nguyễn thị phượng nghiên cứu tác dụng hiệp đồng ức chế tăng sinh tế bào ung thư vú mcf 7 của tamoxifen và viễn chí trung quốc polygala chinensis linn

VÚ MCF-7 CỦA TAMOXIFEN VÀ VIỄN

CHÍ TRUNG QUỐC (POLYGALA

CHINENSIS LINN.)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI – 2024

VÚ MCF-7 CỦA TAMOXIFEN VÀ VIỄN

CHÍ TRUNG QUỐC (POLYGALA

1 Viện Dược liệu

2 Khoa Khoa học cơ bản

HÀ NỘI – 2024

LỜI CẢM ƠN

Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, đầu tiên tôi xin gửi lời cảm ơn tới ThS Trần Thị Hồng Vân – khoa Dược lý- Sinh hóa, Viện Dược liệu và TS Nguyễn Thị Ngọc Hà là giáo viên hướng dẫn trực tiếp đã luôn hết lòng chỉ bảo, giúp đỡ và thúc giục tôi trong suốt qua trình thực hiện và hoàn thành khóa luận này

Khóa luận được thực hiện dưới sự hỗ trợ của đề tài: “Sàng lọc dược liệu có tác dụng tăng cường hiệu quả điều trị của tamoxifen trên dòng tế bào ung thư vú MCF-7 ” do ThS Trần Thị Hồng Vân, khoa Dược lý- Sinh hóa, Viện Dược liệu làm chủ nhiệm

Tôi chân thành cảm ơn đến Ban giám đốc Viện Dược liệu cùng các anh chị nghiên cứu, kỹ thuật viên ở khoa Dược lý- Sinh hóa, Viện Dược liệu đã nhiệt tình giúp đỡ và tạo điều kiện hết sức để giúp tôi hoàn thành khóa luận này Cảm ơn ThS Lại Việt Hưng, Trung tâm Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu đã giúp đỡ chúng tôi tiến hành thu thập mẫu và giám định tên khoa học của VCTQ

Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu trường Đại học Dược Hà Nội đã tạo điều kiện cho tôi được tiếp cận và hoàn thiện đề tài, cùng với lời cảm ơn chân thành nhất gửi đến toàn thể các thầy cô giảng viên của trường Đại học Dược Hà Nội đã luôn tận tụy và nhiệt tình truyền đạt kiến thức, chia sẻ kinh nghiệm và giúp đỡ chúng tôi trong suốt quảng thời gian học tập tại trường

Cuối cùng, tôi gửi lời cảm ơn sâu sắc và lời yêu thương đến gia đình, bạn bè, những người đã luôn bên cạnh, động viên tôi trong suốt thời gian tôi gặp khó khăn trong quá trình hoàn thành khóa luận này

Hà Nội, ngày 01 tháng 06 năm 2024

Sinh viên Nguyễn Thị Phượng

1.1.2 Điều trị ung thư vú 7

1.2 Tamoxifen trong điều trị ung thư vú 9

1.2.1 Cơ chế tác dụng của tamoxifen 9

1.2.2 Tamoxifen trong phác đồ điều trị ung thư vú 10

1.2.3 Tác dụng không mong muốn của tamoxifen 11

1.2.4 Tình trạng kháng tamoxifen 12

1.3 Dược liệu có tác dụng chống ung thư vú 13

1.3.1 Các dược liệu có tác dụng chống ung thư vú 13

1.3.2 Viễn chí Trung Quốc (VCTQ) – Polygala chinensis Linn 14

1.4 Phương pháp phân tích để đánh giá khả năng phối hợp thuốc 20

2 CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22

2.1 Đối tượng nghiên cứu 22

2.2 Nguyên vật liệu, thiết bị 23

2.2.1 Hóa chất 23

2.2.2 Dụng cụ, thiết bị nghiên cứu 24

2.3 Nội dung nghiên cứu 25

2.4 Phương pháp nghiên cứu 25

2.4.1 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 25

2.4.2 Chuẩn bị mẫu thử 25

2.4.3 Nuôi cấy tế bào 26

2.4.4 Thử nghiệm sống sót tế bào 26

2.4.6 Thử nghiệm hóa tế bào miễn dịch 30

2.5 Phương pháp phân tích số liệu 31

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT AI Thuốc ức chế aromatase (Aromatase inhibitor)

AJCC Ủy ban liên hợp về ung thư Hoa Kỳ (American Joint Committee on

Cancer)

BSA Albumin huyết thanh bò (Bovine serum albumin)

CI Chỉ số kết hợp (Combination index)

DCIS Ung thư biểu mô thể ống tại chỗ (Ductal Carcinoma in Situ)

DRI Chỉ số giảm liều (Dose reduction index)

DVT Huyết khối tĩnh mạch sâu (Deep venous thrombosis)

EGFR Thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu mô (Epidermal growth factor receptor) ER Thụ thể estrogen (Estrogen receptor)

FBS Huyết thanh thai bò (Fetal bovine serum)

GnRH Hormon giải phóng gonadotropin (Gonadotropin-releasing hormone) HER2 Thụ thể yếu tố phát triển biểu bì người số 2 (Human epidermal growth

factor receptor

OD Mật độ quang (Optical density)

PBS Dung dịch đệm phosphat (Phosphate-Buffered Saline)

PE Thuyên tắc phổi (Pulmonary embolism)

PR Thụ thể progesteron (Progesteron receptor)

SERM Thuốc điều biến chọn lọc thụ thể estrogen (Selective estrogen receptor

VCTQ Viễn chí Trung Quốc

DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Các thành phần dược chất chính trong cao chiết ethanol của VCTQ 16 Bảng 2.1: Danh mục hóa chất trong nghiên cứu 23 Bảng 2.2: Danh mục dụng cụ, thiết bị trong nghiên cứu 24 Bảng 2.3: Nồng độ thử của tamoxifen và/hoặc dược liệu trên tế bào MCF-7 theo

phương pháp Chou-Talalay 29

Bảng 3.1: Kết quả sàng lọc dược liệu có tác dụng tăng cường hoạt tính ức chế tăng

sinh tế bào MCF-7 của tamoxifen ở nồng độ 5 µM, cao chiết dược liệu ở nồng độ 50 µg/mL 32

Bảng 3.2: Tỷ lệ ức chế tế bào MCF-7 (Fa) khi điều trị bằng tamoxifen, VCTQ đơn độc hoặc kết hợp 34

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ

Hình 1.1 Hình ảnh cây Viễn chí Trung Quốc (chụp bởi ThS Lại Việt Hưng) 15

Hình 1.2 Phân bố tự nhiên của VCTQ 16

Hình 2.1: Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 25

Hình 3.1 Xác định IC50 của tamoxifen và VCTQ 34

Hình 3.2: Đồ thị biểu diễn Fa – CI cho sự kết hợp giữa tamoxifen và VCTQ trên tế bào MCF-7 theo phương pháp Chou-Talalay 35

Hình 3.3: Đồ thị biểu diễn Fa – DRI cho sự kết hợp giữa tamoxifen và VCTQ trên tế bào MCF-7 theo phương pháp Chou-Talalay 36

Hình 3.4: Ảnh hưởng của tamoxifen và VCTQ đến sự hình thành cụm tế bào MCF-7 37

Hình 3.5: Ảnh hưởng của tamoxifen và VCTQ đến mức độ biểu hiện Ki-67 của tế bào MCF-7 39

Hình PL1 Tiêu bản loài Viễn chí Trung Quốc, thu hái tại Bắc Giang, số hiệu HV12, lưu trữ tại Phòng tiêu bản, Trung tâm Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu 60

ĐẶT VẤN ĐỀ

Ung thư vú là loại ung thư phổ biến nhất ở Việt Nam và cũng là nguyên nhân hàng đầu gây tử vong do ung thư ở phụ nữ Trong đó thể bệnh chính là ung thư vú dương tính với thụ thể estrogen (ER+), chiếm khoảng 70% tổng số bệnh nhân ung thư vú Và phương pháp được chỉ định cho thể bệnh này là liệu pháp nội tiết, nhóm thuốc điều biến chọn lọc thụ thể estrogen (SERM) được dùng phổ biến nhất Đặc biệt, tamoxifen là SERM được lựa chọn hàng đầu trong điều trị UTV thể ER+, tamoxifen cho thấy lợi ích rõ ràng trong việc giảm tỷ lệ tử vong và nguy cơ tái phát do ung thư vú, nhưng tình trạng kháng tamoxifen và các tác dụng không mong muốn của thuốc đã trở thành rào cản lớn trong việc điều trị hiệu quả UTV Điều này đã đặt ra một yêu cầu về một liệu pháp điều trị mới tăng cường hiệu quả điều trị và giảm tác dụng không mong muốn của tamoxifen Những nghiên cứu gần đây chỉ ra rằng các chế phẩm có nguồn gốc thiên nhiên là chất chống ung thư đầy hứa hẹn Việc sử dụng kết hợp dược liệu và tamoxifen có thể nâng cao hiệu quả điều trị UTV thông qua tăng cường hoạt tính ức chế sự tăng sinh tế bào ung thư, tăng độ nhạy của tế bào ung thư với tamoxifen, đảo ngược sự kháng thuốc, giảm độc tính và tác dụng không mong muốn do giảm liều tamoxifen VCTQ là loại dược liệu đã được sử dụng lâu đời, hiện nay các nghiên cứu chỉ ra nhiều tác dụng liên quan đến chống ung thư của VCTQ, vì vậy dược liệu này được coi là chất tiềm năng để bổ trợ điều trị ung thư Điều này đã gợi ý chúng tôi về một liệu pháp phối hợp dược liệu như VCTQ với tamoxifen có thể đem lại nhiều lợi ích cho bệnh nhân Tuy nhiên, có rất ít các nghiên cứu trước đây đánh giá về tác dụng kết hợp giữa dược liệu và tamoxifen

Vì vậy, chúng tôi đã thực hiện đề tài “ Nghiên cứu tác dụng hiệp đồng ức chế tăng sinh tế bào ung thư vú MCF-7 của tamoxifen và Viễn chí Trung Quốc (polygala chinensis Linn.)” với ba mục tiêu như sau:

1 Tiến hành sàng lọc quy mô nhỏ tác dụng hiệp đồng của dược liệu và tamoxifen trên tế bào MCF-7 bằng mô hình Bliss Independence và lựa chọn được dược liệu tiềm năng là VCTQ

2 Kiểm chứng tác dụng hiệp đồng của VCTQ và tamoxifen trên tế bào MCF-7 bằng phương pháp Chou-Talalay

3 Đánh giá tác dụng hiệp đồng của VCTQ và tamoxifen trên sự tăng sinh của tế bào MCF-7

1 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN1.1 Tổng quan về ung thư vú

Ở Việt Nam, UTV là bệnh ung thư có tỉ lệ mắc cao nhất, chiếm 13,6% tổng số ca ung thư ở cả hai giới; 28,9% tổng số ca ung thư ở nữ giới và có tỷ lệ tử vong hàng đầu ở phụ nữ (20,2%); tức là cứ 7 người phụ nữ được chẩn đoán ung thư thì có đến 2 người là UTV và cứ có 5 người phụ nữ UTV thì có 1 người tử vong Trong năm 2018, ước tính tại Việt Nam có 15.222 ca mới mắc, đến năm 2022, con số này đã lên tới 24.563 ca mắc mới với 100% là nữ và 10.008 ca tử vong; chứng tỏ xu hướng đang tăng rất nhanh của các bệnh nhân UTV [46] Theo báo cáo của Nguyễn Thị Lan Mai trong luận án của mình, nhận xét về nhóm tuổi mắc UTV thì phân bố ở nhóm tuổi từ 50-59 là cao nhất (30,1%), tiếp theo là nhóm 40-49 tuổi (24,8%), nhóm 60-69 tuổi (21,8%), và nhóm bệnh nhân tuổi 20- 30 và ≥ 80 tuổi chiếm tỉ lệ thấp nhất (1,7%) Đa số UTV xuất phát từ tế bào biểu mô tuyến vú, ung thư biểu mô thể ống xâm nhập là chủ yếu chiếm 84,1% ,còn các thể mô bệnh học khác ít gặp chiếm 4,3%[3] Trong đó thể bệnh chính là UTV dương tính với thụ thể estrogen (ER) [26]

1.1.2 Điều trị ung thư vú

- Xạ trị - Hóa trị - Điều trị đặc hiệu đích - Điều trị miễn dịch - Điều trị nội tiết

1.1.2.2 Điều trị nội tiết

Các phương pháp điều trị khác nhau được lựa chọn cho từng trường hợp bệnh nhân khác nhau, đặc biệt là phụ thuộc đặc điểm bệnh học khối u như thể mô bệnh học, độ mô học, tình trạng thụ thể nội tiết

Trong những bệnh nhân ung thư vú, có khoảng 60 - 70% bệnh nhân có thụ thể nội tiết estrogen (ER) dương tính, trong đó có 65% thụ thể progesterone (PR) dương tính[26] Những bệnh nhân có thụ thể nội tiết ER dương tính được điều trị liệu pháp nội tiết có tỷ lệ sống sót cao hơn so với những bệnh nhân có thụ thể nội tiết ER âm tính Vì vậy, liệu pháp nội tiết tác động vào hoạt động ER đã trở thành nền tảng trong điều trị ung thư vú trong hơn một thế kỷ qua [4] Điều trị nội tiết bằng 2 phương pháp:

• Ngăn chặn việc sản xuất estrogen: - Ức chế buồng trứng: Buồng trứng là nơi sản xuất estrogen chủ yếu ở phụ nữ

chưa mãn kinh, estrogen có tác dụng lên các tế bào biểu mô vú, ảnh hưởng đến các tế bào UTV, nên khi ức chế chức năng của buồng trứng sẽ ngăn chặn sự phát triển của các khối u vú Các biện pháp:

o Phẫu thuật hoặc xạ trị cắt buồng chứng o Thuốc đồng vận GnRH (gonadotropin- releaseing hormone) - Thuốc ức chế aromatase (enzym chuyển đổi tiền chất androgen thành

estrogen, tạo estrogen từ các mô khác trong cơ thể) Ức chế aromatase giúp ức chế giảm sản xuất estrogen, đặc biệt ở những phụ nữ mãn kinh chỉ sản xuất aromatase không sản xuất estrogen nữa Các chất ức chế aromatase hiện đang được sử dụng là thuốc ức chế aromatase không steroid thế hệ thứ 3 (có thể đảo ngược): Anastrozol 1 mg/ngày uống và Letrozol 2,5 mg/ngày uống hoặc steroidal (không thể đảo ngược): Exemestan 25 mg/ngày uống Chỉ dùng cho bệnh nhân mãn kinh [13]

• Ngăn chặn tác động của estrogen lên tế bào khối u: - Thuốc điều biến chọn lọc thủ thể estrogen- SERM (Selection estrogen

receptor modulators): đóng vai trò chủ vận/ đối kháng estrogen hoặc cả hai tùy vào mô đích Tamoxifen là SERM được dùng nhiều nhất, ngoài ra còn có Toremifen và Raloxifen Có thể được sử dụng cho bệnh nhân trước và sau mãn kinh

- Thuốc làm suy giảm chọn lọc thụ thể estrogen- SERD (Selection estrogen receptor degrader): chất đối kháng estrogen, không có tác dụng chủ vận, như Fluvestrant [13]

1.2 Tamoxifen trong điều trị ung thư vú

1.2.1 Cơ chế tác dụng của tamoxifen

Trong những bệnh nhân ung thư vú, có khoảng 60 - 70% bệnh nhân có thụ thể nội tiết estrogen (ER) dương tính Estrogen đóng vai trò chính trong việc thúc đẩy sự tăng sinh của cả biểu mô vú bình thường và biểu mô vú tân sinh, gây ra khối u UTV Ba cơ chế chính được cho là có liên quan đến tác dụng gây ung thư của chúng: kích thích tăng sinh tế bào thông qua hoạt động nội tiết tố qua trung gian thụ thể ER, tác động gây độc gen trực tiếp bằng cách tăng tỷ lệ đột biến thông qua kích hoạt trao đổi chất qua trung gian cytochrom P450 và gây ra dị tật [26]

Tamoxifen (TAM) thể hiện cả tác dụng chủ vận và đối kháng estrogen ở các bộ phận khác nhau trong cơ thể Bởi có hai tác dụng này nên TAM được sử dụng cho bệnh nhân như một bộ điều biến thụ thể estrogen chọn lọc (SERM) Tamoxifen là SERM được sử dụng phổ biến nhất trong điều trị UTV hiện nay, có tác dụng trước và sau mãn kinh với liều uống 20 mg/ngày; phản ứng với tamoxifen khác nhau tùy thuộc vào phần trăm ER và PR từ các tế bào ung thư vú ER+, liệu pháp dùng tamoxifen vẫn có tác dụng kéo dài sau khi kết thúc điều trị [14] TAM hoạt động như một chất đối kháng estrogen trong tế bào ung thư vú ER+, chất chủ vận estrogen một phần trong tế bào nội mạc tử cung và chất chủ vận estrogen trong tế bào xương [13] Ở xương, TAM kích thích các thụ thể estrogen thay vì ngăn chặn chúng, tạo ra tác dụng chủ vận estrogen và có thể ngăn ngừa loãng xương ở phụ nữ sau mãn kinh [23] Trong mô vú, tamoxifen cạnh tranh đối kháng vị trí gắn với estrogen, ngăn không cho estrogen liên kết và kích thích thụ thể, gây ra tác dụng chống estrogen và chống ung thư Tamoxifen làm chậm chu trình tế bào thông qua các quá trình nội bào xuôi dòng, nên cũng được phân loại là thuốc kìm tế bào Tamoxifen có ái lực thấp với ER [6] nên hoạt tính dược lý còn phụ thuộc vào sự chuyển đổi thành chất chuyển hóa dạng có hoạt tính , endoxifen, bởi CYP2D6 [12] Endoxifen cạnh tranh với estrogen và liên kết với ER với ái lực cao hơn TAM gần 100 lần [6] Ngoài ra, tamoxifen ức chế quá trình glycosyl hóa ceramide và bước enzyme có thể giúp ảnh hưởng đặc tính ức chế khối u của ceramide, dẫn chất béo của spakenolipids Tamoxifen và các chất chuyển hóa N-desmethyltamoxifen và 4-hydroxytamoxifen đã được chứng minh là có tác dụng ức chế quá trình thủy phân ceramide bởi enzyme ceramidase Sự can thiệp đặc biệt này làm chậm quá trình phá hủy ceramide và do đó làm giảm thiểu sự hình thành sphingosine 1-phosphate, một loại spakenolipid có đặc tính thúc đẩy tăng trưởng ung thư Các liệu pháp tập trung vào ceramide đang trở thành

biện pháp can thiệp lâm sàng hấp dẫn trong điều trị ung thư, các tác nhân như tamoxifen có thể làm chậm quá trình tạo ra spakenolipids thấp nhất và giải phóng ceramide đệm thông qua ức chế glycosyl hóa, có tầm quan trọng mới [24] Một số cơ chế khác được đưa ra là tamoxifen có thể kích hoạt quá trình chết theo chu trình của tế bào thông qua ức chế hoạt tính của protein kinase, dẫn đến kích hoạt con đường c-Jun N-terminal kinase [15]

1.2.2 Tamoxifen trong phác đồ điều trị ung thư vú

Tamoxifen được chỉ định với bệnh nhân có thủ thể nội tiết ER+, là liệu pháp bổ trợ trong UTV giai đoạn sớm bao gồm phụ nữ tiền mãn kinh, sau mãn kinh và nam giới; điều trị UTV giai đoạn tiến triển hoặc di căn [1] Tamoxifen làm giảm nguy cơ tái phát và tử vong do ung thư vú khi được dùng như liệu pháp bổ trợ và mang lại sự giảm nhẹ triệu chứng một cách hiệu quả cho bệnh nhân ung thư vú di căn [27] Tamoxifen làm giảm 49% nguy cơ ung thư vú xâm lấn và 50% nguy cơ ung thư vú không xâm lấn, làm giảm sự xuất hiện của các khối u dương tính với thụ thể estrogen tới 69% [16]

Dưới đây là một số phác đồ nội tiết bổ trợ trong điều trị UTV: ➢ Giai đoạn sớm (I,II)

• Bệnh nhân còn kinh - Nếu có các yếu tố nguy cơ cao (dựa trên kích thước khối u, di căn hạch, điểm

mô bệnh học ), đặc biệt là phụ nữ dưới 35 tuổi, phối hợp ức chế buồng trứng (bằng chất đồng vận GnRH) hoặc cắt buồng trứng (bằng phẫu thuật hoặc xạ trị) và tamoxifen Ở nhóm đối tượng này kết hợp cắt hoặc ức chế buồng trứng với thuốc ức chế aromatase (AI) cho kết quả tốt hơn kết hợp với tamoxifen Thời gian ức chế buồng trứng có thể đến 5 năm Nếu sau 5 năm, bệnh nhân vẫn chưa mãn kinh, cần cân nhắc sử dụng tiếp Các trường hợp nguy cơ thấp có thể điều trị tamoxifen đơn độc Các trường hợp nguy cơ thấp có chống chỉ định tamoxifen, nên sử dụng ức chế buồng trứng hoặc cắt buồng trứng phối hợp với AI

- Sau 5 năm sử dụng tamoxifen, các trường hợp nguy cơ cao (dựa trên kích thước khối u, di căn hạch và điểm mô bệnh học) có thể tiếp tục điều trị tamoxifen đến 10 năm hoặc chuyển sang AI trong 5 năm (nếu bệnh nhân chuyển sang mãn kinh)

- Thuốc AI đơn độc (không kết hợp với ức chế buồng trứng) không có tác dụng điều trị ở bệnh nhân chưa mãn kinh Vì vậy, thuốc không được sử dụng ở bệnh nhân không đánh giá được chức năng buồng trứng, chỉ dựa vào hiện tượng mất kinh sau hoá trị

• Bệnh nhân đã mãn kinh

- Sử dụng AI từ đầu trong 5 năm Sau 5 năm điều trị có thể cân nhắc dùng tiếp AI 5 năm nữa

- Lựa chọn khác là AI trong 2-3 năm sau đó chuyển sang tamoxifen cho đủ 5 năm

- Các bệnh nhân mãn kinh đã sử dụng 4-6 năm tamoxifen, có thể chuyển sang AI trong 5 năm hoặc cân nhắc điều trị tiếp tamoxifen cho đủ 10 năm

- Các bệnh nhân mãn kinh nhưng có chống chỉ định AI, không dung nạp với AI hoặc không thể dùng AI vì các lý do khác, nên sử dụng tamoxifen trong 5 năm hoặc cân nhắc dùng lên đến 10 năm

• Bệnh nhân nam - Bệnh nhân UTV nam có ER+ nên được điều trị nội tiết bổ trợ bằng tamoxifen

Nếu có chống chỉ định tamoxifen, sử dụng chất đồng vận GnRH kết hợp AI ➢ Giai đoạn di căn (IV)

Điều trị nhằm mục đích giảm triệu chứng liên quan khối u, nâng cao chất lượng sống và kéo dài thời gian sống

- Các bệnh nhân không điều trị nội tiết trong vòng 1 năm trước đó có thể điều trị bằng các thuốc AI nếu đã mãn kinh Cắt buồng trứng (bằng phẫu thuật hoặc xạ trị) hoặc ức chế buồng trứng (bằng chất đồng vận GnRH) ở phụ nữ chưa mãn kinh Lựa chọn khác đối với các bệnh nhân này là tamoxifen nhưng đây là phương pháp kém hiệu quả hơn

- Nếu trước đó bệnh nhân đã dùng tamoxifen, hiện đã mãn kinh có thể chuyển sang AI hoặc ngược lại, bệnh nhân đã điều trị AI có thể chuyển sang tamoxifen

- Điều trị nội tiết duy trì ở bệnh nhân có thụ thể nội tiết dương tính, đã ổn định sau hóa trị cho bệnh di căn là một lựa chọn hợp lý

- Đối với UTV nam, điều trị nội tiết cũng được ưu tiên nếu ER dương tính, trừ khi lo ngại hoặc có bằng chứng bệnh kháng điều trị nội tiết hoặc bệnh tiến triển nhanh cần hóa trị

1.2.3 Tác dụng không mong muốn của tamoxifen

Giống như nhiều loại thuốc điều trị ung thư, tamoxifen có nhiều tác dụng phụ đi kèm, mặc dù những tác dụng phụ này ít khi nghiêm trọng và gây tử vong Các tác dụng phụ thường gặp nhất là tác dụng phụ liên quan đến hoạt động của estrogen như kinh nguyệt không đều, tiết dịch âm đạo và đặc biệt, bốc hỏa là tác dụng phụ thường gặp nhất của tamoxifen, xảy ra ở 80% phụ nữ dùng tamoxifen [16] Các tác dụng phụ ít gặp hơn có thể bao gồm mất ngủ, chóng mặt, nhức đầu, tăng cân, đau bụng, tiêu chảy, khó tiêu,

nhiễm trùng đường tiết niệu, giảm tiểu cầu, đau lưng, rụng tóc, đau xương và đục thủy tinh thể [27]

Mặc dù tamoxifen hoạt động như một chất kháng estrogen trong mô vú nhưng lại có đặc tính estrogen ảnh hưởng đến xương, hệ tim mạch, nội mạc tử cung và có thể cả gan Tamoxifen có cảnh báo về khối u ác tính ở tử cung, tắc mạch phổi và đột quỵ ở những bệnh nhân có nguy cơ cao mắc bệnh ung thư hoặc ung thư biểu mô ống tại chỗ Phụ nữ được điều trị kéo dài bằng tamoxifen có nguy cơ mắc huyết khối tĩnh mạch sâu (DVT) và tắc mạch phổi (PE) Hai năm đầu khi bắt đầu điều trị bằng tamoxifen là thời điểm quan trọng nhất có nguy cơ cao mắc DVT, PE [22] Khoảng 2 trong số 1.000 phụ nữ UTV dùng tamoxifen có nguy cơ phát triển ung thư nội mạc tử cung với tỷ lệ cao gấp hai đến ba lần so với nguy cơ dân số bình thường Nguy cơ này không liên quan đến liều lượng của tamoxifen mà liên quan đến thời gian sử dụng và sự tích lũy Nguy cơ gia tăng này có thể có tác động về thể chất và tâm lý đối với hàng nghìn phụ nữ hiện đang dùng thuốc Tuy nhiên, theo nghiên cứu thì lợi ích của việc giảm 40% UTV là lớn hơn nguy cơ phát triển ung thư nội mạc tử cung [11]

Các tác dụng phụ nghiệm trọng nêu trên bao gồm u nội mạc tử cung, nguy cơ mắc huyết khối tắc mạch, tắc mạch phổi, có thể hạn chế việc sử dụng tamoxifen ở một mức độ nhất định Việc theo dõi tốt quá trình điều trị là bắt buộc: thường là khám phụ khoa, khám tế bào Babes-Papanicolaou, U/S qua âm đạo [13] Việc sử dụng liều tamoxifen thấp hơn cũng làm giảm tác dụng phụ hơn và giảm độc tính hơn, phù hợp về mặt lâm sàng so với tamoxifen liều tiêu chuẩn và có bằng chứng gián tiếp mạnh mẽ cho thấy tamoxifen liều thấp 5 mg cũng có hiệu quả chống ung thư [7]

1.2.4 Tình trạng kháng tamoxifen

Tamoxifen là liệu pháp bổ trợ hàng đầu trong điều trị UTV, làm giảm 50% tỷ lệ tái phát hàng năm và giảm 31% tỷ lệ tử vong [54] Mặc dù vậy, 20-30% khối u vẫn kháng lại liệu pháp tamoxifen, vốn đã có trước khi điều trị (kháng thuốc mới) hoặc phát triển đề kháng trong quá trình trị liệu (kháng tamoxifen mắc phải) [5] Điều này đặt ra một thách thức lớn trong việc điều trị hiệu quả UTV Vì vậy, khám phá cơ chế kháng của Tamoxifen là rất được chú trọng, để tìm ra con đường điều trị mới giảm tình trạng kháng Tamoxifen này

Một số cơ chế kháng Tamoxifen đã được đưa ra bao gồm: mất biểu hiện/ chức năng ER, mất các đường truyền tín hiệu, biểu hiện thay đổi microRNA, cũng như chuyển hóa tamoxifen Ngoài ra, cả nhiễu xuyên âm genomic và phi genomic cũng như mối tương quan phức tạp giữa các phân nhóm ER và các yếu tố tăng trưởng đều góp phần phát triển kháng nội tiết [41] Trong đó, việc mất/ thay đổi biểu hiện ER là cơ chế chính của tình

trạng kháng thuốc mới đối với liệu pháp nội tiết, nó là tình trạng chuyển từ ER(+) ban đầu thành ER(-) Tác dụng của tamoxifen chủ yếu qua trung gian ER và mức độ biểu hiện ER yếu tố dự báo chính về đáp ứng của tamoxifen, nên việc mất biểu hiện ER có thể gây ra tình trạng kháng Các cơ chế làm mất biểu hiện ER là trạng thái thiếu oxy gây ra sự thoái hóa ER [63]; biểu hiện quá mức EGFR hoặc HER2 góp phần ức chế phiên mã gen ER, dẫn đến kháng nội tiết; tăng hoạt tính MAPK và liên quan đến p53 tăng cường các khối u vú có ER(-) [43]

1.3 Dược liệu có tác dụng chống ung thư vú

1.3.1 Các dược liệu có tác dụng chống ung thư vú

Tác dụng không mong muốn, tình trạng kháng thuốc và chi phí điều trị cao là những vấn đề hiện tại liên quan đến việc quản lý hiệu quả điều trị UTV [60] Vì vậy, cần một con đường mới trong phương pháp điều trị UTV nhằm mục tiêu an toàn và tiết kiệm chi phí Từ xa xưa, trong dân gian đã lưu truyền nhiều loại thuốc quý có tác dụng điều trị ung thư trên người [37] Vì vậy, các chế phẩm có nguồn gốc thiên nhiên là chất chống ung thư đầy hứa hẹn Hiệu quả của chúng cũng được báo cáo là làm giảm độc tính và ít tái phát tình trạng kháng thuốc đối với các tác nhân chống ung thư nhắm mục tiêu nội tiết tố (kháng đa thuốc như đã thấy với một số tác nhân chống ung thư) [36]

Các thành phần hoạt tính từ dược liệu có thể ức chế các liên kết phụ thuộc vào ER (tăng trưởng và tăng sinh tế bào) và độc lập (tạo ra các gốc tự do và tác nhân gây độc gen) và có khả năng gây ra stress oxy hóa và gây ung thư thông qua tín hiệu ER [34] Cơ chế tác dụng của các thành phần thực vật đó bao gồm ức chế tăng sinh tế bào, phát triển khối u, di căn, apoptosis hình thành mạch và điều hòa các con đường sống sót của tế bào Chúng điều chỉnh tín hiệu nội bào như yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu, yếu tố hạt nhân -κB và Bcl-2 có liên quan mật thiết đến sự phát triển và tiến triển của ung thư vú [58] Hoạt chất nổi bật như isoflavone, được chứng minh làm giảm nguy cơ tử vong xuống 29% và nguy cơ tái phát ung thư xuống 32% Việc sử dụng isoflavone trong thời thơ ấu hoặc trưởng thành góp phần vào sự biệt hóa mô vú, dẫn đến giảm cấu trúc giải phẫu dẫn đến hình thành tế bào ung thư Cơ chế tác dụng của chất này như một chất có đặc tính estrogen và/hoặc kháng estrogen [53]

Các thành phần khác từ chế phẩm thiên nhiên như flavonoid, alkaloid, terpenoid, coumarin được biết đến với đặc tính chống oxy hóa, chống viêm (glabridin, curcumin, arctigenin và ajoene) và kích hoạt tế bào lympho (axit quinic, β-carotene, epigallocatechin-3-gallate, và ginsan), là những đặc tính điều hòa miễn dịch mạnh cần thiết để ức chế hoặc chống lại các tế bào ung thư [35] Sự có mặt của các thành phần như alkaloid, tanin, terpenoid và saponin có thể là nguyên nhân cho tác dụng chống

UTV [49] Thành phần chính trong Khổ sâm (Croto tonkinensis Gagnep.) làditerpenoid ent-kaurane cho thấy tiềm năng trong việc chống UTV

Có độc tính chọn lọc chống lại các tế bào UTV là một đặc tính quan trọng để lựa chọn dược liệu cho điều trị hoặc kết hợp điều trị UTV Thành phần polyphenol được chứng minh là có khả năng gây độc tế bào chọn lọc đối với các dòng tế bào ung thư vú MCF-7 và HTB-126 tương ứng [50], là thành phần chính của Thanh cao hoa vàng

(artemisia annua L.) [52] và Xạ đen (Celastrus hindsii Benth.) [38] Vì vậy, hai dược

liệu này được chọn để đánh giá tác dụng kết hợp để điều trị UTV Một loạt các thực vật tiềm năng được đánh giá cao trong việc chống lại một số loại

ung thư ở người Trinh nữ hoàng cung (Crinum latifolium) được chứng minh là có tác

dụng chống viêm, chống oxy hóa liên quan đến tác dụng chống ung thư, gây độc tế bào gây ức chế tế bào ung thư nội tiết như tế bào ung thư tuyến tiền liệt, ung thư cổ tử cung

[48] Đặc biệt, Mảnh cộng (Clinacanthus nutans), Ngưu bàng (Arctium lappa L.) và Bán chi liên (Scutellaria barbata Wall.) đã được chứng minh có tác dụng ức chế tăng sinh tế

bào UTV MCF-7 bằng cơ chế chết tế bào theo chu trình trong các nghiên cứu gần đây khi dùng đơn độc [47], [29], [57]; nên nó rất được kỳ vọng trong nghiên cứu kết hợp với TAM nhằm đưa ra liệu pháp điều trị mới

Tác dụng chống ung thư của các thành phần hoạt tính của một số loại thảo dược có thể được cải thiện một cách hiệp quả bằng cách kết hợp chúng với các loại thuốc hóa trị liệu thông thường như tamoxifen, doxorubicin, 5-fluorouracil và paclitaxel Hơn nữa, hiệu quả của các loại thuốc hóa trị liệu cũng được cải thiện và giảm độc tính [58] Một số sản phẩm tự nhiên, bao gồm morin, silybin, epigallocatechin gallate (EGCG), myricetin, baicalein, curcumin, kaempferol hoặc quercetin đã được phát hiện là làm tăng khả dụng sinh học của TAM và các chất chuyển hóa của nó trong cơ thể [66] Vì vậy đã thúc đẩy ý tưởng nghiên cứu để đánh giá tác dụng hiệp đồng của Tamoxifen cùng với các loại dược liệu tiềm năng, nhằm mục đích an toàn, hiệu quả cho người bệnh

1.3.2 Viễn chí Trung Quốc (VCTQ) – Polygala chinensis Linn

1.3.2.1 Tên khoa học Viễn chí Trung Quốc (VCTQ), tên khoa học là Polygala chinensis Linn., được tìm

thấy lần đầu tiên bởi Carl Linnaeus (1707-1778) và xuất bản trên tạp chí Species Plantarum số: 704 năm 1753

VCTQ thuộc bộ Fabales, họ Polygalaceae, chi Polygala (gồm 422 loài được chấp nhận)

Hình 1.1 Hình ảnh cây Viễn chí Trung Quốc (chụp bởi ThS Lại Việt Hưng)

1.3.2.2 Đặc điểm và phân bố

VCTQ là cây thảo sống hàng năm, mọc thẳng, cao 10- 25 cm; rễ sơ cấp màu cam, tròn; thân gỗ, cành nhỏ, có lông mao mềm Cuống lá khoảng 1 mm, có lông; phiến lá màu xanh, hình trứng ngược, hình elip hoặc hình mũi mác, kích thước (2,6- 10× 1- 1,5) cm, dạng giấy, có lông, gân giữa nổi lên in dọc theo trục, ít gân bên, mờ, gốc hình nêm đến tròn hoặc hình tim, mép nguyên, hơi cong, đỉnh tù hoặc nhọn; lá bắc cơ bản 2 lá, hình mũi mác Hoa khoảng 4,5 mm; lá đài 5, màu xanh, có lông chuyển, lá đài ngoài 3, hình trứng hoặc hình mác, khoảng 2 mm, đỉnh nhọn; lá đài trong 2, hình cánh hoa, hình liềm, khoảng 4,5 mm, có 4 hoặc 5 gân rõ rệt, gốc có móng guốc, đỉnh nhọn Cánh hoa 3, màu vàng hoặc trắng pha hồng; bên trong có lông trắng tập trung ở gốc; tràng hoa 4 mm, đỉnh có 2 phần phụ, dạng bó Nhị hoa 8, 1/2 dưới hợp nhất tạo thành bao nhị mở, chia ở 1/2 trên thành 8 sợi tự do; bao phấn hình trứng hẹp Bầu nhụy hình tròn, đường kính 1 mm, có lông; kiểu dáng cong cong, đỉnh hình móc câu; nhụy ở móc Quả nang có đài hoa rộng, hình cầu hoặc hình chữ nhật, có viền, có lông chuyển, có lông ngắn thưa thớt và hiếm khi có lông thẳng dài, kích thước (3,2– 4,4)x (3,7–4,7) mm Hạt màu đen, hình trứng, có lông trắng dày đặc [42]

Hình 1.2 Phân bố tự nhiên của VCTQ

Phạm vi phân bố tự nhiên của VCTQ chủ yếu ở khu vực Châu Á, vùng nhiệt đới & cận nhiệt đới đến Quần đảo Caroline; Châu Á vùng ôn đới có: Trung Quốc, Nansei-shoto, Đài Loan ; Châu Á vùng nhiệt đới có: Tiểu lục địa Ấn Độ, Assam, Bangladesh, Đông Himalaya, Ấn Độ, Pakistan, Sri Lanka, Tây Himalaya, Campuchia, Lào, Myanmar, Nicobar, Thái Lan, Việt Nam, Malesia, Philippin, Sumatra, Papuasia New Guinea, Solomon; Châu Úc có lãnh thổ phía Bắc, Queensland; Thái Bình Dương có Tây Bắc Thái Bình Dương, đảo Caroline [51]

VCTQ có nguồn gốc từ Colombia, Assam, Bangladesh, Borneo, Campuchia, Đảo Caroline, Trung Nam Trung Quốc, Đông Nam Trung Quốc, Đông Himalaya, Hải Nam, Ấn Độ, Jawa, Lào, Đảo Sunda Nhỏ, Malaya, Myanmar, Nansei-shoto, New Guinea, Đảo Nicobar, Lãnh thổ phía Bắc, Pakistan, Philippines, Queensland, Quần đảo Solomon, Sri Lanka, Sumatra, Đài Loan, Thái Lan, Việt Nam, Tây Himalaya [51]

STT Tên thành phần Bản chất Công thức

phân tử

Tỷ lệ (%)

3

9H-Foro (2,3- H) 2,8-dione, 4-methyl-9-(3,4,5-

1.3.2.4 Tác dụng dược lý

Cao chiết VCTQ làm giảm lượng đường huyết và tăng chỉ số insulin trong máu ở những chuột bị gây ra tiểu đường có chỉ số đường huyết cao, insulin trong máu thấp Nồng độ ure, creatinine, glycosyl hóa hemoglobin (HBA1C) cũng được điều hòa bởi VCTQ Hoạt tính chống đái tháo đường của cao chiết có thể có do cơ chế kích thích insulin tuyến tụy còn sót lại hoặc bằng cách tăng sử dụng glucose ở ngoại vi Trong phân

tích hóa thực vật trước đó đã chỉ ra sự hiện diện của các hoạt chất flavonoid, glycoside, phenolic, tanin và alkaloid Trong đó, flavonoid được báo cáo là có tác dụng tái tạo các tế bào beta đảo tụy bị tổn thương, phenolic được chứng minh là thuốc hạ đường huyết hiệu quả Đây có thể củng cố thêm kết luận, VCTQ có tác dụng kiểm soát lượng đường trong máu ở bệnh nhân tiểu đường [30]

VCTQ được chứng minh có tác dụng cải thiện quá trình chuyển hóa lipid, trong đó việc làm giảm nồng độ insulin trong máu được nêu ở trên đóng một vai trò quan trọng Insulin là một chất ức chế mạnh quá trình phân giải lipid, nó sẽ kích hoạt enzyme lipoprotein lipase và thủy phân chất béo trung tính và sự thiếu hụt insulin dẫn đến bất hoạt các enzyme này, từ đó gây ra tình trạng tăng triglycerid máu Vì vậy, việc điều trị bằng VCTQ làm giảm đáng kể nồng độ lipid huyết thanh ở chuột mắc bệnh tiểu đường có thể là do sự cải thiện nồng độ insulin Ngoài ra, nó còn làm giảm nồng độ phospholipid, kiểm soát nồng độ cholesterol toàn phần (TC), chất béo trung tính (TG), LDL-C, VLDL-C và HDL-C; chứng thực tác dụng hạ mỡ máu của mình [30]

Cao chiết ethanol của VCTQ cũng được chứng minh là có tác dụng bảo vệ gan Trong nghiên cứu gây độc gan bằng chất độc gan CCl4 trên chuột, nó Đối với lô chuột được uống cao chiết VCTQ với liều 100 và 200 mg/kg uống trong 14 ngày, các chỉ số trên gần như về mức bình thường; so với nhóm được điều trị bằng thuốc chuẩn silymarin có thể khẳng định được tác dụng bảo vệ gan của VCTQ [62]

VCTQ cũng thể hiện tác dụng bảo vệ gan trong việc điều chỉnh hoạt động của glutamate pyruvate transaminase huyết thanh (SGPT) và glutamate huyết thanh oxaloacetate transaminase (SGOT) trong gan trên mô hình chuột bị nhiễm độc alloxan về mức hoạt động bình thường Mà mức SGPT và SGOT còn đóng vai trò là chỉ số đánh giá chức năng gan và việc phục hồi mức bình thường của các thông số này cho thấy hoạt động bình thường của gan [30]

• Diệt gốc tự do, chống oxy hóa Gurav và cộng sự (2007) sàng lọc hóa chất thực vật của chiết xuất VCTQ cho thấy sự hiện diện của saponin, coumarin, flavonoid và lignan; đó là một nguồn giàu flavonoid và polyphenol Bằng các phương pháp phân tích khác nhau như xét nghiệm loại bỏ gốc tự do 1, 1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH), xét nghiệm loại bỏ gốc tự do oxide nitric và xét nghiệm loại bỏ gốc hydrogen peroxide dẫn đến kết luận rằng phenolics, flavonoid trong đó có hoạt động loại bỏ gốc tự do mạnh mẽ Flavonoid và polyphenol cũng được

chứng minh là có hoạt tính chống oxy hóa và được sử dụng để phòng ngừa và chữa các bệnh ung thư chủ yếu có liên quan đến hoạt động diệt các gốc tự do này [44], [60]

Ngoài ra, hoạt tính chống oxy hóa của VCTQ còn được chứng minh trong nghiên cứu của N Vijaya Rekha và cộng sự (2019) bằng phương pháp DPPH sử dụng DPPH (gốc tự do 1.1- diphenyl-2- picrylhyldrazyl) Liên quan đến tác dụng chống oxy hóa, nghiên cứu còn đánh giá thêm hoạt tính chống giun sán của cao chiết VCTQ [61]

Các nghiên cứu cũng chỉ rằng tác dụng của VCTQ hoạt động phụ thuộc vào nồng độ trong tất cả các mô hình IC50 được phát hiện lần lượt là 56,09 µg/ml, 47,63 µg/ml và 41,003 µg/ml trong xét nghiệm DPPH, xét nghiệm loại bỏ gốc tự do NO và xét nghiệm loại bỏ H2O2 [44] IC50 của cao chiết metanol VCTQ là 30,1 µg/ml

Trong nghiên cứu của M Alagammala và công sự (2012) chỉ ra rằng điều trị bằng VCTQ đã ức chế đáng kể khối lượng và thể tích khối u, ức chế số lượng tế bào ung thư còn sống và đưa các thông số huyết học bất thường về mức bình thường, nó thể hiện đặc tính chống ung thư đáng kể trên chuột mang khối u ung thư cổ trướng hạch Dalton Thông thường, vấn đề chính gặp phải trong điều trị ung thư bằng hóa trị, xạ trị là ức chế tủy và thiếu máu, chủ yếu là do giảm tỷ lệ hồng cầu hoặc huyết sắc tố và điều này có thể xảy ra do thiếu sắt hoặc do tình trạng tan máu hoặc bệnh lý tủy Điều trị bằng VCTQ đã đưa hàm lượng hemoglobin (Hb), số lượng hồng cầu và bạch cầu cơ bản về mức bình thường Điều này chỉ ra VCTQ cũng có tác dụng bảo vệ hệ thống tạo máu Một trong những tiêu chí đáng tin cậy để đánh giá giá trị của bất kỳ loại thuốc chống ung thư nào là khả năng kéo dài tuổi thọ của động vật, nghiên cứu này cũng đánh giá và đưa ra kết luận rằng VCTQ làm tăng tuổi thọ của chuột mang khối u ung thư cổ trướng [30]

1,5–anhydro-d-mannitol, 9,12-octadecadienoic acid (Z,Z)-, squalene được phát hiện trong cao chiết VCTQ có vai trò quan trong việc chống ung thư Trong đó 1,5–anhydro-d-mannitol là hoạt chất chính có ý nghĩa quan trọng trong chống ung thư cản trở sự gắn kết của tế bào ung thư THP-1 với ma trận ngoại bào [17] Flavonoid và polyphenol có trong cao chiết VCTQ cũng được chứng minh là có hoạt tính chống oxy hóa và được sử dụng để phòng ngừa và chữa các bệnh ung thư chủ yếu có liên quan đến hoạt động diệt các gốc tự do này [44], [60] Mà chất chống oxy hóa đóng vai trò quan trọng trong việc ngăn ngừa UTV và cải thiện hiệu quả điều trị UTV [20] Các nghiên cứu trên đã chứng minh tác dụng chống ung thư của VCTQ và tiềm năng của nó trong việc điều trị UTV

1.3.2.5 Y học cổ truyền

Từ lâu đời nay, VCTQ được dùng như một vị thuốc truyền thống hiệu quả cho nhiều loại bệnh [45] Công dụng đầu tiên, lá VCTQ được người Mỹ sử dụng như một dược liệu để điều trị vết rắn cắn, sau này người ta phát hiện ra các công dụng khác của dược liệu này như: làm thuốc long đờm để điều trị ho và viêm phế quản [65], một loại thuốc bổ cực mạnh , giúp phát triển trí tuệ và hỗ trợ tư duy sáng tạo [64]

1.3.2.6 Độc tính cấp

Nghiên cứu độc tính cấp tính cho thấy bản chất không độc hại của toàn bộ cây

VCTQ [30], chiết xuất ethanol của toàn bộ cây Polygala chinensis Linn không cho thấy

bất kỳ tác dụng độc hại nào cho đến liều 2000 mg/kg thể trọng, theo trọng lượng 100 mg/kg và 200 mg/kg thể trọng được dùng ở liều thấp và cao của toàn cây [30]

1.4 Phương pháp phân tích để đánh giá khả năng phối hợp thuốc

Sử dụng phối hợp tamoxifen cùng với các thành phần dược liệu giúp cải thiện một cách hiệu quả tác dụng chống ung thư vú, giảm độc tính và tình trạng kháng thuốc [58] Hiện nay, phối hợp thuốc cũng đã được sử dụng rộng rãi và trở thành lựa chọn hàng đầu trong điều trị nhiều căn bệnh nguy hiểm như ung thư và hội chứng suy giảm miễn dịch [55] Vì vậy, việc đánh giá khả năng phối hợp thuốc rất cần thiết để xác định liệu pháp phối hợp điều trị tiềm năng

Để đánh giá được chính xác hiệu quả của việc phối hợp thuốc trong quá trình sàng lọc, việc lựa chọn phương pháp phân tích thống kê tin cậy là rất quan trọng Có nhiều phương pháp đã được đề xuất như Loewe (1953), Bliss (1956), Carter và cộng sự (1988), Berenbaum (1989), Greco, Par và Rustum (1990), Machado và Robinson (1994), Greco, Bravo and Parsons (1995), Dawson, Gennings và cộng sự (2002), Chou (2006), Fitzgerald và cộng sự (2006), Lee và cộng sự (2007), Whitehead và cộng sự (2008) Các thuật toán mới đã được phát triển trong những năm gần đây như Peifer và cộng sự (2010) , Harbron (2010) , Zhao và cộng sự (2012 , 2014) Qua rất nhiều nổ lực nghiên cứu, hai nguyên tắc chính trong việc lựa chọn mô hình nghiên cứu là: tính cộng hợp Loewe ( Loewe 1953 ) và sự độc lập của Bliss ( Bliss 1956 ) Trong các nghiên cứu kết hợp thuốc điều trị bệnh ung thư, tính cộng Loewe phù hợp khi các loại thuốc nhắm vào cùng một con đường Ngược lại, nguyên tắc độc lập của Bliss phù hợp hơn khi hai loại thuốc không loại trừ lẫn nhau, tức là khi mỗi loại nhắm vào một con đường truyền tín hiệu khác nhau Quyết định sử dụng tính cộng Loewe hay độc lập Bliss có thể được đưa ra dựa trên việc mỗi loại thuốc kết hợp có nhắm vào cùng một con đường hay không Trước tiên, phải xây dựng một mô hình tham chiếu cho giả thuyết về sự không có tương tác giữa hai thuốc, nghĩa là tác dụng của mỗi thuốc là độc lập với nhau, khi kết hợp các

thuốc thì tác dụng đạt được là tổng của mỗi tác dụng thuốc riêng lẻ Bất kỳ sai lệch nào so với các mô hình tham chiếu sẽ được coi là hiệp đồng tăng cường hoặc đối kháng Nếu kết hợp thuốc X và Y đạt mức đáp ứng tương tự so với khi sử dụng riêng lẻ nhưng với liều lượng thấp hơn thì phối hợp đó được gọi là hiệp đồng tăng cường [55]

Sự tương tác của các tác nhân hoạt động sinh học/ hóa học thường được nhóm thành ba loại: tính hiệp đồng, tính độc lập và tính đối kháng, dựa trên mức độ khác biệt của các hiệu ứng kết hợp quan sát được so với phản ứng mong đợi khi không có tương tác[18]

Mô hình Bliss Independence [55]:

Một trong những phương pháp lâu đời nhất để định lượng tác dụng hiệp đồng là mô hình Bliss Independence Mô hình này giả định rằng các loại thuốc không tương tác với nhau và tạo ra đáp ứng của chúng một cách độc lập

Giả sử SA, SB, SAB lần lượt là % tế bào sống sót sau khi tiếp xúc với chất thử A, chất thử B và sự kết hợp giữa 2 chất thử với cùng liều khi dùng đơn độc

A và B hiệp đồng cộng nếu SAB = SA x SB

A và B hiệp đồng tăng cường nếu SAB < SA x SB

A và B đối kháng nếu SAB > SA x SB

Mô hình Loewe Additivity [19]:

Giả định 1: Không có tương tác nào xảy ra khi một chất được kết hợp với chính nó Giả định 2: Liều gây ra cùng đáp ứng của hai chất khác nhau là tương đương nhau Nếu liều đơn độc D1 của chất A và D2 của chất B tạo ra cùng đáp ứng M, trong trường hợp không có tương tác giữa A và B thì bất kỳ sự kết hợp liều lượng nào (d1, d2) của A và B thỏa mãn điều kiện 𝑑1

𝐷1+ 𝑑2𝐷2= 1 sẽ tạo ra đáp ứng M tương tự khi dùng liều đơn độc của mỗi chất

Sự khác biệt chính của hai mô hình tham chiếu ở giả định cơ bản của chúng trong cơ chế tác dụng độc lập hay cùng cơ chế tác dụng Trên thực tế, không có mô hình nào trong số này đúng cho mọi trường hợp phối hợp thuốc Do đó, việc sử dụng mô hình nào để đánh giá đã trở thành lựa chọn cá nhân của các nhà nghiên cứu

2 CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu

➢ Viễn chí Trung Quốc (VCTQ) VCTQ dược thu hái tại Bắc Giang vào tháng 8 năm 2021 và giám định tên khoa học và thu mẫu tiêu bản ký hiệu HV12, được lưu giữ tại bảo tàng thuộc Trung tâm Tài nguyên Dược liệu- Viện Dược liệu (Phụ lục 1) Sau đó các dược liệu sẽ được chiết tách bằng ethanol 70% để thu được cao chiết toàn phần bởi khoa Hóa thực vật – Viện dược liệu

Quy trình chiết cụ thể như sau:

Các dược liệu sàng lọc được thu hái và giám định tên khoa học bởi khoa Tài nguyên- Viện Dược liệu Sau đó các dược liệu này sẽ được chuyển sang khoa Hóa thực vật- Viện Dược liệu để chiết bằng ethanol 70% để thu được cao chiết toàn phần

➢ Dòng tế bào Dòng tế bào ung thư vú biểu hiện thụ thể estrogen Michigan Cancer Foundation-7 (MCF-7), được cung cấp bởi ATCC (American Type Culture Collection), hoạt hóa và lưu giữ tại Viện dược liệu

Mẫu dược liệu thu hái

Bột dược liệu Xử lý loại tạp

Cao chiết cồn Cô cạn

2.2 Nguyên vật liệu, thiết bị

2.2.1 Hóa chất

Bảng 2.1: Danh mục hóa chất trong nghiên cứu

Hoa Kỳ 6 (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium

Bromide) (MTT)

Invitrogen, Hoa Kỳ

16 Kháng thể thứ cấp kháng IgG thỏ liên hợp huỳnh quang

Alexa-488

Abcam, Anh

2.2.2 Dụng cụ, thiết bị nghiên cứu

Bảng 2.2: Danh mục dụng cụ, thiết bị trong nghiên cứu

Quốc