Yun (2008), “Induction and Rapid Propagation of Anoectochilus roxburghii Protocorm”, Journal of Anhui Agricultrural Sciences.
30. Zoltan Molnar, Emese virag, Vince Ordog (2011), “Natural substances in tissue culture media of higher plants”, Institute of Plant Biology, Faculty of Agricultural and Food Sciences, University of West Hungary, Mosonmagyarovar hungary, 1(2011), 123-127.