Luận án tiến sĩ Sinh học: Nghiên cứu tạo và phân tích biến đổi di truyền chủng vi-rút PRRS nhược độc làm vắc-xin

.451.4.1 Sự can thiết và cơ sở khoa học của nghiên cứu đặc tính sinh học củachủng gốc PRRSV BG8 nhằm tạo chủng nhược độc làm vắc-xin phòng bệnh PRRS tại Việt Nam 142 Sự cân thiết và cơ s

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN

BÙI ANH THY

LAM VAC-XIN

LUẬN ÁN TIEN SĨ SINH HOC

TP Hồ Chí Minh - Năm 2024

ĐẠI HỌC QUOC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN

NGHIÊN CỨU TẠO VA PHAN TÍCH BIEN DOI

DI TRUYEN CHUNG VI-RÚT PRRS NHƯỢC ĐỘC

LAM VAC-XIN

Ngành: Di truyền học

Mã số ngành: 62420121

Phản biện 1: PGS TS DO TIỀN DUY

Phan bién 2: PGS TS NGO TH] HOA

Phan bién 3: TS NGUYEN THANH LAM

Phan biện độc lập 1: TS ĐOÀN THỊ THANH HƯƠNG

Phản biện độc lập 2: TS ĐÀO HUY MẠNH

NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC

1 GS TS TRAN LINH THƯỚC

2 TS TRAN XUAN HANH

TP Hé Chi Minh — Nam 2024

LỜI CAM ĐOAN

Tôi cam đoan luận án tiến sĩ ngành Di truyền học, với đề tài Nghiên cứu tạo

và phân tích biến đối di truyền chúng vi-rút PRRS nhược độc làm vắc-xin làcông trình khoa học do Tôi thực hiện dưới sự hướng dẫn của GS TS Trần LinhThước và TS Trần Xuân Hạnh

Những kết quả nghiên cứu của luận án hoàn toàn trung thực, chính xác vàkhông trùng lắp với các công trình đã công bố trong và ngoài nước

Nghiên cứu sinh

Bùi Anh Thy

LỜI CẢM ƠN

Con xin thành kính biết ơn công lao sinh thành dưỡng dục của Bố Mẹ Bố

Mẹ là nguồn động lực giúp con vượt qua những khó khăn, thử thách trong cuộc đời

Để hoàn thành luận án, ngoài sự có gắng của bản thân, tôi đã nhận được sựgiúp đỡ tận tình, hỗ trợ của nhiều cá nhân và tập thé trong suốt quá trình nghiên

cứu, học tập.

Tôi xin thành kính ghi ơn GS TS Trần Linh Thước và TS Trần Xuân Hạnh

đã động viên, tận tình hướng dẫn và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình công tác, học

tập, thực hiện và hoàn thành luận án này.

Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Ban Lãnh đạo đơn vị, Ban Lãnh dao Cong

ty Cổ phan Thuốc thú y Trung ương NAVETCO đã đồng ý và tạo điều kiện về thờigian, cơ sở vật chất dé tôi được học tập, nghiên cứu thực hiện luận án này

Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến GS TS Lê Thanh Hòa và các anh chị

em tại Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam

đã đồng hành, giúp đỡ tôi nghiên cứu thực hiện đề tài này

Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trường Đại học Khoa học tự

nhiên Thanh phố Hồ Chí Minh, Đại học Quốc gia - Hồ Chí Minh, quý Thay Côgiáo Bộ môn Di truyền học, Khoa Sinh học, và Phòng đào tạo sau đại học đã giảngđạy, truyền đạt kinh nghiệm, kiến thức và tạo điều kiện thuận lợi cũng như những

hỗ trợ khác đề tôi hoàn thành khóa học

Tôi xin chân thành cảm ơn các anh chị em trong Bộ môn Hóa Sinh (Sinh họcphân tử), đơn vị đã đồng hành, động viên và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học

tập, nghiên cứu và thực hiện đề tài

Tôi xin chân thành cảm ơn TS Chris J Morrissy thuộc Phòng thí nghiệm

Australian Animal Health Laboratory — CSIRO, đã cung cấp tế bảo trong nghiên

cứu này.

Tôi xin gửi lời cảm ơn và lời yêu thương sâu sắc đến gia đình đã luôn ủng

hộ, động viên tôi trong công tác, học tập và hoàn thành luận án.

TRANG PHU BIA

LOI CAM DOAN

LOI CAM ON

CHƯƠNG I TÔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Hội chứng rồi loạn sinh sản và hô hap ở heo (PRRS)

1.1.1 Khái niệm

1.12 Một số đặc điêm dịch tê học của bệnh PRRS trên thê giới

1.1.3 Một số đặc điểm dịch té học của bệnh PRRS tại Việt Nam

1.2.6 Đa dạng di truyền ở các protein của PRRSV

1.2.7 Đặc điểm nuôi cấy v

1.2.8 Quá trình xâm nhập, nhân lên trong tê bào chủ

1.2.9 Nghiên cứu về biến đổi di truyền của PRRSV trong và ngoài nước

1.3 Vắc-xin phòng bệnh PRRS

1.3.1 Các dạng vắc-xin phòng bệnh PRRS

1.3.2 Các loại vắc-xin phòng bệnh PRRS sử dụng tại Việt Nam

1.3.3 Các tiêu chi đánh giá vắc-xin .42

1.3.4 Các nghiên cứu liên quan đến vắc-xin PRRS tại Việt Nam 44

1.4 Co sở khoa học và thực tiễn các vấn dé được nghiên cứu của luận án .451.4.1 Sự can thiết và cơ sở khoa học của nghiên cứu đặc tính sinh học củachủng gốc PRRSV BG8 nhằm tạo chủng nhược độc làm vắc-xin phòng bệnh

PRRS tại Việt Nam

142 Sự cân thiết và cơ sở khoa học của nghỉ cứu phân tích bi

truyền ở chúng PRRSV nhược độc

143 Sự cân thiết và cơ sở khoa học của nghiên cứu phân tích tính ôn định

kháng nguyên của chủng nhược độc và độ tương đông với các chủng PRRSV

90

ính an toàn, đặc

khác dựa trên trình tự ORFS và protein GPS

1.4.4 Sự can thiết và cơ sở khoa học của nghiên cứu đánh gì

tính sinh miễn dich của chúng nhược độc BG8-P95 theo tiêu chuẩn chủng giống

+50 52

lam vắc-xin phòng bệnh PRRS

CHƯƠNG 2 NOI DUNG - VAT LIEU - PHƯƠNG PHÁP

2.1 Nội dung - So đồ thực hiện các nội dung nghiên cứu 52

2.1.1 Nội dung 322.1.2 Sơ đỗ thực hiện các nội dung nghiên cứu 52

2.2 Nguyên vật liệu, dụng cu, thiết 542.2.1 Ching vi-rút, dòng tế bào, động vật thí nghiệm 542.2.2 Hóa chất và các sinh phẩm 55

2.2.3 Dụng cụ, thiết bị 56

2.3 Phương pháp 57 2.3.1 Hoạt hóa, nuôi cay và xác định mật độ tế bào MARC-145 57

2.3.2 Tiếp truyền PRRSV trên dòng tế bào MARC-145 582.3.3 Xác định hiệu giá PRRSV trên tế bào MARC-145 592.3.4 Xác định liều lượng vi-rút gây nhiễm trên tế bào 15D

2.3.5 Xây dựng đường cong sinh trưởng của vi-rút theo thời gian thu hoạch 60

2.3.6 Thu nhận bộ gen PRRSV 60

2.3.8 Thu nhận thư viện bộ gen và gửi giải trình tự toàn bộ gen PRRSV 61

2.3.9 Phương pháp tiếp nhận và đánh giá chất lượng chuỗi nucleotide sau khi

giải trình tw

2.3.10 Phân tích kêt quả giải trình tự gen và xây dựng cây phả hệ

2.3.11 Xác định tốc độ đột biến trên chuối trình tự nucleotide/ amino aeid 61

2.3.12 Phương pháp chăm sóc và theo dõi heo thí nghiệm

2.3.13 Phương pháp đánh giá khả năng gây bệnh, độc lực vi-rút trên heo thí

68 nghiệm

2.3.14 Điều chê vac-xin thử nghiệm

2.3.15 Kiểm tra độ thuần khiết của vắc-xin

2.3.16 Đánh giá tính an toàn và hiệu lực của văc-xin thử nghiệm trên heo thí

nghiệm _ .71 2.3.17 Đánh giá tính an toàn và đặc tính sinh miên dịch của văc-xin thử nghiệm

trên đàn heo nuôi thực địa -Ö.14 2.3.18 Các phương pháp huyết thanh hoc soi TỔ

2.3.19 Kỹ thuật Realtime RT-PCR phát hiện PRRSV 76

2.3.20 Phương pháp mổ khám kiểm tra bệnh tích đại thể ở heo 162.3.21 Xử lý thong kê 77

CHƯƠNG 3 KET QUA - ĐÁNH GIA BAN LUẬN

3.1 Khao sát đặc tinh sinh học của chủng gốc PRRSV BG8 nhăm tạo chủng nhược

độc băng phương pháp tiêp truyền trên tê bào MARC-145

3.1.1 Đặc trưng di truyền của chủng góc PRRSV BG8

3.1.2 Đặc điển nhân lên của chủng PRRSV BG8 trên tế bào MARC-145 82

3.1.3 Hiệu giá vi-rút qua các đời tiếp truyền ching PRRSV BG8

3.1.4 Đánh giá độc lực của các chủng vi-rút qua các đời nuôi tiếp truyền 87

3.1.5 Khả năng gây đáp ứng miễn dịch sinh kháng thé của chủng PRRSV nhược

độc = )

3.2 Phân tích biên đôi di truyên ở chủng PRRSV qua các đời nuôi tiêp truyền 93

3.2.1 Thu nhận thư viện bộ gen và giải trình tự toàn bộ gen các chủng PRRSV

3.2.2 Biến đổi nucleotide và amino acid trên toàn bộ gen của chủng PRRSV

3.3 Phan tich tinh ồn định protein kháng nguyên GP5 của chủng nhược độc

BG8-P95 và độ tương đông với các chủng PRRSV khác dựa trên trình tự ORFS và

GPS sss LAT

3.3.1 Thu nhận ORFS và giải trình tự ving gen ORFS mã hóa glycoprotein

BG8 qua quá trình tiếp truyén

3.2.4 Phân tích so sánh đặc diém đột biên amino aci

cường độc/ nhược độc và xác định đột biến lên quan đến tính nhược độc

kháng nguyên GP5 của chủng PRRSV BG8 qua các đời tiếp truyền

3.3.2 Đặc trưng di truyền của chủng nhược độc qua tiếp truyền

3.3.3 Đột biến nucleotide trên ORFS va amino acid trên GPS trong quá trình

„121

nuôi tiếp truyền 5

3.3.4 Độ tương dong về trình tự ORFS va GPS giữa các đời tiếp truyền chủng

BG8-P95 với các chủng PRRSV thực địa và các chủng PRRSV vắc-xin tại Việt

Nam Fores oa „126

3.3.5 Đặc điểm biến đổi dau C của GPS ở chủng nhược độc BG8-P95 127

3.4 Đánh giá tính an toàn và đặc tính sinh miễn dịch của chủng nhược độc

BG8-P95 theo tiêu chuân chủng giông làm vắc-xin

3.4.1 Kiém tra cảm quan vắc-xin

3.4.2 Độ thuần khiết của chủng nhược độc BG8-P95 làm v

3.4.3 Tính an toàn của vắc-xin chủng nhược độc BG8-P95 trên heo thí

nghiệm

dịch sinh kháng th 3.44 Đáp ứng mic

xin khác nhau

3.4.5 Xác định hiệu giá kháng thê theo thời gian sau khi

3.4.6 Đánh giá khả năng phòng bệnh của vắc-xin bằng công cường độc vớichủng PRRSV độc lực cao trong điều kiện thí nghiệm

3.4.7 Đánh giá độ an toàn của vắc-xin nhược độc từ chủng BG8-P95 trên đàn

heo nuôi thực địa 147 3.4.8 Hiệu quả phòng bệnh của vắc-xin PRRS chủng BG8-P95 trên thực địa 149

độc bằng phương pháp tiếp truyền trên tế bào MARC-14.

thu hoạch từ quá trình nuôi tiếp truyé

dong với các chủng PRRSV khác dựa trên trình tự ORFS và GPŠ l563.5.4 VỀ tính an toàn, đặc tính sinh miễn dịch của chủng nhược độc BG8-P95theo tiêu chuẩn chủng giống làm vắc-xin phòng bệnh PRRS

CHƯƠNG 4 KET LUẬN - DE NGHỊ

4.1 KET LUẬN

4.2 DE NGHỊ a

DANH MUC CONG TRINH CUA LUAN AN

TAI LIEU THAM KHAO

PHU LUC.

Base pair Cytopathic effect

Deoxyribonucleic acid

Deoxyribonucleotide triphosphate

Day post challenge

Day post inoculation Day post vaccination

Enzyme linked immunosorbent

assay

et alii

Glycoprotein (2,3,4,5) Kilobase

KiloDalton Identity Immunoperoxidase monolayer

assay

Long Polymerase chain reaction

Membrane envelope protein African green monkey kidney cell

Ngày sau công cường độc

Ngày sau gây nhiễmNgày sau tiêm phòng vắc-xinPhản ứng miễn dịch hấp phụnối kết enzyme

cộng sự

Giống nhau

Phương pháp miễn dịch

peroxidase trên tế bào một lớp

Phản ứng tạo chuỗi dài do

polymerase

Protein màngDòng tế bào thận khi xanh

Châu Phi

Hệ số gây nhiễm

Nucleocapsid protein

Non-structural protein

Office International des Epizooties/

World Organisation for Animal

Health

Optical density Open reading frame

Porcine alveolar macrophages

Papain-like cysteine proteinase

Polymerase chain reaction

polyprotein (1a, lab) Porcine reproductive and respiratory syndrome

RNA-dependent RNA polymerase.

Restriction fragment length

polymorphism

Ribosomal frameshift Ribonucleic acid

Reverse transcriptase Reverse transcription - polymerase

chain reaction

subgenome RNA subgenomic mRNA

Structural protein 50% Tissue culture infectious dose

Vi-rút sống nhược độc

Protein màng nhân

Protein phi cấu trúc

Tổ chức Sức khỏe Động vậtThế giới

Mật độ quang Khung đọc mở

Đại thực bào phế nang heo

Phản ứng tao chuỗi do

Polymerase

Hội chứng rối loạn sinh sản và

hô hap trên heo

Đa hình chiều dài của các phân

đoạn DNA dựa trên điểm cắt

TMB 3.3',5,5' - tetramethylbenzidine

TLTK Tai liệu tham khảo.

UTR Untranslated region Ving không dịch mã

VN Việt Nam

DANH MỤC HÌNH ẢNH

Hình 1.1 Bản đồ các quốc gia trong khu vực Châu Á có dịch bệnh PRRS do chủng

vi-rút độc lực cao gây ra.

Hình 1.2 Con đường lan truyền dịch bệnh PRRS từ miền Bắc đến miền Nam Việt

10

ll

12 13 3 14

Hình 1.4 Các thành viên trong bộ Midovirales.

Hình 1.5 Bảng phân loại PRRSV dựa trên trình tự ORF5

Hình 1.6 Hình dạng PRRSV dưới kính hiển vi điện tử

Hình 1.7 Ảnh chụp hạt PRRSV bằng phương pháp chụp t lớp tia X.

Hình 1.8 Các protein cấu trúc trên màng và lõi nhân PRRSV

Hình 1.9 Hệ gen PRRSV và các protein được tạo ra qua quá trình phiên mã và dịch

Hình 1.15 Chức năng và câu trúc domain của protein GP5 ở chủng PRRSV thuộc

Hình 1.16 Protein ORFS5a của chủng VR-2332

Hình 1.17 Sự xâm nhiễm của PRRSV vào tế bào dưới kính hiền vi điện tử

Hình 1.18 Quá trình tổng hợp RNA mach âm trên toàn bộ gen của PRRSV 29Hình 1.19 Sinh tổng hợp sgRNA

Hình 1.20 Chu trình xâm nhiễm và nhân lên của PRRSV

Hình 2.1 Tóm tắt nội dung nghiên cứu

Hình 2.2 Sơ đồ bó trí thực hiện PCR/LPCR nhân bản 5 phân đoạn gen thành phầncủa bộ gen để giải trình tự toàn bộ gen PRRSV 62Hình 2.3 Mô tả thiết kế thí nghiệm đánh giá khả năng gây bệnh, độc lực và tính

sinh miễn dịch của heo thí nghiệm 60

Hình 2.4 Mô tả thiết kế thí nghiệm đánh giá hiệu lực, khả năng phòng bệnh của

vắc-xin trên heo thí nghiệm .74

Hình 3.1 Cây pha hệ xây dựng dựa trên trình ty nucleotide mã hóa GP5 của 96 chủng PRRSV 80

Hình 3.2 Biểu hiện CPE ở tế bào MARC-145 sau khi được gây nhiễm chủng

PRRSV BG8 sau 96 giờ —

Hình 3.3 Hiệu giá vi-rút theo hệ sô MOI và thời gian thu hoạch của chủng BG8 84

Hình 3.4 Đường cong sinh trưởng của chủng PRRSV BG8 ở tế bào MARC-145

.85

Hình 3.5 Hiệu giá vi-rút trung bình của chủng PRRSV BG8 sau mỗi 5 đời tiếp

truyền (P1-P95) ở tế bao MARC-145 86Hình 3.6 Biểu đồ thân nhiệt heo sau khi nhiễm vi-rút ở 5 lô thí nghiệm BG8-PI,BG8-P50, BG8-P75, BG8-P95 và lô đối chứng +88Hình 3.7 Biểu đồ thân nhiệt heo sau khi công cường độc ở 5 lô thí nghiệm BG8-

PI, BG8-P50, BG8-P75, BG8-P95 và lô đối chứng +90

Hình 3.8 Bệnh tích phôi heo ở các lô thí nghiệm Ol

theo thời gian thu hoạch.

Hình 3.9 Biểu đồ đáp ứng miễn dich sinh kháng thé ở heo sau khi gây nhiễm

Hình 3.12 Vị trí biên đôi amino acid trên NSPI (A) và NSP4 (B)

Hình 3.13 Vị trí biến đổi amino acid trên NSP9 (A) và NSP10 (B)

Hình 3.14 Vị trí biến đổi amino acid trên GP2 (A) và E (B)

Hình 3.15 Vị trí biến đổi amino acid trên GP3

Hình 3.16 Vị trí biến đổi amino acid trên GP4

Hình 3.17 Vi trí biến đổi amino acid trên GPS

Hình 3.18 Vị tri epitope miễn dich (151-165 va 161-174) trên M .

Hinh 3.19 Vi tri biến đổi amino acid trên N

Hình 3.20 Các vị trí thay đổi amino acid đáng lưu ý trên GP3 (A) và trên GP5 (B)

wee 16

ở 9 cặp chủng được so sánh dựa trên phần mềm GeneDoc2.7

Hình 3.21 Sản phẩm PCR nhân bản đoạn gen ORFS của chủng PRRSV BG8 quaquá trình nuôi tiếp truyền

Hình 3.22 Cây pha hệ xây dựng dựa trên trình tự amino acid GP5 của 54 chủng PRRSV trong phân dòng (sublineage) 8.7 của kiêu gen II

Hình 3.23 So sánh trình tự gen ORFS của các chủng PRRSV

Hình 3.24 So sánh trình tự amino acid trên GPS5 của các chủng PRRSV 24

Hình 3.25 So sánh trình tự amino acid đầu C của GP5 ở các chủng PRRSV nghiêncứu với 8 cặp chủng PRRSV cường độc/nhược độc làm vac-xin trên thế gidi 128Hình 3.26 Kết quả điện di sản phẩm PCR, kiểm tra tạp nhiễm Mycoplasma từ cácmẫu vắc-xin thử nghiệm 130Hình 3.27 Diễn biến thân nhiệt của heo thí nghiệm sau khi tiêm vac-xin 16 01 131Hình 3.28 Đáp ứng miễn dịch sinh kháng thể ở heo thí nghiệm sau khi tiêm cácliều vắc-xin khác nhau 35

Hình 3.29 Hiệu giá kháng thê ở heo sau khi tiêm vắc-xin được xác định bang phương pháp IPMA

Hình 3.30 Diễn biến thân nhiệt của heo thí nghiệm ở 2 lô vắc-xin sau công cường

Hình 3.31 Dap ứng kháng thê ở heo thí nghiệm ở 2 lô vac-xin sau công cường độc

bằng phương pháp ELISA(A), và IPMA (B)

Hình 3.32 Diễn biến tăng trọng của heo thí nghiém

Hình 3.33 Phỏi heo thí nghiệm sau công cường độc

DANH MỤC BANG BIEU

Bảng 1.1 Chức năng các protein phi cấu trúc ở PRRSV

Bảng 1.2 Chức năng các protein cầu trúc ở PRRSV

Bang 1.3 Vị trí các epitope miễn dịch trên các protein cau trúc .

Bảng 1.4 Sự khác biệt về các sản phẩm protein được tạo ra từ các khung đọc mở

(ORF2-ORF7) giữa các chủng PRRSV Type 1 va Type 2 „ 26

Bang 1.5 Thông tin của các cặp chủng cường độc gốc/chủng vắc-xin nhược độc thuhoạch sau tiếp truyền đã được công bó

Bảng 1.6 Các loại vắc-xin PRRS thế hệ mới

Bảng 2.1 Trình tự các cặp môi được thiết kế để nhân bản 25 sản phẩm PCR dùng

để giải trình tự toàn bộ hệ gen của chủng PRRSV BG8 162Bang 2.2 Bồ tri thí nghiệm đánh giá kha năng gây bệnh, độc lực vi-rút trên heo 68Bảng 2.3 Bồ trí thí nghiệm đánh giá tính an toàn và khả năng đáp ứng sinh miễndich của vắc-xin trên heo thí nghiệm 2)Bảng 2.4 Bồ trí thí nghiệm xác định khả năng đáp ứng miễn dịch tạo kháng thể của

.73

vắc-xin trên heo thí nghiệm theo thời gian

Bang 2.5 Bồ trí thí nghiệm đánh giá hiệu lực của vắc-xin trên heo thí nghiệm bằng

Bang 3.3 Kết quả khảo sát độc lực các chủng PRRSV thông qua

phương pháp công cường độc

nuôi tiêp truyện từ PI

lâm sàng khi gây nhiễm PRRSV thực nghiệm.

Bảng 3.4 Kết quả triệu chứng lâm sàng sau khi công cường độc của các lô thínghiệm gây nhiễm chủng PRRSV qua các đời tiếp truyền 289Bang 3.5 Bénh tich dai thé trên heo ở các lô thí nghiệm đánh giá độc lực vi-rút 90

Bang 3.6 Vị tri nucleotide va amino acid thay đổi của chủng PRRSV (từ BG8-P1

đến BG8-P95) „05

Bảng 3.7 Tốc độ đột biến nucleotide và amino acid của chủng BG8-P95 so vớichủng gốc BG8-P1 09

Bang 3.8 So sánh đột biên amino acid trên 19 protein của PRRSV giữa 9 cặp

chủng cường độc gốc và chủng vắc-xin nhược độc thu hoạch sau tiếp truyền 103Bảng 3.9 Các đột biến amino acid trên protein GP3 và GP5 ở 9 cặp chủng cường

„116

Bảng 3.10 Độ tương đồng trình tự nucleotide của ORFS và trình tự amino acid của

GPS ở các chủng PRRSV.

độc/ nhược độc khảo sat

Bảng 3.11 Tinh trạng của heo thí nghiệm sau khi tiêm vac-xin

PCR .

Bảng 3.13 Trọng lượng va tăng trọng bình quân hăng ngày của heo thí nghiệm 133

Bảng 3.14 Đánh giá đáp ứng miễn dịch sinh kháng thể trên heo thí nghiệm sau khitiêm vắc-xin với các liều khác nhau

Bảng 3.15 Xác định hiệu giá kháng thê theo thời gian băng phương pháp

IPMA anes 136

Bảng 3.16 Các triệu chứng lâm sàng ở heo thí nghiệm sau công cường độc 139

Bảng 3.17 Hiệu quả phòng bệnh của 2 lô vắc-xin sau khi công cường độc 139Bảng 3.18 Diễn biến kháng thể sau công cường độc thông qua xác định chỉ sốkháng thể bằng ELISA và hiệu giá kháng thể.bằng IPMA

Bảng 3.19 Phát hiện PRRSV trong dịch mũi sau công cường độc bang Realtime

Bảng 3.20 Tăng trọng bình quân hăng ngày của heo thí nghiệm

Bảng 3.21 Bệnh tích đại thể trên cơ quan nội tạng của heo thí nghiệm ở lô

vắc-xin 01

Bảng 3.22 Bệnh tích đại thê trên cơ quan nội tạng của heo thí nghiệm ở lô

vắc-xin 02

Bảng 3.23 Số lượng heo được tiêm phòng nhằm đánh giá tính an toàn và hiệu quảvắc-xin trên thực địa „147Bảng 3.24 Số lượng heo nái được tiêm phòng nhằm đánh giá tính an toàn của

Bảng 3.27 Kết quả đánh giá đáp ứng miễn dịch trên nhóm heo thịt ở các trại chăn

chăn nuôi thực địa bằng phương pháp ELISA

nuôi thực địa bằng phương pháp ELISA wee SL

MO DAU

Hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở heo (Porcine reproductive and

respiratory syndrome, PRRS) là bệnh truyền nhiễm nguy hiểm, với các đặc điểm:rối loạn sinh sản như sảy thai ở heo nái; suy giảm đường hô hấp, đặc biệt ở heo búsữa; và xuất hiện các nốt chấm đỏ trên tai ở mọi lứa tuổi (nên còn được gọi là "bệnh

tai xanh") [1].

Tác nhân gây bệnh là vi-rút gây hội chứng rồi loạn sinh sản và hô hấp ở heo(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV), thuộc giống

Betaarterivirus (Arterivirus), họ Arteriviridae, bộ Nidovirales Các đặc tinh sinh

học của PRRSV đã và đang được nghiên cứu từ khi bệnh bắt đầu xuất hiện trên thế

giới cho đến nay do vi-rút luôn luôn biến đổi về cấu trúc đi truyền, đồng thời có khảnăng tái tổ hợp di truyền đề tăng khả năng gây bệnh Từ 2 chủng gốc đại diện cho 2

kiêu gen (Lelystad thuộc Type I và VR-2332 thuộc Type 2), PRRSV đã hình thành

vô số biến chủng khác nhau theo các vùng địa lý khác nhau sau hơn ba mươi nămxuất hiện và tiến hóa Chính sự khác biệt về tính di truyền và sự đa dạng về tínhkháng nguyên, khả năng biến đổi cấu trúc kháng nguyên của vi-rút đã làm tăngthêm những khó khăn trong việc sản xuất vắc-xin phòng bệnh [1]

Hiện bệnh PRRS là vấn nạn của nhiều quốc gia có ngành chăn nuôi heo trênthế giới, trong đó có Việt Nam Kể từ khi chủng PRRSV độc lực cao xuất hiện đầutiên tại Trung Quốc vào năm 2006 cho đến nay, dịch bệnh heo tai xanh diễn biến rấtphức tạp, và bùng phát ngày càng nghiêm trọng ở hầu hết các nước trên thế giới,

nhất là ở Trung Quốc và Việt Nam, với hơn 26 tỉnh thành ở Việt Nam xảy ra dịch

bệnh heo tai xanh [2] Trong khi đó, vắc-xin đang lưu hành trong nước, một số ít làvắc-xin nội địa, đa số là vắc-xin ngoại nhập nên giá thành cao, không chủ độngđược nguồn cung và được điều chế từ các chủng PRRSV nước ngoài, khác biệt vềđặc tính di truyền so với các chủng PRRSV thực địa Ngoài ra, do PRRSV luônluôn biến đổi không ngừng và có khả năng tái tổ hợp di truyền, tạo nhiều biếnchủng mới từ chủng gốc ban đầu Nếu từ các biến chủng vi-rút mới điều chế vắc-xin

vô hoạt, sẽ rút ngắn thời gian sản xuất vắc-xin; tuy vac-xin vô hoạt có tính an toàn

nhưng hiệu quả phòng bệnh kém do không ngăn cản được sự nhân lên của vi-rút.

Còn nếu điều chế vắc-xin nhược độc theo phương pháp truyền thống cấy truyền liêntục nhiều đời trên tế bào để giảm độc lực sẽ mắt rất nhiều thời gian, có khi 2-3 năm;

tuy nhiên, vắc-xin nhược độc vẫn được đánh giá cao vì mang lại hiệu quả phòng

bệnh cao cho heo hơn các loại vắc-xin khác Do đó, trong bối cảnh vắc-xin nội địacòn ít, việc thêm một sản phẩm vắc-xin mới, đặc biệt là vắc-xin nhược độc có ýnghĩa thực tiễn lớn, giúp giảm giá thành, chủ động được nguồn cung, tăng hiệu quảphòng bệnh trên heo Đồng thời, việc phân tích các biến đổi di truyền có liên quantính nhược độc của vắc-xin hướng đến nghiên cứu vắc-xin theo kỹ thuật di truyền

ngược là điều quan tâm, vừa làm giảm thời gian nghiên cứu chủng giống làm

vắc-xin, vừa mang lại tính an toàn và hiệu lực phòng bệnh cao cho heo.

Luận án “Nghiên cứu tạo và phân tích biến đổi di truyền chủng vi-rútPRRS nhược độc làm vắc-xin” được thực hiện với mục tiêu nghiên cứu tạo sảnphẩm vắc-xin mới, điều chế từ chủng vi-rút thực địa được nhược độc hóa bằngphương pháp nuôi cấy truyền trên tế bào; đồng thời phân tích các biến đổi di truyềnqua quá trình nhược độc đề củng có và cung cấp thêm các dữ liệu khoa học về thayđổi về di truyền liên quan đến tính nhược độc, tính sinh miễn dịch ở các chủng vi-

rút có tốc độ tiến hóa nhanh này

Dé hiện thực hóa mục tiêu này, trong giới han của luận án, các nội dung sau đây được nghiên cứu:

[1] Khảo sát đặc tính sinh học của chủng gốc PRRSV BG8 nhằm tao chung

nhược độc bằng phương pháp tiếp truyền trên tế bào MARC-145

[2] Phân tích biến đổi di truyền chủng PRRSV qua 95 đời tiếp truyền trên tế bào.[3] Phân tích tinh ồn định kháng nguyên của chủng nhược độc BG8-P95 va độtương đồng với các chủng PRRSV lưu hành tại Việt Nam và trên thế giới dựa trên

trình tự ORFS và protein GPS.

[4] Đánh giá tính an toàn, đặc tính sinh miễn dịch của chủng nhược độc

BG8-P95 theo tiêu chuẩn chủng giống làm vắc-xin phòng bệnh PRRS cho heo

Luận án có hai đóng góp mới chính sau đây:

(i) Bằng cách tiếp truyền 95 đời ở tế bào MARC-145, từ chủng PRRS BG8 thực

địa, tạo được thành công chủng PRRSV BG8-P95 nhược độc có tính an toàn, đặc

tính sinh miễn dịch, và có khả năng mang lại hiệu quả phòng bệnh cao cho heo Về

mặt thực tiễn, chủng PRRSV BG8-P95 nhược độc đáp ứng tiêu chuẩn chủng giống

làm vắc-xin, được ứng dụng điều chế sản phẩm vắc-xin mới phòng bệnh PRRS choheo cai sữa, heo thịt và heo nái tại Việt Nam, thay thế vắc-xin ngoại nhập

(ii) Phân tích so sánh các biến đổi di truyền của chủng PRRSV BG8-P95 được

nhược độc hóa từ chủng PRRSV BG8 cường độc thực địa tại Việt Nam với các cặp

chủng cường độc gốc - chủng nhược độc tương ứng làm vắc-xin trên thế giới, dự

đoán các đột biến liên quan đến tính nhược độc, đặc biệt là các đột biến trên protein

màng GP5 có vai trò quyết định tính kháng nguyên và khả năng đáp ứng miễn dichsinh kháng thể của các chủng PRRSV

Kết quả nghiên cứu của luận án góp phần cho sự hiểu biết khá đầy đủ về đặc

tính sinh học, tính sinh miễn dịch của chủng PRRSV lưu hành tại Việt Nam; bên

cạnh đó, luận án cung cấp các dữ liệu về biến đồi gen liên quan đến tính nhược độc,tính sinh miễn dịch ở các chủng PRRSV trong quá trình gây nhược độc bằngphương pháp tiếp truyền trên tế bào MARC-145 có giá trị tham khảo cho các

nghiên cứu vê chê tạo văc-xin nhược độc theo công nghệ mới.

CHUONG 1 TONG QUAN TAI LIEU

1.1 Hội chứng rối loạn sinh san và hô hấp ở heo (PRRS)

1.11 Khá

Hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở heo (Porcine Reproductive and

ệnh Respiratory Syndrome - PRRS), hay còn gọi là bệnh heo tai xanh, là một

truyền nhiễm nguy hiểm đối với heo ở mọi nòi giống, lứa tuổi, và được xếp vàonhóm B trong danh mục các bệnh của Tổ chức Sức khỏe Động vật Thế giới (World

Organisation for Animal Health - WOAH, tên gọi trước đây là OIE - Office

International des Epizooties) Các triệu chứng thường gặp bao gồm rối loạn sinhsản, sảy thai, thai chết lưu ở heo nai, heo mới sinh có tỉ lệ chết cao và các biểu hiệnrối loạn hô hap (sót, ho, khó thở ) đối với mọi lứa tuổi heo [3]

Bệnh được ghi nhận lần đầu tiên vào năm 1987 ở Mỹ Thời gian đầu do chưahiểu biết rõ ràng chính xác về tác nhân gây bệnh nên việc đặt tên bệnh chủ yếu dựavào những triệu chứng lâm sàng và bệnh tích; vì vậy, bệnh đã được gọi bằng nhiềutên khác nhau: Hội chứng hô hap và vô sinh ở heo (Swine infertility and respiratorysyndrome - SIRS), bệnh bí hiểm ở heo (Mystery swine disease - MSD), hội chứng

hô hấp và sảy thai ở heo (Porcine epidemic abortion and respiratory syndrome PEARS), hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở heo (Porcine reproductive and

-respiratory syndrome - PRRS), bệnh tai xanh trên heo (Blue ear disease) Năm

1992, OIE đã thống nhất tên gọi là Hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở heo

(PRRS) [3].

1.1.2 Một số đặc điểm dich tễ hoc của bệnh PRRS trên thế giới

Bệnh PRRS xuất hiện lần đầu tiên tại Mỹ vào năm 1987 [4], sau đó, lây lankhắp thế giới, đến Canada (1988), Nhật Bản (1989), Đức (1990), Hà Lan, Tây BanNha, Anh, Pháp (1991), Đan Mạch (1992), Triều Tiên, Phi-lip-pin (1993) Từnăm 1993, các đợt dich bệnh PRRS xuất hiện lan rong ở nhiều nước thuộc Châu Mỹ(Cộng hòa Dominica, Costa Rica, Colombia, Bolivia, Chile), Châu Âu (Thụy Điền,Ireland, Cộng hòa Séc, Bồ Đào Nha, Romania, Liên Bang Nga), và cả Châu Á(Trung Quốc, Việt Nam, Lào, Campuchia) do quá trình vận chuyền, nhập khẩu heo

nhiễm bệnh [5].

Năm 2006, nhóm chủng PRRSV độc lực cao xuất hiện và gây thiệt hại lớn

cho ngành chăn nuôi tại Trung Quốc, khiến 400.000 heo bị chết trong tổng số 2,12triệu heo nhiễm bệnh [5, 6], trong 8 tháng đầu năm 2007 đã xảy ra 826 đợt dịch

bệnh với 257.000 heo bị bệnh, 68.000 heo bị chết, phải tiêu hủy 175.000 heo [6]

Sau đó, nhóm chủng PRRSV độc lực cao tiếp tục lan sang các nước kháctrong khu vực Đông Nam Á như: Việt Nam, Campuchia, Lào, Thái Lan, Bhutan,

Malaysia, Singapore, Myanmar, và Philippin; rồi lây lan đến các nước Đông Á và

Bắc Á như Hàn Quốc, Nga Đến năm 2011, các nước Nhật, Triều Tiên, Indonesia

và các nước khác thuộc khu vực Châu Á-Thái Bình Dương bắt đầu xuất hiện chủng

PRRSV độc lực cao (Hình 1.1) [6, 7].

Hình 1.1 Bản đồ các quốc gia trong khu vực Châu Á có dịch bệnh PRRS do chủng vi-rút

độc lực cao gây ra (các nước màu vàng: nơi xảy ra dịch bệnh PRRS) [7].

Vào năm 2010, một nhóm chủng PRRSV mới xuất hiện khác biệt với nhóm

chủng gốc độc lực cao, được gọi là nhóm chủng PRRSV phân lập năm 2010, là tácnhân gây ra các trận dịch bệnh tại các tỉnh Giang Tây, Phúc Kiến, Quảng Đông,

Quảng Tây (Trung Quốc) [8] Năm 2013, nhóm chủng tương đồng với NADC30

(Genbank: JN654459) (Chủng NADC30 được phân lập đầu tiên tại Mỹ vào năm2008) xuất hiện và từ năm 2015 trở thành mối quan tâm hàng đầu của các nhà khoa

học do đặc điểm tái tổ hợp di truyền dẫn đến xuất hiện nhiều biến chủng Nhóm

chủng tương đồng với NADC30 có khả năng tái tổ hợp di truyền không chỉ trong

chủng PRRSV gốc độc lực cao, với các chủng vắc-xin (TJM, JXA1-P80 (Genbank:

FJ548853)), va với nhóm chủng Bắc Mỹ cổ điển (CH-la (Genbank: AY032626),

'VR2332 (Genbank: U87392)) Chính vì vậy, từ năm 2015 đến nay, nhóm chủng gốcđộc lực cao, nhóm chủng tương đồng với NADC30, và nhóm chủng trung gian

PRRSV trở thành nguồn lây bệnh PRRS chủ yếu Đến năm 2017, ngoài 3 nhóm

trên, còn có thêm nhóm chủng tương đồng với MN184 (Genbank: DQ176019), gây

ra các tran dich bệnh tại Trung Quốc, nhưng nhóm chủng tương đồng với NADC30

vẫn chiếm trên 60% [8, 9]

Tại Mỹ, RFLP (đa hình chiều đài của các phân đoạn DNA dựa trên điểm cắtcác enzyme giới hạn) được dùng làm cơ sở để phân biệt các chủng PRRSV ngoàithực địa với chủng vắc-xin VR2332 Giai đoạn 2014-2015, chủng PRRSV RFLP 1-

7-4 là nguyên nhân gây ra dịch PRRS [10, 11] Giai đoạn 2017-2019, ngoài chủng

PRRSV RFLP 1-7-4, có sự hiện diện số lượng lớn các chủng PRRSV RFLP 1-8-4

và 1-4-4 [11] Đến năm 2020-2021, 2 đợt dich bệnh PRRS lớn xảy ra tại Minnesota

và Iowa (Mỹ): đợt dịch thứ nhất, đỉnh điểm là cuối tháng 10 đến tháng 12/2020; đợtdịch thứ hai bắt đầu vào tháng 4 đến tháng 5/2021, do chủng PRRSV RFLP 1-4-4

gây ra Chung PRRSV RFLP 1-4-4 không phải là chủng mới, vì đã được phát hiện

trước đó vào năm 2006 [10] Theo Kikuti, từ giữa tháng 1/2020, trong số 175/190

trình tự được tìm thấy, có 172 trình tự là PRRSV RFLP 1-4-4 đến từ 154 trang trại

khác nhau bao gồm cả trại heo thịt và trại heo giống; 2 trình tự RFLP 1-4-3 và 1trình tự RFLP 1-7-4 Hơn 99% trình tự RFLP 1-4-4 đều nằm trong một nhánh củadong 1C; tuy nhiên, nhánh này chưa được tìm thấy trước năm 2020, nên đây là mộtnhánh PRRSV mới trong dòng 1C Hiện tai, nhiều chủng thuộc dong IC 1-4-4 đanglưu hành nhiều nơi tại Mỹ [10]

1.1.3 Một số đặc điểm dịch tễ học của bệnh PRRS tại Việt Nam

Ở Việt Nam, hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp xuất hiện lần đầu vàonăm 1997 [12] từ đàn heo nhập khâu từ Mỹ vào các tỉnh miền Nam, với 10/51 heo

giống có huyết thanh dương tính với PRRSV nhưng thời điểm đó chưa phát hiện 6

dịch lâm sàng [13, 14] Trong môi trường chăn nuôi phân tán và vận chuyển vật

nuôi không được kiểm soát chặt chẽ, với đặc tính lây lan rất nhanh, chỉ sau 10 năm,bệnh PRRS xuất hiện ở Việt Nam và trở thành dịch bệnh hàng đầu của ngành thú y.

Tại khu vực miền Đông Nam Bộ trong 3 năm 2003-2005, tỉ lệ nhiễm bìnhquân là 36,78%; trong số 130 mẫu dương tính, có đến 59,23% mẫu nhiễm chủng

Bắc Mỹ; 36,92% mẫu nhiễm ghép cả hai chủng Bắc Mỹ và Châu Âu; chỉ có 3,8%

mẫu nhiễm chủng Châu Âu [15] Trong các năm 2005-2007, tỉ lệ nhiễm PRRStrong các trại chăn nuôi công nghiệp hoặc ở các hộ gia đình tại 8 tỉnh thành, gồm

Tp HCM, Đồng Nai, Bình Dương, Tiền Giang, Long An, Tây Ninh, Bà Rịa-Vũng

Tàu và Khánh Hòa là 357/887 mẫu dương tính (chiếm 40,2%), và các chủngPRRSV thu được đều thuộc kiểu gen II [16]

Sự hiện diện của chủng độc lực cao từ Trung Quốc làm tình hình dịch bệnh

diễn biến trở nên phức tạp và nghiêm trọng hơn Trong năm 2007 xuất hiện 3 đợt:Dot 1, dịch bệnh bùng phát mạnh tại 7 tỉnh thành miền Bắc; đợt 2, dịch bệnh lây lan

ra ở 14 tỉnh; đợt 3, bệnh tái bùng phát tại Khánh Hòa, Cà Mau và Lạng Sơn với tỉ lệ

chết trên 24% (Hình 1.2) [2, 5, 17]

Nam 2008, Việt Nam xảy ra 2 đợt dịch bệnh PRRS: Dot 1, bệnh khởi phat tai

Hà Tĩnh, Thanh Hóa, Nghệ An, sau đó lan rộng trong 10 tỉnh thành; đợt 2, bệnh

PRRS xuất hiện tại 17 tỉnh; đợt 3, dịch bệnh xuất hiện và gây thiệt hại nặng tại

Thanh Hoá [19], tiếp đến là Quảng Trị, Thừa Thiên-Huế, Bà Rịa-Vũng Tàu [2]

Năm 2009, dịch bệnh tiếp tục xảy ra ở 13 tỉnh thành Năm 2010, dịch bệnhPRRS bắt đầu xuất hiện tại Hải Dương, rồi lây lan ra 16 tỉnh thành ở miền Bắc; còn

ở miền Trung và miền Nam, đợt dịch xảy ra đầu tiên tại Sóc Trăng, sau đó lan rộng

32 tỉnh thành [2].

Nói chung tại Việt Nam, từ năm 2007-2013, dịch bệnh PRRS có xu hướng

xảy ra hàng năm vào các tháng 3-5 ở các tỉnh phía Bắc và các tháng 7-9 ở các tỉnhphía Nam; trung bình tái bùng phát trên diện rộng hai năm một lần; trung bình mỗinăm có 25/100 xã nguy cơ có dịch PRRS [13] Từ 2016 đến 2019 cả nước không

xuất hiện dịch PRRS, nhưng tháng 10/2020 xuất hiện trở lại 6 dich PRRS tại Hà

Nam, Nghệ An.

Hình 1.2 Con đường lan tru én dịch bệnh PRRS từ n miền Nam Việt Nam.

Dịch bệnh xuất hiện ban dau tại ương (tháng 4/2007), roi dén Quảng Nam (tháng

6/2007) [16].

Các điều tra dịch tễ học cho thấy từ năm 2007 các biến chủng PRRSV lưu

hành tại Việt Nam gần như giống nhau hoàn toàn với chủng Trung Quốc có độc lực

cao, đều thuộc kiểu gen II [15, 19, 20] và khác biệt khá lớn so với chủng vắc-xin

BSL-PS100 (thuộc kiểu gen II) được dùng phổ biến ở Việt Nam, do vậy vắc-xin

BSL-PS100 không hiệu quả trong phòng bệnh heo tai xanh ở Việt Nam [21].

Nghiên cứu của Nguyễn Văn Cảm và cộng sự (2011), cho thấy tỉ lệ lưu hành

kháng thể kháng PRRSV trong các trại chăn nuôi tại 15 tỉnh, thành ở 3 miền Bắc,Trung, Nam trong năm 2011 là 87,6%; trong đó kháng thể PRRS kiểu gen II (dòng

Bắc Mỹ) lưu hành ở tat cả 15 tỉnh, thành, trung bình với tỉ lệ 75,1%; kháng thé

PRRS kiểu gen I (dòng Châu Âu) lưu hành ở 8/15 tỉnh, thành với tỉ lệ 7,6% [12]

Nghiên cứu của Nguyễn Ngọc Hải và cộng sự (2012) cho thấy các trại heo bịlây nhiễm PRRSV một cách rất phức tạp, với ba kiểu nhiễm PRRSV: Nhiễm 1 kiểu

gen II (dong Trung Quốc) (65,22%); nhiễm 1 kiểu gen II (dòng Bắc Mỹ cổ điền)

(32,60%); nhiễm 2 kiểu gen I và II (dòng Bắc Mỹ và dòng Châu Âu) (1,28%) Sự

đa dạng di truyền của các dòng PRRSV lưu hành ở nước ta gây nên sự phức tạp và

khó khăn không chỉ trong chẩn đoán mà cả trong việc áp dụng biện pháp tiêm

phòng, lựa chọn vắc-xin phòng bệnh PRRS phù hợp [22].

1.14 Triệu chứng lâm sàng và bệnh tích

Tất cả các giống heo ở các lứa tuổi khác nhau đều là vật chủ lây nhiễm rút, bao gồm heo sau cai sữa, heo choai và heo nái mang thai, và có chung các dấuhiệu triệu chứng lâm sàng nhưng với mức độ khác nhau Tỉ lệ nhiễm bệnh 50-100%, và tỉ lệ chết 20-100% tùy theo độc lực vi-rút, lứa tuổi heo Về mặt độc lực,

vi-có 2 dạng chính là dạng cô điển và dạng biến thể Dạng cô điển: Có độc lực thấp, ởdạng này khi heo nhiễm bệnh thì có tỷ lệ chết thấp, chỉ từ 1-5% trong tổng đàn.Dạng biến thể độc lực cao: Gây nhiễm và chết nhiều heo, tỉ lệ chết 20-100%, caonhất là heo con mới sinh (100%), tiếp đến heo choai (70%), heo sau cai sữa (20%),

và heo nái mang thai (10%) [2, 5, 6].

Các biểu hiện lâm sàng thường gặp ở heo khi mắc hội chứng rối loạn sinhsản và hô hấp là sốt cao (40,0-42,0%C), giảm ăn, rồi bỏ ăn, da man đỏ, thở khó, ho,chảy nước mũi, tai xanh, táo bón hoặc tiêu chảy Khi bệnh nặng, heo thường sốt caokéo dai, cơ thể run từng cơn liên tục, thở rit Heo ốm lâu ngày có thẻ trạng gay yếu,người trắng bệch, thường nằm tụ lại thành bay trong góc chuồng, lười vận động,ngủ li bì, hô hấp rất khó khăn, và đi đứng xiêu vẹo Ngoài ra, heo bệnh còn kèmtheo các triệu chứng sưng khớp, sưng tấy cơ quan sinh dục [3, 23, 24, 25, 26]

Bệnh tích biến đổi chủ yếu ở phổi Thuỳ phổi bị nhiễm PRRSV có màu đỏ

xám, có mủ và chắc đặc (nhục hoá) (Hình 1.3) [24] Bề mặt cắt ngang của thuỳ phổilồi ra, khô và xuất hiện những nét loét trên các cơ quan nội tang [27] Ngoài ra, phối

xuất huyết tạo ra các mảng loang 16, hình dạng phổi bẹp áp sát vào khung sườn

[28].

Màng bao tim có hiện tượng viêm dính, xoang ngực có chứa nhiều dịch trangđục Hình thái tim bep, cơ tim nhão Do phôi bị tốn thương trong khi nhu cầu oxycủa co thé heo luôn ở mức cao, cho nên tim phải làm việc quá sức, tạo ra các bệnhtích nêu trên Lach heo bệnh thường dai chắc, san sùi và tím tái Thận xuất huyếtlắm chấm giống đầu đỉnh ghim; khi bổ đôi thận, các bé thận xuất huyết rất ang(Hinh 1.3) Néu chi quan sat bénh tich 6 lach, than va hach mang treo thi dé nham

với bệnh dich tả heo Có thé có biểu hiện gan khác thường, gan hơi to, trên bề mặt

có các mảng đen, nhưng bệnh tích này chỉ chiếm tỉ lệ nhỏ Ruột bị xuất huyết ở

nhiều đoạn khác nhau; tuy nhiên, bệnh tích nặng nhất là ở hạch màng treo ruột Sựxuất huyết hoặc tụ huyết làm cho hạch ruột vằn vện giống đá hoa cương, có hiện

tượng thoái hóa Bệnh tích này cũng hay nhằm với bệnh tích của bệnh dịch tả heo

[28] Ngoài ra, hạch Iympho có hiện tượng sưng to, phù né, kích thước tăng so vớibình thường, xuất hiện lắm tắm trên bề mặt [24]

Hình 1.3 Bệnh tích đại thé của heo nhiễm PRRSV A: Viêm phôi thay; B: Hach lympho

sưng to; C: Than xuât huyét; D: Lach nhôi huyét [29].

1.1.5 Phòng ngừa và điều trị bệnh

An toàn sinh học là yếu tố rất cần thiết trong chăn nuôi vì vừa rẻ, vừa hiệu

quả Người chăn nuôi cần nghiêm túc thực hiện và có kế hoạch vệ sinh chuồng trạiđịnh kỳ, thực hiện tốt công tác cách ly gia súc bệnh, gia súc mới nhập trại sẽ hạn

chế tốt dịch PRRS Hai biện pháp thường được sử dụng hiện nay là vệ sinh bằng cơ

giới và vệ sinh bằng thuốc sát trùng để phòng dịch PRRS

Hiện nay, vắc-xin PRRS MLV được cấp phép sử dụng ở một số nước trênthế giới như Bi, Canada, Trung Quốc, Đức, Nhật, Mê-hi-cô, Hà Lan, Ba Lan, TâyBan Nha và Mỹ Các loại vắc-xin MLV được cấp phép sử dụng tại Mỹ có nguồn

gốc từ PRRSV chủng Bắc Mỹ, trong đó bao gồm Ingelvac PRRS MLV và

ReproCyc PRRS-PLE (cả hai được sản xuất từ chủng VR-2332; Boehringer

Ingelheim), và Ingelvac PRRS ATP (từ JA-142; Boehringer Ingelheim) Tương tự

như vậy, các loại vắc-xin MLV được cấp phép sử dụng trong các nước Châu Âu chỉ

có nguồn gốc từ PRRSV chủng Châu Âu, trong đó bao gồm Porcilis PRRS (Merck),

Amervac-PRRS (Hipra), và Pyrsvac-183 (Syva) Tất cả các vắc-xin này đều có tácdụng tạo đáp ứng miễn dịch, nhưng kháng thé đặc hiệu có khả năng trung hòa vi-rút

sinh ra muộn sau 4 tuần tiêm vắc-xin [30, 31]

Hiện nay chưa có thuốc đặc trị đề điều trị bệnh này, chỉ có thể sử dụng một

số thuốc tăng cường sức đề kháng, điều trị triệu chứng và ngăn ngừa bệnh tái phát

1.2 Vi-rút gây bệnh PRRS (PRRSV)

1.2.1 Phân loại

Order Nidovirales

Family Arteriviridao Coronaviridae Roniviidae

Genus Arierivirus Coronavirus Torovirus Bafinivirus Okavirus

EAV Group 2a ETov GAROV (GAV)Group ana | Foy HHCY (kv) BTeV WaBav (MBV)| | Soy (VI)

tentative | SHEV BCoV HToV

members | PRRSV HCoV-OC43 PToV

WPDV HGoV-HKUT

Gupta |PHEOoV (PHEV)

roup 1a TGECOV || Group 25 ek en

(TGEV) —_|| sars.cov TIENG

FCoV BICoV-HKUS

CGoV B†CoV-HKUS

BtGoV-HKUS Group 1b _ || BICov-133,

HCoV.2296 HCoV-NL63

PEDCoV.

(PEDV) BiCov-512

Hình 1.4 Các thành viên trong bộ Nidovirales [31].

Vi-rút gây ra hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp trên heo (Porcine

reproductive and respiratory syndrome virus — PRRSV), hay còn gọi là vi-rút gây

bệnh tai xanh, là một loại vi-rút có hệ gen RNA sợi dương, mạch đơn, thuộc giống

Betaarterivirus (Arterivirus), họ Arteriviridae, bộ Nidovirales (Hình 1.4) Bộ

Nidovirales bao gồm 3 họ, trong đó 2 họ có kích thước bộ gen khá lớn, từ 26,3—

31,7kb là Coronaviridae, Roniviridae, va 1 họ có kích thước bộ gen nhỏ hơn,

khoảng 12,7-15,7kb là Arteriviridae chỉ gồm một giống duy nhất Betaarterivirus

Dựa vào sự khác biệt về tính di truyền và tính kháng nguyên, PRRSV được

chia làm 2 loài (hay 2 Type): Loài Betaarterivirus suid 1 (Genotype I hay Type 1)

gồm những chủng thuộc dòng Châu Âu (chủng đại diện là chủng Lelystad (LV);Genbank: M96262), và loài Betaarterivirus suid 2 (Genotype II hay Type 2) gồm

những chủng thuộc dòng Bắc Mỹ (chủng đại diện là chủng VR-2332; Genbank:

EF536003) Hai Type này tương đồng với nhau chỉ khoảng 40-70% về trình tựnucleotide và 50-80% về trình tự amino acid [6, 9, 35]

Protein kháng nguyên bề mặt GPS (do trình tự ORF trong bộ gen của

PRRSV mã hóa) được xem là kháng nguyên quan trọng nhất nên trình tự ORFSđược dùng xếp loại các bậc dưới loài bao gồm: Phân type (subtype) > phân nhóm

(subgroup) > dòng (lineage) > phân dòng (sublineage) Dựa vào đó, Type 1 được

chia thành 4 phân type từ phân type I đến phân type IV; trong đó phân type 1 đượcchia thành 4 phân nhóm từ phân nhóm I đến phân nhóm IV, với 3 dòng từ dòng 1

đến dòng 3; mỗi dòng được chia thành nhiều phân dòng (Dòng 1 có 7 phân dòng từ

A — 1G; dòng 3 có 7 phân dong từ 3A — 3G) Type 2 gồm 9 dòng (từ dong 1 đếndong 9); mỗi dòng được chia thành nhiều phân dòng, chẳng hạn trong dòng 8 có 9phân dòng từ 8.1 đến 8.9 (Hình 1.5) [36, 37, 38]

PRRSV có dạng hình cầu, kích thước 45-80 nm, với vỏ bọc bên ngoài, trên

bề mặt có những gai nhô ra, và bên trong chứa nhân có hình dạng đa giác, vớiđường kính 25-35 nm, hệ gen RNA của vi-rút nằm trong nhân được bao bọc bởi

protein nucleocapsid N (Hình 1.6) [23, 40] Phương pháp chụp cắt lớp bằng tia X

cho thấy PRRSV còn có hình oval kích thước 50-65 nm; bề mặt ngoài trơn láng

được tạo bởi phức hợp protein màng, lõi bên trong xếp từng lớp, hình thành quả cầu

rỗng, có đường kính trung bình 40 nm (Hình 1.7) [41, 42]

—

Hình 1.7 Ảnh ch hạt PRRSV bang phương pháp chụp cat lớp tia X (a): Anh nhìn tông

thể hình dang vi-rút; (b): Ảnh chụp cat lớp từ trên xuống theo phương thăng đứng; (c): Ảnh

chụp cắt lớp theo phương ngang [41, 42].

Hạt vi-rút chứa hệ gen RNA kết hợp với protein nucleocapsid N, tạo ra cấu

trúc xoắn ốc (Hình 1.8) Protein màng chính GPS hình thành cấu trúc heterodimervới protein mang M, cùng chiếm phan lớn trên màng bao vi-rút Các protein mangphụ GP2, GP3 và GP4 kết hợp với nhau hình thành phức hợp multimer/heterotrimer

và tương tác với heterodimer GP5-M (Hình 1.8) GP3 là protein cấu trúc trên mang

vi-rút, nhưng đôi khi cũng được thấy ở dạng protein hòa tan, và được tiết ra ngoài tế

bao tùy theo chủng vi-rút [42, 43].

mall hydrophobic proteins

minor GP trimer

ENVELOPE "nen hước

Ø~55 nm

Hình 1.8 Các protein cấu trúc trên màng và lõi nhân PRRSV A, B: Các protein cấu trúc

GP2, E, GP3, GP4, GP5, M và N (mã hóa bởi ORF2-ORF7); C: Bề mặt cắt ngang hat

PRRSV; D: Hình ảnh bên trong lõi nhân, đặt biệt là vùng trung tâm lõi; E: Các cấu trúc

tinh thể liên kết các vùng domain đầu C của protein N có dạng các khói hình chữ nhật xép

Hệ gen của PRRSV là một phân tử RNA sợi đơn, mạch dương, không phân

đoạn, có kích thước khoảng 15 kb tùy theo dòng vi-rút, gồm 10 khung đọc mở

(ORF): ORFla, ORFIb, ORF2a, ORF2b, ORF3, ORF4, ORF5, ORF5a, ORF6 va

ORF7 (Hình 1.9) [1, 35] Trong đó, ORFla va ORF 1b nằm gan đầu 5’, mã hoá cho

phức hợp sao chép, chiếm khoảng 75% trình tự của bộ gen [45] Phía đầu 3’ chứa

những vùng gen ORF2-ORF7 mã hoá cho các protein cấu trúc của vi-rút Các gen

có đặc điểm gối đầu một phan 3° của gen trước với phần 5’ của gen sau, gen sau tận

dụng phần cuối chuỗi gen trước làm promoter đê hoạt động [1]

ORFla (7512 nucleotde)/ORFIb (4374 nucleotide) mã hoá cho 2

polyprotein chính là ppla (2503 aa), pplab (3960 aa), từ đó tạo 16 protein phi cấu

trúc @NSPI — NSP12) (Hình 1.9) [1] ORF2a (771 nucleotide), ORF2b (222 nucleotide), ORF3 (765 nucleotide), ORF4 (537 nucleotide), ORF5 (603

nucleotide), ORFSa (190 nucleotide), ORF6 (525 nucleotide), và ORF7 (372

nucleotide) lần lượt mã hóa các protein cấu trúc GP2 (256 aa), E (73 aa), GP3 (254

aa), GP4 (178 aa), GP5 (200 aa), ORF5a (51 aa), M (174 aa), và N (123 aa) [1].

ORF la va ORF 1b được tách biệt nhau nhờ vi tri chuyén dich khung ribosom(Ribosomal frameshift-RFS) Trong ving RFS có chứa trình tự bảo tồn chung

“slippery” hay “shifty condons” cho cả Type 1 va Type 2 là 5'-UUUAAAC-3', tiếp

theo sau là nút thất (pseudoknot) chứa 64 nucleotide [40]

1.2.4 Đặc diém và chức năng các protein phi cấu trúc (NSP) ở PRRSV

Polyprotein Ppla và Pplab chứa các domain của các protease là PCPlơ,

PCPIB (papain-like cystein protease), CP (chymotrypsin-like cysteine protease), SP

(serine protease) nên sau khi được hình thành sẽ bị phân cắt thành 16 protein phicấu trúc NSPla, NSPIB, NSP2, NSP-2N, NSP-2TF, NSP3, NSP4, NSP5, NSP6,

NSP7a, NSP7B, NSP8, NSP9, NSP10, NSPII và NSP12 Trừ NSP6, NSP7a, NSP7P, NSP8, NSP12 có chức nang chưa rõ, các protein còn lại là các enzyme

tham gia vào phức hợp sao chép, phiên mã, và các enzyme thủy phân protein (Bang 1.1) [30, 43, 46].

Bảng 1.1 Chức năng các protein phi cấu trúc ở PRRSV [43, 46, 48].

So lugng/vi tríORF | Protein | amino acid theo Type vi-rút Chức năng, đặc điểm

Type 1 Type 2

Protein điêu hòa sự tông hợp NSPI 385 aa 383 aa B

(NSPIa.| (etl | et Lễ 3 Neswweinemaeee

NSPIB) | Gly385) GIy383) EN ,

Protein chuyên màng, có hoạt tính cysteine protease, chức

1078 aa 1196 aa năng enzyme khử ubiquitin

NSP2 (Ala386- (Ala384— |hóa, ức chế IFN, dấu hiệu

Gly1463) Gly1579) cho sự đa dang di truyền,

dùng trong thí nghiệm chân đoán.

230 aa 230 aa Protein xuyên màng, có hoạt

NSP3 (Alal464- (Glyl580- | tính thủy giải protein, hình

Glu1693) Glu1809) thành phức hợp sao chép.

ORFla a =

(7512 nt) 203 aa 204 aa Serine protease, cảm ứng chu

NSP4 (Gly 1694— (Gly1810- | trình chét của té bao, ức chê

Glu1896) Glu2013) IFN.

NSP9 (Ala2352- | (Ala2459- RNA-dependent RNA

Glu3036) Glu3143) | P9Y6186.

152 aa 153 aa

NSPI2 (Gly3703— (Gly3808— | Chưa có thông tin.

Pro3854) Asn3960)

ORF: Open reading frame, NSP: non-structural protein.

NSPla, NSPIB, NSP2, NSP4, NSP7, NSP8, NSP9, NSP10 và NSPII là

những protein nằm trong nhân, nhưng có thể di chuyền ra ngoài tế bào chất; NSP2,NSP3, NSP5 là những protein xuyên màng; và NSP12 là protein trong tế bao chat

Các protein phi cấu trúc tự tương tác với nhau, tương tác một chiều hoặc hai chiều

với các protein khác, hình thành mạng lưới tương tác, có khả năng điều hòa quá

trình sao chép phiên mã (Hình 1.10) [47].

ORF1b-Encoded Proteins

(iii) Protein nucleocapsid N (Bảng 1.2 và Hình 1.11) Mỗi protein cấu trúc có chức

năng và cấu trúc riêng, nhưng đều cần thiết cho sự xâm nhiễm, hợp nhất các thành

phần hạt vi-rút, đặc biệt trên các protein cấu trúc có chứa trình tự epitope miễn dịch

Protein màng phụ; tương tác với

CD163; có 2 vị trí glycosyl hóa bao

ORF2a 249 aa 256 aa tồn cao; hình thành phức hợp

GP2 (Metl— (Metl— Pa H

(771 nt) Ser249) Gin256) multimer với GP3-GP4, hợp nhât

thành phân hạt vi-rút; cân thiết cho

sự xâm nhiễm của vi-rút.

Protein màn; hụ; không được

ORF2b E ae iL vn aa glycosyl hóa, s khả năng hình

(222 nt) (Metl— (Metl~ | thanh kênh ion oligomer; cần thiết

Leu70) Leu73) Ạ wR

cho sự xâm nhiễm của vi-rút.

Protein màng phụ, đa dạng nhât; có

7 vị tri glycosyl hóa; có tính kháng

ORF3 265 aa 254 aa nguyên cao; có khả năng trung hòa

(765 nt) GP3 (Metl— (Metl— virút, hình thành phức hợp

Arg265) Arg254) multimer với GP2-GP4, hợp nhât

thành phần hạt vi-rút; cần thiết cho

sự xâm nhiễm của vi-rút

Protein màng phụ; tương tác với CDI63; được glycosyl hóa, hình

thành phức hợp multimer với

GP2-ORF4 183 aa 178 aa GP3, hop nhat thanh phan hat

vi-(537 nt) GP4 (Metl— (Metl— rút; tạo tương tác gián tiêp giữa

Tle183) Tle178) glycoprotein mang phy va GP5;

protein hợp mang; có khả năng trung hòa; cân thiết cho sự xâm nhiễm của vi-rút.

ORF5a 43 aa Slaa Protein câu trúc màng phụ, ky

(156m) ORF5a (Metl— (Metl— nước, không được _ glycosyl hóa,

Tle43) MetS1) cần thiết duy trì sự sống vi-rút.

ORFS 201 aa 200 aa Protein câu trúc màng chính, đa

(603 nt) GPS (Metl— (Metl— dạng nhât; protein - xuyên màng

Ala201) Pro200) chính; tương tác với sialoadhesin,

có khả năng trung hòa và bảo vệ; hình thành phức hợp heterodimer

với M qua liên kết disulfide; tạo

điều kiện vi-rút xâm nhiễm vào tế

bào chủ và gây độc cho tế bao

Protein màng chính; tương tác với heparan sulfate; không được

ORF6 173 aa 174 aa glycosyl hóa, được bao ton cao(525 nt) M (Metl—- (Metl— nhất, có vai trò cần thiết trong việc

Argl73) Lys174) hợp nhất các thành phần của vi-rút

và giải phóng vi-rút khỏi tế bào

chủ.

Màng nhân (Nucleocapsid); protein

được phosphoryl hóa, nhưng không được glycosyl hóa; có vai trò trong miễn dịch, dùng làm kháng nguyên

ORF7 128 aa 123 aa phát hiện ˆ Kháng thể tee bên và

(372 nt) N (Meth (Metl— chan đoán bệnh; thành phan duy

Ser128) Alal23)

nhất của mang vi-rút tương tác qua

liên kết cộng hóa trị và liên kết ái

lực định vị trong nhân và tương tác

với nhân tố phiên mã tế bao

ORF: Open reading frame, GP: glycoprotein.

Bang 1.3 Vị trí các epitope miễn dich trên các protein cấu trúc [43, 52]

Protein Trinh ty epitope Vi tri amino acid trén protein

hoá tại 2 vị trí là Asn173 và Asn179 ở các chủng vi-rút Type 1 hoặc Asn171 và

Asn178 ở các chủng vi-rút Type 2, có trọng lượng phân tử khoảng 29-30 kDa, gồm

249 aa (Type 1) hoặc 256 aa (Type 2) GP2 chứa trình tự tín hiệu tại đầu N nằm

giữa aa 1 và 37 (Type 1), aa 1 và 40 (Type 2); theo sau là trình tự epitope miễn dich

tại vị tri aa 41-55 và 121-135 (Bang 1.3 va Hình 1.12); tiếp theo là domain ngoại

bào 168-170 aa, một vùng xuyên màng ky nước 25 aa và domain nội bào dài 20 aa

[41, 49, 52] Cùng với GP3 và GP4, GP2 tạo thành phức hợp cần thiết cho sự xâm

nhiễm của vi-rút vào tế bào [3, 50]

GP2 (256 aa):

1 40 188 198

a n,n 9e.

178 184 GP3 (254 aa):

1 2( B2 17

ee a 5,

2942 50 131 152160 195 Hình 1.12 Các vị tri domain trên các glycoprotein màng phụ GP2 va GP3 Trong đó, SS: signal sequences; TM: transmembrane regions; N: amino terminus; C: carboxy terminus;

kí hiệu hình nhánh chỉ vị tri glycosyl hóa trên GP2, và GP3 [50].

Glycoprotein GP3 dài 265 aa (Type 1) hoặc 254 aa (Type 2), được glycosyl

hóa tại 7 vi trí là 27, 42, 50, 130, 151 và 159 (Type 1) hoặc 29, 42, 50, 131, 152,

160 và 195 (Type 2), trọng lượng phân tử của GP3 khoảng 45kDa, có chuỗi aa được

bảo tồn cao, gồm 265 aa (Type 1) hoặc 254 aa (Type 2) do bị mắt đi 11 aa tại đầu C[41] GP3 có 2 vùng domain xuyên mang, | domain nằm tại vi trí aa 1-27, được

xem là vùng trình ty tín hiệu, 1 domain nằm tại vị trí 183-200 (Hình 1.12) GP3 có

vai trò quan trọng trong miễn dịch [35, 51] Trên GP3 có 4 trình tự epitope miễn

dịch chủ đạo tại vị trí aa 61-75, 71-85, 81-95, 91-105, làm hình thành 4 motif

Q5!AAAEVYEPGRSLWC”, R7!SLWCRIGHDRCSED**, R$!CSEDDHDDLGFM

VP*, G'FMVPPGLSSEGHLT" (Bảng 1.3); trong đó quan trọng nhất là 2 trình tựepitope ngắn nằm tại vị trí aa 67-74 và 74-85 (Y°EPGRSLWTM vàWCRIGHDRCGED*) được bảo tồn ở nhiều chủng PRRSV Type 2, đột biến xảy

ra trên vùng amino acid này có thể làm thay đồi tính kháng nguyên PRRSV [52,53] Tương tự GP2, GP3 cũng đóng vai trò trong việc hợp nhất các thành phần hạt

vi-rút, đồng thời tương tác với các thụ thể trên tế bao tạo điều kiện cho vi-rút xâmnhiễm vào tế bào [50].

Protein GP4 dài khoảng 183 aa (Type 1) hoặc 178 aa (Type 2), được

glycosyl hoá cao tại 4 vi trí là 37, 84, 120 và 130 (Type 2) [41] GP4 chứa vùngtrình tự tín hiệu từ 1-21, và 1 chuỗi xoắn xuyên màng tại vị trí 161-181 (Type 1)

hoặc 156-177 (Type 2), có trọng lượng phân tử ban đầu khoảng 20-28 kDa khi mớiđược tổng hợp, sau đó được gắn thêm N-glycan thành protein 31-35 kDa trong quá

trình vận chuyển qua mạng lưới nội chất và bộ máy Golgi đề trở thành protein hợp

màng [35, 41, 51] Cùng với GP2 và GP3, GP4 là một trong bốn cấu trúc màng phụ

có vai trò quan trọng trong việc hợp nhất các thành phần hạt vi-rút, và tạo điều kiện

cho vi-rút xâm nhiễm vào tế bào thông qua thụ thể trên màng [50] GP4 gồm 5

domain: Domain trình tự tín hiệu, domain kết hợp CD163, domain epitope trunghòa (vùng biến đổi cao), domain neo GPI, domain ky nước [54] Trong epitopetrung hòa có chứa motif H°GVSAAQEKISFGS%Š được bảo tồn cao ở nhóm chủngPRRSV Type 1 [54], H*SRDSASE -AIR® được bảo tồn cao ở nhóm chủng PRRSV

Type 2 [54] (Hình 1.13).

PRRSV-2 (VR) 56-HRDSASI

Hình 1.13 Cac domain chức năng cùng các vị trí N-glycosyl hóa trên GP4 đối với các chủng PRRSV Type 1 và đối với các chủng PRRSV Type 2 (biểu thị trong ngoặc don).

Trong đó, vùng màu xám: trình tự tín hiệu (1-22); vùng màu đen thứ nhất: vùng domain

kết hợp CD163; vùng màu đen thứ hai: epitope trung hòa (56-68); vùng màu đen thứ ba:

domain kị nước (164-178) [54].

Protein E có trọng lượng phân tử khoảng 10kDa, dài khoảng 69-73 aa, có 1

domain xuyên màng [35, 40, 49, 55], không tham gia trực tiếp vào quá trình hợp

nhất và phóng thích các thành phan hat rút nhưng cần thiết cho sự xâm nhiễm

vi-rút thông qua sự tương tác với heterotrimer GP2/3/4 để hình thành phức hợp cấu

trúc màng vi-rút Ngoài ra, protein E còn hoạt động như | kênh ion, cho phép

PRRSV phóng thích các thành phan hat vi-rút vào bên trong tế bào chủ [41, 49]

1.2.5.2 Các protein cấu trúc màng chính GPŠ và M

Glycoprotein GPS dài 201 aa (Type 1) hoặc 200 aa (Type 2), được glycosyl hoá tại 4 vi trí 30, 33, 44 và 51, trọng lượng phan tử 24,5-26 kDa [35, 51] Trên

GP5 có vùng trình tự tín hiệu nằm tại vị trí aa 1-31, theo sau là vùng ectodomain

được glycosyl hóa tại Asn46 và Asn53 (Type 1) hoặc tại Asn44 và Asn51 (Type 2).

Sự glycosyl hóa tại Asn44 hay Asn46 có vai trò thiết yếu cho sự đóng gói và xâm

nhiễm của vi-rút GP5 gắn với màng bọc ngoài của PRRSV qua 3 domain xuyên

mang tại các vi trí 63-82, 90-106 và 107-125, có tinh kháng nguyên mạnh, có khả

năng bám dính đa dạng trên bề mặt tế bào, và cần thiết cho sự xâm nhiễm PRRSV

[41] Vùng ky nước trên GP5 kéo dai từ vị trí aa 60-125, gồm 3 vùng xoắn xuyên

màng: Vùng xuyên màng thứ nhất từ aa 68-90 (Type 1) hoặc aa 63-82 (Type 2);

vùng xuyên màng thứ hai từ aa 90-106; vùng xuyên màng thứ ba từ aa 107-125

[41] Vùng ky nước thứ nhất và thứ hai không nằm xuyên màng hoàn toàn, hìnhthành cấu trúc kẹp tóc, nối với vùng xuyên màng thứ ba (Hình 1.14) [49]

N Gp5

PRRSV lumen

P ER

membrane cytoplasm

e

Hình 1.14 Cấu trúc GPS Vùng ky nước thứ nhất và thứ hai không nằm xuyên màng hoàn

toàn, hình thành cấu trúc kẹp tóc, nói với vùng xuyên màng thir ba Chỗ nói giữa vùng ky

nước | và 2 được cảm ứng bởi aa proline bao tồn [49].

GP5 có 4 vùng domain, bao gồm trình tự tín hiệu (từ aa 1-32), domain ngoại

bào (từ aa 33-63), vùng xuyên màng (từ aa 64-134), domain nội bào (từ aa 135—