Luận văn thạc sĩ Bảo vệ thực vật: Khảo sát khả năng đối kháng của nấm Chaetomium sp. đối với nấm Rhizoctonia solani gây bệnh lở cổ rễ trên rau họ thập tự

Mụctiêu dé tài là phân lập và đánh giá được khả năng đối kháng của một số dong namChaetomium đối với nam Rhizoctonia solani gây bệnh lở cổ rễ trên cây rau họ thập tự trong điều kiện phòn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH

NGUYEN TRAN NGOC TRINH

KHAO SAT KHA NANG DOI KHANG CUA NAM

Chaetomium sp DOI VOI NAM Rhizoctonia solani

GAY BENH LO CO RE TREN

RAU HO THAP TU

LUAN VAN THAC Si KHOA HOC NONG NGHIEP

Thanh phé H6 Chi Minh, thang 12 nam 2022

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH

NGUYEN TRAN NGỌC TRINH

KHAO SAT KHA NANG DOI KHANG CUA NAM

Chaetomium sp DOI VOI NAM Rhizoctonia solani

GAY BENH LO CO RE TREN

KHAO SÁT KHẢ NĂNG DOI KHÁNG CUA NAM Chaetomium sp DOI VỚI NAM Rhizoctonia solani

GAY BENH LO CO RE TREN

RAU HO THAP TU

NGUYEN TRAN NGOC TRINH

Hội dong cham luận văn:

1 Chủ tịch: TS VÕ THỊ THU OANH

Hội Bảo Vệ Thực Vật

2 Thư ký: TS VÕ THỊ NGỌC HÀ

Trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh

3 Phản biện1: TS PHAN CÔNG KIÊN

Viện Nghiên cứu Bông Và Phát Triển Nông Nghiệp Nha Hồ

4 Phản biện2: PGS.TS NGUYEN BAO QUOC

Trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh

5 Ủy viên: TS NGUYÊN THỊ HAI

Trường Đại học Công Nghệ TP Hồ Chí Minh

LÝ LỊCH CÁ NHÂN

Tôi tên là Nguyễn Trần Ngọc Trinh, sinh ngày 18 tháng 05 năm 1997 tại BếnTre.

Tốt nghiệp Trung học phổ thông năm 2015 tại Trường Trung học phổ thông

Ca Văn Thỉnh, huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre

Tốt nghiệp Đại học năm 2019 ngành Bảo vệ thực vật, hệ chính quy tạiTrường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh

Từ năm 2019 đến nay làm việc tại Công ty Cổ phần Vinamit, xã Phước

Sang, huyện Phú Giáo, tỉnh Bình Dương.

Tháng 10 năm 2020, học cao học chuyên ngành Bảo vệ thực vật tại trườngĐại học Nông Lâm TP H6 Chí Minh

Địa chỉ liên lạc: ấp Phú Lợi Hạ, xã An Định, huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh BếnTre.

Điện thoại: 0329996788.

Email: trrnhnguyen 18§0597(@gøma1l.com

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi Địa điểm nghiên cứu,

số liệu và kết quả đúc kết từ thí nghiệm trong luận văn là hoàn toàn trung thực chưatừng được công bố trong bat kỳ công trình nghiên cứu nao

Tác giả

Nguyễn Trần Ngọc Trinh

Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban Lãnh đạo Công ty Cổ phần Vinamit, phòngSinh học, các anh chị đồng nghiệp đã ủng hộ, tạo điều kiện giúp đỡ về mọi mặt détôi thực hiện đề tài trong suốt thời gian qua.

Chân thành cảm ơn sinh viên Nguyễn Minh Thông, Khoa Khoa học Sinh học

đã hỗ trợ, giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài

Xin chân thành cảm ơn Ba Mẹ, người thân, tất cả bạn bè và đồng nghiệp đãluôn động viên, tạo điều kiện giúp đỡ tôi học tập và hoàn thành luận văn này

TP Hồ Chi Minh, ngày tháng năm 2022

Tác giả

TÓM TẮT

Đề tài “Khảo sát khả năng đối kháng của nấm Chaetomium sp đối vớinam Rhizoctonia solani gây bệnh lở cỗ rễ trên rau họ thập tự” được thực hiệntại Phòng Sinh học ứng dụng thực vật, Khoa Khoa học Sinh học, Trường Đại họcNông Lâm thành phố Hồ Chi Minh và tại công ty cổ phần Vinamit xã Phước Sanghuyện Phú Giáo tỉnh Bình Dương từ tháng 02 năm 2022 đến tháng 12 năm 2022 Mụctiêu dé tài là phân lập và đánh giá được khả năng đối kháng của một số dong namChaetomium đối với nam Rhizoctonia solani gây bệnh lở cổ rễ trên cây rau họ thập

tự trong điều kiện phòng thí nghiệm và nhà lưới phục vụ cho canh tác nông nghiệp

an toàn, bền vững

Từ 80 mẫu đất thu thập tại Bình Dương, Đắk Nông, Thành phố Hồ ChíMinh, Bình Phước bằng phương pháp bay giấy lọc đã phân lập được 13 dòng namChaetomium C01 — C13 Trong điều kiện in vitro, bằng phương pháp đồng nuôi cấyvới nam Rhizoctonia solani, đã xác định dòng CT07 có hiệu suất đối kháng rất cao(83,4%), bay dong (CT01, CT02, CT04, CT06, CT08, CT11, CT12) có hiệu suất đối

khang dao động từ 38,8% — 72,5%; năm dòng (CT03, CT05, CT9, CT10, CT13)

không có khả năng đối kháng

Trong điều kiện nhà lưới, khi xử lý hạt giống với dịch nam ChaetomiumC107 thể hiện khả năng phòng bệnh ở cải xanh đạt 68,6 — 70,1%, cải ngọt đạt 73,6

— 74,1% Chiều cao cây, chiều đài rễ, trọng lượng tươi, trọng lượng khô ở nghiệmthức sử dụng nam Chaetomium CTƠ7 khác biệt với nghiệm thức đối chứng hatkhông xử lý nắm Chaetomium

Khi phun nắm Chaetomium CT07 lên cây nhiễm bệnh, hiệu quả trừ bệnh ở 5ngày sau phun ở cải xanh đạt 66,9 — 68,1% và cải ngọt đạt 69,2 — 78,0% và giảm ởthời điểm 10 ngày sau phun 63,6 — 64.3% (cải xanh) và 69,6 — 76,5% (cải ngọt) Ởthời điểm 15 NSP hiệu quả phòng trừ nắm của nghiệm thức CT07 là 60,4 — 61,4%(cải xanh) và 67,0 — 72,0% (cải ngọt).

The study " Evaluation of the antimicrobial activity of Chaetomium sp strains against Rhizoctonia solani on cruciferous vegetables", was carried out at the Faculty

of Biological Sciences, Nong Lam University- Ho Chi Minh city, and Vinamit Joint

Stock Company, Phuoc Sang Commune, Phu Giao District, Binh Duong Province

from February to December 2022 The study aimed to isolate and evaluate the

antagonistic ability of Chaetomium sp strains to Rhizoctonia solani causing damping off disease on cruciferous vegetables in laboratory and greenhouse conditions for biocontrol of this soil-born pathogen.

From 80 soil samples collected in Binh Duong, Dak Nong, Ho Chi Minh City,

Binh Phuoc by soil baiting technique, 13 strains of Chaetomium named C01- C13

were isolated Based on the dual-culture method, the CT07 strain showed the highest antagonistic efficiency of 83,4% Seven Chaetomium strains (CT01, CT02, CT04, CT06, CT08, CT11, CT12) indicated the antagonistic efficiency from 38,8% to 72,5% Five Chaetomium strains (CT03, CT05, CT9, CT10, CT13) have no

antagonistic efficiency.

In greenhouse conditions, for seeds treated with Chaetomium CT07, the disease prevention ability on Brassica juncea was 68,6—70,1%, and on Brassica integrifolia was 73,6— 74,1% Plant height, root length, fresh weight, and dry weight of treatment Chaetomium CT07 were significantly higher than in control.

Spraying Chaetomium CT0O7 on infected plants, the disease control effectiveness of at 5 days after spraying on Brassica juncea was 66.9 - 68.1% and on Brassica integrifolia was 69.2 - 78.0% And gradually decreased at the time of 10 days after spraying from 63.6 to 64.3% (Brassica juncea) and 69.6 to 76.5% (Brassica integrifolia) At the time of 15 days after spraying, the effectiveness of CT07 was 60.4

- 61.4% (Brassica juncea) and 67.0 - 72.0% (Brassica integrifolia).

MỤC LỤC

TRANG Trang tựa

Trang chuẩn y -5- 2< cSccccrerrrrrrerrerree Error! Bookmark not defined

12 V/IEHUGG:EITIOTT-sazczsrsossgssetssdoingisnEdiuftsrtioast.BGisul3niDrS20i92Ei3:39i3808iGn818si0fsZ2/ESiG0B.09500.0/2G85.162nS:221gã60ã ul

LOi CaM GOAN eee eee 1H

LOT CAM OM 0 1V LOM Tat cong t0 0 ng 010306160 C043ISEELSSEEIS3S13433EEGI333EX3SS2SSEISESE4SESSSXSSES835t38gbSS.g32g30 V HTNẬHIHẨV een sotnielss5E p3 ƠNg s32 yaSRetstg3sEstitslgrsBosBosssslitliegus3dsiispsfpsidSs430400-39ui:gSE0288a8i4088.0708s33.00008) vi MC) Ce vilDanh sách các chữ viết tắt - 22- 522 22222222222212212221221 2112112212111 211221 1c xe &Darth sachcac HìnH, - se s2 2110210110303 ng gan ng in ga 2511120 <ieg xI Danh sách cáo ban? cccs.gsensemnnnecunsmemmssse nro nme emer Xi

———e————— 1Chương 1 TONG QUAN 22- 522 2222222222221221221221231221211221221221221 22.2 xe 31.1 Đặc điểm của nam Chaetomium Sp 52-55-55257225555scsscscscssrscsccs-sc-e31.1.1 Giới thiệu chung về nắm Chaetomium SỤ -. -2-752©52575+cs-55s-cs 31.1.2 Đặc điểm hình thái của nắm Chaetomium SỤ -2 5-552©7555255ss55c+-31.1.3 Đặc điểm phân bố của nắm Chaetomium SỤ 5-55:55255255255255255z552 51.1.4 Yếu tố dinh dưỡng, sinh trưởng va phát triển của nam Chaetomium sp 51.1.5 Hoạt tính cơ bản của nắm Chaetomitim Sp -2 52-552©5225255222sz25+25sze: 61.1.6 Đặc điểm phân loại của nam Chaetomium 39 ốc ca 91.2 Những nghiên cứu về chế phẩm sinh học 2 222252222+z22zz>2++2 10

1.2.1 Những nghiên cứu ngồi HƯỚC - - - 25+ S+* St srrrrrrrrrrrrrrrrrrrrre 10

1.2.2 Những đghiên cứu TONE MUGS si cácccccnsckiicsSs L1 501351501156 2y 0615608866035 24588300 111.3 Tơng quan về nam Rhizoctonia SOLAN c.cccccccsessessessesseesessessessessessessesseeseees 121.3.1 Đặc điểm của nắm Rhizoctonia SOLA cccccccsccsesessesescesesessesesessesvesesvevesees 121.3.2 VỊ trí phân loại nam Rhizoctonia $Ọ4Hi - 5-5252 S2 E‡E+E£ESEEEErEzrerrkee 131.3.3 Đặc điểm sinh hoc nắm Rhizoctonia SOLAN -2- 2 52+s+E‡+E+E£E+EzEezxzxsce2 13

1.3.4 Đặc điểm hình thái của nắm Rhizoctonia soÏani 5-5c5z+cccszcszecrces 141.3.5 Đặc điểm sinh lý của nắm Rhizoctonia soÏ4wi -2:©52©5s+2sz2czz5522 141.3.6 Khả năng gây bệnh của R SØÏ/Ï - + 5c 5< S+Esseserrerrrrrrrrrrrrrerreree 151.3.7 Quá trình lưu tồn và phát triển của nắm R soÏ4wï . - 151.3.8 Phổ kí chủ của nắm R sØÏđữi -2¿-55cc¿¿222ccrtEEkerrrrrkirrrrrrirrrrrie 161.4 Giới thiệu chung về CAVSTAU IG THAD UU ccccacassnassannes gõ gõ 8h30 D112 Sã038880i0448016:43348558.80 161.4.1 Nguồn gốc, phân loại 22 22222222E+2EE2EE2221222122212212221221 212222 161.4.2 Một số bệnh hại chính trên rau họ thập tự . -2 -5©csecse2 18Chương 2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - 212.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu - 2 2 22¿222+2E2E+22Et2EEzzxrrxrzrrcrev 21

DD Nat: LSU 116 BT StH GURU sáics86s661660545138 615630 1310634L-61800G62603801835040.3840153008860103816844888334140083 S81 21 2.3 N61 dung nghién 0u 0 21 2.4 Phương phap nghiện €ỨỮU¿ss¿z‹:-¿ssso:sxxss6csz5566548310536<66393420,8300086.088100013s04308840 80105880080 222.4.1 Phương pháp phân lập nam Rhizoctonia soÏani -2+©2z22z+5222z+5s2 222.4.2 Khảo sát tính gây bệnh của các MPL nắm R.solani trên 4 loại cải trong

điều kiện phịng thí nghiệm - 22 22©2222EE22EE22EE22E12221227122212222222e2 232.4.3 Phân lập và định danh nam Chaetomium sp dua vao dac điểm hình thái 242.4.4 Đánh giá khả năng đối kháng R solani của các dịng Chaetomium sp

trong điều kiện phịng thí nghiệm 2-22 22©2222++222Ez2EEzE+zzxzze, 252.4.5 Đánh giá kha năng phịng trừ bệnh lở cơ rễ do nam R solani gây ra của

nam đối kháng Chaetomium sp trong điều kiện nhà lưới 262.4.6 Định danh lồi nam Chaetomium sp dựa vao trình tự vùng ITS 302.5 Phương pháp xử lý số liệu - 2 2-522222222cSzzzxeztzrserseerersrese-xc- 3TChương 3 KET QUÁ VÀ THẢO LUẬN -2©2252+2scssczscsscsc.-c .- -323.1 Phân lập R solani gây bệnh lở cổ rễ 2-2: 22©22+2S22EE+£E2EE+EEzzxrzzxrrer 323.2 Khảo sát tinh gây bệnh của nam Rhizoctonia solani trên bỗn loại cải 343.3 Kết qua phân lập nấm Chaetomium SỤ s -22-25c55227ccccccrcrrrerrrrrrree 373.3.1 Bay nam Chaetomium Sp .-552552552552222cSccsczsscsrersrseerc-e 3Ÿ73.3.2 Đặc điểm hình thai của nam Chaetomium Sp.o cc.cccccccscecvecceeceeseesseeseeseees 38

3.4 Khả năng đối kháng với nắm R solani của các dòng Chaetomium trong

điều kiện phòng thí nghiệm - 2 222E22EE22EE22EE22EE22EE2221222222222222e2 423.5 Khả năng phòng trừ nắm R solani của dong Chaetomium điều kiện nhà lưới 453.5.1 Kha năng phòng bệnh của dòng Chaetomium trong điều kiện nhà lưới 453.5.2 Kha năng trừ bệnh lở cổ rễ do nam R solani của nam Chaetomium 49

3.6 Định danh dòng Chaetominm CŸTTÙ TT - 22555555 ‡+s+skExexeersreesrerrerxke 59

KET LUẬN VÀ DE NGHỊ, - 5 ©S2S£2E£2E22E21211211211212112112112121 212 xe 60TÀI LIEU THAM KHẢO 2-52 + s‡SE2E£EE£E2EEEE2E12171E212111112111111 21.1 xe, 62PHU LU :ásccscnxssyss620111181010111001211680161181330548440145618591555554ESS5EESSEASSESEESSESSS8445000389588 68

DANH SÁCH CAC CHỮ VIET TAT

Cs Cộng su

R solani Rhizoctonia solani

MPL Mẫu phan lập

NSC Ngay sau chung

NSG Ngày sau gieo

NSP Ngay sau phun

GSC Gio sau chung

HSDK Hiéu suat d6i khang

DANH SÁCH CÁC HÌNH

HÌNH TRANG

Hình 1.1 Các dang qua thé và bào tử của nắm Chaetomium (Wang và cs, 2016) 4

Hình 1.2 Một số chất kháng sinh của nam Chaetomium có hoạt tính ức chế nam gầy bệnh (Keawchal và.cs,,20097 cuc sen nen2 nhan Hán hở HH H48 05001400 6.8 7 Hình 2.1 Bồ trí thí nghiệm đồng nuôi cay Chaetomium sp voi nam R solani 26

Hình 2.2 Bồ trí thí nghiệm khả năng phòng bệnh lở cô rễ của nấm Chaetomium .28 Hình 2.3 Thí nghiệm đánh giá khả năng trừ bệnh lở cô rễ của nấm Chaetomium 30

Hình 3.1 Triệu chứng bệnh ngoài đồng trên một số loại cải - 2-52 32 Hình 3.2 Hình thái tan nam trên môi trường PDA ở thời điểm 3 NSC 33

Hình 3.3 Hình thái tản nam # solani trên môi trường PDA ở thời điểm 14 NSC 33 Hình 3.4 Hình dạng sợi nắm Rhizoctonia solani ở độ phóng đại 1000 1an 33

Hình 3.5 Tinh gây bệnh của các MPL R solani điều kiện phòng thí nghiệm NSC: PESOS OIE KH Hổ crete see ttt ER ra io 36 Hình 3.6 Bay nam ở thời điểm 21 ngày sau khi đặt giấy vô trùng - 38

Hình 3.7 Hình thái tản nam Chaefomium sp trên môi trường PDA ở thời điểm 7 nese su cây Dũ A, - MÍ: MP, LG HỖ se siehienhga nh ng an dasesz 41 Hình 3.8 Hình thái tản nam C#aefomium sp sau phân lập trên môi trường PDA ở thời điểm 14 ngày sau cay Từ A - M: MPL CT1-CT13 - 42

Hình 3.9 Sự phát triển của các chủng nam Chaetomium va MPL R-CX ở thời điểm 7 NSC A: Đối chứng R solani, Từ B - N: MPL CT01-CT13 44

Hình 3.10 Cây cải xanh ở các nghiệm thức, 15 ngày sau khi gieo 47

Hình 3.11 Cây cải ngọt ở các nghiệm thức 15 ngày sau khi g1eo 48

Hình 3.12 Cải xanh ở các nghiệm thức 15 ngày sau khi phun 56

Hình 3.13 Cải ngọt ở các nghiệm thức 15 ngày sau khi phun - 57 Hình 3.14 Cây phát sinh loài dựa trên trình tự ving ITS theo phương pháp

Neiborg-Joining với giá trị bootrap I00 -5-c2-c2c+xcscssrsrrrreree 59

DANH SÁCH CÁC BANG

BANG TRANG

Bảng 2.1 Danh sách mau nắm bệnh phân lập từ các mẫu bệnh thu thập 22

Bang 3.1 Mức độ gây bệnh của các mẫu nam R solani trên một số loại cải trong điều kiện phòng thí nghiệm 22 2+2+2E£2EE+EE+2EE2EE+EE22EE22E22Ezzrxe2 35 Bảng 3.2 Tỷ lệ số mẫu có nam Chaefomium ở các mẫu phân lập - 37

Bảng 3.3 Đặc điểm hình thái của 2 nhóm nam Cjiaefo/miiii -5 5: 39 Bang 3.4 Bán kính tan nắm 8 solani và hoạt tính đối kháng của các dòng nam Chaetomium trên môi trường PDA sau 7 ngày nuôi cấy -5-55-552 43 Bang 3.5 Hiệu lực phòng bệnh của dòng CT07 ở 15 ngày sau gieo cây cải TU DẲ vaxcesesssters ns mrvenreume eee eee ere RE 46 Bang 3.7 Ảnh hưởng của nam Chaetomium CT0? đến sinh trưởng của cải xanh UD BAY SAUCE sasssuescssi na Duốggt20iL30g30920L888045805u:05:68080gagĐ4GEB48ii38030.3008.1540S431301043801036958gi20850.0 47 Bang 3.8 Ảnh hưởng của nam Chaetomium CT07 đến sinh trưởng của cây cải Heo Se ay SHII7BÍGisssztcfcs6i62505461164ã4SE04825 200002 encase nears eee Kea 48 Bang 3.9 Ty lệ bệnh lở GỖ TẾ ở cái xanh (ĐỘ sáaeeaeadeinsdiindeniisicessisonasnesssi 49 Bang 3.10 Tỷ lệ bệnh lở cỗ rễ ở cải ngọt (%) -2-2¿©5222222222E2E2zzzzscee 50 Bang 3.11 Hiệu lực trừ bệnh lở cô rễ và diện tích đường cong tích lũy bệnh ở cải c0 50

Bang 3.12 Hiệu luc trừ bệnh lở cỗ rễ và diện tích đường cong tích lũy bệnh ở ẤT, TỊE G ee ee ee eee 51 Bảng 3.13 Chiều cao cây tại các thời điểm theo dõi ở cây cải xanh 52

Bảng 3.14 Chiều cao cây tai các thời điểm theo dõi ở cây cải ngọt 52

Bang 3.15 Số lá/cây tại các thời điểm theo dõi ở cây cải xanh - 53

Bang 3.16 Số lá/cây tại các thời điểm theo đối ở cây cải ngọt 53

Bảng 3.17 Chiều dài lá tại các thời điểm theo dõi ở cây cải xanh - 54

Bang 3.18 Chiều dài lá tại các thời điểm theo dõi ở cây cải ngọt - 54

Bang 3.19 Chiều rộng lá tại các thời điểm theo dõi ở cây cải xanh 55Bang 3.20 Chiều rộng lá tại các thời điểm theo dõi ở cây cải ngọt - 55Bảng 3.21 Chiều dài rễ, trọng lượng tươi, trọng lượng ô thí nghiệm của cácfiehierri thire cái xanh: LONSP bu aseesaessnrsoiodoieitievgdiERSDiSSUELSEE.SAGESESEIGSRSEGSEESBSSNESE3800388 56Bang 3.22 Chiều dài rễ, trọng lượng tươi, trọng lượng 6 thi nghiệm của cácficHiệfi Chive Car TGC LONSP các sass consncws 1200606 Bá 81156 102430080585488/38 553848023300L485361A38608480 57

MỞ DAU

Họ thập tự (Cruciferae) gồm cải bắp, cải xanh, cải ngọt, cải thìa, cải ngồng,

súp lơ, là những loại rau có chứa hàm lượng dinh dưỡng cao, có ý nghĩa to lớn vềmặt y học, mang lại hiệu quả kinh tế cho người sản xuất Theo Bộ Nông nghiệp vàPhát triển nông thôn, năm 2021, cả nước trồng khoảng 995.000 ha rau các loại,năng suất 186 tạ/ha, sản lượng 18,5 triệu tấn Từ đầu năm 2021 đến nay, sản lượngrau các loại đạt khoảng 12,5 triệu tắn, tăng 2,2% so với cùng kỳ năm trước Riêngkhu vực phía Nam, sản lượng ước đạt 7,2 triệu tấn

Cùng với sự gia tăng đó là sự gia tăng về bệnh hại làm giảm năng suất, chấtlượng nông san và làm tăng chi phí sản xuất Trong đó, phải kể đến các số bệnh do

vi sinh vật hiện diện trong đất gây ra Nam Rhizoctonia solani là một trong những

mam bệnh có nguồn gốc trong dat, thuộc nhóm bán ký sinh, có phổ ký chủ rất rộng.Theo Gangopdyay và Chakrabati (1982) nam R solani gây hại trên 550 loại câytrồng khác nhau, từ giai đoạn cây con đến thu hoạch làm ảnh hưởng đến sản lượngnông nghiệp Bệnh lỡ cô rễ do nam Rhizoctonia solani gây ra là đáng chú ý nhất,mức độ lây lan nhanh dẫn đến tình trạng chết hàng loạt làm ảnh hưởng nghiêmtrọng đến năng suất cây trồng (Đỗ Tan Dũng, 2013) Việc phòng trừ bệnh bằng các

biện pháp hóa học tuy mang lại hiệu quả cao nhưng gây ảnh hưởng đến sức khỏe

con người và dư lượng hóa chất trong nông sản cũng như gây ô nhiễm môi trường

Do vậy, biện pháp phòng trừ sinh học trong sản xuất nông nghiệp nhằmhướng đến một nền nông nghiệp bền vững theo hướng bảo vệ môi trường đã đượcquan tâm nghiên cứu nhằm góp phần làm giảm ô nhiễm môi trường, nâng cao độphì nhiêu của đất và làm tăng năng suất cây trồng và giá trị của nông sản Hiện nay,

sử dụng vi sinh vật đối kháng có nguồn gốc từ đất đang là một biện pháp day tiềm

năng Trong sô các loài nâm đôi kháng có tiêm năng lớn ứng dụng trong phòng

chống bệnh cây là nam thuộc chi Chaetomium Đây là loài nam túi hoại sinh lớnnhất với trên 300 loài đã được mô tả (von Arx và cs., 1986).

Dé đóng góp cơ sở khoa học nghiên cứu các giải pháp phòng trừ nam ® solanitheo hướng sinh học, việc nghiên cứu nam Chaetomium trong quản lý bệnh lở cô rễtrên rau họ thập tự là rất cần thiết và cấp bách nên đề tài “Khảo sát khả năng đốikháng của nam Chaetomium sp đối với nắm Rhizoctonia solani gây bệnh lở cỗ

rễ trên rau họ thập tự” được thực hiện

Mục tiêu

Chon lọc dòng nam Chaetomium sp từ đất có khả năng đối kháng namRhizoctonia solani gây bệnh lở cô rễ trên cây họ thập tự phục vụ phát triển chếphẩm sinh học kiểm soát nắm bệnh

Yêu cầu

Phân lập nam Rhizoctonia solani gây bệnh trên cây họ thập tự

Thu thập, phân lập nam Chaefomium sp từ dat

Xác định khả năng đối kháng của nam Chaetomium sp đối với namRhizoctonia solani trong điều kiện phòng thí nghiệm và nhà lưới

Định danh dòng Chaetomium sp có hiệu suất đối kháng cao nhất

Giới hạn đề tài

Đề tài được thực hiện từ tháng 02 năm 2022 đến tháng 12 năm 2022, tạiCông ty cô phần Vinamit và Khoa khoa học Sinh học Trường Đại học Nông LâmThành phó Hồ Chí Minh

Chương 1

TONG QUAN

1.1 Đặc điểm của nam Chaetomium sp

1.1.1 Giới thiệu chung về nam Chaetomium sp

Chi Chaetomium thuộc

Giới: Fungi

Ngành: Ascomycota

Lớp: Sordariomycetes

Bo: Sordariales Ho: Chaetomiumceae Chi: Chaetomium

khác nhau ở điều kiện ấm áp và khô như: phân, rơm, giấy, hạt, mảnh vụn thực vật,

lông chim Nhưng môi trường sống chủ yếu vẫn là ở trong đất Theo Soytong vàQuimio (1989), các loài Chaetomium sp có thé được phân lập bằng phương phápbay nam bằng mảnh giấy lọc đặt trên bề mặt dat 4m trong dia petri

1.1.2 Đặc điểm hình thái của nắm Chaetomium sp

Khuẩn ty: phát triển nhanh trên môi trường thạch khoai tây, kích thước 6 — 9

cm sau 9 — 10 ngày nuôi cấy Khuẩn ty ban đầu có màu trắng như bông, sau chuyểnsang màu xám nhạt, rồi dan chuyển sang màu nâu đen do sự hình thành các qua théascoma Các quả thể này có dạng hình cầu hoặc hình quả lê, kích thước lớn, hình thànhrải rác khắp bề mặt khuẩn lạc, tạo thành đám màu nâu đen khi già (Soytong, 1991)

Sợi nam: Soi nam có vách ngăn, có mau xám hoặc nâu nhạt, moc từ môi

trường và từ sợi khí sinh (Soytong, 1991).

Cơ quan sinh sản: Quả thê hình quả lê phình ra ở giữa, có màu tối (đen hoặcnâu đen), có mở lỗ; có nhiều lông bao mọc xung quanh bên ngoài, kích thước 100 —

500 x 100 — 400 um, với các kiểu dang và độ dày mỏng khác nhau tuỳ loài; có loạithang hay uốn nếp kiểu gon sóng, loại ngoằn ngoèo kiểu ruột già, loại chỉ ngoằn ngoèotrên đỉnh sợi, loại xoăn lọn, loại đơn giản, loại phân nhánh (Soytong, 1991).

Quả thé lúc còn non có hình cavat đến hình gậy chứa đựng từ 4 — 8 bao tửmàu nâu Khi quả thé chín các nang nam giống như cột trụ hoặc hình chùy nhú lên

từ đầu của qua thé, chứa các nang bao tử thắng hoặc không thang hàng Kích thướccủa nang nam là 68 — 84 x 5 — 7 wm Các nang bào tử có màu, thành tế bào nhẫn, cónhiều hình dang khác nhau (chủ yếu là hình quả chanh) với 1 lỗ mầm, kích thước 10

— 12x 2.8 - 4 um Bao tử bọc sinh ra từ túi bào tử hình trụ hoặc sợi nam, kích thướcbào tử 7 — 8 x 5 — 6 um (Rai và Mukerrji, 1964).

Hình 1.1 Các dạng qua thé và bào tử của nam Chaetomium (Wang va cs, 2016)

Chú thích: A; B; C; D: Các dạng quả thé của nắm Chaetomium;

E; F; G; H; J: Các dạng bào tử của nam Chaetomium

1.1.3 Đặc điểm phân bố của nắm Chaetomium sp.

Nam Chaetomium sp là một trong những nhóm nắm lớn nhất trong hệ visinh vật đất phân bố rộng rãi trong tự nhiên, và sự phân bố của cũng tuân theo quyluật như các loài vi sinh vật khác Số lượng của nắm Chaetomium sp chủ yêu nằmtrong các tầng đất dưới Đặc biệt ở tầng đất sâu 25 — 30 cm thì số lượngChaetomium sp.co nhiều nhất (Soytong và Quimio, 1989)

1.1.4 Yếu tố dinh dưỡng, sinh trưởng và phát triển của nắm Chaetomium sp

Nguồn carbon: Khả năng hấp thụ nguồn carbon khác nhau của các chủngnam Chaetomium sp được ứng dụng trong việc sản xuất chế phẩm sinh học phòngtrừ nắm bệnh hại cây trồng (Soytong, 1990) Các chủng nắm này hấp thụ tốt một số

loại đường như Saccharose, glucose, fructose, cellubioseza, D- lactose, D-maltose,

tinh bột, ri đường, axit malic, L- arabinoea dé tổng hop năng lượng, hấp thụ kémđối với rượu, N-amylic, citric acid (Lê Thị Anh Hồng và cs, 2005) Chaetomium

sp sử dụng rất tốt với các loại đường fructose, saccharose, galactose, ribose,cellobiose (Bainier, 1910) Nhưng cũng có những nghiên cứu cho thấy rang, trongmôi trường không cần đường thi Chaefomium sp van phát triển tốt Các loàiChaetomium hấp thụ cả hợp chat vô cơ và hữu cơ có chứa nitơ, nhưng ưa môi

trường có chứa L-triptophan và L-glutamic Prolin nhanh chóng bị phân giải bởi

Chaetomium globosum và sử dụng các sản pham của quá trình phân giải đó (Rai và

MukerrjI, 1964).

Nguồn nitơ (dam): Theo Soytong (1988), thì các loài Chaetomium hap thụ

cả hợp chất vô cơ và hữu cơ có chứa nitơ, nhưng ưa môi trường có chứa

L-triptophane và L-glutamic Prolin nhanh chóng bị phân giải bởi Chaetomium

globosum va sử dụng các sản phẩm của quá trình phân giải đó Các loài C

cupreum, C globosum, C lucknowense thích hợp sử dung đạm nitrat natri, nitrat

amon sử dụng kém hơn Cũng theo Soytong thì có những loài hap thụ tốt muốiamon đó là C mollicellum, C funicolum Trên môi trường có chứa casein ức chếsinh trưởng của nhiều loài Chaefomium

Độ âm: Độ âm tương đôi là ảnh hưởng dén sự nảy mâm của bào tử và phát

triển các cơ quan dinh dưỡng của nam Chaetomium Bao tử nam Chaefomium côthé nay mầm trong một phổ độ 4m tương đối rộng 30-100%, nhưng phù hợp nhất là70-100% Bao tử nam Chaetomium có thê nảy mầm cả khi ở các vùng đất khô hạn

vì tiết ra ergosterol (Sekita và cs, 1981)

Nhiệt độ: Nam Chaetomium phát triển trong một pho nhiệt độ rộng từ

3-52°C Mỗi loài Chaetomium lại có khoảng nhiệt độ thích nghi riêng như: C.

globosum, C cupreum là 4-42°C, C lucknowense là 3-50°C (Chives, 1915) Nguồngốc xuất xứ có ảnh hưởng lớn đến khoảng nhiệt độ sinh trưởng thích hop của namChaetomium Nêu cùng C globosum, nhưng khi phân lập ở Trung Quốc trong vùngkhí hậu ôn đới thì nhiệt độ thích hợp là 12 — 15°C và phát triển tối ưu cả ở Nga,

nhưng cũng loài đó khi phân lập ở Thái Lan thì nhiệt độ thích hợp là 25-30°C Khi

nhiệt độ lên cao quá thì nắm Chaetomium chậm sinh trưởng, bề mặt map mô, khôngbằng phẳng (Umeda, 1981) Tuy nhiên nhiệt độ không ảnh hưởng rõ rệt đến hoạttính đối kháng của nắm Chaetomium (Bordeau và Andrew, 1987)

Ánh sáng: Ánh sáng ảnh hưởng đến hoạt động và quá trình sinh trưởng củanam Chaetomium Trong điều kiện tối, quá trình sinh bào tử chậm hơn trong điềukiện chiếu sáng, nhưng số lượng bào tử điều kiện chiếu sáng liên tục sẽ ít hơn sovới điều kiện tối Trong điều kiện sáng xen tối thì lượng bào tử và lượng nam sinhkhối thu được là cao nhất Trong điều kiện chiếu sáng liên tục sẽ ức chế sự tạothành sinh khối, sự hình thành bào tử và sự tăng trưởng phát triển của sợi nấm.Nhưng thì ánh sáng không có ảnh hưởng rõ rệt đến một số chủng nắm Chaetomium

1.1.5 Hoạt tính co bản của nắm Chaetomium sp

Một trong những hoạt tính cơ bản và quan trọng của loài Chaetomium sp là

khả năng sinh enzyme ngoại bào mạnh như cellulase Cellulase là enzyme phổ biến

ở nhiều loài Chaetomium sp Day là enzyme khá quan trọng trong quá trình sốngcủa loài nam này Nam Chaetomium không chỉ giúp phân giải các xác thực vật tạonguồn đỉnh dưỡng cho sinh trưởng và phát triển của nam mà còn tạo cơ chế dé xâmnhập và phá hủy một số loại nấm gây bệnh khác bang cách ức chế sự tổng hợpthành tế bào nam như ức chế hình thành thành tế bào 3 - D - glucan của nam Đây làmột trong những cơ chế cơ bản dé ky sinh trên nam bệnh của Chaetomium sp Ngoài ra, Chaetomium sp còn kích thích sinh trưởng của cây bằng cách tiếtergosterol làm tăng độ mùn trong đất, từ đó kích thích cây sinh trưởng làm tăng sức

dé kháng cho cây Nam Chaetomium sp có khả năng sản sinh ra bao tử trong vùngđất của rễ cây trồng, có khả năng cạnh tranh dinh dưỡng mạnh hơn so với nắmbệnh, nhất là trong điều kiện đất có nhiều mun hơn (Di-pietro, 1991)

Chaetomium sp còn có khả năng tông hợp được các chất hoạt hóa sinh học

nhóm Mycotoxin (Chaetoglobosin Q, R, T, U) và nhóm Epipolythiodioxopiperazine

(Chaetoglobosin A, B, C) Đây là nhóm chất có hoạt tính kháng nắm, có khả năngtiêu điệt các tế bào nắm bệnh bằng cách phá hủy màng tế bào, làm cho nguyên sinhchat bị phá vỡ ra ngoài và mat đi độc tính của nắm bệnh, kết quả là làm giảm hiệuquả của tác nhân gây bệnh cũng như mức độ nhiễm bệnh (Di-pietro, 1991)

có khả năng ức chế, phá vỡ tế bào, xâm nhiễm, tiêu diệt các loài nam hai một cách

khá dé dang (Soytong, 1989)

-Chaetomium sản sinh ra chất Chaetoglobusin C có khả nang ức chế sinhtrưởng của một số năm gây bệnh cây như Colletotrichum gloeosporioides,Coldematium, Fusarium oxysporum, Phytophthora pahnivora, Pparasiica,

P.cactorum, Pyricularia oryzae, Rhizoctonia solani va Sclerotium rolfsli (Soytong

Chaetomium là nhóm nam có hệ enzyme ngoại bào phong phú có khả năng

tao cellulases, chitinases và beta-1,3-glucanases Cac enzyme này giúp Chaetomium

có thé phân hủy vách tế bảo nam that (fungi) được cấu tạo bởi chitin (là các chuỗiN-acetyl-D-glucosamine không phân nhánh) và B-1,3-glucan hay vách tế bào củanam trứng (Phytophthora, Pythium), được cấu tạo bởi cellulose và glucan (Cao và

cs, 2009; Gao và cs, 2005a; Gao va cs, 2005b; Kaewchal và cs, 2009; Sun va cs, 2006; Ya fen & Jin-jie, 2005).

Thực tế khi xử lý chế phẩm sinh học được sản xuất từ các chủng namChaetomium, cây sinh trưởng phat trién manh va cho nang suat, chat lượng cao hon,

cả trong điều kiện nhà kính và ngoài đồng ruộng, Chaetomium được biết có khảnăng sản sinh một lượng cơ chất ergosterol khá lớn Chính ergosterol là một nhómhợp chất chuyền hóa có nguồn gốc từ nắm có khả năng cải tạo đất làm cho đất thêmmàu mỡ, tăng độ phì nhiêu của đất, cải thiện cấu trúc đất, kích thích sự phát triển

của cây (Eash và cs, 1994) Hàm lượng ergosterol là một chỉ thị sinh học quan trọng

về chất lượng đất (Martinez-Salgado và cs, 2010)

Một cơ chế nữa cũng phải kể đến là hợp chất chaetoglobosin C doChaetomium globosum sản sinh ra có kha năng kích thích cây hình thành tính khang

(IR, Induced Resistance) của cây Các thí nghiệm đã cho thay Chaetomium cảm ứng

hình thành các lớp oxy hoạt hóa (ROS, reactive oxygen species) — là các phân tử

dẫn truyền tín hiệu dé cảm ứng tại thành tính kháng tập nhiễm trên cây cà rốt, khoaitây, khoai lang, thuốc lá (Kanokmedhakul và cs, 2002; Soytong và cs, 2001)

1.1.6 Đặc điểm phân loại của nắm Chaetomium sp.

Phân loại theo phương pháp truyền thong

Nam Chaetomium được chia thành nhiều loại khác nhau dựa trên các đặcđiểm hình dáng quả thé, lông bề mặt và lông bên của quả thé, chỉ tiết quả bào tử.Trong thực tế Chaetomium rất đa dạng về hình dang qua thé, đa dang của lông bao.Hầu hết các tác giả đều dựa trên sự phân nhánh và cách cuộn xoắn của lông bao bênngoài quả thể làm tiêu chí chính cho phân loại, trong khi Von Arx và cs, 1984, dựatrên đặc điểm của nang bao tử, qua bao tử và dựa vào bề mặt thành của nang bào tử

Trong khuôn khổ chi Chaetomium, có trên 300 loài đã được nghiên cứu và

mô tả Trong đó phân loại của Soytong và Quimio (1991) có những mô tả và hìnhảnh rõ ràng nhất từ qua thé, lông bao quả thé (đặc điểm của lông, sự phân nhánh của

lông), hình dạng quả bảo tử, hình dạng nang bào tử.

Ở Philippines Quimio và Soytong (1991) đã phân lập được 19 loài hoànchỉnh trong tông số 88 mẫu phân lập Ở Thái Lan Soytong đã phân lập được 15 loàihoàn chỉnh trong tổng số 190 mẫu phân lập

Định danh dựa vào trình tự vùng ITS

DNA tổng số của nam được chiết bằng phương pháp CTAB theo phương

pháp Doyle (1987) Phản ứng PCR được thực hiện với primer ITS1 và ITS4 Phản ứng được thực hiện theo chu trình nhiệt như sau: 94°C: 5 phút, 25 chu kỳ (94°C:

30s, 55°C: 30s, 72°C: 1 phút), 72°C: 10 phút Sản phẩm của phản ứng PCR được

kiểm tra bằng điện di trên gel agarose 1% Kích thước của đoạn DNA thu được sauphan ứng PCR được so sánh với thang DNA chuẩn (1 Kb Plus DNA ladder Marker)sau đó sản pham PCR được giải trình tự Mức độ tương đồng về trình tự ITS của haichủng nghiên cứu được so sánh với các chủng đã công bố trên Genbank bằng công

cụ BLAST Sử dụng phan mềm MEGAII để xây dựng cây di truyền, lựa chọn

phương pháp Neiborg Joining với độ tin cậy được tính bằng thuật toán Bootstrapvới 1000 lần lặp lại Dựa vào cây phân loại và giá trị bootstrap để xác định mốiquan hệ di truyền của chủng nghiên cứu.

1.2 Những nghiên cứu về chế phẩm sinh học

1.2.1 Những nghiên cứu ngoài nước

Các loài Chaetomium được phân lập từ đất sử dụng như tác nhân kiểm soátsinh học được khai thác ở Thái Lan từ năm 1989 Theo kết quả nghiên cứu thì cácloài Chaetomium có khả năng phòng trừ bệnh nam hại cây trồng, biệt là các bệnhnam lan truyền trong đất như Pyricularia oryzae, Curvularia lunata, Rhizoctoniaoryzae, Phytophthora palmivora, Phytophthra parasitica (Soytong va Quimio,1989) Những bao tử sống của loài Chaetomium sp làm giảm bệnh héo rũ cây càchua do nắm Fusarium oxysporum, F lycopersici trong những thí nghiệm trong nhakính hay trên đồng ruộng và cũng ngăn chặn bệnh thối cuống lá ngô do Sclerotium

rolfsii (Soytong, 1991) Theo Singh và cs (2001), dùng môi trường có 1% rỉ đường,

2-3% nắm men có thê sản xuất chế phẩm sinh học phòng trừ một số loại nắm bệnh

từ một số chủng Chaetomium Nghiên cứu sự tạo bào tử của các chủng nam khácnhau bằng phương pháp nuôi cấy chìm (Dulmage, 1970) Theo ông, cũng giống nhưquan điểm của Soytong hoạt tính diệt nam hay chất lượng của chế phẩm phụ thuộcvào môi trường và đặc biệt là chủng giống Nếu tìm được các chủng có hoạt tính đốikháng cao, sẽ có chế phẩm tốt hơn

Ketomium là tên thương mại của thuốc trừ nam sinh học phổ rộng (Int cl 5

AO 1 N 25/12, chứng nhận sáng chế Thái Lan số 6266, 20 năm, ngày phát hành22/1/1994: ngày kết thúc 21/01/2014) là chế phẩm sinh học sản xuất từ 22 chủngChaetomium globosum và Chaefomium Ketomium đã được đăng ký bởi Bộ Nôngnghiệp Thái Lan (số 458/2539, 02/9/1996) sử dụng như thuốc trừ nam sinh họckiểm soát bệnh hại cây trồng, như phân bón sinh học phân hủy chất hữu cơ, cảmứng hệ miễn dịch thực vật và như chất kích thích tăng trưởng Cơ chế kiểm soátbệnh cây đòi hỏi các chủng cụ thể của C globosum và C cupreum có khả năng sảnxuất chất kháng sinh; sản xuất ergosterol kích thích tăng trưởng cây trồng do khả

năng cải thiện lớp mun trong dat, tăng độ phì của đất; ví dụ như C globosum sảnxuất Chaettolobosin C, ngăn chặn sự phát triển của tác nhân gây bệnh nhưPhytophthora parasitica, P palmivora, P cactorum, Pyricularia oryzae, Fusarium oxysporum, Colletotrichum gloeosporioide, C dematium, Sclerotium rolfsii va

Rhizoctonia solani, (Suh va cs, 1993) Theo Soytong, chế phẩm Ketomium trừ nam

sinh học có hoạt tính diệt nam, lượng bào tử phải đạt 3,2 x 107 bào tử/g

Sử dụng chế phẩm Ketomium trong kiêm soát bệnh cây dé thay thé các thuốctrừ sâu và thuốc diệt nam hóa học, đặc biệt là các bệnh do tác nhân gây bệnh trongđất gây ra kết hợp với các biện pháp kiểm soát khác như vệ sinh môi trường, cảithiện hệ thông thoát nước, cắt tia loại bỏ các bộ phận bị bệnh của cây, bón vôi vàphân hữu cơ (nhưng không sử dụng đồng thời hay pha trộn với thuốc trừ sâu hóahọc) va sử dụng trước khi có những thiệt hại về kinh tế có thé giúp ngăn ngừa cácthiệt hại do nắm bệnh (Soytong, 1992)

1.2.2 Những nghiên cứu trong nước

Ở Việt Nam, nam đối kháng Chaetomium lần đầu tiên được nghiên cứu ởViện Di truyền nông nghiệp vào năm 1999 Chế phẩm Ketomium cũng đã được thửnghiệm và đăng ký thành công tại Việt Nam trên một số bệnh cây trồng: bệnh đạo

ôn trên lúa do Pyricularia oryzae gây ra, bệnh thôi rễ cây cà chua do nam Fusariumoxysprum gây ra, bệnh thối rễ và vàng lá cây hoa cúc do nam Rhizoctonia solani

gây ra Các nghiên cứu đã phân lập và định danh được 4 loài Chaetomium, nghiên

cứu được khả năng đối kháng của hai loài Chaetomium globosum và Chaetomiumcupreum trong phòng thí nghiệm, đã chứng tỏ rang nam Chaetomium có kha năng

đối kháng cao với với các loải nắm bệnh như: Curvularia lunata, Fusarium

olucopersici, Sclerotium rolfsii, Pyricularia oryzae, P palmyvora, P parasitica,

Colletotrichum gloeosporioides.

Năm 2002-2003 Viện Di truyền nông nghiệp đã san xuất thử thành công chếphẩm trừ nam sinh học từ các chủng Chaefomium được tìm thay ở Việt Nam, vớitên gọi Chaetomium VDT và đã tiến hành thử hiệu lực chế phẩm trừ nam sinh họcnày lên một số loài cây trồng như: Cam Canh, Thông, hoa Hồng, hoa Cúc và Cà

Chua Ngoài ra ở viện Khoa học Kỹ thuật Nông Lâm Nghiệp Miền núi phía Bắc,Nguyễn Văn Thiệp và cộng sự (2003), đã có những nghiên cứu bước đầu về khảnăng ức chế của nam Chaetomium Sp với một số loại nắm gây bệnh chính trên chẻ,

cà phê, cao su Tuy nhiên, những nghiên cứu này vẫn hạn chế về số loài nắm đốikháng Chaetomium sp., và các nghiên cứu chỉ mới là những nghiên cứu bước đầu.1.3 Tong quan về nắm Rhizoctonia solani

1.3.1 Đặc điểm của nắm Rhizoctonia solani

Nam Rhizoctonia solani đã được De Candolle mô tả lần đầu tiên vào năm

1815, lúc đầu được đặt tên là Rhizoctonia crocorum Loài R solani là loài namquan trọng nhất của chi Rhizoctonia và được mô tả bởi Julius Kuhn (1858) trên câykhoai tây Hình thức sinh sản hữu tính của nắm được ghi nhận đầu tiên bởi Ikata vàHitomi (1930), sau đó là Singh và Pavgi (1969), Ou (1973) và nam trong giai đoạnnày được đặt tên là Thanatephorus cucumeris (Frank) Donk Đây là loại nam kísinh không chuyên tính, có phô kí chủ rộng Hiện tại chưa phát hiện thấy hình thứcsinh sản hữu tính của nắm này ở Việt Nam

Hình thức sinh sản hữu tính liên quan đến 3 chỉ: Thanatephorus Donk (hình

thức sinh sản vô tính là Rhizoctonia solani Kuhn), Ceratobasidium Rogers (hình thức sinh sản vô tính là loài Rhizoctonia hai nhân), Waitea Warcup va Talbot (hình thức sinh sản vô tinh là loài Rhizoctonia zeae Voorhees, Rhizoctonia oryzae Ryker

va Gooch (Carling va Summer, 1992).

Theo Masumoto va cs (1933) điều kiện tối ưu cho sự phat triển củaRhizoctonia solani là 28 — 31°C, pH từ 5 — 7 Nhiệt độ có ảnh hường lớn đến sựphát triển của nam Các mẫu R solani phân lập từ các khu vực có nhiệt độ cao, hoặccác mẫu phân lập từ nhà lưới có mức nhiệt độ sống tối thích cao hơn so với các mẫu

R solani từ các vùng lạnh Trong đất, nam có thể tồn tại ở nhiệt độ từ 5 — 42°C,hạch nam tồn tại được trong đất khô và âm ít nhất được 130 ngày, khi ngâm trongnước nóng ở độ sâu 8cm sống được 224 ngày

Sol nắm nằm trên bề mặt có màu nâu, tuy nhiên những sợi nắm bên trong vậtchủ lại thường không màu Khi trưởng thành, các sợi nam chuyền dan từ vàng sangnâu (Walker, 1928) Sợi nắm phân nhánh khác nhau giữa các mẫu phân lập, phần

lớn phân nhánh theo góc nhọn bên phải Đường kính trung bình của sợi nắm nhỏhơn 5 — 6 pm Điều kiện tối ưu cho sự xâm nhiễm của sợi nấm vào vật chủ ởkhoảng 28 — 32°C, độ 4m trên 80% Nhiệt độ dưới 10°C và cao hon 38°C, sợi namngừng phát triển (Papavizas và cs, 1975).

Nam Rhizoctonia solani là nam có khả năng hình thành hạch Theo Whitney

và Parmeter (1963), Papavizas (1965), khi nuôi cay đơn bào tử trong môi trườngagar, hạch nam sinh ra từ các mẫu phân lập khác nhau có hình dang, kích thước vamàu sắc khác nhau

1.3.2 Vị trí phân loại nam Rhizoctonia solani

Giới: Fungi

Nganh: Basidiomycotina

Lớp: Basidiomycetes

Bộ: Mycelia sterilia Ho: Thelephoraceae Chi: Rhizoctonia

Loai: Rhizoctonia solani (R solani)

(Theo Sneh va cs, 1991)

Loài R solani còn được mô ta dưới nhiều tên khác nhau Các tên được chap

nhận là đồng nghĩa với R solani gồm: R alba, R alderholdii, R allii, R anomola, R.

betae, R brassicarum, R carptae, R dauci, R dichotoma, R dimorpha, R fusca,R gossypii, R gossypii var aegyptica, R gossypii var anatolica, R lupini, R macrosclerotia, R melongena, R microslerotia, R napae, R napaeae, R napi, R potomacensis, R praticola, R rapae, R solani var ambigua, R solani vat barassicae, R solani var cedri-deodarae, R solani var cichorii-endiviae, R solani var hortensis, R solani var lycopersicae, R solani var typical, Sclerotium irregular

va S oryzicola (Carling va Sumner, 1992).

1.3.3 Đặc điểm sinh học nam Rhizoctonia solani

Nam Rhizoctonia solani là nam có khả năng hình thành hạch Theo Whitney

và Parmeter (1963), Papavizas (1965), khi nuôi cay đơn bào tử trong môi trườngagar, hạch nam sinh ra từ các mẫu phân lập khác nhau có hình dang, kích thước va

màu sắc khác nhau Hach nam có thê tồn tại trong dat vài năm nhờ vào lớp màngdày bên ngoài Hach nam được hình thành nhiều nhất ngoài ánh sáng, trong điềukiện đất khô, hạch nam có thể mat sự sống sau 21 tháng (Vincelli và cs, 1989).

1.3.4 Đặc điểm hình thái của nắm Rhizoctonia solani

Ở giai đoạn vô tính, nam phat triển ở dạng sợi, tạo hạch Khuan ty con non

không mau, khi trưởng thành có màu nâu nhạt do sự tích lũy sắc tố nâu, đường kínhkhuẩn ty khoảng 5 — 8 um với những vách ngăn không liên tục, chỗ phân nhánh hoithắt lại, sợi nắm phân nhánh tương đối thắng góc, có vách ngăn gần nơi phân nhánh

Hạch nắm được hình thành từ sự kết hợp của hệ sợi nam, thường sau 3 — 4ngày thì đạt kích thước tối đa và bắt đầu hình thành sắc tố nâu Hạch có kích thướccàng lớn, số lượng càng nhiều thì độc tính càng cao Hạch nắm có dạng hình cầu,đáy phẳng, màu trắng khi còn non và màu nâu đen khi về già, bề mặt hạch thô và cónhiều lỗ li tỉ như tô ong Kích thước đường kính hạch thường biến động trongkhoảng 1 - 3 mm một số hạch có thể liên kết với nhau tạo thành khối lớn Hạchnam còn non có thé chìm dưới nước nhưng khi già thì nổi lên do lớp tế bào phía

ngoài hạch trở nên rỗng (Từ Thị Mỹ Thuận, 2008)

Ở giai đoạn hữu tính, nấm sinh ra đảm (basidium) và bào tử đảm(basidiospore) Đảm không có vách ngăn, kích thước đảm dao động trong khoảng

10 — 15 x 7,8 pm, trên mỗi đảm có từ 2 — 4 mau dé gắn bào tử đảm Bao tử đảm cókích thước 8 — 11 x 6,5 um có hình trứng hoặc hình bầu dục, đơn bào Bào tử đảmkhông có khả năng tồn tại, nhưng có vai trò lớn trọng sự biến đổi di truyền của namnày.

1.3.5 Đặc điểm sinh ly của nắm Rhizoctonia solani

Khuan ty phát triển tối thích ở 25°C — 30°C, pH thích hợp cho sự phát triểncủa nam là 5,4 — 6,7, tối thiêu là 3 và tối đa là 9 Nắm xâm nhập vào cây qua khíkhông, vết thương hoặc trực tiếp qua biểu bì, nam thường hình thành lớp tơ nam

trước khi xâm nhập Đây là cơ sở chính hình thành các que xâm nhiễm chọc thủng

biểu bì đi vào thân cây

Hach nam nảy mam ở khoảng nhiệt độ 16 — 30°C, nhiệt độ tối thích 27°C

Sự nảy mam của hạch nam cần ẩm độ tương đối cao (95 — 96%).

Hach nam và khuẩn ty có thé sống chịu được với nước nóng 40°C trong 100phút Ở nhiệt độ cao, khả năng sống sót của hạch nam giảm và mất đi hoàn toàn ởnhiệt độ 60°C trong 80 phút (Nguyễn Viết Long, 2001) Hach nam sinh ra nhiềunhất ngoài ánh sáng và phát triển nhanh khi nhiệt độ môi trường giảm đột ngột

Nam 8 solani không những có khả năng tồn tại trong đất mà còn sinh sản vàphát triển trong đó và khi gặp trường hợp thuận lợi thì nấm sẽ xâm nhập va gâybệnh cho cây (Đường Hồng Dật và cs, 1979)

1.3.6 Khả năng gây bệnh của R solani

Khả năng gây bệnh trên nhiều ký chủ dưới nhiều dạng khác nhau được xem

là đặc tính của R solani Tùy theo chủng R solani có thể có độc lực với cây vật chủnày, tuy nhiên lại không có độc lực với vật chủ khác R solani đã gây ra những thiệthại đáng ké trên nhiều loại cây trồng như lúa, thuốc lá, khoai tây, củ cải đường,bông vải, đậu nành, đậu đỗ, cải bắp, cà rốt, xà lách Chưa có bất kỳ loài cây nàođược công bố là miễn nhiễm đối với nắm này mặc dù vẫn có những cây trồng không

bị tan công bởi một MPL nào đó

1.3.7 Quá trình lưu tồn và phát triển của nam R solani

Nam R solani lưu tồn trong đất hay trong vật liệu cây ký chủ bị bệnh đướidạng hạch nắm hay sợi nắm, nhưng nguồn bệnh chủ yếu là hạch nam Hach có thésông qua đông và tồn tại rat lâu Hach nổi trên nước và có thé mat sức nảy mam sau

21 tháng Trong điều kiện ngập nước vẫn có tới 30% số hạch nam giữ được sứcsống, nảy mầm thành sợi nắm xâm nhiễm và lây bệnh cho vụ sau (Vũ Triệu Mân và

Lê Lương Té, 1998)

Nắm có khả năng lan truyền theo chiều đứng hay chiều ngang Lan truyềntheo chiều đứng chủ yếu là sợi nam, vết bệnh phát triển dần lên lá, chồi và các bộphận khác Bệnh lan truyền theo chiều ngang từ nơi này sang nơi khác bằng hạch

nắm và sợi nắm, sự lan truyền chủ yêu nhờ dòng nước, hạch nắm bị nước cuốn di

gặp ký chủ thích hợp sẽ bám vào hay do nước mưa.

1.3.8 Phố kí chủ của nam R solani

Nam 8 solani hiện diện rất phố biến trong đất và có phô ky chủ rộng Câytrồng ở quốc gia nào cũng có bệnh do nam R solani gây ra Haque (1975) đã pháthiện ra đậu phộng (Arachis hypoaea), ớt (Capcium annum), cà tốt (Daucus carota),

đậu nành (G/ycine max), bông vai (Gossypium sp.), đại mạch (Hordeum vulgar), xà

lách (Lactuca sativa), lúa (Oryzae sativa), bắp (Zea mays), cà chua (Lycopersicumesculentum) đều nhiễm R solani; Tsai (1970) cũng đã ghi nhận trên 20 loài cỏ daithuộc 11 họ, trong đó chủ yếu là họ hòa bản (Gramineae) và họ Cyperaceae là kýchủ của nam R solani (Nguyễn Việt Long, 2001)

Nhiều loài thực vật thuộc nhóm một và hai lá mầm mọc trong và xung quanhruộng lúa, dọc theo kênh mương là đồng ký chủ và là nguồn lây bệnh cho cây lúa

Ở Việt Nam, Kim và vs (1981) đã ghi nhận đậu nành, bắp, lúa miến (Shorgumvulgare), mía, và 27 loài cỏ dại khác ở đồng bằng sông Cửu Long là ký chủ củanam R solani O Hoa Ki, có khoảng 550 loài ký chủ của nam 8 solani đã được ghinhận O Châu A, nam R solani gây bệnh chủ yếu trên cây lúa, một số loại cây trồng

và một số cỏ ngoài tự nhiên thuộc họ hòa bản, họ hoa thập tự, họ cà, họ dưa, họ bầu

bí, họ bìm bìm (Nguyễn Việt Long, 2001)

1.4 Giới thiệu chung về cây rau họ thập tự

1.4.1 Nguồn gốc, phân loại

Nguồn gốc

Họ Cải (Brassicaceae), còn gọi là họ Thập tự (Cruciferae), là một họ thực vật

có hoa Các loại cây trồng trong họ nay gần như đều có chứa chữ “cdi” trong tên gọi

Theo Viện sĩ N.I Vavilop các loại củ cải trắng nhiệt đới, cải bắc thảo, cải trang,

cải xanh phát sinh từ Trung Quốc Cải bắp, cải bông, củ cải đỏ, củ cải trắng có nguồngốc phát sinh từ Trung tâm Địa Trung Hải (Trần Văn Minh và cs, 2006)

Họ này trước đây được gọi là Cruciferae ("thập tự"), do bốn cánh hoa trênhoa trông tương tự như hình thập tự Nhiều nhà thực vật học vẫn còngọi các thành viên của họ này là các loài "hoa thập tự" Theo điều 18.5của ICBN (Quy tắc St Louis) thi Cruciferae được coi là tên gọi hợp lệ và vì thé

có tên gọi khác của họ Cải được chấp nhận Tên gọi Brassicaceae có nguồngốc từ chi điển hình của họ là chi Brassica.

Phân loại

Họ cai (Brassicaceae) có khoảng 375 chi và 3200 loài Chi Brassica chứakhoảng 100 loài bao gồm cải dầu, cải bắp, súp lơ, bông cải xanh, cải Brussels, củcải, cải mù tat Số nhiễm sắc thé trong ho cai dao động từ 2n = 8 đến 2n = 256(Lysak và cs, 2005) Ở nước ta họ cải có 6 chỉ và 20 loài (Hoàng Thị Sản, 1999).Căn cứ vào đặc điểm của cuống la, phién lá (kích thước, hình dạng, mau sắc cácgiống rau cải của nước ta hiện nay được phân thành 3 nhóm: nhóm cải be (Brassicacampestris L.), nhóm cải thìa/ cải trắng (Brassica chinensis L.), nhóm cải xanh/cải

cay/cải canh (Brassica juncea L.) (dẫn theo Nguyễn Thị Loan, 2018)

* Nhóm cải be (Brassica campestris L.)

Nhóm cải be còn gọi là nhóm cải dưa (chủ yếu dé muối dưa) Nhóm cải này ưanhiệt độ thấp, chịu lạnh Nhiệt độ thích hợp 15 - 22°C do đó trồng thích hợp trong vụĐông Xuân Đặc điểm nhóm cải bẹ là có bẹ lá to, dày, giòn, lá lớn Năng suất của 1 cây

có thé 2 - 4 kg, thời gian sinh trưởng từ lúc gieo đến thu hoạch từ 120 - 160 ngày

* Nhóm cai thìa/cải trắng (Brassica chinensis L.)

Nhóm cải thìa có đặc điểm dễ phân biệt đó là hình lóng máng, màu trắng,phiến lá hơi tròn, cây mọc gọn, có khả năng thích ứng rộng (10 - 27°C) nên có thểtrồng được quanh năm Nhóm này có thời gian sinh trưởng ngắn sau trồng 30-50ngày có thể thu hoạch, dễ để giống, có thể trồng xen, gieo lẫn các loại rau khác vàcải xanh chống giáp vụ rau (Lê Thị Khánh, 2008)

* Nhóm cải xanh/cai cay/cải canh (Brassica juncea L.)

Nhóm cải xanh có khả năng chịu được nóng và mưa to, nhóm cải này có khảnăng thích nghi rộng, thường được trồng quanh năm đặc biệt trong vụ Xuân Hè và vụ

Thu Đông Cải xanh có cuống hơi tròn, nhỏ, ngắn Phiến lá nhỏ và hẹp, bản lá mỏng,

cây thấp, nhỏ, lá có màu xanh vàng đến xanh đậm ăn có vị cay nên gọi là cải cay, dé dégiống

Theo Phạm Thị Minh Tâm (2001), cải xanh là cây thân thảo hằng niên, cao

40-60 em hoặc có thê cao hơn Là loại rau có vị đăng đắng (thường gọi là cải đắng), lá cómàu xanh đậm hoặc xanh nõn chuối Lá mọc từ gốc, cuống lá hơi tròn và nhỏ, phiến lánhỏ hẹp, có răng cưa không đều Hoa mọc thành chùm dạng ngủ, hoa có 4 cánh màuvàng Hạt hình cầu màu đen trồng phố biến khắp cả nước Cải xanh là loại cây chịuđược nóng và mưa, nhanh cho thu hoạch nên có tác dụng giải quyết giáp vụ rất hiệuquả Rau cải xanh có thời gian từ gieo trồng đến thu hoạch là 40-45 ngày.

về giá trị dược liệu của cây cải xanh, theo Đông y cải xanh có vi cay, tính

ôn, có tác dụng giải cảm hàn, thông đàm, lợi khí Trong cải xanh có chứa nhiềuvitamin A, B, C, K, nicotinic acid, carotene, albumin Theo các chuyên gia dinhdưỡng cải xanh có thê chữa được bệnh gout, chống lão hoá da cũng như có thê trị

được viêm họng (dẫn theo Nguyễn Thị Loan, 2018)

1.4.2 Một số bệnh hại chính trên rau họ thập tự

Bệnh chết rạp cây con (Damping off): do Pythium, Phytophthora,Rhizoctonia, Fusarium bệnh xuất hiện phố biến ở vườn ươm cây con, hại nặng vào

mùa mưa với nhiệt độ thấp Triệu chứng đầu tiên xuất hiện trên thân những nốt nhỏ

sau đó vết bệnh sẽ lan dai theo chiều dài của thân và chu vi thân Làm cho thân cây

bị teo lại có màu vàng và bị gãy gục trong khi lá vẫn còn xanh, giai đoạn cây con

vừa mọc khỏi mặt đất và có 1-2 cặp lá thật được đánh giá là thời điểm gây bệnhnặng nhất Đặc biệt khi ẩm độ cao, cây bị bệnh moc | lớp sợi nam trang lam caychét

Bệnh sung rễ: do nắm Plasmodiophora brassiae Wor gây ra, nam xâm nhập

gây hại ở rễ, tạo thành các nốt sưng u trên rễ với kích thước khác nhau, cây bị bệnh

sinh trưởng kém, lá vàng và héo, bị nặng cây có thé chết Đặc biệt trong điều kiệnkhô hạn, hiện tượng vàng héo lá xảy ra nhanh hơn, trên lá không tạo thành các vếtkhô cháy nếu không bị bệnh nào khác Theo Vũ Triệu Mân (2007), bệnh gây hại ở

rễ và gốc thân nằm sâu trong đất tạo ra các u sưng nổi cục san sùi, xuất hiện từngđoạn hoặc kéo dài cả rễ Các u sưng lúc đầu có màu sắc tương tự như màu rễ cây,

bề mặt nhẫn, bên trong ruột trắng và cứng Sau thời gian u sưng chuyền sang màunâu và thối mục Sau khi rễ bị hại, lá chuyên sang vàng, dày thô, lá mat độ nhẫn

bóng, cây chết héo dan.

Bệnh thối nhũn: bệnh do vi khuẩn Erwinia carotovora gây ra Vét bệnh đầu tiênthường xuất hiện ở các cuống lá già phía dưới gần mặt đất, tạo thành những mọng nước,sau đó thối nhũn Vết bệnh theo cuống lá phát triển lên trên làm cho cả lá bị vàng và thốinhữn Các lá phía trên cũng có thé bị bệnh va cả cây bị thối Ở các chỗ mô cây bị thốichứa day dich màu vàng, có mùi hôi nồng Điều kiện thời tiết nóng, 4m và mưa nhiềuthuận lợi cho bệnh phát triển Những ruộng thoát nước kém, bón nhiều phân đạm, thiếuKali thường bị bệnh nặng hơn Ruộng bị sâu nhiều cũng là điều kiện tốt cho bệnh lây lan

Bệnh đốm vòng: do nam Alternaria brassicae Sace gây ra Bệnh có thê gây hại

từ giai đoạn cây con đến giai đoạn gần thu hoạch, bảo quản Trên cây con, vết bệnh

thường xuất hiện trên lá sò và thân non, màu đen hình tròn hoặc bất định, bệnh nặng làm

cây chết Trên cây đã lớn vết bệnh hình thành trên lá hình tròn, có nhiều vòng đồng tâm,màu nâu nhạt hoặc nâu xầm, xung quanh có thé có quang vàng Vết bệnh rat lớn đườngkính có khi tới Icom, nhiều vết bệnh có thé liên kết vời nhau thành hình bat định Khi gặptrời âm ướt trên bề mặt vết bệnh thường hình thành một lớp nấm mốc màu đen Trongđiều kiện trời âm ướt, trên mặt vết bệnh thường hình thành lớp nam mốc màu den.Namgây bệnh có thé xâm nhập vào trong cây qua các vết thương cơ giới do mưa gió hoặc docon người tạo ra trong quá trình chăm sóc hoặc do vết cắn phá của côn trùng

Bệnh lở cỗ rễ: do nam Rhizoctonia solani Kuhn gây hại Bệnh phát triển gây hainặng trong mùa mưa, mức độ lây lan nhanh Vết bệnh có màu tái xanh sau chuyền sang

xám và loang 16 trên khắp mặt lá Trên bề mặt vết bệnh xuất hiện tơ nam và hạch nắm

màu trăngs sau đó chuyền sang nâu Ở những ruộng có mật độ trồng dày và bón phân

nhiều đạm và lân, bệnh gây hại nặng Theo Đào Hằng Trang (2007) bệnh lở cô rễ do

nam R solani Kuhn gây ra Biểu hiện của bệnh là thắt cổ rễ, thói rễ, thối chân, phần thânsát mặt đất thối mềm Nắm có khả năng xâm nhiễm trên thân, cành, lá, khi tiếp xúc vớidat 4m ướt và điều kiện khí hậu nóng âm Triệu chứng thay đồi tuỳ thuộc vào thời kỳxâm nhiễm.

Chương 2

NOI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

Đề tài được thực hiện từ tháng 02 năm 2022 đến tháng 12 năm 2022, tạiCông ty cô phần Vinamit và Khoa Khoa học Sinh học, Trường Dai học Nông LâmThành phố Hồ Chi Minh

2.2 Vật liệu nghiên cứu

Môi trường dùng trong nghiên cứu:

- Môi trường WA (water agar): 20 g agar, nước đủ 1000 ml.

- Môi trường PDA (Potato-Dextrose-Agar): 200 g khoai tây, 20 g dextrose,

500 ml), buồng đếm hong cau,

2.3 Nội dung nghiên cứu

- Phân lập nam Rhizoctonia solani gây bệnh trên cây ho thập tự, xác địnhtính gây bệnh của nắm đối với cây trồng họ thập tự

- Phân lập nam Chaetomium sp từ dat trong và định danh dựa vào đặc điểm

hình thái.

Rhizoctonia solani trong điều kiện phòng thí nghiệm.

- Đánh giá kha năng đối kháng của nam Chaetomium sp đối với namRhizoctonia solani trong điều kiện nhà lưới

- Định danh nắm Chaetomium sp dựa vào phương pháp sinh học phân tử.2.4 Phương pháp nghiên cứu

2.4.1 Phương pháp phân lập nắm Rhizoctonia solani

2.4.1.1 Phương pháp thu mẫu

Tiến hành thu thập các mẫu bệnh có triệu chứng điển hình do nắmRhizoctonia solani gây hại trên cây trồng họ thập tự tại các vùng trồng của Vinamit

Organic Farm Các mẫu bệnh được bảo quản trong hộp nhựa, mẫu bệnh được mang

về phòng thí nghiệm dé xác định Các mẫu được bảo quản theo phương pháp quản lýthực vật của Shivas va Beasley (2005).

Bảng 2.1 Danh sách mẫu nam bệnh phân lập từ các mẫu bệnh thu thập

STT Cây trồng Tên khoa học Vị tríbệnh Mã hóa mẫu bệnh

1 Cải xanh Brassica juncea Cô rễ, thân R-CX

2 Cải ngọt Brassica integrifolia Cổ rễ, than, lá R-CN

3 Cải thìa Brassica rapa chinensis Cổ rễ R-CT

: Brassica chinensis var ,

nam có đặc điểm hình thái đặc trưng của nam bệnh tiến hành tách và làm thuần nambệnh trên môi trường PDA.

Phương pháp xác định nam Rhizoctonia: dựa vào các đặc điểm về hìnhthái màu sắc tản nắm, sợi nắm, hình dạng và màu sắc hạch nấm theo khóa phân loại

của Ogoshi (1975); Sneh (1991); Zheng (2011).

- Theo màu sắc, đặc điểm phát triển tan nắm, hạch nắm: tất cả các mẫu phânlập (MPL) được nuôi cấy trên môi trường PDA trong điều kiện 12 giờ sáng — 12 giờtối, sau 7 ngày nuôi cấy ghi nhận các đặc điểm về tản nam và hạch nam

- Theo đặc điểm sợi nam: Tat cả các MPL nuôi cấy trên môi trường PDAtrong điều kiện 12 giờ sáng — 12 giờ tối, sau 3 ngày nuôi cấy tiến hành làm tiêu bản

để quan sát đặc điểm sợi nắm dưới kính hiển vi có độ phóng đại 400 lần

2.4.2 Khảo sát tính gây bệnh của các MPL nam R.solani trên 4 loại cải trongđiều kiện phòng thí nghiệm

Thí nghiệm tiễn hành đánh giá trên 4 loại cải xanh, cải ngọt và cải thìa và cảingồng được thực hiện trong đĩa petri (90 x 15 mm) theo phương pháp của Keijer và

cs (1997) Bốn mau phân lập (MPL) 8 solani vừa phân lập được sử dụng dé đánhgiá Môi trường dé thực hiện thí nghiệm là WA, hạt giống của mỗi loại rau được ủnứt mầm và đặt trên một đường thắng với khoảng cách bằng nhau trên bề mặt

thạch Hai khoanh tản nắm (đường kính 4 mm) được đặt giữa các hạt giống, khoanh

môi trường WA được sử dụng đối chứng Dùng giấy bạc bọc một nửa đĩa pétri déngăn ánh sáng chiếu vào rễ và đặt nghiêng một góc 60° Các dia petri được dé trongphòng thí nghiệm, nhiệt độ 28 + 2°C, 12 giờ sáng, 12 giờ tối

Theo dõi hàng ngày ghi nhận thời gian xuất hiện vết bệnh (ngày)

Tỷ lệ bệnh (%) được đánh giá 1 lần tại thời điểm 5 ngày sau chủng bệnh theocông thức: TLB (%) = A/B x 100% Trong đó: A là số cây bị bệnh; B là tổng số cây

Cấp 1: Trụ hạ diệp hơi mất màu — gây bệnh nhẹ.

Cấp 2: Trụ hạ diệp mất màu và các vết bệnh nhỏ (đường kính <1mm) trên

thân, trụ hạ diệp, lá hoặc rễ - gây bệnh nhẹ

Cấp 3: Trụ hạ diệp mat màu và các vết bệnh lớn (đường kính >lmm) trênthân, trụ hạ diệp, lá hoặc TẾ - gây bệnh nặng

Cấp 4: Cây con chết — gây bệnh nặng

2.4.3 Phân lập và định danh nam Chaetomium sp dựa vào đặc điểm hình thái

2.4.3.1 Phương pháp thu mẫu

Các mẫu đất được thu thập ở độ sâu tang đất từ 15 — 20 cm với lượng đất500g dat/mau được đựng trong hộp nhựa có nắp, dan nhãn ghi thông tin mau Cácmẫu đất được thu thập tại huyện Phú Giáo, tỉnh Bình Dương, huyện DakSong, tỉnhĐắk Nông, huyện Chợ Gạo, tỉnh Tiền Giang, huyện Đồng Xoài, tỉnh Bình Phước vàhuyện Củ Chi, Thành phó Hồ Chí Minh

để làm thuần

Nam thuộc chi Chaetomium sp được phan loại dua vào đặc điểm hình tháitheo khóa phân loại của Soytong và Quinio (1989).

+ Theo hình dạng, màu sắc tản nam: tat cả các mau phân lập (MPL) được

nuôi cấy trên môi trường PDA trong điều kiện 12 giờ sáng — 12 giờ tối, sau 7 ngàynuôi cay ghi nhận các đặc điểm về tan nam

+ Theo hình dạng, màu sắc quả thể: tất cả các mẫu phân lập (MPL) được

nuôi cấy trên môi trường PDA trong điều kiện 12 giờ sáng — 12 giờ tối, sau 14 ngày

nuôi cấy ghi nhận các đặc điểm về quả thê.

+ Theo hình dạng, màu sắc bào tử: tất cả các mẫu phân lập (MPL) được nuôi

cây trên môi trường PDA trong điều kiện 12 giờ sáng — 12 giờ tối, sau 14 ngày nuôicay ghi nhận các đặc điểm về bào tử

2.4.4 Đánh giá khả năng đối kháng R solani của các dòng Chaetomium sp

trong điều kiện phòng thí nghiệm

Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên đơn yếu tố gồm 14nghiệm thức, tương ứng với 13 dong Chaetomium phân lập được và 1 đối chứng với 3lần lặp lại, mỗi lần lặp lại gồm 03 đĩa petri Nghiệm thức đối chứng là nam R solaniđược nuôi trong đĩa petri chứa môi trường PDA Các thí nghiệm đánh giá khả năng đốikháng được tiến hành theo phương pháp của Soytong (1988)

Chọn 1 nguồn nam R solani có khả năng gây bệnh cao nhất, thời gian xuất hiệnbệnh sớm nhất đề tiến hành các thí nghiệm đối kháng

Phương pháp thực hiện

Chuẩn bị nguồn nắm Chaetomium sp và nam R solani: nam Chaetomium

sp và nam R solani được nuôi cấy trên môi trường PDA 7 ngày sau đó tiến hànhthí nghiệm theo phương pháp cấy kép

Tiến hành cấy đối xứng 2 loại nắm Chaetomium sp va nam gây bệnh trên bềmặt môi trường trong đĩa petri 9 cm Dùng khoan thạch hình trụ có đường kính 4

mm, vô trùng, khoan lay một phần thạch ở ria tản nam Chaetomium sp và đặt vàođĩa petri (đường kính 9 cm) chứa môi trường PDA, khoảng cách đặt khoanh thạch

và mép đĩa là 1 cm Sau 3 ngày nuôi cấy tiễn hành cấy khoanh tản sợi nam bệnh đốixứng vào trong dia petri U đĩa ở nhiệt độ từ 28 — 30°C

Chỉ tiêu theo dõi: Do bán kính tan nam gây bệnh về phía vị trí cay nam đốikháng ở thời điểm 7 NSC

- Hiệu quả ức chế PIRG (Percent Inhibition of Radical Growth)

PIRG= (RI- R2)/R1 x 100 Trong đó: R1 là bán kính tản nam gây bệnh cấyđối chứng: R2 là bán kính tan nam gây bệnh khi cay với nam đối kháng

- Hoạt tính đối kháng quy ước như sau: Hoạt tính rất cao (PIRG > 75%);