phạm thị xuân quỳnh nghiên cứu phát triển sản phẩm dầu xoa bóp từ tinh dầu chùa dù tại xã tả phìn sa pa lào cai

SA PA, LÀO CAI

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Hà Nội - 2024

Nơi thực hiện:

1 Bộ môn Thực vật

Hà Nội – 2024

LỜI CẢM ƠN

Để hoàn thiện khóa luận, tôi đã được rất nhiều sự chỉ bảo tận tình của thầy cô, sự giúp đỡ của anh chị, các bạn, các em và gia đình

Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin được gửi lời cảm ơn chân thành tới

PGS TS Trần Văn Ơn, ThS Lê Thiên Kim người thầy đã trực tiếp hướng dẫn tôi

trong quá trình thực hiện và hoàn thành khóa luận Thầy đã chỉ dạy cho tôi về cách tư duy, xử lý vấn đề, hướng dẫn tôi xây dựng phương pháp nghiên cứu và cho tôi những lời khuyên giá trị cũng như động viên tôi rất nhiều trong quá trình làm thực nghiệm và xử lý kết quả nghiên cứu

Bên cạnh đó, trong quá trình thực hiện khóa luận, tôi còn nhận được sự chỉ bảo tận tình của các thầy cô tại Bộ môn Thực Vật, sự giúp đỡ của các anh chị, các bạn, các em và sự động viên từ gia đình Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến:

TS Nguyễn Thu Hằng, TS Phạm Đức Vịnh, TS Nguyễn Đức Thiện người

hỗ trợ, đồng hành cũng như đã hướng dẫn và giải đáp thắc mắc của tôi trong quá trình nghiên cứu

Bộ môn Vật lý – Khoa Khoa học cơ bản đã tạo điều kiện cho tôi thực hiện

phần thực nghiệm

Các bạn cùng nghiên cứu: Nguyễn Thị Ngọc Hân, Đỗ Bích Hằng cùng các em: Trần Khánh Linh, Nguyễn Minh Quý đã giúp đỡ, động viên tôi trong quá trình

làm thực nghiệm Cùng các bạn tình nguyện viên đã tham gia khảo sát sản phẩm

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn các thầy cô Trường Đại học Dược Hà Nội đã dìu dắt tôi trong suốt 5 năm qua, cảm ơn gia đình, bạn bè đã ủng hộ tôi trong quãng thời gian sinh viên

Cuối cùng, tôi xin cảm ơn chính bản thân vì đã nỗ lực, cố gắng trong suốt quá trình thực hiện khóa luận

Hà Nội, ngày 03 tháng 06 năm 2024

Sinh viên

Phạm Thị Xuân Quỳnh

MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN

MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG

DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 2

1.1 Tổng quan về tinh dầu Chùa dù 2

1.1.1 Nguồn gốc nguyên liệu 2

1.1.2 Thành phần tinh dầu Chùa dù 2

1.1.3 Công dụng tinh dầu Chùa dù 3

1.1.4 Sản xuất tinh dầu Chùa dù 4

1.1.5 Một số sản phẩm từ cây Chùa dù 5

1.2 Tổng quan về viêm 5

1.2.1 Khái niệm 5

1.2.2 Nguyên nhân gây viêm 6

1.2.3 Phân loại viêm 6

1.2.4 Các chất trung gian hóa học gây viêm 6

1.3 Tổng quan về các sản phẩm dầu xoa bóp và nguyên liệu 7

1.3.1 Khái niệm 7

1.3.2 Thành phần trong dầu xoa bóp 7

1.3.3 Kỹ thuật bào chế 10

1.3.4 Một số sản phẩm dầu xoa bóp trên thị trường 10

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13

2.1 Đối tượng, nguyên liệu và thiết bị nghiên cứu 13

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 13

2.1.2 Nguyên liệu nghiên cứu 13

2.1.3 Thiết bị, dụng cụ, hoá chất 13

2.2 Phương pháp nghiên cứu 14

2.2.1 Xây dựng công thức và bào chế thử nghiệm sản phẩm dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù 14

2.2.2 Đánh giá một số yếu tố thị trường của sản phẩm dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù 18 2.2.3 Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở sản phẩm dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù 19

CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN 21

3.1 Xây dựng công thức và bào chế thử nghiệm sản phẩm giảm đau chứa tinh dầu Chùa dù tại xã Tả Phìn, Sa Pa, Lào Cai 21

3.1.1 Lựa chọn thành phần công thức 21

3.1.2 Lập công thức và bào chế thử nghiệm 21

3.1.3 Đánh giá tác dụng chống viêm thông qua định lượng giải phóng nitric oxyde (NO) 24

3.2 Kết quả đánh giá một số yếu tố thị trường của sản phẩm giảm đau chứa tinh dầu Chùa dù 25

3.2.1 Thông tin cơ bản của người cung cấp tin 25

3.2.2 Thông tin về sức khỏe 26

3.2.3 Thông tin về các biện pháp chăm sóc sức khỏe 27

3.2.4 Thông tin phản hồi về sản phẩm nghiên cứu 29

3.3 Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở sản phẩm giảm đau chứa tinh dầu Chùa dù 30

4.2 Bàn luận về các vấn đề thị trường của sản phẩm 38

4.2.1 Bàn luận về giá của sản phẩm 38

4.2.2 Bàn luận về tính khả thi của sản phẩm 39

4.3 Mô hình CANVAS của sản phẩm thử nghiệm 43

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 44

TÀI LIỆU THAM KHẢO 45

PHỤ LỤC 49

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

TNF-α Yếu tố hoại tử khối u alpha

DANH MỤC BẢNG

Bảng 1.1 Thông tin một số sản phẩm dầu xoa bóp trên thị trường 11

Bảng 1.2 Thống kê thành phần một số sản phẩm dầu xoa bóp trên thị trường 12

Bảng 2.1 Bảng khảo sát công thức thử nghiệm ban đầu 16

Bảng 3.1 Công thức tương đối giữa các pha 21

Bảng 3.2 Kết quả điểm số trung bình hài lòng của 5 người tình nguyện đối với 3 công thức thử nghiệm 23

Bảng 3.3 Thành phần công thức sản phẩm đã lựa chọn 24

Bảng 3.4 Giá trị ức chế 50% (IC50) của các dược liệu trên giải phóng NO từ đại thực bào phúc mạc 24

Bảng 3.5 Ảnh hưởng của cao chiết dược liệu đến tỷ lệ sống của đại thực bào 25

Bảng 3.6 Đặc điểm chung của người tình nguyện 25

Bảng 3.7 Kết quả đánh giá khảo sát sản phẩm 29

Bảng 3.8 Kết quả đo khối lượng của sản phẩm (10ml) 30

Bảng 3.9 Thời gian chảy của nước cất trong ống Ostwald 30

Bảng 3.10 Thời gian chảy của mẫu thử trong ống Ostwald 30

Bảng 3.11 Kết quả góc quay cực của sản phẩm 31

Bảng 3.12 Kết quả đánh giá chỉ số acid của mẫu sản phẩm 32

Bảng 3.13 Kết quả đánh giá chỉ số peroxyd của mẫu sản phẩm 33

Bảng 3.14 Tiêu chuẩn cơ sở sản phẩm đề xuất 34

Bảng 4.1 So sánh ưu nhược điểm sản phẩm nghiên cứu với các sản phẩm khác 36

Bảng 4.2 Tính toán sơ bộ giá thành sản phẩm (cỡ lô 100 hộp 10ml) 38

Bảng 4.3 Phân tích SWOT 39

Bảng 4.4 Các chiến lược đề xuất 40

Bảng 4.5 Phân tích PEST 41

Bảng 4.6 Mô hình CANVAS 43

DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ

Hình 1 1 Chuỗi giá trị của Chùa dù tại Lào Cai 5

Hình 1 2 Một số sản phẩm có chứa tinh dầu Chùa dù 5

Hình 2.1 Quy trình bào chế sản phẩm 16

Hình 3.1 Một số hình ảnh sản phẩm bào chế thử nghiệm 22

Hình 3.2 Kết quả tần suất vận động, tập thê dục của nhóm người tình nguyện 26

Hình 3.3 Kết quả tần suất đau nhức xương khớp hoặc đau do căng cơ, vận động,….của người tình nguyện 26

Hình 3.4 Vị trí đau nhức thường gặp trên người tình nguyện 27

Hình 3.5 Tình trạng cơn đau đi kèm viêm trên người tình nguyện 27

Hình 3.6 Khảo sát các biện pháp giảm đau 28

Hình 3.7 Khảo sát mong muốn về thành phần dầu xoa bóp 28

Hình 3.8 Khảo sát mức độ chi trả sản phẩm 29

Hình 3.9 Kết quả chồng của phổ Chùa dù và Sản phẩm xoa bóp 32

ĐẶT VẤN ĐỀ

Chùa dù (Elsholtzia penduliflora W W Smith) còn được gọi là Kinh giới rủ, là

loài cây dại mọc nhiều ở rừng và đồi nương[10], [52] Cây có vị cay, đắng, mùi thơm, tính ấm, có tác dụng lợi tiểu, giải nhiệt, giảm đau và sát khuẩn [55], [56] Tại xã Tả Phìn, thị trấn Sapa, Lào Cai, người dân địa phương từ lâu đã sử dụng Chùa dù trong chăm sóc sức khỏe để trị các bệnh thông thường như ho, viêm họng, sốt, cảm cúm, đặc biệt là dùng lá Chùa dù sau khi bóp nát được đắp lên vết thương giúp giảm tình trạng sưng đau, cũng có thể được ngâm làm rượu thuốc

Hiện nay, cây Chùa dù được trồng khá phổ biến tại thị xã Sa Pa, đặc biệt tại hai xã Tả Phìn và xã Ngũ Chỉ Sơn với tổng diện tích khoảng 50 ha Cây có đặc tính dễ trồng, không cần nhiều công chăm sóc, có thể trồng trên đất dốc, khả năng chịu lạnh tốt, phù hợp với khí hậu địa phương Mỗi một ha trồng cây Chùa dù có thể thu được trên 13 tấn nguyên liệu, mỗi một tấn có thể chiết xuất được khoảng 1 đến 3 lít tinh dầu Tinh dầu chùa dù có tác dụng trị các chứng đau nhức khi xoa bóp ngoài da, xông hơi giải cảm, xua đuổi côn trùng, là thành phần của bài thuốc chữa sốt rét, cảm cúm [55], [56] Trong tinh dầu Chùa dù, thành phần chính là 1,8-cineol (trên 50%) cũng có nhiều đặc tính: kháng khuẩn, kháng viêm, chống oxy hóa, long đờm,… [3], [28], [37], [53]

Công ty CP kinh doanh các sản phẩm bản địa Sa Pa (SapaNapro) là một đơn vị doanh nghiệp cộng đồng tại xã Tả Phìn, thị xã Sa Pa, tỉnh Lào Cai Từ lâu doanh nghiệp này đã nhân giống và phát triển các vùng trồng Chùa dù, từ đó chiết xuất tinh dầu và sử dụng để pha chế nhiều dòng sản phẩm bản phẩm bản địa khác nhau tại công ty (cao tắm lá thuốc người Dao Đỏ, gói xông, nước ngâm chân, tinh dầu treo xe,…), được phân phối theo nhiều kênh thị trường khác nhau, bao gồm cả xuất khẩu Tuy nhiên, riêng đối với dòng sản phẩm xoa bóp giảm đau, hiện nay trên thị trường Sa Pa nói chung, tại công ty SapaNapro nói riêng, việc sử dụng tinh dầu Chùa dù mới chỉ được dùng ở dạng nguyên chất, không đáp ứng được các yêu cầu mà thị hiếu người tiêu dùng đặt ra (như giá thành vừa phải, mùi hương dễ chịu, chăm sóc làm mềm da, giảm đau mà không bị nóng rát, )

Từ những lý do trên, để đáp ứng nhu cầu thực tiễn đặt ra của thị trường, "Nghiên cứu phát triển sản phẩm giảm đau chứa tinh dầu Chùa dù tại xã Tả Phìn, Sa Pa, Lào Cai" đã được thực với 03 mục tiêu nghiên cứu:

1 Xây dựng công thức và bào chế thử nghiệm sản phẩm dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù tại xã Tả Phìn, Sa Pa, Lào Cai

2 Đánh giá một số yếu tố thị trường của sản phẩm dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù

3 Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở sản phẩm dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù

1CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan về tinh dầu Chùa dù

1.1.1 Nguồn gốc nguyên liệu

Tinh dầu Chùa dù được chiết xuất từ loài Elsholtzia penduliflora W W Smith (đồng nghĩa: Aphanochilus penduliflorus (w W Smith), thường được gọi là Chùa dù hay Kinh giới rủ, thuộc chi Elsholtzia Willd, họ Bạc hà Lamiaceae[10]

Chùa dù là cây cỏ mọc đứng, cao 100 - 200 cm Mùa hoa từ tháng 9 - 11 và mùa quả từ tháng 11 - 12 [10] Cây ưa sáng và ẩm, ở độ cao từ 1000 m trở lên, phân bố ở một số nước châu Á là Trung Quốc, Ấn Độ, Thái Lan, Việt Nam Ở Việt Nam, loài này có ở Lai Châu (Sìn Hồ, Tả Sử Chồ), Lào Cai (Sapa, Bát Xát), Hà Giang (Đồng Văn, Quản Bạ), Nghệ An (Kỳ Sơn) [10], [52],[57]

1.1.2 Thành phần tinh dầu Chùa dù

1.1.2.1 Tinh dầu Chùa dù

Cho đến nay, các nghiên cứu về thành phần hoá học của Chùa dù còn khiêm tốn, chủ yếu là nghiên cứu về tinh dầu Các công bố về thành phần hóa học cho thấy, Chùa dù có chứa tinh dầu, flavonoid, phenolic, sterol, triterpenoid và một số hợp chất khác [3]

Theo các nghiên cứu của tác giả trên thế giới cho thấy, trong tinh dầu Chùa dù ở Trung Quốc có khoảng hơn 40 hợp chất được xác định, trong đó chủ yếu là các hợp chất: 1,8-cineol (71,71%), P-pinen (7,3%), a-pinen (3,9%), sabinen (2,8%), limonen (2,4%), linalol, thymol, camphen, y-terpinen, 4-phenylbuten-1, myrcen, naphthalen, elemen, trans-caryophyllen, humulen, B-cubeben, B-dehydro elsholizion, a-terpineol, carvacrol, 1-octen-3-ol, benzaldehyd [51], [56]

Tại Việt Nam, công ty CP SapaNapro đã công bố tinh dầu dầu Chùa dù thu hái tại xã Tả Phìn, Sa Pa, Lào Cai có 23 hợp chất khác nhau trong tinh dầu Chùa dù, trong đó các thành phần chính bao gồm 1,8-cineol với hàm lượng 63,80%, Cymene 5,49%, Terpinene(g-) 3,98%, Sabinene 2,76%, Thujene 2,66%, Myrcene 1,73%, Terpinene (a-) 1,53% và nhiều thành phần có hàm lượng dưới 1% (trong phụ lục 1 đính kèm)

+ Tinh dầu tràm gió (Melaleuca cajuputi)

+ Tinh dầu bạch đàn (Eucalyptus globulus)

+ Tinh dầu sả chanh (Cymbopogon citratus)

+ Tinh dầu hương thảo (Rosmarinus officinalis)

+ Tinh dầu húng quế (Ocimum basilicum)

Với nhiều đặc tính: kháng khuẩn, kháng viêm, chống oxy hóa, long đờm,…Nổi trội nhất là đặc tính chống viêm theo những cơ chế [28], [37], [53]:

+ Ức chế các chất trung gian gây viêm: Cineol có thể ức chế sự sản xuất và hoạt động của các chất trung gian gây viêm như prostaglandin và leukotriene

+ Giảm hoạt động của các tế bào miễn dịch: Cineol có thể ức chế hoạt động của các tế bào miễn dịch gây viêm như đại thực bào và tế bào mast

+ Tăng cường sản xuất các chất chống viêm: Cineol có thể kích thích sản xuất các chất chống viêm như interleukin-10

1.1.3 Công dụng tinh dầu Chùa dù

1.1.3.1 Theo y học cổ truyền

- Tính vị và công năng: Chùa dù có vị cay đắng, mùi thơm, tính ấm, có tác dụng như phong tán hàn, giải nhiệt, chỉ thống

- Công dụng trong y học cổ truyền: Theo tài liệu thu thập được, Chùa dù được tìm thấy ở một vài nước châu Á là Trung Quốc, Thái Lan và Việt Nam [10], [51], [52] Loài này được sử dụng với nhiều công dụng khác nhau, tuy nhiên chủ yếu được dùng để chữa cảm cúm và các chứng viêm

Toàn bộ cây thường được sử dụng để tán phong, tán hàn, thanh nhiệt, giải độc, tiêu viêm, giảm đau, giảm ho Chùa dù kết hợp với các loại thuốc thảo mộc khác có tác dụng chống viêm đặc biệt tốt [56] Ngoài ra, Chùa dù còn được dùng làm thuốc điều trị bệnh đường hô hấp, chống vi khuẩn, virus, bệnh than, nhiễm trùng vết thương, viêm họng, viêm amidan, viêm màng não chứa dịch, sốt rét và dùng trong các trường hợp dự phòng và điều trị cúm, viêm nhiễm, viêm phổi, viêm vú, viêm phế quản [55]

Y học cổ truyền Trung Quốc sử dụng loài Chùa dù trong các bài thuốc chữa cúm, cảm mạo, trị các vết thương bị nhiễm trùng, chữa các bệnh viêm màng não, viêm họng, viêm amidan, viêm phổi, viêm phế quản, sốt rét Ngoài ra, Chùa dù ở Trung Quốc còn dùng trị bệnh nhiệt thán và ngoại thương cảm nhiễm Liều dùng 12-15g, dạng thuốc sắc, dùng ngoài giã cây tươi đắp, bôi [18], [2], [47], [3]

Ở Việt Nam, dược liệu Chùa dù được dùng để chữa cảm cúm, sốt, ho, tiểu tiện khó do bị viêm, tiểu tiện ra máu Ngày dùng 10 - 15 g cây khô, dùng dưới dạng thuốc sắc hay hãm Cây tươi để xông chữa cảm cúm, hoặc dùng cây tươi giã nát, đắp hay xoa bóp chỗ đau khi trẻ em họ hay sốt Tinh dầu của loài này dùng uống hay xoa bóp, có thể được dùng thay thế tinh dầu khuynh diệp và tinh dầu tràm trong một số công thức dầu xoa, cao xoa Tinh dầu Chùa dù còn có tác dụng điều trị các chứng đau và tiêu chảy, hoặc dùng pha loãng rồi xoa bóp chữa tê thấp, đau mình mẩy Rễ Chùa dù được dùng để trị sốt rét, mỗi ngày dùng 8 - 10 g dưới dạng thuốc sắc [2], [3] Ngoài ra, Chùa dù còn được người Dao đỏ ở Sapa, Lào Cai sử dụng làm một trong các thành phần của bài thuốc tắm, có tác dụng phục hồi sức khỏe cho phụ nữ sau khi sinh, người mới ốm dậy, cơ thể và sức đề kháng còn yếu, người lao động vất vả trong thời gian dài [5]

1.1.3.2 Theo y học hiện đại

Hiện nay, có rất ít công trình nghiên cứu về tác dụng sinh học của loài Chùa dù đã được công bố

Năm 2010, Zhang và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu khả năng ức chế virus gây bệnh Newcastle của tinh dầu Chùa dù trên phôi gà nuôi cấy SPF Kết quả cho thấy, tinh dầu của loài này không gây tác dụng phụ đối với phôi gà SPF và có tác dụng

ức chế hoàn toàn sự sinh sản của virus gây bệnh Newcastle trong phôi gà SPF [50]

Năm 2022, Tiến sĩ Hoàng Thị Diệu Hương công bố về tác dụng chông viêm của tinh dầu Chùa dù trong Tài luận Tiến sĩ tại Viện Dược Liệu[8]

1.1.4 Sản xuất tinh dầu Chùa dù

Chùa dù được trồng chủ yếu ở các xã Tả Phìn và Ngũ Chỉ Sơn của thị xã Sa Pa với tổng diện tích trồng khoảng 50 ha Cây có đặc tính dễ trồng, không cần nhiều công chăm sóc, có thể trồng trên đất dốc, khả năng chịu lạnh tốt, sau 10 đến 12 tháng trồng cho thu hoạch, sau đó chặt sát gốc, cây sẽ mọc lại Đất đai ở đây cũng phù hợp, cây trồng 1 lần nhưng có thể thu hoạch từ 7 đến 8 năm nên chi phí đầu tư không nhiều 1 ha trồng cây chùa dù thu được trên 13 tấn nguyên liệu, giá bán trung bình 4.000-5.000 đồng/cây tươi thu về khoảng 52 triệu/ha Trong đó, một lượng nhỏ chùa dù (10-15%) được đưa vào nấu thuốc tắm lá tươi, phục vụ khách du lịch tại chỗ của các đơn vị Lượng dược liệu tươi còn lại được đem đi chiết xuất tinh dầu Tinh dầu Chùa dù sau khi chiết xuất và tinh chế sẽ được sử dụng để pha chế một số sản phẩm chứa tinh dầu (cao tắm, tinh dầu treo xe,…) hoặc đóng chai/can Các sản phẩm sau đó được phân phối theo nhiều kênh thị trường khác nhau, bao gồm cả xuất khẩu (tuy nhiên kênh thị trường này chưa bền vững) Giá bán tinh dầu hiện tại do công ty SapaNapro cung cấp: 150.000VNĐ/lọ 10ml, 2,5 triệuVNĐ/1L Dưới đây là chuỗi giá trị Chùa dù trong hình 1.1

Hình 1 1 Chuỗi giá trị của Chùa dù tại Lào Cai

Chuỗi giá trị của Chùa dù tại Lào Cai được hình thành dựa trên sự gắn kết giữa các nhóm tác nhân: người trồng, các cơ sở chế biến, sản xuất, và các đại lý phân phối, bán hàng Tất cả các hoạt động sản xuất sơ cấp và thứ cấp diễn ra trên địa bàn tỉnh Lào Cai, tuy nhiên có ít sản phẩm đầu ra và giá trị gia tăng chưa cao Giữa các tác nhân trong chuỗi giá trị có mối quy tắc ràng buộc khá bền vững thông qua hợp đồng hoặc có ghi chép tài chính minh bạch, trong đó hai đơn vị là HTX Dao và Công ty CP SapaNapro có vai trò trung tâm trong chuỗi giá trị Ngoài ra, còn có sự hiện diện của các tác nhân có chức năng hỗ trợ, cung cấp các hàng hóa đầu vào, dịch vụ khoa học công nghệ, thông tin thị trường và tổ chức sản xuất như: các cơ quan xúc tiến đầu tư, xúc tiến thương mại, hệ thống chương trình OCOP, hệ thống ngân hàng thương mại, hệ thống cơ quan quản lý và dịch vụ nông nghiệp, các tổ chức khoa học công nghệ và tổ chức phi chính phủ

1.1.5 Một số sản phẩm từ cây Chùa dù

Cây Chùa dù được dùng làm thuốc chữa cảm cúm, sốt, ho, tiểu tiện khó do bị viêm, tiểu tiện ra máu thường được bán ra dưới dạng cây khô, sử dụng cho việc sắc hoặc hãm Với sản phẩm là cây tươi để xông chữa cảm cúm, hoặc dùng cây tươi giã nát đắp hay xoa bóp chỗ đau khi trẻ em ho hay sốt Còn rễ được bán ra để sử dụng trong việc chữa sốt rét Phổ biến nhất hiện nay là dạng tinh dầu sau khi đã được chưng cất, sử dụng trong việc đốt, xông để làm căng thẳng, lo âu hoặc dùng massage /tắm trị viêm khớp, thấp khớp, chữa buồn nôn, cảm lạnh và cảm cúm, hết đau nhức cơ bắp, hỗ trợ máu lưu thông và tiêu hóa kém

Ngoài ra, Chùa dù cũng là thành phần chính trong bài thuốc lá tắm người Dao

Hình 1 2 Một số sản phẩm có chứa tinh dầu Chùa dù 1.2 Tổng quan về viêm

1.2.1 Khái niệm

Viêm là một quá trình quan trọng trong hệ miễn dịch của cơ thể, nhằm loại bỏ hoặc sửa chữa các mô bị tổn thương và vô hiệu hóa tác nhân có hại, sau đó khôi phục

lại cân bằng nội môi Viêm không phải là một bệnh cụ thể mà là một quá trình bệnh lý chung, rất phổ biến và gặp ở nhiều bệnh khác nhau Viêm vừa là một phản ứng bảo vệ cơ thể chống lại yếu tố gây bệnh, vừa là phản ứng bệnh lý, khi đáp ứng viêm không phù hợp hoặc có sự gia tăng quá mức, viêm sẽ trở thành có hại cho cơ thể như đau đớn, tổn thương mô lành, rối loạn các chức năng cơ quan ở mức độ rất nặng nề, nguy hiểm [21], [50] Trong phản ứng viêm, các hợp chất trung gian hóa học gây viêm được giải phóng và gây ra các triệu chứng lâm sàng điển hình như sưng, nóng, đỏ và đau [46]

1.2.2 Nguyên nhân gây viêm

Viêm do nhiều nguyên nhân gây ra, có thể phân chia các nguyên nhân gây viêm thành 2 nhóm chính [9]:

a) Nguyên nhân bên ngoài - Nhiễm khuẩn: vi khuẩn, virus, nấm mốc, các kí sinh trùng tác động thông qua yếu tố hoại tử khối u alpha các độc tố, các sản phẩm chuyển hóa

- Tác nhân vật lí như: cơ học (chấn thương do va đập, vết thương kể cả vết thương vô khuẩn), nhiệt học (bỏng nóng hoặc bỏng lạnh), tia xạ, dị vật

- Tác nhân hóa học: chất hòa tan gây hoại tử tế bào và tổn thương chất gian bào (dung dịch acid, kiềm, muối, ), chất gây thực bào của bạch cầu đa nhân

b) Nguyên nhân bên trong Các nguyên nhân bên trong như hoại tử tổ chức, nghẽn mạch, xuất huyết, rối loạn thần kinh dinh dưỡng (như viêm tắc động mạch), thay đổi nội sinh của các chất gian bào (như hình thành các phức hợp miễn dịch kháng nguyên - kháng thể), phản ứng miễn dịch (quá mẫn, tự miễn)

1.2.3 Phân loại viêm

Viêm có thể chia làm 2 dạng chính là viêm cấp tính và viêm mạn tính - Viêm cấp tính là đáp ứng tức thì của hệ miễn dịch chống lại mầm bệnh và tổn thương mô Các triệu chứng của viêm cấp tính là sưng, nóng, đỏ, đau và mất chức năng hoạt động [46], [19] Viêm cấp tính diễn ra trong thời gian ngắn, và thường được coi như một biện pháp tự điều trị của cơ thể [32]

- Trong viêm mạn tính, nhiều loại cytokin và yếu tố kích thích tăng trưởng được giải phóng, dẫn đến việc tăng sinh các tế bào miễn dịch như bạch cầu lympho và nguyên bào sợi Viêm mạn tính có thể dẫn đến tổn thương mô liên tục bởi các tế bào này [13], [32].Ngoài ra, viêm mạn tính cũng có thể dẫn đến một số bệnh như viêm khớp dạng thấp, tim mạch, tiểu đường, béo phì và ung thư [12]

1.2.4 Các chất trung gian hóa học gây viêm

Có nhiều chất trung gian hoá học khác nhau cùng gây ra những đáp ứng giống nhau trong viêm cấp, được gọi là các chất khơi mào phản ứng Những chất khơi mào này sẽ gián tiếp tác dụng thông qua tác động trực tiếp của rất nhiều chất trung gian hoá học, từ đó gây ra các biểu hiện của đáp ứng viêm Một yếu tố khởi phát viêm có thể hoạt hoả một hoặc nhiều chất trung gian gây viêm

Mặc dù hệ thống chất trung gian gây viêm rất nhiều và phức tạp nhưng có thể chia thành các nhóm như sau: (1) Các chất chuyển hoá của acid arachidonic; (2) nitric oxyd (NO); (3) các acid amin hoạt mạch (histamin, serotonin); (4) các cytokin; (5) các protease huyết tương, hệ kinin, hệ bổ thể, hệ đông máu và tiêu tơ huyết; (6) các globulin miễn dịch; (7) các yếu tố hoạt hoá tiểu cầu; (8) các thành phần của lysosom (protease); (9) các gốc dẫn xuất oxy tự do và các yếu tố sinh trưởng [6], [7], [23]

Trong quá trình tiền viêm, một lượng lớn các chất trung gian tiền viêm như NO và prostaglandin được tạo ra thông qua sự điều chỉnh lên các gen gây viêm cảm ứng của iNOS và COX-2, tạo ra liên tục trong chứng viêm mạn Hiện nay, nhiều nghiên cứu trong và ngoài nước đã dùng các đích phân tử này để sàng lọc tác dụng chống

viêm in vitro, như: ức chế sản xuất NO ở tế bào RAW 264.7 gây viêm bằng LPS, ức

chế peroxid lipid, ức chế TNF- α, ức chế COX-2 trong quá trình tổng hợp prostaglandin, ức chế iNOS, Trong số các phương pháp chứng minh hiệu quả, việc kiểm tra NO là một trong những phương pháp thông dụng nhất

1.3 Tổng quan về các sản phẩm dầu xoa bóp và nguyên liệu

1.3.1 Khái niệm

Các sản phẩm xoa bóp giảm đau có thể ở dạng thuốc dầu, cao xoa, cao dán Trong đó, dạng thuốc dầu (dầu xoa bóp) là dạng bào chế đơn giản nhất, có từ lâu đời, phổ biến trong dân gian [4] Thuốc dầu thường được dùng ngoài để sát trùng, giảm đau, xông hít Rất ít thuốc dầu có thể uống được

1.3.2 Thành phần trong dầu xoa bóp

Thành phần bao gồm tinh dầu (hoạt chất), và dầu thực vật (dung môi hòa tan), có thể phối hợp thêm các thành phần khác

1.3.2.1 Thành phần hoạt chất

Thành phần hoạt chất trong dầu xoa bóp là các loại tinh dầu (hay phối hợp nhiều loại tinh dầu với nhau), hoặc hoạt chất tan trong dầu, ngoài ra còn phối hợp thêm dịch chiết dược liệu, cao chiết và tá dược nền [4] Các tinh dầu thường được sử dụng có nhiều đặc tính khác nhau, bao gồm khả năng giảm đau, giãn cơ và chống viêm, bao gồm:

- Tinh dầu màng tang: được biết đến với tên khoa học là Litsea cubeba, thường

được nhiều ứng dụng trong lĩnh vực y học và mỹ phẩm nhờ vào các đặc tính chống oxy hóa, chống vi khuẩn, chống viêm và chống nấm của nó [24], [33]

- Tinh dầu Quế [43], [44], [54]: có nhiều ứng dụng trong y học cổ truyền và hiện đại, bao gồm việc làm dịu cơ thể, giảm đau, hỗ trợ tiêu hóa, và cải thiện tuần hoàn máu

- Dầu khuynh diệp: Dầu khuynh diệp đã được nghiên cứu rộng rãi về đặc tính giảm đau và chống viêm Nghiên cứu chỉ ra rằng dầu, đặc biệt là thành phần chính 1,8-cineol (eucalyptol), có hiệu quả trong việc giảm đau và viêm Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng việc hít hoặc bôi dầu khuynh diệp tại chỗ có thể làm giảm đáng kể mức độ đau và

các dấu hiệu viêm như protein phản ứng C (CRP) và số lượng bạch cầu (WBC) trong các môi trường lâm sàng khác nhau, bao gồm phục hồi sau phẫu thuật và các tình trạng mãn tính [26]

- Dầu oải hương: Tinh dầu oải hương (LEO) đã được nghiên cứu rộng rãi về đặc tính giảm đau và chống viêm Nghiên cứu chỉ ra rằng LEO có thể làm giảm đáng kể cơn đau và chứng viêm thông qua nhiều cơ chế khác nhau

Tác dụng giảm đau: Dầu oải hương đã chứng minh được đặc tính giảm đau đáng kể trên mô hình động vật Một nghiên cứu sử dụng xét nghiệm formalin trên chuột cho thấy rằng việc điều trị trước bằng dầu oải hương làm giảm các hành vi liên quan đến cơn đau tương tự như tác dụng của tramadol và indomethacin, cả hai đều là thuốc giảm đau nổi tiếng Điều này cho thấy các thành phần của dầu oải hương, chẳng hạn như linalol và linalyl acetat, có thể có tác dụng hiệp đồng trong việc điều trị cơn đau [49]

Tác dụng chống viêm: Đặc tính chống viêm của dầu oải hương đã được nhấn mạnh trong một số nghiên cứu Một nghiên cứu đã điều tra tác động của LEO lên đại thực bào THP-1, một loại tế bào miễn dịch liên quan đến phản ứng viêm Kết quả chỉ ra rằng LEO có thể làm giảm việc sản xuất các cytokine gây viêm, là những phân tử truyền tín hiệu thúc đẩy quá trình viêm Điều này cho thấy rằng dầu oải hương có thể điều chỉnh phản ứng viêm ở cấp độ tế bào [16], [38]

- Dầu gừng: Tinh dầu gừng được chiết xuất từ cây Gừng, có tên khoa học là

Zingiber officinale (Willd.) Roscoe, được sử dụng trong nhiều thế kỷ để điều trị nhiều

tình trạng khác nhau, bao gồm cảm lạnh, sốt, rối loạn tiêu hóa, đầy hơi khó tiêu, đau bụng, nôn mửa, và tiêu chảy Đặc biệt, tinh dầu gừng đã được nghiên cứu và sử dụng rộng rãi dược phẩm với tác dụng chống oxy hóa và kháng viêm: giúp bảo vệ cơ thể khỏi tổn thương từ các gốc tự do và quá trình viêm nhiễm [20], [25] Tinh dầu gừng có chứa các hợp chất có hoạt tính sinh học như gingerol, shogaol, và zingiberene có khả năng ức chế các enzyme cyclooxygenase (COX) và lipoxygenase (LOX), là những enzyme tham gia vào quá trình viêm Ngoài ra, làm giảm sản xuất các cytokine gây viêm như interleukin-1 (IL-1), interleukin-6 (IL-6), và (TNF-α) Bên cạnh đó có tác dụng giảm đau bằng cách tác động lên hệ thống thần kinh trung ương và ngoại vi Các thành phần trong tinh dầu có thể ức chế sự truyền tín hiệu đau qua các thụ thể TRPV1 và TRPA1, giúp giảm cảm giác đau [14], [15], [30], [35]

- Tinh dầu Bạc hà [22]: thường được chiết xuất từ cây Bạc hà, có tên khoa học

là Mentha piperita được sử dụng phổ biến trong y học cổ truyền và hiện đại, có các

công dụng như làm dịu cơ thể, giảm đau, giảm căng thẳng, cải thiện tiêu hóa và hỗ trợ hệ hô hấp và phối hợp trong dầu massage

- Methyl Salicylate[34]: Methyl salicylate là một hợp chất tổng hợp có công thức hóa học là C8H8O3, còn được gọi là salicylate methyl ester Nó thường được sử dụng trong các sản phẩm dược phẩm và mỹ phẩm nhờ vào tính chất giảm đau và giảm

viêm của nó.Thường được sử dụng trong các sản phẩm giảm đau cục bộ như kem, gel, và dầu xoa bóp, cũng như trong các sản phẩm chăm sóc da như kem dưỡng và lotion

1.3.2.2 Dung môi (dầu nền)

Trong dược học cổ truyền, dung môi để bào chế dạng thuốc dầu chủ yếu là dầu thực vật, dầu parafin Dầu thực vật có vai trò vừa là dung môi hòa tan các thành phần, vừa bắt dính tốt trên da và làm mềm da Ngoài ra, do có độ nhớt cao, dầu còn làm giảm bay hơi các thành phần dễ bay hơi như tinh dầu Hiện nay, có nhiều ta dược khác có độ tinh khiết cao, khả năng ổn định tốt hơn dầu thực vật (các triglycerid mạch trung bình) [4]

- Dầu dừa chưng cất phân đoạn: là một lựa chọn phổ biến và hiệu quả làm dầu nền trong dầu xoa bóp, nhờ vào các tính chất dưỡng ẩm, làm mềm da và khả năng thẩm thấu tốt [11], [42], [45] do chứa acid béo thiết yếu và các chất dưỡng ẩm tự nhiên, giúp làm mềm và dưỡng ẩm cho da Dầu dừa thường không gây kích ứng da và phù hợp cho cả da nhạy cảm, bên cạnh đó cũng chứa các chất chống oxy hóa tự nhiên, giúp bảo vệ da khỏi sự tổn thương do tác động của môi trường

- Dầu jojoba: là một lựa chọn phổ biến và hiệu quả làm dầu nền trong dầu xoa bóp nhờ vào các tính chất dưỡng ẩm, làm mềm của acid béo và vitamin E giúp bảo vệ da khỏi tác động của các gốc tự do và tác nhân oxy hóa khác, giữ cho da khỏe mạnh và trẻ trung Dầu jojoba có cấu trúc tương tự như dầu tự nhiên của da, giúp dầu xoa bóp dễ dàng thẩm thấu và không gây tắc nghẽn lỗ chân lông, phù hợp ngay cả với da nhạy cảm [11], [41]

- Dầu Hạnh nhân: Dầu hạnh nhân là một lựa chọn phổ biến làm dầu nền trong dầu xoa bóp nhờ vào các tính chất dưỡng ẩm, giàu vitamin E và acid béo thiết yếu [31], [39] giúp da mềm mại trong thời gian dài và giảm kích ứng trên da Tương tự dầu jojoba, dầu hạnh nhân cũng cấu trúc tương tự như dầu tự nhiên của da, giúp dầu xoa bóp dễ dàng thẩm thấu và không gây tắc nghẽn lỗ chân lông

- Dầu Ớt: là một lựa chọn phổ biến làm dầu nền trong dầu xoa bóp nhờ vào các tính chất chống viêm, giảm đau và kích thích tuần hoàn máu của capsacin trong điều

trị các bệnh lý về đau nhức, chủ yếu là ở các bệnh nhân bị thoái hóa khớp [17], [36]

Bên cạnh đó, dầu ớt cũng có thể cải thiện cảm giác thư giãn và sảng khoái khi được sử

dụng trong dầu xoa bóp

- Dầu Mù u: thường được sử dụng làm một thành phần chính trong dầu xoa bóp nhờ vào các tính chất dưỡng ẩm, làm dịu da do giàu acid béo thiết yếu: acid linoleic và gamma-linoleic [29], [40], [48] Vitamin E trong dầu Mù u giúp bảo vệ da khỏi tác động của các gốc tự do và tác nhân oxy hóa khác, giữ cho da khỏe mạnh và trẻ trung cũng như có cấu trúc tương tự như dầu tự nhiên của da, giúp dầu xoa bóp dễ dàng thẩm thấu và không gây tắc nghẽn lỗ chân lông

1.3.2.3 Các thành phần khác

Ngoài dùng môi, trong thuốc dầu còn có thể thêm các chất chống oxy hóa, chất màu (tan trong dầu) như clorophyl

Sử dụng vitamin E làm chất bảo quản trong sản phẩm dầu xoa bóp là một lựa chọn tự nhiên, an toàn và phù hợp với các tiêu chí ở trên [27]

Nên sử dụng tinh dầu có độ tinh khiết cao (đã tinh chế) để tăng độ ổn định cho chế phẩm

- Hòa tan và phối hợp các thành phần: Các thành phần hoạt chất và tá dược tan được trong dung môi được hòa tan bằng cách khuấy trộn thông thường Nếu trong thành phần có nhiều tinh dầu và các chất dễ bay hơi cần hòa tan trong dụng cụ kín

Có thể phối hợp các tinh dầu và các chất làm thơm khác thành hỗn hợp rồi phối hợp vào dung môi Nhiều thành phần khi phối hợp vào nhau có thể gây chảy lỏng như menthol, camphor, dẫn tới khả năng hòa tan vào dầu sẽ nhanh hơn

Nếu có thành phần khó tan trong dầu, có thể dùng dung môi trung gian hòa tan trước khi phối hợp vào dầu

Một số dược liệu có thành phần hoạt chất tan trong dầu, vì vậy có thể chiết xuất bằng dầu bằng các phương pháp thích hợp như ngâm, hầm,

- Hoàn chỉnh thành phẩm: Thuốc dầu có thể được lọc qua màng lọc PTFF có kích thước 1-10 µm với các thiết bị phù hợp Đóng lọ, nút kín, tranh ánh sáng

Lọ thuốc dầu thường bằng thủy tinh để tránh bay hơi tinh dầu và chống thấm ẩm, miệng lọ thường nhỏ để thuận tiện khi sử dụng

1.3.4 Một số sản phẩm dầu xoa bóp trên thị trường

Hầu hết các loại dầu xoa bóp trên thị trường hiện nay thường sẽ có hoạt chất giảm đau nhức và gây tê như Menthol, Glycol salicylate, Methyl salicylate, tinh dầu long não,… So với các loại thuốc uống, dầu xoa bóp có thể giúp giảm thiểu cơn đau hiệu quả khi được kết hợp với các động tác massage Đồng thời, sản phẩm này không làm hại gan, thận cũng như các bộ phận nội tạng khác như thuốc uống nên có thể dùng thường xuyên

Một số sản phẩm dầu xoa bóp và thành phần trong các sản phẩm có thị trường tiêu thụ lớn tại Việt Nam (Bảng 1.1, Bảng 1.2) bao gồm:

Bảng 1.1 Thông tin một số sản phẩm dầu xoa bóp trên thị trường

1 Tên sản phẩm: Dầu phật linh 2 Giá thành: 16.500VNĐ/ 5 ml 3 Thành phần: Camphor, Menthol, tinh dầu bạc hà, tinh dầu đinh hương, tinh dầu diệp

1 Tên sản phẩm: Dầu gió xanh 2 Giá thành: 42.000VNĐ/ 12 ml 3 Thành phần: menthol, tinmh dầu khuynh diệp, methyl salicylat

1 Tên sản phẩm: Dầu gừng Thái Dương 2 Giá thành: 80.000VNĐ/ 24 ml

3 Thành phần: Camphor, Menthol, tinh dầu bạc hà, tinh dầu quế, tinh dầu gừng, tinh dầu hương nhu, tinh dầu tràm, methyl salicylat

1 Tên sản phẩm: Dầu nóng xoa bóp Antiphlamine

2 Giá thành: 85.000VNĐ/ 100ml 3 Thành phần: Menthol, methyl salicylat

1 Tên sản phẩm: Dầu Siang pure oil 2 Giá thành: 15.000VNĐ/ 3 ml 3 Thành phần: Camphor, Menthol, tinh dầu bạc hà, tinh dầu quế, tinh dầu đinh hương, methyl salicylat

1 Tên sản phẩm: Tinh dầu xoa bóp dược liệu Nhật Phong

2 Giá thành: 195.000VNĐ/ 50 ml 3 Thành phần: tinh dầu bạc hà, tinh dầu quế, tinh dầu đinh hương, tinh dầu gừng, tinh dầu hương nhu, tinh dầu tràm, tinh dầu khuynh diệp, methyl salicylat, củ sắn

Bảng 1.2 Thống kê thành phần một số sản phẩm dầu xoa bóp trên thị trường

STT Thành phần

Tên sản phẩm Dầu

phật linh

Dầu gió xanh

Dầu gừng Thái Dương

Dầu nóng xoa bóp Antiplamine

Siang pure oil

Tinh dầu xoa bóp dược liệu

Nhất Phong Thành phần chính

2CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng, nguyên liệu và thiết bị nghiên cứu

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu

Sản phẩm dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù , được sản xuất bởi Công ty CP kinh doanh các sản phẩm bản địa Sa Pa (SapaNapro)

2.1.2 Nguyên liệu nghiên cứu

- Các tinh dầu: + Tinh dầu Chùa dù: Lô 012023 (ngày sản xuất 26/1/2023) (, Lô 012024 (ngày sản xuất 26/1/2024), sản xuất bởi Công ty CP kinh doanh các sản phẩm bản địa Sa Pa (SapaNapro)

+ Tinh dầu Màng tang: Lô 012023 (ngày sản xuất 26/1/2023), Lô 012024 (ngày 26/1/2024), sản xuất bởi Công ty CP kinh doanh các sản phẩm bản địa Sa Pa (SapaNapro)

+ Tinh dầu Quế, Tinh dầu Bạc Hà, Tinh dầu Gừng - Methyl Salicylat, Vitamin E

- Các dầu nền: Dầu Dừa, Dầu Ớt, Dầu Mù u, Dầu Hạnh nhân, Dầu Jojoba Các nguyên liệu nghiên cứu đạt tiêu chuẩn của nhà sản xuất

2.1.3 Thiết bị, dụng cụ, hoá chất

2.1.3.1 Thiết bị

- Cân phân tích - Cân kỹ thuật - Máy đo khúc xạ A.KRUSS Optronic GmbN DR6100 - Máy đo góc quang cực A.KRUSS Optronic GmbH - Máy Raman của Viện Kiểm nghiệm

2.1.3.2 Dụng cụ

- Các dụng cụ thí nghiệm thường quy: bình định mức (50ml), cốc có mỏ (50ml, 100ml), buret, bình nón, ống nghiệm, pipet (1ml, 2ml, 5ml), quả bóp, ống đong, đũa thủy tinh, phễu lọc, giấy lọc

- Nhớt kế Ostwald - Bao bì: Chai thủy tinh 10ml; Nhãn mác

2.1.3.3 Hóa chất

a) Hóa chất trong test NO

- LPS và L-NAME được mua từ Sigma Aldrich (St Louis, MO, USA) - Thuốc thử Griess được mua từ Promega (Madison, WI, USA)

- Môi trường nuôi cấy DMEM và các yếu tố bổ sung bao gồm huyết thanh thai bò (FBS) và kháng sinh Penicillin/Streptomycin được mua từ Pan-Biotech (Aidenbach, Germany)

- Thuốc thử MTT được mua từ AK Scientific Inc (Union City, CA, USA)

- DMSO được mua từ Merck (Rahway, NJ, USA)

b) Hóa chất được sử dụng trong xây dựng tiêu chuẩn

Ethanol 95%; Kali hydroxyd 0,1 mol/l; Phenolphtalein; Hồ tinh bột; Acid acetic khan nước; Cloroform; Natri thiolsulfat 0,01 N; Kali iodid bão hòa

2.2 Nội dung nghiên cứu

- Xây dựng công thức và bào chế thử nghiệm sản phẩm dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù tại xã Tả Phìn, Sa Pa, Lào Cai

- Đánh giá một số yếu tố thị trường của sản phẩm dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù

- Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở sản phẩm dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Xây dựng công thức và bào chế thử nghiệm sản phẩm dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù

2.3.1.1 Lựa chọn thành phần công thức

a) Pha hoạt chất

Dựa trên khảo sát và đánh giá 6 sản phẩm dầu xoa bóp từ tinh dầu trên thị trường (Bảng 1.2), lựa chọn một số thành phần chính về pha hoạt chất được sử dụng phổ biến, bên cạnh đó là nguồn tinh dầu sẵn có ở địa phương để xây dựng nên pha hoạt chất bên cạnh thành phần chính là tinh dầu Chùa dù

b) Các dầu nền

Khi lựa chọn pha dầu nền cho việc điều chế dầu xoa bóp, xem xét các yếu tố như tính chất của dầu nền, mục đích sử dụng sản phẩm Dưới đây là nguyên tắc lựa chọn pha dầu nền:

- Tính chất dưỡng ẩm: Chọn dầu nền có khả năng dưỡng ẩm tốt để giữ da mềm

mại và không bị khô sau khi sử dụng

- Độ nhẹ nhàng và dễ hấp thụ: Lựa chọn dầu nền có độ nhẹ nhàng và dễ hấp thụ vào da mà không gây cảm giác nhờn dính

- Khả năng làm mềm và dịu da: Chọn dầu nền có khả năng làm mềm và dịu da, giúp giảm căng thẳng và cải thiện tình trạng da

- Tương thích với tinh dầu và thành phần khác: Dầu nền nên tương thích tốt với tinh dầu và các thành phần khác trong công thức, không gây phản ứng hoá học không mong muốn

- Phù hợp với mục đích sản phẩm: có thể thêm vào để bổ trợ một số cảm giác trên da (nóng, …)

- Khả năng bảo quản: Chọn dầu nền có khả năng bảo quản tốt để sản phẩm có thể sử dụng được trong thời gian dài mà không bị ô nhiễm hay hỏng hóc

- Phù hợp với loại da: Lựa chọn dầu nền phù hợp với loại da của người sử dụng, có thể là dầu phù hợp với da khô, da dầu, hoặc da nhạy cảm

- Thành phần tự nhiên và hữu cơ: không chứa hóa chất độc hại hay chất bảo quản có hại cho da

c) Chất chống oxy hóa

Lựa chọn chất chống oxy hóa dựa trên các tiêu chuẩn dưới đây

- Tính chất chống oxy hóa: giúp bảo vệ dầu và các thành phần khác trong sản

phẩm khỏi quá trình oxy hóa, giảm thiểu việc sản phẩm biến chất hoặc mất điệu

- Bảo vệ chất béo không no: Trong các sản phẩm dầu xoa bóp, chất bảo quản có thể giúp bảo vệ chất béo không no khỏi việc bị oxy hóa, giúp sản phẩm giữ được độ ổn định và hiệu quả hơn

- Tính thẩm mỹ: giúp cải thiện tính thẩm mỹ của sản phẩm bằng cách giữ cho dầu không bị oxy hóa và mùi hương không bị biến đổi

- An toàn và tự nhiên: là một chất bảo quản tự nhiên, không gây hại cho da và không gây ra các vấn đề sức khỏe khi sử dụng trong sản phẩm chăm sóc da

- Tính ổn định: có khả năng giúp sản phẩm giữ được độ ổn định và tuổi thọ lâu dài hơn, giúp sản phẩm có thể sử dụng trong thời gian dài mà không cần lo lắng về việc sản phẩm bị hỏng

2.3.1.2 Xây dựng công thức và bào chế thử nghiệm

a) Xây dựng công thức:

Xây dựng hệ công thức giữa các pha bao gồm: Pha tinh dầu (trên 40%), dầu nền (dưới 50%), chất chống oxy hóa (dưới 10%) dự kiến có 5 công thức bào chế với các tỉ lệ tinh dầu và dầu nền khác nhau, thu được các dạng bào chế thử nghiệm

- Phối trộn các nguyên liệu: Các nguyên liệu được phối trộn đồng nhất bằng đũa thủy tinh hoặc khuấy từ trong các cốc có mỏ 200ml Các tinh dầu được phối trộn với nhau tạo thành Pha tinh dầu Dầu nền và chất chống oxy hóa được phối trộn với nhau tạo thành Pha dầu nền

- Phối trộn Pha tinh dầu và Pha dầu nền với nhau: thêm từ từ Pha tinh dầu vào Pha dầu nền trong khi đang khuấy đều Pha dầu nền bằng đũa thủy tinh tại nhiệt độ phòng Sau khi thêm hết Pha tinh dầu, tiếp tục khuấy đều bằng đũa thủy tinh ít nhất 5 phút, thu được Hỗn hợp dầu Đánh giá nhanh bằng cảm quan: màu sắc, mùi hương, thể chất

- Đậy kín và để ổn định Hỗn hợp dầu trong thời gian 24 tiếng ở điều kiện phòng (dưới 30 độ C)

- Lọc nhanh Hỗn hợp dầu qua bông, thu được Bán thành phầm Đánh giá nhanh bằng cảm quan: màu sắc, mùi hương, thể chất

- Đóng lọ: Dùng pipet hút Bán thành phầm vào lọ thủy tinh 10ml, bịt nút nhựa và đóng nắp lọ Ghi Ngày sản xuất và dán nhãn theo đúng quy định Đánh giá cảm quan thành phẩm

Hình 2.1 Quy trình bào chế sản phẩm

c) Đánh giá các công thức thử nghiệm

- Tự đánh giá độ ổn định, mùi hương, độ thấm, tính nóng, và không bết dính của các công thức nghiên cứu, từ đó chọn ra 03 mẫu tốt nhất

- Tiếp tục tiến hành khảo sát 03 mẫu đã chọn với ít nhất 03 đối tượng tình nguyện, sử dụng 8 tiêu chí (Bảng 2.1) để đánh giá cho điểm (thang điểm từ 1 đến 10, tương ứng từ không thích/kém nhất là 1 điểm và rất thích/tốt nhất là 10 điểm), tính giá trị trung bình và lựa chọn công thức có điểm số cao nhất cho các nghiên cứu tiếp theo

Bảng 2.1 Bảng khảo sát công thức thử nghiệm ban đầu

1 Độ thấm qua da Sau khi bôi trên da 5s, xem sản phẩm đã thấm hoàn toàn hay chưa Tối đa 10 điểm

2 Có gây bết dính trên da Sau khi bôi thì không để lại một lớp

màng ẩm dày trên da

Tối đa 10 điểm 3 Cảm giác gây bí da Sau khi bôi lên da từ 30 phút-1 giờ có cảm giác ngữa trên da Tối đa 10 điểm

4 Mùi hương Theo cảm nhận của bản thân Tối đa 10 điểm

5 Cảm giác nóng lúc sử

dụng

Bôi lên da và kết hợp cùng động tác massage nhẹ, cảm giác nóng nhẹ trên da

và diu cơn đau

Tối đa 10 điểm

6 Khả năng giảm viêm Qua 1-2 ngày, nhận thấy vết thương bớt

đỏ, sưng, cảm giác dễ chịu

Tối đa 10 điểm 7 Giảm cảm giác đau ở vị

trí bôi

Dựa trên cảm nhận của người tình

nguyện Tối đa 10 điểm

8 Cảm giác kích ứng ở

trên da (rát, đỏ, )

Sau 24 – 48h, không có cảm giác nóng rát trên da, phần da không bị đỏ, rát Không nổi những nốt mẩn kích ứng

Tối đa 10 điểm

2.3.1.3 Đánh giá tác dụng chống viêm thông qua định lượng giải phóng nitric oxyde (NO)

a) Chuẩn bị mẫu thử:

Mẫu nghiên cứu được lựa chọn từ thử nghiệm trước được pha loãng trực tiếp trong môi trường nuôi cấy để thu được các nồng độ khác nhau từ 1:30000 đến 1:300

b) Nuôi cấy tế bào:

Dòng đại thực bào chuột nhắt Raw 264.7 từ ATCC được nuôi cấy trong môi trường DMEM chứa 10% FBS và 1% kháng sinh (streptomycin/penicillin) Tế bào được duy trì trong tủ nuôi cấy 37oC với 5% CO2 Tế bào được cấy chuyển mỗi khi đạt mật độ 70-80%

c) Đo giải phóng Nitric oxyde (NO):

Tế bào được cấy trong một đĩa nuôi cấy 96 giếng (Corning) thành trong ở mật độ 4×104 tế bào/giếng trong môi trường đầy đủ Sau khi ủ qua đêm, môi trường cũ được loại bỏ và tế bào được ủ với môi trường mới chứa các mẫu thử ở nồng độ thích hợp trong 2 giờ, sau đó tiếp tục ủ với môi trường chứa LPS 100 ng/mL thêm 24 giờ nữa Môi trường trong mỗi giếng (50 µL) được hút chuyển sang một đĩa 96 giếng mới Sau đó, thêm 50 µL dung dịch sulfanilamid và ủ ở nhiệt độ phòng, trong bóng tối trong 5 phút trước khi thêm 50 µL N-1-napthylethylenediamin dihydrochlorid tới hỗn hợp phản ứng Sau khi tiếp tục ủ thêm 5 phút ở nhiệt độ phòng, đo độ hấp thụ của dung dịch tạo thành ở bước sóng 535 nm sử dụng hệ thống máy đọc đĩa Variaskan LUX (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA)

Giải phóng NO được đánh giá thông qua định lượng chất chuyển hóa nitrit/nitrat trong môi trường nuôi cấy đại thực bào

Nồng độ NO trong mỗi mẫu được tính toán dựa trên đường chuẩn được xây dựng với chất chuẩn Natri nitrit Tỷ lệ phần trăm ức chế giải phóng NO của mẫu thử được tính theo công thức: I% = (CLPS - Cthử)×100/CLPS, trong đó CLPS và Cthử lần lượt là nồng độ NO của tế bào được xử lý với LPS đơn độc và LPS kết hợp với mẫu thử

d) Đánh giá độc tính tế bào:

Tế bào được cấy trong một đĩa 96-well thành trong ở mật độ 4×104 tế bào/giếng trong môi trường đầy đủ Sau khi ủ qua đêm, tế bào được ủ với môi trường chứa các mẫu thử ở nồng độ thích hợp trong 24 giờ Kết thúc thời gian điều trị, 10 µL dung dịch MTT 5 mg/mL được thêm trực tiếp vào môi trường và ủ trong 2 giờ Môi trường sau đó được loại bỏ để thu các tinh thể kết kinh màu tím ở đáy đĩa Tinh thể được hòa tan trong 100 µl DMSO trước khi được đo độ hấp thụ ở bước sóng 570 nm

Đo độ hấp thụ của của chất lỏng tinh thể màu tím sau khi loại bỏ môi trường trong 100 µl DMSO ở bước sóng 570 nm

e) Xử lý số liệu:

Giá trị IC50 được tính toán bằng phần mềm Graphpad 8.0.2 sử dụng phương

pháp hồi quy phi tuyến 2.3.2 Đánh giá một số yếu tố thị trường của sản phẩm dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù

Đánh giá một số yếu tố thị trường của sản phẩm nghiên cứu bằng phương pháp điều tra sử dụng phiếu phỏng vấn trên đối tượng tình nguyện:

a) Chọn mẫu: Tiến hành thực hiện trên 2 nhóm mẫu

- Nhóm pre-test: 05 thành viên trong nhóm thực hiện nghiên cứu được đưa vào nghiên cứu, nhằm đánh giá độ an toàn của sản phẩm khi dùng trên người, liều lượng sử dụng, tác dụng của sản phẩm, cũng như đánh giá độ đúng - đủ của phiếu phỏng vấn, qua đó chỉnh sửa hoặc bổ sung phù hợp (Phụ lục 3)

- Nhóm test: 50 người tình nguyện sử dụng sản phẩm, được cung cấp đầy đủ về thông tin các thành phần sản phẩm, đồng ý và hiểu rõ mục đích nghiên cứu (Phụ lục 4)

b) Phương pháp nghiên cứu và nội dung phỏng vấn

- Thực hiện thu thập dữ liệu như sau: + Chọn người tình nguyện làm chủ hành vi, có khả năng trả lời câu hỏi Nghiên cứu viên giới thiệu bản thân, giải thích mục đích nghiên cứu và các nội dung sẽ được phỏng vấn Người tình nguyện hiểu và đồng ý tham gia nghiên cứu và cung cấp thông tin cá nhân, đồng ý chia sẻ thông tin trong nghiên cứu

+ Nghiên cứu viên giải thích và hướng dẫn cách sử dụng sản phẩm thử nghiệm (dầu xoa bóp chứa tinh dầu Chùa dù ), phát mẫu cho người tình nguyện

+ Người tình nguyện sử dụng sản phẩm trong thời gian tối thiểu 1 tuần

+ Sử dụng công cụ google form để xây dựng phiếu phỏng vấn, gắn link và sử dụng mã QR code (phụ lục 6) để các đối tượng tham gia thử nghiệm sản phẩm điền phiếu phỏng vấn trên thiết bị điện tử Biểu mẫu phỏng vấn đã xây dựng xem tại Phụ lục 6

+ Sau khi thu thập thông tin Nghiên cứu viên kiểm tra lại kết quả điền phiếu điều tra và phản hồi lại cho người tình nguyện nếu thiếu sót thông tin để bổ sung kịp thời hoặc cần phỏng vấn sâu các vấn đề liên quan khác

- Các nội dung chính của phiếu gồm: + Thông tin cơ bản của người cung cấp tin: Họ và tên, Giới tính, Độ tuổi, Nghề nghiệp, Số điện thoại

+ Thông tin về sức khỏe: Tần suất tập thể dục/tuần; Tình trang đau nhức xương khớp hoặc đau do căng cơ/vận động,…; Những vị trí đau nhức thường gặp; Những vị trí đau có đi kèm tình trạng viêm, sưng tấy

+ Thông tin về các biện pháp chăm sóc sức khỏe: Những biện pháp giảm đau thường sử dụng; Mong muốn về thành phần dầu xoa bóp; Giá thành chi trả cho sản phẩm

+ Thông tin phản hồi về sản phẩm nghiên cứu: 8 chỉ tiêu đánh giá (Bảng 2.1) Cho điểm từ 0 đến 5 điểm (với 0 là không hài lòng và 5 là rất hài lòng)

Tỷ trọng tương đối của một chất là tỷ số giữa khối lượng của một thể tích cho trước của chất đó và khối lượng của cùng thể tích nước cất, tất cả đều cân ở 20°C [1]

Xác định tỉ trọng tương đối của mẫu nghiên cứu: Tiến hành: Chuẩn bị một picnomet 10 ml khô, sạch Đặt trên cân phân tích và ấn RE-ZERO để trừ khối lượng của bình Cân chính xác 10ml mẫu và 10ml nước cất trong picnomet, ở nhiệt độ từ 19 độ 20°C trên cân phân tích Xác định tỉ số của hai khối lượng và lấy giá trị trung bình của 3 lần đo

b) Độ nhớt:

- Theo phương pháp đo thời gian chất lỏng chảy trong ống mao quản [1] - Nguyên tắc của phương pháp này là dựa vào công thức Poiseuile: h = 0 𝐷.𝑡

D0.t0 Trong đó : t0 là thời gian nước cất chảy qua ống D là khối lượng riêng chất lỏng D0 là khối lượng riêng của nước cất

c) Chỉ số khúc xạ:

Sử dụng máy A.KRUSS Optronic GmbN DR6100 xác định chỉ số khúc xạ của mẫu nghiên cứu (đo 1 lần)

d) Góc quay cực: Sử dụng máy A.KRUSS Optronic GmbH để xác định góc quay cực của mẫu nghiên cứu, đo 3 lần, lấy giá trị trung bình

Chỉ số acid là số miligam kali hydroxyd cần để trung hòa các acid tự do chứa trong 1g tinh dầu Tiến hành trung hòa các acid tự do bằng dung dịch chuẩn kali hydroxyt trong ethanol [1], tính chỉ số acid của chế phẩm theo công thức sau:

Chỉ số acid = (5,6 x a) /P Trong đó:

a là số ml dung dịch kali hydroxyd 0,1 N (chuẩn độ) đã dùng; p là lượng chế phẩm đem thử (g)

b) Chỉ số peroxyd

- Nguyên tắc [1]: Khi có oxy không khí các acid béo có trong thành phần của dầu nhất là các acid béo không no sẽ dễ dàng bị oxy hóa một phần và tạo thành peroxyd

Việc xác định chỉ số peroxyd có thể dựa vào phản ứng sau: 2Na2S2O3 + I2 2NaI + Na2S4O6

Chỉ số Iod là số gam Iod được giải phóng ra bởi peroxyd có trong 100gam mỡ Lượng Iod giải phóng ra có thể chuẩn độ bằng dung dịch Natri Hyposulfit với chỉ thị là hồ tinh bột Công thức tính:

Chỉ số peroxyd = [ (a- b) x 10]/ P Trong đó:

a là số ml dung dịch natri thiosulfat 0,01 N (CĐ) đã dùng trong mẫu thử; b là số ml dung dịch natri thiosulfat 0,01 N (CĐ) đã dùng trong mẫu trắng; p là lượng chế phẩm đem thử (g)

c) GC-MS của pha tinh dầu

Các thành phần trong mẫu nghiên cứu được phân tích ằng phương pháp sắc ký – khối phổ GC-MS tại Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên - Phòng Phân tích hóa

học tại Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam

3CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN 3.1 Xây dựng công thức và bào chế thử nghiệm sản phẩm giảm đau chứa tinh dầu Chùa dù tại xã Tả Phìn, Sa Pa, Lào Cai

3.1.1 Lựa chọn thành phần công thức

Dựa trên khảo sát và đánh giá 6 sản phẩm dầu xoa bóp từ tinh dầu trên thị trường (Bảng 1.2), đồng thời dựa trên nguồn tinh dầu sẵn có ở địa phương và tri thức bản địa của người Dao đỏ tại xã Tả Phìn, Sa Pa, Lào Cai, đề tài đã lựa chọn các thành phần sau đây để tiến hành xây dựng công thức sản phẩm ở các bước nghiên cứu tiếp theo:

- Các tinh dầu: Tinh dầu Bạc Hà, Tinh dầu Quế, Tinh dầu Gừng Đây đều là các tinh dầu có sẵn tại Sa Pa, và sử dụng rất phổ biến trong các sản phẩm giảm đau xương khớp

- Các tinh dầu: Tinh dầu Chùa dù, Tinh dầu Màng tang Đây là các tinh dầu sử dụng để giảm đau theo tri thức bản địa của người dân tộc tại Sa Pa, Lào Cai, đặc biệt là tinh dầu Chùa dù có hiệu quả minh chứng giảm đau tốt

- Hoạt chất: Methyl salicylat Hoạt chất này được sử dụng nhiều trong các sản phẩm giảm đau, hỗ tác dụng làm nóng, massage và giảm đau tại chỗ

- Các dầu nền: Dựa trên các tiêu chí lựa chọn dầu nền (mục 2.2.1.1), đề tài đã lựa chọn được các loại dầu nền sau đây: Dầu dừa chưng cất phân đoạn, Dầu hạnh nhân, Dầu mù u, Dầu jojoba và Dầu ớt

- Chất chống oxy hóa: đề tài lựa chọn Vitamin E để đưa vào công thức, đạt các tiêu chí theo mục 2.2.1.1

3.1.2 Lập công thức và bào chế thử nghiệm

a) Xây dựng hệ công thức giữa các pha: hệ công thức giữa các pha được trình bày ở Bảng 3.1

Bảng 3.1 Hệ công thức giữa các pha

Hình 3.1 Một số hình ảnh sản phẩm bào chế thử nghiệm

c) Kết quả đánh giá các công thức thử nghiệm

Sau khi tiến hành tự đánh giá về độ ổn định, mùi hương, độ thấm, tính nóng, và không bết dính của các công thức nghiên cứu, đề tài đã lựa chọn được 03 công thức CT1, CT2 và CT3 có nhiều ưu điểm hơn so với 2 công thức còn lại

Tiến hành khảo sát 8 tiêu chí (theo bảng 2.1) đối với 3 sản phẩm bào chế theo 3 công thức đã lựa chọn, trên 3 đối tượng tình nguyện sử dụng sản phẩm mẫu trong thời gian 1 tháng, thu được kết quả phản hồi cho thấy có sự khác biệt đáng kể giữa điểm số chấm điểm hài lòng của người tình nguyện Trong đó công thức CT2 được đánh giá điểm số trung bình hài lòng cao nhất (tổng điểm 7,3) (Bảng 3.2)

Bảng 3.2 Kết quả điểm số trung bình hài lòng của 5 người tình nguyện đối với 3

công thức thử nghiệm

(Từ 1 – 10, trong đó 10 là hài lòng nhất) Công thức 1 Công thức 2 Công thức 3

Bảng 3.3 Thành phần công thức sản phẩm đã lựa chọn CÔNG THỨC CHO

lượng

Đơn vị HOẠT CHẤT

(63%)

Tinh dầu Quế

đủ 15*

ml

CHẤT CHỐNG OXY HÓA

(10%)

* Các tỉ lệ không được công khai

3.1.3 Đánh giá tác dụng chống viêm thông qua định lượng giải phóng nitric oxyde (NO)

3.1.3.1 Tác dụng ức chế giải phóng NO của sản phẩm dầu xoa bóp

Đề tài đã đánh giá tác dụng ức chế giải phóng NO của mẫu sản phẩm được bào chế theo công thức CT2 (Bảng 3.3), kết quả cho thấy mẫu thử thể hiện tác dụng ức chế giải phóng NO từ đại thực bào Raw 264.7 hoạt hóa với giá trị ức chế 50% (IC50) đạt được tại mức pha loãng 1:9569 (v/v), khoảng tin cậy 95% từ 1:21164 đến 1:4627 (Bảng 3.4)

Bảng 3.4 Giá trị ức chế 50% (IC50) của các dược liệu trên giải phóng NO từ đại

thực bào phúc mạc

(µg/mL)

95% CI của IC50

1:9569 1:21164 –

1:4627 NO (µM) 4,79 ± 0,4 2,57 ± 0,17 1,11 ± 0,13 0,84 ± 0,07 0,62 ± 0,07

% ức chế 15,52 54,67 80,42 85,19 89,07

L-NAME

0,803 0,462 – 1,416 NO (µM) 5,21 ± 0,18 3,75 ± 0,5 2,32 ± 0,23 1,58 ± 0,44 0,84 ± 0,09

% ức chế 8,11 33,86 59,08 72,13 85,19

Ghi chú: Nồng độ NO của tế bào chứng không kích thích là 0,86 ± 0,43 µM; của tế bào chứng kích thích với LPS là 5,67 ± 0,18

Nhận xét: Như vậy, mẫu thử có tác dụng ức chế giải phóng NO từ đại thực bào

Raw 264.7, đối với mẫu trắng (L-NAME), tác dụng % ức chế của mẫu thử luôn cao

hơn Tác dụng ức chế giải phóng NO này có liên quan đến khả năng chống viêm của sản phẩm

3.1.3.2 Đánh giá độc tính tế bào

Kết quả đánh giá độc tính tế bào của mẫu nghiên cứu cho thấy mẫu thử thể hiện độc tính tế bào đại thực bào Raw 264.7 mạnh tại tỉ lệ pha loãng 1:300 nhưng không ảnh hưởng đến sự sống của tế bào tại các nồng độ ≤ 1:1000 (Bảng 3.5)

Bảng 3.5 Ảnh hưởng của cao chiết dược liệu đến tỷ lệ sống của đại thực bào

Nhận xét: Mẫu thử có độc tính nhất định với tế bào đại thực bào Raw 264.7 liên

quan đến nồng độ pha loãng Tuy nhiên với nồng độ ≤ 1:1000 không ảnh hưởng đến sự sống của tế bào, trong khi IC50 đạt được tại mức pha loãng 1:9569 (v/v) cho thấy tiềm năng sử dụng của sản phẩm

3.2 Kết quả đánh giá một số yếu tố thị trường của sản phẩm giảm đau chứa tinh dầu Chùa dù

3.2.1 Thông tin cơ bản của người cung cấp tin

Tổng số 50 người tình nguyện đã tham gia nghiên cứu, đồng ý sử dụng thử sản phẩm và chia sẻ thông tin Đặc điểm chung được mô tả trong bảng 3.6

Bảng 3.6 Đặc điểm chung của người tình nguyện

1 Giới tính:

Nữ Nam

37 người (74%) 13 người (26%) 2 Độ tuổi:

18-23 tuổi 23-30 tuổi 30-50 tuổi

38 người (76%) 11người (22%) 1 người (2%) 3 Nghề nghiệp:

Sinh viên Nhân viên văn phòng

Công chức

42 người (84%) 7 người (14%) 1 người (2%)

Nhận xét: Phần lớn người tình nguyện tham gia nghiên cứu trong độ tuổi dưới

30 tuổi (tổng 98%), nữ (74%) và là sinh viên (84%)

3.2.2 Thông tin về sức khỏe

Từ kết quả phản hồi của 50 người tình nguyện, có thể thấy tần suất vận động, tập thể dục (trung bình mỗi tuần) đa số đối tượng chỉ dưới 2 buổi/tuần Kết quả tổng hợp và trình bày trên Hình 3.2

Hình 3.2 Kết quả tần suất vận động, tập thê dục của nhóm người tình nguyện

Tình trạng thường xuyên đau nhức xương khớp hoặc đau do căng cơ/vận động (trung bình trên tháng) của các đối tượng khá ít, chủ yếu từ 1-2 lần/tháng (70%), chỉ có 3 người thường xuyên đau (tần suất > 10 lần/tháng) (Hình 3.3)

Hình 3.3 Kết quả tần suất đau nhức xương khớp hoặc đau do căng cơ,

vận động,….của người tình nguyện

Đối với những vị trí đau nhức thường gặp, có 4 vị trí đau được người tình nguyện ghi lại: Cổ, vài gáy; các khớp gối, thắt lưng; bắp tay, bắp chân Trong đó, đau cổ, vái gáy chiếm tỉ lệ lớn với 32 phản hồi (64%), thứ 2 là thắt lưng với 22 phản hồi (44%) (Hình 3.4) (% được tính toán là lấy số phản hồi vị trí đau chia cho 50 kết quả trả lời, tổng số > 100% do một người có thể đau tại nhiều vị trí)

Hình 3.4 Vị trí đau nhức thường gặp trên người tình nguyện

Đối với tình trạng cơn đau kèm theo viêm, đa số các đối tượng không gặp tình trạng này (Hình 3.5)

Hình 3.5 Tình trạng cơn đau đi kèm viêm trên người tình nguyện

3.2.3 Thông tin về các biện pháp chăm sóc sức khỏe

Đối với 8 biện pháp giảm đau được liệt kê trong kết quả phỏng vấn, việc sử dụng các loại dầu xoa bóp (46%) và sử dụng các miếng dán giảm đau (36%) là phổ biến nhất, các biện pháp như tập các bài tập giảm đau và tự massage ít được sử dụng (Hình 3.6)

Hình 3.6 Khảo sát các biện pháp giảm đau

Thông tin về thị hiếu của khách hàng đối với thành phần của một sản phẩm dầu xoa bóp (Hình 3.7) cho thấy, có đến 48/50 người tình nguyện mong muốn sản phẩm có thành phần từ thảo dược thiên nhiêu, trong đó 35/50 người đều kỳ vọng thành phần phải có tác dụng giảm đau nhanh, hiệu quả

Hình 3.7 Khảo sát mong muốn về thành phần dầu xoa bóp

Đối với giá thành sản phẩm, thông qua 50 phản hồi, khách hàng có thể chi trả dưới từ 20.000 VNĐ đến 50.000 VNĐ (52%) cho 1 sản phẩm dầu xoa bóp 10ml có thành phần từ tinh dầu tự nhiên với khả năng làm giảm tình trạng đau, viêm từ lần 3 sử dụng (hình 3.8) 26% người tình nguyện có thể chi trả từ 50.000VNĐ đến 100.000VNĐ

Hình 3.8 Khảo sát mức độ chi trả sản phẩm

3.2.4 Thông tin phản hồi về sản phẩm nghiên cứu

Kết quả phản hồi về sản phẩm nghiên cứu cho thấy, chỉ có các chỉ tiêu giảm viêm, cảm giác nóng, mùi hương, độ thấm đều đạt >4 trên thang điểm 5 Các chỉ tiêu thấp điểm nhất là cảm giác kích ứng, bí da và gây bết dinh và những chỉ tiêu này cũng nhận về nhiều đánh giá 0, 1, 2 điểm (Bảng 3.7.)

Bảng 3.7 Kết quả đánh giá khảo sát sản phẩm

7 Khả năng giảm đau ở vị trí bôi 2 3 8 16 21 3,98 8 Cảm giác không kích ứng (rát,

+ Một số có bôi chạm vết thương hở, và bôi quá nhiều lớp sản phẩm trong 1 lần bôi, dẫn đến bị kích ứng

+ Khả năng giảm viêm, 1 số không gặp tình trạng viêm ở vết thương nên đánh 3 để trung lập ý kiến

Như vậy, cần hướng dẫn sử dụng kỹ hơn và tăng cỡ mẫu nghiên cứu để kết quả thu được toàn diện hơn

Trong khảo sát một số yếu tố thị trường sản phẩm, do đặc thù công việc của bản thân, đề tài chủ yếu khảo sát các đối tượng sinh viên và nữ giới, tuy nhiên khách hàng mục tiêu về sau của sản phẩm này là các khách du lịch và người lớn tuổi, có nhu cầu sử dụng các sản phẩm massage giúp giảm đau xương khớp Trong các giai đoạn tiếp theo của quy trình Nghiên cứu và phát triển sản phẩm, chúng tôi sẽ sản xuất thử nghiệm sản phẩm này ở quy mô pilot và thử nghiệm trên đối tượng khách du lịch tại Sa Pa, Lào Cai (phối hợp cùng Công ty SapaNapro), để tiếp tục cải thiện sản phẩm phù hợp với thị hiếu và nhu cầu của khách hàng

3.3 Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở sản phẩm giảm đau chứa tinh dầu Chùa dù

Kết quả đo tỉ trọng tương đối được ghi lại ở Bảng 3.8

Bảng 3.8 Kết quả đo khối lượng của sản phẩm (10ml)

Dbk= mtb𝑚0 x D0= 9,5380

10,00 x 0,99823 = 0,95211 (g/ml)

Như vậy, đề xuất chỉ tiêu tỉ trọng tương đối sử dụng để kiểm nghiệm mẫu thử là: 0,9530 ± 2% [0,9339; 0,9721] ở nhiệt độ 20oC

3.3.2.2 Độ nhớt

Thời gian chảy của nước cất dao động từ 4,34 đến 4,80 (s) (Bảng 3.9)

Bảng 3.9 Thời gian chảy của nước cất trong ống Ostwald

Thời gian (s) 4,51 4,34 4,67 4,80 4,73 4,61

Thời gian chảy của mẫu thử dao động từ 23,61 đến 24,53 (s) (Bảng 3.10)

Bảng 3.10 Thời gian chảy của mẫu thử trong ống Ostwald

Mẫu thử Lần 1 Lần 2 Lần 3 Lần 4 Lần 5 Lần 6 Lần 7 Lần 8 Lần 9 Lần 10 TB Thời

gian (s) 24,53 24,20 24,00 24,01 23,75 23,61 23,67 23,72 23,62 23,68 23,88

3.3.2.2 Từ hai thông số này, tính toán được giá trị độ nhớt của mẫu thử là:

 = 0 x 𝐷.𝑡

D0.t0 =1,002 x 0,95211 23,88

0,99823 4,61 = 4,951 (cP) Như vậy, đề xuất chỉ tiêu độ nhớt sử dụng để kiểm nghiệm mẫu thử là: 4,950 cP ± 2% [4,851; 5,049]

- Tiến hành: ngâm bình đựng chất lỏng trong nước đá để về nhiệt độ khoảng 15

độ, tiến hành đo nhanh chất lỏng trong máy tại nhiệt độ khoảng 20-21 độ C

- Kết quả: Góc quay cực của mẫu sản phẩm trong khoảng nhiệt độ 20 – 20,50C dao động từ -2,21 đến – 2,100C (Bảng 3.11)

Bảng 3.11 Kết quả góc quay cực của sản phẩm

Hình 3.9 Kết quả chồng của phổ Chùa dù và Sản phẩm xoa bóp

Với Series 1 là Sản phẩm; Series 2 là Chùa dù

Nhận xét: về hình dáng của Chùa dù và sản phẩm có độ tương đồng nhưng của

sản phẩm được đẩy cao hơn, mạnh hơn, tuy nhiên ở bước sóng 652 nm thì cường độ có giảm đi một chút So sánh với các phổ khác nhận thấy được điểm đặc trưng của Chùa dù trong phổ sản phẩm, đặc trưng cho thành phần chính

Như vậy, đề xuất chỉ tiêu quang phổ Raman sử dụng để kiểm nghiệm mẫu thử là: có ít nhất 3 đỉnh đặc trưng của Chùa dù (tại các bước sóng 652 nm; 808 nm; 932 nm; 1448 nm)

3.3.3 Chỉ tiêu hóa học

3.3.3.1 Chỉ số acid

- Tiến hành: Cân khoảng 2 g mẫu thử, chính xác đến 0,5 mg Cho phần mẫu thử vào bình cầu Thêm 5 ml ethanol đã trung hòa và không quá 5 giọt chất chỉ thị hoặc là dung dịch phenolphtalein hoặc là dung dịch đỏ phenol tùy vào từng trường hợp Chuẩn độ dịch lỏng bằng dung dịch kali hydroxyd đựng trong buret Tiếp tục thêm cho đến khi sự đổi màu ổn định trong 30 s

- Kết quả: khối lượng cân của các lần dao động trong khoảng từ 2,0001 đến 2,0089 thu được chỉ số từ 1,11503 đến 11,11955 (Bảng 3.12)

Bảng 3.12 Kết quả đánh giá chỉ số acid của mẫu sản phẩm

Lần 1 Lần 2 Lần 3 Lần 4 Lần 5 Trung bình m (g) 2,0008 2,0003 2,0089 2,0001 2,0053 2,00308

Chồng phổ

Series1Series2