Western blot là phương pháp có độ nhạy cao dựa trên tính đặc hiệu của kháng thể để phát hiện protein đã được điện di trên gel sdspage (sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis) và chuyển lên màng lai . Western blot cho phép xác định sự có mặt, trọng lượng phân tử, định lượng protein có mặt trong các mẫu khác nhau. Western blot còn có tên gọi khác là western blotting hay là phương pháp lai thấm protein. Western blot là phương pháp có độ nhạy cao dựa trên tính đặc hiệu của kháng thể để phát hiện protein đã được điện di trên gel sdspage (sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis) và chuyển lên màng lai . Western blot cho phép xác định sự có mặt, trọng lượng phân tử, định lượng protein có mặt trong các mẫu khác nhau. Western blot còn có tên gọi khác là western blotting hay là phương pháp lai thấm protein.
Trường : ĐH NÔNG LÂM - HUẾ Khoa : CƠ KHÍ CÔNG NGHỆ GVHD : Vân Anh Lớp : Bảo Quản Chế Biến 41 Nhóm : 2 SEMINAR CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM 2 THÀNH VIÊN THỰC HIỆN 1. NGUYỄN THỊ MĨ LỆ 2. NGUYỄN BÁ HÒA 3. LÊ THANH NHÂN 4. PHẠM NGUYÊN HẢI 3 Giới thiệu chung về kỹ thuật Western Blot Western blot là phương pháp có độ nhạy cao dựa trên tính đặc hiệu của kháng thể để phát hiện protein đã được điện di trên gel sds-page (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis) và chuyển lên màng lai . Western blot cho phép xác định sự có mặt, trọng lượng phân tử, định lượng protein có mặt trong các mẫu khác nhau. Western blot còn có tên gọi khác là western blotting hay là phương pháp lai thấm protein. 4 Hình ảnh về kỹ thuật Western blot 5 Các bước tiến hành trong kỹ thuật Western blot Protein được phân tách bằng điện di trên gel SDS-PAGE. Các protein được chuyển sang màng lai nitrocellulose, giữ nguyên vị trí như đã phân tách trên gel. Ủ màng lai đã cố định protein với một kháng thể sơ cấp (primary antibody). Kháng thể sơ cấp là một kháng thể đặc hiệu, sẽ bám vào protein và tạo thành một phức hợp protein-Kháng thể đối với protein 6 Tiếp theo ủ màng lai với một kháng thể thứ cấp (secondary antibody) có enzyme (alkalin phosphatase hoặc horseradish peroxidase) đi kèm. Kháng thể thứ cấp sẽ bám vào kháng thể sơ cấp giống như kháng thể sơ cấp đã bám vào protein. Tiếp tục ủ màng lai trong một hỗn hợp phản ứng đặc hiệu với enzyme. Nếu mọi việc đều diễn ra một cách chính xác sẽ phát hiện thấy các băng ở bất kỳ nơi nào có mặt phức hợp protein-Kháng thể sơ cấp,kháng thể thứ cấp. Ðặt một phim nhạy cảm với tia X lên màng lai để phát hiện các điểm sáng phát ra do enzyme 7 Sơ đồ kỹ thuật Western blot 8 Ứng dụng của kỹ thuật Western blot Western Blot phát hiện kháng thể HIV là một kỹ thuật trong đó vi rút toàn phần tinh chế được điện di trong gel polyacrylamide và được chuyển sang giấy nitrocellulose ủ với huyết thanh. Kháng thể được đánh dấu bằng enzyme(hoặc bằng chất phát huỳnh quang) thông qua kỹ thuật Western blot phát hiện ra protein đặc hiệu Kết luận được chắc chắn 100%,khi người bệnh có xét nghiệm HIV(+) với phương pháp western-Blot. Phương pháp này phát hiện một loạt nhiều kháng thể đặc hiệu,chống nhiều loại kháng nguyên khác nhau của virus HIV. Western blot loại trừ được phản ứng dương tính giả. 9 Hình ảnh chung của kỹ thuật Western blot 10 . Trường : ĐH NÔNG LÂM - HUẾ Khoa : CƠ KHÍ CÔNG NGHỆ GVHD : Vân Anh Lớp : Bảo Quản Chế Biến 41 Nhóm : 2 SEMINAR CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM 2 THÀNH VIÊN THỰC HIỆN 1. NGUYỄN THỊ MĨ LỆ 2. NGUYỄN. màng lai . Western blot cho phép xác định sự có mặt, trọng lượng phân tử, định lượng protein có mặt trong các mẫu khác nhau. Western blot còn có tên gọi khác là western blotting hay. lai để phát hiện các điểm sáng phát ra do enzyme 7 Sơ đồ kỹ thuật Western blot 8 Ứng dụng của kỹ thuật Western blot Western Blot phát hiện kháng thể HIV là một kỹ thuật trong đó vi rút toàn