Tổng quan về ENZYM LIPASE
Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam CHƯƠNG I : TỔNG QUAN VỀ ĐẶC ĐIỂM CỦA ENZYM LIPASE 1. Định nghĩa Lipase Lipase (triacylglycerol acylhydrolase, EC 3.1.1.3) Là enzym xúc tác cho phản ứng thủy phân triacylglycerol ( dầu thực vật, mỡ động vật ) tạo thành glixerin và axit béo tương ứng. Lipase xúc tác phản ứng thuỷ phân lần lượt từng liên kết α - ester trong phân tử chứ không phải c ắt đứt cả 3 liên kết ester cùng lúc. Có hoạt tính mạnh đối với cơ chất không tan trong nước, thể hiện hoạt tính bề mặt. Hoạt động mạnh trong hệ nhũ hóa, đặc biệt là hệ nhũ đảo (nước trong dầu). 2. Phân loại và cấu trúc của lipase 2.1. Phân loại Theo nguồn gốc: Lipase từ động vật : thu nhận thường khó và hiệu quả kinh tế không cao Lipase từ thực vật Lipase từ vi sinh vật : vi sinh vật là nguồn nguyên liệu vô tận để sản xuất enzym với quy mô công nghiệp lớn, đồng thời việc thu nhận chế phẩm cũng dễ dàng và có thể thoã mãn trong 1 mức độ lớn nhu cầu của các ngành công nghiệp khác nhau. Theo tính chất: Lipase có tính đặc hiệu vò trí C. (cylindracae) rugosa Corynebacterium Staphylococus aureus Lipase có tính đặc hiệu cơ chất : Cơ chất có khả năng kết hợp vaò trung tâm hoạt động của enzym và bò chuyển hoá dưới tác dụng của enzym. C. rugosa (C18:1 cis-9) A. niger (C10 và C12 hoặc C18:1 cis-9) M. miehei (C12) Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam G. Candidum đặc hiệu với γ-linolenate trong dầu cây borage và axit eruic từ dầu hạt nho.v.v. o Bertolini nhân hai giống lipase vô tính I và II từ chủng G. candidum ATCC 34614 o Loại I đặc hiệu với axit béo không no nối đôi vò trí cis-9 o Loại II đặc hiệu với các cơ chất có chuỗi acyl từ C8-C14 o Yuzo và các đồng sự báo cáo về tính đặc hiệu của hai loại lipase từ chủng Pseudomonas (lipase HU 308 và AK 102) đối với các axit béo C20 nối đôi vò trí delta 5 o Sự thay đổi hàm lượng axit béo C20 trong axit béo phân đoạn tách ra trong suốt quá trình thủy phân dầu giàu PUFA bằng lipase 2.2. Cấu trúc của lipase Lipase từ động vật Cấu tạo lipase tuyến tụy từ người gồm hai tiểu phần, phần lớn hơn chứa ù đuôi N, phần nhỏ hơn chứa đuôi C. Nhân của tiểu phần đuôi N hình thành bởi 9 sợi xếp song song trên mặt phẳng gấp nếp β Tiểu phần C hình thành bởi hai lớp mặt phẳng không song song Tiểu phần N chứa trung tâm hoạt động, liên kết với nhóm glycosyl, liên kết với Ca2+ và có thể liên kết với heparin Trung tâm hoạt động bò che dưới các vòng xoắn α mạch ngắn gọi là các nắp hay nút đậy Lipase từ nấm Không có sự tương đồng cấu trúc với lipase tuyến tụy ngoài mối liên hệ chuỗi Gly-X-Ser-X-Gly có liên hệ với trung tâm hoạt động Cũng có cấu trúc nắp đậy Lipase từ vi khuẩn Một số lipase từ chủng Pseudomonas như P. cepacia, P. glumae, P. flourensence Có kích thước phân tử dao động từ 30-35kDa cho thấy có nhiều sự đồng đẳng Chuỗi G-X-S-X-G liên kết với trung tâm hoạt động Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam Lipase từ loài Bacillus Có khối lượng phân tử khoảng 19kDa Chuỗi A-X-S-X-G liên kết với trung tâm hoạt động 3. Tính chất của enzym lipase: Lipase có hoạt tính bề mặt ở phân pha nước/lipit và chỉ thuỷ phân chất béo đã nhũ hố. Lipase khác với ccác enzym esterase khác ở điểm, esterase chỉ thuỷ phân các ester tan trong nước như TAG. Lipase có nhiều trong sữa, các hạt có dầu (đậu nành, đậu phộng), ngũ cố (lúa mạch, yến mạch), trong trái cây và rau, trong hệ thống tiêu hố của động vật và nhiều loại vi sinh vật. Lipase có thể thuỷ phân cả 3 liên kết ester trong TAG hoặc chỉ thuỷ phân một số liên kết ester nhất định giữa gốc –OH và các gốc acyl trong phân tử acyl lipit. Bảng 4.9 cho biết đặc tính đặc hiệu của một số enzym lipase Liên kết bị thuỷ phân Nguồn lipase Các gốc acyl ở vị trí 1,3 Tuyến tuỵ, sữa, Pseudomonas fragi, Penicillium roqueforti Các gốc acyl ở vị trí 1, 2 và 3 yến mạch, hạt thầu dầu, Aspergillus flavus Axit oleic và linoleic ở vị trí 1,2 và 3 Geotrichum candidum Kích thước của giọt dầu trong hệ nhũ tương càng nhỏ thì tổng diện tích bề mặt phân pha dầu / nước càng lớn dẫn đến hoạt tính của lipase càng cao. Lipase trong tụy heo là enzim được nghiên cứu đầy đủ nhất. Nó có MW 48kDa, khả năng thủy phân giảm dần trong dãy cơ chất : TAG > DAG >MAG. Phân tử pancreatic lipase ( lipase tuyến tụy ) có đầu kỵ nước gắn với giọt dầu nhờ các tương tác kỵ nước, còn tâm hoạt động của enzym thì gắn với phân tử cơ chất tại tâm hoạt động có các axit amin Ser, His, và Asp có vai trò tham gia vào việc cắt các liên kết ester ( tương tự như ở serine proteinase ). Tâm hoạt động của lipase còn chứa nhóm Leucine có tác dụng tạo ra liên kết kỵ nước với cơ chất lipid và đặt cơ chất đúng vào vị trí tại tâm hoạt động của enzym. Hoạt tính của lipase được tăng cường bởi iơn Ca 2+ , các axit béo tự do tạo ra sẽ kết hợp với Ca 2+ để tạo thành muối khơng tan. - Lipase của sữa cũng tương tự như lipase tuyến tụy. Các lipase thu được từ vi sinh vật thường có độ bền nhiệt cao. Ví dụ như lipase từ Pseudomonas fluosescence có thể khơng bị mất hoạt tính khi thanh trùng hay xử lý ở nhiệt độ cao cũng như trong q trình sấy. Lipase này có thể gây ra những hư hỏng và làm giảm chất lượng sữa bột trong q trình bảo quản. Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam - Hoạt tính lipase trong thực phẩm khơng hồn tồn dự đốn được độ bền của thực phẩm trong q trình bảo quản. Tính đặc hiêu cơ chất của lipase rất khác biệt nên các axit béo tự do tạo ra trong q trình thủy phân rất khó xác định. Ngưỡng giá trị cảm nhân mùi và vị của các axit béo cũng thay đổi rất khác nhau nên ảnh hưởng của lipase lên mùi của thực phẩm cũng rất khác biệt. Các thơng tin chính xác chỉ có được khi định lượng các axit béo tạo ra torng q trình bảo quản bằng sắc kí khí. Chú thích : HLL: Humicola lanuginosa PcamL: Penicillium camembertii RDL: Rhizopus delemar CLL: Candida lipolytica RJL: Rhizomucor javanicus ROL: Rhizopus oryzae GCL: Geotrichum candidum CRL: Candida rugosa Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam PCL: Pseudomonas cepacia PFL: Pseudomonas fluorescens Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam 3.1. Cường lực xúc tác : Lipase là chất xúc tác sinh học,nó có đầy đủ các tính chất của 1 chất xúc tác. Tuy nhiên lipase có cường lực xúc tác mạnh hơn nhiều so vi71 các chất xúc tác thông thường. Khả năng xúc tác của enzym được xác định thơng qua hoạt độ hoạt động của enzym. Hoạt độ hoạt động của enzym được xác định thơng qua đơn vị hoạt độ. Người ta biểu diễn đơn vị hoạt độ qua những đơn vị sau : a) Đơn vị enzym quốc tế (UI) là lượng enzym có khả năng xúc tác làm chuyển hố được một micromol cơ chất sau một phút ở điều kiện tiêu chuẩn 1 UI = 1µmol cơ chất (10 -6 mol)/phút b) Katal (Kat) là lượng enzym có khả năng xúc tác làm chuyển hố được 1mol cơ chất sau một giây ở điều kiện tiêu chuẩn 1 Kat = 1mol cơ chất/giây 1 UI = 10 1 . 10 -6 Kat = 16.67 nKat (nanokatal) c) Hoạt độ riêng của một chế phẩm enzym là số đơn vị UI ( hoặc số đơn vị Katal) ứng với 1ml dung dịch (nếu là dịch) hoặc 1mg Protein (nếu là bột khơ) của chế phẩm enzym. Nếu chế phẩm enzym đã tinh sạch, hoạt độ được biểu thị bằng số UI (hoặc Kat) trên 1mg enzym. Khi biết được khối lượng ptử của enzym ta hồn tồn có thể tính được hoạt độ riêng của phân tử. d) Hoạt độ riêng phân tử: là số phân tử cơ chất được chuyển hố bởi một phân tử enzym trong một đơn vị thời gian. 3.2. Tính đặc hiệu của enzym: 3.2.1. Đặc hiệu kiểu phản ứng: Enzym lipase chỉ có thể xúc tác cho phản ứng thuỷ phân. 3.2.2. Đặc hiệu cơ chất: Cơ chất là chất có khả năng kết hợp vào trung tâm hoạt động của enzym và bò chuyển hoá dưới tác dụng của enzym. Lipase có tính đặc hiệu tương đối : nó có khả năng tác dụng lên 1 kiểu liên kết nhất đinh trong phân tử cơ chất mà không phụ thuộc vào cấu tạo của các phần tham gia tạo thành mối liên kết đó. Lipase có khả năng thuỷ phân được tất cả các mối liên kết ester carboxylic. Cơ chế tác dụng của lipase: Thông thường, trong phản ứng có xúc tác enzym, nhờ sự tạo thành phức hợp trung gian enzym – cơ chất mà cơ chất được hoạt hoá, bởi lẽ khi cơ chất kết hợp vào enzym do kết quả của sự cực hóa, sự chuyển dòch của các electron và sự biến dạng của các liên kết tham gia trực tiếp vào phản ứng dẫn tới làm thay Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam đổi động năng cũng như thế năng, kết quả làm cho phân tử cơ chất trởø nên hoạt động hơn, nhờ đó tham gia phản ứng dễ dàng Quá trình tạo thành phức enzym – cơ chất (ES) và biến đổi phức này thành sản phẩm, giải phóng enzym tự do thường trải qua 3 giai đoạn : E + S ES P + E - Giai đoạn 1: Enzym kết hợp với cơ chất bằng liên kết yếu tạo thành phức ES không bền, phản ứng này xảy ra rất nhanh và đòi hỏi năng lượng hoạt hoá thấp - Giai đoạn 2: Khi cơ chất tạo phức với E sẽ bò thay đổi cả cấu hình không gian, cả về mức độ bền vững của các liên kết. Kết quả là các liên kết bò phá vỡ - Giai đoạn 3: tạo thành sản phẩm còn ezym dc giải phóng dưới dạng tự do. • Cơ chế tác dụng của Lipase : tâm ái nhân của lipase sẽ tương tác với 1 trong 2 nguyên tử tích điện dương của liên kết bò thuỷ phân. Sự tạo thành phức hợp trực tiếp như thế với trung tâm phản ứng sẽ làm cho sự đứt các liên kết và sự thuỷ phân dc dễ dàng thuận lợi. • Một cơ chế khác liên hệ tính tác dụng của ezym với sự khuyết electron của liên lết bò thuỷ phân là : Enym làm tăng sự khuyết electron vốn đã tồn tại trước đó, bằng cách tạo thành liên kết tương ứng với cơ chất ở những vò trí ít nhiều gần gũi với liên kết bò thuỷ phân. Nhờ vậy mà làm cho sự phân bố electron trong phân tử cơ chất bò thay đổi theo 1 chiều hướng cần thiết, khiến cho việc đứt liên kết được dễ dàng hoặc khiến cho 1 trong 2 nguyên tử của liên kết tương tác được với các tác nhân ái nhân. AB + H 2 O AOH + BH Dưới tác dụng của enzym lipase, khi hợp chất AB kết hợp với enzym thì liên kết A-B bò kéo căng , kèm theo sự chuyển dòch electron dẫn đến làm đứt liên kết A-B và gắn nhóm HO - của nước vào phần B của phân tử. Sau khi hoàn thành phản ứng enzym dược giải phóng dưới dạng tự do. 4. Các yếu tố ảnh hưởng đến tính chất của enzym lipase. Cơ chất Hệ nhũ tương thường Hệ nhũ tương đảo Hệ nhũ tương nhỏ (các micell đảo) • Liu và các đồng sự tìm ra tỷ lệ mỡ heo/tristearin 3:1 là tối ưu trong tổng hợp chất thay thế bơ cacao từ Lipozym IM-20 Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam • Báo cáo của Ting và các đồng sự thì tỷ lệ dầu nước là 10/5 là tối ưu với hiệu suất thủy phân dầu nành là 48% với lipase cố đònh trên hạt chitosan bằng phương pháp BINARY pH Ting và đồng sự báo cáo pH tối ưu cho lipase cố đònh trên hạt chitosan là 7-8 thì cho hiệu suất phản ứng hủy phân dầu nành là cao nhất Liu và các đồng sự báo cáo pH tối ưu của Lipozym là 9 trong phản ứng nội chuyển hóa tổng hợp bơ cacao từ mỡ heo và tristearin. o Romija chiết xuất trong dòch gan và t tạng của lớp đầu túc như mực (Sepiaofficinalis), bạch tuộc ( Eledne cierbosa ) được enzym lipase xúc tác phản ứng thuỷ phân thấy pH thích hợp nhất của lipase dòch gan là 6.0, còn của dòch t tạng là 6.4 o Hykeo đã lấy dòch ruột cá vược ( perca fluviatelis ) đem thuỷ phân tributirin thì thấy tác dụng của chúng mạnh nhất ở 25–37 o C, pH = 12.3 – 12.8 o Các nhà khoa học Nhật đã dùng dòch t tạng của tôm càng ( Squil- laoratoria ) thuỷ phân methylacetat thấy chúng hoạt động mạnh ở 38 o C, pH = 7.2 với thời gian là 15h. Nhiệt độ: Ting và đồng sự báo cáo nhiệt tối ưu cho lipase cố đònh trên hạt chitosan là 35-60 0 C thì cho hiệu suất phản ứng hủy phân dầu nành là cao nhất Liu và các đồng sự báo cáo nhiệt độ tối ưu của Lipozym là 50 0 C trong phản ứng nội chuyển hóa tổng hợp bơ cacao từ mỡ heo và tristearin. Chất hoạt hóa và ức chế: Canxi ( Ca ) hoạt hóa lipase trong phản ứng thủy phân theo ba cơ chế : Kết hợp với enzym làm thay đổi cấu trúc Giúp lipase dễ dàng hấp thụ lên bề mặt cơ chất-nước Khử các axit béo sản phẩm của phản ứng thủy phân giảm khả năng ức chế của axit với enzym - Muối mật hoạt hóa lipase từ tuyến tụy của người - Một vài cơ chất ức chế như : o Các hợp chất bề mặt có chứa anion o Protein o Ion kim loại o Axit boronuc Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam o Các hợp chất có chứa phospho như cabarmate, β-lactone… Nước: Nước không những là môi trường để khuyếch tán enzym và cơ chất mà còn là tác nhân tham gia vào phản ứng nữa. Nước có ảnh hưởng không những tới vận tốc mà cả đến chiều hướng của phản ứng thủy phân bởi enzym nữa. Nước cũng là 1 yếu tố điều chỉnh các phản ứng thuỷ phân bởi enzym, có thể dùng nước làm nhân tố tăng cường hay kìm hãm các phản ứng thuỷ phân có enzym xúc tác. Ting và đồng sự báo cáo tỷ lệ dầu-nước 10/5 là tối ưu cho lipase cố đònh trên hạt chitosan thì cho hiệu suất phản ứng thủy phân dầu nành là cao nhất. Liu và các đồng sự báo cáo aw tối ưu của Lipozym là 0.61 trong phản ứng nội chuyển hóa tổng hợp bơ cacao từ mỡ heo và tristearin. Condoret và các đồng sự [8] báo cáo a w tối ưu của Lipozyme IM-20 là 0.4-0.7 p suất: Liu và các đồng sự báo cáo áp suất tối ưu của Lipozym là 17Mpa trong phản ứng nội chuyển hóa tổng hợp bơ cacao từ mỡ heo và tristearin. Nandy và các đồng sự báo cáo áp suất tối ưu là 15mbar cho lipase dùng tổng hợp dẫn xuất của AHA trong ngành mỹ phẩm. Lipase cố đònh và lipase tự do: Ting và đồng sự báo cáo lipase cố đònh trên hạt chitosan dùng tỷ lệ cơ chất nước 10/5 có hiệu suất 48% còn lipase tự do với tỷ lệ cơ chất 10/7 có hiệu suất thấp hơn là 45% trong phản ứng thủy phân dầu nành là cao nhất. • Olivier và các đồng sự báo cáo rằng 20.1 mg lipase từ chủng Burkholdenia (BCL) cho phản ứng chuyển hóa ester nhanh hơn khi dùng 38mg lipase đó ở dạng tự do. Một vài báo cáo về các thông số ảnh hưởng : Thủy phân dầu nành bằng lipase cố đònh bằng phương pháp BINARY trên hạt chitosan báo cáo bởi Ting và các đồng sự Yếu tố tỷ lệ dầu nước (10/5) Tỷ lệ dầu- nước (w/w) Biến đổi nhờ lipase tự do (%) Biến đổi nhờ lipase cố định (%) [...]... cọ 53.0 ± 0.5 34.3 ± 0.6 Tổng quan về enzym lipase từ cá Chú thích: POL = palmito oleo linolein POS = palmito oleo stearin SOS = stearin oleo stearin SOO = stearin oleo olein GVHD: Trần Bích Lam Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam CHƯƠNG III : NGUỒN NGUYÊN LIỆU VÀ QUÁ TRÌNH THU NHẬN 1 Nguồn nguyên liệu : Vì enzym là những xúc tác sinh.. .Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam 10:1 33.10 38.58 10:3 37.71 45.31 10:5 41.40 48.21 10:7 45.08 47.37 10:9 36.04 43.46 Động lực học phản ứng thủy phân Vmax (U/mg-protein) Km (mg) Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam Lipase cố định 254 1841 Lipase tự do 21.6 469 Liu và các đồng sự báo cáo ứng dụng lipase trong tổng hợp chất thay thế bơ cacao... 2.1 Phương pháp tách chiết Lipase với aceton và rửa tủa (lần 2) bằng aceton: Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam T heo bảo quản tươi ở nhiệt độ đông đá Tách bỏ mô liên kết Xay nhỏ Cân Lọc lấy dd bằng rây Tủa thu lấy E Ly tâm lấy tủa (lần 1) Ly tâm lấy tủa (lần 2) Rửa tủa bằng aceton Sấy tủa nhẹ ở 30 – 35oC Nghiền nhỏ sản phẩm Lipase thô Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích... 2-ethylhexylpanmitate Lipase từ chủng C cylindracea tổng hợp nên các sáp ester dùng trong lónh vực chăm sóc cá nhân Nandi và các đồng sự báo cáo về việc dùng lipase xúc tác phản ứng ester hóa tổng hợp các glyceride mạch vừa từ sản phẩm axit béo chưng cất từ dầu dừa và dầu nhân cọ (FADs) Phản ứng thủy phân FADs bằng lipase Candida Rugosa; nhiệt độ 35 ± 2oC (nguồn cho nhóm acyl) Tổng quan về enzym lipase từ... khác hoạt động ( tiếp xúc với oxy) o Lipase từ chủng C rugosa thủy phân màng chất béo trong nước thải Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam o Lipase từ chủng P aerunigosa LP602 cho thấy tính hiệu quả trong xử lý nước thải chứa nhiều chất béo từ các lò mỗ gia súc o Hỗn hợp các enzym cellulase, protease và lipase với tỷ lệ tương đương có tác dụng phân giải tổng hàm lượng chất béo lơ lửng (TSS)... trimethylolpropan cũng được tổng hợp tương tự như trên dùng làm chất bôi trơn - Ứng dụng lipase như một chất cảm ứng sinh học ( Đầu dò sinh học): Nguyên lý: Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam Một chất cảm ứng sinh học hoạt động dựa trên sự hòa tan lớp màng polymer (có thể phân hủy bằng phương pháp sinh học) bằng enzym Lipase sẽ phân huỷ lớp màng polymer đó - Ứng dụng lipase trong công nghiệp... Morohashi phát hiện có lipase chủng Propionicbacterium acne trên da bò truyền nhiễm Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam 4 Ứng dụng Lipase trong ngành mỹ phẩm : Nguyên lý Dùng lipase làm chất xúc tác cho phản ứng ester hóa các axit béo từ các nguồn nguyên liệu tồng hợp các ester làm mềm da như một số sản phẩm chăm sóc cá nhân như dầu tắm ,kem chống quăn tóc Lipase Rhizomucor miehei... nhau về kích thước, hình dạng và phân tử lượng của các enzym (127001000000) cho phép tách và làm sạch enzym bằng phương pháp lọc gel sephadex là phương pháp có nhiều triển vọng Cho o6ng có phương pháp tách làm sạch chung cho các enzym Để xây dựng phương pháp tách và làm sạch một enzym nào đó cần biết lựa chọn và phối hợp một cách có hiệu quả nhất các biện pháp tách và làm sạch khác nhau Tổng quan về enzym. .. pháp tách chiết Lipase bằng cồn : Các giai đoạn tách chiết với cồn tuyệt đối với những tỉ lệ 1:4, 1:5, 1:7 và cồn 96o tương tự như với aceton nhưng thay aceton bằng cồn 2.3 Phương pháp tách chiết Lipase kết tủa bằng (NH4)2SO4 : T heo bảo quản tươi Tách bỏ mô liên kết Xay nhỏ Cân Lọc lấy dd Lọc lấy dd Ly tâm lấy tủa Sấy tủa nhẹ ở 40oC Nghiền nhỏ sản phẩm Lipase thô Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD:... mặt enzym có trong tế bào với lượng rất ít, mặc khác nó luôn có đồng thời với các protein khác cũng có các tính chất lý hoá rất giống nhau, hơn nữa enzym lại rất không bền, dễ bò mất khả năng xúc tác do tác động của các yếu tố bên ngoài Trong dòch chiết, ngoài enzym còn chứa các protein tạp và nhiều chất khác, để loại bỏ chúng phải sử dụng phối hợp nhiều biện pháp khác nhau Tổng quan về enzym lipase . Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam CHƯƠNG I : TỔNG QUAN VỀ ĐẶC ĐIỂM CỦA ENZYM LIPASE 1.. stearin oleo olein Tổng quan về enzym lipase từ cá GVHD: Trần Bích Lam Tổng quan về enzym lipase từ cá