Chương 6 Kỹ Thuật hỗ trợ sinh sản TS. Đặng Đức Long

CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6.1. GIỚI THIỆU • Khái niệm Các kĩ thuật can thiệp vào các giai đoạn khác nhau thuộc cơ chế sinh sản của người và động vật có vú, nhằm giúp cho cá thể sinh con bình thường gọi là kĩ thuật hỗ trợ sinh sản.  Hệ thống , hiệu quả và sự chuẩn độ của các quy trình kĩ thuật  Hệ thống , hiệu quả và sự chuẩn độ của các quy trình kĩ thuật trong phòng thí nghiệm, kết hợp với các phác đồ trị liệu y học, nhằm hỗ trợ trong suốt cả giai đoạn của tiến trình sinh sản, để cuối cùng, tạo ra những cá thể mới (ở người và động vật có vú) được gọi là công nghệ hỗ trợ sinh sản hay công nghệ sinh sản được hỗ trợ (Assisted reproduction technology - ART).  Hỗ trợ sinh sản là một quy trình công nghệ, nhằm tạo ra cá thể mới với nhiều kĩ thuật hỗ trợ phù hợp cho từng giai đoạn trong tiến trình sinh sản. CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6.1. GIỚI THIỆU • Ứng dụng: sử dụng như là một liệu pháp điều trị vô sinh, mà còn là phương tiện hữu ích, nền tảng để tiến hành các nghiên cứu khác ở người và động vật (chuyển gen, chẩn đoán sớm, bảo tồn động vật, nhân bản, thu tê bào gốc ). tồn động vật, nhân bản, thu tê bào gốc ). • Nội dung chính:  kĩ thuật thu nhận giao tử  kĩ thuật hỗ trợ thụ tinh  nuôi phôi  kĩ thuật chuyển phôi (cấy truyền)  một số các kĩ thuật liên quan khác CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6.1. GIỚI THIỆU • Sơ lược lịch sử phát triển: Từ thế kỉ 14, người Arập đã biết dùng miếng bùi nhùi kích thích ngựa đực đế lấy tinh trùng, sau đó, đưa tinh trùng thu được vào âm đạo ngựa cái và con cái có chửa, đẻ. Từ đó, khái niệm về phương thức truyền giống gián tiếp hình thành.  Năm 1763, Jacobi đã thực hiện các kĩ thuật thụ tinh nhân tạo cho chó và cá. Năm 1780, Spallanzani, đã nghiên cứu tinh dịch, nhận thấy rằng khi đế’ tinh dịch ở nhiệt độ thấp, tinh trùng sống lâu hơn và đã gieo tinh thành công cho 19 con chó cái, trong đó có tới 15 con thụ thai, có mang.  Thụ tinh nhân tạo cho gia súc được nghiên cứu có hệ thống từ đầu thế kỉ 20 . Năm 1907, Ivanov là người đầu tiên có công trong lĩnh vực này, ông phát triển thụ tinh nhân tạo ở nhiều loài ngựa, bò, dê, cừu, và quan trọng là hoàn chỉnh mô hình âm đạo giả. CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6.1. GIỚI THIỆU • Sơ lược lịch sử phát triển:  Năm 1959, con thỏ đầu tiên được ra đời từ phương pháp thụ tinh trong ống nghiệm.  Năm 1961, Petrucci (Italia) nêu những điều kiện đế thụ tinh trong ống nghiệm; được Edward và Steptoe tiếp tục vào năm 1962.  N ăm 1971 , Steptoe đã bắt dầu thực hiện hút 149 trứng qua nội soi ổ  N ăm 1971 , Steptoe đã bắt dầu thực hiện hút 149 trứng qua nội soi ổ bụng và nuôi được 112 tế bào đến giai đoạn phôi nang; tuy nhiên không thể tiến hành cấy truyền. Có 1 trường hợp báo cáo cấy thành công, phôi có hiện tượng làm tổ, nhưng thai lại nằm ngoài tử cung.  Ngày 25/7/1978, lần đầu tiên một em bé (Louise Brown) ra đời bằng công nghệ thụ tinh trong ống nghiệm tại một bệnh viện ở Anh. Năm 1982, bé gái thứ hai (Amadine) ra đời bằng công nghệ này ở Pháp.  Năm 2005, phác đồ mới trong kĩ thuật trữ trứng đã cải thiện đáng kế tỉ lệ thụ tinh. Nhiều em bé đầu tiên từ cả trứng và tinh trùng đông lạnh ra đời thành công tại Italia CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6.2. KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6.2.1 Chuẩn bị trứng • Cho trứng (oocyte donation) Kĩ thuật cho trứng được chỉ định áp dụng với những trường hợp suy buồng trứng sớm, sau đó, được sử dụng cho nhiều trường hợp khác như bất thường trong NST của người mẹ, mãn kinh sinh lí, buồng trứng kém đáp ứng với kích thích hay phụ nữ thất bại nhiều lần khi trứng kém đáp ứng với kích thích hay phụ nữ thất bại nhiều lần khi thụ tinh in vitro bằng trứng của chính họ. Người cho trứng, trước hết sẽ được kích thích buồng trứng bằng các hormone gây chín rụng nhiều trứng hoặc được chọc hút qua siêu âm đầu dò âm đạo. số lượng trứng thu nhận nhờ kích thích, mỗi lần trung bình từ 5 - 10 trứng. Việc cho trứng ở người đã được nhiều quốc gia cho phép, kèm theo các quy chế nghiêm ngặt, các thủ tục về pháp lí, đạo lí CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6.2. KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6.2.1 Chuẩn bị trứng • Cho trứng (oocyte donation) Người cho trứng không nên quá 35 tuổi, có sức khỏe tốt, tâm sinh lí và quan hệ xã hội bình thường và nhất thiết phải trải qua các kiểm tra y học, nội tiết và sản khoa nghiêm ngặt. Các xét nghiệm FSH, LH, E 2 được theo dõi ít nhất qua hai tháng. Ngoài ra các thử nghiệm E 2 được theo dõi ít nhất qua hai tháng. Ngoài ra các thử nghiệm NST, xét nghiệm HbsAg, HIV, BW cũng phải được tiến hành. Hơn nữa nếu người cho trứng đã từng có ít nhất là một con bình thường thì càng tốt. CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6.2. KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6.2.1 Chuẩn bị trứng • Cho trứng (oocyte donation) Việc thu nhận nguồn trứng trưởng thành ở người thường được tiến hành thông qua một phác đồ trị liệu (down regulation protocol) : - người cho trứng được tiêm GnRHa (DecapepTil 0,1 mg) dưới da mỗi ngày trong vòng 14 ngày (kể từ ngày thứ 21 của chu kì kinh nguyệt). - Thử lại LH và E2, nếu LH > IU/L và E2 > 50 pg/ml thì bắt đầu kích thích buồng trứng với FSH/hMG. Ngược lại, nếu các giá trị trên chưa đạt, phải tiếp tục tiêm GnRHa. -Tiêm phối hợp và song song giữa GnRHa (0,05 mg) với FSH (Puregon 50 IU; 100 IU), liều lượng tuỳ theo tuổi và trạng thái sinh lí người cho trứng. CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6.2. KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6.2.1 Chuẩn bị trứng • Cho trứng (oocyte donation) - Theo dõi sự phát triển (kích thước và số lượng) của nang trứng bằng siêu âm 2-3 ngày một lần. Đồng thời theo dõi hormone (LH, E2) từ ngày thứ 6 sau khi kích thích. - Khi xuất hiện ít nhất hai nang trứng lớn nhất đạt kích thước siêu âm 17 mm đường kính thì tiêm hCG (Pregnyl 5000IƯ) để kích thích sự trưởng thành của noãn. - Việc chọc hút trứng tiến hành 35 - 36 giờ sau khi tiêm hCG dưới sự hướng dẫn của đầu dò siêu âm. Phải tiến hành gây tiền mê cho người bằng hypnovel và fentanyl kết hợp với gây tê cục bộ cạnh cổ tử cung bằng lidocain. CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6.2. KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6.2.1 Chuẩn bị trứng • Cho trứng (oocyte donation)  Cho noãn tương (ooplasmic donation) : thay vì thu nhận tế bào trứng, chỉ lấy dịch bào tương của chúng hay dịch túi mầm.  Chuyển tế bào chất giữa các tế bào trứng người (gọi là cho noãn tương) và chuyển túi mầm (chứa nhân) được tiến hành gần đây như là một phương thức nhằm cải thiện hiệu quả của hỗ trợ sinh sản . CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6.2. KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6.2.1 Chuẩn bị trứng • Gây rụng trứng nhiều (superovulation)  Gây rụng trứng nhiều ( gây siêu bài noãn) là phương pháp kích thích sự chín và rụng trứng hàng loạt bằng các hormone nhằm thu được nhiều trứng chín một lúc.  Có thể nhằm hai mục đích : thu nguồn trứng và cho thụ tinh tự nhiên để thu nhận nguồn phôi (trong ống dẫn trứng) sau đó.  Nhóm hormone gonadotropin (Pregnant mare’s serum gonatropin - PMSG) (huyết thanh ngựa chửa) có tác dụng gây chín trứng nhanh, giống như FSH. Tương tự, hCG (human chorionic gonatropin) cũng tác động gây rụng trứng như LH (Luteinizing hormone).  Liều dùng của các hormone nói trên tuỳ thuộc vào từng loài, tuổi và trọng lượng con vật; cũng như phụ thuộc vào loại thuốc, thời gian tiêm. Ớ một số loài như chuột, hiệu quả kích thích rụng trứng còn phụ thuộc vào chu kì sáng tối [...]... trứng ultrasound) và gội rửa nang trứng (follicular flushing) CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6. 2 KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6. 2.1 Chuẩn bị trứng C u trúc bu ng tr ng c a đ ng v t có vú CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6. 2 KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6. 2.1 Chuẩn bị trứng • Quan sát và phân loại trứng Kính hiển vi soi nổi với độ phóng đại (x6 - xl2) dùng để kiểm tra dịch và với độ phóng đại cao hơn... đánh giá cũng giống như khi trứng còn lớp cumulus Kĩ thuật này thuận lợi là trứng được đánh giá cấn thận hơn và thường sử dụng trong ICSI CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6. 2 KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6. 2.1 Chuẩn bị trứng • Quan sát và phân loại trứng Tr ng trư ng thành (ph c h p OCC) CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6. 2 KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6. 2.1 Chuẩn bị trứng • Nuôi trứng trưởng thành: Khi... tinh trùng ở người vợ khi cho quá nhiều tinh trùng chết vào buồng tử cung CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6. 3 KĨ THUẬT HỖ TRỢ SỰ THỤ TINH 6. 3.1 Dẫn tinh nhân tạo (Artificial Insemination) • Dẫn tinh nhân tạo (còn gọi gieo tinh; sinh sản nhân tạo) là những kĩ thuật đưa tinh trùng (đã được thu nhận, chọn lọc) vào cơ quan sinh dục của con cái (đã được chuẩn bị trước cho việc nhận tinh) Dẫn tinh nhân... phương pháp hỗ trợ thụ tinh IVF và các kĩ thuật vi thụ tinh khác CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6. 2 KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6. 2.2 Chuẩn bị tinh trùng d/ Chuẩn bị tinh trùng cho kĩ thuật thụ tinh • Tinh trùng được thu nhận bằng cách nào đi nữa cũng không có khả năng xâm nhập vào tế bào trứng nếu không được hoạt hoá Trong sự giao phối tự nhiên, tinh trùng được hoạt hoá trong ống sinh dục của... receptor đặc hiệu, cũng như một chuỗi các phản ứng sinh lí và sinh hoá phức tạp Các phản ứng này diễn ra sẽ gỡ bỏ (hay biến đổi) lớp bảo vệ bên ngoài tinh trùng, để lộ ra các receptor, cho phép tinh trùng có thể tương hợp với trứng CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6. 2 KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6. 2.2 Chuẩn bị tinh trùng d/ Chuẩn bị tinh trùng cho kĩ thuật thụ tinh • Kích thích hoá học cho sự di động... chắn đang ở trạng thái MII CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6. 2 KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6. 2.1 Chuẩn bị trứng • Quan sát và phân loại trứng Kĩ thuật trực tiếp thứ hai liên quan đến việc phân tách khối cumulus bằng enzyme Các phức hợp OCC phải được đặt vào trong đĩa bốn giếng đã chứa sẵn môi trường thu trứng có bổ sung 0,4% BSA và hialuronidase 80 IU/ml tại 37° trong 30 - 60 giây Dùng một pipette... Nếu phát hiện trứng có một thể cực có thể cho rằng trứng đang ở giai đoạn metaphase II (MII) CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6. 2 KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6. 2.1 Chuẩn bị trứng • Quan sát và phân loại trứng có hai kĩ thuật (trực tiếp và gián tiếp) để đánh giá sự trưởng thành của trứng từ phức hợp OCC Kĩ thuật đánh giá gián tiếp thường thông qua các trứng còn gắn khối cumulus,; việc đánh giá này... cho dẫn tinh) CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6. 2 KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6. 2.2 Chuẩn bị tinh trùng d/ Chuẩn bị tinh trùng cho kĩ thuật thụ tinh • Lợi ích của việc chuẩn bị tinh trùng: Việc chọn được các tinh trùng bình thường, di động tốt, đồng thời cô đặc chúng trong một thể tích nhỏ sẽ tạo nhiều thuận lợi cho các phương pháp điều trị : Loại được các tế bào chết, hầu hết các vi sinh vật và... trùng trong máu Tương tự, có thề xác định được kháng thể trong cơ thể phụ nữ kháng lại tinh trùng Sẽ làm giảm khả năng sinh sản của phụ nữ, ngoài ra kháng thể còn ảnh hưởng đến sự thụ tinh theo những cơ chế chưa biết rõ CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6. 2 KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6. 2.2 Chuẩn bị tinh trùng c/ Kháng thể kháng tinh trùng - tinh trùng và miễn dịch • Việc ngăn chặn sự kết hợp giữa khảng... và trâu là 38° C 39° nồng độ khí thích hợp là 5%C02 5%O2 và 90% N2 C, CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6. 2 KĨ THUẬT CHUẨN BỊ GIAO TỬ 6. 2.2 Chuẩn bị tinh trùng a/ Thu nhận tinh dịch • Tinh trùng sử dụng trong thụ tinh in vitro có thể được khai thác từ tinh hoàn, phó tinh hoàn thông qua con đường phóng tinh hay thu nhận từ phẫu thuật trực tiếp • Hay được sử dụng Âm đạo giả (Artificial vagina - AV) . ART).  Hỗ trợ sinh sản là một quy trình công nghệ, nhằm tạo ra cá thể mới với nhiều kĩ thuật hỗ trợ phù hợp cho từng giai đoạn trong tiến trình sinh sản. CHƯƠNG 6: CÔNG NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6.1 nhằm hỗ trợ trong suốt cả giai đoạn của tiến trình sinh sản, để cuối cùng, tạo ra những cá thể mới (ở người và động vật có vú) được gọi là công nghệ hỗ trợ sinh sản hay công nghệ sinh sản được. NGHỆ HỖ TRỢ SINH SẢN 6.1. GIỚI THIỆU • Khái niệm Các kĩ thuật can thiệp vào các giai đoạn khác nhau thuộc cơ chế sinh sản của người và động vật có vú, nhằm giúp cho cá thể sinh con bình