dừa, chuối xanh đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến
4.2.1. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l,Kinetinen(0,3mg/l), NAA (0,3mg/l) kết hợp với khoai tây đến khả năng nhân Kinetinen(0,3mg/l), NAA (0,3mg/l) kết hợp với khoai tây đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy)
Môi trường nuôi cấy mô, tế bào thực vật thường bổ sung các chiết xuất hữu cơ như nước dừa, bột chuối, nước cốt cà chua, dịch chiết khoai tây nghiền, dịch chiết mạch nha, dịch chiết nấm men.
Khoai tây là nguồn nguyên liệu rất giàu cacbohydrat, protein, acid amin, vitamin và các nguyên tố khoáng. Đặc biệt trong khoai tây có chứa cytokinine có tác dụng phân bào, kích thích khả năng tạo chồi [25]. Kết quả nghiên cứu được thể hiện ở bảng 4.4 và hình 4.4:
Bảng 4.4. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l,
Kinetine (0,3mg/l), NAA (0,3mg/l) kết hợp với khoai tây đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến
Ghi
chú: Môi trường nền (MT nền) được sử dụng là MS bổ sung saccharose 20g/l + agar 6g/l + Inositol 0,1g/l, pH = 5,7.
Hình 4.4. Biểu đồ thể hiện ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine (0,3mg/l), NAA (0,3mg/l) kết hợp với khoai tây đến khả năng
nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy)
Từ bảng 4.4 và hình 4.4 cho thấy:
Giá trị LSD.05 đạt 0,38 thì các CT3, CT4 so với công thức đối chứng có
sự sai khác có ý nghĩa ở mức độ tin cậy 95%. Còn các CT2, CT5, CT6 có sự sai khác không có ý nghĩa ở mức độ tin cậy 95%. Hệ số nhân chồi tăng dần CT 2 đến CT4 và giảm dần từ CT 5 đến CT6. Trong đó CT3 bổ sung khoai tây 30g/l cho hệ số nhân chồi cao nhất đạt 6,1 lần, chất lượng chồi tốt, thân chồi mập, lá xanh. Tiếp đó là CT4 bổ sung khoai tây 40g/l cho hệ số nhân chồi đạt 5,8 lần. Khi nồng độ khoai tây vượt quá 40g/l thì hệ số nhân chồi giảm, ở CT5 bổ sung khoai tây 100g/l hệ số nhân chồi thấp nhất đạt 4,0 lần chất lượng chồi trung bình.
4.2.2. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng lượng BAP 1,5mg/l,Kinetine (0,3mg/l), NAA (0,3mg/l) kết hợp với chuối xanh đến khả năng nhân Kinetine (0,3mg/l), NAA (0,3mg/l) kết hợp với chuối xanh đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy)
Công thức Nồng độ khoai tây (g/l) Số mẫu nuôi cấy (mẫu/CT) Hệ số nhân (lần) Chất lượng chồi CT1 (ĐC) 0 45 5,2 +++ CT2 20 45 5,5 ++ CT3 30 45 6,1 +++ CT4 40 45 5,8 +++ CT5 50 45 4,7 +++ CT6 100 45 4,0 ++ LSD.05 0,38 CV% 4,1
Bột chuối khô hoặc bột nghiền từ quả chuối xanh được sử dụng trong nuôi cấy mô một số cây trồng như lan. Trong chuối xanh chứa các acid amin, vitamin, chất khoáng, đường. Đặc biệt trong chuối xanh có chứa cytokinine [30]. Vì vậy, để tìm được nồng độ chuối xanh có ảnh hưởng tốt nhất cho sự
sinh trưởng, phát triển và chất lượng chồi Lan Kim Tuyến in vitro chúng tôi
tiến hành nuôi cấy chồi trên môi trường nền bổ sung BAP 1,5mg/l, Kinetine 0,3mg/l, NAA 0,3mg/l (nồng độ BAP, Kinetine, NAA tốt nhất tìm được ở thí nghiệm 1, 2 và 3) và chuối xanh ở các nồng độ khác nhau.
Kết quả nghiên cứu được thể hiện ở bảng 4.5 và hình 4.5:
Bảng 4.5. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine (0,3mg/l), NAA (0,3mg/l) kết hợp với chuối xanh đến khả năng
nhân chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy) Công thức Nồng độ chuối xanh (g/l) Số mẫu nuôi cấy (mẫu/CT) Hệ số nhân (lần) Chất lượng chồi CT1 (ĐC) 0 45 5,1 +++ CT2 20 45 5,2 +++ CT3 30 45 5,6 ++ CT4 40 45 5,9 ++ CT5 50 45 4,5 ++ CT6 100 45 3,6 ++ LSD0,5 0,39 CV% 4,4
Ghi chú: Môi trường nền (MT nền) được sử dụng là MS bổ sung saccharose 20g/l + agar 6g/l + Inositol 0,1g/l, pH = 5,7.
Hình 4.5. Biểu đồ thể hiện ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine (0,3mg/l), NAA (0,3mg/l) kết hợp với chuối xanh đến khả
năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến
Từ bảng 4.5 và hình 4.5 cho thấy:
Giá trị LSD.05 đạt 0,39 các CT3, CT4 so với công thức đối chứng có
sự sai khác có ý nghĩa ở mức độ tin cậy 95%. Hệ số nhân chồi cao nhất ở CT4 đạt 5,9 lần với nồng độ chuối xanh 40g/l, CT3 có nồng độ chuối xanh 30g/l hệ số nhân chồi giảm đi không đáng kể còn 5,6 lần, chất lượng chồi trung bình. Các CT2, CT5, CT6 so với công thức đối chứng có sự sai khác không có ý nghĩa ở mức độ tin cậy 95%, trong đó CT6 cho hệ số nhân chồi thấp nhất đạt 3,6 lần, chất lượng chồi kém.
4.2.3. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l,Kinetine (0,3mg/l), NAA (0,3mg/l), kết hợp với nước dừa đến khả năng Kinetine (0,3mg/l), NAA (0,3mg/l), kết hợp với nước dừa đến khả năng nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii (sau 35 ngày nuôi cấy)
Nước dừa là chất hữu cơ tự nhiên thường được bổ sung vào các môi trường nuôi cấy mô tế bào thức vật. Trong nước dừa có chứa acid amin, protein,
các khoáng chất, các vitamin như B1, B2, B3, B5, B6…. Đặc biệt nước dừa có
chứa auxin, cytokine, Myo-Inostol có tác dụng rất tốt cho sự sinh trưởng của cây. Nước dừa thường được sử dụng để kích thích phân hóa, nhân nhanh chồi và
cho chất lượng chồi tốt, bền vững trong duy trì in vitro.
Qua nhiều lần nhân nhanh chất lượng chồi có xu hướng giảm sút. Để giải quyết vấn đề này và đảm bảo hệ số nhân chồi trong nhân nhanh thì việc bổ sung nước dừa vào môi trường nhân nhanh tốt nhất đã thu được trong các thí nghiệm trên (môi trường có bổ sung BAP 1,5mg/l, Kinetine 0,3mg/l, NAA 0,3mg/l, khoai tây 40g/l) là phù hợp với mục đích nghiên cứu khả năng nâng cao chất lượng chồi của nước dừa trong nhân nhanh.
Bảng 4.6. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine (0,3mg/l), NAA (0,3mg/l) kết hợp với nước dừa đến khả năng
nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy)
Công thức Nồng độ nước dừa (ml/l) Số mẫu nuôi cấy (mẫu) Hệ số nhân (lần) Chất lượng chồi CT1 (ĐC) 0,0 45 5,6 +++ CT2 50 45 5,8 +++ CT3 100 45 6,4 +++ CT4 150 45 5,2 +++ CT5 200 45 4,0 ++ CT6 250 45 4,7 + LSD.05 0,46 CV% 4,9
Ghi chú: Môi trường nền (MT nền) được sử dụng là MS bổ sung saccharose 20g/l + agar 6g/l + Inositol 0,1g/l, pH = 5,7.
Hình 4.6. Biểu đồ thể hiện ảnh hưởng của hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine (0,3mg/l), NAA (0,3mg/l), kết hợp với nước dừa đến khả năng
nhân nhanh chồi Lan Kim Tuyến (sau 35 ngày nuôi cấy)
Giá trị LSD.05 đạt 0,46 thì CT3 so với công thức đối chứng có sự sai khác có ý nghĩa ở mức độ tin cậy 95%. Các CT2, CT4, CT5, CT6 so với công thức đối chứng có sự sai khác không có ý nghĩa ở mức độ tin cậy 95%. Trong đó CT3 bổ sung nồng độ nước dừa 100ml/l cho hệ số nhân chồi cao nhất đạt 6,4 lần, chất lượng chồi tốt. Khi tăng nồng độ nước dừa lên 150ml đến 250ml hệ số nhân chồi giảm. Hệ số nhân chồi thấp nhất ở CT5 bổ sung nước dừa 200ml/l đạt 4,0 lần chất lượng chồi trung bình.
Tác giả Phùng văn Phê và cs (2010) đã bổ sung nước dừa vào môi trường
nhân nhanh trên đối tượng Anoectochilus roxburghii cho hệ số nhân chồi cao
nhất, chất lượng chồi tốt ở nồng độ 100ml/l [9]. Kết quả nghiên cứu của tác giả phù hợp với kết quả nghiên cứu của đề tài, hệ số nhân chồi đạt cao nhất ở nồng độ 100ml/l.
Nhận xét chung: So sánh kết quả nghiên cứu ở các thí nghiệm cho thấy công thức 3 của bảng 4.6 có hàm lượng BAP 1,5mg/l, Kinetine 0,3mg/l, NAA 0,3mg/l, nước dừa 100ml/l cho hệ số nhân chồi cao nhất đạt 6,4 lần, chất lượng chồi tốt thân chồi mập, lá xanh. Do vậy, có thể sử dụng môi trường có bổ sung BAP 1,5mg/l, Kinetine 0,3mg/l, NAA 0,3mg/l, nước dừa 100ml/l để nhân nhanh
giống Lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii.
PHẦN 5