ĐiỀU KHIỂN GiỚI TÍNH VÀ KỸ THUẬT HỖ TRỢ SINH SẢN Ở ĐỘNG VẬT
PHẦN I MỞ ĐẦU
Slide 3
I. ĐiỀU KHIỂN GiỚI TÍNH
I.3. Cơ chế hình thành đực cái - Con cái có bộ NST gồm n cặp NST thường và 1 cặp NST giới tính XX, qua giảm phân tạo giao tử chỉ cho 1 loại trứng có n nhiễm sắc thể thường và 1 nhiễm sắc thể giới tính X. - Con đực có bộ NST gồm n cặp NST thường và 1 cặp NST giới tính XY, qua giảm phân tạo giao tử cho 2 loại tinh trùng: Một loại có n NST thường và 1 NST giới tính X; Một loại có n NST thường và 1 NST giới tính Y. - Qua thụ tinh tạo hợp tử: n NST thường và X + n NST thường và X = n cặp NST thường và XX (sinh con cái). n NST thường và X + n NST thường và Y = n cặp NST thường và XY (sinh con đực)
Phần II NỘI DUNG
Bảng. Tỷ lệ đực cái thu được sau khi điện di tinh dịch Thỏ (Sreder, 1934)
Slide 8
+ Phương pháp hóa học: Dựa vào tính chất ưa axit của tinh trùng X và ưa kiềm của tinh trùng Y, người ta đã đề ra phương pháp đơn giản là thụt rửa âm đạo trước khi giao hợp 2 giờ bằng một dung dịch kiềm nhẹ hay axit nhẹ (vô hại) để hỗ trợ và loại từ một trong hai loại tinh trùng. Muốn sinh con gái, cần hỗ trợ cho tinh trùng X, loại trừ tinh trùng Y, dùng một thìa cà phê nước cốt chanh tươi hòa trong 1 lít nước đun sôi để nguội. Còn muốn sinh con trai thì cần hỗ trợ cho tinh trùng Y, loại trừ tinh trùng X, dùng một thìa cà phê thuốc tiêu muối (bicarbonat natri) hòa trong một lít nước đun sôi để nguội.
- Phương pháp “trứng chờ tinh trùng”: Dựa vào đặc điểm tinh trùng mang NST Y nhỏ, nhẹ, di chuyển nhanh nhưng tuổi thọ thấp. Ngược lại, tinh trùng mang NST X thì lớn, nặng, di chuyển chậm nhưng tuổi thọ cao. Nếu giao phối vào trước lúc trứng chín và rụng đều đặn thì tỉ lệ sinh con là cái cao (ở người có thể đạt 84%). Nếu tránh giao phối trước ngày trứng rụng và chỉ giao phối vào đúng hoặc sau ngày trứng chín và rụng 1 – 2 ngày thỉ tỉ lệ con sinh ra là đực cao (ở người có thể đạt 86,6%). Phương pháp này được áp dụng trên người rất phổ biến vì dễ làm và dễ tính ngày trứng chín và rụng. Ngày trứng rụng được tính theo công thức: Ngày rụng trứng = Số ngày của một chu kì kinh nguyệt – 14. Ngoài những phương pháp trên thì ở người còn có thể theo dõi sự thay đổi trạng thái cơ thể như nhiệt độ (thân nhiệt tăng 0,3 – 0,50C), pH môi trường âm đạo (7,5 – 8)…[1].
Tác động lên trao đổi chất Tác động lên trao đổi chất bằng cách cung cấp cho cơ thể bố hoặc mẹ những nguyên liệu đặc trưng để xây dựng ưu tiên những loại dị giao tử mà ta mong muốn. Ong: Ấu trùng ong có hai loại: Loại đơn bội (n) nở thành ong đực, loại lưỡng bội (2n) nở thành ong cái (ong chúa và ong thợ). Nếu ấu trùng ong cái được nuôi bằng phấn hoa và mật ong sẽ nở thành ong thợ, nếu ấu trùng được nuôi bằng sữa chúa thì sẽ nở thành ong chúa. Vì vậy, muốn tách đàn thì chúng ta phải chủ động cho ấu trùng lưỡng bội ăn thức ăn là sữa chúa. Cá: Để tăng tỉ lệ cá đực trong đàn thì người nuôi cho cá mới nở ăn tinh hoàn tươi hay đã chế biến hoặc thức ăn đã tẩm testosteron.
Bò: Nếu thức ăn giàu K, sẽ có nhiều bê đực. Từ đó, người ta đã đề ra khẩu phần thức ăn trong chăn nuôi bò mẹ như sau: Muốn có nhiều bê đực để lấy thịt, cần thêm K, NaCl (muối ăn), loại bớt thực vật giàu kim loại kiềm thổ (C, Mg). Để có nhiều bò sữa thì thêm vào thức ăn sinh tố D, Ca, Mg [1]. - Tác động lên môi trường sống Trứng ếch ấp ở 150C nở ếch đực nhiều hơn ếch cái. Khi ấp ở 300C thì ếch nở ra cái nhiều hơn đực. Ở cá: Nuôi trứng đã thụ tinh và cá mới nở trong nước pha testosteron tỉ lệ đực trong đàn sẽ tăng [1].
2. Xác định giới tính của phôi
Slide 14
Ví dụ: Ở phôi bò: Kích thước < 0,9mm tỷ lệ thành công là 9% Kích thước 0,9 – 4mm tỷ lệ thành công là 63% Kích thước > 4,9mm tỷ lệ thành công là 68,9% + Phương pháp phân tích NST sử dụng một cụm tế bào phôi 6- 7 ngày tuổi: Thu nhận 10 -12 tế bào ở giai đoạn phôi dâu hay giai đoạn phôi nang, trong số đó phải có ít nhất một tế bào ở giai đoạn metaphase (pha giữa của phân bào). + Phương pháp phân tích NST sử dụng một nửa phôi được cắt ở giai đoạn 6- 8 ngày tuổi. Nửa còn lại được giữ một thời gian ngắn hay đông lạnh trong khi chờ kết quả xác định giới tính.
3. Xác định giới tính bằng phương pháp miễn dịch
4. Xác định giới tính bằng phương pháp phân tử
Slide 18
Slide 19
II.1. Thụ tinh trong ống nghiệm (IVF) - Em bé đầu tiên trên thế giới sinh ra từ kỹ thuật thụ tinh trong ống nghiệm là cô Louis Brown, được sinh ra tại Anh vào năm 1978. - Tại Việt Nam kỹ thuật TTTON được thực hiện lần đầu tiên vào năm 1997 bởi nhóm nghiên cứu của bác sĩ Nguyễn Thị Ngọc Phượng và cộng sự tại Bệnh viện Từ Dũ. Ngày 30/4/1998, ba em bé TTTON đầu tiên của Việt nam, từ ba cặp vợ chồng, đã ra đời tại Bệnh viện Phụ Sản Từ Dũ. Hiện nay, trên thế giới mỗi năm có khoảng 1.000.000 trường hợp TTTON. - Kỹ thuật TTTON được thực hiện để điều trị hiếm muộn cho các cặp vợ chồng có chỉ định. - Các chỉ định của TTTON có thể bao gồm: tắc vòi trứng, bất thường về số lượng và chất lượng tinh trùng, lạc nội mạc tử cung, hiếm muộn không rõ nguyên nhân… Ngoài ra, TTTON còn được chỉ định cho các trường hợp xin trứng, chẩn đoán di truyền tiền làm tổ.
Kỹ thuật TTTON gồm các bước sau: - Kích thích buồng trứng để có nhiều trứng phát triển giúp tăng hiệu quả điều trị. - Thực hiện chọc hút noãn với máy siêu âm đầu dò âm đạo. - Noãn sau khi chọc hút được sẽ được nuôi cấy với tinh trùng để thụ tinh tạo phôi. - Tiếp tục theo dõi nuôi phôi trong phòng nuôi cấy phôi. - Sau thời gian nuôi cấy phôi từ 2-5 ngày, phôi sẽ được cấy vào buồng tử cung. - Phôi sẽ được hút vào một ống nhựa rất nhỏ và mềm và đưa ống nhẹ nhàng vào buồng tử cung và đặt phôi vào trong buồng tử cung. Phôi sau khi đặt vào buồng tử cung sẽ có thể làm tổ và phát triển thành thai nhi như bình thường. - Khoảng 14 ngày sau cấy phôi, bệnh nhân có thể thử thai để biết kết quả. Tỉ lệ có thai trung bình khoảng 35%. Việc khám theo dõi thai và sinh đẻ của thai từ TTTON hoàn toàn như một thai bình thường.
Slide 22
III. Một số kỹ thuật phát sinh từ TTTON III.1.Tiêm tinh trùng vào bào tương noãn (ICSI)
Slide 24
III.2. Xin noãn - Là kỹ thuật giúp một phụ nữ (người nhận) có thể có thai với noãn của phụ nữ khác (người cho). Kỹ thuật này được thực hiện thành công ở Việt Nam từ năm 1999 do bác sĩ Vương Thị Ngọc Lan và cộng sự thực hiện. Một số phụ nữ không thể có thai với noãn của mình do nhiều nguyên nhân khác nhau: - Suy buồng trứng (tương tự như mãn kinh): buồng trứng không còn hoạt động. - Giảm dự trữ buồng trứng: buồng trứng có thể còn hoạt động nhưng số lượng và chất lượng noãn quá kém nên không có khả năng có thai hoặc khả năng có thai là quá thấp. - Có bệnh lý ở buồng trứng hoặc đã cắt buồng trứng nên không có khả năng có thai.
Kỹ thuật này được thực hiện như sau: - Người nhận và người cho sẽ được điều chỉnh cho chu kỳ kinh trùng với nhau bằng thuốc nội tiết. - Người nhận sẽ được dùng thuốc nội tiết để chuẩn bị nội mạc tử cung. Song song đó, người cho sẽ được cho sử dụng thuốc kích thích buồng trứng. - Khi nang noãn đủ lớn, người cho sẽ được chọc hút noãn. - Noãn sẽ được thực hiện thụ tinh trong ống nghiệm với tinh trùng của chồng người nhận. - Phôi được tạo ra sẽ được cấy và buồng tử cung người nhận. Nếu phôi tiếp tục phát triển và làm tổ trong tử cung, người nhận có thể mang thai và sinh nở như bình thường. Nếu chất lượng noãn tốt, tỉ lệ có thai sau kỹ thuật xin noãn vào khảng 50%.
III.3. Mang thai hộ
Slide 28
III.4. Đông lạnh và lưu trữ tinh trùng
III.5. Đông lạnh và lưu trữ phôi
III.6. Đông lạnh và lưu trữ noãn
III.7. Phẫu thuật trích tinh trùng
III.8. Nuôi trứng trưởng thành trong ống nghiệm
III.9. Kỹ thuật hỗ trợ phôi thoát màng
Slide 35
IV. Thụ tinh nhân tạo bằng phương pháp bơm tinh trùng vào buồng tử cung (IUI) [5]
Chỉ định: Do tính hiệu quả, giá thành thấp và kỹ thuật đơn giản, kỹ thuật IUI hiện được áp dụng rộng rãi cho nhiều chỉ định như:
Kỹ thuật IUI được thực hiện gồm 3 bước sau: Kích thích buồng trứng – Chuẩn bị tinh trùng – Bơm tinh trùng.
Theo dõi đáp ứng của buồng trứng được thực hiện bằng cách phối hợp siêu âm đầu dò âm đạo và xét nghiệm nội tiết (E2, LH huyết thanh). Cần siêu âm cơ bản đầu chu kỳ, trước kích thích, để làm cơ sở đánh giá sự phát triển nang noãn. Siêu âm theo dõi nang noãn thường được bắt đầu vào ngày 6-7 của chu kỳ, sau đó siêu âm lại khoảng 3 ngày/lần để đánh giá sự đáp ứng của buồng trứng và tăng giảm liều thuốc thích hợp. - Nang noãn thường được đánh giá là trưởng thành nếu kích thước trên siêu âm > 18mm và E2 huyết thanh >350pg/ml/nang (có thể thay đổi tùy phác đồ kích thích). Nếu nang noãn được đánh giá là trưởng thành, ta cho hCG (liều 5.000 – 10.000 đv) tiêm bắp để kích thích sự phát triển của noãn và rụng trứng. Bệnh nhân sẽ được hẹn bơm tinh trùng vào buồng tử cung khoảng 36 giờ sau tiêm hCG.
B. CHUẨN BỊ TINH TRÙNG
Lợi ích của các phương pháp chuẩn bị tinh trùng: - Chọn được các tinh trùng bình thường, di động tốt cho các phương pháp điều trị. - Loại được các tế bào chết, hầu hết các vi sinh vật và phần lớn các chất độc với tinh trùng. - Loại được một phần lớn prostaglandins trong tinh dịch, tránh co thắt tử cung trong phương pháp IUI. - Kích thích sự hoạt hóa đầu tinh trùng, tạo thuận lợi cho quá trình thụ tinh với trứng. - Giảm đựơc phần lớn nguy cơ nhiễm trùng từ tinh dịch, do các phương pháp chuẩn bị tinh trùng hiện nay có thể phát hiện và loại được hầu hết các vi sinh vật có trong tinh dịch. - Tránh được nguy cơ sốc phản vệ đôi khi xảy ra khi cho tinh dịch vào buồng tử cung. - Giảm nguy cơ tạo kháng thể kháng tinh trùng ở người vợ khi cho quá nhiều tinh trùng chết vào buồng tử cung.
Với ưu điểm vượt trội so với phương pháp bơm tinh dịch tươi về mặt kỹ thuật, cũng như về mặt an toàn và y đức, hiện nay người ta chỉ áp dụng IUI với tinh trùng đã chuẩn bị. Các kỹ thuật chuẩn tinh trùng nói chung tương đối đơn giản, dễ thực hiện. Có hai phương pháp đạt hiệu quả cao và được áp dụng rộng rãi nhất trong việc chuẩn bị tinh trùng là: - Phương pháp swim-up là chỉ những tinh trùng di động tốt sẽ tự bơi lên trên, thoát khỏi lớp tinh dịch phía dưới. - Phương pháplọc sử dụng thang nồng độ: dùng các dung môi đặc biệt (percoll) ở các nồng độ khác nhau có chức năng lọc, loại bỏ các tinh trùng chết, dị dạng, di động kém và các thành phần trong tinh dịch. Phần tinh trùng lọc được, rửa 2 lần với môi trường cấy để loại bớt percoll trong môi trường cấy. Tinh dịch thường được lấy khoảng 2 giờ trước khi thực hiện bơm tinh trùng. Thời gian kiêng xuất tinh từ 2 – 5 ngày trước khi lấy tinh dịch để điều trị. Tinh dịch phải được lấy bằng tay (thủ dâm) vào trong lọ sạch, tiệt trùng. Để giảm nguy cơ nhiễm trùng, người chồng thường được cho uống Doxycyclin 100mg, 2 viên/ngày, trong vòng 14 ngày, trước khi thực hiện IUI.
C. BƠM TINH TRÙNG VÀO BUỒNG TỬ CUNG
Kỹ thuật bơm tinh trùng đóng vai trò quan trọng để đảm bảo tỉ lệ thành công. Nếu không thực hiện nhẹ nhàng, đúng kỹ thuật sẽ ảnh hưởng nhiều đến tỉ lệ có thai. - Có thể thực hiện bơm tinh trùng 1 lần hoặc 2 lần sau khi tiêm hCG. Nếu bơm 1 lần, IUI được thực hiện vào khoảng 36 giờ sau tiêm hCG. Nếu bơm 2 lần, IUI được hiện vào thời điểm 25 và 48 giờ sau tiêm hCG. Nên theo dõi sự rụng trứng bằng siêu âm đầu do âm đạo trước và sau khi bơm tinh trùng. - Sau khi bơm tinh trùng khoảng 14 ngày, bệnh nhân được hẹn để làm xét nghiệm thử thai. Nếu xét nghiệm máu dương tính, bệnh nhân được hẹn trở lại 2 – 3 tuần sau để siêu âm xác định thai.
IUI là một kỹ thuật an toàn, ít biến chứng nhất trong các kỹ thuật hỗ trợ sinh sản. Biến chứng của kỹ thuật IUI có thể là biến chứng của kích thích buồng trứng hoặc của kỹ thuật bơm tinh trùng. Các biến chứng có thể có: - Hội chứng quá kích buồng trứng: tỉ lệ thay đổi tùy theo đối tượng bệnh nhân và phác đồ thuốc sử dụng. - Đa thai: thường không quá 20%, nếu kích thích nhiều nang noãn trưởng thành. - Nhiễm trùng: tỉ lệ nhiễm trùng thấp, thường do kỹ thuật chuẩn bị tinh trùng hoặc không đảm bảo vô trùng khi thực hiện kỹ thuật bơm tinh trùng. - Sẩy thai: tỉ lệ sẩy thai ở các chu kỳ hỗ trợ sinh sản nói chung cao hơn bình thường. - Một số các biến chứng khác có thể gặp như: xuất huyết, đau bụng, viêm vòi trứng không nhiễm trùng, dị ứng…
Các yếu tố ảnh hưởng đến kỹ thuật TTNT
Phần III KẾT LUẬN
TÀI LiỆU THAM KHẢO 1. Phan Thị Sang, 2000. Sinh lý sinh sản ở gia súc và người. Đại học Huế, trường Đại học Sư phạm. 2. Hoàng Kim Giao, 2004. Công nghệ cấy truyền phôi ở gia súc. NXB Khoa học và Kỹ thuật. 3. Nguyễn Thị Xiêm, Lê Thị Hương Lan, 2002. Vô sinh. NXB Y học. 4. http://www.ivftudu.com.vn/article/1280/ 5.http://www.giaoducsuckhoe.net/article.asp?articleID=539&CategoryID=3&SubCategoryID=12&SpecialtyID=9