Khóa luận tốt nghiệp Hóa học: Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học của cây cỏ the (Centipeda Minima L.)

Cudi cùng em củng xin cam ơn tất cả các bạn trong phỏng thi nghiệm Hợp chat thiên nhiên trường Đại học Sư Phạm thành phỏ Hồ Chi Minh đã tận tỉnh trao đôi những kinh nghiệm.. Khoa luận tố

TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHAM TP HO CHÍ MINH

GVHD: TS BUI XUAN HAO

SVTH: VO THI KIM HANG LỚP: HÓA 4C

MSSV: K37.106.023

Chuyên ngành: HOÁ HỮU! CƠ

[hành phố Hồ Chi Minh Tháng 5 nam 2015

NHAN XÉT CUA HỘI DONG

FARRER EEE R REA e meee wen m neem err eE ene eH EEE RETR EERSTE HELE EERE EEE EEE EEE HEHE ESE EEE EERE EERE EERE EE EER SHEER EEE EEE EERE SER EE REBAR Eee e net any

Aa Reda shan wanna enw ee meena 0n 0000580 0800 ease Ee EEE EEEE EEE N TEES EEEEEEN EEE HEHEHE SEES EEE EES EE HERES HERE E HERS EE EES EE SEER EEE EERE EERE EEE EES

¬ CC C C

(AC ESE EEE EEE EO EERE SEER ERE E EERE wen eneee

AA eee ene e meee ener eee EE EEE TESTE EEE SE ET HEHEHE EE EERE EE EEE SE EEE EEE ỐC ED Es a Res EEE EE EEE EE SED Ea en ma sees EEEEEe eee EE TEEE®

HAAR eR OR ORR e eRe e tne n nee n ee EET EEE EEE EH EEE SHEE EER HSEE EERE EES E EERE EEE EEE EH EEE EE SESE EEE EEEEEE SEES EERE EEEESEESE ESE EEE DESEO EEE EEE EE ES

eer ire etre ri trie rire reer eter ree errr rere errr rrr rie ier rere eee eee

DO E EERE ERE E TE EEE RHEE EEE EE EEE SEES E EEE REROEEERE ESO E Eee eee ốc cố aaa Eee nen CỐ SE ESTEE TEES EE EEE EE EEE EE EES

—DÓỐ

-_

———— DDD À 6 cố anaes eneens Hee eee ETE SE EEE EEE SS

TATA RR n nee e eee EERE EEE REESE HEHE EEE SERENE SHOES EEE O EEE Ramee eee w ee mE EES E SEES ESTE ESSE REESE SEES EE EEEEESESEES ESSER ESSE EEE EEESEE SEER EES

AAR ERE REET a EE REE AC

linh 222 ˆˆˆ EH ETE E SEES Ee ee eee meee Eee EES een e Eee ee eee en aes a eee Ee S ESE Eee EEG 00

HAR Aa Ree eww nnn n nner ene een ee EEE THERE E EEE EE EEE EERE EEE EE EEE EE

AERO NAO Reem nena ene n eee e eee E nee eee EET EE SHEE EEE HEE EEEEEEEEEEEEEES EEE EREEEEE SEES HESS EEEE EEE EE ORES EEE EEEEEE EEE ES HEHEHE SEER EOE EEO EEEee

veces \ MÔ sẽ.

Ben 1.»

1 tụ Xưa HẠ, àìecee Noss 61 The Arvh Tosa ¬

TP.HCM ngày tháng nam 2015

LOI CAM ON

C;* *+_›

Luận van được thực hiện tại phòng thí nghiệm Hop chat thiên nhiên thuộc

khoa Hóa trường Đại học Sư Phạm thành phỏ Hồ Chi Minh.

Với sự kinh trọng và lòng biết ơn sâu sắc em xin chân thành cảm ơn thay

Boi Xuân Hao người luôn hết lòng hướng dẫn giải đáp những thắc mac va tạo mọi

điều kiện thuận lợi cho em hoan thành tốt khóa luận này Thay da truyền đạt những

kien thức cũng như những kinh nghiệm quý bau trong thực tiễn để em bẻ sung thêm

những kiên thức cân thiết dé phục vụ cho quả trình học tập và nghiên cứu Em cũng

xin cam ơn thay Dương Thúc Huy, cô Lê Thị Anh Tuyết và cô Lé Thị Thu Hương

đà giúp đỡ và cho em những ¥ kiến quý báu dé em có thẻ hoàn tất dé tài của mình.

[:m xin cảm on quỷ Thay Co bộ môn Hoa khoa Hóa — Đại học Su Pham

thành phê Hỗ Chi Minh các thay cô đã hết long hưởng dẫn giảng day vả truyền đạt cho em những kiến thức khoa học quý báu trong suốt thời gian em học tại trường.

Cudi cùng em củng xin cam ơn tất cả các bạn trong phỏng thi nghiệm Hợp

chat thiên nhiên trường Đại học Sư Phạm thành phỏ Hồ Chi Minh đã tận tỉnh trao đôi những kinh nghiệm đoàn kết gắn hỏ và tạo mọi điều kiện giúp đỡ nhau trong

suốt quả trình thực hiện dé tải.

Em xin chân thành cảm ơn!

Mục lục

MO ĐÀU KH seesesees _— se |

CHƯƠNG 1 TONG QUAN - «c5 c< se s<eessesseeesee 2

1.1 Vải nét vẻ Ho Cúc — Asteraceae’ 3ã048gvgfoiÄ3tE316:53316i171Eti3149134:8838818:488833518845:53011.3838 2

| 3 Cau chỉ trong họ Cúc — ÀSECTACCAC ng nu ng ng 4

[BSE CN CUD :ẽanopptiiniooiinitia1nni200107430680800i110536038608ã8880).13655 (348/97080883288X118464083800/70095480889E6ãC 3

1.3.3 Thành phan hoa học có trong cấy có thế stšvyšutá26tzXs256gg2ãss£Svt46cxszcueaiÕ

CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU 5 5c seseseseseseeseeseses=s=sessszsesesez 10

2.1 Đỏi tượng nghiền cứU - SH“ nh Tu HH Hà TH He 10

2:2 PRuơœnp pháp NOMEN CUD acai ssicees secs<:zcc:ccic<=(222cccprcc2rirnrricrritrarzketiarstraeacafrsisVawstcercasaere sua OD

2.2.1 Phương pháp cô lộp các hợp chất co con re „:ö§šï3ia L0

STO NGHỆ N caccocptitcig2Ecoi1(0110a3189000100080g0v746(9008g8363090610883g38gsã0ã106088g2ã6g52g:98g85629807tg898g5588038 l0

3.3.1 Cac điều kiện thì nghiệm n2 020 lj 6 10

2.3.2 Điều che các luại cao va cô lặp các hop chất trong cao hutmol EÍ

CHƯƠNG 3 KET QUÁ VA BIEN LUẬN 16

+.) Biến luận câu truc, stewed 5ì (v55 : : SyNf41:956u81961V%366a5850085585 wl

4.2 Biên luận hợp chất Í)-2Š coe ceseccnecepecessecenencesssencionece sssececencessceeesceceesecs tk

TÀI LIU THAM KHẢO nnieeioaieeasisaeneaaaaea D2

OC ee

DANH MỤC HÌNH ANH, SƠ BO, BANG BIEU

HÌNH ANH Trang

HN: UD ACY CÓIHTfussrrerarsossrriraritrtsiti05121010205300068675858889888785587588618789845688898ã/7803888596556 4 IIERH UL,S HHNSAICÔ HH titcsiiiniiiiisiinistiii6isiis:212505ã215655ã82050518ã6385585564588ã8389ã88658588ã86965ã38855 4

Hinh 3.1, Phân mang J và cau trúc A và cầu trúc E c 2 5cccscc2csccssccree 1?

Ilìinh 322 Tương Gat HMBC Gũn Tổ esis ccna crescents IT

SO DO

Su dé 2.1 ()uv trình Fite (fe (tl) | at eee ee eee 12

Sơ đỏ 2.2 Quy trình sắc ky cột silica gel cao ethyl äC€taite e-ccsccsccccss 13

Sơ đồ 2.3 Quy trình sắc ky cội silica gel phân đoạn A3 14

BANG BIEU

Bang 2.1 Khôi lượng của các loại cao va thu suất se với

bot mẫu nguyen liệu ban đầu ban đầu 2-¿- 2< s2 cezceczscsi<srazkersee 1

Bang 2.2 Kết qua sắc ky cột trên cao ethy! acetate của cây co the 13

Bang 3.1 Số liệu phò 'H-NMR va C-NMR của hợp chat CT3 19 Bang 3.2 Bang so sánh số liệu phô 'H-NMR va "C-NMR của hợp chat D-

25.CTC l6 và Minimosiđd 5c s21 12211011 111211 1111 1c de 20

DANH MỤC CAC KI HIỆU VÀ CHỮ VIET TAT

hrs broad singlet (mùi đơn rong)

d doublet (mũi dor)

dd doublet of doublet (mũi đôi đôi)

HMBC — Heteronuclear Multiple Bonds Correlation

J coupling constant (hang số ghép spin)

tì multiplet (mùi đa)

NMR Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy (phỏ cong hưởng từ hat

Khoa luận tốt nghiệp Vô Thị Kim ¡lãng

MO DAU

Cây có từ lâu đã được dùng nhiều trong các bài thuốc v học cô truyền dan

gian ở Việt Nam cũng như trên thé giới Day 1a nguồn tai nguyên thực vật co giá trị

thiết thực trong việc phong chữa bệnh cho nhan dan Từ cây có các nha khoa học

trên thể giới da chiết xuất được nhiều hợp chat hỏa học được dùng dé chữa trị nhiều

cin bệnh hiểm nghèo như hợp chat taxol được cô lập tir cây thông đỏ hợp chất

vinblastin từ cay diva cạn ding điều trị ung thư ngực ở phụ nit

Ngây nay sự kết hợp của ngành hóa học các hợp chat tự nhiên với các ngành

y dược học, sinh học đã không ngừng nghiên cứu thành phan hoa học và hoạt tinh

sinh học của các loại được thao có trong các bai thuốc cô truyền dé ứng dụng vao

việc chữa bệnh cho con người.

Việt Nam thuộc vung khí hậu cặn nhiệt đới với hệ thực vật rat phong phú đa

dang Nhiều cay thuốc có pia trị sử dung cao như cây sâm Ngọc Linh mọc ở tinh

Quang Nam cây thông do mọc ở Lam Đông Đây là một thuận lợi lớn cho việc

nghiên cứu của các nha hóa học các hợp chất thiên nhiên ở nước ta.

Cay co the từ lâu đã được dùng trong y học din tộc dé điều trị các chứngbệnh như viêm họng cấp viêm mii dj ứng viêm phế quản man tinh, ho gà, trị chan

thương đau mat đỏ, viêm mắt có mủ Tuy nhiên ở Việt Nam chưa có công trình

khoa học nao công bé vẻ nghiên cứu thành phần hóa học của cây có the Vì lý do

đỏ chúng tôi chọn cây có the là đôi tượng nghiên cứu trong đẻ tai này, với mong

muon làm sang to thánh phan hóa học cua cây có the, gop phan vào việc nghiên cứu

các hợp chat tự nhiên tim ra những hợp chat có hoạt tinh sinh học nhằm nang cao

gia trị sử dụng của dược thao Việt Nam.

Khóa luận tot nghiệp Võ Thị Kim Ilắng

CHƯƠNG 1 TONG QUAN

- Phan họ hoa ông (Tubuliforae Asteroideae): trên cụm hoa chi có hea hình

dng hoặc hoa hình ông ở giữa hoa hình lười nhỏ ở xung quanh dau.

- Phản họ hoa lưỡi nhé (Liguiiflorae Cichorioideae): tat cả các hoa trong

cụm hoa dau là hoa lưỡi nhỏ khong bao giờ có hoa ông Cây có nhựa mủ.

Họ Cúc phân bỗ rộng khắp thẻ giới nhưng phê biển nhất tại các khu vực ôn

đới và mien núi nhiệt đới

Ở Việt Nam họ Cúc cỏ khoang 125 chỉ trên 350 loài chủ yêu là có đại một

xủ được trồng làm cảnh (các loại hoa cúc) rau an (ngải cứu cải cúc rau điếp] gia

vị (cúc tan)

+ Một sé đặc điểm thực vật của họ Cúc:

Than cỏ hay bụi sống một năm hay nhiều năm it khi là day leo hay cây gồ.

Rẻ có thẻ phù lên thành củ, nhưng chat dự trừ ở đây không phải là tinh bột

ma là inulin (thược được).

La có hình dang biến thiên không có lá kèm thường mọc đối hoặc tụ thành hình hoa ở gốc có những loại lá có gai Thông thường phiền lá nguyên xẻ sâu, hình dang la kép hình long chim hay hình chân vịt hiểm gặp.

Cum hoa: Đâu có thẻ mang nhiều hoa hay ít hoa Đầu có thẻ đứng riêng lẻ hay tụ thành chùm gié xim nhưng thông thường nhất là tụ thành ngủ Có thể xem

hoa tự dau như một giẻ thù ngắn trong đỏ các hoa đính theo một đường xoăn dehay liên tục, hoa giả ở bia, hoa non ở giữa Dang thông thường của hoa tự đầu làhình nón nhưng cũng có thẻ pháng hoặc có khi lõm hình chén Đầu mang hai loại lábắc lá bắc ngoài bat thụ tạo thành một tong báo Các lá bắc này có thé định trênmột hàng (Seneciio Lagetes) hoặc đính trén nhiêu hang kết hợp Hình dang và kýchthước của lá bắc nguài rat biến thiên Ở actisd, các lá bắc ngoai nạc va phan nay ăn

^

Khĩa luận tot nghiệp Võ Thị Kim Hang

dược La bắc ngồi cĩ thẻ nguyên hay cĩ rang, cĩ gai cĩ những loại cĩ màu như

cánh Lá bắc thật cĩ mang hoa ở nách là những phiến mĩng hẹp đơi cĩ lơng Lá

bắc thật cĩ thẻ phang hay cong xung quanh hoa chúng cĩ thé khơng cĩ.

Hoa: lưỡng tỉnh mẫu năm bau dưới khơng cĩ lá bắc con Các hoa trên mộtđầu cĩ thé giéng nhau cĩ cùng cách cầu tạo cùng chức năng Kiểu đầu này goi làđồng giao với tồn những hoa hình ơng hoặc tồn hoa hình lưỡi nhỏ co năm ringhoặc đơi khi tồn hoa hình mơi Hoa tự dau cĩ thé gơm hai loại hoa: hoa đều hình

Ong o giữa cú nhiệm vụ sinh san và hoa khơng đều hình lưỡi nhà cĩ ba rang ở bìa

đĩng vai trị của trang dé thu hút cịn trùng Kieu đầu này gọi là di giao

Bao hoa: lá dai thường giảm vi nhiệm vu bảo vệ đã được dam nhiệm bởi các

ki bac của tong bao Đài cĩ thé biến mắt đơi khi chỉ cịn một go nhỏ, nguyễn hay cĩ

thủy gỡ cĩ thẻ mang những vảy hoặc một vịng lơng tơ Sau khi thụ tinh, đài cĩ thẻ

phát triển thành một mao lơng cĩ thẻ láng hay cỏ gai, cĩ nhiệm vụ trong sự phát tancua gua Trang do cánh hoa dính cĩ thê đều hình ơng (trường hợp hia giữa của cácdau dị giao) hoặc khơng đều cĩ dang lười nho cĩ ba rang hay rang hoặc hình mơi2/3 hoặc hình ơng dài hơi cong

Bộ nhị: năm nhị bằng nhau, đính trên ống trang và xen kẻ với cánh hoa Chi

nhị rời nhau từ tong Cynareac Bao phan mo dọc hướng trong dính nhau thành một

dng bao quanh voi Chung đới thường kéo dai trên bao phan thành bộ Ngồi ra bao

phan cịn mang ở gốc những phụ bộ chội ra tạo thành những tai nhỏ, che chở cho

mat hoa ở gốc vịi khỏi bị nước mưa

Bộ nhụy: hai lá noăn ở vị trí trước và sau tạo thành bau đưởi một ư đựngmột nỗn định day Dia mật ơ trên bau Ở hoa lưỡng tinh và hoa cải voi xuyên quađĩa mat va chia thành hai nhánh đâu nhụy (voi khơng chia thành ở hoa bat thụ), Cácnhánh dau nhụy mang & mat dưới những lơng dé quét hạt phan khi voi mọc xuyênqua ơng câu tạo bởi các bao phan Sự thụ phan nhờ cỏn trùng

Qua be thường mang một mao lỏng do dai biến đổi cĩ khí mao lơng dược

mang bởi một cudng dai hay ngắn Đơi khí quả trần hoặc cĩ moe hay cĩ gai Mat

khong cĩ nội nhũ 1a mam to nhiều khi chứa đây dau

Khóa luận tốt nghiệp Võ Thị Kim Hang

Họ Cúc là họ có số loài được dùng làm thuốc lớn nhất trong giới thực vật Có

khoảng 51 loài của họ Cúc được dùng làm thuốc, trong đó có 18 loài được dùng

trong công nghiệp dược như các loài: atisô, bạch truật, co nhọ nội, cỏ ngọt, cúc hoa,cúc tần, hỏng hoa, hy thiêm, ké đầu ngựa, khoản đông hoa, man tưới, mộc hương,ngải cứu, ngưu bang, sai dat, thương truật, thanh hao hoa vàng, tử uyên

1.2 Các chi trong họ Cúc — Asteraceae

Ở Việt Nam, họ Cúc có khoảng 125 chi, trong đó có một số chỉ tiêu biểu, thường

gặp như chi Gerbera, chi Helianthus L, chi Cynara Cây co the là một loài thuộc chi

Centipeda.

1.3 Đặc điểm thực vat cây cỏ the|3|

Hình 1.1 Cây cỏ the Hình 1.2 Hoa cỏ the

Cây cỏ the thuộc họ Cúc, chi Centipeda.

Tên khoa học: Centipeda minima (L).

Tên thông thường: nga bat thực thảo, địa hồ tiêu, cầu tử thảo, cóc man, cúc

man, thạch hỗ tuy.!Ì

Có the là một loại cỏ mém, mọc bò lan trên mặt dat am, thân rất nhiều cành,

ở ngọn có lông mịn trang, nhưng toàn than trông nhăn bóng Lá đơn mọc so le, hình

ba la cạnh, đầu tù, phía cuông hep lại, mép có một, hai hoặc ba răng cưa; dài 10-18

mm, rộng 6-10 mm, gân chính hơi nỗi ở mặt dưới lá gân phụ không rõ không có

cudng Cum hoa hình dau mọc ở nách lá, hoa cai gồm nhiều lớp, cánh hoa hình ông

mau trang, trên có rang cưa, hoa lưỡng tính ít hơn Trang hoa hình chuông, có bon

Khoa luận tỏt nghiện Võ Thị Kim Hang

răng hinh trừng rộng mau hơi tim Qua bé bốn cạnh, trên cạnh có lông mịn nhỏ.

Mùa hoa thang 2 - Š, mùa qua tháng 4 - 7 Dé dùng làm thuốc thường hái toàn cây,

gém cả rể dùng tươi hay phơi hoặc say khô Cây mọc hoang khắp nơi ở vùng đồng

ruộng ảm thập ruộng bo hoang hờ rãnh ven đường Ngay cả trong các thành

phó chỗ những chân tường am khe gạch vỡ ho đất cũng thường hay gặp cay này.

1.3.1 Phân bó, thu hái và chế biến

Có the mọc hoang ở nơi âm thấp hoặc ruộng bỏ hoang ở Việt Nam Trung

Quốc (Quảng lầy Giang Tô Quảng Châu) Malaysia Indonesia Án Độ Nhật Bản.

Chau Uc Mangat mọc phố biện sau vụ gat mọc nhiều vào tháng giêng

Phu hải toàn cây vào mùa khô rửa sạch, dùng tươi hoặc phơi say Khe.

1.3.2 Công dụng

Cây có the có vị cay mùi hac tinh âm, có tác dụng thông khiếu tan thấp.

khu phong tiẻu thùng tiêu viêm tiêu sung Co the con thường dùng làm thuốc chữa

ho, viêm phẻ quan mắt đau đỏ sưng chày nước đãi dau mang mộng mắt viêm mũi

di ứng hay dùng ngoài đẻ chữa bệnh man ngứa (eczema) trị ran cin, dap bó gay

Phân thân la va hoa của cây có the còn được sử dụng phỏ biến trong các bai

thuốc dan gian Vị dụ như trong các bài thuộc dan gian của Trung Quốc cây cỏ the

được dùng dé chữa bệnh đau dau cảm lạnh viêm kết mạc và bệnh sat rét Ở Dai Loan co the được nau lay nước đẻ tắm cho trẻ em bị bệnh ghẻ lở hay uỏng de trị

các hệnh về hệ tiêu hóa.'"!

# Một số bài thuốc dân gian sử dụng cây cỏ the:

e Chữa man ngửa (eczenw): có the hai phan đậu xanh một phan mudi vài hat

Ca ba thứ gid nhỏ dap lên nơi bi man ngứa đã được rửa sạch.

© Chữa ho: co the khỏ 20 g hoặc tươi 30 g nước S00 mÌ sắc can 100 ml chia

ha lan udng trong ngay

e© Chita viêm mũi nghẹt mũi: dùng co the hoa mộc lan (mỗi vị 6 g) kẻ đầu

nwa (10 g) sắc lay nước uỏng Neu dùng ngoài nghiên có the tế tản và bạch chi

roi đặt mỗi lần một ít vào trong mũi.

Khoa luận tot nghiệp Vỏ Thị Kim Hang

1.3.3 Thanh phan hoa hoc cé trong cay co the

Nam 1989 Dipti Gupta va J Singh công bỏ bón triterpenoid saponin mới từ

cấy có the là acid =

1a.3f.19a.23-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic-28-O-/-D-xs lopyranosid (1) acid 1f.2a.3/.19a.23-pentahydroxy urs- 1 xylopyranosid (2) 3a.2la.22¢,28-tetrahydroxyolean-]2-en-28-O-8-D-xy lopyranosid (3) 32¿.16œ.2lz.33a¿.28-pentahvdroxvolean-l2-en-3-@-Ø-D-xvlopvranosvl-28-()-/-D-

2-en-28-0ic-28-O-f-D-x} lopyranosid (4).!7

0H

Khoa luận tốt nghiệp Võ Thị Kim Hàng

Năm 1990 cũng Dipti Gupta va J Singh đã nghiên cứu và tìm ra một số chat

trong cây có the, gồm: tetratriacontanyl nonadecanoat (5) sitosterol (6)

3.3”.5.5“-tetramethoxy stilben (7) 2-isopropyl-5-methylhydroquinon-4-O-/3-D-xylopyranosid

(8) acid 24.3/.23.19a-tetrahy droxyurs-|2-en-28-vic-28-O-8-D-xylopyranosid (9).

3á,31/.33ø.28-tetrahydroxyolean- | 2-en-28-O-f-D-xylopyranosid (10).

3/3 L&œ.31/6.22a.28-pentahvdroxyolean- I2-en-28-@-/-ID-xylopyranosid (11).!*!

CH:+4CH›)iCOO-(CH)::-CH:

Meth Mer

Khoa luận tốt nghiệp Võ Thị Kim Hang

Năm 1998, Robin s lL Taylor và g H Neil Towers đã cô lập được ba

sesyuiterpen lacton có hoạt tinh khang khuẩn là O-methylaerylylplenolin (12)

Khoa luận tot nghiện Vo Thị Kim Hãng

Năm 2012 Peng Wu và các cộng sự đã cô lập được các chat sau:

4-oxo-2/-hydroxy-6a-angeloyloxy-pesudoguaia-8/3.12-olid (20) angclovloxy-pesudoguaia-8/@ 12-olid (21) 4.6øœ-dihydroxy-3# -angeloyloxy-

4-oxo-2/-cthoxv-6œ-pesudoguaiit-Ì I(I3)-en-8ø.l2-olid (22) 4-hydroxy-2

a-angeloyloxy-pesudoguaia-II(13)-en-Rz.I2-old (23), 4.5-epoxy-2@-angeloyloxy-guaia-11(13)-en-8/.12-olid (24) 4.5-epoxy-2c-isobuly ry loxy-guaia- 1 I(l3)-cn-&/.12-old (25), plenolin (26) amicolid D (27) pulchellin-2a-O-isovalerat (28) florilenalin-2a-O-isovalerat (29).

Khoa luận tot nghiện Võ Thị Kim Hằng

CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU

2.1 Đối tượng nghiên cứu

Irong phạm vi để tải nảy, chúng tôi chọn khảo sát cao ethyl acetate của cây

có the được thu hai tại tinh Vinh Long vào tháng 07 nam 2013, Cây được nhận danh

tên khoa học bai TS Hoàng Việt khoa Sinh Trường Đại Hoe Khoa Học Tự Nhiên.

Thực hiện sắc ký cột cao ethyl acetate với chat hap phụ silica gel sư dụng hệ

dung môi giải ly diclorometan-methanol với độ phân cực tăng dan thu được 10

nhân đoạn (được ký hiệu từ CT-I đến CT-X) Do giới hạn vẻ thời gian chúng tỏi chỉ

khao sat phan đoạn CT-I và C] -V,

2.2.1 Phương pháp cô lập các hợp chất

Dé cô lập các hợp chat hữu cơ trong dé tải nay đã dùng các phương pháp sắc

ky bao gdm sắc ký lớp mong silica gel sic ky lớp mong pha đảo RP-L sắc ký lớp

mong silica gel điều chẻ sắc ký cột silica gel, sắc ký cột pha đảo RP-18.

2.2.2 Phương pháp xác định cau trúc các hợp chất

Phương pháp chung dé xác định cấu trúc hóa học các hợp chat cô lập được là

dùng các phương pháp quang phỏ hiện đại bao gồm phê khỏi lượng phân giải cao

pho cong hưởng từ hạt nhân (1D-NMR và 2D-NMR)

2.3.Ihực nghiệm

2.3.1 Các điều kiện thí nghiệm

Dung môi dùng trong sắc ky cột và sắc ky lớp mong là diclorometan

dloroform methanol 2-butanol cthvÌ acetate.

Sắc ký lớn mong được thực hiện trén ban mong trang sẵn DC-Alufolien 60Foca (Merck) và bản móng trắng sẵn RP-1& Fosa (Merck) Các chất trên bản mongdược phat hiện băng đến UV hoặc dùng dung dich H2SOy Ban mông sau khi khai

10

Khoa luận tt nghi¢p Vo Thi Kim Hang

triển bang hệ dung môi giải ly thích hợp được nhúng vào dung dịch H2SO, 25%

say khô va say nóng từ từ cho đến khi hiện màu.

Pho cong huong từ hạt nhân được ghi trên may Bruker AMS00 FT-NMR

Spectrometer (tan số 500 MHz đổi với phô 'H-NMR và 125 MHz đối với phô NMR) với TMS là chất nội chuân là CDCl: và DMSO là dung môi.

!$C-Khỏi pho phân giai cao do trên may Bruker MicroTOF-QII,

2.3.2 Điều chế cao ethyl acetate và cô lập các hợp chất

2.3.2.1 Điều chế các loại cao

Cây tươi sau khi thu hải vẻ được rửa sạch va say ở 60°C cho dén khí khôi

lượng không đôi sau dé mẫu nguyên liệu được xay nghiền thành bột thô thu được

3.2 kg Dun hoàn lưu 3.2 kg bột thé với dung môi methanol (3 lần x 3 giờ) lọc nóng cô quay ơ áp suất thắp, thu hỏi dung môi được cao methanol Chiết phân bỏ

long - long cao methanol nay lần lượt với các dung môi có độ phân cực tăng dan là: ctcr dau hoá ethyl acetate và n-butanol Cô quay các địch chiết thu được các loại

cao tương ứng: cao eter dau hỏa (320.2 gam) cao cthy! acetate (36.5 gam) cao

butanol (13.6 gam).

Quy trình điều chẻ các loại cao được trình bay trong sơ đồ 2.1 Thu suất các loại cao

được trình bay trong bảng 2.1.

Bang 2.1 Khôi lượng của các loại cao va thu suất so với bột mẫu nguyên liệu ban

đâu

Bột thô cây có the (3,2 kg)

Logic Khoi lượng (g) Thu suất (%)

Methanol | 412.5 12.89

Etyl acetat 4ó I.14

Butanol 0.43

Võ Thi Kim Hãng

Khoa luận tat nghiệp

Sơ dé 2.1 Quy trình điều chế các loại cao

Bột cây khô (3.20 kg)

- Dun hoàn lưu với MeOH (40 lit).

3 giờ x 3 lân, lọc nông.

- Cô quay dén căn ở áp suất thấp

Cao methanol (412.5 g)

- Chiết phan bỏ long - long

với eter dau hoa

Có quay thu hoi

dung môi

|} Cao eter đầu hỏa (320.2) Phan dịch còn lại (97.12)

- Chiết phân bd lỏng - long

với ethy] acetate

C6 quay thu hỗi

dung môi

Phan dịch còn lại (59.8 g) Cao ethyl acetate (36.52)

- Chiết phản bỏ long - long

với buthanol bão hòa nước.

- Cô quay thu hoi dung môi

Cao n-butanol (13.6 g)