Tiểu luận ENZYME GIỚI hạn

Trong công nghệ di truyền muốn tạo ra ADN tái tổ hợp để đưa vào tế bào chủ cần phải có công cụ cắt plasmid hình vòng và đoạn ADN của tế bào rồi cho chúng nối lại với nhau. Công cụ cắt ADN là các enzym giới hạn 1.Enzyme giới hạn là gì? Enzym giới hạn là enzym có khả năng nhận biết những đoạn trình tự ADN nhất định và cắt ADN ở ngay thời điểm này hay ở điểm kế cận. Tuỳ theo phương thức cắt và nguồi gốc của enzym giới hạn mà người ta phân loại và đặt tên cho các enzym giới hạn đó. Ví dụ : E.coRI, E.coRV, BamHI, HaeIII, Smal, …

GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN : NGUYỄN THỊ VÂN ANH THÀNH VIÊN THỰC HIỆN:

TRẦN THĂNG MAI THỊ HỒNG ĐINH THỊ MỸ LIÊN

NỘI DUNG :

1 EZYME GIỚI HẠN LÀ GÌ ?

2 PHÂN LOẠI ENZYME GIỚI HẠN

3 CÁCH GỌI TÊN

4 ỨNG DỤNG

Trong công nghệ di truyền muốn tạo ra ADN tái tổ hợp để đưa vào tế bào chủ cần phải có công cụ cắt plasmid hình vòng và đoạn ADN của tế bào rồi cho chúng nối lại với nhau Công cụ cắt ADN là các enzym giới hạn

1.Enzyme giới hạn là gì?

Enzym giới hạn là enzym có khả năng nhận biết những đoạn trình tự ADN nhất định và cắt ADN ở ngay thời điểm này hay ở điểm kế cận Tuỳ theo phương thức cắt và nguồi gốc của enzym giới hạn mà người

ta phân loại và đặt tên cho các enzym giới hạn đó

Các enzyme giới hạn có 2 đặc tính :

- Không cắt các liên kết Photphodieste ở đầu đoạn tận cùng thay vào đó là cắt bên trong phân tử DNA

- Chỉ cắt khi nhận ra các trình tự đặc thù thường gồm 4-8

nucleotid

2.Phõn loại enzyme giới hạn

Cỏc enzym giới hạn được phõn thành 3 kiểu I, II và III

I Enzym đa chức năng

nucleaza / methylaza, đa tiểu phần, ≈ 400.000 dalton

ATP

Mg 2+

SAM

Cắt ngẫu nhiên trên phân tử ADN sợi kép cách trình tự giới hạn ≈ 4000 - 7000 bp

II Endonucleaza /

methylaza Mg

2+ Cắt phân tử ADN sợi kép thành

2 phần ở vị trí giới hạn III Enzym đa chức năng

nucleaza / methylaza, đa tiểu phần, ≈ 250.000 dalton

ATP

a Mg 2+

b SAM

Có trình tự nhận biết đặc hiệu gồm 5 hoặc 6 bp, nh ng cắt cách trình tự này ≈ 10 - 27 bp

về phía đầu 3’

Enzyme giới hạn loại II được sử dụng chủ yếu vì nó cắt tại vị trí giới hạn thường cắt ở trình tự dọc theo chiều xuôi-ngược như nhau

Phải chọn enzyme giới hạn cắt ở 2 đầu gen nhưng không cắt bên trong gen

Các vị trí cắt của Enzym giới hạn

Tªn enzym Tr×nh tù nhËn biÕt

Một số enzyme giới hạn cắt trên mạch đơn :

3.Cách gọi tên

Tên enzym giới hạn được ghép bởi chữ cái đầu tiên là tên chi và hai

chữ tiếp theo là hai chữ cái tên loài của vi sinh vật mà enzym được tách chiết Nhưng chữ và số La mã tiếp theo là tên của chủng và dòng của loài sinh vật cụ thể đã tách chiết enzym

Ví dụ: E.coRI (thuộc chi Escherichia, loài coli, chủng Ry 13)

Một số loại khác như E.coRV, BamHI, HaeIII, Smal, …

Enzym giới hạn được gọi tên dựa vào vi khuẩn mà chúng được phân lập theo cách dưới đây :

E Escherichia (giống )

I First identified Order ID'd in bacterium

4 Ứng dụng

Ngày nay người ta biết rất nhiều enzyme khác nhau loại này và chúng là một trong những công cụ sinh học phân tử thiết yếu, đặc biệt thường gặp trong các ứng dụng dòng hóa gene hay phân tích DNA.

đúng khung đọc theo đúng chiều mong muốn,…

- Cắt một trình tự đặc hiệu bằng cách tạo ra đoạn lai RNA/DNA

- Loại đi đầu Poly (A) của phân tử mRNA trong điện di để làm giảm hiện tượng nhiễu khi phân tích RNA

- Loại bỏ phân tử mRNA khi tổng hợp cDNA

d Exonuclease VII (Exo VII) : cắt bỏ đầu thừa trên phân tử DNA sợi kép.Phối hợp với nuclease S1 để xác định kích thước và lập bản đồ các trình tự intron.

e Nuclease S1 :

- Cắt bỏ cấu trúc kẹp tóc khi tổng hợp cDNA

- Tạo các phân tử DNA/RNA không đầu thừa để xác định chiều dài và trình tự mã hoá.

- Xác định intron,