BÁO CÁO SINH HÓA BUỔI 4

GLUCIDEThí nghiệm 1: Định tính monosaccharide bằng phản ứng tráng gương Tiến trình: _Lấy 1 ống nghiệm, cho vào đó 1ml AgNO3 5% và từng giọt NH4OH đặc để tạo thành kết tủa.. Trong phân tử

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG THƯƠNG TP HỒ CHÍ MIN H

KHOA SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG

BÁO CÁO THỰC HÀNH MÔN SINH HÓA

Bài 4 GLUCIDE

Thí nghiệm 1: Định tính monosaccharide bằng phản ứng tráng gương

Tiến trình:

_Lấy 1 ống nghiệm, cho vào đó 1ml AgNO3 5% và từng giọt NH4OH đặc để tạo thành kết tủa _Sau đó, thêm thừ từ NH4OH cho đến khi kết tủa tan hoàn toàn( không cho thừa NH4OH) _Tiếp tục cho 3ml glucose 5%, đun sôi trong 1 phút

Kết quả: Có màu sáng bạc bám lên thành ống nghiệm

Giải thích:

Glucose có nhóm -CH=O nên có khả năng tham gia phản

ứng tráng bạc

Hình 2: Ống nghiệm 1,2 và 3

_Glucose bị oxi hoá bởi dung dịch AgNO3 trong môi trường NH3 tạo thành muối amino gluconat và giải phóng kim loại bạc bám vào thành ống nghiệm

Thí nghiệm 2: Xác định tính chất khử của glucide bằng phản ứng Fehling

Tiến trình:

_Lấy 3 ống nghiệm, đánh số 1,2 và 3, cho vào:

+ Ống nghiệm 1: 1ml glucose 1%

+ Ống nghiệm 2: 1ml maltose 1%

+ Ống nghiệm 3: 1ml saccharose 1%

Thêm vào mỗi ống 1ml thuốc thử Fehling, đun sôi trong 2 phút trên ngọn lửa đèn cồn

Kết quả:

Ống nghiệm Kết quả quan sát

Ống nghiệm

1

Xuất hiện màu đỏ nâu

đậm Ống nghiệm

2

Xuất hiện màu đỏ nâu

nhạt Ống nghiệm

Giải thích:

Hình 1: Xuất hiện bạc bám lên thành ống nghiệm

_Ống nghiệm 1 và 2: Trong thành phần của thuốc thử Fehling có chứa ion Cu2+ Các đường sẽ tác dụng với ion Cu2+ có trong thuốc thử tạo thành phức màu xanh Trong phân tử Glucose có chứa nhóm CHO nó sẽ phản ứng với ion Cu2+ giống như adehit hoặc axeton dễ phản ứng khử tạo kết tủa Cu2O màu đỏ gạch bám lên thành và đáy ống nghiệm Từ đó ta có thể thấy ống nghiệm chứa glucose và ống nghiệm chứa maltose sẽ xuất hiện kết tủa đỏ gạch nhưng ống nghiệm 2 kết tủa xuất hiện chậm hơn ở ống nghiệm 1

_Ống nghiệm 3: Saccharose không đổi màu( màu xanh dương nước biển) do nó có cấu tạo từ glucose và fructose, loại monosaccharit này liên kết với nhau từ hai nhóm -OH gluzit của chúng nên không có tính khử Ngoài ra, saccharose tham gia phản ứng với Cu2+ tạo thành phức có màu xanh đặc trưng thể hiện tính chất của rượu đa chức Nhưng do không tham gia mở vòng nữa nên không có nhóm CHO, vì vậy dù có dư Cu2+ thì cũng không tạo thành Cu2O cho nên dung dịch giữ nguyên màu sắc của Cu2+ với saccharose

Thí nghiệm 3: Xác định đường cetose bằng phản ứng

Seliwanoff

Tiến trình:

_Lấy 2 ống nghiệm, đánh số 1 và 2, cho vào:

Hình 3: Ống nghiệm 1 và 2

_Ống nghiệm 1: 1mL glucose 1%

_Ống nghiệm 2: 1mL fructose 1%

_Thêm vào mỗi ống 5 giọt thuốc thử Seliwanoff, đun sôi kỹ trên ngọn lửa đèn cồn

Kết quả:

Ống nghiệm Kết quả quan sát

Ống nghiệm

1 Glucose có màu vàng rất nhạt Ống nghiệm

2

Fructose có màu đỏ gạch

đậm Giải thích:

_Ống nghiệm 1 có màu vàng rất nhạt các aldose cũng có

thể tạo thành hydroxymetyl - furfural khi đun nóng với acid, nhưng phản ứng xảy ra rất chậm _Ống nghiệm 2 xuất hiện màu đỏ gạch đậm vì dưới tác dụng của HCl và t° các cetol hexose và cetol pentose tạo thành hydroxy methyl fufutal và fufural Các chất này ngưng tụ với resorxinol tạo sản phẩm ngưng tụ có màu đỏ gạch đậm

Thí nghiệm 4: Thủy phân tinh bột bằng acid HCl

Tiến trình:

Hình 4: Ống nghiệm 1 đến 5

_Lấy 4 ống nghiệm, đánh số 1 – 4, cho vào mỗi ống 1mL nước cất và 2 giọt thuốc thử Liugol, lắc đều

_Lấy 1 ống nghiệm khác đánh số 5, cho vào 3mL tinh bột 1% và 3 giọt HCl đặc, lắc đều, đem đun trên nồi cách thủy sôi Đây là dung dịch thủy phân tinh bột (1)

_Kể từ khi nước trong nồi cách thủy bắt đầu đạt 800C:

+ Sau 1 phút lấy ra 1 giọt dung dịch (1) cho vào ống 1, lắc đều

+ Sau 3 phút lấy ra 1 giọt dung dịch (1) cho vào ống 2, lắc đều

+ Sau 5 phút lấy ra 1 giọt dung dịch (1) cho vào ống 3, lắc đều

+ Sau 10 phút lấy ra 1 giọt dung dịch (1) cho vào ống 4, lắc đều

_Quan sát màu ống 4, nếu dung dịch có màu vàng nhạt thì chứng tỏ quá trình thủy phân tinh bột kết thúc

_Lấy ống 5 ra khỏi nồi cách thủy, để nguội Cho vào đó vài giọt NaOH 10% để trung hòa dịch thủy phân

_Sau đó cho 1 lượng thuốc thử Fehling tương đương với lượng dịch (1) có trong ống, đun sôi 3 phút trên đèn cồn, quan sát sự tạo thành kết tủa

Kết quả:

Ống nghiệm Kết quả quan

sát

Ống nghiệm

1

Nâu đen

Ống nghiệm

2

Nâu sẫm

Ống nghiệm

3

Nâu

Ống nghiệm

4

Vàng nâu

Ống nghiệm

5

Nâu đỏ _Màu nhạt dần từ ống 1 đến ống 4, ống 5 có kết tủa màu nâu đỏ

_Ban đầu các ống có màu trắng, sau khi nhỏ 1 giọt dung dịch (1) vô sẽ bắt đầu chuyển màu Giải thích:

_Axit HCl đặc (trong ống 5) có khả năng phân hủy một phần tinh bột vì nó cho H+, nhưng chỉ phân hủy được 50% Vì tinh bột gồm có amylose và amylosepectin (nhánh 1-6 glucosidic) rất khó phá vỡ

_Khi đun nóng ống 5, lượng tinh bột còn lại sẽ được phân hủy thành glucose (đun nóng càng lâu, thủy phân càng nhiều)

_Vậy nên màu của các ống 1 – 4 không giống nhau do thời gian thủy phân của ống 5 khác nhau, chứng tỏ tinh bột dần được thủy phân dần

Thí nghiệm 5: Thủy phân đường saccharose

Tiến trình:

_Lấy 2 ống nghiệm, đánh số thứ tự 1 và 2, cho vào mỗi ống 2mL dung dịch saccharose 5% và 3 giọt HCl đặc

_Đặt cả 2 ống vào nồi cách thủy, đun sôi trong 15 phút, sau đó lấy ra để nguội

_Sau đó cho vào mỗi ống vài giọt NaOH 10% để trung hòa dịch thủy phân Kiểm tra sự trung hòa của dung dịch bằng giấy pH

Hình 5: Ống nghiệm 1 và 2

_Sau đó, cho vào:

_Ống nghiệm 1: 2mL dung dịch Fehling, đun sôi trong 3 phút

_Ống nghiệm 2: 5 giọt thuốc thử Seliwanoff, đun sôi kỹ trên ngọn lửa đèn cồn

Kết quả:

Ống nghiệm Kết quả quan sát

Ống nghiệm

1

Kết tủa màu đỏ gạch Ống nghiệm

Giải thích:

_Disaccharide được tạo thành do 2 gốc monosaccharide kết hợp với nhau qua liên kết O-glucoside Liên kết này không bền với acid và dễ bị thủy phân dưới tác dụng của acid Do đó, khi ta cho saccharose và cho HCl đặc vào thì saccharose bị thủy phân _Khi nhỏ dung dịch Fehling vào ống 1 và đun sôi thì dung dịch chuyển thành kết tủa đỏ gạch đặc trưng  Chứng minh có nhóm adehyde

_Khi nhỏ thuốc thử Seliwanoff vào ống số 2 và đun sôi thi dung dịch chuyển thành màu đỏ nhạt

 Chứng minh có nhóm ceton

Vì saccharose khi thủy phân sẽ tạo ra 2 gốc monosaccharide đó là glucose và fructose Trong glucose có chứa nhóm adehyde (CHO) nên ta phải dùng Fehling làm thuốc thử đặc trưng để định tính và fructose có chứa nhóm ceton (C=O) nên ta phải dùng Seliwanoff làm thuốc thử đặc trưng để định tính

Thí nghiệm 6: Định lượng glucose trong nước tiểu (Phương pháp Causse Bonnas)

Tiến trình:

Chuẩn độ dung dịch Fehling bằng dung dịch glucose mẫu 1%.

Cho vào bình nón 10ml dung dịch Fehling A và 10ml dung dịch Fehling B, thêm 5ml kali ferrcyanur và 25ml nước cất, đem đun sôi Khi mẫu bắt đầu sôi thì chuẩn độ bằng dung dịch

Glucose mẫu 1% đến khi chuyển sang dung dịch có màu vàng Gọi V1 là thể tích Glucose 1%

đã dùng

Chuẩn độ dung dịch Fehling bằng dung dịch nước tiểu cần định lượng glucose.

Cho vào bình tam giác 50ml nước tiểu, thêm 5ml thuốc thử courton (chì axetat), lọc lấy dịch Chuẩn độ dung dịch Fehling: Tiến hành như trên nhưng thay dung dịch glucose 1% bằng dung dịch nước tiểu đã lọc Gọi V2 là thể tích nước tiểu đã dùng

Kết quả:

Hình 6.2: Dung dịch nước tiểu sau khi cho phản ứng với chì axetat.

Hình 6.1: Dung dịch Fehling trước khi

chuẩn độ.

_Bình tam giác 1: Chuẩn độ bằng dung dịch Glucose mẫu 1%

_Bình tam giác 2: Chuẩn độ bằng dung dịch nước tiểu (đã lọc)

Lượng glucose cần thiết để khử 20mL dung dịch Fehling là:

V 1× 0.01 g=11.3 x 0.01=0.113 (g mL)

Lượng glucose chứa trong 1 lít nước tiểu là:

Nồng độ Glucose: C (g/l)=(V 1 x 0.01 x 100)/(V 2 x a) 0

Giải thích:

_Bình 2: Vì thể tích dung dịch nước tiểu dùng để chuẩn độ nhiều hơn thể tích dung dịch xác định (Fehling) mà dung dịch Fehling vẫn chưa chuyển sang màu vàng mà chỉ chuyển sang màu xanh lơ Suy ra lượng đường trong nước tiểu ~ 0

Thí nghiệm 7: Định lượng đường khử bằng phương pháp Bertrand

Tiến trình:

_Lấy 5mL nước ngọt đem đi cân cho vào bình tam giác 250ml  w

_Cho thêm 5 mL Feiling vào bình và đung sôi 3 phút

_Lọc bằng phễu Bucher, rửa phễu bằng nước cất nóng

_Loại bỏ dịch phía dưới phễu, gắn lại phễu

_Cho Fe2(SO4)3 vào phễu để hòa tan tủa, sau đó lấy dịch lọc

Kết quả quan sát

_Lấy dịch lọc chuẩn độ bằng KMnO4 1/30N, xuất hiện màu hồng 30 giây, sau đó ghi lượng KMnO4 đã dùng và tra bảng  a

Hình 7.3: Sau khi chuẩn độ bằng KMnO 4 1/30N Hình 7.2: Trước và sau khi cho Fe 2 (SO 4 ) 3 vào phễu

Hình 7.1: Trước và sau khi đung sôi 3 phút

Kết quả:

Hàm lượng đường khử: X = a ×V1×100

V × w ×1000=

6.3 ×5 ×100

100 ×4.76 × 1000=6.62× 10

−3

%

Giải thích:

_Trong thành phần của thuốc thử Fehling có chứa ion Cu2+ Các đường sẽ tác dụng với ion Cu2+

có trong thuốc thử tạo thành phức màu xanh Trong nước ngọt có phân tử Glucose có chứa nhóm CHO nó sẽ phản ứng với ion Cu2+ giống như adehit hoặc axeton dễ phản ứng khử tạo kết tủa Cu2O màu đỏ gạch

_Để định lượng Cu2O tạo thành, trước hết oxy hóa nó bằng Fe2(SO4)3, đồng I (Cu+) bị oxy hóa trở lại đồng II (Cu2+), còn sắt III (Fe3+) bị khử thành sắt II (Fe2+)

Cu2O + Fe2(SO4)3 + 4H2SO4  2CuSO4 + 2FeSO4 + H2O Lượng sắt II (Fe2+) tạo thành được xác định bằng cách oxy hóa nhờ dung dịch KMnO4 trong môi trường acid

10FeSO4 + 2KMnO4 + 8H2SO4  5Fe2(SO4)3 + 2MnSO4 + K2SO4 + 8H2O

Từ lượng KMnO4 tiêu tốn trong chuẩn độ, có thể tính được lượng đồng I oxyde và từ đó tính được hàm lượng đường trong dung dịch bằng cách tra bảng tỷ lệ giữa lượng đồng và đường khử của Bertrand