Tổng hợp các dẫn xuất 7 hydroxy 5,3’,4’ trimethoxyflavone mannich thông qua sự hỗ trợ của vi sóng và các hoạt Động ức chế tăng sinh của chúng trên tế bào hela

Vì thế để tăng thêm hoạt tính sinh học để không ngừng nâng cao hiệu quả trong các đặc tính được lý trên và quyết định tổng hợp một dẫn xuất hoản toàn mới, các hợp chất này thử hoạt tính

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP.HCM

KHOA CÔNG NGHỆ HÓA HỌC

HO TRO CUA VI SONG VA CÁC HOẠT ĐỘNG ỨC CHE TANG SINH CUA CHUNG TREN TE BAO HELA

Giáng viên giảng dạy: TS NGUYÊN VĂN SƠN

Nhóm:

Lớp: DHHC17A

Khoá: 2021 — 2024

Tp Hồ Chí Minh, tháng 12 năm 2023

Danh Sách Thành Viên Nhóm

Nhóm trưởng

Thành viên

LỜI CÁM ƠN

Em xin chan thành cảm ơn!

TP Hỗ Chí Minh, ngày tháng năm 2023

Sinh viên thực hiện

(Ghi họ và tên)

NHAN XET CUA GIẢNG VIÊN

Phan danh gia: (thang diém 10)

® Thái độ thục hiện:

® - Nội dung thực hiện:

¢ Kỹ năng trỉnh bày:

¢ Tổng hợp kết qua:

Điểm bằng số: Điểm bằng chữ: 52-522 2EnnE212122222 12110222 rree

TP Hỗ Chí Minh, ngày tháng 12 năm 2023 Giảng viên hướng dẫn

(Ký ghi họ và tên)

1.2.2 Ứng dụng của hesperidin trong y học s 2c E12 1122121121221 ru 4

1.3 Phan tg Mannich ƯIỊaad 5

1.3.1 So luge vé phan tng Mannich cccccccccc cess eessesssessessetesesetssressressetsestensiearessresessessesieses 5

1.3.2 Cơ chế phản ứng Mannich cceccccesssessesseessesssessessretsesstetstesresressretiissteissrestetatenteen 5 1.3.3 Một số phản ứng Mannich 52-5 2 2 1122121121122 1121111222221 121002121211 yu 7

lo ao nh a 15

In G 0 ad .H 15 1.4.2 Tính chất vật lý 2 22212211211 1121122112212 21121212122 1211212212122 15 1.4.3 Tính chất hóa học 5: 2221112221112211112211111211110.21111211 11121002 ug 16

CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM S2 2212 2 E122 11 n1 t re 27

2.1 Nguyén ligu va hoa Chat ỶÝÁ 28 2.2 Dụng cụ và thiết bị ST 12212221 2121121212122 112121222 111222 eg 29

PC N9 06v)i::80))1-7981(\):v6i13)›:L-):: PladađiididiiiaiẳÝiảiả 31

2.4 Thử nghiệm cho hoạt động ức chế tăng sinh 1 33

CHƯƠNG 3: KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN - cà n1 11011011 1 1012 1n ya 34 3.1 Kết quá phô và đặc tính hóa lí của các hợp chat tổng hợp - 2S S122 re 34

DANH MUC BANG BIEU

Bảng 1.1 Độ dịch chuyển hóa học của các loại prOtO ác 2111111111211 111110101 11 HH te, 20 Bảng 1.2 Độ dịch chuyển hóa học của các loại cacbon - c ccn nh ng HH ke Hyyu 21 Bảng 2.1 Hóa chất thực Iìn(90i8N PP 28

Bảng 3.1 Nồng độ nửa ức chế [ICso (uM)] của các hợp chất 1-12 trên Hela của dòng tế bào 00500) 096150) x2 Da 33 cece 34

DANH MỤC HÌNH ẢNH

I0 0 BNsr voi gcdadđaaiaitiiiiÝÃ4Ắ 4

Hình 1.2 Cơ chế phản ứng Mannich - 22: 22 21221 9E21525122310213123112111221102112111211212 22g 6 Hình 1.3 Vị trí H-ơ có thê tham gia vào phản ứng Mannich vòng A của flavonoid 7 Hình 1.4 Tổng hợp của 8-aminomethyl khi thế từ hợp chất oroxylin A ¿s.: 5s: se 7 Hình 1.5 Tổng hợp các dẫn xuất Mannich của icaritin và B-anhydroicaritin -. -:ss¿ 8 Hình 1.6 Téng hop kaempferide, 2,4,6-trinydroxyacetophenol va 4-hydroxybenzoic 9 Hinh 1.7 Téng hop mét sé dan xuat từ phản ứng Mamnich không có xúc tác và không có dung

Hình 1.21 Phản ứng acyl hóa 11 9101 111111111111 1111111111111 1H HH HH Hà Hào 17

Hình 1.22 Mô tả định hướng hạt nhân từ và từ trường trong phố NMIR - 5 se 19 Hình 1.23 Hình ảnh hiển vi điện tử quét của một tế bào HeLa 2-52 222222222221 1122226 24 Hình 1.24 Hình ảnh huỳnh quang đa photon của tế bào HeLa được nuôi cấy với protein huỳnh

Hình 1.26 Ví dụ của xếp đĩa và màu sắc của tế bào điển hình - 22522 22221222222222e 26

Hình 1.27 Cơ chế phát hiện khả năng tồn tại của tế bào với MIT TL ác cc n n1 1111211111158 1x2 27

Hình 2.1 Máy khuấy tir Thermo scientilc - 5: 12221 2211211221122112111211221211 1226 30 Hình 2.2 Cân kỹ thuật Sartorius TE3102S - 52212 2212211211121121102112112121122 yeu 30 Hình 3.1 Phé 'H NMR của hợp chất 2 5s 2 22122112112111211211121122121212122222 2g re 34 Hình 3.2 Phổ !%C NMR của hợp chất 2 - S9 1221122112 12118211211211221 12101222 2n ra 35 Hinh 3.3 Pho 'H NMR của hợp chất 3 5 S2 22 22112112118211211121221211212122222 2c re 36 Hình 3.4 Phô !*C NMR của hợp chất 3 1 2s 22222122112 1211021121121221 1210122 cn ra 36 Hình 3.5 Phỏ !H NMR của hợp chất 4 5S 122222112 1211821121122 re 38 Hình 3.6 Phô !*C NMR của hợp chất 4 - S9 21221122112 121102112221221 1210122 re ra 38 Hình 3.7 Phỏ !H NMR của hợp chất 5 5S 2222 22512112111211211121221212121222222 re 39 Hình 3.8 Phổ !%C NMR của hợp chất 5 1 2s 9222212211211 1102112112121 12101212 cn ra 40 Hình 3.9 Phỏ !H NMR của hợp chất 6 5 S2 2222112 12111211211121221212112122222 2 nga 41 Hình 3.10 Phố '°%C NMR của hợp chất 6 - - 2s 2222122112 1211021222222 12111 re 42 Hình 3.11 Phố 'H NMR của hợp chất 7 55 22 22 221121121112112112122212121222222 2 re 43 Hình 3.12 Phố 'C NMR của hợp chất 7 - - 2s 122112211211 1102112122 1210122 cn rau 43 Hình 3.13 Phố 'H NMR của hợp chất 8 55 22 2222112112 1821121122221212122222 2 tre 44 Hình 3.14 Phố 'C NMR của hợp chất 8 2S 2222222112 12110212222222 121112 ren 45 Hình 3.15 Phố 'H NMR của hợp chất 9 S2 212211211 1102112112221 12121222222 re 46 Hình 3.16 Phố 'C NMR của hợp chất 9 s21 2122112211211 1021222222 121112 ren 47 Hình 3.17 Phố 'H NMR của hợp chất 10 5222222 E12111211221121221 12101222222 reg 48 Hình 3.18 Phố '°%C NMR của hợp chất 10 -.- s- 22 2222122112111211211212212 12101221 na 49 Hình 3.19 Phố 'H NMR của hợp chất 1 52222222 2E12111211221121221 12111222222 reg 50 Hình 3.20 Phố '°C NMR của hợp chất I1 - 5ä 22 222212211211121121121221 12181211 na 51 Hình 3.21 Phố 'H NMR của hợp chất 12 5222222 1E11121121112122121210122222 2tr eg 52 Hình 3.22 Phố '°%C NMR của hợp chất 12 - s- 22 2222122112111211211211221 121812212 1 rau 53

LỜI NÓI ĐẦU

Cùng với tốc độ phát triển ngày càng nhanh của các ngành khoa học kỹ thuật nói chung

và hóa học nói riêng, các hợp chất hữu cơ mà đặc biệt là các dị vòng ngày càng được quan tâm nghiên cứu do những ứng dụng hết sức quan trọng mà chúng mang lại Các hợp chất đị vòng

có mặt ở hầu hết các lĩnh vực của đời sống như: y học, nông nghiệp, công nghiệp

Hesperidin có tác dụng chống dị ứng, chống ung thư, hạ huyết áp, kháng khuẩn, kháng viêm và đặc tính giãn mạch Các nghiên cứu trên chuột đã làm giám 22% ung thư ruột kết và 29% ung thư phối Các ứng dụng được lý, sinh hóa và chữa bệnh của hesperidin phụ thuộc vào

sự thay thế xung quanh cấu trúc lõi hesperidin Vì thế để tăng thêm hoạt tính sinh học để không ngừng nâng cao hiệu quả trong các đặc tính được lý trên và quyết định tổng hợp một

dẫn xuất hoản toàn mới, các hợp chất này thử hoạt tính sinh học trên hàng loạt tế bào để cho ra

công dụng và những hoạt tính nhất định của từng hợp chất

Phan ứng Mamnich là phản ứng alkyl hóa của một proton axit đặt kế bên một nhóm chức carbonyl bang formaldehyde va amine bac nhat hoặc bậc hai Sản phẩm cuối cùng là một hợp chat f-amino-carbonyl con duoc goi 1a cac bazo Mannich Phan tng gitra amine va carbonic ø-methylen cũng được coi là phản ứng Mamnich bởi vi cac amine nay tao thanh giira amine va

aldehyd Phản ứng này được đặt tên theo nhà hoa hoc Carl Mannich

Phản ứng Mamnich còn là một phương pháp hiệu quá để tổng hợp các hợp chất Ø-amine liên kết nitơ với các hợp chất ketone và các hợp chất phenol, nó được sử dụng rộng rãi trong quá trình tổng hợp các sản phẩm tự nhiên cũng như các phân tử thuốc hữu cơ Cấu trúc cơ bản

dẫn xuất bazơ Mamnich có chứa nitơ là một nhóm quan trọng của các nhóm hoạt chất được học có thể cải thiện hiệu quả hoạt tỉnh sinh hoc, khả dụng sinh học, và hòa tan trong nước của

các hợp chất Vì vậy tổng hợp dẫn xuất quercetin có ứng dụng quan trong trong nghiên cứu

nên khoa học mới với nhiều ứng dụng thực tiền

Từ những ứng dụng quan trọng trong việc tổng hợp các dẫn xuất quercetin, chúng tôi thực hiện đề tài “ Tổng hợp các dẫn xuất 7-hydroxy-5,3’,4’-trimethoxyflavone Mannich théng qua sự hỗ trợ của vi sóng và các hoạt động ức chế tăng sinh của chúng trên tế bào Hela”

-_ Mục đích nghiên cứu

+ Tổng hợp các dẫn xuất 7-hydroxy-5,3’ ,4’-trimethoxyflavone Mannich théng qua sw hé trợ của vi sóng và các hoạt động ức chế tăng sinh của chúng trên té bao Hela

+ Xác định cấu trúc của các chất tổng hợp được

-_ Phương pháp nghiên cứu

+ Nghiên cứu tài liệu

+ Thực nghiệm tông hợp các chất

+ Xác định cấu trúc các hợp chất đã tổng hợp băng các bằng các phương pháp hóa lý

CHƯƠNG 1: TỎNG QUAN

1.1 - Giới thiều đề tài

Flavonoid hiện diện rộng rãi trong tự nhiên, và hầu hết các loại thực vật đều chứa

flavonoid Các nghiên cứu hiện đại đã chi ra rang flavonoid có chức năng làm giảm lipid máu, chống khối u,?° chống oxy hóa,*” thuốc chống đông máu,Š chống viêm,*'' cải thiện chuyển hóa đường và lipid,'*2 báo vệ hệ thống tim mạch và mô gan,Ẻ vv., nó vừa có giá trị y học quan trọng nhưng lại có độc tính thấp nên trở thành đối tượng quan trọng trong nhiều nghiên cứu y được Tuy nhiên, hàm lượng thấp các flavonoid có thành phần hoạt tính sinh học mạnh trong tự nhiên ánh hưởng đến việc nghiên cứu sâu của con người về cơ chế được lý và sàng

lọc các hoạt tính sinh học, điều này làm hạn chế sự phát triển và sử dụng của flavonoid Vì

vậy, việc tông hợp các flavonoid có hoạt tính sinh học tiềm năng bằng phương pháp hóa học là rat quan trọng, có lợi cho sự phát triển của các flavonoid Trong số các flavonoid, các hợp chat

có chứa nguyên tử hydro hoạt tính ngưng tụ với aldehyde và amine và sản phẩm tong hop methyl hóa amine trên cơ sở phán ứng Mannich có một loạt các hoạt tính được lý như chống khối u, chống viêm, khử trùng và tiêu điệt vi khuẩn 19

Trong những năm gần đây, việc ứng dụng phán ứng Mamnich trong nghiên cứu thuốc mới, cùng với việc nghiên cứu phản ứng Mamnich không ngừng được được nghiên cứu theo chiều sâu, ứng dụng của nó đã thâm nhập vào hầu hết các lĩnh vực sản xuất và đời sống của con người Vì vậy, việc nghiên cứu sâu và mở rộng phản ứng Mannich đã trở thành một trong những chủ để quan trọng của nghiên cứu hiện nay Đề nghiên cứu sâu hơn hoạt tính sinh học của các flavonoid tự nhiên và các dan xuat flavonoid Mannich nay va kham pha méi quan hé cau trúc hoạt động của chúng và đáp ứng nhu câu phát triển thuốc mới

7-hydroxy-5,3',4'-trimethoxyflavone (1) la mot flavonoid tự nhiên được phân lập từ lá

của Murraya panciculata L.” Mặt khác, tài nguyên thiên nhiên của hợp chất 1 bị hạn chế đo hàm lượng thấp trong cây Murraya paneiculata L đã ảnh hưởng tiêu cực đến việc đánh giá hoạt tính sinh học của chúng Do đó, tông hợp hóa học của 1 sẽ là một cách tiếp cận thay thé rat quan trọng đề giải quyết vấn đề vẻ tính sẵn có của nó

Gần đây, rõ ràng là hầu hết các nhóm thuốc quan trọng, đặc biệt là những loại thuốc có nguồn gốc từ các sản phẩm tự nhiên là các hợp chất chứa nitơ Phản ứng Mamnich của

flavonoid la sy thay đổi cầu trúc aminomethyl hóa, có thể cải thiện hoạt tính sinh học của

flavonoid và cải thiện tính chất vật lý của chúng Dạng gốc amine trong thuốc có thể tăng

cường các đặc tính hóa lý (ví dụ: khả năng hòa tan trong nước) và cải thiện hoạt tính sinh học

va kha dụng sinh học của các phân tử.” Hợp chất 1 có thể trai qua các phản ứng Mannich chon lọc thay đôi trong các điều kiện nhất định và tông hợp các dẫn xuất Mannich khác nhau, đây là một phần quan tâm của chúng tôi trong việc mở rộng điều tra có hệ thống về hoạt tính sinh học của flavonoid và các dẫn xuất flavonoid Mannich.'*?!

của phản ứng Mannich đã tạo ra mười một hợp chất mới (2-12) Tất cả các hợp chất tổng hợp

đã được xác nhận bằng phương hóa lý hiện đại như 'HMR, °C NMR và MS Hơn nữa, các

hợp chất tổng hợp đã được kiểm tra hoạt động ức chế tăng sinh trên tế bào ung thư Hela ở

người bằng phương pháp MTT tiêu chuẩn.”

1.2 Tống quan về Hesperidin

1.2.1 Giới thiệu

Hesperidin là một flavanon glyeosid có thê được phân lập lượng lớn từ vỏ các loại quá như cam, quýt và chúng xuất hiện trong hầu hết các thành phân của thực vật như lá cây, quả, hạt Dạng aglycon của hesperidin được gọi là hesperitin Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng hesperidin có tác đụng chống dị ứng, chống ung thư, hạ huyết áp, kháng khuẩn, kháng viêm và đặc tính giãn mạch Các nghiên cứu trên chuột đã làm giảm 22% ung thư ruột kết và 29% ung thư phối

1.2.2 Ứng dụng của hesperidin trong y học

Tac dung cua hesperidin được các nhà nghiên cứu đặc biệt quan tâm trong hai thập kỷ vừa qua và có một lương lớn các ấn phẩm được công bố về ứng dụng của hesperidin trong y học

Hesperidin cũng như các flavonoid có tác dụng kháng viêm, chống oxy hóa, chống dị img, chéng ung thư Hesperidin có tác dụng làm bền thành mạch và giảm tính thâm của mao mạch nên được sử đụng trong điều trị bệnh cao huyết áp và bệnh trĩ Tác dụng chữa ho của hesperidin là do khả năng chống dị ứng nhờ tính chất ứng chế việc giải phóng histamine từ các

tế bào lớn Hesperidin khi đùng với Vitamin € có tác dụng cộng hưởng và hỗ trợ hap thu Vitamin C

Ngăn chặn ung thư: Hesperidin có công dụng giúp cơ thể hình thành những hợp chất han chế sự phát triển của ung thư Chúng bảo vệ DNA tránh các được yếu tô khác phá vỡ, hư hại, hạn chế các khối u trong cơ thể phát triển Trong thời gian gần đây, nhiều nghiên cứu chỉ ra rằng Hesperidin chống ung thư rất tốt

Điều trị bệnh trĩ: Người bị trĩ sử dụng Hesperidin kết hợp với điosmin, troxerutin dé chữa bệnh Thử nghiệm với 134 người có bệnh trĩ với Hesperidin được giảm đau, bớt chảy máu Với người bệnh trĩ nhẹ, hầu như không còn dấu hiệu sưng tấy, huyết cục bên trong hậu

môn Thậm chí người bệnh không cần đùng thuốc giảm đau hàng ngày, mà chỉ cần bổ sung Hesperidin

1.3 Phan wng Mannich

1.3.1 Sơ lược về phản ứng Mannich

Các cơ sở và tạp chí Mannich đã thu hút nhiều sự chú ý trong những thập kỷ qua vì có nhiều ứng dụng trong các lĩnh vực khác nhau Một số điều tra đã chỉ ra rằng các hợp chất với

co so Mannich cho thay một hiệu suất chống sốt rét và hoạt động chống co giật các cơ sở

Mannich cting cé thé dong vai trò là pha chuyển chất xúc tác Phản ứng Mamnich là một trong những liên kết C-C quan trọng nhất công trình trong tổng hợp hữu cơ

Phản ứng Mannich, còn được gọi là phản ứng methyl hóa amine, là một phản ứng hữu

cơ quan trọng phát triển xuất phát từ đầu thế kỷ 20 và được đặt tên theo nhà hóa học người Đức Carl Ulvich Franz Mamnich (1877-1947) Mannich phát hiện vào năm 1917 rang phan ứng của amine trong hydrochlo khi có mặt của formaldehyt và các hợp chất có liên kết C-H

linh hoạt, đặc biệt là hợp chất có nhóm ketone, có thể tạo ra các base ketone, Hơn nữa, các

chất có tính chất tương tự alkaloid có thể được sản xuất bằng cách lựa chọn các thành phần phán ứng thích hợp.Trong đó, một số báo cáo nghiên cứu đã được tổng hợp bởi phán ứng Mamnich Cụ thể, các phản ứng với ceton, ceton thơm và ceton carboxylie như là thành phần axit đã được nghiên cứu nhiều Các dẫn xuất base Mannich và các dẫn xuất của nó trước tiền được sử dụng làm thuốc Theo thời gian, các sản phẩm của phản ứng Mannich được lan truyền

rộng rãi trong các lĩnh vực sản xuất thuốc và hàng tiêu dùng, ví dụ như: chúng có thể được sử

dụng để tổng hợp các thuốc an thần, thuốc chống nắm, thuốc chống đông máu và các chất

tương tự vẻ thuốc, chất chống oxy hoá, thuốc nhuộm hoạt tính, hương vị thực phẩm Các điều

kiện cô điển của phan ứng Mannich đối với các hợp chất hydroxyl dựa trên tỷ lệ chất nền,

amine va formaldehyde trong rượu với sự g1a nhiệt trong thời gian dài

1.3.2 Cơ chế phản ứng Mannich

Phản ứng Mannich được sử dụng để biến đổi amine bậc một hoặc bậc hai và hai hợp

chất carbonyl thành một hợp chất /Ø-amino carbonyl, còn gọi là base Manmnich, sử đụng một

axit hoặc base làm chất xúc tác

Trong cơ chế xúc tác axit, cá hợp chất carbonyl được proton hóa ở oxy, tạo thành hợp

chất carbonyl enolizable khi có mặt z-hydro, sau đó được loại bỏ bằng cách proton hóa để tạo

thành một enol trung gian Hợp chất carbonyl phản ứng với amine để tạo thành một ion iminium như trong sơ đồ hình 1.2 Các trung gian enol sau đó tấn công vào các ion iminium và sau đó loại bỏ proton thu được sản phẩm cuối cùng của phán ứng Mannich

Hình 1.2 Co ché phan img Mannich Hon 5000 flavonoid da duoc tach ra từ các nguyên liệu thực vật khác nhau, được phan loại theo cấu trúc hóa học Nhưng dựa trên khung flavonoid, các hợp chất này muốn thực hiện

phản ứng Mannich, chúng phải có các nguyễn tử hydro ở vị trí ø so với nhóm hydroxyl Vi dụ khi chúng muốn thực hiện phản ứng Mannich trên vòng A các hợp chất flavonoid, các cau trúc

có thể phù hợp như trong hình 1.3 Dé thực hiện phản ứng Mannich trên vòng B của các hợp chất flavonoid là tương tự Nhưng để tạo ra phán ứng này một cách thận trọng trong tạo ra sản

phẩm, ít nhất cần khóa các nhóm chức -OH ở các vị trí khác nhau, để khi hợp chất chỉ có một

hoặc hai nguyên tử H-ø so với nhóm hydroxyl

Tổng hợp của 8-aminomethyl khi thể từ hợp chất oroxylin A [23]

Các điều kiện cổ điển của phản ứng Mamnich đối với các hợp chất hydroxyl được dựa trên tỷ lệ chat nén, amine va formaldehyde trong rượu với gia nhiệt kéo dài Trong trường hợp nay formaldehyde, oroxylin A va amine bac nhat hoac thir cap trong ty 1é 1: 1: 1, được phán ứng khi khuấy trong isopropanol trong 1-2 giờ thu được một dẫn xuất của các dẫn chất C- aminomethylat

R = Morpholinyl (CzHgNO) R = Methyl benzyl amino (CgH,)N)

R = N-methyl piperzinyl (CzH¡¡N;) R =n-butyl amino (CxH¡¿N) R= Benzylamino (C;HạN) R = Di phenyl amino (C¡;H¡¿N)

R = 1-Boc piperzinyl (CgH;7N20>2) R = Piperidinyl (C5H;9N)

R = N-methyl furfuryl amino (C7H;.NO) R= Pyrrolidinyl (CzHgN)

Hình 1.4 Tổng hợp của 8-aminomethyl khi thế từ hợp chất oroxylin A Phản ứng Mamnich được tổng hợp bằng các dẫn xuất của phenol khác nhau và được sử dụng rộng rãi trong việc tạo thành chuỗi amino alkyl Các dẫn xuất bazơ Mannich của các hợp chất được tông hợp băng cách phản ứng của icaritin hoặc Ø-anhydroicaritin với các amine bậc hai khác nhau như: dimethylamine, dipropylamine, diisopropylamine, pyrrolidin, piperidin, morpholin, piperzine hoặc N-methylpiperzin và formaldehyde Các điều kiện cổ điển của phản

ứng Mamnich đối với các hợp chất của phenol thu được dựa trên chất nền, amine và tỷ lệ formaldehyde trong rượu với nhiệt độ Trong trường hợp sau đây, cartin hoặc Ø-

anhydroicaritin, formaldehyde và các amine bac hai lần lượt ở tỷ lệ 1:1.2:1.2 va khuấy hồi lưu

6 80 °C trong 1-3 giờ đã tạo thành aminomethyl hóa tại vị trí C-6 của 1caritn và aminomethyl

hóa tại C-6 của /Ø-anhydroicaritin thu được các hợp chất 12-20 [24]

%, cac Amine, CH:OH, HCI, đun hoàn lưu từ l-3 giờ

- Tổng hợp 2-(pyrrolidin- I-ylmethyl) phenol từ phenylborronic acid

solvent, 80°C, 8h

+ (HCHO)n + NH » i>

R2

phenylboronic acid 2-(pyrrolidin-1-ylmethyl)phenol

Téng hop 2-(pyrrolidin-1-ylmethy!) phenol tir phenylboronic acid

- Téng hop kaempferide, 2,4,6-trihydroxyacetophenone va 4-hydroxybenzoic acid

4.NR'R? = N(CH(CH3)2)2 5.NR'R2 = N(CCH2CH3)2

Hình 1.6 Tổng hợp kaempferide, 2,4,6-trihydroxyacetophenol và 4-hydroxybenzoic

Hóa chất và điều kiện phản ứng: (a) BrBn, K;CO:/acetone, rufux, 12 giờ; (b) (Me}»SO,/NaOH; SOC];/CH;C]›; (c) KaCOz⁄acctone, ruflux, 24 gid; (d) DMDO, 0 °C, 24 gid, r.t; p-toluensulfonic acid, 2 gid, r.t; (e) 5% Pd/C, Ha, 24 gio, r.t ; (f) 37% HCHO, CH;0OH, amine,

HCI, 80 °C, 3 gio, 56- 3 %

Phan tmg Mannich da thanh phan được thực hiện trong môi trường không có dung môi

và không có chất xúc tác [25].

dung môi Phản ứng Mamnich với chất xúc tác kẽm trong các phản ứng Mamnich đa thành phần [26]:

R'-CHO

On" OF ae hos,

3-OMePh, 2-Thieny R“=H,CI,Br,Me ,n-Bu ,OMe ,-Pr

Hình I.8 Phản ứng Mamnich với chất xúc tác kẽm

Phản ứng tổng hợp 3-benzyl-4-(2-oxopropyl)-3,4-dihydroquinazolin-2(1H)-one (d) va sản phẩm phụ methyl (E)-{2-(3-oxobut-I-en-l-yl) phenyl carbamate (f) từ methylphenyl

carbamate (a), propan-2-one (b) va phenylmethanamine (c) với sự hỗ trợ là vi sống dựa trên

cơ sở phản ứng Mamnich không sử dụng xúc tác [27]:

Việc sử dụng phản ứng Mannich trong téng hop naphthoquinone dẫn xuất được báo cáo lần đầu tiên vào năm 1948 bởi Leffler và Hathaway, người hợp chất tổng hợp 2-hydroxy-3- methylamino-1,4- naphthoquinones thành phần phản ứng sử dụng formaldehyde và một số amine:

OH

NHR!

Hình 1.12 Phản ứng Mamnich đa thành " giữa lawone, amine và acetaldehyde hoặc

benzaldehyde Téng hop cac dan xuat co so Chalcones Mannich va hoat tinh sinh hoc

Theo nghiên cứu đã được báo cáo trên cơ sở phản ứng Mannich của các hợp chat chalcones thu được các hợp chất có cấu trúc hóa học 1- [3,5-bis-aminomethyl-4- hydroxyphenyl] -3- (4- halogenopheny!) -2- -propen- 1- ones (1a - ¢, 2a - e, 3a - e) như thê hiện trong và được đánh giá về tác dung tre ché déc té bao va carbonic anhydrase cua chúng Theo cac gia tri PSE, Mannich co biperidine 2a (PSE = 470) va 3a (PSE = 413) và có các morpholine 2b (PSE = 694.1) va 3b (PSE = 676,5) thu hút sự chú ý với các gia tri PSE cao Đặc biệt là 2b với clo và 3b với halogen brom và morpholine trong cả hai hợp chất có thế đóng vai trò là phân tử chì cho các nghiên cứu chống ung thư tiếp theo vì giá trị PSE cao nhất

Tổng hợp các dẫn xuất cơ sở Mamnich của BA-j từ Baicalin

Theo nghiên cứu này, dựa trên cơ sở của phan ứng Mannich của Baicalein thu được 18

dẫn xuất Mamnich của flavoinods Các dan xuat cha so Mannich đã được thử hoạt tính sinh

học ức chế trên đòng tế bào CDKI Kết quả chỉ ra rằng hoạt tính sinh học của 8- Hydroxypiperidinemethyl-baiealein (BA-j) là cao nhất trong số các hợp chất này như được nêu trong BA-j là một chất ức chế đòng tế bào CDKI chọn lọc và có hoạt tính chống tăng sinh phổ rộng trong các tế bào ung thư ở người (ICso 12.3 M) Vì vậy, theo kết quả này, BA-j

có thể thu được các gốc tự do oxy (O”) và tăng chọn lọc nông độ H:O: nội bào trong tế bào

ung thư và hoạt hóa tế bào lympho, do đó gây ra apoptosis của chúng chứ không phải trong các tế bào bình thường Những phát hiện này cho thấy BA-j chọn lọc gây ra apoptosis trong

ung thư và tế bào lympho hoạt hóa bằng cách kiếm soát mức H;O; nội bảo, và có thế được

phát triển thành một chất chống tăng sinh mới để điều trị ung thư, AIDS và một số bệnh miễn địch [29]

Baicalin

OH O Baicalein

và 5-10 mạnh hơn các tế bào Hela với giá trị ICzo la 12,47-28,24 uM so voi cac cis-Platin kiém soát đương tính (IC:o 41,25 MỊ), cũng là các hợp chất 5, 6, 8 và 10 mạnh hơn so với các té bao HCC1954 voi 214 tri ICso la 8,82-14,97 LM so voi cis-Platin kiểm soát dương tính (IC:o 29,681

M) và các hợp chất 2, 3, 5, 6 và 10 mạnh hơn các tế bào SK-OV-3 với giá trị IC¿o là 7,67- 18,50 uM

2 NR'R* = N(CH3)2 5 NR'R?=N(CH2CH2CH3)2 8 NR'R® = AI

3 3 NR'R = N(CHzCH:); “ˆ=N(CH;CH-4; 6 NR!R“ = =N ) 'R2 =H(C 7 >= N N-CH

4 NRR= N[CH(CH;);]; 7 NRÌR“=N._ NTH 10 NRÌR2= N_ N=C

Hình 1.15 Tổng hợp kaempf&ride và các dẫn xuất trên cơ sở Mannich Hóa chất và điều kiện: (a) I›, Py, refux, 10 giờ, 95 %; (b) (CH:);SO¿, 5 % NaOH (aq), 6

giờ, r.t, H:SÖ¿, reflux, 4 gio, 89 %

Isoflavene phenoxodiol với các amine bậc một khác nhau phenoxodiol đã phan ứng với

formaldehyd và các amine theo tỷ lệ mol (1:12:2) trong Ethanol Tién trinh của phán ứng được theo dõi bởi sắc ký lớp mỏng và các sản phẩm thô được kết tỉnh lại từ dichloromethane và n-

R = Butyl 55 %

R = Allyl 22%

OH

Hinh 1.16 Téng hop Isoflavene phenoxodiol trén co so phan img Mannich

Hóa chất và điều kiện: (a) amine bac 1, formaldehyd, Ethanol, 24 giờ, hồi lưu

Tổng hợp 3-benzyl-7-(3-benzyl-3,4-dihydro-2H-benzo[e][1,3]oxazin-6-y])-3,4-dihydro- 2H,8H-chromeno[6,7-e][1,3] oxazine (2) tir Phenoxodio (1), benzylamine va formandehyde trén co so phan tng Mannich [30]

Hình I.I7 Tổng hợp dẫn xuất oxazine trên cơ sở phản ứng Mannich

Hóa chất và điều kiện: (a) benzylamine, formaldehyd, ethanol, 24 gio, hồi lưu

1.4 Tống quan về amine

1.4.1 Khái niệm

Amine la hop chat hữu cơ có nguyên tử gốc là nitơ trong nhóm chức Những amine có cấu hình tương tự amoniae, nhưng trong đó một nguyên tử hydro được thay bằng nhóm alkyl hay loại nhóm chức khác chứa cacbon

Bậc của amine chính là số nguyên tử hydro được thay thé Thay thế 1, 2 hoặc 3 nguyên

tử hydro, lần lượt ta có amine bậc 1, amine bậc 2 và amine bậc 3

1.4.2 Tính chất vật lý

Các amine thấp như các metylamine và etylamine là những chất khí, có mùi gần giống

amoniac Cac amine bac cao hơn là những chất lỏng, có một số là chất rắn

Nhiệt độ sôi của amine nhất là amine bậc một và amine bậc hai là cao hơn của hidrocacbon tương ứng, nhờ có sự phân cực và sự có mặt liên kết hiđro liên phân tử Tuy nhiên nhiệt độ sôi của amine lại thấp hơn aneol vì liên kết hiđro N-H N yếu hơn O-H O

Các amine thấp tan tốt trong nước (nhờ liên hết hiđro với nước), các amine cao ít tan hoặc không tan Các amine để bay hơi nhất là ở bậc thấp Phổ hồng ngoại của các amine bậc một và bậc hai được đặc trưng bởi đải hấp thụ ở vùng 3300 - 3500 em ' tương ứng dao động hóa trị của liên kết N-H Tín hiệu cộng hướng của proton N-H có giá trị trong khoảng 0.3 - 0.4 ppm

Ca amine bac mét, bac hai, bậc ba đều có khá năng tạo liên kết hydrogen với nước Do

đó các amine có trọng lượng phân tử thấp (C¡-C¿) đều tan được trong nước Các amine có trọng lượng phân tử lớn hơn khó tan trong nước, tuy nhiên có khả năng tan được trong các dung môi ít phân cực hơn nước như ether, aleohol hay dung môi phân cực kém như benzen Methylamine và cthylamine có mùi giống như NH:, các amine khác thường có mùi tanh của

cá

Cac amine thom thường có độc tính cao, đễ hấp thụ qua da và có khả năng gây chết người Phần lớn các amine thơm ở dạng tỉnh khiết thường không có màu Tuy nhiên, chúng đễ

bị oxy hóa bới oxygen trong không khí Kết quá là các sản phẩm amine thơm có màu bị oxy

hóa bởi không khí Các amine thơm rất Ít tan trong nước, độ tan trong nước là 3 ø/100 mL CHữa các amine đồng phân với nhau, amine bậc ba có nhiệt độ sôi thấp do không có khảs năng tạo liên kết hydrogen với nhau Amine bậc một luôn có nhiệt độ sôi cao nhất, do có nhiều

liên kết hydrogen hơn Các amine có nhiệt độ sôi cao hơn các hợp chất không phân cực có cùng trọng lượng phân tử và có nhiệt độ sôi thấp hơn các hợp chất alcolhol tương ứng do khá năng tạo liên kết hydrogen liên phân tử của amine yếu hơn so với alcolhol

Tương tự như NH:, các hợp chất amine có tính bazơ do còn một cặp điện tử không liên

kết trên nguyên tử nitroeen Các amine có khả năng nhận proton H” từ các acid để hình thành các muỗi amoni tương ứng Do nguyên tử nitrogen có độ âm điện nhỏ hơn so với oxygen, tính bazơ của amine lớn hơn 80 lần so với tính base của các acohol tương ứng và các hợp chất ether hay HO

1.4.3 Tính chất hóa học

Tinh bazo

Tương tự như NHs, Cac hop chat amine cé tính bazơ do còn một cặp điện tử không liên kết trên nitrogen Các amine có khả năng nhận proton H” từ các acid để hình thành các muối amoni tương ứng Do nguyễn tử nitrogen có độ âm điện nhỏ hơn so với oxygen, tinh base cua amine lớn hơn so với tính base của các aleohol tương ứng và các hợp chat ether hay HO

RiÌNH + HCI — R-NH; C[I

<<

Hinh 1.18 Phan ứng amine với HCI

Do tính base của amine lớn hơn của HO, khi hòa tan vào HaO sẽ hình thành một cân

bằng H:O đóng vai trò acid, sẽ chuyển một proton cho amine đề hình thành muối ammonium tương ứng Đặc trưng cho tính base của các amine là hằng số K¿ Giá trị của pKy càng nhỏ, nghĩa là hằng số cân bằng K;¿ càng lớn, tính base của amine càng mạnh, khá nặng nhận proton của amine càng tăng Ngược lại, pK› càng lớn, tính base của amine càng giám Cần lưu ý tính base của dung dich amine trong nước là do chính amine gây ra, chứ không phai do anion OH”

gây ra

Một số phản ứng amine:

Phan ứng ankyl hóa: Các amine bậc một có thế tham gia phản ứng thế ái nhân với các

dẫn xuất halogen, hình thành các amine bậc hai tương ứng, cac amine bậc hai này có thể tham

gia phán ưng tiếp tục tạo thành amine bậc ba

42

HạC ~~

HạC— su

Hinh 1.20 Phan tmg acyl héa cua aniline

Cơ chế phản ứng acyl hóa: Trong đó đòi hỏi phải có proton trên nguyên tử nitrogen của amine Khác với phản ứng ankyl hóa, các amine sinh ra không có khả năng tiếp tục tham gia phán ứng acyl hóa, do đôi điện tử không liên kết trên nguyên tử nitrogen đã tham gia phản ứng liên hợp với nhóm C=O

O2 m== Ollm==

H CH;

Hình 1.21 Phản ứng acyl hóa Các chất amide đễ dàng bị thủy phân khi có mặt xúc tác acid hoặc kiểm Phản ứng acyl hóa thường được sử dụng để bảo vệ nhóm —NH: trong các quá trình tổng hợp hữu cơ

> Phản ứng sulfonyl hóa:

Các amide bậc một và bậc hai có khả năng tham gia phản ứng với các dẫn xuất sunfonyl chloride nh CsH;SO,Cl, hình thành các hợp chất sulfonamide Cac amide bac ba khéng tham gia phan img nay San pham của phản ứng sulfonyl hóa amine bậc một có khả năng tan trong

dung địch kiềm, sản phẩm của phán ứng sulfonyl hóa amide bậc hai không có khá năng tan trong dụng địch kiềm

> Phản ứng oxy hóa:

Phản ứng oxy hóa amide diễn ra theo nhiều giai đoạn khác nhau, tùy thuộc vào bản chất

amide, tác nhân oxy hóa cũng như điều kiện phản ứng mà thu được các sản phâm khác nhau

1.4.4 Ứng dụng

Các hơp chất amine bậc hai là những hợp chất trung gian quan trọng cho các ngành công

nghiệp sản xuất phẩm nhuộm, các chất lưu hoá cao su, đặc biệt là ngành sản xuất dược phẩm

Rất nhiều loại được phẩm là dẫn xuất của các amine bậc hai có tác dụng nâng cao chất lượng cuộc sống, tuy nhiên có những amine bậc hai là chất gây nghiện

1.5 Phương pháp phân tích

1.5.1 Phương pháp phố cộng hướng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) NMR (nuclear magnetie resonance) là kỹ thuật có giá trị nhất để nghiên cứu cấu trúc phân tử, xác định thành phần hóa học trong các hợp chất hữu cơ Phương pháp NMR có hạn chế là chỉ áp dụng cho các hạt nhân nguyên tử với số hiệu nguyên tử (số thứ tự Z) lẻ hoặc số khối (A) lẻ vì các nguyên tử loại này có spin hạt nhân thì mới có tính chat từ như !H, 5C, N, '®E Các hạt nhân không có tính từ như ?D, °C, 'O, 3S không thể hiện trên phố NMR Các ảnh hướng đến phản ứng vào quá trình epoxy hóa được đánh giá bằng phân tích bằng phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân !H (NMR) Phổ proton có thê xem là phổ có độ nhạy cao

nhất trong kỹ thuật NMR vì hàm lượng 'H trong tự nhiên chiếm đến 99,98%,

Tính từ của hạt nhân nguyên tử được biéu thi định lượng qua moment lưỡng cực từ

H=yxP Trong đó:

pi: momen tir co gid trị tuyệt đối là ạt

P: momen động lượng (momen spin) hay spin hạt nhân có giá trị tuyệt đối là p

yY: hệ sỐ từ thẩm đặc trưng cho mỗi hạt nhân Hguyên fỨ

Hạt nhân từ cần được đặt trong từ trường không đổi Hạ, sau đó tác động lên hạt nhân bức

xạ điện từ H¡ (sóng rađio) sao cho từ trường H¡ của bức xạ này quay quanh trục Hạ với tần số góc có giá trị cần thiết gây nên sự cộng hưởng

Hình 1.22 Mô tả định hướng hạt nhân từ và từ trường trong phố NMR Phố cộng hưởng từ hạt nhân NMR nghiên cứu cấu trúc phân tử bằng sự tương tác của

bức xạ điện từ tần số radio với tập hợp hạt nhân được đặt trong từ trường mạnh Các hạt nhân

này là một phần của nguyên tử, và các nguyên tử lại được tập hợp thành phân tử Quá trình này sẽ tạo ra sự khác biệt về trạng thái spin của các hạt nhân và mức năng lượng tương ứng của chúng Tần số cộng hướng (tần số Larmor) Ủgi lệ thuận với từ trường B,

Trong từ trường Bo, các hạt nhân không nằm yên mà ở trạng thái cân bằng động Nếu muốn phá vỡ trạng thái cân bằng động này cần phải cung cấp năng lượng từ ngoài vào bằng cách cho một từ trường khác có cường độ B; tác dụng vào các phân tử này Điều đó sẽ làm

thay đổi lại sự phân bố các hạt nhân giữa hai mức năng lượng trên Một số hạt nhân sẽ hấp thụ

năng lượng của từ trường B¡ để nhảy từ mức năng lượng thấp lên mức năng lượng cao và ngược lại, một số hạt nhân ở mức năng lượng cao sẽ bức xạ năng lượng đề chuyển xuống mức năng lượng thấp Năng lượng cần thiết để cung cấp cho quá trình thay đôi đó đúng bằng AE = năng lượng cộng hướng từ nhân Quá trình hấp thụ năng lượng AE đề phân bồ lại cân bằng động trong từ trường B;¡ gọi là hiện tượng cộng hưởng từ nhân Hiện tượng cộng hưởng từ xảy

ra khi hạt nhân hấp thụ các năng lượng có tần số bằng vo được gọi là tần số cộng hưởng từ Đối với các hạt nhân trong phân tử càng phức tạp trong nguyên tử do ảnh hưởng của các đám mây electron của các nguyên tử bên cạnh Do hiệu ứng chắn từ khác nhau nên các hạt nhân !H và °C trong phân tử có tần số cộng hưởng khác nhau Đặc trưng cho các hạt nhân 'H

va °C trong phân tử là giá trị độ chuyên dịch hoá học ổ

Bảng 1.1 Độ dịch chuyển hóa học của các loại proton

Loại proton Độ dịch chuyển hóa học ( ppm)

Amino, R-NH; 1.0-5.0?

Sự chuyến dịch hóa học của các proton này khác nhau trong các đung môi khác nhau và

theo nhiệt độ và nông độ

Bảng 1.2 Độ dịch chuyển hóa học của các loại cacbon

Carboxylic acids, esters, -COOH 160-185

Aldehydes, ketones, -C=O 182-215

Nguyên tắt chung của phương pháp phố khối lượng là phá vỡ phân tử trung hoà thành ion phân tử và các ion dương mảnh có số khối z = m/e (m là khối lượng còn e là điện tích ion) Sau đó phân tách các ion này theo số khối và ghi nhân thu được phố khối lượng Dựa vào phố khối này có thế xác định phân tử khối và cầu tạo phân tử của chất nghiên cứu

Quá trình ion hóa là quá trình bắn phá các phân tử hợp chất hữu cơ trung hòa thành các ion phân tử mang điện tích đương bằng các phần tử mang năng lượng cao Sự bắn phá này sẽ

làm tách một một điện tử ra khỏi phân tử khảo sát làm cho phân tử biến thành ion dương, được

gọi là ion phân tử lon phân tử là ion dương và cũng là gốc tự do vì nó chứa số lẻ điện tử, nên ion phân tử còn gọi la cation géc hay ion gốc

X_ + c© Xế + 2e

Mẫu sau khi đã hoá hơi được dẫn vào buồng ion hoá để biến các phân tử trung hoà thành các ion Quá trình ion hoá này có thể thực hiện theo một số phương pháp khác nhau như:

- Phương pháp va chạm electron (electron impact): mau chat ở đạng hơi được dẫn vào trong một buồng, ở đây có một dòng e mang năng lượng chuyển động vuông góc với mẫu và xảy ra va chạm giữa chúng, biến các phân tử trung hoà thành các ion phân tử hoặc các ion mảnh Năng lượng của dòng e vào khoảng 10ev đến 100ev Sau đó đòng ion mới được tạo ra, chạy qua một điện trường E để làm tăng tốc độ chuyên động, thế của điện trường được gọi là thể tang tốc U Phương pháp này được đùng phô biến

- Phương pháp ion hoá hoá học (chemical ionization): Phương pháp có kỹ thuật gần giống với phương pháp va chạm electron Nguyên tắc phương pháp này là đưa vào một chất khí khác ngoài chất cần nghiên cứu Chất khí này sẽ bị ion hóa và các ion này sẽ tác động lên phân tử mẫu nghiên cứu tạo thành các ion phân tử Chất khí thường được sử dụng là methane

- Phương pháp ion hoá trường: cho mẫu dạng hơi đi qua giữa hai điện cực cảm ứng có

một điện trường mạnh, dưới tác dụng của lực tĩnh điện, phân tử trung hoa sé biến thành các

1on dương

- Phuong phap ion hoa proton: cho dong phan ti mau dang hoi va dap voi déng photon

có năng lượng khoảng 10eV sẽ xảy ra qua trinh ion hoa

- Phương pháp bắn phá nguyên tử nhanh: một đòng khí agon hay xenon được bắn ra từ một khẩu súng đập thăng vào mẫu hoà tan trong đung môi như glixerin Trước tiên các phân tử dung môi bị ion hoá rồi chính nó ion hoá phân tử mẫu thành các ion tiếp theo

Nguyên tắc phân mánh: Sự phân hoá phân tử các hợp chất hữu cơ qua sự va chạm với e thường xảy ra theo những quy luật nhất định, dựa vào những quy luật đó người ta có thể giải

thích được cầu tạo các hợp chất hữu cơ

- Ankane: Những ankane và những hợp chất chứa nhóm anksyl bị phá vỡ dưới sự hình thành của một ion ankyl và 1 gốc Những ankyl gắn với các nhóm chức X = OH, SH, OR thì trước tiên sẽ tách nhóm chức trước

- Co ché tach ion tropylium (vong):

Các hợp chất benzen có nhóm thế CH;X (X=H, ankyl, OH, SH, -COR ) gan voi vòng benzen thường tách gốc R cho các ion tropylium theo cơ chế sau:

CạH:-CH;-R” —> C;H;-R —> C;H; + R

R=H: m/e = 91 Hoc—x |” GH,

có thể phân lập một tế bào cụ thể, nhân nó lên và bắt đầu một dòng tế bào Gey đã đặt tên cho

mẫu là HeLa, theo các chữ cái đầu của tên Henrietta Lack Là dòng tế bào đầu tiên của con người được nuôi cấy trong phòng thí nghiệm, đó là dòng tế bào “ bat tử '` ( chúng không chết

24

sau vài lần phân chia tế bào ), chúng có thể được sử dụng để tiến hành nhiều thí nghiệm Điều

này thể hiện lợi ích to lớn cho việc nghiên cứu y học và sinh học

Tế bào HeLa cũng là tế bào đầu tiên được nhân bản thành công vào năm 1955 bởi

Theodore Puck and Philip I Marcus tai dai hoc Colorado Denver Nhu cau vé dong té bao

HeLa nhanh chóng tăng lên Kế từ khi chúng được đưa vào sản xuất hang loạt, các tế bào của

Henrietta đã được các nhà khoa học trên toàn cầu sử dụng để “ nghiên cứu về ung thư, AIDS, ảnh hưởng của bức xạ và các chất độc hại, lập bản dé gen và vô số các mục đích khoa học

khác ˆ° Có gần 11000 băng sáng chế liên quan đến HeLa

Tế bào HeLa được sử dụng trong nghiên cứu biếu thị của virus Papiloma E2 và apoptosis Tế bào HeLa cũng được sử dụng để nghiên cứu khả năng gây ra apoptosis của virus gây bệnh ở các dòng tế bào ung thư Khá năng gây ra apoptosis của virus này có thế đóng một vai trò quan trọng trong việc phát triển các phương pháp điều trị cho tế bào khối u kháng lại bức xạ và hóa trị Tế bào HeLa cũng được sử dụng trong một số nghiên cứu ung thư

bao gồm những thứ liên quan đến các hormone sinh dục như Estradiol, estrogen, va các thụ

thé estrogen cing voi hop chat giéng estrogen nhu Quercetin và các đặc tính giám ung thư của

nó Cũng đã có những nghiên cứu vẻ tế bào HeLa, tác động của flavonoid va chaasst chéng oxy hóa với estradiol đối với sự tang sinh của tế bào ung thư Tế bào HeLa đã được sử dụng

để nghiên cứu các hợp chất phytochemical và cơ chế cơ bán của hoạt động chống ung thư của chiết xuất ethanolic của vỏ xoài (EEMP) EEMP đã được phát hiện có chứa đa đạng các hợp chất phenolie khác nhau và kích hoạt quá trình tử vong của các tế bào HeLa ác tính ở cô tử cung cơn người, điều này cho thấy EEMP có thê ngăn ngừa ung thư cỗ tử cung cũng như các loại ung thư khác Té bao HeLa được sử dụng trong nghiên cứu liên quan đến các fullerene để tạo ra quá trình apoptosis như một phần của quang trị liệu cũng như nghiên cứu ung thư trong ống nghiệm sử dụng các dòng tế bào Các tế bào HeLa khác cũng được sử đụng dé xác định

dấu hiệu ung thư trong RNA và được sử dụng để thiết lập hệ thống nhận dạng dựa trên RNA

và can thiệp vào các tế bào ung thư

1.7 Thử nghiệm hoạt đông ức chế tăng sinh

Xét nghiệm M TT tiêu chuẩn là một xét nghiệm so màu không hoạt tính nhạy cảm để xác

định số lượng tế bào sống sót trong các xét nghiệm tăng sinh tế bào và xét nghiệm độc tính tế

bào Dung địch được thêm trực tiếp vào các tế bào và không cần trộn trước các thành phản

MTT sử dụng muối tetrazolium của Dojindo, WST-§ 2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4- nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, muối monosodium], tao ra formazan hoa tan trong nước khi giảm sự có mặt của chất mang điện tử Số lượng formazan màu vàng được tạo ra trong tế bào tỷ lệ thuận với số lượng tế bào sống Một cách ngắn gọn, vào cuối giai đoạn nuôi cấy, 10 uL dụng địch MTT được thêm vào mỗi giếng của đĩa nuôi cấy Sau 2-4 giờ ủ, độ hấp thụ ở bước sóng 450 nm được do bằng máy quang phổ spectrophotometer (Biotek

Instruments, Gene Company Limited, Winooski, VT) Tác dụng gây độc té bao duoc chi dinh

theo tỷ lệ phần trăm tế bào sống sót (tỷ lệ tế bào sống sót sau khi điều trị và không điều trị) theo công thức sau:

Khả năng tổn tại tế bao = ( độ hấp thu của mẫu - độ hấp thu nền / độ hấp thụ đối chứng