Nghiên cứu ảnh hưởng của chất khử trùng, môi trường và một số hợp chất hữu cơ tự nhiên đến khả năng tái sinh, nhân nhanh cây gừng núi ðá (zingiber purpureum roscoe

LỜI CẢM ƠN Được trí Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhịêm Khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm em tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng, môi trường số hợp chất hữu tự nhiên đến khả tái sinh, nhân nhanh Gừng Núi Ðá (Zingiber purpureum Roscoe)” Phịng thí nghiệm nuôi cấy mô Tế bào Thực vật, Khoa CNSH-CNTP, Trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên Hiện nay, em hoàn thành đề tài tốt nghiệp Đại học Được kết ngày hôm em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa thầy cô giáo Khoa tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian qua Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới: ThS Nguyễn Thị Tình tận tình bảo, hướng dẫn em thời gian thực đề tài Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ, tạo điều kiện vật chất tinh thần cho em trình học tập nghiên cứu Em mong nhận đóng góp ý kiến thầy bạn để đề tài em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn ! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2014 Sinh viên thực Lê Thị Lanh DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT ADN : Acid deoxyribonucleic B1 : Thiamin B3 : Nicotinic acid B5 : Gamborg’s B6 : Pyridoxine BA : 6-Benzylaminopurine Cồn : C2H5OH CV : Coefficient of Variation Đ/C : Đối chứng HSN : Hệ số nhân IAA : Indol axetic acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Significant Difference Test MT : Môi trường MS : Murashige and Skoog’s NAA : α - Naphlene axetic acid TLMTS : Tỷ lệ mẫu tái sinh TN : Thí nghiệm WPM : Woody Plant Medium DANH MỤC BẢNG Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau ngày nuôi cấy) 20 Bảng 4.3: Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 22 (sau 20 ngày nuôi cấy) .22 Bảng 4.4:Kết nghiên cứu ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) 24 Bảng 4.5:Kết TN nghiên cứu ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 27 (sau tuần nuôi cấy) 27 Bảng 4.6: Kết TN nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 30 (sau tuần nuôi cấy) 30 Bảng 4.7: Kết TN nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết khoai tây cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 32 (sau tuần nuôi cấy) 32 DANH MỤC HÌNH Hình 1: Cây hoa Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe) .3 Hình 4.1: Biểu đồ thể kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau ngày nuôi cấy) 19 Hình 4.2 Biểu đồ thể hiên kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau ngày ni cấy) 20 Hình 4.2: Ảnh: Kết ảnh hưởng số chất khử trùng đến khả tạo mẫu Gừng Núi Đá nấm, vi khuẩn Gừng Núi Đá 21 (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau ngày nuôi cấy) 21 Hình 4.3: Biểu đồ thể kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá 22 (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau 20 ngày nuôi cấy) 22 Hình 3: Ảnh hưởng mơi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau 20 ngày nuôi cấy) 23 Hình 4.4: Biểu đồ thể kêt TN nghiên cứu ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) .25 (sau tuần nuôi cấy) 25 Hình 4.4: Ảnh: Kết TN ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần ni cấy) 26 Hình 4.5: Biểu đồ thể kêt TN nghiên cứu ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá(Zingiber purpureum Roscoe.) 28 (sau tuần nuôi cấy) 28 Hình 4.5: Ảnh: Kết TN ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến khả nhân nhanh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 28 (sau tuần nuôi cấy) 28 Hình 4.6: Biểu đồ thể kết TN nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) 30 Hình 4.6: Ảnh: Kết TN nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 31 (sau tuần nuôi cấy) 31 Hình 4.7: Biểu đồ thể kết TN nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết khoai tây cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá 32 (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) 32 (HSN: 2,30 lần; ++) (HSN: 2,43 lần; ++) (HSN: 2,83 lần; ++) (HSN: 1,57 lần; +) Hình 4.7: Ảnh: Kết TN nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết khoai tây cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá 33 (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) 33 MỤC LỤC PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu nghiên cứu 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu Gừng Núi Đá .3 2.1.1 Phân loại .3 2.1.2 Đặc điểm hình thái .3 2.1.3 Đặc điểm hoa .4 2.1.4 Đặc điểm củ 2.1.5 Đặc điểm phân bố .4 2.1.6 Sinh thái, trồng trọt .4 2.1.7 Thành phần hóa học 2.1.8 Tác dụng dược lý 2.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Khái niệm nuôi mô tế bào thực vật 2.2.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật .6 2.3 Một số chất điều hịa sinh trưởng ni cấy mơ tế bào thực vật 2.3.1 Auxin 2.3.2 Cytokinin 2.4 Tình hình nghiên cứu Gừng Núi Đá Việt Nam giới PHẦN ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 3.1 Vật liệu phạm vi nghiên cứu .10 3.1.1 Vật liệu nghiên cứu 10 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 10 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 10 3.3 Hóa chất thiết bị 10 3.3.1 Hóa chất 10 3.3.2 Thiết bị .10 3.4 Nội dung nghiên cứu 11 3.4.1 Nội dung nghiên cứu 11 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 12 3.5 Phương pháp đánh giá xử lí số liệu 16 3.5.1 Các tiêu theo dõi 16 3.5.2 Phương pháp xử lí số liệu 17 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 18 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 18 4.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) .18 4.1.2.Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn 19 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 21 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số hợp chất hữu tự nhiên đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 23 4.3.1.Kết nghiên cứu ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) .24 4.3.2.Kết nghiên cứu ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 27 4.3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 30 4.3.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết khoai tây cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 32 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 5.1 Kết luận 34 5.2 Kiến nghị 34 PHẦN TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 6.1 Tài liệu tham khảo tiếng Việt 35 6.2 Tài liệu tham khảo tiếng Anh 36 PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Họ gừng bao gồm khoảng 47 chi 1.000 loài, phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, chủ yếu nam đông nam châu Á Ở Việt Nam, biết gần 20 chi gần 100 loài [3], [11] Từ đời Minh Trung Quốc, nhà y học tiếng Lý Thời Châu viết “Bản thảo Cương mục” sau: “gừng đắng mà không hôi xua tà, đuổi ác, ăn sống, ăn chín, ngâm giấm, làm tương, ngâm muối, xào với mật, đường Cũng làm rau, làm kẹo, làm thuốc có lợi” Nước gừng tính ơn có cơng dụng long đờm, chữa ho Vỏ gừng tính mát có cơng dụng hịa tỳ vị, tiêu viêm, sưng Gừng khơ tính nhiệt, dùng ấm có cơng dụng giải hàn, trừ tỳ vị hư hàn Lá gừng tính ơn có cơng dụng hỗ trợ tiêu hóa, hoạt huyết, tiêu nhỏ, chữa ăn nhiều thịt khơng tiêu, làm tiêu vết bầm tím ngã, [9] Ngày nay, với phát triển khoa học kỹ thuật, gừng có tác dụng đặc biệt phát nghiên cứu Cụ thể như: hoạt tính kháng virus, chống oxi hóa kháng khuẩn [18]; tăng cường nhận thức tiềm cho phụ nữ trung niên [21] Tuy nhiên nguồn gen họ gừng có nguy mát nhanh khai thác mức Theo Quyết định số 80/2005/QĐ- BNN Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn từ năm 2005 Gừng Núi Đá xếp vào nhóm giống thực phẩm quý cần bảo tồn [10] Vì vậy, Gừng Núi Đá cần có định hướng bảo tồn đắn để phục vụ xã hội tương lai Ở Việt Nam, có số nghiên cứu lẻ tẻ phân loại thực vật bảo tồn gia đình, cịn nghiên cứu sâu chọn tạo nhân giống lưu giữ bảo quản gừng in vitro chưa có nghiên cứu thực Vì chúng tơi tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng, môi trường số hợp chất hữu tự nhiên đến khả tái sinh, nhân nhanh Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe)” Kết nghiên cứu góp phần hồn thiện quy trình nhân giống lồi gừng nói chung Gừng Núi Đá nói riêng để bảo tồn tạo số lượng giống lớn, bệnh, đồng phục vụ cho sản xuất 1.2 Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng, môi trường số hợp chất hữu tự nhiên đến khả tái sinh, nhân nhanh Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 1.3 Yêu cầu nghiên cứu Xác định chất khử trùng, nồng độ chất khử trùng thời gian khử trùng cho hiệu tạo mẫu Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) vô trùng cao Xác định ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) Xác định ảnh hưởng số hợp chất hữa (nước dừa, dịch chiết khoai tây dịch chiết cà rốt) đến khả sinh trưởng phát triển Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu góp phần xây dựng quy trình kỹ thuật nhân giống Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) phương pháp nuôi cấy in vitro 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn Bảo tồn loại dược liệu q Góp phần nghiên cứu quy trình nhân nhanh in vitro Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) tạo số lượng lớn phục vụ sản xuất, nâng cao thu nhập cho người dân PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu Gừng Núi Đá 2.1.1 Phân loại Theo Võ Văn Chi Sách tra cứu tên cỏ Việt Nam (2007), Gừng Núi Đá phân loại sau [5]: Giới Ngành (Regnum) (Phylum) : Plantae : Magnoliophyta (Angiospermae) Lớp (Class) : Liliopsida (Monocotyledones) Bộ (Ordo) : Zingiberales Họ (Family) : Zingiberaceae Chi Loài (Genus) (Species) : Zingiber :purpureum Roscoe Tên Việt Nam: Gừng Dại, Gừng Đá, Gừng Núi Đá Tên khoa học: Zingiber purpureum Roscoe Tên khác: Cây Ngải, Zơ Rơng, Gừng Gié, Gừng Tía Tên nước ngồi: Zingiber cassumunar Roxb., Bengle (Java) Hình 1: Cây hoa Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe) 2.1.2 Đặc điểm hình thái Cây thân thảo cao 1,5- 2m, có thân rễ lớn củ gừng, màu đỏ, khơng cay gắt có mùi thơm đặc trưng Lá khơng cuống, hình thn, dài nhọn, giáo gốc trịn, đầu thót nhọn, mặt nhẵn, mặt có lơng bột, dài 20-40cm, rộng 23,5cm; lưỡi bẹ dạng vẩy mỏng, bẹ có khía, có lơng [4] 2.1.3 Đặc điểm hoa Cán hoa có lơng, đài trung bình 15-20 cm, vẩy có lơng gốc, hình nhọn giáo, khơng lợp lên nhau; cụm hoa hình thoi, dày hoa, dài khoảng 11 cm, rộng 4-6 cm; cánh hoa dày xếp lợp lên nhau, cánh hoa tạo thành ống, mép màu tía Hoa mau tàn Tràng có ống khơng vượt q bắc; thùy hẹp dài Bao phấn ngắn cánh môi; trung đới dài mềm yếu Cánh mơi hình trịn, chẻ sâu, màu vàng nhạt, có thùy bên nhị lép tạo thành Bầu có lơng Quả nang trịn, cao 1,3 cm Mùa hoa tháng 7-8, mùa tháng 9-10 [4] 2.1.4 Đặc điểm củ Củ có màu đỏ vàng gần giống màu củ cà rốt Nhân dân thường dùng củ làm gia vị làm thuốc [4] Có nơi dùng củ gừng để chữa lỵ mãn tính Tại Ấn Độ, người ta sử dụng thân rễ với mục đích tương tự củ gừng Ở Malayisa, gừng dùng làm thuốc trị giun cho trẻ em nước sắc củ dùng cho phụ nữ sau sinh đẻ Người ta lại ngâm củ rượu dùng thoa bụng cho phụ nữ sinh Thân rễ gừng dại dùng để điều trị bệnh thấp khớp Ở Thái Lan, gừng dại sử dụng với nhiều cơng dụng, cịn dùng làm thuốc tiêu viêm, chữa bong gân đau cơ, vết thương chảy máu [4] 2.1.5 Đặc điểm phân bố Họ gừng (Zingiberaceae) có khoảng 45 chi 1300 loài, phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, chủ yếu Nam Đông Nam châu Á Ấn Độ, Việt Nam, Thái Lan, Malayisa Indonexia Ở nước ta biết đến gần 20 chi gần 100 loài, gặp Lạng Sơn, Hà Tây, Ninh Bình nhiều tỉnh phía Nam Trong đó, nhiều có giá trị [4], [11] 2.1.6 Sinh thái, trồng trọt 2.1.6.1 Sinh thái Đặc điểm sinh thái riêng giống gừng tùy thuộc vào điều kiện vùng trồng Tuy nhiên, chúng có đặc điểm ưa ẩm, ưa sáng chịu bóng Trong tự nhiên, gừng dại thường mọc ven đường, thung lũng nơi ẩm, hốc đá có mùn tán rừng thưa [1] 34 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Sau nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng, khả nhân chồi Gừng Núi Đá môi trường có bổ sung số hợp chất hữu tự nhiên nước dừa, dịch chiết khoai tây dịch chiết cà rốt đưa số kết luận sau: Mẫu Gừng Núi Đá khử trùng hóa chất HgCl 0,1% thời gian phút cho hiệu cao nhất, tỷ lệ mẫu đạt 82,2% Mơi trường thích hợp cho tái sinh chồi Gừng Núi Đá môi trường MS + Đường 30g/l + Agar 5g/l; pH: 5,6-5,8; tỷ lệ mẫu tái sinh đạt 83,33% Môi trường MS + 4,4 mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA + Đường 30g/l + Agar 5g/l + nước dừa, pH = 5,6-5,8 cho khả nhân chồi cao Trong đó, bổ sung nước dừa với nồng độ 50 ml/l môi trường thu kết tốt (hệ số nhân chồi cao đạt 3,57 lần; chất lượng chồi tốt: chồi mập, xanh đậm) Môi trường MS bổ sung dịch chiết khoai tây, cà rốt khơng thích hợp cho nhân chồi Gừng Núi Đá 5.2 Kiến nghị - Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ khác nhau, thời gian khác chất khử trùng khác đến hiệu tạo vật liệu nấm, vi khuẩn - Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường nuôi cấy bổ sung kết hợp nước dừa, dịch chiết khoai tây dịch chiết cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá - Nghiên cứu ảnh hưởng số hợp chất hữu tự nhiên khác dịch chiết nấm men, dịch chiết chuối đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá - Nghiên cứu môi trường rễ giá thể thích hợp cho Gừng Núi Đá 35 PHẦN TÀI LIỆU THAM KHẢO 6.1 Tài liệu tham khảo tiếng Việt Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam tập 1, Nxb Khoa học kỹ thuật Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhi, Lê Thị Muội (1997), Cơng nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Nxb Nơng Nghiệp, Hà Nội Ngơ Xn Bình, Bùi Bảo Hồn, Nguyễn Thúy Hà (2003), Giáo trình cơng nghệ sinh học, Nxb Nông Nghiệp Hà Nội Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng tập 2, Nxb Khoa học Kỹ thuật Hà Nội Võ Văn Chi (2007), Sách tra cứu tên cỏ Việt Nam, Nxb Giáo dục Trịnh Đình Chính, Hồng Triệu Hùng, Nguyễn Thị Hoàng Anh, Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học Gừng dại (Zingiber cassummunar Roxb) tỉnh Kom Tum, Tạp chí dược liệu, tập 12, số 3+4/2007, trang 89-91 Nguyễn Việt Cường, Hồ Thanh Tâm, Nguyễn Bá Nam, Hà Thị Mỹ Ngân, Lê Kim Cương, Nguyễn Phúc Huy, Dương Tấn Nhựt (2013), “Nghiên cứu ảnh hưởng số hợp chất hữu bạc nitrat (AgNO 3) lên sinh trưởng phát triển sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) nuôi cấy in vitro, Hội nghị khoa học tồn quốc 2013 Trịnh Đình Đạt (2009), Cơng nghệ sinh học (công nghệ di truyền), tập 4, Nxb giáo dục Ngọc Minh, Sỹ Cảo (2009), Hành, tỏi, gừng 700 thuốc trị bệnh, Nxb Thanh Hóa 10 Quyết định số 80/2005/QĐ-BNN, ngày 05/12/2005 Bộ trưởng Nông nghiệp Phát triển Nơng thơn 11 Hồng Thị Sản (2009), Phân loại thực vật, Nxb Giáo dục 12 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tân (2009), Sinh lý học thực vật, Nxb Giáo dục 36 6.2 Tài liệu tham khảo tiếng Anh 13 Abbas M.S., Taha H.S., Aly U.I., El-Shabrawi H.M and Gaber E.I (2011), “In vitro propagation of ginger (Zingiber officinale Rosco)”, Journal of Genetic Engineering and Biotechnology, 9(2), 165-172 14 Baque A, Shin YK, Elshmari T, Lee EJ, Paek KY (2001), “Effect of light quality, sucrose and coconut water concentration on the micropagation of Calanthe hybrids (‘Bukduseong’ x ‘Hyesung’ and ‘Chunkwang’ x ‘Hyesung’)”, AJSC, 5(10), 1247-1254 15 Bordoloi A.K., Sperkova J and Leclercq P.A (1999), “Essential Oils of Zingiber cassumunar Roxb From Northeast India:” Journal of Essential Oil Research, 11(4), 441-445 16 Chaiwongsa R., Ongchai S., Boonsing P., Kongtawelert P., Panthong A and Reutrakul V (2013), “Active Compound of Zingiber Cassumunar Roxb Down-Regulates the Expression of Genes Involved in Joint Erosion in a Human Synovial Fibroblast Cell Line” African Journal of Traditional, Complementary and Alternative Medicines, 10(1) pp:40-48 17 Chirangi P and Sharma G L (2005), “In vitro propagation and microrhizome induction in Zingiber cassumunar (Roxb.) : an antioxidant-rich medicinal plant”, Internation journal of food, agriculture and environment, 3(1), 139142 18 Jung San Chang, Kuo Chih Wang, Chia Feng Yeh, Den En Shieh, Lien Chai Chiang (2013), “Fresh ginger (Zingiber officinale) has anti-viral activity against human respiratory syncytial virus in human respiratory tract cell lines” 19 Murdad R, Latip MA, Aziz ZA, Ripin R (2010), “Effects of carbon source and potato homogenate on in vitro growth and development of Sabah’s Endangered orchid: Phalaenopsis gigantea”, AsPac J Mol Biol Biotechnol, 18 (1), 199-202 20 Molnar Z, Virag E, Ordog V (2011), “Natural subtances in tissue culture media of higher plants”, Acta Biol Szeged, 55 (1), 123-127 21 Naritsara Saenghong, Jintanaporn Wattanathorn, Supaporn Muchimapura, Terdthai Tongun, Nawanant Piyavhatkul, Chuleratana Banchonglikitkul, 37 Tanwarat Kajsongkram (2012), “Zingiber officinale Improves Cognitive Function of the Middle-Aged Healthy Women” 22 Tg Siti Amirah Tg Kamazeri, Othman Abd Samah, Muhammad Taher, Deny Susanti, Haitham Qaralleh (2012), “Antimicrobial activity and essential oils of Curcuma aeruginosa,Curcuma mangga, and Zingiber cassumunar from Malaysia”, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 5(3), 202-209 23 Thorpo TA, Stasolla C, Yeung E-C, de Klerk GJ, Roberts A, George EF (2008), “The components of tissue culture media II: Organic additions, osmotic and pH effects, and support systems” George EF, Hall MA and de Klerk GJ, eds., Plant propagation by tissue culture, 3rd edition Springer-Verlag, Dordrecht, 115-173 PHỤ LỤC Phụ lục : Kết xử lý số liệu Bảng 4.1: Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn (sau ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE MSKN FILE 11 22/ 5/** 2:59 PAGE anh huong cua mot so chat khu trung nghien cuu den hieu qua tao mau sach VARIATE V003 MSKN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 10173.8 * RESIDUAL 3391.26 148.297 182.94 0.000 18.5372 * TOTAL (CORRECTED) 11 10322.1 938.371 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 11 22/ 5/** 2:59 PAGE anh huong cua mot so chat khu trung nghien cuu den hieu qua tao mau sach MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS MSKN 3 60.0000 3 55.5533 77.7767 SE(N= 3) 0.000000 2.48577 5%LSD 8DF 8.10585 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 11 22/ 5/** 2:59 PAGE anh huong cua mot so chat khu trung nghien cuu den hieu qua tao mau sach F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | NO OBS MSKN BASED ON BASED ON TOTAL SS RESID SS 12 48.333 30.633 | 4.3055 | % | | 8.9 0.0000 | | Bảng 4.2: Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn (sau ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE MSKN FILE 12 5/ 6/** 8:42 PAGE anh huong cua thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao mau sach nam, vi k VARIATE V003 MSKN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 3466.40 * RESIDUAL 1155.47 118.549 77.97 0.000 14.8186 * TOTAL (CORRECTED) 11 3584.95 325.904 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 12 5/ 6/** 8:42 PAGE anh huong cua thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao mau sach nam, vi k MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS MSKN 48.8900 75.5533 3 82.2233 42.2233 SE(N= 3) 2.22251 5%LSD 8DF 7.24737 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 12 5/ 6/** 8:42 PAGE anh huong cua thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao mau sach nam, vi k F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | NO OBS MSKN BASED ON BASED ON TOTAL SS RESID SS 12 62.222 18.053 | 3.8495 | % | | 6.2 0.0000 | | Bảng 4.3: Kết ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá(Zingiber purpureum Roscoe.) (sau 20 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMTS FILE TN3 22/ 5/** 0:47 PAGE anh huong cua cac moi truong MS, B5, WPM den kha nang tai sinh choi gung nui da VARIATE V003 TLMTS LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 2022.22 * RESIDUAL 1011.11 200.000 30.33 0.001 33.3334 * TOTAL (CORRECTED) 2222.22 277.778 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN3 22/ 5/** 0:47 PAGE anh huong cua cac moi truong MS, B5, WPM den kha nang tai sinh choi gung nui da MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLMTS 83.3333 63.3333 3 46.6667 SE(N= 3) 3.33333 5%LSD 6DF 11.5305 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN3 22/ 5/** 0:47 PAGE anh huong cua cac moi truong MS, B5, WPM den kha nang tai sinh choi gung nui da F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 9) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON OBS TLMTS TOTAL SS RESID SS 64.444 16.667 | 5.7735 | % | | 9.0 0.0010 | | Bảng 4.4:Kết ảnh hưởng dịch chiết nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.)(sau tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE ND 25/ 5/** 7: PAGE anh huong cua nuoc dua den kha nang nhan choi Gung Nui Da VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 7.29600 * RESIDUAL 1.82400 195.43 0.000 10 933338E-01 933338E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 7.38933 527809 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE ND 25/ 5/** 7: PAGE anh huong cua nuoc dua den kha nang nhan choi Gung Nui Da MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN 2.36667 3.56667 3 2.76667 2.23333 1.43333 SE(N= 3) 0.557775E-01 5%LSD 10DF 0.175757 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE ND 25/ 5/** 7: PAGE anh huong cua nuoc dua den kha nang nhan choi Gung Nui Da F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 15) SD/MEAN | NO OBS HSN BASED ON BASED ON TOTAL SS RESID SS 15 2.4733 0.72651 | % | | | | 0.96609E-01 3.9 0.0000 | Bảng 4.5:Kết ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến khả nhân nhanh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE KT 25/ 5/** 15:21 PAGE anh huong cua dich chiet khoai tay den kha nang nhan choi gung nui VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES SQUARES DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 1.89667 * RESIDUAL 632222 94.83 0.000 533336E-01 666670E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.95000 177273 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KT 25/ 5/** 15:21 PAGE anh huong cua dich chiet khoai tay den kha nang nhan choi gung nui MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN 2.36667 2.60000 3 2.10000 1.53333 SE(N= 3) 0.471406E-01 5%LSD 8DF 0.153721 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KT 25/ 5/** 15:21 PAGE anh huong cua dich chiet khoai tay den kha nang nhan choi gung nui F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | NO OBS HSN BASED ON BASED ON TOTAL SS RESID SS 12 2.1500 0.42104 | % | | | | 0.81650E-01 3.8 0.0000 | Bảng 4.6:Kết ảnh hưởng dịch chiết cà rốt đến khả nhân nhanh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE CR 25/ 5/** 6:26 PAGE anh huong cua dich chiet ca rot den kha nang nhan choi Gung Nui Da VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 1.60250 * RESIDUAL 534167 106.83 0.000 400003E-01 500004E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.64250 149318 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CR PAGE 25/ 5/** 6:26 anh huong cua dich chiet ca rot den kha nang nhan choi Gung Nui Da MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN 2.30000 2.33333 3 2.63333 1.63333 SE(N= 3) 0.408250E-01 5%LSD 8DF 0.133126 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CR 25/ 5/** 6:26 PAGE anh huong cua dich chiet ca rot den kha nang nhan choi Gung Nui Da F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | NO OBS HSN BASED ON BASED ON TOTAL SS RESID SS 12 2.2250 0.38642 | % | | | | 0.70711E-01 3.2 0.0000 | Bảng 4.7: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết khoai tây cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá(Zingiber purpureum Roscoe.)(sau tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE KTCR PAGE 25/ 5/** 6:50 anh huong cua dich chiet khoai ta va ca rot den kha nang nhan choi Gung Nui Da VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 2.51667 * RESIDUAL 838889 167.78 0.000 400002E-01 500003E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.55667 232424 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KTCR PAGE 25/ 5/** 6:50 anh huong cua dich chiet khoai ta va ca rot den kha nang nhan choi Gung Nui Da MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN 2.30000 2.43333 3 2.83333 1.56667 SE(N= 3) 0.408249E-01 5%LSD 8DF 0.133126 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KTCR PAGE 25/ 5/** 6:50 anh huong cua dich chiet khoai ta va ca rot den kha nang nhan choi Gung Nui Da F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | NO OBS HSN BASED ON BASED ON TOTAL SS RESID SS 12 2.2833 0.48210 | % | | | | 0.70711E-01 3.1 0.0000 | Phụ lục 2: Môi trường Table 1: Preparation of modified MurashigeAND Skoog’s MS medium Component Stock Solution (g/l) I NH4NO3 KNO3 82,5 95 II MgSO4 7H2O MgSO4 4H2O ZnSO4 7H2O CuSO4 5H2O 37,0 2,23 1,058 0,0025 III CaCl2.2H2O KI CoCl2.6H2O 44,0 0,083 0,0025 Bottle IV V KH2PO4 H3BO3 Na2MoO4.2H2O FeSO4 7H2O Na2EDTA 2H2O 17,0 0,62 0,025 2,784 3,724 Amount to take preparation (ml) Final concentratic (mg/ l) 20 1.650,0 1.900,0 10 370,0 22,3 10,6 0,025 10 440,0 0,83 0,025 10 170,0 6,2 0,25 10 27,85 37,25 0,5 2,0 0,1 0,5 0,5 2,0 0,1 0,5 mg/100ml Vitamin Nicotinic acid Glycine ThiamineHCl PyridoxineHCl 100 100 100 100 Inositol 100,0 Sucrose 30.000,0 Agar 8.000,0 PH 5,8 Table 2: Preparation of modified Gamborg’s B5 medium (E-24medium ) Stock Bottle Component Solution (g/l) Amount to take preparation (ml) Final concentratic (mg/ l) KNO3 250 20 2500,0 (NH4)2SO4 13,4 10 134,0 MgSO4.7H2O 15,0 NaH2PO4.H2O 15 10 150,0 MnSO4.H2O 1,0 10 10,0 H3BO3 0,3 3,0 ZnSO4.7H2O 0,2 2,0 KI 0,075 10 0,75 Na2MoO4.2H2O 0,025 10 0,25 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 FeSO4.7H2O 2,785 Na2EDTA 3,725 37,25 CaCl2.2H2O 15,0 150,0 10 Inositol 27,85 160 mg/100ml Vitamins Nicotinic acid 100 1,0 Thiamine HCL 100 10 10,0 Pyridoxine HCL 100 1,0 Sucrose 8000,0 Agar PH 5,6 - 5,8 Table 3:Môi trường WPM - Woody Plant Medium Muối khoáng Nồng độ (mg/l) Muối khoáng Nồng độ (mg/l) NH4NO3 400 H3BO3 6,2 Ca(NO3)2.4H2O 556 ZnSO4.7H2O 8,6 CaCl2.2H2O 96 MgSO4.7H2O 370 CuSO4.5H2O 0,25 K2SO4 990 FeSO4.7H2O 27,8 KH2PO4 170 MgSO4.4H2O 22,3 Na2MoO4.2H2O 0,25 Na2EDTA.2 H2O 37,2 Các chất hữu Myo-inositol 100 Nicotinic acid 0,5 Pyridoxine HCL 0,5 Thiamine HCL 1,0 Glycine 2,0 Agar 6,0 Sucrose 20 pH 5,6 - 5,8 ... Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe. ) 21 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số hợp chất hữu tự nhiên đến khả nhân chồi Gừng. .. ? ?Nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng, môi trường số hợp chất hữu tự nhiên đến khả tái sinh, nhân nhanh Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe) ” Kết nghiên cứu góp phần hồn thiện quy trình nhân giống... - Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường (MS, WPM, B5) đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe. ) Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng số hợp chất hữu đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber