Tổng hợp dẫn xuất amide của 7 hydroxy 4 coumarin acetic acid

“Tôi xin cam đoan các kết quả hú được trong để tài này là do bản thân thực hiện dưới sự hướng dẫn khoa học của TS, Lê Tín Thanh và không sao chép từ bắt kỳ một công trình nào khác Những

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRUONG DAI HQC SU PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

Tô Thị Kim Linh

TONG HOP DAN XUAT AMIDE CUA 7-HYDROXY-4-COUMARIN ACETIC ACID

LUẬN VĂN THAC SI KHOA HQC VAT CHAT

Thanh phé Hé Chí Minh - 2024

TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

Tô Thị Kim Linh

TONG HOP DAN XUAT AMIDE CUA 7-HYDROXY-4-COUMARIN ACETIC ACID

Chuyên ngành: Hóa hữu cơ

Mã Số _ : 8440114

LUAN VAN THAC Si KHOA HQC VAT CHAT

NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC:

TS LÊ TÍN THANH

“Thành phố Hồ Chí Minh - 2024

“Tôi xin cam đoan các kết quả hú được trong để tài này là do bản thân thực hiện dưới

sự hướng dẫn khoa học của TS, Lê Tín Thanh và không sao chép từ bắt kỳ một công trình nào khác

Những bà liệu, trí

đếu có ngu :h dẫn, kết quả, đánh giá của một tác giả sử dụng trong luận văn

n gốc rõ rằng, trích dẫn và chú thích theo đúng quy định Nếu có bắt kỳ gian lận nào tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm

“TP HCM, ngày 10 tháng 10 năm 2023

'Tô Thị Kim Linh

Luận văn này được hoàn thành dưới sự hướng dẫn của TS Lê Tín Thanh Em xin gửi đến cô lời cảm ơn chân thành vì Cô đã luôn tận tình chỉ day, tạo mọi điều kiện tốt nhất để cem hoàn thành ¡ này,

Em xin gửi lồi cảm ơn đến Quý Thầy Cô Khoa Hóa học và Phòng Sau Đại học Trường

Đại học Sư phạm Thành phố Hỗ Chí Minh tẩn tình truyền đạt và góp ý để em hoàn thiện

hơn về mặt kiến thúc và kinh nghiệm nghiên cứu khoa học

Đồng thời em xin gửi lời cảm ơn đến Thầy Võ Đức Duy đã có những góp ý đáng giá

cho bin thin em và quy tình trong bài báo cáo này:

“Cuối cùng, em xin được gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè, các bạn sinh viên trong phòng thí nghiệm Tổng hợp hữu cơ đặc biệt là anh Phan Thấi Sơn và anh Võ Vinh Huy, bạn Phan Minh Tắn đã giáp đỡ và ủng hộ em trong suốt chặng đường vữa qua

'Vì sự hạn chế về mặt thời gian và điều kiện vật chất cũng như chủ quan cá nhân nên

sm không thể tránh khỏi những thiểu sót trong quá tình thực hiện đề tà Em rt mong trong luận văn

Em xin chân thành cảm ơn!

“TP HCM, ngày 10 tháng 10 năm 2023 'Tô Thị Kim Linh

CHUONG 1 TONG QUAN

1.1 Tổng quan hợp chất coumarin và dẫn xuất

1.1.1 Hợp chất coumarin và dẫn xuất

1.1.2 Tông hợp dẫn xuất 7- hydroxylcoumarin

1.2 Tổng quan các hợp chất amide của coumarin 1.2.1 Ứng dụng của hợp chất amide

1.2.3 Tổng hợp các hợp chất amide

1.2.3 Tổng hợp hợp chất amide chứa khung 7-hydroxycoumarin 1.3 Các tác nhân ghép cặp amide thường được sử dụng 1.3.1 Tác nhân HATU

1.3.2 Tác nhân DCC

1.3.2 Tác nhân EDC

'CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM

2.2 Phuong pháp nghiên cứu cấu trúc các hợp chất tổng hợp được 3.2.1 Phổ công hưởng từ hạt nhân "H và °C-NMR, 2.2.2 Phố khối lượng HR-MS

3.3 Đánh giá khả năng ức chế tế bảo ung thư bằng phương pháp MTT 2.4 Quy trình thực nghiệm

1 Tổng hợp 7-hydroxy-4-coumarin acetic acid LI 2.3.2, Tổng hợp một số dẫn xuất amide (L2 ~ L8) của 7-hydroxy-4-coumar

acetic acid

2.3.3 Tổng hop ester của Boc-Valine

(CHUONG 3 KET QUA VA THAO LUẬN

3.3 Tổng hợp ester của Boe-Valine

3.4 Thử nghiệm hoạt tính sinh học của các hợp chất LI-8

'CHƯƠNG 4 KẾT LUẬN - KIÊN NGHỊ

41, Kétluan

4.2 Kiến nghị

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHU LUC

DANH MUC BANG BIEU Bing 1.1, Gift ICs cia din suit chrysn amino acid wi hai dng t bio MGC-803

và MCF-7

Bảng 32.1 Kết qui thử nghiệm độc tính tế ào trên đồng MCF-7 và HepG2

DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cấu tạo cơ bản của Coumarin

Hình L2 Chu trie ea mot sé hop chit coumarin trong tự nhiên Hình 1.3 Một số dẫn xuất của coumarin

Hình 1.4 Một số dẫn xuất coumarin có chứa liên kết amide

Hình 1.5 Cấu trúc các hợp chất có chứa liên kết amide

Hình 1.6 Các dẫn xudt ciia diphenyl pyrimidine

Hình 1.8 Cấu trúc phân tử của các tác nhân ghép cặp thưởng gặp Hình 3.1 Phổ 'H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) của hợp chất LI

Hình 3.2 Phổ 'H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) của hợp chất L2

Hình 3.3 Phd 'H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) của hợp chất Lâ

Hình 3.4 Phỏ 'H-NMR (DMSO-d6, 600 MHZ) của hợp chất L4 Hình 3.6 Phổ !H-NMR (DMSO-d6, 600 MHZ) của hợp chất L6

Hình 3.6 Phổ 'H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) của hợp chất L7

Hình 3.9 Phổ 'H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) của hợp chất L9 Hình 3.10 Phỏ 'H~NMR (DMSO-d6, 600 MHz) của hợp chất LI0

DANH MỤC CÁC SƠ ĐỎ

Sơ đồ 1.1 Sơ đồ tổng hợp 7-4

Sơ đề 1.2 Sơ đồ tổng hợp dẫn xuất theo thông qua phan ig Knoevenagel Sơđồ LẠ

'droxycoumarin-4- -acetic acid theo Sheng Chen

Téng hợp các dẫn xuất coumarin-benzimidazole theo Purva

Sơ đổ L.4 Tổng hợp các dẫn xuất 7-Hydroxycoumatin chita uoride

Sơ đồ L5 Tổng hợp các dẫn xuất chrysin amino acid

Sơ đồ 17 Sơ đồ tổng hợp hợp chất amide

Sơ đồ L8 Sơ đỗ tổng hợp Bortezomib có sử dụng xúc ác TBTU

Sơ đồ L9 Sơ đồ tổng hợp hợp chắt amide sử dụng xúc tác TBTU

Sơ đỏ 1.10 Tong hop N-hydroxycinnamoyl amino acid amide ethyl ester

Sơ đồ I.11 Sơ đồ tổng hợp các dẫn xuit amide 24

Sơ độ 1.12 Sơ đồ tổng hợp các dẫn xuất amide 22

Sơ đồ 13 Sơ đỗ tổng hợp các dẫn xuất amide 26

Sơ đồ 1.14, Sơ đồ tổng hợp dẫn xuất amide từ 2-(7-hydroxy-2-oxo-2H-chrome cúc acid

Sơ đồ I.15 Tổng hợp các dẫn xuất 23 theo Phutdhawong

Sơ đỗ 1.16 Sơ đồ tông hợp hợp chất Odanacatib 36 thông qua tác nhân HATU

Sơ đỗ I.17 Sơ đỗ tổng hợp hợp chất 39 sử dụng tác nhân HATU,

Sơ độ 1.18 Sơ đồ tổng hợp amide 42 sử dụng tác nhân DCC

Sơ đồ I.19 Sơ đồ tổ 1g hợp amide 45 sử dụng tác nhân DCC,

Sơ đồ 1.20, Sơ đồ tổng hợp amide 49 sử dụng tác nhân EDC

Sơ đồ 2.1 Quy trình tổng hợp hợp chất LI

Sơ đồ 22 Quy trình tổng hợp các hợp chất amide

Sơ đồ 2.4 Quy trình tổng hợp ester của Boc- Valine

CCoumarin la hop chit phin bổ nhiều trong tự nhiên, đặc biệt là các loài thực vật [1]

“rong những năm gẵn đây, coumarin va cde din xu ắt được quan tâm do hoại tính sinh

"học đa dang của chúng Đặc biệt với hoạt tính kháng khuẩn [2-3], kháng nắm [4-6] chống

p trong việc nghiên cứu và tổng hợp tạo nhiều dẫn xuất mới góp phần vào nh vực tổng hợp ung thư [7] và kháng viêm [8] của các nhóm hợp chất này, làm cho chúng trở nên in hữu cơ và y học Nổi bật như dẫn xuất coumnrin-l.2.3-iazole có khả nãng chống lại các đồng ung thư ở người: MCF.7 (ung thư vũ, ICs = 5.89 ¡ÌM); SW480 (ung thư biểu mô ruột kết bào, ICsy= 1.99 „M); A549 (ung thư phổi, ICại = 0.52 HM); dẫn xuất khác của 1.2,3-

ICso = 0,9 uM [9]

.riazole-coumarin có khả năng chống lại tế bào ung thư gan Hep:

Do hoạt tính sinh học phong phú của dị vong coumarin và nhóm amide, các nhà khoa học đã nghiên cứu kết hợp hai nhóm hợp chất này trong cùng một cấu trúc Cụ thể như,

7-lndroy-2-axe-N- sông bổ của Wamier và Kharkar đã tổng hợp thành công hợp c pyridn-2-ylnetlyl)chromene-]-carboxamide có khả năng phát quang ở bước sóng 447 1im và có tính chọn lọc và nhân biết Fe" trong tế bào sống [10]: dẫn xuất acid có khả năng gây độc đồng té bao MCF-T (ICs = 13.15 1.73 1M) [10]; Novobiocin huốc kháng sinh [11]

‘la chrysin amino

coumarin mới đầy hứa hẹn phục vụ cho lĩnh vực tổng hợp hữu cơ và hóa được,

1.1 Téng quan hợp chất coumarin va dẫn xuất

1.1.1, Hap chất coumarin và dẫn xuất

'Coumarin được phân lập lần đầu tiên từ loài thực vat ¢6 tn Coumarouna odorata

(Dipteryx odorata) thude ho du béi nhà khoa học Vogel người Đức vào năm 1820

fu trúc 'Coumarin (1.2-benzopyrone hoje 2H-1-benzopyran-2-one) va cée

phân cục, phân bổ nhiễu trong tự nhiên, đặc biệt ở trong các loài thực vật được tim thấy

trong rễ, thân, quả và hạt của nhiễu loại thực vật hai lá mầm [I2], ngoài ra cũng có một số

soumuẫn như nơtobiocin, cokmermycin và alatotin được phân lập từ nắm và vỉ khuẩn 10.13)

“Cấu trúc của các hợp chất này còn có sự phát quang mầu xanh lam khi hắp thụ ta

UV Đặc biệt sự liên hợp kéo dài trong vòng courmain với các đặc tỉnh giàu điện tử và

úc hóa

truyền điện tích cho phép khung nảy tương tác với các phân tử và ion [ 0|

hoe cia coumarin xuất phát từ sự hợp nhất của vòng ben/ene với pyrn-2-one Do de, én carbon carbonyl & vj ti 2 [14]

Hình 1 Cắu tạo cơ bản của coumarin

nh đến hiện nay có hơn 1300 các dẫn xuất coumarin có nguồn gốc tự nhiên chủ yến

tử nhiễu loài thực vật khác nhau được định danh (/fình 1.2) [10]

Linear Dityero

Hinh 1.2 Céu tric cia mptsé hop chat coumarin trong ty nhién

Cc din xudt coumarin la hop chit chuyén héa thye vit quan trọng có mặt khắp nơi

trong tự nhiên Các đẫn xuất của hợp cl

hợp các dẫn xuất có khả năng ức c lipase cia tuys

0% 14.2401

Hinh 1.3 Một số dẫn xuất của coumarin Cấu trúc các dẫn xuất coumarin có chứa liên kết amide CO-NH ngày càng được

nghiên cứu phát triển Đặc biệt như hợp chất 2 là chất ức chế HDAC (histone deacetylase)

tốt nhất (ICạp =

47 0.02 uM) déng thời có khả năng ức chế sự phát tiễn của các khối

, đi căn và xâm nhập qua các tế bào khác Hợp chất 3 có đặc tính kháng các dòng ung thư

MCF-1 véi i tj ICs Ia 1.07 uM Hợp 4 có khả năng gây độc tẾ bào bằng liên kết cộng

Sự phân bổ rộng rầi và hoạt tính sinh học đa dạng của hợp chất coumarin và các dẫn xuất đã thúc đẫy các nhà khoa học thực hiện các nghiên cứu liên quan đẾn tổng hợp các

hợp chất chứa khung coumarin trong các năm gắn đây

Năm 2015, S Chen cùng với cộng sự tổng hợp thành công hợp chất 7- hydroxycoumarin-+-acetic acid 7 tir resoreinol và 13-acetonediearboxylie acid sử dụng

úc tác H:SO, 70% với hiệu suất đạt 91% (Sư đổ 1.) [22]

hhydroxycoumarin chia fluoride e6 tée dụng tốt hoạt nh kháng nắm thông qua phản ứng thực hiện phân ứng trong môi trường acid H;SO, thì được đẫn xuất của dẫn xuất của soumarin chứa nguyên tổ fluoride, sau đó thực hiện phản ứng để chữa nhóm aldehyde với hiệu suất đạt 83% (§ơ đổ I.9) [25]

lồng hợp hợp chất 10 có

10 (63%) (0: H;SO, 01C, 4h,

(i: Tatuoroacetie acid, Hevamethyleneteramine, 1.5 hị HCI 3Wf, 0 C, 4Š min

“Sơ đồ 1.4 Tổng hợp các dẫn xuất 7-Hydroxycoumarin chứa fleoride

12 Tổng quan các hợp chất amide của coumarin

1.2.1 Ging dung của hợp chất amide

Hợp chất amide là một phin quan trọng tong cấu trúc phân tử sinh học, giúp tao

các phân tử sinh học khác [26, 27] vực y học, liên kết amide hiện diện tong các nhóm thuốc quan trọng Phản

tg sống của peptide, protein và vôi

ứng tạo thành amide là phản ứng phổ biến nhất được thực hiện trong ngành công nghiệp

<uge phim và các loại thuốc có chữa nhóm amide được bán trên thị trường [28-31]

Liên kết amide hiện diện trong các nhóm thuốc quan trong nhw: Saquinavir trong điều

tr HIV/AIDS: Aliskiren (in thương mại là Novaris) gay te ché renin peptidimetic, ding

để điều trì tăng huyết áp: Atorasatir ngân ngừa bệnh tìm mgch; Lisinopril úc chế men điều trị đau thất ngực và tăng huyết áp (Hình 1.5) [32, 3

Hinh 1.5 Cấu trúc các hợp chất có chứa liên kết amide

Bên cạnh đó, năm 2018, D Liu và các cộng sự đã chứng mình các dẫn xuất chrysin amino acid 1 (Sad 15) th hiện khá năng cÌ

303 và đồng tế io MFC Ngoài ra, các hợp chất này còn có vai trồ trong điều tị kháng tng sinh tốthơn các dòng tổ bào MGC- viêm, chẳng ung thự, chống oxy hóa và ngăn chặn sự phân cắt DNA [34]

4 isopropanol kon 2H

HÀ Aye co 1 E86) hoại ome whys ore ee

` A kế

Sơ đồ 1.5 Tổng hợp các dẫn xuất chrysin amino acid

Bang 1 Giá trị Ca của đẫn xuất chrysin amino acid với bai đồng tẾ bào

5

ota

Hinh 1.6 Cée din xudt cia diphenyl pyrimidine

“Trong số đó, hợp chất 12b, trong đó có nhóm thé L-proline, duge xée dinh Ia chat

ức chế BTK mạnh nhất, với ICo = 8.7 pM Đẳng thị

tw đối với ế bào B các đồng tế bảo ng thư hạch đưới dạng iözurinb và th hiện tính gây

Năm 2020, C Dong cùng cộng sự đã nghiên cứu phương pháp tổng hợp các dẫn

12b cũng thể hiện hoạt động tương

o thấp chống lại các

xuit amide cia 18b-ghyeyrrhetinic acid e6 boot tính giống như thuốc ức chễ tế bào ung thự ALK (Sơ đồ 1.6) Trong cẫu trúc cia 18b-ghycyrrherinic acid o6 gin efe nhém phân cực -OH và -COOH có th tác động đến thành tế bào vi khuẩn và tế bào ung thư Nhờ vậy, HepG-2, Karpas-299, PC-3 Trong các hợp chất tạo thành hợp chắt lớa có hoạt tính ức chế vừa phải chồng lại ALK với IC«: giá trị 203.56 nM và tương đối yếu đối với c-Met (ACs > 1000nM) [36].

hydrochloride: (EDC), N-[(Dimethylamino)-1H- ›-triazolo-[4,5-b]pyridin- 1~

ylmethylene}-N-methylmethanaminium hexafluorophosphate N-oxide (HATU), 1.1’=

Bortezomib là thuốc chống ung thir hing đầu được sử dụng để

cứu đã nghiên cứu nhiều phương

nhân mắc bệnh u tủy và u lympho tế ào Các nhà nghị

pháp tổng hợp khác nhau để tổng hợp Bortezomib với hiệu suất cao Năm 2009, Andrey S Ivanov cing cộng sự đã tiến hành tổng hợp Bortezomib từ phản ứng ghép cặp giữa N-

pyrazinoyl-L-phenylalanine 18 va mudi ammonium 17, sử dụng xúc tác TBTU trong DCM

và DIPEA đạt hiệu suất 83% (Sơ để 1.8) [37]

‘So dé 1.8 So dé tong hop Bortezomib cé sic dung xúc tác TBTU

im 2017, Liena Qin cing cOng sự sir dung khung benzofuran va 2.3-

(6) NAOH (2 M, 40 equiv), THE.MEOH-HLO, rỉ

(eh amis © (U.S equiv.) TBTU (1.2 equiv), triethyl amine

Inamoyl từ dẫn xuất của cinnamic acid tạo thành hợp chit này có tính kháng oxy

hóa và kháng tyrosinase sit dung EDC làm xúc tác trong dung môi DMF giúp loại DPPH (2.2-liphenyl-I-pierylhydrazyl) cho hiệu suất từ 48-86% (Sơ để 1.10) [39]

tà «em coeHoei Sots W

Re te °

Sơ đồ 1.10 Tầng hợp N-hydraxycinnamoyl amina acid amide etliyl ester'

Năm 2023, N Yadav cùng với cộng sự đã sử dụng khung coumain để tổng hợp các dẫn xuất amide có khả năng te cl pase của tuyển tụy (PL) tire

So

(0) K:C0s, 0, RT, 20%

(b) AN, EDC HCI, HOBK, DIPEA, DME, 0°C, 15.208

Sw db 1.11 So db tang hop ede din xuét amide 24 1.23 Téng hop hop chit amide chira khung 7-hydroxycoumarin

Do hoạt tính sinh học phong phi cia dj vong coumarin va nhóm amide, các nhà khoa

"học đã nghiên cứu kết hợp hai nhóm hợp chất này trong cùng một cấu trúc

Cụ thể như năm 2014, M Saeedi cùng với các công sự tổng hợp ra một số dẫn xuất

amide có chứa các gốc coumarin, trong đó có hợp chất 22 có hoạt tính chống oxy hóa

(ĐPPH) mạnh nhất (ICs) = 0.94 0.01 mM) tc chit nén 4-bromoaniline va 2-chloroacetyl

amide 21, tiếp tục ti hành phán ứng véi 7-hydroxy-2H-chromen-2-one trong môi trường amide 22 chứa đị vòng coumarin (Sơ đổ 1.12) [41]

Nam 2021, W Phutdhawong cùng với cộng sự tiến hành tổng hợp thành công các

dẫn xuất amide của coumarin-3-carboxamide từ 24#-dihydroxy benzyldehyde và 3-

hydroxy- -methylbut-1-ene bing alkyl hóa Eriedkl

để thu aldehyde với hiệu suất 53% Aldehyde 31 thực hiện đóng vòng pyrano thông qua

phản ứng với malonie acid thu được dẫn xuất coumarin 32 TiẾp ục phản ứng tạo amide

"hợp các dẫn xuất amide 33 thu được từ 43-51% (Sơ đổ 1.15) [44]

dioxane, 1, 2.55 34 (53%)

Ho on Pyridine, anne mình

So dé 1.15 Ting hop cée din xudt 33 theo Phutdhawong

1.3 Các tác nhân ghép cặp amide thường được sử dụng

Hiện nay có rất nhiều các tác nhân ghép cặp khác nhau được sự dụng sử dụng như:

N.N'-dieyclohexylearbodiimide (DCC), ethyl 3 carbodiimide hydrochloride (EDC),N- (dimethylamino)-14-1

fimethylaminopropyl)- -iazolo[4,5-b]pyridin-

nhân ghép cặp hình thành liên kết amide thông qua nghiên

năm 2009 tổng hợp thành công hợp chất odanacab 36 có khả năng ức chế cathepsin K dé

điều tr chứng loãng xương Quá tình thực hiện phản ứng ghếp cặp hợp chit 34 va

eyclopropylamine:HCI 3§ đã được thực hiện ở các điều kiện và tác nhân ghép cặp khác

nhau Chẳng hạn như khỉ thực hiện sử dụng tác nhân (COCD)›, SOCI; hoặc hình thành

n hảnh đổi tác nhân khác, cụ th lung môi DMAc ở 3°C Sau đó cho thêm

“Sau đồ nhóm nghiên cứu

HATU có thêm ¡-Pr:NEt trong 1.5 giờ trời

dung dich odanacatb trong dung môi THP/nước để thu được sản phẩm ghép cặp với hiệu

Sơ đồ 1.16 Sơ đồ tổng hợp hợp chất OẢanacatÐ 36 thông qua tác nhân HATU XMột ví dụ khác về sự hình thành iên kết amide thông qua tác nhân HATU thông qua kết quả của nhóm nghiên cứu S ikal năm 2013 về việc tổng hợp thành công hợp chất 39

có khả năng ức chế sự xâm nhập của HIV Đầu tiên, phan ứng kết hợp giữa -keto acid 37

và pipeidine 38, dựa trên các tà liệu nghiên cứu trước trên chất nền tương tự, nhóm đã

nhưng không thụ được sản phẩm như mong muốn Sau đó tiếp tục thử nghiệm ghép cặp amide với (COCI); nhưng thu được hợp chất 39 với hiệu suất 20 và tạo ra nhiều sản phẩm phụ Cuỗi cùng nhóm tiến hành đổi phản ứng ghép cặp giữa 37 và 38 sử dụng tác nhân

Bên cạnh HATU, DCC cũng là một tác nhân được sử dụng trong phản ứng ghép cặp

amide được sử dụng từ lâu Cụ thể như phản ứng tổng hợp hợp chất 42 được thực hiện bởi

nhóm nghiên cứu của M Prishad có khả năng kháng thụ th tachykinin NK-1 ở người điều

chuyển từ sử dụng N-Boc-L-proline và hợp chất 41 qua thực hiện với các dẫn xuất ”~ proline 40 với 41 sử dụng IBCE, HBTU hoặc 2.2-dithiobis(benzothiazole) để hạn chế quá

học xanh Còn khi thực hiện phản ứng sử dụng tác nhân EDC thu được hiệu suất cao nhưng

shỉ phí hục hiện quá cao Cuỗi cùng nhóm thực hiện phản ứng giữa hợp chất 40 và 41 với

81% (So dé 1.18) [47]

4h véi hiệu suất lên đ

“ ° =1 «

Sordi 1.19, So db ting hop anide 4Š sử dạng tác nhân DCC 14⁄2, Tác nhân EDC

Năm 2002, T to cũng nhóm nghiên cứu đã sử dụng EDC/HOBI để kết hợp acid 48 với +aninopiperidine 47 thông qua acid chiride được to a từ (COCD: hoặc SOCTI; thụ cđược hợp chất 49 với hiệu suất đạt 71794 nhưng bị ảnh hướng bởi độ hút m của hai chất môi DMF thủ được sản phẩm với hiệu suất eao hơn, tiếp tục tiền hành thực hiện phản ứng

trong quy mô nhà mấy thú được sân phẩm amide 49 với hiệu xuấtlên đến 76% (Sed 1.20)

CHiCh véi lượng EDC và HOBt bằng nhau thú được hợp chất 52 với hiệu suất 91 Sau

đó thực hiện phản ứng tiếp tục với tác nhân EDC có sự có mặt của HOBI trong môi trường

ước trong vòng 3h thu được hợp chất 53 với hiệu sắt lên đến 81% (Sơ đỗ E27) [50]

BocHN coe cai = coc il 4

Me ©

so n 201%)

eoe,HoBL Ho | Ì_ com 06%, L8 3h bn

sen

So dé 1.21 Sơ đồ ting hop amide 53 sử dụng tác nhân EDC

CHUONG 2: THUC NGHIEM 2.1, Hóa chất

“Các hoá chất được mua từ hãng Ac Aladin, Chemsol, Energy Chemical, Fischer

‘Chemical, Merck, Meryer vi Sigma-Aldrich ddu được sử dụng trực tiếp mà không qua nh chế Dung môi chiết, sắc ký cột được mua từ hãng Chemool

2.2 Phương pháp nghiên cứu cấu trúc các hợp chất tổng hợp được

3.2.1 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 'H vi “C-NMR

Cấu trúc phân tử các dẫn xuất được xác nhận qua thông tin từ các phổ cộng hưởng từ

một chiều được ghi trên máy NMR BRUCKER 600 MHz ('H) và 600 MHz ('H) va 150

MHz ('C) tại phòng NMR, Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt

[Nam và Khoa Hóa học ~ Trường Đại học Khoa học Tự nhí — Đại học Quốc gia Hà Nội

2.2.2 Phố khối lượng HR-MS

Phin từ khối cũa dẫn xuất tổng hợp được xác nhận qua thông ứn từ phổ khối lượng HR-MS được ghi trên máy LC-MS/MS IT-TOE Shimadzn, thực hí

2.3 Đánh giá khả năng ức chế tẾ bào ung thư bằng phương pháp MTT

Dong té bio MCE-7 và HepG2 sau khi thu sẽ được nuôi cấy trên đĩa 96 giếng trong môi trường bám dính 2D ở mật độ 5 x 10° té bào/giết thề tích nuôi cấy là 100 uL/ ng

“Sau 48h nuôi cấy, các tế bào bám dính hoàn toàn trên bề mặt và đạt 1/3 diện tích bề mặt

tì tên hành xử lý với dung dịch mẫu thử theo các bước sau:

- Loại bỏ môi trường nuôi cấy cũ, rửa bề mặt đĩa nuôi cấy với PBS 1X (Phosphate

Buffered Saline 1X ~ Đệm muỗi phosphate 1X),

~ Bổ sung môi trường nuôi cấy mới chứa dung dịch mẫu thử (đung dịch chứa dẫn xuất đđa tổng hợp) có nồng độ từ 0, 100, 200, 500, 1000, 2000 pg/mL Giống đối chứng được xử ý với lượng DMSO tương ứng Ý bào được mui cấy trong 48h ở điều kiện 37*C, 5 % CO› và độ âm 95 %, sau đó được tiền hành phân tích sự tăng lào bằng phương pháp MTT theo các bước sau:

- Loại bỏ môi trường cũ, bổ sung 100 uL môi trường mui cấy mới chứa 10% MTT (3-45-dimethylthiazol-2-y)-2,5-diphenyltetrazoliom bromide) $ mg/mL va i dia nudi sấy ở 37 *C tong 4h, tránh sánh sáng

- Loại bỏ môi trường chứa MT, bổ sung 100 l DMSO/giếng

~ Đo một độ quang OD ở bước sóng 570 nm trên mấy quang phỏ (Molickan Sky của Thermo) Mỗi nồng độ lặp lại 5 giếng cho mỗi thí nghiệm

bảo được tính theo công thức:

0D của tế bào bị xử lý x 100 0P tế hào đối chứng âm (negative)

“Trong đó, đối chứng % tăng sinh tế bào = âm là tế bào không bị xử lý với dung dịch mẫu th,

Giá trị ICso của môi dòng tế bào được tính dựa trên mức độ hắp thụ OD bằng phải

mềm chuyén dung GraphPad Prism 5.0 theo hướng dẫn của nhà sản xuất Phân tích thống

kẻ bằng kiểm định Mana- Wishney

2.4 Quy trình thực ng

2.3.1 Tổng hgp 7-hydroxy-4-coumarin acetic acid L1

‘COOH +/ Hạ§O, 70°C, 30 phút HO 5

dlén pH = 3 Rta ké tia vi nude lamb thu drge sin phim LA (5.2 g 50%) e6 dang chit tắn màu vàng nhạt

được hòa tan trong THF (0.2 mL) Sau đó, hỗn hợp được thêm tiếp các amine (0.1 mmol)

và HATU (46.5 mg, 0.12mmol) Hỗn hợp phản ứng được khuấy ở nhiệt độ phòng trong

giờ Hỗn hợp sau phan ứng được chiết với ethyl acetate (3 x 30 ml) Pha hữu cơ được làm khan bằng Na:SO, và cô quay đưới áp suất thấp để loại bỏ dung môi thu được sản phẩm thô Tính chế sn phẩm thô bằng phương pháp sắc ký cột siiea gel pha thường (H: EA

4 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 3.61 (s, 2H), 3.08 (4d, / = 54, IMR (150 MHz, DMSO-d): 8 167.3, 161.2,

4,24 Hz, 1H), 6.71 (d,

7.2, Hz, 2H), 1.02 (1, = 7.2 Hz, 3H); 8C-