Nhiều thầy thuác y hác dân tác dùng Gừng en như mát vß thuác chính ể hß trợ iều trß nhiều chứng bệnh như: au bụng ầy trướng, khí huyết ngưng trệ, bệnh máu ông thành hòn, tiêu mủ, trß vết
T ã ng quan v Á b Ç nh tim m ¿ ch
Gi ò i thi ầ u chung v Á b ầ nh tim m ¿ ch
Bệnh tim mạch (CVDs) là nguyên nhân hàng đầu gây tử vong trên toàn cầu, với hơn 17,3 triệu ca tử vong mỗi năm (chiếm 31% tổng số ca tử vong) Hơn 3/4 số ca tử vong do CVDs xảy ra ở các nước thu nhập thấp và trung bình CVDs là nhóm rối loạn của tim và mạch máu.
- Bệnh m¿ch vành - bệnh của các m¿ch máu cung cấp máu cho cơ tim
- Bệnh m¿ch máu não - bệnh của các m¿ch máu cung cấp máu cho não
- Bệnh áng m¿ch ngo¿i biên - bệnh của các m¿ch máu cung cấp máu cho cánh tay và chân;
- Bệnh thấp tim - tổn thương cơ tim và van tim do sát thấp khớp, do vi khuẩn liên cầu gây ra;
- Bệnh tim bẩm sinh - dò tật cấu trỳc tim tồn t¿i khi sinh;
- Huyết khái tĩnh m¿ch sâu và thuyên tắc phổi - cục máu ông trong tĩnh m¿ch chân, có thể bong ra và di chuyển ến tim và phổi
Bệnh mạch vành (CHD) là nhóm bệnh lý ảnh hưởng đến động mạch vành, nguồn cung cấp máu duy nhất cho tim CHD bao gồm các bệnh như thiếu máu cơ tim (IHD) và nhồi máu cơ tim cấp.
Bệnh mạch máu não gồm hai nhóm chính: thiếu máu cục bộ và xuất huyết Tai biến mạch máu não là thuật ngữ phổ biến chỉ nhóm bệnh này, khởi phát đột ngột gây tổn thương thần kinh Khoảng 85% trường hợp đột quỵ là do thiếu máu cục bộ (thiếu máu lên não) Đột quỵ xuất huyết chia thành hai loại: xuất huyết não và xuất huyết dưới nhện.
Bệnh mạch ngoại biên là bệnh tắc nghẽn mạch máu ngoại biên do xơ vữa động mạch và huyết khối, không ảnh hưởng đến mạch máu nuôi tim và não Tăng huyết áp là yếu tố nguy cơ chính của bệnh mạch ngoại biên.
Xơ vữa động mạch là quá trình bệnh lý mãn tính gây bệnh mạch vành (nhồi máu cơ tim) và bệnh mạch máu não (đột quỵ) Chất béo và cholesterol tích tụ trong lòng mạch, làm hẹp lòng mạch, cản trở lưu thông máu và khiến mạch máu trở nên cứng hơn Mảng bám có thể vỡ, hình thành cục máu đông gây nhồi máu cơ tim hoặc đột quỵ.
Cỏc y ¿ u t ò gõy ra b ầ nh tim m ¿ ch
Các yếu tốnguy cơ gây ra bệnh tim mạch bao gồm [29]:
Hành vi nguy cơ sức khỏe bao gồm hút thuốc lá, lười vận động, chế độ ăn uống không lành mạnh (nhiều muối, chất béo, calo) và lạm dụng rượu bia.
- Các yếu tá nguy cơ chuyển hóa (tăng huyết áp, tăng lượng ường trong máu, tăng lipid máu, thừa cân béo phì)
- Các yếu tá rủi ro khác (nghèo ói và tình tr¿ng giáo dục thấp, tuổi cao, giới tính, di truyền, các yếu tá tâm lý)
Nghiên cứu dịch tễ học khẳng định mối liên quan chặt chẽ giữa các yếu tố nguy cơ (cholesterol cao, huyết áp cao, tiểu đường, béo phì, viêm nhiễm, chế độ ăn gây xơ vữa, stress oxy hóa) và bệnh tim mạch Lười vận động, chế độ ăn không lành mạnh và hút thuốc lá cũng là những yếu tố nguy cơ đáng kể.
5 lá và sử dụng nhiều bia rượu là những yếu tá nguy cơ chính về hành vi gây ra
Hknh 1.1: Mười yếu tánguy cơ gây tửvong liên quan ến CVDs
Thu ò c ch òng ng°ng tÁ p ti à u c Å u và thu ò c ch òng đụng mỏu trong điÁ u
Vai trũ c ă a thu ò c ch òng ng°ng tÁ p ti à u c Å u và thu ò c ch òng đụng máu trong điÁ u tr á các b Ç nh tim m ¿ ch
trong điÁu trá các bÇnh tim m¿ch
Huyết khối động mạch và tĩnh mạch là nguyên nhân hàng đầu gây bệnh tim mạch và tử vong Huyết khối động mạch gây ra nhồi máu cơ tim, đột quỵ và bệnh động mạch ngoại biên, trong khi huyết khối tĩnh mạch (VTE), bao gồm huyết khối tĩnh mạch sâu (DVT) và thuyên tắc phổi (PE), là bệnh lý mạch máu phổ biến sau nhồi máu cơ tim cấp và đột quỵ, có thể gây tử vong hoặc biến chứng nghiêm trọng Thuốc chống ngưng tập tiểu cầu và thuốc chống đông máu là liệu pháp lý tưởng để phòng ngừa và điều trị huyết khối.
Huyết khối động mạch hình thành do tiểu cầu kết dính và ngưng tập với fibrin khi chảy máu cao và nội mạc mạch máu bị tổn thương Thuốc chống ngưng tập tiểu cầu ức chế quá trình này Thuốc chống đông máu chủ yếu phòng ngừa biến chứng tim mạch ở bệnh nhân rung nhĩ và bệnh van tim Thuốc tiêu sợi huyết phục hồi dòng máu ở bệnh nhân nhồi máu cơ tim không can thiệp PCI và đột quỵ thiếu máu cục bộ cấp.
Huyết khối tĩnh mạch hình thành do tiểu cầu kết dính, ngưng tập cùng fibrin và hồng cầu bị mắc kẹt trong điều kiện dòng máu chậm tại vị trí mạch máu tổn thương, khác với huyết khối động mạch ở lượng tiểu cầu ít hơn Thuốc chống đông máu là giải pháp chính phòng ngừa và điều trị VTE do fibrin dư thừa trong huyết khối tĩnh mạch Điều trị tắc mạch phổi sử dụng tiêu sợi huyết toàn thân hoặc thông động mạch; liệu pháp này cũng áp dụng cho DVT cần can thiệp mở rộng.
Cỏc thu ò c ch òng ng°ng tÁ p ti à u c Å u và cỏc thu ò c ch òng đụng mỏu 6
Các thu ố c ch ống ngưng tậ p ti ể u c ầ u
Thuốc kháng tiểu cầu ức chế quá trình kết dính, hoạt hóa, ngưng tập và liên kết viêm của tiểu cầu, tác động lên nhiều mục tiêu như COX-1, thụ thể ADP, glycoprotein (GP Ib, GP Ia/IIa, GP VI), thrombin, sản phẩm AMP vòng và thụ thể Gp IIb/IIIa.
Thuốc chống ngưng tập tiểu cầu được sử dụng rộng rãi trong lâm sàng hiện nay bao gồm aspirin, dipyridamol, ticlopidin và các chất ức chế thụ thể GP IIb/IIIa.
Aspirin ức chế không hồi phục sự tổng hợp prostaglandin và thromboxan A2 từ acid arachidonic, đặc biệt là thromboxan A2 – một tác nhân gây ngưng tập tiểu cầu mạnh, thông qua ức chế cyclooxygenase.
Hknh 1.2: Minh háa tác dụng của các thuác cháng ngưng tập tiểu cầu [1] Xuất phát từ tác dụng chính của aspirin là ức chế ngưng tập tiểu cầu, thuác cú hiệu quÁ cao trong ngăn ngừa và iều trò những tỡnh tr¿ng tăng ụng gõy tắc m¿ch mà ở ó sự ho¿t hóa tiểu cầu óng vai trò quan tráng hơn cÁ như bệnh lý ỏng m¿ch vành tim (nhồi mỏu cơ tim, au thắt ngực khụng ổn ònh,…) [1]
Ticlopidin tưong tác với glycoprotein IIb/IIIa receptor của fibrinogen làm ức chế sự gắn fibrinogen vào tiểu cầu ho¿t hóa, ngăn cÁn sự kết dính tiểu cầu
Ticlopidin tăng prostaglandin D2 và E2, chống kết tập tiểu cầu và kéo dài thời gian chảy máu Tuy nhiên, do tác dụng phụ nghiêm trọng như giảm bạch cầu (có thể gây tử vong), suy tủy và tắc mật, thuốc này hiện nay ít được sử dụng.
Dipyridamol tăng nồng độ AMP vòng trong tiểu cầu, ức chế thromboxan A2 và gián tiếp làm tăng adenosin, dẫn đến tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu mà không kéo dài thời gian chảy máu.
Clopidogrel ức chế thụ thể ADP của tiểu cầu, ngăn sự hoạt hóa glycoprotein IIb/IIIa và giảm gắn kết fibrinogen, do đó ức chế sự kết tập tiểu cầu.
❖ Các chất ức chế glycoprotein IIb/IIIa receptor:
Bao gồm mát sá thuác như Abcimab, Eptifibatid, Tirofiban, … [4]
Các thu ố c ch ống đông máu
Heparin tăng cường mạnh mẽ khả năng ức chế đông máu của antithrombin III (AT III) Hai dạng heparin thường dùng trong lâm sàng là heparin chưa phân đoạn và heparin trọng lượng phân tử thấp.
Heparin được chỉ định trong các bệnh lý tăng đông máu gây tắc mạch, đặc biệt khi hoạt hóa yếu tố đông máu đóng vai trò chính Thuốc cũng được sử dụng trong tắc mạch cấp tính như nhồi máu cơ tim và tắc mạch phổi [1].
Liều heparin tối ưu và an toàn nhất thường đạt được khi APTT kéo dài gấp 1,5-2 lần so với giá trị ban đầu [1].
❖ Thuốc chống đông đường uống, kháng vitamin K
Vitamin K đóng vai trò quan trọng trong quá trình đông máu bằng cách hoạt hóa các yếu tố II, VII, IX, X, protein S và protein C Chất coumarin ức chế vitamin K, dẫn đến giảm hoạt tính đông máu.
Hknh 1.3: Tác dụng của dẫn xuất coumarin [1]
Dẫn xuất coumarin thường thay thế heparin sau giai đoạn cấp tính, do tác dụng chậm hơn, tạo nên "thời gian điều trị giai đoạn đầu" khoảng 3 ngày Chỉ số PT, nhạy cảm với thay đổi yếu tố II, VII, X (phụ thuộc vitamin K và bị ức chế bởi coumarin), được dùng theo dõi hiệu quả điều trị INR từ 2,0 đến 3,0 cho thấy hiệu quả điều trị dẫn xuất coumarin tốt nhất.
H ¿ n ch ¿ c ă a m ộ t s ò thu ò c ch òng ng°ng tÁ p ti à u c Å u và thu ò c ch òng đụng máu
H ¿ n ch ¿ c ă a thu ò c ch òng ng°ng tÁ p ti à u c Å u
Thuốc kháng GPIIb/IIIa tĩnh mạch từng đóng vai trò quan trọng trong can thiệp mạch vành qua da (PCI) ở bệnh nhân Angina Tuy nhiên, nhu cầu về thuốc này đã giảm do sự ra đời của các thuốc chống ngưng tập tiểu cầu mạnh hơn như aspirin, clopidogrel, prasugrel và dipyridamol.
Hiệu quÁ của aspirin và clopidogrel ã ược thiết lập rõ ràng trên cyclooxygenase-
Aspirin và các thuốc chống ngưng tập tiểu cầu khác nhắm vào COX-1 (quan trọng trong tổng hợp thromboxan A2) và P2Y12 (thụ thể ADP chính trên tiểu cầu) Tuy aspirin hiệu quả trong phòng ngừa thứ phát các biến cố tim mạch do xơ vữa động mạch, nhưng chỉ hữu ích trong phòng ngừa ban đầu, kể cả ở bệnh nhân tiểu đường type II Tuy nhiên, aspirin có thể gây tác dụng phụ như kích ứng dạ dày và chảy máu, giảm bạch cầu trung tính, thiếu máu bất sản và ban xuất huyết giảm tiểu cầu.
Những vấn ề trên nêu bật những h¿n chế của aspirin
Clopidogrel chỉ hiệu quả hơn aspirin một chút Kết hợp aspirin với clopidogrel ưu việt hơn dùng riêng aspirin ở bệnh nhân tim mạch nguy cơ cao, nhưng tăng nguy cơ chảy máu đáng kể và hiệu quả không như mong đợi ở bệnh nhân tim mạch ổn định Kết hợp aspirin và dipyridamol cũng vượt trội hơn aspirin đơn thuần trong dự phòng thứ phát bệnh mạch máu não, hiệu quả tương đương clopidogrel.
Thuốc chống ngưng tập tiểu cầu hiện nay chỉ ức chế một phần con đường hoạt hóa tiểu cầu, dẫn đến hiệu quả hạn chế và nguy cơ cao thất bại khi gặp tác nhân kích thích mạnh Điều này lý giải tại sao biến cố tim mạch vẫn xảy ra.
H ¿ n ch ¿ c ă a thu ò c ch òng đụng mỏu
Sự ra ời của heparin tráng lượng phân tử thấp (LMWH) và fondaparinux
Thuốc kháng đông tổng hợp dựa trên pentasaccharide của heparin ức chế yếu tố Xa, đơn giản hóa điều trị ban đầu huyết khối động mạch hoặc tĩnh mạch nhờ khả năng tiêm dưới da không cần theo dõi đông máu Nguy cơ giảm tiểu cầu thấp hơn heparin, thậm chí không tồn tại với fondaparinux Tuy nhiên, tiêm hàng ngày hạn chế sử dụng lâu dài, tích tụ ở bệnh nhân suy thận, thiếu thuốc giải độc và nguy cơ huyết khối thông khi dùng trong PCI, đặc biệt với fondaparinux do thời gian bán hủy dài.
Thuốc chống đông máu hiện nay có những hạn chế như tác dụng chậm, cần điều chỉnh liều lượng, ảnh hưởng bởi yếu tố di truyền và chế độ ăn (vitamin K) Tương tác thuốc cũng ảnh hưởng đáng kể đến hiệu quả của thuốc chống đông máu, ví dụ như Warfarin Hơn nữa, một số thuốc chống đông máu như heparin không phân tử lượng có thể gây tăng nguy cơ chảy máu và biến chứng huyết khối.
Do hạn chế của thuốc chống đông máu và thuốc chống ngưng tập tiểu cầu hiện nay, nghiên cứu tập trung vào phát triển hợp chất mới từ dược liệu, hướng tới hiệu quả cao và ít tác dụng phụ.
Nghiên cứu cho thấy cây thuốc có khả năng chống ngưng tập tiểu cầu, chống đông máu và hoạt tính chống oxy hóa đáng kể [17,27] Kết quả này rất khả quan đối với 12 hoạt chất CVDs được nghiên cứu.
T ã ng quan v Á G ćng đen
Gi ò i thi ầ u chung v Á chi Distichochlamys
1.4.1.1 Đ¿c điÃm thực vÁt và phõn bò
Chi *Distichochlamys* (họ Gừng, Zingiberaceae) là một chi thực vật đặc hữu của Việt Nam, được Mark Fleming Newman mô tả lần đầu năm 1995 Tính đến năm 2020, chi này bao gồm 4 loài đã được phát hiện.
1995 tới năm 2012 t¿i nước ta Distichochlamys có quan hệ gần với chi
Scaphochlamys và chi Boesenbergia là các cây thảo nhỏ, thân không từ bẹ lá, rễ nhỏ Lá có phiến lá màu nâu nhạt đến nâu đỏ, cuống lá dài 15-25cm Cụm hoa mọc giữa các bẹ lá, ít hoa, màu vàng Cánh môi hình trứng ngược hoặc gần tam giác ngược, xẻ thùy sâu hoặc nông Bầu nhụy 3 ô.
Cây tháo là loài ưa bóng, ẩm, thường mọc dưới tán rừng và là đặc hữu của Việt Nam Bài viết này sẽ trình bày sự phân bố cụ thể của các loài thuộc chi này.
Distichochlamys citrea* M.F.Newman, 1995 (Gừng ên) là loài đặc trưng của chi *Distichochlamys*, phân bố tại khu vực Cúc Phương, Việt Nam Loài này có lá màu xanh và hoa màu vàng, nụ hoa có điểm vệt đỏ.
- Distichochlamys orlowii K.Larsen & M.F.Newman, 2001 (Gừng en Orlow): Phân bá trong mát khu vực hẹp t¿i mát làng thuác huyện An Khê, tỉnh Gia Lai [18]
Distichochlamys rubrostriata*, được nhà thực vật học Tania Rehse (Đại học Duke) và John Kress (Viện Smithsonian) miêu tả và đặt tên năm 2003, là loài gừng đặc hữu của khu vực Cúc Phương, Việt Nam Đây là loài cây gừng chỉ tìm thấy ở miền Bắc Việt Nam.
Cây 13 lá có tán lá xanh nhạt, hoa vàng tươi nở liên tục nhiều tuần Tuy nhiên, do là cây nhiệt đới nên nhiều nhà khoa học cho rằng chúng không phù hợp khí hậu lạnh, nhưng có thể trồng chậu trong nhà vào mùa đông.
- Distichochlamys benenica Q.B Nguyen & Škornik, 2012: Được các nhà khoa hác Việt Nam và Singapore tìm thấy ở Vườn quác gia Bến En, Thanh Hóa vào tháng 4 năm 2011 [3,24]
Hiện nay, kiến thức về chi *Distichochlamys*, đặc biệt là thành phần hóa học, còn rất hạn chế Nghiên cứu chỉ mới xác định sơ bộ một số thành phần hóa học trong cây Gừng en (*Distichochlamys citrea*) bằng phương pháp chưng cất tinh dầu và sắc ký khí khối phổ.
Thành phần ược tìm thấy ở thân rễ Gừng en ược phân lo¿i làm 4 nhóm:
Ginger essential oil's main components are oxygenated monoterpenes (OM), including 1,8-cineole as the major constituent (30.71–43.67%) Other components identified include aliphatic compounds (AC), monoterpene hydrocarbons (MH), and sesquiterpene hydrocarbons (SH).
Chemical analysis of *D rubrostriata* essential oil identified over 14 compounds, with major constituents including 1,8-cineole (13.20–22.00%), α-citral (18.49–22.13%), β-citral (14.15–22.26%), trans-geraniol (12.47–12.75%), and geranyl acetate (6.61–14.92%).
H k nh 1.4 : Cấu trúc hoá hác của mát sá hợp chất trong tinh dầu cây Gừng en: α- pinene (1), β-pinene (2), β-linalool (3), α-terpineol (4), 1,8-cineole (5), cis- geraniol (6), β-citral (7), α-citral (8) và neryl acetate (9)
Hiện nay, các tài liệu nghiên cứu về tác dụng dược lý của chi
Gừng, theo y học cổ truyền, có vị cay, tính nóng, ấm và được biết đến như một vị thuốc hoạt huyết hành khí cực mạnh Nhiều thầy thuốc dân tộc dùng gừng làm thuốc chính hỗ trợ điều trị các chứng bệnh như đau bụng đầy trướng, khí huyết ngưng trệ, bệnh máu ứ thành cục, tiêu mủ, trợ vết thương, mau lành da.
1.4.2 Vài nét s¢ l°ÿc vÁ cây Gćng đen ( Distichochlamys citrea )
Cây Gừng ( *Distichochlamys citrea*) là một loài thực vật có hoa thuộc chi Gừng (*Distichochlamys*) họ Gừng (Zingiberaceae), được M.F.Newman phát hiện tại Vườn quốc gia Bạch Mã.
Năm 1995, loài Mã (Thừa Thiên Huế) được mô tả khoa học Đặc điểm nhận dạng: lá xanh, hoa vàng có điểm vệt đỏ giữa nụ; củ hình chồi vọt, mập mạp, vỏ ngoài vàng nhạt, ruột màu tím đen (không phải tím xanh).
Hknh 1.5: Hình Ánh cây Gừng en (Distichochlamys citrea)
Gừng Việt Nam (Distichochlamys citrea) là cây thân rễ, lá dài đến 42cm, mọc thành cụm dày đặc.
Cây có thân 20cm, cứng, với các đặc điểm như lá thưa, búng; phiến lá dài 17-22cm, rộng 8.3-10.7cm, hình elip, gân giữa lệch rõ; lá bắc dài 21-23mm, phủ lớp lông mềm, mặt ngoài cứng, mặt trong búng và sáng, màu hồng sẫm; đài hoa dài 9mm, có lông thưa, hình mác hoặc chia thùy, màu trắng trong; tràng hoa dài 30mm, màu trắng chuyển vàng nhạt ở phần xa, hình elip.
Th ự c tr ¿ ng và ph à n b ò cõy G ćng đen ( Distichochlamys citrea)
Gừng en là chi ặc hữu của Việt Nam, phân bá chủ yếu ở các tỉnhQuÁng
Các tỉnh Bỡnh, QuÁng Trò, Gia Lai, Thanh Hóa, Nghệ An cùng các vườn quốc gia Pự Mỏt, Bạch Mã và Cúc Phương đều có trữ lượng gừng dại.
Gừng rừng Việt Nam khan hiếm do khai thác quá mức Nhiều nghiên cứu trong và ngoài nước tập trung nhân giống gừng rừng nhằm đáp ứng nhu cầu dược liệu.
Thành ph Å n hóa h ã c cây G ćng đen ( Distichochlamys citrea)
Nghiên cứu về thành phần hóa học của cây Gừng en (Distichochlamys citrea) còn rất hạn chế Các nhà khoa học mới chỉ xác định sơ bộ một số thành phần hóa học trong tinh dầu lá và thân rễ, với hàm lượng lần lượt là 0,12% và 0,50% (theo nguyên liệu tươi) bằng phương pháp chưng cất tinh dầu và sắc ký khí khối phổ.
Essential oil from the leaves yielded 18 compounds, primarily β-sesquiphellandrene (54.95%), β-pinene (18.26%), α-pinene (4.16%), α-terpineol (3.08%), cis-geraniol (2.46%), 1,8-cineole (2.18%), and β-citral (1.22%) Rhizome essential oil contained 40 compounds, with major components including 1,8-cineole (30.34%), α-citral (20.88%), β-citral (11.05%), neryl acetate (9.90%), and cis-geraniol (7.61%).
Hàm lượng tinh dầu trong các mẫu nghiên cứu khác nhau đáng kể do ảnh hưởng của điều kiện khí hậu và thổ nhưỡng, dẫn đến sự khác biệt về chất lượng và giá trị.
Công d ā ng và tác d āng d°ÿ c lý cây G ćng đen ( Distichochlamys citrea)
Loài Gừng en (Distichochlamys citrea) cần được nghiên cứu thêm về thành phần hóa học để làm rõ công dụng và tác dụng, hỗ trợ bảo tồn nguồn gen và tìm kiếm hoạt chất phục vụ y học.
1,8-cineole, thành phần chính trong tinh dầu thân rễ gừng, đã được chứng minh ức chế tế bào ung thư máu HL-60 ở người.
Tinh dầu sả chứa α-citral, β-citral và trans-geraniol với công dụng chống oxy hóa, ngừa ung thư, kháng khuẩn và tẩy giun sán Các thành phần khác như geranyl acetate chống viêm, chống nấm mạnh mẽ, và β-linalool hỗ trợ hoạt động chống oxy hóa, giảm độc tế bào Tinh dầu này được ứng dụng trong điều trị nhiều bệnh như đau cơ bắp, rối loạn thần kinh chức năng, bệnh thấp khớp, hen suyễn và tim mạch.
Nguyờn li ầu, đòi t°ÿ ng nghiờn c ą u
Đòi t°ÿ ng nghiờn c ą u
Loài cây gừng *Distichochlamys citrea*, một mẫu vật đặc hữu của Việt Nam, được thu thập tại Quảng Bình tháng 6/2021 và được đặt tên chính thức bởi TS Nguyễn Quốc Bình - Phòng Sinh học, Bảo tàng Thiên nhiên Việt Nam.
• Quy trỡnh sơ chế nguyờn liệu: Mẫu Gừng en sau khi giỏm ònhược rửa s¿ch và phơi khô trong bóng mát, nhiệt á không quá 30 o C
• Quy trỡnh chiết xuất cỏc phõn o¿n dòch chiết dược liệu:
Phần thõn lỏ sau khi phơi khụ ược xay nhò Ngõm 10 g phần bỏt này vào
100 mL hỗn hợp dung môi gồm hexane, ethyl acetat, ethanol và methanol được siêu âm 60 phút ở 40°C, sau đó lọc Quá trình này được lặp lại 3 lần với mỗi dung môi Dung môi được cất thu hồi dưới áp suất giảm đến khi khối lượng không đổi, thu được các cặn chiết.
- Cao ethyl acetat (Ea): 411,25 mg
• Sơ ồ chiết tách dược liệu ược trình bày cụ thể trong Hình 2.1
Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, Khoa Khoa học Sự sống, Trường Đại học Khoa học và Công nghệ Hà Nội là nơi tiến hành các quy trình chiết tách dược liệu.
Hknh 2.1: Sơ ồ chiết tách dược liệu Gừng en
Dòch chiết 3 Lặp l¿i các bước trên
Nhiệt á: 40 á Thời gian: 60p Thêm 100ml dung môi
Nguyên li Ç u d ā ng c ā nghiên c ą u
This study utilizes pure Dimethyl Sulfoxide (DMSO), 0.9% NaCl, 1% Polyvinyl alcohol (PVA), 1% Polyvinyl butyral (PVB), collagen, herbal extracts, Aspirin (100mg), Heparin (5000 IU/mL), Thromborel S (PT reagent), Dade Actin (APTT reagent), Thromboclotin (TT reagent), ADP, and ristocetin.
Để tiến hành xét nghiệm, cần chuẩn bị: xy lanh 10 mL hoặc 20 mL, kim lấy máu 20G, ống nghiệm chứa citrate, ống nghiệm sạch, ống đựng mẫu, viên khuấy từ, đầu côn, eppendorf, micropipette (1–10 µL, 20–200 µL, 100–1000 µL), găng tay, bút đánh dấu và giá đựng ống nghiệm.
-Máy o á ngưng tập tiểu cầu CHRONO-LOG 530 VS
-Máy o thời gian ông máu ACL TOP500.
H knh 2.2: Máy ACL TOP500 Hknh 2.3: Máy CHRONO-LOG 530 VS
Với sự chấp thuận của Hội đồng Đạo đức Trường Đại học Y dược, Đại học Quốc gia Hà Nội (số hồ sơ 0220202/CN-HĐĐĐ), nghiên cứu đã thu thập mẫu máu từ người tình nguyện khỏe mạnh, độ tuổi 18-25, tuân thủ hướng dẫn quốc gia về đạo đức trong nghiên cứu y sinh học trên người.
Nghiên cứu cần tình nguyện viên khỏe mạnh, tuổi từ 18-25, không hút thuốc lá, không mắc bệnh về máu, và không dùng thuốc ảnh hưởng đến quá trình đông máu, tiêu sợi huyết.
Nghiên cứu loại trừ những người tham gia có bất thường về số lượng tiểu cầu, mẫu máu bị vỡ hồng cầu hoặc hiến máu trên 450ml trong vòng 28 ngày trước.
Nghiên cứu chỉ tiến hành trên người tình nguyện đã hiểu rõ lợi ích, rủi ro và mục đích, đồng thời được quyền tự nguyện tham gia, rút lui bất cứ lúc nào mà không bị ràng buộc Thông tin cá nhân của người tham gia được bảo mật và chỉ sử dụng cho mục đích nghiên cứu.
Mẫu máu (12-14 mL) được lấy từ các tình nguyện viên tại Khoa Khám bệnh và Điều trị ngoại trú, Viện Huyết học, bởi các bác sĩ/y tá chuyên nghiệp để xét nghiệm các chỉ số huyết học.
Ph°¢ng pháp nghiên cą u
Đỏnh giỏ ho¿ t tớnh ch òng ng°ng tÁ p ti à u c Å u c ă a cỏc d ỏ ch chi ¿ t thõn lá cây G ćng đen
Sử dụng phương pháp o quang của Born (1962) ể o á ngưng tập tiểu cầu trên máy CHRONO-LOG 530 VS của Mỹ [20]
Sử dụng 3 chất kích tập: Với thể tích lần lượt là collagen (1 μL), ADP
❖ Tiến hành: Đo khÁ năng ngưng tập tiểu cầu của máu bình thường:
Thêm 500 μL PRP vào cuvet thủy tinh có bi khuấy từ, bổ sung chất kích tập tiểu cầu Nếu tỷ lệ ngưng tập tiểu cầu trên 50%, tiến hành đánh giá khả năng ngưng tập tiểu cầu của máu với các cao chiết ở nồng độ 5 mg/mL.
Aspirin 0,1 mg/mL là chứng dương, DMSO 0,1% là chứng âm
Quy trình tiến hành cụ thể như sau:
Cho 450 μL PRP vào cuvet Thêm 50 μL dung dịch thử, ủ 3-5 phút ở 37°C Sau đó, thêm chất kích thích ngưng tập tiểu cầu Tính % ngưng tập tiểu cầu bằng cách so sánh lượng ánh sáng truyền qua mẫu với mẫu chứng (100%).
Lặp l¿i thớ nghiệm 3 lần ở mòi lo¿i dòch chiết và chứng dương
❖ Các thông số nghiên cứu:
Phần trăm ngưng tập tiểu cầu tái a ược biểu diễn qua chỉ sá Amplitude
Phần trăm ức chế ngưng tập tiểu cầu (% I) của các mẫu thử và mẫu chứng dương ược tính theo công thức sau:
%�㔼 = (%�㕁�㕇�㕇�㔶 ÿáþ �㕏ìĀ/ ý/ườĀý − %�㕁�㕇�㕇�㔶 ÿẫþ %�㕁�㕇�㕇�㔶)
%�㕁�㕇�㕇�㔶 ÿáþ �㕏ìĀ/ ý/ườĀý �㕥 100(% NTTC tính theo chỉ sá Amplitude)
Sự thay đổi độ dốc (slope) trong vài phút đầu tiên phản ánh hoạt hóa tiểu cầu và đánh giá giai đoạn khởi đầu quá trình ngưng tập.
Chỉ số diện tích dưới đường cong ngưng tập tiểu cầu (AUC) phản ánh mức độ ngưng tập tiểu cầu, từ thời điểm tiểu cầu biến dạng đến khi ngưng tập tái lập Đây là chỉ số quan trọng nhất, phụ thuộc vào tốc độ thay đổi ngưng tập và phần trăm ngưng tập tái lập.
Đỏnh giỏ ho¿ t tớnh ch òng đụng mỏu că a cỏc d ỏ ch chi ¿ t thõn lỏ cõy
-Xây dựng mô hình ánh giá tác dụng cháng ông máu trên in vitro
-Nghiờn cứu tỏc dụng chỏng ụng mỏu trờn in vitro của cỏc dòch chiết thõn lá cây Gừng en thông qua các chỉ sá PT, APTT và TT; trong ó:
+ Chỉ sá PT (thời gian Prothrombin): Là chỉ sá ánh giá con ường ông máu ngo¿i sinh
+ Chỉ sá APTT (thời gian thromboplastin từng phần ược ho¿t hoá): Là chỉ sáánh giá con ường ông máu nái sinh
+ Chỉ sá TT (thời gian Thrombin): Là Chỉ sáánh giá con ường ông máu chung, thăm dò tác á t¿o thành fibrin
Thu huyết tương nghèo tiểu cầu (PPP) vào áng falcon vô khuẩn Chia
450 μL PPP vào mòi ỏng mỏu ó ược lo¿i s¿ch chất chỏng ụng Thờm 50 μL hòn hợp dung dòch thử vào mòi ỏng theo thứ tự sau và ủ trong vũng 5 phỳt:
-àng 1: 450 àL PPP và 50 àL dung dòch DMSO 0,1% (chứng õm)
-àng 2: 450 àL PPP và 50 àL dung dòch Heparin 0,2 IU/mL (chứng dương)
-àng 3,4,5,6: 450 àL PPP và 50 àL cỏc lo¿i dòch chiết (Mt, Et, Ea, Hx) nồng á 5 mg/mL
Tiến hành o chỉ sá PT, APTT và TT bằng máy ACL TOP500
Lặp l¿i thớ nghiệm 3 lần ứng với mòi lo¿i dòch chiết.
Ph°Âng phỏp phõn tớch sò liầu
Thí nghiệm được lặp lại ba lần, dữ liệu biểu diễn bằng biểu đồ và phân tích ANOVA bằng phần mềm IBM SPSS Statistics 22 Kiểm định Tukey (p < 0,05) được dùng để xác định sự khác biệt có ý nghĩa giữa các nhóm xử lý.
K ¿ t qu Á
Tỏc d ā ng ch òng ng°ng tÁ p ti à u c Å u c ă a cỏc d ỏ ch chi ¿ t thõn lỏ cõy
Nghiên cứu sử dụng các cao chiết thân lá gừng với nồng độ 5 mg/mL, bao gồm ethyl acetat (Ea), methanol (Mt), hexan (Hx) và ethanol (Et).
3.1.1.1 Ành h°ởng căa cỏc phõn đo¿n dỏch chi¿t Gćng đen đ¿n tò lầ ng°ng tÁp tiÃu cÅu (%NTTC)
Phần trăm ngưng tập tiểu cầu của cỏc phõn o¿n dòch chiết thõn lỏ cõy Gừng en ược thể hiện trong biểu ồ 3.1
BiÃu đỏ 3.1: Ành hưởng của cỏc phõn o¿n dòch chiết thõn lỏ Gừng en ến tỉ lệ NTTC
(BT là mẫu trắng (không có cao chiết); Aspirin 0,1 mg/mL là chứng dương;
Nh ậ n xét: Theo biểu ồ 3.1, ở mức nồng á 5 mg/mL cho thấy cao chiết
Ethanol, methanol, hexan, và ethyl acetate ức chế kết tập tiểu cầu gây ra bởi ADP (p < 0,05) Hiệu quả ức chế này cũng được quan sát thấy khi sử dụng collagen làm chất gây ngưng tập tiểu cầu.
BT Mt Et Hx Ea Aspirin
Nghiên cứu cho thấy methanol và hexan làm giảm đáng kể sự ngưng tập tiểu cầu so với nhóm đối chứng (p < 0,05) Chỉ có cao chiết methanol ức chế ngưng tập tiểu cầu khi kích thích bằng ristocetin (p < 0,01).
Cao chiết Methanol ảnh hưởng lớn nhất (p < 0,05), cao chiết Hexan ảnh hưởng thấp nhất (p < 0,05) đến tỉ lệ ngưng tập tiểu cầu so với DMSO 0,1% So với Aspirin 0,1 mg/mL, cao chiết Methanol tăng ngưng tập tiểu cầu gấp 1,6 lần (ADP) và 48,5 lần (Collagen), nhưng giảm 2,2 lần (Ristocetin) (p < 0,05).
3.1.1.2 Ành h°ởng căa các phân đo¿n dách chi¿t thân lá cây Gćng đen đ¿n tòc động°ng tÁp tiÃu cÅu (Slope)
Tỏc ỏngưng tập tiểu cầu (Slope) của cỏc phõn o¿n dòch chiết thõn lỏ cõy
Gừng en ược trình bày trong biểu ồ 3.2
BiÃu đỏ 3.2: Ành hưởng của cỏc phõn o¿n dòch chiết thõn lỏ Gừng en ến tỏc á ngưng tập tiểu cầu (Slope)
(BT là mẫu trắng (không có cao chiết); Aspirin 0,1 mg/mL là chứng dương;
Cao chiết Methanol, Hexan và Ethyl acetate (nồng độ 5 mg/mL) làm giảm đáng kể sự kết tập tiểu cầu so với DMSO 0,1% (p < 0,05) khi kích thích bằng ADP và Collagen Kết quả này được thể hiện trong biểu đồ 3.2.
BT Mt Et Hx Ea Aspirin
30 các cao chiết gần như không làm giÁm tác á kết tập tiểu cầu so với chứng âm
Như vậy, trong các cao chiết thì cao chiết Methanol có Ánh hưởng lớn nhất
Cao chiết Hexan và Methanol đều ảnh hưởng đến sự ngưng tập tiểu cầu (p < 0,05), nhưng tác dụng của Methanol kém hơn đáng kể so với Aspirin 0,1 mg/mL (p < 0,05).
3.1.1.3 Ành h°ởng căa các phân đo¿n dách chi¿t thân lá Gćng đen đ¿n mąc độ ng°ng tÁp tiÃu cÅu (Area Under the aggregation curve– AUC) Ành hưởng của cỏc phõn o¿n dòch chiết thõn lỏ Gừng en ến mức ỏ ngưng tập tiểu cầu (AUC) ược trình bày trong biểu ồ 3.3
BiÃu đỏ 3.3: Ành hưởng của cỏc phõn o¿n dòch chiết thõn lỏ Gừng en ến mức á ngưng tập tiểu cầu (AUC)
(BT là mẫu trắng (không có cao chiết); Aspirin 0,1 mg/mL là chứng dương;
Nh ậ n xét: Theo biểu ồ 3.3, ở mức nồng á 5 mg/mL cho thấy khi sử dụng
Nghiên cứu cho thấy ADP, ethanol, methanol, hexan, và ethyl acetate đều làm giảm đáng kể khả năng ngưng tập tiểu cầu so với nhóm chứng (p < 0,05) Kết quả này khác biệt khi sử dụng collagen làm chất gây ngưng tập.
BT Mt Et Hx Ea Aspirin
Chỉ cao chiết Methanol giảm đáng kể sự ngưng tập tiểu cầu so với DMSO 0,1% (p < 0,05), trong khi các cao chiết khác hầu như không có tác dụng này khi dùng Ristocetin (p > 0,05).
Cao chiết Methanol ảnh hưởng lớn nhất, còn cao chiết Hexan ảnh hưởng ít nhất đến sự ngưng tập tiểu cầu so với DMSO 0,1% (p < 0,05) Tuy nhiên, so với Aspirin 0,1 mg/mL, hiệu quả của cao chiết Methanol phụ thuộc chất kích tập: kém hơn 1,4 lần với ADP, 1,3 lần với Collagen, nhưng lại cao hơn 1,4 lần với Ristocetin (p < 0,05).
Tỏc d ā ng ch òng đụn g mỏu c ă a cỏc d ỏ ch chi ¿ t thõn lỏ cõy G ćng đen
Ho¿t tớnh chỏng ụng mỏu in vitro của cỏc phõn o¿n dòch chiết thõn lỏ
Gừng en ược thể hiện trong biểu ồ 3.4
BiÃu đỏ 3.4: Ành hưởng của cỏc phõn o¿n dòch chiết thõn lỏ Gừng en ến thời gian ông máu (s)
(DMSO là chứng âm; Heparin 0,2 IU/mL là chứng dương; * : p < 0,05 so với mẫu trắng)
Kết quả nghiên cứu (Biểu đồ 3.4) cho thấy Heparin có tác dụng kéo dài thời gian đông máu trên cả con đường nội sinh, ngoại sinh và chung (p < 0,05) Ngược lại, ở nồng độ 5 mg/mL, các cao chiết không có tác dụng chống đông máu.
DMSO ME ET HX EA Heparin
34 sinh, ông máu ngo¿i sinh và ông máu chung do kết quÁ không khác biệt và không có ý nghĩa tháng kê so với chứng âm DMSO (p > 0,05).
Bàn lu Á n
Mô hình nghiên c ą u
3.2.1.1 Thÿ nghiầm chòng ng°ng tÁp tiÃu cÅu in vitro Đề tài này ã sử dụng phương pháp quang hác ểo á ngưng tập tiểu cầu (Light Transmission Aggregometry - LTA), ược phát triển bởi Born năm 1962 Đâyược coi là tiêu chuẩn vàng ểánh giá chức năng ngưng tập tiểu cầu và ược sử dụng phổ biến nhất hiện nay [11,30]
This study utilized ADP, collagen, and ristocetin as aggregating agents; other agents such as arachidonic acid are also commonly used.
Dung dịch DMSO 0,1% được sử dụng để kiểm soát ảnh hưởng của dung môi chiết xuất đến kết quả nghiên cứu Kết quả cho thấy DMSO 0,1% không ảnh hưởng đến kết quả ngưng tập tiểu cầu in vitro.
Nghiên cứu này so sánh khả năng chống ngưng tập tiểu cầu của các cao chiết thân lá gừng với Aspirin bằng cách đánh giá ba thông số: tỷ lệ phần trăm ức chế tiểu cầu (%I), diện tích dưới đường cong ngưng tập tiểu cầu (AUC), và độ dốc đường cong ngưng tập (S) Ba thông số này quan trọng trong đánh giá chức năng tiểu cầu và chẩn đoán các bệnh liên quan.
3.2.1.2 Thÿ nghiầm chòng đụng mỏu in vitro
Bài nghiên cứu đánh giá khả năng chống đông máu *in vitro* của các cao chiết dược liệu bằng máy đông máu ACL TOP500, dựa trên nguyên lý tán xạ ánh sáng khi hình thành sợi fibrin Các chỉ số PT, APTT và TT được đo lường để xác định thời gian đông máu Máy đo phân tích cường độ ánh sáng tán xạ, phản ánh quá trình đông máu và cho kết quả thời gian đông máu.
DMSO 0,1% được sử dụng làm đối chứng để loại trừ ảnh hưởng của dung môi đến kết quả nghiên cứu Kết quả cho thấy DMSO 0,1% không ảnh hưởng đến kết quả đông máu in vitro.
Cao chiết thân lá gừng được đánh giá hiệu quả chống đông máu bằng cách so sánh hoạt tính của nó với Heparin 0,2 IU/mL, một thuốc chống đông máu phổ biến.
K ¿ t qu Á nghiên c ą u
3.2.2.1 Tỏc dāng chòng ng°ng tÁp tiÃu cÅu in vitro căa cỏc cao chi¿t thõn lỏ cây Gćng đen
Nghiên cứu này đánh giá tác động của các dịch chiết thân, lá gừng en Việt Nam (Distichochlamys citrea) lên sự ngưng tập tiểu cầu in vitro Mô hình in vitro đơn giản, dễ thực hiện, phù hợp cho nghiên cứu tác dụng của dịch chiết gừng en.
Nghiên cứu này đánh giá tác dụng ức chế ngưng tập tiểu cầu *in vitro* của 4 loại cao chiết thân lá gừng (methanol, ethanol, hexane và ethyl acetat) ở nồng độ 5 mg/mL, sử dụng ADP, collagen và ristocetin làm chất gây ngưng tập.
Kết quÁ nghiờn cứu của ề tài bước ầu cho thấy dòch chiết thõn, lỏ cõy
Cao chiết Methanol từ gừng ức chế sự ngưng tập tiểu cầu hiệu quả in vitro, đặc biệt với ADP và Ristocetin, đạt tỷ lệ 29,36% và 21,31% thấp hơn đáng kể so với nhóm đối chứng (p < 0,05).
Nghiên cứu ảnh hưởng của mẫu thân và lá gừng khô (đã loại bỏ tinh dầu) đến tác dụng ức chế ngưng tập tiểu cầu cho thấy hiệu quả có thể bị giảm do mất đi các thành phần tinh dầu Đây là yếu tố quan trọng cần xem xét khi đánh giá tác dụng của cao chiết gừng.
Nghiên cứu sử dụng dung dịch DMSO 0,1% để hạn chế sai số và ảnh hưởng của nền mẫu, từ đó đánh giá chính xác tác dụng của các dịch chiết lên sự ngưng tập tiểu cầu.
Nghiên cứu so sánh tác động của các dịch chiết với Aspirin 0,1 mg/mL (chứng dương) lên quá trình ngưng tập tiểu cầu Kết quả cho thấy dịch chiết Methanol làm tăng khả năng ngưng tập tiểu cầu so với Aspirin, đặc biệt là với chất hoạt hóa ADP (tăng 1,6 lần) và Collagen (tăng 48,5 lần), nhưng lại kém hơn với Ristocetin (giảm 2,25 lần).
3.2.2.2 Tỏc dāng chòng đụng mỏu in vitro căa cỏc cao chi¿t thõn lỏ cõy Gćng đen
Nghiên cứu cho thấy ở nồng độ 5 mg/mL, các cao chiết không có tác dụng chống đông máu rõ rệt (p > 0,05) Cần nghiên cứu thêm hoặc tăng nồng độ chiết để khẳng định kết quả.
Nghiên cứu in vitro tác dụng chống đông máu và chống ngưng tập tiểu cầu của các chiết xuất (Methanol, Ethanol, Hexan, Ethyl acetat) từ thân lá Gừng (Distichochlamys citrea) ở nồng độ 5 mg/mL cho thấy kết quả đáng chú ý.
Cao chiết Methanol từ thân lá cây Gừng (Distichochlamys citrea) Việt Nam cho thấy khả năng chống kết tập tiểu cầu in vitro mạnh nhất, đặc biệt với chất gây ngưng tập ADP và Ristocetin.
Nghiên cứu đánh giá khả năng chống đông máu in vitro của các cao chiết thân lá cây Gừng en Việt Nam (Distichochlamys citrea) cho thấy ở nồng độ 5 mg/mL, không có tác dụng chống đông máu trên cả ba đường thử nghiệm.
H ¿ n ch ¿ c ă a nghiên c ą u
Nghiên cứu này còn hạn chế về số lượng mẫu dịch chiết và số lần lặp lại, chưa đảm bảo độ chính xác cao.
Nghiên cứu chưa tiến hành cho thuác thử ủ với máu toàn phần của các tình nguyện viờn và chưa ỏnh giỏ ược giỏ trò IC50
Nghiên cứu về hiệu quả và độ an toàn của cao chiết và hợp chất từ gừng Việt Nam cần được nghiên cứu chuyên sâu hơn để khẳng định kết quả Đây mới chỉ là khảo sát bước đầu.
Khóa luận này đạt được kết quả khiêm tốn do thời gian và kinh nghiệm hạn chế, chỉ là bước khởi đầu cho nghiên cứu hoạt tính chống ngưng tập tiểu cầu, chống ung thư của gừng Việt Nam Chúng em kiến nghị (Phần kiến nghị cần được bổ sung vào đây)
Nghiên cứu phân lập và xác định thành phần hóa học của dịch chiết thân lá cây Gừng en Việt Nam (Distichochlamys citrea) để thu được các hợp chất tinh khiết, nhằm tái đánh giá tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu và chống đông máu của chúng.
Nghiên cứu hoạt tính sinh học của thân lá cây Gừng en Việt Nam (Distichochlamys citrea), bao gồm khả năng kháng khuẩn, kháng nấm, kháng ung thư và tác dụng gây độc tế bào.
Nghiên cứu *in vitro* hoạt tính chống ngưng tập tiểu cầu và chống đông máu của các dịch chiết từ các bộ phận khác nhau của cây gừng (Distichochlamys citrea) tại Việt Nam.
TÀI LIặU THAM KHÀO Tài liÇu Ti¿ng ViÇt
1.Bá môn huyết hác truyền máu - Trường ¿i hác Y Hà Nái (2006), Bài giảng huyết học truyền máu - Sau đại học, Nhà xuất bÁn Y hác, tr 267-270
2.Bá môn Dược cổ truyền (2017),