Khóa luận tốt nghiệp Sư phạm Sinh học: Khảo sát tác dụng của nước sắc hoa đu đủ đực (Carica papaya L.) lên lượng đường huyết và một số chỉ tiêu sinh lí máu ở chuột nhắt trắng bị đái tháo đường type II

đã được công nhận là một loại được liệu quý giá trong các phương pháp v học dân gian, nhờ vào ham lượng các thành phần như alkaloid, flavonoid, saponin, steroid, coumarin diterpenes,quin

TONG TUYET LINH

KHAO SAT TAC DUNG CUA NUOC SAC

HOA DU DU ĐỤC (Carica papaya L.)

LÊN LUQNG DUONG HUYET VÀ MOT SO

CHÍ TIÊU SINH LÍ MAU Ở CHUQT NHAT TRANG

BI DAI THÁO DUONG TYPE II

KHOA LUAN TOT NGHIEP DAI HOC

NGÀNH SƯ PHAM SINH HỌC

THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH - 2024

TONG TUYET LINH

KHAO SAT TAC DUNG CUA NUOC SAC

HOA DU DU DUC (Carica papaya L.)

LEN LUQNG DUONG HUYET VA MOT SO

CHÍ TIEU SINH Li MAU Ở CHUỘT NHAT TRANG

BI DAI THÁO DUONG TYPE II

KHOA LUAN TOT NGHIEP DAI HOC

NGANH SƯ PHAM SINH HỌC

NGƯỜI HƯỚNG DAN KHOA HOC PGS TS Nguyén Thi Thuong Huyén

CN Hỗ Linh Kiều Nhi

THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH - 2024

LỜI CAM ĐOAN

Khoá luận tốt nghiệp với tên đề tài “Khảo sát tác dụng của nước sắc hoa đu

đủ đực (Carica papaya L.) lên lượng đường huyết và một số chỉ tiêu sinh lí máu ở

chuột nhất trắng bị đái tháo đường type II” do tôi thực hiện với sự hướng dẫn của Cô

—PGS.TS Nguyễn Thị Thương Huyền và CN Hỗ Linh Kiều Nhi

Tôi xin cam đoan các kết quả trong khoá luận là trung thực và chưa từng

được ai công bé trong bat kì công trình nào khác

Thanh phó Hồ Chí Minh, ngày 02 tháng 05 năm 2024

SINH VIÊN

Tống Tuyết Linh

LỜI CẢM ƠNTrong hành trình hoàn thành đề tài khoá luận, em đã nhận được rất nhiều sự

giúp đỡ, hỗ trợ dé có được kết quả ngày hôm nay.

Với tình cam chân thành, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Cô- PGS TS.

Nguyễn Thị Thương Huyền người đã tận tình hướng dân, chi bảo, hỗ trợ kinh phí và

tạo điều kiện cho em trong suối thời gian hoàn thành khoá luận tốt nghiệp.

Với tat ca lòng biết ơn, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới cô - CN Hồ Linh

Kieu Nhi, người đã tận tình hướng dan, hỗ trợ kinh phí, truyền đạt những kiến thứcquan trọng, kinh nghiệm quý báu trong suốt quá trình hoàn thành khoá luận tốt

nghiệp Đó không chỉ là nên tản g cho quá trình thực hiện khoá luận mà còn là hành

trang cho chẳng đường phía trước.

Em xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất đến toàn bộ Quý Thay Cô Khoa Sinhhọc, Trường Đại học Sư phạm Thành phó Hồ Chí Minh đã giảng dạy các kiến thức,

truyền đạt những kinh nghiệm quý báu cho em trong suối 4 năm học tập và rèn luyện

tại trường Em xin cảm ơn Thây - Th$ Trương Văn Trí, Cô Hà Thị Bé Tư và ChịNguyễn Thị Thanh Hang đã giúp đỡ chỉ dạy và tạo điều kiện cho em trong quá trình

nghién cứu.

Em cũng xin cam ơn bạn Nguyễn Kim Mi, Lâm Thi Khánh Phương, Đặng BảoNgân, Tran Nguyễn Hoàng Uyên, Võ Hoàng Gia Lạc, Tran Thị Phương Nga vì đã

giúp đỡ trong quá trình thực hiện khoá luận tại phòng thí nghiệm.

Chân thành cảm ơn bạn Bùi Thị Lan, Nguyễn Kinh Kha, Đặng Trân Gia Hân,

Tong Phú Tân, Lê Trúc Phương, Lê Hỗ Minh Trung, Nguyễn Quốc Trung, đã nhiệttình hỗ trợ giúp đỡ em trong thời gian hoàn thành khoá luận

Cuối cing, em muốn gửi lời cảm ơn tới mẹ, tới gia đình và bạn bè - nhữngngười đã hết sức ting hộ, giúp đỡ và động viên em trong suốt quá trình học tập đãqua Khoá luận của em còn những hạn chế về năng lực và những thiểu sót trong quá

trình nghiên cứu Em xin lắng nghe và tiếp thu những ý kiến, nhận xét dé hoàn thiện,

bé sung kiến thức Em xin chân thành cảm ơn!

TP Hỗ Chí Minh, ngày 02 tháng 05 năm 2024

SINH VIÊN

Tống Tuyết Linh

MỤC LỤC

RGD NOI na na nai i DONC AMON 1 /ïỶởớớỚớỚớỚ ốc ii

MỤC LUC cocccccecccsssescssssesssssesssssesssssvessssueesssssesssssesssssesssssesssisesssssesssssseesssessesnecsesseeessaneeeesnees iii

DANH MUG CHU VIET TAT 07777 6 vi

DANH MC BANG cooooiooooooooiooiiinooitoiitiitiitiiiinitiiitiiiliiiiiiiiliiiliit88ã800ả8.8i6 Vii

j.`b/101I10/9100) 80 -.4 Ả ÔỎ vii NHÀ Để Ĩ scnssnoontonntonntiitiinto0010011001018801813000583808360010088818500086E839835001838883855008888383352038788818597038E8388 l

1.Tinhcipiiiiilt:efla đỗ isin |

Di NHỊC H€U/TÌBHICH CƯ |; (2::02020211040)01010121000110310030013131313131313041301010113516131603151303131313111314131311115E 2

3 Đối tượng nghiên €ứau 22-2222 22E2212EE21122221112221112721112211122111271112 2211 ccrrveg 2

.IN0I/(UTEIHEHISGNICUN:222124141220041402214614531143020431434314314343133331333133313834593133143331431493514342181551555 2

Ds PUB VA nEHIỆR'CƯỦ!iniiiinnnniitiiniiiintiiiiiiii0111010101411010321638)891438)38383805983383898938380883883888) 3

CHUGNG 1: TONG QUAN VE TADLIBU | ssiissscisssccsssccasscccosscnssccossecoosseossseosssccosiccasscessece0si 4

1.1 Tông quan về bệnh đái tháo đường type To cccccecsseescssessseessssessssessstessssesensesenvess 4

1,1,1, E hối BỘT ::cizi:iiirpiigitniiiii0ii1in110111110111111111131188388338838135131513501811583811881888588388585363 4

1.1.2 Nguyên nhân và các yếu tO nguy CƠ - sc 22c 222v 22 vtttrrrrrrrrrrrrrrrrrrreee 4 1.1.3 Triệu chứng, phòng ngừa và điều trị 22s22xcc2cxcEExrErkrrrrkrrrrrrrrrrrree 4 12: Tổng quan về StepOZ0G iii 5

1.2.1 Đặc tính, trạng thái tồn tại của streptozotocin - c:cccscccccscccccrrerrrrrreee 5 1.2.2 Vai trò của streptozotocin đối với mô hình chuột Dai tháo đường 5 1.2.3 Cơ chế gây bệnh của streptozocin đối với tế bảo [3 đảo tụy 6

1.2.4 M6 hình cam ứng bệnh đái tháo đường do STZ 7

1.2.5 Mô hình đáp ứng đái tháo đường type II do STZ có kết hợp nicotinamide (NA)§ 1.3 Tông quan về insulin - 22-2222 22222222211222111221111221112211117211112111121112 c2 xe 9

1.3.1 Cơ chế đáp ứng của insulin đỗi với glucose trong tế bảo và cơ quan 9

1.3:2.IKbfãnigi0isuliiil[T]lisssiaassaniooittitittititititittititittittiiiiiitiiiiiititiiiitliiiitititititi 13

1.4 Tông quan sơ lược về chuột nhắt trling ccccccsecscssseesssseesesssesesssesessseesesneeeesseeeesss 15

1.4.1 Vị trí phân loại [33] c1 111111111111111111111111111111111111111011010000000000 666 is

14:2) Bite điểm Bình thé va sitll ll ciisscissicnnnnnnnnnnmnnnnnnnnnnn 15

1.5 Tông quan về hoa đu đủ đực (Carica papaya L.) cccccsssesssessssecsssessssessssecsssesesnesesees 16

1G; Vad iGO GS NCA as sasssssassanvannnsnansnesaassassassassesanvaansaaninnnnniasduistiassessissavsainanininniaanainanas 17

1.7 Tông quan về các công trình nghiên cứu trên the giới và ở Việt Nam 17

1.7.1 Tông quan về các công trình nghiên cứu trên thế giới - 17 1.7.2 Tổng quan vé các công trình nghiên cứu tại Việt Nam 52e-: 18

CHUONG 2 VAT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19

2.1 Phương pháp chăm sóc chuột HH nh ngiưy 22 2.2 Phương pháp gây mô hình chuột đái thảo đường type ÏÌ cc<ccee 23

2.3.Cơ sở xác định liều dùng nước sắc hoa đu đủ đực ¿-ccccccccsceserseee 23 2.4 Bố trí thí nghiệm 22: 222222221122211122211122111172111172111121111121111111111 11 24 2.5 Phương pháp chuẩn bị nước sắc hoa đu đủ đực -scccsscccxercrserrrsrrrrreee 25

25:1), Phong pháp xử linilti[S8ÌÌussasssaaaoannoaiinnanianiiintitiiiniindtiniiiauaai 25 2:6 Phương pháp gây cho chiuQtitaGragssisssssssssssssssssssssssssassssanssssvssoansssansssanssoassssansssansssenns 26

2.7 Phương pháp Khao sát độ tăng trọng - cành, 27

2.8 Phương pháp thu nhận mẫu máu chuột 5-55 5scScsccrxerrrerrrerrrerrrsree 28

2.8.1 Phương pháp xác định giá trị đường huyếP ó6 c2 12 11 111111 1122 28

2.8.2 Phương pháp xác định số lượng hỏng cau, bạch cau, tiêu cầu, kích thước hồng

cau, ham lượng Hb, chỉ số hematocrit và thời gian đông máu - 29 ADM ito carte cdc | sang er ee 33

CHƯƠNG 3 KET QUA VA THẢO LLUẬN 2552222 2222221222122 rrrrrrrres 34

3.1 Tác dụng ôn định của nước sắc hoa đu di đực lên độ tăng trọng trung bình của

chuột đái tháo đường type II qua các tuân nuôi 2 ©2++c++ezcvxererxerrrsceee 34

3.2 Tác dụng ôn định của nước sắc hoa đu đủ đực lên một số các chỉ số huyết học ở

chuột dai thảo đường type II qua các tuần nuôi 5c 25c c2cvvcrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrree 36

3.2.1 Anh hướng lên chỉ số đường huyết -ccccocccoeceoreososee 36 3.2.2 Ảnh hưởng lên số lượng hông cầu trung bình .::55:52sc2ssccsse: 37 3.2.3 Ảnh hưởng lên số lượng bạch cau trung bình -c+222cccvccvvvvrrrrrrres 39

IV

3.2.4 Ảnh hưởng lên số lượng tiểu câu trung bình ¿c6 cv 22c 40

3.2.5 Anh hưởng đến một số chi số huyết học khác -ccccccccccccccsvee 42 KET LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ, 5 cv E1 H1 E11 11111111 111111111111 1x crkee 47

1 KHÓI LƯỢNG - ĐỘ TANG TRỌNG 22-22222222 2222221222231 ccee 1

2 SO LIEU DUONG HUYET oo.cccccccccccecccsssesscessesssessesssessessscsssessesssessesssesseessesssesseessesseesseess 5 3: SOMMUIHONG CAU iii 9

4 SO LƯỢNG BACH CẦU : 2222222222211122221111222111112211111221111112211111 21111 re 12

5 SO LƯỢNG TIỂU CẦU - 6 tt St SE 1E 112111 21111111211 11111111111 11111211 11.1 ctxe 14

6 HÀÃM'ILUƯỢNGIHEMOGGLUOBIN:.ecoocoioooooooooooooaooioooaiatiddnddiiianandi 20

7 CHI SOHEMATOGRAD tunnaonnoaoaoooooonooootootoniiibttitiiitiiigigiagittsadl 23

8 BAN KINH HONG CÂU -222-22222222222212222112221122111221112111221112111 2112 1e ccxe 27

Dy TT EAGAN EMCO GIMIE, ó:c::2:0006210001551102211100231010231210021119033416033414021413603301633148603310/ 33

Vv

Streptozotocin + nước sac hoa du du đực Streptozotocin + Nicotinamide

Streptozotocin + Metformin

vì

DANH MỤC BANG

Bang 1.1 Một số mô hình thí nghiệm cảm ứng bệnh đái tháo đường trên chuột bằngSUZ, coiic: 0 021012110131151312313133123535333539535185553853559535385385858378538553355356585585353553858525555335228525358 §

Bảng 1:2: Vi tel phân |ÍG8) cissscioccicsosiioisiisiiiationiiiotiiisiitE11581316811213803120355855556558855 15

Bang 1.3 Vai trò dược liệu của hoa đu đủ due eect ceeeeceeecteeeeeeeeeeneees 17

Bảng 2.1 Dụng cụ, thiết bị chăm sóc và lay MAU CHUỘI sicaisscsssscisascesacsscesscerasseass 19

Bang 2.2 Hoá chat sử dụng cho thí nghiệm 0 cc.cccsssssscseecssecsssecssecssseesnesenees 20Bảng 2.3 Quy trình thu nước sắc hoa du đủ đực (Carica papaya L.) 26

Bang 3.1 Độ tang trong của chuột sung 34

Bảng 3.2 Chỉ số đường huyết của chuột (mg/dLL) ©.22-©2s2522222222222z2552 36

Bảng 3.3 Số lượng tế bào hồng cầu của chuột (x106 TB/mm°) 38

Bảng 3.4 Số lượng tế bào bạch cầu của chuột (x103 TB/mm) 39

Bang 3.5 Số lượng tế bào tiêu cầu của chuột (x105 TB/mmỀ) 41

Bảng 3.6 Một số chỉ số huyết học khác ở chuột . -522- 522252252222 42

vil

DANH MỤC HÌNH

Hình 1.1 Cơ chế hoạt động của streptozotocin trong tế bào B đảo tụy 6

Hình 1.2 Mô hình cam ứng bệnh đái tháo đường bằng §TZ - 7

Hình 1.3 Cơ chế đáp ứng đái tháo đường type H trong nghiên cứu 9

Hình 1.4 Cơ chế tác động của insulin trên kênh vận chuyền glucose 10

Hình 1.5 Hoạt động của insulin thúc day việc lưu trữ ở các cơ quan 12

Hinh Ì;6 Gơ chế Khing NGL assssssssossscsnssscssnseiscssissaisecssnssscnesesssassenassoannsannscnnsaas 14 Hình 2.1 Sơ đô bố trí thí nghiệm tông the 2©22252cccccscccscccseecce- 22 Hình 2.2 Bồ trúi chuồng nuôi chuột thí nghiệm -: :-55:552: 24 Hình 2.3 Minh họa thao tác cho chuột uống ĐH 27

Hình 2.4 Minh họa khảo sat trọng lượng chuột .- .c se 27 Hình 2.5 Minh họa thao tác thu máu chuột - ¿5255 s s22 <<zs s2 28 Hình 2.6 Minh họa thao tác thir đường huyết -22225c2z5vszcvszs 29 Hình 2.7 Minh họa đo kích thước hong cầu bằng phần mềm S-eye 30

Vill

MỞ ĐÀU

1 Tính cấp thiết của đề tài

Bệnh đái tháo đường là một rồi loạn chuyên hoá mãn tính, phát sinh khi tuyến

tụy không sản xuất du insulin hoặc cơ thé không đáp ứng hiệu quả với insulin Day

là một trong những bệnh phô biến nhất trên toàn cầu Bệnh này được phân loại thành

bón loại chính dựa trên nguyên nhân và triệu chứng lâm sàng: đái tháo đường loại I,

loại II, thai kì và các trường hợp đặc biệt khác Trong số đó, đái tháo đường loại IIđặc biệt pho biến, chiếm khoảng 85 đến 95% số ca đái tháo đường ở các nước phat

triển và tí lệ này còn cao hơn ở các quốc gia đang phát triển Tình trạng này được cho

là do sự gia đi của dân số, đô thị hoá, thói quen ăn uống không lành mạnh lối sống

nhanh và thiếu hoạt động thé chất Theo IDF (The International Diabetes Federation)

vao nam 2019, có khoảng 463 triệu người trên thé giới mắc bệnh đái tháo đường vớiước tính khoảng §7,6 triệu người tại Đông Nam A [1] Bệnh đái tháo đường có thédẫn đến nhiều biến chứng nguy hiểm, bao gồm tồn thương than, mạc và các van đềliên quan đến tim mạch như đột quy, loét chân do đái tháo đường, nhiễm tring, vàđặc biệt là tôn thương than kinh Biến chứng ton thương than kinh ngoại vi là một

trong những biến chứng nguy hiểm và phô biến nhất, với tỷ lệ mắc từ 26 đến 47%.

Mặc dù thường ít gây tử vong, nhưng nó có thé gây ra tàn phế, buộc phải cắt cụt chi [2].

Trong thời đại hiện nay, bên cạnh việc sử dụng các loại thuốc thương mại đề

điều trị đái tháo đường, sự tin dùng vào được liệu cô truyền đang ngày càng tăng lên

do nguồn góc lâu đời và tính ứng dụng truyền thông của chúng Do đó, việc nghiên

cứu và khám phá các loại được liệu truyền thông có khả năng chữa trị đái tháo đường

đang thu hút sự quan tâm rộng rãi [1], [2] Các nghiên cứu hiện nay về các được liệu

từ thực vật đã cho thấy khả năng giảm đường huyết [3-7] Tuy nhiên không chỉ cần

tìm ra các được liệu có thể hạ đường huyết mà còn cân phải xem xét về khả nănggiảm biến chứng của bệnh đái thao đường [8]

“Trong thời gian dai, hoa du đủ đực (Carica papaya L.) đã được công nhận là

một loại được liệu quý giá trong các phương pháp v học dân gian, nhờ vào ham lượng

các thành phần như alkaloid, flavonoid, saponin, steroid, coumarin diterpenes,quinones, phenol va tannin, Trong số các chất nay, flavonoid trong hoa du đủ được

xem là một hoạt chất quan trọng có khả nang ôn định đường huyết bang cách thúc

đây sự cân băng trong sản xuất insulin trong cơ thể [9-11] Nhiều nghiên cứu đã chỉ

1

ra rằng các hợp chất chiết xuất từ hoa đu đủ đực mang lại một loạt các lợi ích cho sức

khỏe và các hoạt động sinh học như kha nang kháng oxy hoá, kháng khuân, ức chế

sự phát triển của tế bào ung thư và ồn định đường huyết [9], [10], [12].

Nhằm đánh giá tác dung của nước sắc hoa đu đủ đực đối với mức độ đường huyết và một số chỉ tiêu sinh lí máu ở chuột nhắt trắng mắc bệnh đái tháo đường type

II, kết quả của nghiên cứu có thé cung cấp cơ sở khoa học cho việc sử dung hoa du

đủ đực trong điều trị bệnh đái tháo đường type II ở con người Nếu hiệu quả đượcchứng minh, nước sắc hoa đu đủ đực có thé trở thành một phương pháp điều trị bổsung cho bệnh dai tháo đường type II, góp phan cải thiện chất lượng cuộc sống của

người bệnh và giảm gánh nặng chi phí y tế Ngoài ra, đề tài này cũng có ý nghĩa trong việc bảo tồn và tôn vinh giá trị y học của cây đu đủ, một nguồn được liệu quý giá trong y học dân gian Việt Nam, cũng như nâng cao nhận thức của cộng đồng về việc

sử dụng các cây thuốc trong điều trị bệnh đái thao đường.

Chính vì các lí do trên, dé tài “Khao sát tác dụng của nước sắc hoa đu đủđực (Carica papaya L.) lên lượng đường huyết và một số chỉ tiêu sinh lí máu ởchuột nhat trắng bị Dai tháo đường type HE” là một hướng nghiên cứu có ý nghĩakhoa học và thực tiễn cao.

2 Mục tiêu nghiên cứu

Khảo sát tác dụng của nước sắc hoa đu đủ đực (Cariea papaya L.) lên lượng

đường huyết và một số chỉ tiêu sinh lí máu ở chuột nhất trắng bị đái tháo đường type

II Nghiên cứu này nhằm cung cấp thêm thông tin về tác dụng của hoa đu đủ đực

trong việc kiểm soát đường huyết và cái thiện các chỉ tiêu sinh lí máu ở bệnh nhân

tiêu đường type II.

3 Đối tượng nghiên cứu

Chuột nhat trắng cái chủng ICR 6 tuần tudi

4 Nội dung nghiên cứu

> Khao sát tác dụng của nước sắc hoa Du Đủ đực ở chuột bị bệnh đái tháo

đường type II lên độ tăng trọng:

> Khảo sát tác dụng của nước sắc hoa Du Đủ đực & chuột bị bệnh đái tháo

đường type II lên tế bào máu chuột: hong cau, bạch câu tiêu cầu và kíchthước hong cau;

z Khao sát tac dung của nước sắc hoa Du Đủ đực ở chuột bị bệnh đái tháo

đường type II lên một số chỉ số huyết học: hàm lượng glucose trong máu,

hàm lượng hemoglobin, chỉ số hematocrit, thời gian đông máu.

2

=

5 Phạm vi nghiên cứu

- Đề tài được thực hiện trên chuột nhất trắng cái bị đái tháo đường type IL.

- 2 liều nước sắc hoa đu đủ đực

- Thời gian bố trí thí nghiệm: 6 tuần/đợt thí nghiệm

- Độ tăng trọng cơ thé chuột.

- Các chỉ số huyết học: hàm lượng glucose trong máu, số lượng tế bào máu (hồng

cau, bạch cau, tiêu cầu), hàm lượng hemoglobin, chỉ số hematocrit, bán kính hồngcâu và thời gian đông máu

CHUONG 1 TONG QUAN VE TÀI LIỆU1.1 Tổng quan về bệnh đái thao đường type II

1.1.1 Khái niệm

Bệnh đái tháo đường type II, còn được gọi là tiêu đường type H, là bệnh rối loạn

chuyên hoá không dong nhất, dién hình bởi tang glucose trong máu do sự thiểu huthoặc khả năng không đây đủ của insulin, hoặc cả hai Tăng glucose trong máu kéo

đài gây ra các rồi loạn trong quá trình chuyên hoá carbohydrate, protide, lipide, gây

ton thương cho nhiều cơ quan khác nhau, đặc biệt là tìm và mạch máu, than, mắt vàthân kinh [13]

1.1.2 Nguyên nhân và các yếu to nguy co

Bệnh đái tháo đường type II có nguyên nhân chính là sự kháng insulin và thiếu hụt insulin Sự kháng insulin xảy ra khi tế bảo trong co thê không phan ứng tốt với

insulin, din đến tang glucose trong máu Trong khi đó, thiểu hụt insulin xay ra khitụy không sản xuất đủ insulin dé đáp ứng nhu cầu của cơ thé Các yếu 6 nguy cơkhác cũng đóng vai trò quan trọng trong sự phát triển của bệnh, bao gồm tuôi tác, tiền

sử gia đình, thừa cân hoặc béo phì, lối sông ít vận động, chế độ ăn uống không lành

mạnh bệnh cao huyết áp, mỡ máu cao, và hội chứng buồng trứng đa nang ở phụ nữ.Có nhiều yếu tổ nguy cơ góp phần vào sự phát triển của bệnh này, bao gồm tuôi tác tiền sử gia đình, thừa cân hoặc béo phì, lối sống ít vận động chế độ ăn uéng không lành mạnh, bệnh cao huyết áp, mỡ máu cao, và hội chứng buông trứng đa nang

ở phụ nữ [13].

1.1.3 Triệu chứng, phòng ngừa và điều trị

#Triệu chứng

Người mắc bệnh đái tháo đường type II thường xuyên đi tiêu cảm giác khát

nước nhiều, cảm thay đói sau khi ăn, giảm cân không đo kiêng ăn, mệt mỏi, cảm giácnhìn mờ ngứa và tê bì ở tay, chân, da khô và ngứa, cùng với tốc độ lành vét thương

chậm Các biến chứng của bệnh này có thê là cấp tính như hôn mê tăng đường huyết,

hôn mê hạ đường huyết và toan ceton do đái tháo đường; cũng như là biến chứng mạn

tính như bệnh tim mạch, bệnh lí mach máu não, bệnh thận, bệnh lí võng mạc, bệnh lí

than kinh và loét ban chân đái tháo đường [13]

*Điều trị và phòng ngừa

Trong việc điều trị căn bệnh này, thay đôi lối sống bằng việc áp dụng chế độ ăn

uống cân đối và tập luyện thé dục đều đặn thường được khuyến khích kết hợp với

việc sử dụng thuốc uống hạ đường huyết hoặc insulin Đồng thời, để phòng ngừa căn

bệnh này, quan trọng là duy trì cân nặng ở mức hợp lí tập luyện thẻ dục thường

xuyên, tuân thủ chế độ ăn uống lành mạnh, ngừng hút thuốc lá, đảm bảo uống đủ nước và thực hiện kiêm tra sức khỏe định kỳ [13] Tóm lai, đái tháo đường type I làmột bệnh lí mãn tính nguy hiểm, nhưng có thé kiểm soát tốt bằng chế độ sinh hoạthợp lí và tuân thủ điều trị Phát hiện sớm và điều trị kịp thời có thể giúp ngăn ngừabiến chứng và nâng cao chất lượng cuộc sống cho người bệnh

1.2 Tổng quan về Streptozocin

1.2.1 Đặc tính, trạng thái ton tai của streptozotocinStreptozotocin (STZ) là một dẫn xuất nitrosourea đơn chức, được phân lập từ

Streptomyces achromogenes vào năm 1960 STZ không chỉ có hoạt tính kháng sinh

phô rộng mả còn được biết đến với đặc tính chống ung thư Trong các nghiên cứu,

STZ thường được sử dụng đề gây ra bệnh đái tháo đường ở động vật thí nghiệm thông

qua tác động độc hại lên tế bào của tuyển tụy Là một tác nhân alkyl hoá mạnh, STZ

có khả năng methyl hoá trực tiếp DNA, gây ra sự đút gãy chuỗi DNA tại các vị tríkhông bèn với kiềm, tông hợp DNA đột xuat, gắn thêm DNA, gây quang sai nhiễmsắc thé, vi nhân, trao đôi nhiễm sắc thé chị em và gây chết tế bào Nó cũng đã đượcphát hiện có khả năng gây đột biến trong các xét nghiệm vi khuẩn và tế bào nhânchuẩn STZ cũng có khả năng gây ung thư Việc sử dụng STZ có thé gây ra các khối

u ở thận, gan và tuyến tụy của chuột chỉ sau một lần sử dụng Một số bằng chứng còn cho thay mối liên quan giữa các gốc tự do và tôn thương DNA, nhiễm sắc thé bởi hợp

chat này Do việc sử dung STZ như một chat chồng ung thư, nghiên cứu về độc tính

đi truyền của nó có ý nghĩa thực tiễn đáng ké [14].

1.2.2 Vai trò của streptozotocin đỗi với mô hình chuột Đái tháo đường

Tuy được phân lập từ năm 1960, nhưng vai trò của streptozotocin đối với bệnh

Dai tháo đường không được mô tá trong vòng 3 năm Cho đến năm 1967 - 1969, tác động gây Dai tháo đường của STZ mới được làm rõ STZ phá hủy có chọn lọc các tế

bao dao tụy 8 dan đến cơ thé động vật bị thiếu hụt insulin, tăng đường huyết, khát

nước, đào thải nước tiêu liên tục (đặc trưng cho Dai tháo đường type 1) Ngoài ra, khi

sử dụng STZ kết hợp với nicotinamide, kết quả cho thấy một hình thức Đái tháođường type 2 Nicotinamide hỗ trợ bảo vệ một phan tế bào B chỗng lại STZ, tạo ra

mô hình thiếu insulin mà không phải kháng insulin (Dai tháo đường type 2) Nó được

đặc trưng bởi sự ôn định, tăng đường huyết và mắt khoảng 60% chức năng tế bào B

[15-18].

1.2.3 Cơ chế gây bệnh của streptozocin doi với tế bào fp dao tụy

STZ là sự kết hợp của nhóm nitramine methylnitrosourea có tính phản ứng cao

ở vị trí C2 và phan tử glucose Nhóm nitramine methylnitrosourea gây ra tính độc của

STZ, trong khi phân tử glucose dẫn chất nay đến thăng các tế bào B đảo tụy [19] STZnhắm mục tiêu đặc hiệu vào các tế bào đảo tụy bằng cách nhận điện GLUT2, mộtprotein vận chuyên xuất hiện nhiều trên màng tế bào B (Hình 1.1) [20-22] Do GLUT2cũng ton tại trong gan và thận, liều cao STZ có thé gây hại cho các cơ quan nảy; tuynhiên, chúng nhanh chóng được thận chuyên hoá và bài tiết [22] Khi ức chế biểuhiện của chat vận chuyên GLUT2 trong màng tế bào bảo vệ các tế bảo B tuyến tụykhỏi các hoạt động gây độc tế bào và gây bệnh đái tháo đường của STZ [23]

Sau khi STZ xâm nhập vào các tế bào B dao tụy nó phá vỡ sự liên tục của sợi

DNA, kích thích enzyme tổng hợp poly (ADP-ribose) và làm giảm mức NAD* và

NADP*, là các nucleotide đóng vai trò quan trọng trong các quá trình hô hap tế bào.Điều này đóng vai trò quan trọng trong việc ức chế sự tông hợp tiền insulin

(proinsulin) và gay ra bệnh đái tháo đường Do mức NAD* và NADP' giảm, oxy

được kích hoạt trong các tế bào và hydrogen peroxide được tạo ra [25] Các loại oxyhoạt tính (ROS) cũng có thé hình thành trong các tế bào trong quá trình tích tụ STZtrong các tế bảo [3 đo tính bat ôn hoá học của chúng [26] [27] Theo nghiên cứu, các

6

vị trí của nitơ N7 va oxy O6 của guanine đặc biệt dé bị tốn thương bởi các phân tử

alkyl của STZ [27] [28].

1.2.4 Mô hình cam ứng bệnh đái tháo đường do STZ

Cơ chế gây ra bệnh đái tháo đường do STZ có thê khác nhau tùy thuộc vào liều

dùng Vì vậy, có hai phương pháp được sử dụng thường xuyên đề xác định là STZ

được tiêm một lan, liều cao hoặc nhiều liều thấp được thé trong Hình 1.2 và Bang 1.1

Hình 1.2 Mô hình cắm ứng bệnh đái tháo đường bằng STZ [29]

(A) Cơ ché gây ton thương tế bào beta myén tụy khi dang một hoặc nhiều liều STZ

(Bì Cơ chế hoạt động của STZ trong nhân tế bào Bp

Bảng 1.1 Một số mô hình thí nghiệm cảm ứng bệnh đái tháo đường trên

chuột bằng STZ [24]

Liêu lượng Đối tượng Mức độ đường huyết

>200 mg/dL; 438 + 70 mg/dL (an

10 mg/kg b.w BALB/c hoặc C57BL thức ăn giàu chất béo) sau 6 tuần;

trong Š ngày (đực, 4— 5 tuần tuổi) >600 mg/dL (đã cho ăn với chế độ ăn

ít béo} sau 6 tuân

5Š và 75 mg/kgbwC57BL/6I (đực và cái 547 +65,9 mg/dL (duc)

trong 5 ngày 10-12 wantudi) — 237+§6,3 mg/dL (cái

Liêu duy nhat Sprague-Dawley 20,39 + 1,72 mmol /L

30 mg/kg b.w (đực ,6 tuần tuôi) — 367 +3Img /dL sau 1 tuần

Liêu duy nhât Wistar

426 + 31 mg/dL

60 mg/kg b.w (đực, 8 tuân tuôi)

Liêu duy nhat

ICR (đực, 5 tuần tudi) >500 mg/dL sau 6 tuần

50 mg/kg b.w

Liêu duy nhat ` :

ICR (đực, 4 tuân tu6i) 465 + 15,60 mg/dL sau 2 tuân

nghiên cứu và tái hiện chính xác các đặc điêm phức tạp của bệnh đái tháo đường

type II, các phương pháp kết hợp giữa STZ và các hoá chất khác như NA đã được

phát triển Phương pháp này mang lại nhiều kết quả tích cực được mô tả chỉ tiết

trong Hình 1.3.

HFD+STZ Fructose + STZ GTG

Hyperinsulinemia, IR, Free fatty acid, |

IR/Glucose intolerance ride, Mitochondrial Obesity, ff 86,

‡ oxidative stress, Leptin Impaired Insulin Obese/Prediabetic resistance secretion

DNA breaks Inflammation

1 Ectopic fat accumulation- Type 2 Diabetes Mellitus

PARP activation High leptin and low STZ

Jt NA adiponectin levels

(Portial protection)

NAD depletion stz

1

Necrotic cell death 4

Hyperglycemia impaired Bcells

4

Type 2 Diabetes Mellitus

Hình 1.3 Cơ chế đáp ứng đái thao đường type H trong nghiên cứu [30]

Khi STZ xâm nhập vào tế bao B, gây tôn thương DNA và tăng hoạt động của

enzyme stra chữa DNA poly (ADP-ribose) polymerase (PARP-1) Hoạt động quá

mức của enzyme nay dan dén cạn kiệt NAD (+) va ATP nội bao, lam cho các tế bào

tiết insulin bj hoại tử Nicotinamide (NA) cho thay mot phan bao vé bằng cách ức chếPARP-], ngăn ngửa sự cạn kiệt NAD (+) và ATP trong các tế bào tiếp xúc với hoạtđộng của STZ Bệnh đái tháo đường type II được gây ra theo cách này cũng thê hiệncác triệu chứng rồi loạn lipid máu, đường niệu và keton niệu [30]

1.3 Tổng quan về insulin

1.3.1 Cơ chế đáp ứng của insulin đối với glucose trong tế bào và cơ quan

* Đối với tế bào

Insulin - hormone được tiết ra từ tế bào B đảo tụy - có chức năng điều hòa hoạtđộng của enzym, tham gia vào quá trình đồng hoá và dj hoá 3 thành phan quan trọngcủa co thé là Lipid - glucid - protid Do vậy, insulin có liên quan đến một số chỉ địnhnhư dành cho trẻ suy dinh dưỡng, gay gò, đặc biệt được dùng như thuốc quan trọngđối với bệnh nhân đái tháo đường (cá type I và II)

9

Vai trò quan trọng nhất của insulin trong cơ thể con người là sự tương tác với

glucose (Hình 1.4) dé cho phép các tế bào của cơ thé sử dụng glucose làm năng

lượng Tuyến tụy thường sản xuất nhiều insulin hơn đẻ đáp ứng với mức tăng đột biến của lượng đường trong máu ví dụ sau khi ăn một bữa ăn nhiều đường Điều

này là do insulin hoạt động như một chìa khoá ding dé mở các tế bào trong cơ thê

và cho phép glucose được sử dung làm nguôn năng lượng.

Hình 1.4 Cơ chế tác động của insulin trên kênh vận chuyển glucose

Thy thé insulin (insulin receptor - IR) là một protein xuyên màng, gồm tiêu phannằm mặt ngoài màng, [3 năm mặt trong màng Tiểu phan a bên ngoài tế bào liên kếtvới insulin và kích hoạt xúc tác tyrosine kinase (Tyr-K) nằm trong tế bao, Ngượclại Tyr-K kích hoạt nhiều loại protein khác trong một tầng tín hiệu dẫn đến các chức

nang khác nhau của insulin Các bước chính trong báo hiệu insulin, như trong Hình

1.5, bao gồm: khi insulin kết nối với IR, một loại enzyme đặc biệt gọi là tyrosine kinase được kích hoạt Quá trình này gây ra việc gắn thêm nhóm phosphate

(Phosphorylation) vào các phan tử tyrosine trên IR và các protein khác.

Phosphorylation này lan truyền tín hiệu đến nhiều protein khác nhau trong tế bào, baogồm insulin receptor substrate (IRS), phosphoinositide 3-kinase (PI3K), và proteinkinase B (PKB hoặc AKT) Các tín hiệu này cuối cùng dẫn đến việc vận chuyền cácGLUT4 từ bên trong tế bào lên bề mặt của chúng, giúp tế bào hấp thụ glucose từ máu

10

Quá trình này quan trọng cho việc cung cấp năng lượng cho cơ bắp và mô mỡ, đặc biệt là khi cơ thé cân nang lượng nhiêu hon, chang hạn khi tập thé dục Sau khi xâm

nhập vào các tế bào (ví dụ, được GLUT4 tạo điều kiện), glucose được chuyển hoá

thành năng lượng được chuyền đôi thành glycogen dé lưu trữ, được lưu trữ dưới dang

triglyceride và / hoặc được sử dụng cho các quá trình tăng trưởng tế bào.

* Doi với các cơ quan

Trong gan, dòng chảy dudng chất được tối ưu hoá nhờ sự phối hợp của các tínhiệu hormone và dưỡng chat Insulin, thông qua Akt2, kích hoạt glycogen synthase

và giảm sự phiên mã của các enzyme gluconeogenesis thông qua sự bat hoạt của

FOXOI Insulin cũng thúc day sự kích hoạt và biểu hiện của SREBPI Glucose ức

chế quá trình phân giải glycogen và khi được chuyên hoá, có thê kích hoạt ChREBP

Cả SREBPI và ChREBP đều thúc day quá trình tạo lipid mới (DNL) Gan cũng hap

thụ axit béo từ các mảnh chylomicron hoặc từ quá trình phan giải lipid ngoại biên,

góp phần vào tông hợp lipid thông qua quá trình tái ester hoá [31].

Trong cơ xương, insulin kích hoạt sự di chuyên của các túi chứa glucose (GSV)

đến màng tế bao, tăng cường sự hấp thu glucose và tong hợp glycogen Sự di chuyển

của GSV cũng có thé được kích hoạt bởi hoạt động thé dục Cơ xương cũng hap thụ

axit béo dé oxy hoá cung cấp năng lượng cho cơ thé [31]

Trong mô mỡ, insulin ức chế quá trình phân giải lipid và thúc day sự hap thuglucose Mô mỡ là nơi lưu trữ chính của lipid, với sự hấp thu phối hợp của chất béo

từ chylomicrons và lipoprotein tỷ trọng rất thấp (VLDL) [31].

Tóm lại, các quá trình này đảm bảo sự cân bằng năng lượng và chuyên hoá trong

cơ thê, đóng vai trò quan trọng trong việc duy trì sức khỏe toàn diện.

11

Hình 1.5 Hoạt động của insulin thúc đây việc lưu trữ ở các cơ quan [19]

BAR: thy thé B-adrenergic; TG: chylomicron-trighycerides; IR: thự thể insulin; HL: hepatic lipase;

CM-R: mảnh chylomicron; CAM-KIL calmodulin kinase H; GS: glycogen tiHhase; GP: givcagen

phosphorylase; Ac-CoA: Acervi-CoA.

glycogen ở gan Kháng insulin ở cơ, do lipid lạc chỗ, xảy ra trước kháng insulin ở

gan và chuyển glucose ăn vào vào gan, dan đến tăng quá trình tạo mỡ mới ở gan vàtăng lipid máu Cơ chế kháng insulin được thé hiện ở Hình 1.6 [31]

Sự xâm nhập của dai thực bào vào mô mỡ trắng (WAT) dẫn đến tăng phân giải

mỡ, làm tăng thêm quá trình tông hợp triglyceride ở gan và tăng lipid máu do tăng

quá trình ester hoá axit béo Quá trình phân giải mỡ WAT do đại thực bào gây ra cũng

kích thích tân tạo glucose ở gan, dẫn đến tăng đường huyết lúc đói và sau bữa ăn

thông qua việc tăng cung cấp axit béo đến gan, dẫn đến tang ham lượng acetyl-CoA trong gan, một chất kích hoạt mạnh mẽ pyruvate carboxylase và tăng chuyên đổi

glycerol thành glucose [31].

Các quá trình điều hòa cơ chất này chủ yếu không phụ thuộc vào tín hiệu insulin

ở gan nhưng phụ thuộc vào tín hiệu insulin trong WAT, cơ quan bị khiếm khuyết do

viêm Các liệu pháp giảm lưu trữ lipid lạc chỗ và giảm quá trình phân giải lipid WAT

do đại thực bào gây ra sẽ đảo ngược nguyên nhân gốc rẻ của bệnh đái tháo đường

type H [31].

Trong gan, việc kích hoạt PKCc qua trung gian DAG làm suy yếu tín hiệu insulin, hạn chế quá trình tông hợp glycogen do insulin kích thích, trong khi quá trình

tông hợp lipid ở gan vẫn tiếp tục không bị suy giảm Tại cơ xương, sự kích hoạt PKC0

qua trung gian DAG làm suy yếu tín hiệu insulin, cản trở sự hấp thu glucose do insulin

kích thích và dẫn đến tăng cung cấp glucose đến gan Tuy nhiên, tập thẻ dục vẫn cóthé thúc day sự hấp thu glucose ở cơ Trong mô mỡ, sự giải phóng cytokine từ các

đại thực bảo liên quan đến mô (ATM) thúc đây quá trình phân giải mỡ và dẫn đến tăng giải phóng axit béo (FA) Điều này sẽ thúc day quá trình tong hợp lipid ở gan và

kích hoạt quá trình tạo glucose ở gan thông qua sự hoạt hoá PC và glycerol qua trung

gian acetyl-CoA, tăng sản xuất glucose thông qua quá trình chuyền đôi cơ chất [31]

13

14

1.4 Tổng quan sơ lược về chuột nhắt trắng

Đề tài được thực hiện trên chuột nhắt trắng 6 tuần tuôi chủng ICR (Institute

Giống Chuột Mus Linnaeus, 1785

Loài Chuột trắng Mus musculus Linnaeus, 1785

Nồi Chuột nhất trang Mus musculus var albino Linnaeus,

oi

1785

1.4.2 Đặc điểm hình thái và sinh lí

*Đặc điềm hình thái

Chuột nhắt trắng - Mus musculus var albino ching ICR có hình dạng tương

tự với chuột nhắt nhà Chuột có lông ngắn trắng: mắt sáng, lồi; tai vénh; đuôi tran dai; miệng thuyền; năm ngón chân trên mỗi bàn chân Cân nặng từ 1 - 2g đối với

chuột mới sinh, 20 - 40g đối với chuột trưởng thành (5 - 8 tuần tuổi) Chuột nhấttrắng chủng ICR có tuôi thọ từ 2 đến 2.5 năm, 6 đến 8 tuần tuôi chuột bước vào độ

tuôi thuần thục giới tính và có thời gian mang thai là 19 đến 21 ngày [34], [35].

*Đặc điểm sinh lí máu [34]

15

- Tỷ lệ thé tích máu: Chiêm khoảng 6-7% trọng lượng cơ thé.

- Plasma: Chiếm khoảng 55% thẻ tích máu chứa nước protein, các chất điện giải.

glucose, hormone, và các chat vận chuyền khác.

- Tế bào máu: Chiếm khoảng 45% thẻ tích máu, bao gồm:

+ Hong cầu: Chiém khoảng 95% tế bào máu, có chức năng vận chuyền oxy và CO›;

+ Bạch cầu: Chiém khoảng 4% tế bào máu, có chức năng bảo vệ cơ thé chồng lại

1.5 Tổng quan về hoa đu đủ đực (Carica papaya L.)

Du đủ (Carica papaya L.) có nguồn gốc từ Trung và Nam Mỹ và là một trong

những loại cây ăn quả được trông nhiều nhất trên thé giới, đặc biệt là ở các vùng nhiệt

đới và cận nhiệt đới, trong đó có Việt Nam Du đủ (Carica papaya L.) là một loại cay

thân thảo lâu năm, có mủ màu trắng duc, có thé cao tới 12m Nó cho quả quanh nam

và mỗi quả nặng từ 1000 đến 3000g Du đủ được chia thành cay đực và cái Hoa du

đủ là bộ phận lưỡng tính, mọc thành cụm ở đỉnh ngọn hoặc nách lá của cây đu đủ.

Hoa trắng nhạt hay xanh nhạt; trong đó, hoa đu đủ đực mọc ở kẽ lá thành chùy cócuống rất đài; hoa cái có tràng dài hơn tràng của hoa đực, mọc thành chùy ở kẽ lá

Hoa đu đủ có 5 cánh hoa mỏng manh, nhụy hoa màu cam sáng và nhiều nhị hoa màu

vàng [36], [37] Hiện nay, nhiều thành phan hoạt chất thực vật đã được tìm thấy từcác bộ phận khác nhau của Du đủ (Carica papaya L.) Trong đó các thành phan chínhbao gồm: alkaloid, flavonoid, saponin, steroid, coumarin diterpenes, quinones, phenol

va tannin Đặc biệt, hoa du đủ đực chứa nhiều flavonoid, steroid triterpenoid, tannin

và carbohydrate, Các hợp chat chiết xuất từ các bộ phận khác nhau của hoa đu đủ đực (Carica papaya L.) cho thấy một loạt các tác đụng đối với sức khoẻ và các hoạt động sinh học như kháng oxy hoá, chống tăng huyết áp chong khối u, chống đái tháo đường, các hoạt động kháng khuân, [9-11] Chính vì vậy, đây là đối tượng có thé

khai thác nguồn hoạt chất sinh học thực vật tự nhiên dé cung cấp cho cơ thé Theo

đó, cần có các nghiên cứu vẻ tác dụng của hoa đu đủ đực nói chung và nước sắc hoa

du đực nói riêng dé có đủ cơ sở khoa học day đủ

l6

1.6 Vai trò được liệu

Hoa du đủ (Carica papaya L.) từ lâu đã được sử dụng trong y học dan gian dé

điều trị nhiều bệnh lí khác nhau Ngày nay, các nghiên cứu khoa học đã dan chứng

mình những tác dụng dược liệu quý báu của hoa đu đủ, cụ thê hơn lả hoa đu đủ dực

đã góp phan khăng định vị trí quan trọng của nó trong lĩnh vực y học Vai trò đượcliệu của hoa đu đủ đực được thẻ hiện trong Bang 1.3

Bang 1.3 Vai trò được liệu của hoa du du đực [9], [10], [12]

Enzyme papain và chymopapain có khả năng phân giải

Hỗ trợ tiêu hoá protein, giúp tiêu hoá thức ăn hiệu quả, giảm day bụng,

khó tiêu táo bón

Các hợp chat polyphenol và vitamin C có tác dụng chong

oxy hoá mạnh mẽ, giúp trung hòa gốc tự do, bảo vệ tế bào

Các hợp chat polyphenol và flavonoid có tác dung chông

Giam viêm viêm, giảm đau, hỗ trợ điều trị các bệnh viêm khớp thoái

hoá khớp,

Ho trợ điều trị bệnh — Một số nghiên cứu cho thay hoa đu đủ có kha năng hạ

dai tháo đường đường huyết, cải thiện tình trạng bệnh đái tháo đường.

1.7 Tông quan về các công trình nghiên cứu trên thể giới và ở Việt Nam

Kha năng ôn định đường huyết của hoa đu đủ đực (Carica papaya L.) được các nhà khoa học trên thé giới rat quan tâm đặc biệt trong các năm gan đây có các nghiên

cứu liên quan tiêu biểu sau:

1.7.1 Tổng quan về các công trình nghiên cứu trên thể giới

Năm 2018, Wahyuni và cộng sự đã công bó, hoa đu đủ (Carica papaya L.) chứachất chuyển hoá thứ cấp như flavonoid, tannin, steroid và terpenoid Chiết xuất hoa

đu đủ thê hiện tiềm năng trị đái tháo đường ở liều 400 mg/Kg BW và 500 mg/Kg BW

thông qua việc giảm lượng đường trong máu ở chuột [38].

17

Đến năm 2021, ES Marpaung và cộng sự, công bố hoa đu đủ chứa flavonoid,

tanin và steroid triterpenoid có chức năng chống bệnh Dai tháo đường do sucrose (liều 160 mg/kg thé trọng) với các nồng độ chiết suất hoa du đủ khảo sát 200, 400 và

500 mg/kg thé trọng Kết quả cho thấy, chiết suất hoa đu đủ ở nông độ 200 mg/kg thé

trọng có hiệu quả ôn định đường huyết tốt nhất thông qua khảo sát khói lượng chuột

va lượng glucose trong máu [10] Tương tự như Wahyuni và cộng sự (2018), nghiên

cứu vẫn chưa có những đánh giá nhất định về các chỉ tiêu sinh lí máu khác ở chuột

1.7.2 Tổng quan về các công trình nghiên cứu tại Việt NamNăm 2019, Nguyễn Thị Xuân Thu đã tiến hành sàng lọc một số thực vật có khảnăng hạ đường huyết trên mô hình chuột đái tháo đường type II do streptozocin gây

ra Kết quả nghiên cứu cho thấy cao chiết từ lá và hạt đu đủ lần lượt có khả năng hạđường huyết là 52,38% và 53,16% Ngoài ra, cao chiết ethanol từ hạt và lá đu đủ đều

có kha năng ức chế hoạt động của enzyme a-glucosidase và enzyme a-amylase Các

nghiên cứu mô bệnh học trên tuyến tụy đã phát hiện rằng cao chiết từ hạt đu đủ cũng

có tác dung cải thiện tôn thương các tiêu đảo tụy do streptozocin gây ra [39].

Nghiên cứu của Nguyễn Thị Huỳnh Như và đồng nghiệp (2020) đã chứng minhrằng cao chiết từ hạt du đủ chứa một số thành phan hoá học có hoạt tính kháng oxyhoá được biéu hiện qua kha năng khử và bat gốc tự do Điều này đưa ra tiềm năng

hỗ trợ trong việc điều trị bệnh tiêu đường [40] Cùng năm đó, một nghiên cứu khác của Giang Thị Kim Liên va Đỗ Thị Lệ Uyên (2020), cho thay các hợp chất hoá học chủ yếu trong hoa đu đủ đực bao gồm các chất có nhóm OH, các este và axit béo,

cùng với các chất thuộc nhóm digoxin Trong số các chất này, Stigmasterol là mộtchất chống oxy hoá mạnh, có tác dụng hạ đường huyết và giảm cholesterol [41].

18

CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU2.1 THỜI GIAN VA DIA DIEM NGHIÊN CỨU

2.1.1 Thời gian nghiên cứu

Dé tài được tiến hành từ tháng 10/2023 đến tháng 5/2024

2.1.2 Địa điểm nghiên cứu

Đề tài được thực hiện tại phòng thí nghiệm Giải phẫu — Sinh lí Người và Động

vật (M103), Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hỗ Chí Minh.

2.2 DỤNG CỤ, THIẾT BỊ VÀ HOÁ CHÁT

2.2.1 Dụng cụ, thiết bị dùng chăm sóc chuột và lay máu chuột

Bảng 2.1 Dụng cụ, thiết bị chăm sóc và lay máu chuột

* Dụng cụ, thiết bị chăm sóc chuột

| Phòng nuôi động vật thí nghiệm Việt Nam

2 Chuông nuôi chuột Việt Nam

3 Bình nhựa đựng nước uông cho chuột (75 ml) Việt Nam

4 Máy lạnh Nhật

5 Nhiệt kê điện tử do nhiệt độ và độ âm Đức

6 Falcon 50ml (làm do chơi cho chuột giảm stress) Pháp

* Dụng cụ, thiết bị lầy máu chuột và quan sát tiêu bản

] May thử đường huyet FreeStyle Optium Anh

2 _ Kính hiên vi quang học Olympus Nhật

4 Cân phân tích Shimadzu Nhật

5 Buong đêm hồng cau, bach cau Heinz Herenz Hamburg Đức

6 Ong trộn hong cau, bạch câu — Heinz Herenz Hamburg Đức

7 Ong mao quản Hirschmann Laborgerate Duc

8 Bộ dụng cụ Huyết sắc kẻ Sahli Marienfeld Đức

9 Máy li tam HETTICH Đức

14 Falcon 50 Kartel Spa Phap

21 Kim tiêm ImL Vinahankook Việt Nam

22 ~= Falcon 15 Kartel Spa Phap

2.2.2 Hoá chat va dung dich thí nghiệm

Bang 2.2 Hoá chất va dung dich sử dung cho thí nghiệm

* Hoá chất sử dụng cho thí nghiệm

1 Streptozocin Santa Cruz My

2 Nicotinamide Santa Cruz My

3 Acid citric

4 — Natri citrate

5 Natri sulfate Scharlab S.L Tay Ban Nha

6 Natri clorua Scharlab S.L Tay Ban Nha

7 Axit axctic Scharlab S.L Tay Ban Nha

8 Xanh methylen

9 Magnesium sulfate Scharlab S.L Tay Ban Nha

I0 — Kali dihydrogen phosphate Merck Đức

11 = di-Natri hydrogen phosphate Merck Dite

12 Giemsa bột An Độ

13 Methanol Xilong Scientific Trung Quôc

IS Formaldehyde Xilong Scientific Trung Quéc

* Dung dich sw dụng cho thí nghiệm

20

Streptozocin Cân 0,115g streptozocin + đệm citrate (pH=4,5) vừa du

Đệm citrate (b) Pha stock natri citrate: cân 2,941g Natri citrate + nước

pH=4.5 cất vừa đủ 100ml dung dich

=> 4,7ml (a) + 5,3ml (b) + nước cắt vừa đủ 100ml dung dịch

(điều chỉnh pH bằng acid citric)

Nước muôi sinh lí Cân 0,9g Natri chlorua + nước cat vừa đủ 100ml dung dịch

0.9%

_ Dung dịch hồng cầu 5g Na:SO¡ + 1 g NaCl + nước cất vừa đủ 100 ml dung dich.

Hayem

_ Dung dich bạch cầu 5 ml axid acetic nguyên chất + 2 giọt xanh metylen 0,3% +

Lazarus nước cất vừa đủ 100 ml

Dung dịch MgSO4: 14 g: nước cat vừa đủ 100 ml Magie sulphat 14%

Dung dich Giemsa 7,6 g Giemsa + 750 mL methanol + 250 mL glycerin

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Toàn bộ thí nghiệm của khoá luận được bồ trí theo sơ đồ Hình 2.1

Hình 2.1 Sơ đồ bố tri thí nghiệm tổng thé

DC: Đi chứng; NT: Nghiệm thức; STZ; Streptozotocin; HD: Nước sắc hoa Du Di đực

2.1 Phương pháp cham sóc chuột

Chuột nhất trắng đực chung ICR (Mus musculus var albino) 4 tuan tudi, duoc

mua từ Trung tâm Công Nghệ Sinh học Thành phố Hỗ Chí Minh Chuột được nuôi

ôn định ở điều kiện phòng thí nghiệm trong 2 tuân cho đạt trọng lượng 19 - 23g (6

tuần tuôi) trước khi tiến hành thí nghiệm

Điều kiện nuôi: chuột được nuôi trong lồng kính kích thước 30x 19x19 cm*, dướinên chuông lót trâu, trên nắp chuồng đậy bang lưới sắt (5 con/chuồng); chu kì sángtối (10 giờ sáng và 14 giờ tối) ở nhiệt độ phòng (27 - 28°C) được ghi nhận bởi máy

đo nhiệt kế điện tử đặt trong phòng Thức ăn cho chuột là viên thức dn tông hợp chuyên cho chuột được mua từ Viện Sinh học Nhiệt đới, nước uống là nước sinh hoạt

của phòng thí nghiệm Chuột được cho ăn, bé sung nước uống vào lúc 8 giờ và 18giờ hàng ngày Chuông nuôi được thay trau 2 ngay/lan

toto

2.2 Phương pháp gây mô hình chuột đái tháo đường type II

Dựa trên nghiên cứu của Koji Hayashi và đồng nghiệp (2006) trên chuột ICR

8 tuần tuôi, việc sử dụng liều đơn 100mg/kg BW và 125mg/kg BW streptozotocin đã

gây ra sự cảm ứng va tạo ra mô hình chuột Dai thao đường sau ba tuần [51]

Nghiên cứu của Sachin Arora và đồng nghiệp (2009) trên chủng Swiss Albino trọng lượng 25 - 30g đã chỉ ra rằng liều 100mg/kg BW chỉ tăng đường huyết mả

không gây ra tiêu đường Tuy nhiên, với liều 180 mg/kg BW, kết quả cho thấy 100%chuột trở thành tiều đường, nhưng chỉ có khoảng 75% số chuột sống sót qua năm tuần

theo dõi [52].

Nghiên cứu của Vũ Kha Thanh Thanh và đồng nghiệp (2017) trên chuột nhắt

trang Mus musculus Swiss Albino (giống đực 4 - 6 tuần tuôi) đã xác định rang liều

125 mg/kg BW có thé đạt được tỷ lệ chuột tiêu đường đáng ké so với liều 150 mg/kg

BW, nhưng cao hơn so với liều 100 mg/kg BW ở tuần 5 Nhóm chuột với trọng lượng

từ 12-20g và tiêm liêu 125 mg/kg đã có tỷ lệ 39% và 62% chuột tiêu đường đạt chuẩnsức khỏe ở tuần 3 va 5 sau tiêm Đặc biệt, tat cả chuột tiêm liều 125 mg/kg BW đãsông sót đến tuần thứ 3 Chuột với trọng lượng từ 20 - 28g trước khi tiêm

streptozotocin đã có tỷ lệ tiêu đường cao hơn đáng kế so với nhóm chuột trọng lượng

từ 12 - 20g [53].

Từ đó, dé tài sẽ lựa chọn kết hợp nông độ Streptozotocin (STZ) và

Nicotinamide (NA) phù hợp dé gây mô hình chuột Dai tháo đường type IL.

2.3.Cơ sở xác định liều dùng nước sắc hoa đu đủ đực

Theo Ths.Bs Nguyễn Văn Toàn - bệnh viện y học cỗ truyền tinh Bắc Giang,lạm dụng dược liệu thiên nhiên mỗi ngày trong thời gian đải sẽ mang lại nhiều hậuquả đáng tiếc như ngộ độc, anh hưởng chức năng gan, thận, có thé không gây tử

vong hoặc biến chứng tức thì nhưng về lâu đài có thé ảnh hưởng đến cơ thê bởi những chất độc hại ân chứa bên trong nó [54] Đề tài đã tham khảo một số sách cũng như ý kiến của bác sĩ và được sĩ tại Bệnh viện y học cô truyền thành phố Hồ Chí Minh, với boi cảnh hiện có, dé tài quyết định lựa chọn hai liễu dùng nước sắc: liều 1 - uống liên

tục ba ngảy, nghỉ 1 ngày; liều 2 - uống liên tục năm ngày và nghỉ 2 ngày Ngoài ra,

dé tai sử dụng thuốc Metformin thương mại dé làm đối chứng dương cho thí nghiệm

2.4 Bồ trí thí nghiệm

Chuột đạt tiêu chuẩn lam thi nghiệm được phân chia vào các nghiệm thức và đánh dấu theo thứ tự có định cho từng nghiệm thức Thí nghiệm gồm 54 chuột, chia

làm 6 nghiệm thức (9 chuột/nghiệm thức) (Hình 2.2).

+ Nghiệm thức 1 - Đối chứng (DC): chỉ cho uống nước máy khử Chlorua va

tiêm dung dịch đệm citrate vào màng bụng.

+ Nghiệm thức 2 — Streptozotocin + Nicotinamide (STZ + NA): chuột được

uống nước máy khử Chlorua và tiêm Streptozotocin + Nicotinamide theo nồng độyêu cầu vào màng bụng Sau 72 giờ tiêm STZ - NA, định lượng glucose mau, những

chuột có nòng độ glucose máu khi no cao hơn 180-200 mg/dL được xem là chuột đái

tháo đường type II thành công và được sử dụng trong nghiên cứu.

+ Nghiệm thức 3 - Streptozotocin + Metformin (STZ + M): chuột được uốngnước máy khử Chlorua, tiêm Streptozotocin + Nicotinamide theo nông độ yêu cau

vào màng bụng Sau 72 giờ tiêm STZ — NA, định lượng glucose máu, những chuột

có nông độ glucose máu khi no cao hơn 180-200 mg/dL được xem là chuột đái tháođường type HH thành công va được sử dung trong nghiên cứu và được điều trị bằng

Metformin thương mại.

+ Nghiệm thức 4 — Nước sắc hoa đu đủ đực liêu 2 (HD2): chuột được uéng nước

máy khử Chlorua và bỗ sung thêm nước sắc hoa đu đủ đực theo liều yêu cầu (uốngliên tục 5 ngày, nghỉ 2 ngày).

24

+ Nghiệm thức 5 — Streptozotocin + Nước sắc hoa đu đủ đực liều 1 (STZ +

HDI): chuột được uéng nước máy khử Chlorua, tiêm Streptozotocin + Nicotinamide

theo nông độ yêu cầu vào mang bụng Sau 72 giờ tiêm STZ.— NA, định lượng glucosemau, những chuột có nông độ glucose máu khi no cao hon 180-200 mg/dL được xem

là chuột đái tháo đường type H thành công và được sử dụng trong nghiên cứu và được

điêu trị bằng nước sắc hoa đu đủ đực theo liều yêu cầu (uống liên tục 3 ngay, nghi | ngảy)

+ Nghiệm thức 6 - Streptozotocin + Nước sắc hoa đu đủ đực liều 2 (STZ +

HD2): chuột được uống nước máy khứ Chlorua, tiêm Streptozotocin + Nicotinamide

theo nông độ yêu cầu vào mảng bụng Sau 72 giờ tiêm STZ — NA, định lượng glucosemáu, những chuột có nông độ glucose máu khi no cao hơn 180-200 mg/dL được xem

là chuột dai tháo đường type II thành công và được sử dụng trong nghiên cứu va được

điều trị bằng nước sắc hoa đu đủ đực theo liều yêu cầu (uống liên tục 5 ngày, nghỉ 2 ngày).

2.5 Phương pháp chuẩn bị nước sắc hoa đu đủ đực

2.5.1 Phương pháp xử lí mẫu [55]

* Thu hái: với bộ phận can thu hái là hoa thì nên thu hái khi hoa sắp nở hoặc

chớm nở néu đề khi hoa nở mới thu hai thì cánh hoa sẽ rất dé bị rụng Hai hoa bằng

tay, động tác hái nhẹ nhàng: xếp hoa vào rô cứng, không xếp quá nhiều, không lèn chặt.

* Làm sạch: rửa bang nước dé loại bỏ các tạp chat còn lẫn hay bám dính vào

được liệu như đất, cát, bụi, Cần thao tác nhanh, không nên ngâm hoa lâu trong nước.

* Phơi, say hoa: hoa đã ráo nước sẽ tiền hành được phơi dưới bóng ram trong 2ngày dé hoa khô dan, tránh phơi trực tiếp dưới nắng gat vì sẽ làm hoa thâm đen giảm

chất lượng Khi hoa đã khô, sẽ tiến hành cho vào túi giấy, dem cân và ghi chú, sau đó

mẫu sẽ được say khô trong tủ say ở nhiệt độ 50°C đến khi khối lượng không đồi

* Bao quản: mẫu hoa sau thành phẩm sẽ được bảo quản trong bộc giấy kín và

dé ở nơi khô ráo thoáng mát.

2.5.2 Phương pháp thu nhận nước sắc

Sau khi đã có mẫu khô thành pham của hoa du đủ đực (Carica papaya L.), tiễn hành theo các bước trong Bang 2.3 đề thu được nước sắc.

Bang 2.3 Quy trình thu nước sắc hoa du đủ đực (Carica papaya L.)[56]

Bước ] Can và ngâm mau với nước cat trong 15 phút

Bước2 Loại nước, thêm 300 mL nước cat va nau trong 90 phút ở 70 — 80°C

Bước 3 Thu nước sắc lần một

Buéc4 Thêm 200 mL nước cat va nau trong 90 phút ở 70 — 80°C

Bước § Thu nước sắc lan hai

Bước 6 Hòa nước sac lan một và hai

Bước 7 Ly tâm loại cặn với toc độ 3 000 vòng trong 10 phút

Bước § Cô đặc nước sắc trong bê ôn nhiệt (60°C) tới khi đạt ti lệ giữa mẫu và

ước

thé tích là 1:1 (g/mL)

2.6 Phương pháp cho chuột uống nước sắc hoa du đủ đực

Chuột được uống nước sắc hoa đu đủ đực (Carica papaya L.) bằng cách dùng

xi lanh dung tích 1 mL gắn với đầu kim chuyên dụng (đầu kim số 8) bơm trực tiếp từ

miệng xuống thực quản tương ứng với liều khảo sát (Hình 2.3) Tính toán thê tích

cho chuột uống không quá 0,5 mL/lan uống Thời gian cho uống nước sắc hoa đu đủ

đực (Carica papaya L.) vào mỗi 10h00 - 10h30 mỗi ngày Theo dõi và ghi nhận các

dấu hiệu bat thường hằng ngày sau khi cho chuột uống nước sắc hoa đu đủ đực

(Carica papaya L.) vào sô nhật kí

26

Hình 2.3 Minh họa thao tác cho chuột uống nước sắc hoa đu đủ đực

2.7 Phương pháp khảo sát độ tăng trọng

Cân trọng lượng từng con chuột tương ứng với mỗi nồng độ trong từng nghiệm

thức vào buôi sáng trước khi cho ăn với chu kì | tuần/lần (Hình 2.4) Ghi chép thông

số theo nghiệm thức

Từ kết quả này sẽ tính được độ tăng trọng của chuột sau mỗi tuần nuôi ở từngnghiệm thức Độ tăng trọng của chuột tại thời điểm khảo sát được tinh bằng cách laykhối lượng cơ thê chuột tại thời điểm khảo sát trừ cho khối lượng cơ thê chuột tại thờiđiểm đưa vào thí nghiệm (tuần 0)

Hình 2.4 Minh họa khảo sát trọng lượng chuột

27

2.8 Phương pháp thu nhận mẫu máu chuột

Trước khi lay mau, cho chuột nhịn đói | đêm hôm trước, sáng hôm sau tiền

hành lay máu Lay máu vào thời điểm trước khi thực biện thí nghiệm và chu kì 2

tuan/lan, lay máu ở tinh mạch đuôi chuột dé đánh giá một số chỉ số huyết học: số

lượng hông cau, bạch cầu, tiêu cầu, Hb, tốc độ đông máu, hematocrit, kích thước

hồng cau va giá trị đường huyết Đánh giá theo hướng dan trong Giáo trình thực hảnh

Sinh lí học người và động vật, trong đó số lượng tiêu cầu được xác định theo phương

pháp Fonio [57].

Cach lay mau chuột như sau:

Chuan bi hoá chat và dung cu, bố trí khu vực lấy mau Cho chuột vào 1 falcon

nhựa 50mL, dé lộ đuôi chuột ra bên ngoài Dùng bông gon tâm còn 70° sát trùng, dùng

kim trích lấy máu ở tĩnh mạch đuôi chuột Lau đi giọt máu đầu tiên và tiến hành lấy máu

(Hình 2.5).

Hình 2.5 Minh họa thao tác thu máu chuột

2.8.1 Phương pháp xác định giá trị dường huyếtĐầu tiên, lắp pin và chip vào máy đo đường huyết, sau đó gắn que thử Đảm

bao răng ngón tay không ti¢p xúc với vùng nhận mau Tiếp theo, sử dụng bông gon côn đề sát trùng vùng lây máu và chờ cho nó khô hoàn toàn Dùng kim trích máu vô

trùng dé lay mẫu mau, sau đó lau đi giọt máu dau tiên Cuối cùng, đặt mẫu máu vào

hứng và đợi cho kết quả hiển thị (Hình 2.6).

Hình 2.6 Minh họa thao tác thir đường huyết

2.8.2 Phương pháp xác định số lượng hông câu, bạch cau, tiếu cau, kích

thước hông cau, hàm lượng Hb, chỉ số hematocrit và thời gian đông máu

*Phương pháp xác định số lượng hồng cầu

Bước 1: Chuan bị buông đếm.

Làm vệ sinh buồng đếm, lamella và ống trộn hong cau Day lamella lên lướidém của buồng đếm theo chiều doc và đưa lên kính hiển vi kiểm tra ở vật kính X10,

Bước 2: Lay máu va pha loãng máu.

Dùng bông gòn thấm côn lau đuôi chuột tại vị trí lay máu, chờ còn khô han

Dùng kim trích máu vô trùng dé lay máu Lấy bông gòn lau sạch giọt máu đầu tiên dùng tay nặn và chờ cho máu tiếp tục chảy ra dé lấy máu Dùng ống trộn hong cầu

hút máu đến vạch 0,5 Nếu máu lên quá vạch thì dùng bông gòn thấm nhẹ ở dau ông.Tiếp tục hút thêm dung dịch hồng cầu vào ống trộn hồng cầu đến vạch 101 Như vậy,

máu đã được pha loãng 200 lan.

Bước 3: Dan máu vào buông đêm

Tháo dau hút, dùng ngón tay cái và ngón giữa bịt hai đầu ông trộn và lắc đều

nhẹ nhàng dé trộn máu với dung dich pha loãng Bỏ vải giọt đầu trong ống trộn, đặt

đầu Ong trộn vào cạnh của lamelle tiếp giáp với buồng đếm, nhờ lực mao dẫn, máu

pha loãng sẽ tràn đều vảo buồng dém Đưa buồng đếm lên kính hiển vi và tiễn hanh

đếm số lượng hông cầu

Bước 4: Cách đếm

Chinh buông đếm hiện rõ ở thị trường, chuyển qua vật kính X40, đếm số lượnghồng cầu thuộc 5 6 trung bình (80 6 nhỏ) bao gồm đếm 4 ô ở 4 góc lưới đếm va | 6 ở giữa

vị trí trung tâm Việc xác định hong cầu thuộc một ô được tuân theo nguyên tắc Egorov.

Tổng số lượng hồng cầu đếm được trong 80 ô vuông nhỏ là A Mỗi mẫu máuđược đếm tôi thiêu 3 làn, sau đó lay số trung bình của các lần đếm (A) Số lượng hồngcau/mm? máu (N) được tinh theo công thức:

Bước 2: Lay máu và pha loãng máu

Dùng bông gòn thấm côn lau đuôi chuột tại vị trí lay máu, chờ cồn khô han Dùng kim trích máu vô trùng đề lay máu Lấy bông gòn lau sạch giọt máu đầu tiên,

dùng tay nặn và chờ cho máu tiếp tục chảy ra để lay máu Dùng ống trộn bach cầu

hút máu đến vạch 0,5 Nếu máu lên quá vạch thì dang bông gòn thấm nhẹ ở đầu ống.

Tiếp tục hút thêm dung dịch bạch cầu vảo ống trộn bạch cầu đến vạch 11.Như vậy,máu đã được pha loãng 20 lần

Bước 3: Dàn máu vào buông dém

Tháo đầu hút, dùng ngón tay cái và ngón giữa bịt hai đầu ống trộn va lắc đều

để trộn máu với dung địch pha loãng Bỏ vai giọt dau trong ống trộn, đặt dau ống trộn vảo

cạnh của lamelle tiếp giáp với buồng đếm, nhờ lực mao dẫn, mau pha loãng sẽ trản đều

vào buông đêm Dua buông đêm lên kính hiện vi và tiếng hành đếm số lượng bạch cau.

Bước 4: Cách đếm

Chỉnh buông đếm hiện rõ ở thị trường, chuyên qua vật kính X40, đếm bạch

cau trong 25 ô vuông lớn (400 ô nhỏ) ở vùng trung tâm Mỗi mẫu máu được đềm tối

thiêu 3 lần, lay chỉ số trung bình của các lần đếm (B) Số lượng bạch cầu được tính

theo công thức:

30