nuôi cấy lát mỏng potx

Trường CĐSP Đà Lạt khoa: Tự Nhiên lớp: CNSH K34 Bài báo cáo: Nuôi cấy lớp lát mỏng, hiện tượng hóa nâu, hiện tượng thủy tinh thể, nuôi cấy chồi bất định, tạo củ giống lily bằng phương pháp nuôi cấy invitro, phương pháp thủy canh Nhóm thực hiện: Nguyễn Tiến Chiến Phạm Thanh Huyền Võ Tiến Diễn I. Sự phát sinh cơ quan từ lớp mỏng của giống điều 1. M Đ UỞ Ầ  Cây điều là cây công nghiệp đem lại hiệu quả kinh tế cao ở một số nước thuộc vùng nhiệt đới Châu Á và Châu Phi do nhân hạt điều có giá trị cao trong xuất khẩu.  Thông thường cây được nhân giống từ hạt, nhưng phương pháp này đem lại tính không đồng nhất về di truyền .  Các phương pháp nhân giống vô tính truyền thống như giâm cành, ghép cành thường được sử dụng để nhân các dòng điều có năng suất cao, tuy nhiên hệ số nhân giống không đáp ứng được nhu cầu.  Nuôi cấy lớp mỏng tế bào là một phương pháp cho nhiều ưu thế hơn so với những phương pháp nhân giống in vitro truyền thống khác và được ứng dụng thành công trên nhiều loài cây khác nhau  Tuy nhiên, việc ứng dụng phương pháp nuôi cấy lớp mỏng tế bào ở cây thân gỗ chưa được công bố nhiều. 2. Vật liệu và phương pháp a. Vật liệu: - Mẫu nuôi cấy là hạt trưởng thành của giống điều cao sản BO1 b. Phương pháp: - Hạt được khử trùng bằng dung dịch NaOCl với nồng độ 1% trong 24 giờ, sau đó rửa lại bằng nước cất vô trùng 3 lần - Cây mầm phát triển từ hạt nuôi cấy trên môi trường khoáng MS không có đường và vitamin sau 2 tuần được dùng làm nguyên liệu cho thí nghiệm. - Lớp mỏng cắt ngang từ 2 loại vật liệu là đốt tử diệp và đốt thân của cây mầm (có bề dày khoảng 0,3-0,5mm) được cấy trên các đĩa petri (Ф = 10cm) chứa 20ml môi trường. - Môi trường nuôi cấy là môi trường MS có bổ sung nước dừa 10%, adenine sulphate 40mg/L, saccharose 20g/L, maltose 10 g/L, agar 9g/L, than hoạt tính 3g/L. - Môi trường được bổ sung các chất điều hoà sinh trưởng thực vật là benzyladenine (BA), kinetin (KN) và naphthalene -1-acetic acid (NAA) ở các nồng độ khác nhau. pH của môi trường trước khi khử trùng là 5,9. - Môi trường được khử trùng ở 121oC, 1 atm trong 20 phút. Phòng nuôi cây có nhiệt độ 25 ± 2oC, độ ẩm 60 ± 5%. Đĩa petri đựng mẫu được che tối trong 3 ngay đầu, với thời gian chiếu sáng 12 giờ/ngày. -Mỗi đĩa petri có 24 mẫu cấy của mỗi loại vật liệu (đốt thân mầm hoặc đốt tử diệp). -Thí nghiệm có 3 yếu tố là 3 chất điều hòa tăng trưởng thực vật, mỗi yếu tố có hai mức độ. -Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên và mỗi nghiệm thức gồm 4 đĩa petri lập lại 3 lần. Số liệu được phân tích thống kê bằng phần mềm MSTATC . -Thí nghiệm được theo dõi trong 28 ngày. 3. K T QUẾ Ả - Kết quả thí nghiệm sau 28 ngày nuôi cấy cho thấy các lát mỏng ở vùng đốt thân chỉ cho một chồi còn ở vùng đốt tử diệp thì cho nhiều chồi hơn. - Điều này cho thấy là do vùng sinh mô chờ hiện diện chung quanh đốt tử diệp dễ bị kích hoạt dưới tác động của chất điều hòa sinh trưởng thực vật. Chồi hình thành từ lớp mỏng đốt thân mầm và đốt tử diệp sau 28 ngày. - Số chồi cao nhất (5, 7 chồi) từ lớp mỏng ở đốt tử diệp thuộc nghiệm thức 6 có bổ sung 10mg/l BA, 1mg/l KN và 0,5mg/l NAA. Lớp mỏng tạo chồi thấp nhất (3 chồi) khi được nuôi trên môi trường có bổ sung 5mg/l BA v à 0,5mg/l NAA. - Ảnh hưởng của BA và KN lên sự tạo chồi của lớp mỏng vung đốt tử diệp thấy rõ nhất khi nồng độ BA 10mg/L và KN 1mg/L, trong khi ảnh hưởng của NAA không thấy rõ lắm trong thí nghiệm này. - Đối với đốt thân mầm, nồng độ của các chất điều hoà sinh trưởng thực vật được sử dụng trong thí nghiệm này không đem lại sự khác biệt về số chồi hình thành ở cả 8 nghiệm thức. S ch i t o thành t l p lát m ng đ t ố ồ ạ ừ ớ ỏ ố thân m m và đ t t di p sau 28 ngàyầ ố ử ệ  Các chồi hình thành từ lớp mỏng được tiếp tục cấy chuyền sang môi trường MS có bổ sung 1mg/l BA và 1mg/l KN để phát triển thành cây với số lần cấy chuyền là 2 tuần/lần. Chiều cao cây trung bình đạt 3-4cm sau 2 tháng cấy chuyền. [...]...Cụm chồi cây điều phát triển sau 2 tháng cấy chuyền 4. KẾT LUẬN - Phương pháp nuôi cấy lớp mỏng tế bào có thể được sử dụng để tạo chồi trực tiếp từ trục thượng diệp của hạt điều nảy mầm Số chồi được tạo trực tiếp từ lớp mỏng đốt tử diệp là cao nhất khi môi trường có bổ sung 10mg/l BA, 1mg/l KN v à 0,5mg/l NAA - Đối với nuôi cấy lớp mỏng của đốt thân mầm thì chồi có thể phát triển trên... ảnh hưởng đến cây bị thủy tinh thể + giảm etylen trong bình nuôi cấy bằng cách thông khí tốt + tăng nồng độ ánh sáng và giảm nhiệt độ phòng cấy IV Quy trình tạo củ lily bằng phương pháp nuôi cấy in vitro - Lily là cái tên được đặt cho loài hoa đẹp, bền và đa số có toả hương thơm dịu dàng Quy trình nhân giống cây hoa Lily bằng phương pháp nuôi cấy in-vitro được tiến hành qua các công đoạn sau: Khử trùng... chỉ có hiệu quả khi cây con được nhân giống chuyển ra đồng ruộng có tỉ lệ sống cao Có hiện tượng trong nuôi cấy mô là xuất hiện cây in vitro thủy tinh thể - Khi chuyển ra khỏi bình nuôi cấy, cây con đễ dàng bị mất nước và tỉ lệ sống thấp Đây là một dạng bệnh sinh lý Dạng này thường thấy khi nuôi cấy trên môi trường lỏng hay môi trường thạch có hàm lượng thạch thấp, đặc biệt khi sự trao đổi khí thấp,... tăng nồng độ đường trong nuôi cấy và dùng các chất có áp suất thẩm thấu cao, nhưng phương pháp này làm thay đổi sự tổng hợp cấu trúc không gian của diệp lục và ức chế hình thành chồi + giảm gây vết thương trên mẫu qua chất khử trùng và tiếp xúc với môi trường cấy ít nhất ABA ngăn chặn được sự hóa thủy tinh thể ở một số loài cây trồng + giảm nồng độ đạm trong môi trường nuôi cấy +chuyển cây in vitro... gluta thione, và mecaptoethanol Phương pháp quan trọng là phối hợp vitaminC và axit citric  Phương pháp đề nghị: + sử dụng mẫu cấy nhỏ từ mô sẹo + gây vết thương trên mẫu nhỏ nhất khi khử trùng + ngâm mẫu vào dung dịch vitamin C và axit citric vài giờ trước khi cấy + Nuôi cấy mẫu trong môi trường lỏng, O2 thấp không có đèn 1-2 tuần chuyển mẫu từ môi trường có nồng độ chất kích thích sinh trưởng thấp... thể + Nhận thấy là có sự khác nhau về hình thành lớp sáp ở cây nuôi cấy mô và cây ngoài tự nhiên Lượng sáp chứa trong cây ngoài vườn ươm cao hơn hẳn cây in vitro Tế bào có chứa nhiều phân tử có cực dễ dàng nhận phân tử nước gắn trên nó, gia tăng độ mất nước và tốc độ hô hấp của tế bào trong nhân vô tính và đưa đến sự chết của mô trong nuôi cấy - Ngăn chặn quá trình thủy tinh thể + giảm sự hút nước bằng... nồng độ phytohormone  Sự phát triển các chồi bất định gián tiếp đầu tiên qua giai đoạn hình thành callus cơ sở từ các chồi được tách trong nuôi cấy Các chồi sau đó phát triển từ ngoại vi mô callus và không có quan hệ ban đầu với các mô có mạch dẫn của mẫu vật VI. Nuôi trồng thủy canh  Thủy canh là kỹ thuật trồng cây không dùng đất  mà trồng trực tiếp vào môi trường dinh dưỡng  hoặc giá thể mà không phải là đất. các giá thể có ... 5mg/L và có hoặc không có kinetin và NAA   II. Hiện tượng hóa nâu    ­ Hiện tượng hóa mẫu hóa nâu hay bị đen là chết  mẫu hay làm giảm sự tăng trưởng.     ­ Nguyên nhân của hiện tượng này là do mẫu  nuôi cấy có chứa nhiều tannin hay hydroxyphenol  có nhiều trong mô già hơn mô sẹo ­ Một số phương pháp làm giảm sự hóa nâu mẫu: + tách các phần tử phenol ra khỏi môi trường + bổ sung các chất khử redox (oxidation­redution) ... pháp nuôi cấy in-vitro được tiến hành qua các công đoạn sau: Khử trùng mẫu Nhân giống invitro - Tạo mô sẹo - Tạo phôi - Tạo củ con từ phôi - Tạo củ bi - Tạo củ lớn - Tạo củ thương phẩm V Phương pháp nuôi cấy chồi bất định  Đỉnh chồi bất định mới có thể phát triển hoặc trực tiếp trên mẫu vật hoặc gián tiếp từ mô callus, mà mô callus này hình thành trên bề mặt vết cắt của mẫu vật Một số loại mẫu vật... phenol vào môi trường + ngăn chặn sự hoạt động của enzim phenolase + giảm lượng phenol có sẵn trong mẫu bằng môi trường  lỏng giống môi trường rắn + mẫu chuẩn bị có vết cắt nhỏ, để ngoài vài giờ trước  khi cấy,  hay nơi cấy trong môi trường không có ánh  sáng  Than hoạt tính được đưa vào môi trường để hấp thụ chất kìm hãm phenol, ngăn chặn quá trình hóa nâu hay đen, đặc biệt có hiệu quả trên các loại phong lan, . Nhiên lớp: CNSH K34 Bài báo cáo: Nuôi cấy lớp lát mỏng, hiện tượng hóa nâu, hiện tượng thủy tinh thể, nuôi cấy chồi bất định, tạo củ giống lily bằng phương pháp nuôi cấy invitro, phương pháp thủy.  Tuy nhiên, việc ứng dụng phương pháp nuôi cấy lớp mỏng tế bào ở cây thân gỗ chưa được công bố nhiều. 2. Vật liệu và phương pháp a. Vật liệu: - Mẫu nuôi cấy là hạt trưởng thành của giống điều. thể. + giảm etylen trong bình nuôi cấy bằng cách thông khí tốt + tăng nồng độ ánh sáng và giảm nhiệt độ phòng cấy IV. Quy trình tạo củ lily bằng phương pháp nuôi cấy in vitro - Lily là cái tên