Rong bún (Enteromorpha sp.)
Mӝt sӕ ÿһFÿLӇm sinh hӑc
Trên thӃ giӟL Fy KѫQ ORjLEnteromorpha sp ÿѭӧc mô tҧ (Index Norninum Algarum, 2002) Rong bún Enteromorpha sp có vӏ trí phân loҥLQKѭVDX x Giӟi : Plantae x Ngành : Cholorophyta x Lӟp : Chlorophyceae x Bӝ : Ulotrichales x Hӑ : Ulvaceae x Giӕng : Enteromorpha Link, 1820 ĈһFÿLӇm hình thái
Các loài Enteromorpha sp rҩW NKy ÿӇ phân biӋt (Budd & Pizzola, 2002) Tҧn rong có hình sӧi dài, phân nhánh, dҽp và rӛng Các sӧi cӫa Enteromorpha sp hình ӕng, dài có thӇ phân nhánh, phҷng (Fish and Fish, 1989; Kirby, 2001) Rong WKѭӡng có PjX[DQKWѭѫLYjEӏ mҩWPjXNKLÿѭӧc SKѫLQҳng trên các tҧQÿi&ҩu tҥo cӫa sӧi rong chӭa các tӃ bào hình trө, phҷng, mӝt hoһc nhiӅu lӟp tӃ bào, hoһc nhiӅXFѫquan phӭc tҥp
Giӕng nhiӅu loài rong khác, rong Enteromorpha sp có hai hình thӭc sinh sҧn: vô tính và hӳu tính ThӇ bào tӱ có hai bӝ nhiӉm sҳc thӇ, ký hiӋXOjQ7URQJNKLÿyWKӇ giao tӱ chӍ có mӝt nhiӉm sҳc thӇ 1n Thông qua nguyên phân, giao tӱ (tӃ bào sinh sҧn hӳXWtQKÿѭӧc sinh ra bӣi thӇ giao tӱ và phát triӇn thành mӝt thӇ bào tӱ và giҧm phân tҥo ra hӧp tӱ (tӃ bào sinh sҧn vô tính), mӛi hӧp tӱ phát triӇn thành mӝt thӇ giao tӱ, thӇ giao tӱ Qj\VDXÿyWҥo ra nhiӅu giao tӱ KѫQYjFKXNǤ vүn tiӃp tөc (Kirby, 2001)
Hình 2.1 ± Rong bún Enteromorpha sp
Các giao tӱ ÿӵc và cái có thӇ cùng hoһFNKiFNtFKWKѭӟc, cҧ hai giao tӱ và hӧp tӱ ÿѭӧc sinh ra tӯ nhӳng tҧn rong Enteromorpha sp., khi giao tӱ ÿӵc có màu cam vàng và giao tӱ cái có màu xanh thì chúng bҳWÿҫu kӃt hӧp lҥi vӟLQKDXÿӇ tҥo thành mӝt ³cây rong non´ Các giao tӱ không thӇ tӗn tҥi trong thӡLJLDQGjLVDXNKLÿѭӧc phát tán nӃu chúng không tìm thҩy mӝt giao tӱ khác hoһc mӝWQѫLÿӇ phát triӇn (Budd và Pizzola, 2002)
Enteromorpha sp là loài rong phân bӕ trên toàn thӃ giӟi, trong nhiӅu P{LWUѭӡng khác nhau, nó có thӇ chӏXÿѭӧFFiFÿӝ mһn khác nhau tӯ Qѭӟc ngӑWÿӃQQѭӟc biӇn và FNJQJWuPWKҩy ӣ suӕLQѭӟc mһn Chúng có thӇ phát triӇn trên bӡ biӇQÿҥLGѭѫQJWURQJ YQJQѭӟc lӧ và trong nӝLÿӏDQѭӟc ngӑt Enteromorpha sp FNJQJFyWKӇ phát triӇn trên nhiӅu loҥi nӅQÿi\FiWEQKRһFÿҩWÿiWKұm chí cҧ gӛ, bê tông hoһc kim loҥi hoһc phát triӇn tӵ do mà không cҫn giá thӇ, Enteromorpha sp FNJQJSKiWWULӇn ӣ bãi triӅu ven biӇQ Qy FNJQJ Fy WKӇ phát triӇn vӟi các loҥi rong và tҧo khác trong nhiӅu môi WUѭӡng sӕng khác nhau
Hình 2.2 ± 9zQJÿӡi cӫa rong bún Enteromorpha sp (Kirby, 2001) ĈLӅu kiӋQVLQKWUѭӣng và phát triӇn
Các loài rong bún (Enteromorpha sp.) Qѭӟc lӧ phân bӕ chӫ yӃu ӣ các thӫy vӵc QѭӟFWƭQKQѭӟFWURQJYjÿӝ mһn thҩp (1-QKѭFiFDRTXҧng canh và thӫy vӵc tӵ QKLrQ1JRjLUDURQJE~QFNJQJÿѭӧc tìm thҩy ӣ các thӫy vӵFQѭӟc lӧ NKiFQKDXQKѭNrQKQѭӟc thҧi, nhӳng ao hӗ gҫQNKXGkQFѭDRW{Pthâm canh bӓ hoang hoһc giӳa hai chu kǤ sҧn xuҩt.
Thành phҫn hóa hӑc và ӭng dөng cӫa rong bún
Theo kӃt quҧ phân tích cӫa Aguilera ± Morales et al (2005KjPOѭӧng protein cӫDURQJE~QGDRÿӝng trong khoҧng 11.6 ± 25.5%, lipid 2 ± 3.6%, tro 32 ± 36%, giàu chҩt khoáng (Iod và Canxi), vitamin (B12, C) và các sҳc tӕ fucoxathin, fucosterol, phlorotanin Tәng các acid amin thiӃt yӃu chiӃm 9.78 ± 16.58% trӑng Oѭӧng khôÿһc biӋt protein trong rong bún có khҧ QăQJ tiêu hóa cao (98%) (Fleurence, 1999; Aguilera ± Morales et al (2005) Ngoài ra, rong còn chӭa các acid béo thiӃt yӃXQKѭDFLG Į- linolenic (omega 3_C:18)
7KHR 6DX]H ÿѭӧc trích dүn bӣi NguyӉQ 9ăn Luұn (2011) thì
Enteromorpha sp có chӭa chҩt diӋp lөc b và khoáng chҩt, chҷng hҥQQKѭPDJLHFDQ[L và sҳW7URQJÿyQJjQKURQJOөc Chlorophyta chӭa 16-22.1% protein, tro 12.4-18.7% và 43.4-60.2% carbohydrate
KӃt quҧ cӫa NguyӉQ9ăQ/Xұn (2011), khҧo sát vӅ thành phҫn sinh hóa cӫa rong bún Enteromorpha sp thì KjP Oѭӧng protein là: 7.28-26.64%, lipid: 1.05-4.78%, tro: 17.14-[ѫ-9.24% và cacbohydrate: 36.50-59.76% KӃt quҧ cho thҩy khҧ QăQJFyWKӇ sӱ dөQJURQJE~QÿӇ làm nhiên liӋu sinh hӑc hoһc dùng làm thӭFăQ cho các loài thӫy sҧQYjFRQQJѭӡi
Mӝt nghiên cӭu khác trên thӃ giӟi ÿmFKRWKҩy các thành phҫQY{FѫFKҩt béo và thành phҫn acid amin cӫa loài Enteromorpha sp ăQ ÿѭӧc, tӭc là Enteromorpha compressa, Enteromorpha linza và Enteromorpha tubulosa thu thұp tӯ các bӡ biӇn phía tây Bҳc cӫa ҨQĈӝ có giá trӏ GLQKGѭӥQJ7URQJÿyOѭӧng carbohydrate chiӃm cao nhҩt (51.05 ± 1.22%), tiӃS WKHR Oj SURWHLQ Yj KjP Oѭӧng lipid
(5.56 ± 0.16%) Trong sӕ Pѭӡi bҧy nguyên tӕ phân tích (Ca, K, Mg, Na, P, As, Cd,
Co, Cu, Fe, Hg, Mn, Mo, Ni, Zn, Cr, Pb) thì KjPOѭӧng canxi cӫa E tubulosa FDRKѫQ
Enteromorpha compressa và Enteromorpha linza E compressa FyKjPOѭӧng protein
(11.42 ± 0.017 g/100 g trӑQJOѭӧQJNK{FDRKѫQVRYӟi 2 loài còn lҥi Các thành phҫn khác (81.51 ± 6.65 mg/100 g trӑQJOѭӧng khô) chiӃm tӍ lӋ cao ӣ E linza Phân tích vӅ KjPOѭӧng acid amin cho thҩy, 7 trong sӕ 10 acid amin thiӃt yӃXÿѭӧc ghi nhұn là lӟn KѫQ KRһc bҵng vӟi các protein tham khҧR +ѫQ Qӳa, cҧ ba loài nghiên cӭu sӣ hӳu Oѭӧng acid EpRWѭѫQJÿӕi cao; ngoài ra chúng còn có các acid béo không bão hòa nhiӅu KѫQӣ mӝt sӕ loҥi khác, ngoҥi trӯ E.compressa 'Rÿy ba loài rong khҧo sát có thӇ ÿѭӧc sӱ dөQJQKѭWKӵc phҭm bә VXQJÿӇ nâng cao giá trӏ GLQKGѭӥng trong chӃ ÿӝ ăQ uӕng.
Có nhiӅu bҵng chӭng chӭng minh rҵng vӏ WUt ÿӏa lý ҧQK KѭӣQJ ÿӃn các thành phҫn hóa hӑc cӫa các loҥL URQJ ÿһc biӋW Oj KjP Oѭӧng protein (Dere et al, 2003; Haroon et al., 2000) Nghiên cӭu tұp trung vào rong lӟn thu thұp tӯ GemLik-Karacaali (Bursa) và Erdek-2UPDQOL%DÕNHVLUWҥi vùng biӇn Marmara cӫa Thә 1Kƭ.Ǥ ÿm[iF ÿӏQKÿѭӧc mӕi quan hӋ giӳa protein tәng, vӏ WUtYjÿӝ sâu
KӃt quҧ khҧo sát thành phҫQ GLQK Gѭӥng cӫa rong bún (Enteromorpha intestinalis) ӣ thӫy vӵFQѭӟc lӧ tӍnh Bҥc LLrXYj6yF7UăQJ (NguyӉn Thӏ Ngӑc Anh, 2014), cho thҩy thành phҫn sinh hóa cӫDURQJE~QWKD\ÿәLWKHRJLDLÿRҥn phát triӇn, WURQJÿyWKjQKSKҫQGLQKGѭӥng cӫDURQJQRQYjURQJWUѭӣQJWKjQKWѭѫQJWӵ nhau và cҧ KDLFyKjPOѭӧQJGLQKGѭӥQJFDRKѫQQKLӅu so vӟLURQJJLj7KrPYjRÿyWKjQK phҫQVLQKKyDFѫEҧn và acid amin cӫDURQJE~QFNJQJÿѭӧF[iFÿӏnh ӣ các khoҧQJÿӝ mһn khác nhau (thҩp nhҩt, trung bình và cao nhҩt) cho mӛi thӫy vӵc Ngoài ra hàm Oѭӧng protein cӫa rong bún có mӕLWѭѫQJTXDQWKXұn vӟLKjPOѭӧQJGLQKGѭӥng trong thӫy vӵc
Nhìn chung URQJ Qѭӟc lӧ là mӝW ÿӕL WѭӧQJ ÿѭӧc quan tâm vӅ GLQK Gѭӥng vì chúng rҩt giàu vitamin, khoáng chҩW Yj [ѫEnteromorpha compressa (Linnaeus) là mӝt nguӗn giàu chҩt sҳWYj[ѫÿѭӧc sӱ dөQJQKѭPӝt thành phҫn trong Pakoda - mӝt thӵc phҭPăQQKҽ truyӅn thӕng phә biӃn ӣ ҨQĈӝ ViӋc bә sung Enteromorpha sp vào mӝt sӕ loҥi thӵc phҭm JL~SWăQJKjPOѭӧng sҳt tӯ PJWăQJOrQ126 mg/100g và Oѭӧng canxi tӯ PJWăQJOrQPJJ
Thu nhұn protein
Trích ly protein
&iFSKѭѫQJSKiSWUtFKO\SURWHLQÿӅu dӵa trên nhӳng tính chҩt hóa lý cӫa protein QKѭ ÿӝ WtFK ÿLӋQ NtFK WKѭӟc phân tӱ ÿӝ hòa tan cӫa protein cҫn thu nhұn NhiӅu protein còn liên kӃt vӟi các phân tӱ sinh hӑc khác nên viӋc trích ly các protein này còn phө thuӝc vào bҧn chҩt cӫa các liên kӃt Muӕn thu nhұQÿѭӧc các protein nguyên thӇ tӭc là protein có tҩt cҧ tính chҩt tӵ QKLrQÿһFWUѭQJFӫa nó, cҫn sӱ dөng các biӋn pháp NKiFQKDX&iFWiFQKkQWKѭӡng sӱ dөng trong quá trình trích ly và thu nhұQSURWHLQÿó là sӵ WKD\ÿәi nhiӋWÿӝ, nӗQJÿӝ proton (pH) và sӱ dөng các dung môi hóa hӑc Ngoài UDFiFWiFÿӝQJFѫKӑc, sóng siêu âm có ҧQKKѭӣQJÿӃn quá trình tách chiӃt protein
Dung môi chӫ yӃu WKѭӡng ÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ trích ly protein trong rong là kiӅm Fleurence (1995) chӍ ra rҵng viӋFWUtFKO\SURWHLQTXDKDLJLDLÿRҥn, lҫQÿҫu bҵQJQѭӟc khӱ ion và lҫn thӭ hai bҵng dung môi NaOH 0,1M và 2-mercaptoethanol cho hiӋu suҩt trích ly protein cao nhҩW ÿӕi vӟi hai loài rong Ulva rigida và Ulva rotundata
Barbarino và /RXUHQoRÿmQJKLrQFӭu quá trình trích ly protein tӯ 15 loҥi rong NKiFQKDXYjÿѭDUDPӝt quy trình trích ly và thu nhұn protein tӯ rong Tác giҧ ÿmFKӍ ra rҵng sӱ dөng dung dӏch NaOH 0,1N vӟi sӵ hӛ trӧ cӫDTXiWUuQKÿӗng hóa Fѫ trên URQJÿѭӧc lҥnh ÿ{QJVӁ cho hiӋu suҩt trích ly tӕt nhҩt
Tuy nhiên, viӋc trích ly protein bӏ hҥn chӃ bӣi các thành phҫn polysaccharides trong thành tӃ EjR QKѭ DOJLQDWHV WURQJ Phaeophyta hoһc các carrageenans trong Rhodophyta (Fleurence, 1999; Jordan & Vilter, 1991) Sӕ lѭӧng lӟn polysaccharides WUXQJWtQKQKѭ[\ODQVYjFHOOXORVHWURQJPӝt sӕ ORjLURQJÿӓ và rong lөFFNJQJFyWKӇ ҧQKKѭӣQJÿӃn viӋc trích ly các protein (Fleurence, 1999) Nhӳng polysaccharides này là nhӳng trӣ ngҥi chính trong viӋc trích ly và tinh sҥch protein tӯ rong (Fleurence và cӝng sӵ, 1995; Jordan & Vilter, 1991) Các hӧp chҩWSKHQROLFFNJQJÿyQJPӝt vai trò quan trӑng trong viӋc hҥn chӃ hiӋu quҧ cӫa quá trình trích ly protein (Ragan &
*ORPELW]DĈӇ cҧi thiӋn khҧ QăQJKzDWDQFӫa protein rong, QJѭӡi ta sӱ dөng các chҩt phө JLDQKѭFKҩt tҭy rӱa (Rice & Crowden, 1987) hoһc sӱ dөQJSKѭѫQJiQKӛ trӧ xӱ lý kiӅm (Serot và cӝng sӵWURQJFiFSKѭѫQJSKiSFә ÿLӇn ViӋc loҥi bӓ SRO\VDFFKDULGHWURQJÿLӅu kiӋn nhҽ nhàng sӁ JL~SWăQJKLӋu quҧ thu nhұn protein
2.2.2 Xӱ lý nguyên liӋu bҵng enzyme ÿӇ hӛ trӧ trích ly protein
MӝWSKѭѫQJSKiS WKѭӡQJÿѭӧc lӵa chӑQÿӇ hӛ trӧ trích ly protein tӯ rong là sӱ dөng hӋ enzyme thӫy phân thành tӃ bào và các polysaccharide bên trong tӃ bào (Fleurence, 2003; Joubert and Fleurence, 2008) $PDQRYj1RGDÿӅ xuҩt viӋc sӱ dөng các enzyme phá vӥ thành tӃ bào tҧo Porphyra yezoensis tҥRÿLӅu kiӋn thuұn lӧi cho viӋc trích ly và nghiên cӭu protein Các tác giҧ sӱ dөng mӝt hӛn hӧp enzyme, bao gӗm các enzyme tiêu hóa lҩy tӯ ruӝt cӫDEjRQJѭHaliotis discusand (chӃ phҭm
WKѭѫQJPҥLÿѭӧc gӑLOj0DFHURHQ]\PH5ÿӇ cҧi thiӋn khҧ QăQJWKXQKұn protein KӃt quҧ là hiӋu suҩt thu hӗLSURWHLQWăQJÿһc biӋt là protein hòa WDQ WURQJ Qѭӟc vӟi hiӋu suҩt trích ly là 29% Mӝt nghiên cӭu thӵc hiӋn trên các loài tҧR ÿӓ Chondrus Crispus, Gracilaria verrucosa và Palmaria palmate sӱ dөng các enyme khác nhau, kӃt quҧ cho thҩy hoҥWÿӝng cӫa các enzyme carrageenase và cellulaVHÿm làm cho hiӋu xuҩt trích ly SURWHLQWăQJOҫn (Fleurence và cӝng sӵ, 1995)
Quá trình thӫy phân cellulose cҫn có sӵ tham gia cӫa cҧ 3 loҥi cellulase là HQGRJOXFDQDVH H[RJOXFDQDVH Yj ȕ-glucosidase Tӯ các nghiên cӭu riêng rӁ vӟi tӯng loҥi enzyme cellulase, các nhà khoa hӑFÿmÿѭDUDNӃt luұn là các enzyme cellulase sӁ thay phiên nhau phân hӫ\FHOOXORVHÿӇ tҥo thành sҧn phҭm cuӕi cùng là glucose
Theo Erikson và cӝng sӵ FѫFKӃ WiFÿӝng cӫa 3 loҥLHQ]\PHQj\QKѭVDX ÿҫXWLrQHQGRJOXFDQDVHWiFÿӝQJYjRYQJY{ÿӏnh hình trên bӅ mһt cellulose, cҳt liên kӃWȕ-1,4-glucoside vào tҥRUDFiFÿҫu mҥch tӵ do TiӃSÿyH[RJOXFDQDVHWҩn công cҳt ra tӯQJÿRҥn cellobiose tӯ ÿҫu mҥch glucan mӟLÿѭӧc tҥo thành KӃt quҧ cӫa hai quá trình trên tҥo ra các oligosaccharide mҥch ngҳn, cellobiose, glucose CuӕL FQJ ȕ- glucosidase sӁ tiӃp tөc thӫy phân các oligosaccharide tҥo ra glucose
Các yӃu tӕ ҧQK KѭӣQJ ÿӃn quá trình thӫy phân cellulose cӫa enzyme cellulase bao gӗm nӗQJÿӝ FѫFKҩt, nӗQJÿӝ enzyme, nhiӋWÿӝ và pH cӫDP{LWUѭӡng Cellulase tӯ A.niger hoҥW ÿӝng tӕt trong khoҧng 40 0 C-50 0 C WURQJ NKL ÿy KRҥt tính endoglucanase thu nhұn tӯ Trichodermareesei ÿҥt tӕLѭXӣ 55 0 C, còn endoglucanase tӯ
A oryzae hoҥWÿӝng tӕt trong khoҧng 45 0 C - 55 0 C (Kiamoto và cӝng sӵ, 1996) Theo kӃt quҧ nghiên cӭu cӫa Gao và cӝng sӵ (2008), hoҥt tính endoglucanase cӫa A terreus tӕt nhҩt trong khoҧng pH acid tӯ 2 ± WURQJ NKL ÿy NKRҧng pH tӕi thích cӫa
Trichoderma reesei và A oryzae là 4 ± 5 pH tӕL ѭX FKR KRҥW ÿӝng cӫa enzyme cellulase tӯ A.niger OjP{LWUѭӡng trung tính pH 7 ± 8
2.3 Tính chҩt chӭFQăQJ cӫa protein
Protein có thӇ có mһt trong thӵc phҭm ӣ trҥng thái rҳn hoһc lӓng, dҥng thuҫn nhҩt hoһc hӛn hӧp ChӃ phҭPSURWHLQÿѭӧc bә sung vào thӵc phҭm ÿӇ tҥo giá trӏ dinh Gѭӥng, tҥo hình và tҥo kӃt cҩX ÿһF WUѭQJ FKR WKӵc phҭP 7URQJ FiF ÿLӅu kiӋn công nghӋ nhҩW ÿӏnh, protein có thӇ WѭѫQJ WiF Yӟi nhau, vӟL QѭӟF JOXFLG OLSLG ÿӇ tҥR ÿӝ ÿһFÿӝ dҿRÿӝ trong, tҥo bӑt, tҥRÿӝ xӕp cho sҧn phҭP1Jѭӡi ta gӑLÿk\OjWtQKFKҩt chӭFQăQJcӫDSURWHLQ7tQKQăQJF{QJQJKӋ cӫa protein trong thӵc phҭm ngoài phө thuӝc vào thành phҫn, cҩu trúc và các tính chҩt hóa lý cӫa protein còn phө thuӝc rҩt lӟn vào yӃu tӕ P{LWUѭӡQJQKѭGXQJP{LS+Oӵc ion, nӗQJÿӝ protein, nhiӋWÿӝ và các thành phҫn khác trong thӵc phҭm khác (Hoàng Kim Anh, Hoá hӑc thӵc phҭm, 2007)
Mӝt vài tính chҩt chӭFQăQJFѫEҧn cӫa các loҥLSURWHLQWKѭӡQJÿѭӧc nghiên cӭu có thӇ ÿѭӧc kӇ ÿӃQQKѭNKҧ QăQJhòa tan, khҧ QăQJKҩp thu dҫu, hҩSWKXQѭӟc, khҧ QăQJ Wҥo gel, khҧ QăQJ Wҥo bӑt, khҧ QăQJ WҥR QKNJ WѭѫQJ Yj FiF \Ӄu tӕ ҧQK Kѭӣng WKѭӡQJÿѭӧc khҧRViWQKѭS+Qӗng ÿӝ muӕi
Khҧ QăQJhòa tan cӫa protein có thӇ biӇu diӉQTXDSKѭѫQJWUuQKFkQEҵng nhiӋt ÿӝng lӵc hӑc sau (Damodaran, 1996):
Protein ± Protein + Dung môi ± 'XQJP{Lļ3URWHLQ± Dung môi
Khi lӵFWѭѫQJWiFSURWHLQ± dung môi lӟQKѫQSURWHLQ± protein thì protein sӁ bӏ khuӃch tán vào dung môi, tҥo micelle và hình thành dung dӏch
Theo Vaclavik và Christian (2008), nhӳng tính chҩt chӭF QăQJ NKiF QKDX QKѭ khҧ QăQJWҥRQKNJWѭѫQJNKҧ QăQJWҥo bӑWÿLӅXFyOLrQTXDQÿӃn tính tan cӫa protein
Có hai yӃu tӕ chính ҧQKKѭӣQJÿӃn khҧ QăQJhòa tan cӫa protein là thành phҫn, cҩu trúc cӫa protein và các yӃu tӕ P{LWUѭӡQJQKѭS+ nӗQJÿӝ muӕi, loҥi dung môi và nhiӋWÿӝ Bigelow (1967) cho rҵQJÿӝ hòa tan cӫDSURWHLQOLrQTXDQÿӃn tính chҩt kӷ Qѭӟc cӫDFiFDFLGDPLQYjÿLӋn tích cӫa chúng Theo tác giҧ, tính chҩt kӷ Qѭӟc càng nhӓ YjÿLӋn tích càng lӟn thì khҧ QăQJhòa tan cӫa protein càng cao
2.3.1.1 ҦQKKѭӣng cӫDS+ÿӃn khҧ QăQJhòa tan cӫa protein
Khҧ QăQJhòa tan cӫa protein phө thuӝc nhiӅXYjRS+Ĉӝ hòa tan cӫa protein kém nhҩt tҥi các giá trӏ pI Càng khác biӋt giá trӏ S,ÿӝ hòa tan cӫDSURWHLQFjQJWăQJ 1KѭWURQJQJKLrQFӭu cӫa Wu và cӝng sӵ (2008) vӅ ҧQKKѭӣng cӫDS+ÿӃn khҧ QăQJ hòa tan cӫa các chӃ phҭm protein thu nhұn tӯ hҥWÿұu phӝng, kӃt quҧ cho thҩy khi giá trӏ pH gҫQÿLӇPÿҷQJÿLӋn (pH 4.0 ± 5.0), khҧ QăQJhòa tan cӫa chӃ phҭm protein là rҩt thҩSYjWăQJGҫn vӅ cҧ hai phía khi giá trӏ pH WKD\ÿәi FjQJ[DÿLӇPÿҷQJÿLӋn Khҧ QăQJhòa tan cӫa các chӃ phҭm protein thӇ hiӋn tӕt nhҩt ӣ cҧ giá trӏ pH acid (pH 2.0) và pH kiӅm (pH 10.0)
Tính chҩt chӭFQăQJFӫa protein
Khҧ QăQJKҩp thu dҫu cӫa protein
Khҧ QăQJKҩp thu dҫu ҧQKKѭӣQJÿӃn tính chҩWQKNJhóa cӫa protein, cҧi thiӋn vӏ và khҧ QăQJJLӳ mùi cӫa thӵc phҭm Khҧ QăQJKҩp thu dҫu chӏu ҧQKKѭӣng bӣi nhiӅu yӃu tӕ QKѭÿһFÿLӇm hình dҥng cӫa phân tӱ protein, bӅ mһt kӷ Qѭӟc, sӵ hiӋn diӋn cӫa nhӳng amino acid không phân cӵFWURQJFiFWѭѫQJWiFFӫa protein ± dҫu (Saavedra và cӝng sӵ, 2013) Nhӳng amino acid không phân cӵc này sӁ liên kӃt vӟi chuӛi hydrocarbon cӫa phân tӱ dҫu, tӯ ÿyOjPWăQJNKҧ QăQJKҩp thu dҫu cӫa protein
Mӝt sӕ nghiên cӭu cӫa Ogunwolu và cӝng sӵ (2006), Mao và Hua (2012) cho rҵng sӵ khác biӋt ӣ khҧ QăQJKҩp thu dҫu giӳa các mүu là do sӵ hiӋn diӋn nhiӅu hay ít nhӳng amino acid không phân cӵc trong thành phҫn nguyên liӋu Bên cҥQK ÿy Vӵ biӃQWtQKVѫEӝ cӫa protein làm lӝ ra các nhóm amino acid kӷ Qѭӟc trong quá trình xӱ OêFNJQJFyWKӇ OjPWăQJNKҧ QăQJKҩp thu dҫu cӫa protein.
Khҧ QăQJKҩSWKXQѭӟc cӫa protein
Sӵ hҩp thu và giӳ Qѭӟc cӫa protein có ҧQKKѭӣng lӟQÿӃn tính chҩt và kӃt cҩu cӫa thӵc phҭP 1ѭӟF ÿѭӧc hҩp thu sӁ tҭP ѭӟW QKѭQJ NK{QJhòa tan protein làm cho SURWHLQWUѭѫQJOrQWӯ ÿyWҥRQrQÿӝ ÿһc cho thӵc phҭm (Damodaran, 1996)
Khҧ QăQJKҩSWKXQѭӟc cӫDSURWHLQÿѭӧF[iFÿӏnh bҵng sӕ gram hoһc mL Qѭӟc liên kӃt vӟi mӛL JUDP SURWHLQ NKL ÿҥW ÿѭӧc trҥng thái cân bҵng ҭm giӳa khӕi bӝt SURWHLQWK{YjKѫLQѭӟFÿӝ ҭPWѭѫQJÿӕi 90 ± KLÿyFiFSKkQWӱ Qѭӟc gҳn kӃt vӟi mӝt vài nhóm trong phân tӱ protein Các nhóm này có thӇ là các gӕF WtFK ÿLӋn WK{QJTXDWѭѫQJWiFWƭQKÿLӋn) hoһc các cҫu nӕi peptide (thông qua liên kӃt hydro) Mӝt vài yӃu tӕ P{L WUѭӡQJ QKѭ S+ QӗQJ ÿӝ muӕi, loҥi muӕi, nhiӋW ÿӝ có thӇ ҧnh Kѭӣng trӵc tiӃSÿӃn khҧ QăQJKҩSWKXQѭӟc cӫa protein (Damodaran, 1996)
2.3.3.1 ҦQKKѭӣng cӫDS+ÿӃn khҧ QăQJKҩSWKXQѭӟc cӫa protein
.KLWKD\ÿәi pH môi WUѭӡng sӁ OjPWKD\ÿәi sӵ ion hóa và sӵ WtFKÿLӋn cӫa các phân tӱ SURWHLQGRÿyVӁ OjPWKD\ÿәi lӵc hút và lӵFÿҭy giӳDFiFSURWHLQFNJQJQKѭ NKX\QK Kѭӟng protein liên kӃt vӟLQѭӟc Protein thӇ hiӋn khҧ QăQJK\GUDWHhóa yӃu nhҩt ӣ S+ÿҷQJÿLӋQNKLÿyWѭѫng tác protein ± protein là cӵFÿҥi và sӵ WѭѫQJWiFJLӳa Qѭӟc và các phân tӱ protein là cӵc tiӇu Khi giá trӏ pH càng khác biӋt so vӟi pI, sӵ gia WăQJÿLӋn tích cùng vӟi lӵFÿҭ\WƭQKÿLӋn sӁ OjPWăQJNKҧ QăQJJLӳ Qѭӟc cӫa protein Khҧ QăQJKҩSWKXQѭӟc cӫa hҫu hӃt các loҥLSURWHLQÿҥt cao nhҩt ӣ khoҧng pH 9.0 ± 10.0 Tuy nhiên, khi giá trӏ pH lӟQKѫQVӵ mҩWÿLӋQWtFKGѭѫQJWӯ gӕc -amino cӫa lysine sӁ làm giҧm khҧ QăQJJLӳ Qѭӟc cӫa protein (Damodaran, 1996)
2.3.3.2 ҦQKKѭӣng cӫa nӗQJÿӝ muӕi ÿӃn khҧ QăQJKҩSWKXQѭӟc cӫa protein
Bҧn chҩt và nӗQJÿӝ muӕLFyOLrQTXDQÿӃn giá trӏ lӵFLRQWURQJP{LWUѭӡng và sӵ phân bӕ ÿLӋn tích trên bӅ mһt phân tӱ SURWHLQQrQFNJQJҧQKKѭӣQJÿӃn khҧ QăQJK\GUDW hóa1Jѭӡi ta nhұn thҩy có sӵ cҥnh tranh liên kӃt giӳDQѭӟc, muӕi và các nhóm ngoҥi cӫa acid amin Khi nӗQJÿӝ muӕi thҩp, khҧ QăQJKҩSWKXQѭӟc cӫa protein có thӇ WăQJ do sӵ ÿtQKWKrPFiFLRQJL~SPӣ rӝng mҥQJOѭӟi protein Tuy nhiên khi nӗQJÿӝ muӕi cao, các liên kӃt muӕi ± Qѭӟc trӣ nên trӝLKѫQOjPJLҧm các liên kӃt protein ± Qѭӟc, GRÿyNKҧ QăQJKҩSWKXQѭӟFFy[XKѭӟng giҧm
Theo Lawal và cӝng sӵ (2005), khҧ QăQJKҩSWKXQѭӟc cӫa các chӃ phҭm protein thu nhұn tӯ hҥt bҥch quҧ WăQJGҫn theo sӵ JLDWăQJQӗQJÿӝ NaCl trong khoҧng 0 ± 0YjVDXÿyJLҧm dҫQFKRÿӃn khi nӗQJÿӝ ÿҥt giá trӏ 1.25M Ӣ nhӳng giá trӏ lӵc ion thҩp, nhӳng ion muӕi bӏ hydrat hóa liên kӃt yӃu vӟi các gӕFWtFKÿLӋn cӫa protein nên không làm ҧQKKѭӣQJÿӃn lӟp vӓ hydrat cӫa nhӳng gӕFWtFKÿLӋQQj\1KѭQJӣ nhӳng giá trӏ lӵFLRQFDRKѫQOjP[Xҩt hiӋn sӵ liên kӃt chһt chӁ giӳDQѭӟc và các ion muӕLO~FQj\WѭѫQJWiFJLӳa các phân tӱ SURWHLQÿѭӧFWăQJFѭӡng dүQÿӃn hiӋQWѭӧng dehydrat hóa nhӳng phân tӱ protein và làm giҧm khҧ QăQJKҩSWKXQѭӟc Ngoài ra, chӃ phҭm albumin có khҧ QăQJKҩSWKXQѭӟc thҩSKѫQQKLӅu so vӟi globulin do albumin có khҧ QăQJhòa tan tӕWKѫQ El ± Adawy (2000) cho rҵng protein có khҧ QăQJhòa tan càng cao sӁ thӇ hiӋn khҧ QăQJKҩSWKXQѭӟc càng kém.
Khҧ QăQJWҥo tҥo bӑWYjÿӝ bӅn bӑt cӫa protein
3URWHLQÿѭӧc biӃW ÿӃQ QKѭ mӝt chҩt tҥo bӑt và làm bӅn bӑt trong mӝt sӕ loҥi thӵc phҭm Sӵ hình thành hӋ bӑWOLrQTXDQÿӃn sӵ khuӃch tán protein hòa WDQÿӃn các bӅ mһt phân chia không khí ± QѭӟF ĈӇ ÿiQK JLi WtQK QăQJ Wҥo bӑt cӫa mӝt loҥi SURWHLQ QJѭӡL WD WKѭӡQJ [iF ÿӏnh giá trӏ foam capacity ± FA (khҧ QăQJ Wҥo bӑt) và foam stability ± )6ÿӝ bӅn bӑt) cӫDSURWHLQÿy
Có rҩt nhiӅu yӃu tӕ ҧQKKѭӣQJÿӃn khҧ QăQJWҥo bӑWYjÿӝ bӅn bӑt cӫa protein Bên cҥnh khҧ QăQJhòa tan, nӗQJÿӝ và bҧn chҩt cӫa protein là nhӳng yӃu tӕ nӝi tҥi; giá trӏ pH, nӗQJÿӝ muӕi trong dung dӏch, thӡLJLDQFѭӡQJÿӝ khuҩy hoһc sӵ gia nhiӋt nhҽ là nhӳng yӃu tӕ ErQQJRjLFyWiFÿӝQJÿӃn khҧ QăQJWҥo bӑWYjÿӝ bӅn bӑWQKѭQJ WURQJ ÿy \Ӄu tӕ pH và nӗQJ ÿӝ muӕi là hai yӃu tӕ WKѭӡQJ ÿѭӧc khҧo sát trong các nghiên cӭu vӅ tính chҩt chӭFQăQJFӫa các loҥi protein khác nhau
2.3.4.1 ҦQKKѭӣng cӫDS+ÿӃn khҧ QăQJWҥo bӑWYjÿӝ bӅn bӑt cӫa protein
Lawal và cӝng sӵ ÿmQJKLrQFӭu vӅ khҧ QăQJWҥo bӑWYjÿӝ bӅn bӑt cӫa albumin, globulin, bӝWWiFKEpRYjFKѭDWiFKEpRWӯ ÿұu Parkia biglobossa Châu Phi ӣ nhӳng pH khác nhau KӃt quҧ cho thҩy, tҥi nhӳQJÿLӇm pH mà khҧ QăQJWҥo bӑt cao nhҩWWKuÿӝ bӅn bӑt lҥi không cao Nhӳng nghiên cӭXWѭѫQJWӵ FNJQJFyNӃt luұQÿӝ bӅn bӑWÿҥt giá trӏ FDRKѫQWKuNKҧ QăQJWҥo bӑt giҧm (Lawal và cӝng sӵ, 2004; Aluko và Yada, 1995) Sӵ JLDWăQJÿLӋn tích cӫa nhӳQJSURWHLQFyWѭѫQJWiFNӷ Qѭӟc yӃu làm WăQJVӵ OLQKÿӝng cӫa các phân tӱ SURWHLQWKHRÿyFiFSKkQWӱ protein này sӁ khuӃch WiQÿӃn các bӅ mһt phân chia không khí ± QѭӟFQKDQKKѫQEDROҩy các bӑt khí, tӯ ÿy OjPWăQJNKҧ QăQJWҥo bӑt cӫa các chӃ phҭm protein Tuy nhiên vӅ ÿӝ bӅn bӑt thì có sӵ khác biӋt Vӟi mӑi nguyên liӋXÿѭӧc khҧRViWÿӝ bӅn bӑWÿҥt giá trӏ cao nhҩt tҥi pI và giҧm dҫn ӣ KDLELrQ&NJQJWKHRQKLrQFӭu, tҥLÿLӇPÿҷQJÿLӋn, sӵ hình thành mӝt lӟp màng tҥi bӅ mһt phân chia pha dӉ GjQJKѫQvì NK{QJFzQWѭѫQJWiFÿҭ\GRWtFKÿLӋn cùng dҩXÿLӅu này góp phҫn tҥo nên mӝt lӟp phân tӱ protein bӅQKѫQWҥi bӅ mһt phân chia pha không khí ± Qѭӟc giúp bӑt tҥRUDFyÿӝ bӅn cao
2.3.4.2 Ҧnh Kѭӣng cӫa nӗQJ ÿӝ muӕi ÿӃn khҧ QăQJ Wҥo bӑW Yj ÿӝ bӅn bӑt cӫa protein
Bên cҥnh yӃu tӕ pH, sӵ JLDWăQJQӗQJÿӝ muӕLFNJQJҧQKKѭӣng tӟi khҧ QăQJWҥo bӑWYjÿӝ bӅn bӑt cӫa protein Nghiên cӭu cӫa Lawal và cӝng sӵ (2005) vӅ ҧQKKѭӣng cӫa nӗQJ ÿӝ muӕL ÿӃn khҧ QăQJ Wҥo bӑt cӫa các chӃ phҭm protein thu nhұn tӯ ÿұu
Parkia biglobossa Châu Phi cho thҩy khi nӗQJ ÿӝ muӕL WăQJ Wӯ 0 lên 0.4M thì khҧ
QăQJ Wҥo bӑW ÿӕi vӟi cҧ DOEXPLQ Yj JOREXOLQ ÿӅX WăQJ Gҫn VDX ÿy NKҧ QăQJ Wҥo bӑt giҧm khi tiӃp tөFWăQJQӗQJÿӝ muӕi Tác giҧ cho rҵng khҧ QăQJWҥo bӑWWKD\ÿәi là do ÿӝ hòa tan khác nhau cӫa protein ӣ nhӳng giá trӏ nӗQJÿӝ muӕi khác nhau Khi nӗng ÿӝ muӕi thҩp, khҧ QăQJWҥo bӑWWăQJOjGRVӵ WăQJGҫn khҧ QăQJhòa tan cӫa protein ӣ nhӳng nӗQJÿӝ muӕi này Khi nӗQJÿӝ muӕi tiӃp tөFWăQJNKҧ QăQJhòa tan giҧm dҫn kéo theo sӵ giҧm dҫn cӫa khҧ QăQJWҥo bӑt Khi lӵc ion thҩp thì khҧ QăQJhòa tan cӫa SURWHLQWăQJGҫQQJѭӧc lҥLÿӝ hòa tan cӫa protein giҧm dҫQNKLWăQJOӵc ion quá cao (Akintayo và cӝng sӵ, 1999) Ӣ nhӳng nӗQJ ÿӝ muӕi thҩS ÿӝ bӅn bӑt cӫa chӃ phҭm globulin và protein FRQFHQWUDWHFy[XKѭӟQJWăQJGҫQYjÿҥt cӵFÿҥLÿӝ bӅn bӑt sӁ giҧm dҫn khi nӗQJÿӝ muӕLWăQJFDRKѫQLawal và cӝng sӵ (2005) cho rҵng nӗQJÿӝ muӕLWăQJVӁ góp phҫn tҥo nên nhӳng lӟp màng khá nhӟt thônJTXDWѭѫQJWiFJLӳa các phân tӱ protein nên cҧi thiӋQÿӝ bӅn hӋ bӑt.
Khҧ QăQJWҥRQKNJYjÿӝ bӅn hӋ QKNJWѭѫQJFӫa protein
HӋ QKNJ WѭѫQJOjFiFKӋ phân tán cӫa hai chҩt lӓng không hòa tan vào nhau, mӝt chҩt lӓng ӣ dҥng nhӳng giӑt nhӓ phân tán, còn chҩt lӓng kia ӣ dҥng pha liên tөc HӋ QKNJWѭѫQJUҩt phә biӃn trong các sҧn phҭm thӵc phҭm Tuy nhiên, các hӋ QKNJWѭѫQJ WKѭӡng không bӅn do các hiӋQWѭӧng nәi lên/lҳng xuӕng, kӃt tө hay hӧp nhҩt cӫa pha phân tán làm ҧQKKѭӣQJÿӃn chҩWOѭӧng sҧn phҭP3URWHLQÿóng vai trò nәi bұt trong viӋc làm bӅn hӋ QKNJWѭѫQJWKӵc phҭm Các protein tҥi bӅ mһt phân chia pha cӫa các giӑt dҫu bӏ SKkQWiQYjRSKDQѭӟc liên tөc sӁ tҥo mӝt lӟp màng vӟi nhӳng tính chҩWFѫ
Oê QKѭ ÿӝ Gj\ ÿӝ nhӟW ÿӝ ÿjQ KӗL ÿӝ cӭng và có tác dөng chӕng lҥi sӵ hӧp giӑt (Matsumura và Matsumiya, 2012)
2.3.5.1 ҦQK Kѭӣng cӫD S+ ÿӃn khҧ QăQJ WҥR QKNJ Yj ÿӝ bӅn hӋ QKNJ WѭѫQJ cӫa protein
KӃt quҧ nghiên cӭu cӫa Lawal và cӝng sӵ (2005) cho thҩy khҧ QăQJWҥRQKNJFӫa tҩt cҧ các nguyên liӋXÿӅu có giá trӏ nhӓ nhҩt tҥLS,YjWăQJGҫn ӣ KDLELrQĈiӅu này ÿѭӧc giҧi thích là do tҥLS+ÿҷQJÿLӋn, protein sӁ giҧm khҧ QăQJhòa tan và tӯ ÿyJLҧm khҧ QăQJWҥRQKNJ9uNKLSURWHLQFyNKҧ QăQJhòa tan tӕt, nó sӁ dӉ dàng khuӃFKWiQÿӃn bӅ mһt phân chia dҫu ± Qѭӟc và bӏ hҩp phө ӣ ÿy9LӋFQj\JL~SQJăQFҧn sӵ hӧp nhҩt cӫa các giӑt dҫu phân tán Ĉӝ bӅQQKNJWѭѫQJÿѭӧc tҥo thành là kém nhҩt tҥLS+ÿҷQJÿLӋn (Lawal và cӝng sӵĈiӅXQj\ÿѭӧc giҧi thích là do tҥi pI, phân tӱ protein cân bҵQJÿLӋn tích nên không góp phҫn vào sӵ tíFKÿLӋn trên bӅ mһt các hҥt dҫu phân tán trong hӋ QKNJWѭѫQJYjFy[XKѭӟng làm cho các hҥWQKNJWѭѫQJGӉ WѭѫQJWiFYӟi nhau, gây ra hiӋQWѭӧng kӃt tө làm giҧPÿӝ bӅQQKNJWѭѫQJ6ӵ giҧm khҧ QăQJhòa tan ӣ ÿLӇPÿҷQJÿLӋn cӫa SURWHLQFNJQJOjPJLҧPÿӝ bӅn hӋ nhNJ WѭѫQJWҥo thành Theo nghiên cӭu cӫa Deng và cӝng sӵ ÿӝ bӅn hӋ QKNJWăQJNKLS+WăQJWӯ 1-12 Tҥi pH thҩSÿӝ bӅQQKNJWKҩp nhҩt do sӵ WѭѫQJWiFJLӳa các giӑWQKNJ WăQJcác protein PDQJÿLӋQWtFKGѭѫQJ bӏ trung hòa do sӵ có mһt cӫa ion chloride Khi S+WăQJ thì lӵFÿҭy giӳa các giӑWQKNJ WăQJOrQ, ÿӗng thӡLOjPWăQJNKҧ QăQJK\GUDWHFӫa các phân tӱ protein WtFKÿLӋn Nhӳng yӃu tӕ này làm giҧPQăQJOѭӧng bӅ mһt cӫa các giӑWQKNJJySSKҫQOjPWăQJÿӝ bӅQQKNJ
2.3.5.2 ҦQK Kѭӣng cӫa nӗQJ ÿӝ muӕi ÿӃn khҧ năQJ WҥR QKNJ Yj ÿӝ bӅn hӋ QKNJ WѭѫQJ cӫa protein
Khi nӗQJÿӝ muӕLWăQJGҫn tӯ ÿӃn 0.4M thì khҧ QăQJWҥRQKNJFӫa chӃ phҭm albumin tӯ ÿұu Parkia biglobossa Châu Phi sӁ WăQJGҫQYjVDXÿyJLҧm dҫn nӃu tiӃp tөF WăQJ QӗQJ ÿӝ muӕi (Lawal và cӝng sӵ, 2005) KӃt quҧ khҧR ViW ÿӝ bӅn hӋ QKNJWѭѫQJWURQJNKRҧng giá trӏ nӗQJÿӝ muӕLQyLWUrQFNJQJFKRNӃt quҧ WѭѫQJWӵ Theo giҧi thích cӫa tác giҧ, khi nӗQJÿӝ muӕi thҩp, sӵ hình thành mӝt lӟSPjQJWtFKÿLӋn bao lҩy nhӳng hҥt cҫu béo sӁ WăQJFѭӡng lӵFÿҭ\WƭQKÿLӋn và tҥo nên lӟp màng hydrate xung quanh bӅ mһt phân chia pha, làm chұm quá trình hӧp giӑt cӫDSKDSKkQWiQTXDÿy góp phҫn làm bӅn hӋ QKNJWѭѫQJWҥo thành Ӣ nhӳng giá trӏ nӗQJÿӝ muӕLFDRKѫQÿӝ hòa tan protein giҧm dҫQNpRWKHRÿyOjVӵ giҧm khҧ QăQJWҥRQKNJYjÿӝ bӅn hӋ QKNJWѭѫQJFӫa các chӃ phҭm protein khҧo sát.
Khҧ QăQJWҥo gel cӫa protein
HiӋQWѭӧng gel hóa là sӵ tӵ tұp hӧp lҥi các phân tӱ bӏ biӃn tính và tҥo thành mӝt mҥQJOѭӟi protein có trұt tӵ Khҧ QăQJWҥo gel là mӝt tính chҩt chӭFQăQJTXDQWUӑng cӫa nhiӅu loҥLSURWHLQÿӇ tҥo cҩu trúc cho nhiӅu loҥi thӵc phҭm Tӯ dung dӏch protein WURQJQѭӟFFiFJLDLÿRҥn cӫa quá trình tҥo gel nhiӋWÿѭӧc minh hoҥ QKѭVDX
P D 3URWHLQÿmEӏ biӃn tính (duӛi mҥch) N: Sӕ tiӇXÿѫQYӏ ÿmELӃt
(1) ± Quá trình phân ly cҩu trúc bұc cao cӫDSURWHLQWKjQKQÿѫQYӏ (quá trình gia nhiӋt)
(2) ± Quá trình tái liên kӃt cӫDFiFÿѫQYӏ protein phân ly (quá trình làm lҥnh) Trҥng thái gel hóa cuӕi cùng là tұp hӧp các phân tӱ SURWHLQ ÿm ELӃn tính mӝt phҫn TURQJ ÿLӅu kiӋn mà sӵ biӃn tính diӉn ra chұP KѫQ TXi WUuQK Wұp hӧp cӫa các protein, thì protein tҥRJHOQJD\WURQJO~FFzQÿXQQyQJWUҥQJWKiLJHOÿyFyWtQKFKҩt ÿөc và cҩu trúc không bӅn, ít dҿo và ÿjQKӗi 7URQJÿLӅu kiӋn mà sӵ tұp hӧp cӫa các protein chұPKѫQTXiWUuQKELӃn tính protein, các chuӛi polypeptide sӁ duӛi mҥch và sҳp xӃp có trұt tӵ KѫQ PҥQJ Oѭӟi gel tҥo thành chӫ yӃu nhӡ liên kӃt hydro, và sӁ NK{QJÿһc lҥLFKRÿӃQNKLÿѭӧc làm lҥnh Dҥng gel này trong suӕt và bӅQKѫQGҥng gel ÿ{QJWө*HOÿ{QJWө FyPjXÿөc là do hiӋQWѭӧng tán xҥ ánh sáng gây ra bӣi các tұp hӧp protein không tan phân bӕ hӛQÿӝn trong cҩu trúc gel (Damodaran, 1996)
Trҥng thái và tính chҩt cӫa hӋ JHOWKѭӡng bӏ WiFÿӝng bӣi nhiӅu yӃu tӕ khác nhau QKѭQӗQJÿӝ protein, giá trӏ pH, bҧn chҩt và nӗQJÿӝ cӫa các chҩWÿLӋn ly trong dung dӏch protein Ngoài ra, sӵ gel hóa có thӇ xҧy ra ngay tӯ TXiWUuQKÿXQQyQJKD\WURQJ JLDLÿRҥn làm lҥQKYjÿLӅu này phө thuӝc vào bҧn chҩt cӫa protein
2.3.6.1 ҦQKKѭӣng cӫDS+ÿӃn khҧ QăQJWҥo gel cӫa protein
Nghiên cӭu cӫa Lawal và cӝng sӵ (2005) vӅ khҧ QăQJWҥo gel cӫa các chӃ phҭm protein tӯ ÿұu Parkia biglobossa Châu Phi, ӣ pH 4.0 thì nӗQJÿӝ tӕi thiӇXÿӇ tҥo gel cӫa các chӃ phҭm là thҩp nhҩt Tác giҧ cho rҵng lӵFÿҭ\WƭQKÿLӋn giӳa các phân tӯ protein là yӃu nhҩt tҥLS+ÿҷQJÿLӋn, nhӡ ÿyOjPWăQJNKҧ QăQJWұp hӧp và gel hóa Càng xa pH thì khҧ QăQJWҥo gel giҧm dҫQÿyOjGRVӵ JLDWăQJOӵFÿҭ\WƭQKÿLӋn giӳa các phân tӱ protein
2.3.6.2 ҦQKKѭӣng cӫa nӗQJÿӝ muӕi ÿӃn khҧ QăQJWҥo gel cӫa protein
Lawal và cӝng sӵ FNJQJQKұn thҩy khi nӗQJÿӝ muӕi tăng nhҽ (0.4 ± 0.6M) thì sӁ OjPWăQJNKҧ QăQJWҥo gel Tuy nhiên, ӣ nhӳng giá trӏ nӗQJÿӝ muӕLFDRKѫQ nӗQJ ÿӝ chӃ phҭP ÿӇ tҥo gel lҥL WăQJ Gҫn, tӭc khҧ QăQJ Wҥo gel giҧm dҫn HӋ gel SURWHLQÿѭӧFKuQKWKjQKOjGRWѭѫQJWiFJLӳa các phân tӱ SURWHLQÿӇ hình thành nên cҩu trúc mҥQJ Oѭӟi 3 chiӅX &ѫ FKӃ cӫa nhӳng liên kӃt ngang trong mҥQJ Oѭӟi này liên TXDQÿӃn sӵ hình thành cӫa nhӳng liên kӃt hydro, cҫu nӕi disulphide và sӵ WUDRÿәi hay hình thành liên kӃt giӳa các nhóm peptide Ӣ các giá trӏ nӗQJÿӝ muӕi thҩp, các nhóm chӭc bӏ che phӫ bên trong mҥQJOѭӟLSURWHLQÿѭӧc thӇ hiӋn ra bên ngoài nhӡ sӵ duӛi mҥch, tӯ ÿyWѭѫQJWiFJLӳa các phân tӱ SURWHLQÿѭӧc thuұn lӧLÿLӅu này làm cho sӵ gel hóa tӕWKѫQVRYӟi mүu ÿӕi chӭng (nӗQJÿӝ muӕLOj07X\QKLrQNKLWăQJGҫn giá trӏ nӗQJÿӝ muӕi dүQÿӃn xuҩt hiӋn hiӋu ӭng chҳn trên các phân tӱ protein và hiӋu ӭng này làm sӵ gel hóa trӣ nên yӃXKѫQ
ĈLӇm mӟi cӫDÿӅ tài
ĈӕLWѭӧng nghiên cӭu là rong b~QQѭӟc lӧ Enteromorpha sp ÿѭӧc thu nhұn tҥi các tӍnh có diӋQWtFKQX{LW{PQѭӟc lӧ cӫDYQJĈӗng Bҵng Sông Cӱu Long Vùng VLQKWKiLQѭӟc lӧ do nuôi tôm này chӍ mӟLÿѭӧc hình thành khoҧQJKѫQQăPQD\Wҥi mӝt sӕ tӍQKĈӗng Bҵng Sông CӱX/RQJQrQÿӕLWѭӧng nghiên cӭXFKѭDÿѭӧc quan tâm nhiӅu MһFGÿmFyQJKLrQFӭu thu nhұn protein tӯ rong mӅQQѭӟc lӧ Chaetomorpha sp QKѭQJ URQJ%~QQѭӟc lӧ Enteromorpha VSFyÿһFÿLӇm hình thái, cҩu tҥo tӃ bào, vӏ trí tҫQJQѭӟc sinh sӕng và mùa vө rҩt khác rong mӅn nên kӃt quҧ thu nhұQSURWHLQÿһc biӋt là viӋc sӱ dөng protein này sӁ có nhӳng giá trӏ mӟi WURQJOƭQKYӵc chӃ biӃn thӵc phҭm ĈӅ tài nghiên cӭu tìm hiӇu thành phҫn sinh hóa, thu nhұn SKkQÿRҥn protein và [iFÿӏnh các tính chҩt GLQKGѭӥng, tính chҩt chӭFQăQJFӫa SKkQÿRҥn này sӁ giúp có ÿѭӧc nhӳng thông tin cҫn thiӃt vӅ mӝt loҥi protein thu nhұn tӯ nguӗn nguyên liӋu rҩt mӟi là Enteromorpha sp KӃt hӧp giӳa viӋc sӱ dөng các kӻ thuұt xӱ lý enzyme và nhӳng SKѭѫQJSKiSWKXQKұn protein truyӅn thӕngÿӅ tài sӁ tiӃn hành nghiên cӭu quá trình trích ly protein Các kӻ thuұW SKѭѫQJ SKiS SKkQ WtFKsӁ ÿѭӧc áp dөng có thӇ ÿiQKJLicác tính chҩt chӭFQăQJ cӫa chӃ phҭPSURWHLQWKXÿѭӧc nhҵm tìm ra các khҧ QăQJӭng dөng mӟi cӫDSURWHLQWKXÿѭӧc trong ngành thӵc phҭm
Mөc tiêu chính cӫDÿӅ tài là tìm kiӃm giҧi pháp công nghӋ mӟi cho viӋc chuyӇn hóa nguӗn sinh khӕLURQJQѭӟc lӧ mӑc tӵ nhiên gây ô nhiӉPP{LWUѭӡng thành nhӳng sҧn phҭm có giá trӏ JLDWăQJ ÿӇ ӭng dөng trong công nghiӋp thӵc phҭm
Nguyên liӋu và thiӃt bӏ
Rong bún Enteromorpha sp
Rong bún Enteromorpha VSÿѭӧc thu nhұn sau 15 ± 20 ngày phát triӇn tuǤ thuӝc YjRÿLӅu kiӋn thӡi tiӃWÿѭӧc thu tҥi các ao nuôi tôm quҧng canh tҥi Cà Mau và Long
An Rong thu hoҥch ÿѭӧc cho vào túi nilong rӗi vұn chuyӇn trong thùng xӕp trong ngày vӅ phòng thí nghiӋP 7UѭӡQJ Ĉҥi hӑc Công NghӋ Sài Gòn) Tҥi phòng thí nghiӋPURQJÿѭӧc rӱa vӟLQѭӟc thuӹ cөFÿӇ loҥi bӓ các tҥp chҩWGѫ Yjÿѭӧc bҧo quҧn ӣ nhiӋWÿӝ -18 0 &ÿӇ sӱ dөng trong quá trình làm thí nghiӋm.
Enzyme cellulase Viscozyme® Cassava C
Enzyme Viscozyme® Cassava C là mӝt loҥLHQ]\PHGQJÿӇ thӫy phân cellulose nhҵm mөFÿtFK làm WăQJNKҧ QăQJthu nhұn protein tӯ rong
Nhà phân phӕi: Công ty Brenntag ViӋt Nam, 202 HòaQJ9ăQ7Kө, Quұn Phú Nhuұn, TP Hӗ Chí Minh
Tính chҩt: x 7rQWKѭѫQJPҥi: Cellulase x Hoҥt lӵc: 700 EGU/g x Màu sҳc: Màu nâu x Trҥng thái vұt lý: Lӓng x Tӹ trӑng (g/mL): 1.22 x NhiӋWÿӝ bҧo quҧn: 0 - 25 o C (32 - 77 o F) x HoҥWÿӝng tӕt ӣ nhiӋWÿӝ tӯ 50 o C ÿӃn 55 o C x pH hoҥWÿӝng tӕt ӣ khoҧQJÿӃn 5.5 ÿѫQYӏ hoҥWÿӝ endoglucanase unit (EGU) OjOѭӧng chӃ phҭm cҫn sӱ dөQJÿӇ xúc tác tҥo ra ȝPROÿѭӡng khӱ trong 1 phút ӣ FQJÿLӅu kiӋn thí nghiӋm.
BӝWSURWHLQÿұu nành
BӝWSURWHLQÿұu nành ÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ làm mүXSURWHLQÿӕi chӭng
Nhà phân phӕi: Công ty TNHH TM Tân Phú Trung, /NJ\ %iQ %tFK SKѭӡng Phú Thҥnh, Quұn Tân Phú, Thành phӕ Hӗ Chí Minh
Tính chҩt: x Màu sҳc: MjXYjQJÿөc x Trҥng thái: Rҳn (ӣ dҥng bӝt) x +jPOѭӧng protein trong bӝWSURWHLQÿұu nành khoҧng 70%
ThiӃt bӏ sӱ dөng
Các thiӃt bӏ sӱ dөng trong quá trình trích ly và thu nhұn protein:
- ThiӃt bӏ xay rong: sӱ dөng máy xay mүu YB800 ĈjL/RDQ
- ThiӃt bӏ әn nhiӋt trong quá trình trích ly: sӱ dөng thiӃt bӏ әn nhiӋt - lҳc WNB10 Memmert Ĉӭc)
- ThiӃt bӏ ly tâm: sӱ dөng thiӃt bӏ ly tâm Hettich EBA 280 và Hettich EBA 280 S, nhà sҧn xuҩW+HWWLFK*PE+ &R.*Ĉӭc)
- ThiӃt bӏ sҩ\ ÿ{QJ NK{ Vӱ dөng thiӃt bӏ sҩ\ ÿ{QJ NK{ Fӫa Thermo Fisher Scientific Inc (Mӻ)
- 0i\ÿӗng hóa: sӱ dөng thiӃt bӏ ÿӗng hóa Fѫ ,.$7Ĉӭc)
- 0i\ÿR TXDQJ SKә: sӱ dөng thiӃt bӏ ÿR TXDQJ SKә GENESYS 10S UV- Vis, nhà sҧn xuҩt Thermo Fisher Scientific (Mӻ)
- Cân phân tích 4 sӕ lҿ: sӱ dөng cân phân tích 4 sӕ lҿ ATY 224 Shimadzu (Nhұt)
- ThiӃt bӏ Y{Fѫhóa mүu: sӱ dөng thiӃt bӏ Y{Fѫhóa mүu 12 chӛ Behrotest và bӝ lӑc khói Ĉӭc)
- ThiӃt bӏ ÿRS+Vӱ dөng thiӃt bӏ ÿRS+-HQZD\ (Anh)
(a) ThiӃt bӏ xay rong (b) BӇ lҳc әn nhiӋt (c) ThiӃt bӏ ly tâm (d) ThiӃt bӏ sҩ\ÿ{QJNK{
Hình 3.1 ± Mӝt sӕ thiӃt bӏ sӱ dөng trong quá trình trích ly và thu nhұn protein
(a) 0i\ÿRTXDQJSKә (b) Cân phân tích (c) ThiӃt bӏ Y{Fѫhóa mүu (d) 0i\ÿRS+
;iFÿӏnh thành phҫn hoá hӑFFѫEҧn cӫa rong nguyên liӋu ;iFÿӏQKKjPOѭӧng protein tәng
;iFÿӏnh tӍ lӋ 4 nhóm protein 3URWHLQWDQWURQJQѭӟc Protein tan trong kiӅm Protein tan trong muӕi Protein tan trong cӗn Ҧnh Kѭӣng cӫa các yӃu tӕ ÿӃn quá trình trích ly SKkQÿRҥn protein tan WURQJQѭӟc:
TӍ lӋ rong nguyên liӋXQѭӟc cҩt NhiӋWÿӝ trích ly
Sӱ dөng chӃ phҭPFHOOXODVHÿӇ hӛ trӧ quá trình trích ly protein:
NӗQJÿӝ enzyme Thӡi gian xӱ lý enzyme ĈiQKJLiWtQKFKҩt chӭFQăQJFӫDSKkQÿRҥn prRWHLQWDQWURQJQѭӟc: Khҧ QăQJKzDWDQ
Khҧ QăQJhҩSWKXQѭӟc Khҧ QăQJhҩp thu dҫu Khҧ QăQJWҥo bӑWYjÿӝ bӅn bӑt Khҧ QăQJWҥRQKNJYjÿӝ bӅQQKNJ
3.3 3KѭѫQJSKiSEӕ trí thí nghiӋm
3.3.1 ;iFÿӏnh các nhóm protein trong rong
;iFÿӏnh tӹ lӋ FiFQKyPSURWHLQFѫEҧn (dӵa theo khҧ QăQJhòa tan cӫa chúng trong các loҥi dung môi khác nhau) trong rong bún Enteromorpha sp KӃt quҧ thu ÿѭӧc sӁ OjPFѫVӣ ÿӇ thu nhұn các chӃ phҭm protein tӯ rong
Dӵa vào vai trò và chӭFQăQJFӫa protein, chúng ta có rҩt nhiӅu cách phân loҥi prRWHLQNKiF QKDXWURQJÿyVӵ phân loҥLFiF QKyPSURWHLQWKHRÿӝ hòa WDQÿѭӧc sӱ dөng rҩt phә biӃn Theo phân loҥi cӫD+XYj(VHQSURWHLQÿѭӧc chia làm bӕn nhóm chính theo khҧ QăQJhòa tan: Albumin (hòa WDQWURQJQѭӟc), Globulin (hòa tan WURQJ Qѭӟc muӕi loãng), Glutelin (hòa tan trong kiӅm loãng) và Prolamin (hòa tan trong dung dӏch ethanol loãng)
Quy trình trích ly sӱ dөng trong nghiên cӭXQj\ÿӇ thu nhұn bӕn nhóm protein WUrQÿѭӧc tiӃQKjQKWKHRÿӅ xuҩt cӫa Hu và Esen (1981) (Hình 3.4)
Hình 3.4 ± 6ѫÿӗ công nghӋ quá trình thu nhұn protein tӯ rong bún Enteromorpha sp
Lҩ\JURQJÿm [D\ Pӏn cho vào bình tam giác (thӇ tích 250mL) 6DXÿy lҫn Oѭӧt trích ly protein trong rong bҵng các dung môi VDXÿk\: Qѭӟc cҩt, NaCl 0.5M, cӗn
70 o và NaOH 0.1M TiӃn hành trích ly vӟi tӹ lӋ nguyên liӋu và dung môi là 1:20 (g/mL), ӣ nhiӋWÿӝ 40 o C, trong thӡi gian 50 phút Sau mӛi lҫn trích ly, ta tiӃn hành ly tâm 6.000 vòng/ phút trong thӡi gian 5 phút Phҫn dӏch nәi sӁ ÿѭӧc thu lҥLÿӇ [iFÿӏnh protein, phҫn rҳQÿѭӧc sӱ dөQJÿӇ trích ly vӟi dung môi tiӃSWKHR/ѭӧng protein hòa tan trong mӛi lҫQWUtFKÿѭӧF[iFÿӏnh bҵQJSKѭѫQJSKiS Kjeldahl - Nessler
;iFÿӏnh tӹ lӋ cӫa các nhóm protein WURQJURQJWKHRÿӝ hòa tan
$+jPOѭӧQJQLWѫWtQKÿѭӧc (g)
3.3.2 Khҧo sát các yӃu tӕ ҧQKKѭӣQJÿӃn quá trình WUtFKO\SKkQÿRҥn protein
3.3.2.1 ҦQKKѭӣQJFӫDWӹOӋGXQJP{LYjFѫFKҩWÿӃQKLӋXVXҩW WUtFKO\SKkQÿRҥQ SURWHLQWDQWURQJQѭӟF
- Thӡi gian trích ly 50 phút
Thông sӕ khҧo sát: tӹ lӋ Fѫ FKҩt : dung môi (g:mL) ÿѭӧF WKD\ ÿәi lҫQ Oѭӧt là (1:10), (1:20), (1:30), (1:40), (1:50) (g:mL)
HiӋu suҩWWUtFKO\QKyPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc = భ మ (%)
P 1 /ѭӧng protein có trong dӏch trích (g)
P 2 : Lѭӧng protein có trong rong WUѭӟc khi trích ly SKkQÿRҥQWDQWURQJQѭӟc (g)
Lҩ\YjREuQKWDPJLiFFyÿiQKVӕ thӭ tӵ tӯ ÿӃQWѭѫQJӭng vӟi các tӍ lӋ nguyên liӋu: Qѭӟc cҩt khác nhau), cân mӝWOѭӧng rong khô bҵng nhau cho vào tӯng EuQK6DXÿycho Qѭӟc cҩt lҫQOѭӧt vào các bình tam giác vӟi tӍ lӋ nguyên liӋXQѭӟc cҩt khác nhau và lҳFÿӅuĈӇ tҩt cҧ 5 bình tam giác vào bӇ әn nhiӋt ӣ nhiӋWÿӝ 40 o C, tӕFÿӝ lҳc 200 vòng/phút rӗi trích ly trong khoҧng thӡi gian 50 phút6DXÿyÿHP EuQKWDPJLiFÿLO\WkPYjWKXÿѭӧc dӏFKWUtFKSURWHLQWDQWURQJQѭӟc
Sau khi kӃt thúc quá trình trích ly, ta tiӃn hành [iFÿӏnh KjPOѭӧng protein trong dӏch trích bҵQJSKѭѫQJSKiSKjeldahl - Nessler
3.3.2.2 ҦQK KѭӣQJ FӫD QKLӋW ÿӝ ÿӃQ KLӋX VXҩW WUtFK O\ SKkQ ÿRҥQ SURWHLQ WDQ WURQJQѭӟF
- Thӡi gian trích ly: 50 phút
- TӍ lӋ rong nguyên liӋX Qѭӟc cҩt (g:mL) ÿѭӧc chӑn tӯ kӃt quҧ ӣ thí nghiӋm 3.3.2.1
Thông sӕ khҧo sát: nhiӋt ÿӝ trích ly lҫQOѭӧt là : 40 o C, 50 o C, 60 o C, 70 o C, 80 o C
HiӋu suҩt trích ly QKyPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc = భ మ (%)
P 1 /ѭӧng protein có trong dӏch trích (g)
P 2 : Lѭӧng protein có trong rong WUѭӟc khi trích ly SKkQÿRҥn taQWURQJQѭӟc (g)
Lҩy vào 5 EuQKWDPJLiFFyÿiQKVӕ thӭ tӵ tӯ ÿӃn 5 (WѭѫQJӭng vӟi các nhiӋt ÿӝ khác nhau), cân mӝW Oѭӧng rong khô bҵng nhau cho vào tӯQJ EuQK 6DX ÿy FKR
Qѭӟc cҩt vào các bình tam giác 1 vӟi tӍ lӋ rong nguyên liӋuQѭӟc cҩWÿmWuPÿѭӧc ӣ thí nghiӋm 3.3.2.1 rӗi lҳFÿӅXĈӇ bình tam giác 1 vào bӇ әn nhiӋt vӟi nhiӋWÿӝ trích ly
40 0 C, tӕFÿӝ lҳc 200 vòng/phút, trong 50 phút Sau 50 phút, lҩy bình tam giác 1 ra, tiӃp tөc gia nhiӋt lên 50 0 &FKRQѭӟc vào bình tam giác 2 rӗLÿһt vào bӇ әn nhiӋt và giӳ trong 5SK~W7URQJNKLÿDQJJLDQKLӋt, bình tam giác 1 sӁ ÿHPÿLO\Wâm ÿӇ WKXÿѭӧc dӏch trích SURWHLQWDQWURQJQѭӟc TiӃQKjQKFiFEѭӟFWѭѫQJWӵ cho các bình tam giác còn lҥi
Sau khi kӃWWK~FJLDLÿRҥn trích ly, ta tiӃn hành [iFÿӏnh KjPOѭӧng protein hòa tan trong dӏch trích bҵQJSKѭѫQJSKiS.MHOGDKO- Nessler
3.3.2.3 ҦQK KѭӣQJ FӫD WKӡL JLDQ ÿӃQ KLӋX VXҩW WUtFK O\ SKkQ ÿRҥQ SURWHLQ WDQ WURQJQѭӟF
- Tӹ lӋ rong nguyên liӋX Qѭӟc cҩt (g:mL) ÿѭӧc chӑn tӯ kӃt quҧ thí nghiӋm 3.3.2.1
- NhiӋWÿӝ trích ly ( o &ÿѭӧc chӑn tӯ kӃt quҧ thí nghiӋm 3.3.2.2
Thông sӕ khҧo sát: thӡi gian trích ly lҫQ Oѭӧt là 30 phút, 40 phút, 50 phút, 60 phút, 70 phút và 80 phút
HiӋu suҩt trích ly nhóm SURWHLQWDQWURQJQѭӟc = భ మ (%)
P 1 /ѭӧng protein có trong dӏch trích (g)
P 2 : Lѭӧng protein có trong rong WUѭӟc khi trích ly SKkQÿRҥQWDQWURQJQѭӟc (g)
Lҩy vào 7 EuQKWDPJLiFFyÿiQKVӕ thӭ tӵ tӯ ÿӃn 6 WѭѫQJӭng vӟi các thӡi gian khác nhau), cân mӝWOѭӧng rong khô bҵng nhau cho vào tӯQJEuQK6DXÿycho Qѭӟc cҩt vӟi tӹ lӋ rong nguyên liӋXQѭӟc cҩt ÿѭӧc chӑn tӯ kӃt quҧ thí nghiӋm 3.3.2.1 lҫQOѭӧt vào các bình tam giác, lҳFÿӅXĈӇ 6 bình vào bӇ әn nhiӋt vӟi nhiӋWÿӝ ÿѭӧc chӑn tӯ kӃt quҧ thí nghiӋm 3.3.2.2 và trích ly Sau 30, 40, 50, 60, 70, 80 phút trích ly, lҫQOѭӧt lҩy bình tam giác ra ÿHPÿLO\WkPÿӇ WKXÿѭӧc dӏch trích protein tan trong Qѭӟc
Sau khi kӃWWK~FJLDLÿRҥn trích ly, ta tiӃQKjQKÿRKjPOѭӧng protein tan trong Qѭӟc bҵQJSKѭѫQJSKiS Kjeldahl - Nessler
3.3.3 Sӱ dөng chӃ phҭm enzyme cellulase ÿӇ hӛ trӧ quá trình trích ly protein 3.3.3.1 ҦQKKѭӣng nӗQJÿӝ HQ]\PHÿӃn quá trình trích ly
Thuӹ phân thành phҫn cellulose cӫa rong vӟi tӹ lӋ nguyên liӋu rong và dung môi là 1:20 (g/mL) ӣ nhiӋWÿӝ 50 o C tҥi pH 5.0 Các thông sӕ khҧRViWÿѭӧc lҫQOѭӧt thay ÿәi: tӍ lӋ enzyme cellulase (0-10-20-30-40 U/g) Ta ghi nhұn tәng thӇ tích cӫa dӏch WUtFKÿy/ҩy 10mL dӏFKWUtFK[iFÿӏnh KjPOѭӧng protein có trong dӏch bҵQJSKѭѫQJ pháp Kjeldahl ± Nessler
HiӋu suҩt trích protein có sӱ dөng enzyme cellulose theo nӗQJÿӝ = భ మ (%)
P 1 /ѭӧng protein có trong dӏch trích (g)
P 2 : Lѭӧng protein có trong rong WUѭӟc khi trích ly SKkQÿRҥQWDQWURQJQѭӟc (g)
3.3.3.2 ҦQKKѭӣng thӡi gian xӱ OêHQ]\PHÿӃn quá trình trích ly
Thuӹ phân thành phҫn cellulose cӫa rong vӟi tӹ lӋ nguyên liӋu rong và dung môi là 1:20 (g/mL), nӗQJÿӝ ÿѭӧc chӑn theo kӃt quҧ ӣ thí nghiӋm 3.3.3.1, ӣ nhiӋWÿӝ 50 o C tҥi pH 5.0 Các thông sӕ khҧRViWÿѭӧc lҫQOѭӧWWKD\ÿәi: thӡi gian xӱ lý lҫQOѭӧt (0-30-60-90-120 phút) Ta ghi nhұn tәng thӇ tích cӫa dӏFKWUtFKÿy/ҩy 10mL dӏch trích xác ÿӏnh KjPOѭӧng protein có trong dӏch bҵQJSKѭѫQJSKiSKjeldahl ± Nessler
HiӋu suҩt trích protein có sӱ dөng enzyme cellulose theo thӡi gian = భ మ (%)
P 1 /ѭӧng protein có trong dӏch trích (g)
P 2 : Lѭӧng protein có trong rong WUѭӟc khi trích ly SKkQÿRҥQWDQWURQJQѭӟc (g)
3.3.4 ĈiQKJLiWtQKFKҩt chӭFQăQJFӫDSKkQÿRҥQSURWHLQWDQWURQJQѭӟc
;iFÿӏQKÿLӇPÿҷQJÿLӋQFӫDGӏFKWUtFKSURWHLQ
Giá trӏ ÿҷQJ ÿLӋn cӫa dӏFK WUtFK SURWHLQ ÿѭӧF [iF ÿӏnh thông qua mӕi quan hӋ giӳDÿӝ truyӅn suӕW[iFÿӏnh ӣ Eѭӟc sóng 320 nm) và pH trong khoҧng tӯ ÿӃn 12 (Rezig và cӝng sӵ, 2013)
Dӏch trích nhóm thu ÿѭӧc tӯ phҫn 3.3.3 WKHRTX\WUuQKKuQKÿѭӧc pha loãng bҵng dung môi Qѭӟc cҩt sao cho kӃt quҧ ÿRÿӝ truyӅn suӕt tҥLEѭӟc sóng 320 nm nҵm trong giá trӏ phù hӧp pH cӫa dӏch trích pURWHLQÿѭӧc hiӋu chӍnh trong khoҧng tӯ 2-12 sӱ dөng NaOH 1M và dung dӏch HCl 1M vӟLEѭӟc nhҧ\S+YjEѭӟc nhҧ\ÿѭӧc chia nhӓ KѫQWҥi gҫn giá trӏ S,S+WѭѫQJӭng vӟi giá trӏ ÿӝ truyӅn suӕt nhӓ nhҩt cӫa dӏch trích protein là giá trӏ S,WѭѫQJӭng cӫDSKkQÿRҥQSURWHLQWDQWURQJQѭӟc
XiFÿӏnh giá trӏ ÿҷQJÿLӋn cӫa dӏFKWUtFKSURWHLQÿӇ hӛ trӧ cho quá trình thu nhұn chӃ phҭm protein
3.3.4.2 Xác ÿӏQKWtQKFKҩWFKӭFQăQJFӫDFKӃSKҭPSURWHLQ WӯURQJ
Ta tiӃn hành trích O\WKXÿѭӧc dӏch trích protein WѭѫQJWӵ QKѭӣ phҫn 3.3.3 Ta ghi nhұn tәng thӇ tích cӫa dӏFK WUtFK ÿy /ҩy 10mL dӏFK WUtFK [iF ÿӏnh KjP Oѭӧng protein có trong dӏch bҵQJSKѭѫQJSKiSKjeldahl ± Nessler
Song song ÿyÿHPSKҫn dӏch trích còn lҥi ÿLOjPOҥnh vӅ 2 0 C rӗi bә sung muӕi (dҥng hҥt) vào dung dӏFKFKRÿӃQNKLÿҥt nӗQJÿӝ muӕi (NH ) SO bão hòa là 70% và khuҩ\ÿӅu ӣ nhiӋWÿӝ phòng trong thӡi gian 10 phút6DXÿyO\WkP vӟi tӕFÿӝ 6000 vòng trong thӡi gian 10 phút WKXÿѭӧc kӃt tӫa Hoà tan kӃt tӫa vào nѭӟc rӗi tiӃn hành loҥi bӓ muӕi bҵQJSKѭѫQJSKiSWKҭm tích qua màng cellophane ӣ nhiӋWÿӝ phòng, tӕc ÿӝ khuҩy trong quá trình thҭm tích là 1000 vòng/phút trong thӡi gian 24 giӡ Sau khi loҥi bӓ muӕi amoni, pha lӓng sӁ ÿѭӧc cҩSÿ{QJ, ӣ nhiӋWÿӝ -45 o C rӗi sҩ\WKăQJKRD vӟi áp suҩt sҩy 8Pa trong thӡi gian 32 giӡ ÿӇ thu chӃ phҭP SURWHLQ &kQ Oѭӧng chӃ phҭPWKXÿѭӧc rӗL[iFÿӏnh KjPOѭӧng protein bҵQJSKѭѫQJSKiSKjeldahl ± Nessler
Khҧ QăQJhòa tan cӫa chӃ phҭP SURWHLQ ÿѭӧc xác ÿӏnh theo pKѭѫQJ SKiS Fӫa Ragab và cӝng sӵ (2004)
Mүu chӃ phҭPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc sӁ ÿѭӧc ÿiQKJLi song song vӟi mүXÿӕi chӭng là chӃ phҭm SURWHLQÿұu nành ÿұPÿһc Ĉҫu tiên, lҫQOѭӧt cân 0.2 g mүu chӃ phҭPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc YjSURWHLQÿұu nành rӗi ÿӇ vào ӕng ly tâm Ĉӕi vӟi thí nghiӋm ҧQKKѭӣng cӫa pH, tiӃn hành bә sung thêm 10 mL Qѭӟc cҩWÿmFKӍnh vӅ giá trӏ pH tӯ 2 -10 bҵng dung dӏch HCl 1M hoһc NaOH 1M Ĉӕi vӟi thí nghiӋm ҧQKKѭӣng cӫa nӗQJÿӝ muӕi, tiӃn hành bә sung dung dӏch muӕi NaCl có nӗQJÿӝ WKD\ÿәi tӯ 0 ± 1M (pH 7.0)
Hӛn hӧSÿHPÿLYRUWH[Yӟi tӕFÿӝ là 1500 vòng/ phút trong vòng 8 phút ӣ nhiӋt ÿӝ SKzQJYjÿHPÿLO\WkPYӟi tӕFÿӝ 5.000 vòng/ phút trong vòng 15 phút ÿӇ thu phҫn dӏch nәi có trong ӕng
Thành phҫn protein có trong phҫn dӏch nәi ÿѭӧF ÿR KjP Oѭӧng protein bҵng SKѭѫQJSKiS Kjeldahl ± Nessler
Giá trӏ pH cӫa dӏch protein tӯ 2 ± 10
;iFÿӏnh lѭӧng protein trong dӏch nәi sau khi ly tâm, tӯ ÿyVX\UDNKҧ QăQJhòa tan cӫa chӃ phҭm protein
3.3.4.4 ;iFÿӏQKNKҧQăQJWҥREӑWYjÿӝ EӅQEӑW
Khҧ QăQg tҥo bӑWYjÿӝ bӅn bӑt cӫa chӃ phҭPSURWHLQÿѭӧF[iFÿӏnh theo pKѭѫQJ pháp cӫa Nath và Rao (1981)
Mүu chӃ phҭPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc sӁ ÿѭӧc ÿiQKJLi song song vӟi mүXÿӕi chӭng là chӃ phҭm SURWHLQÿұu nành ÿұPÿһc Ĉҫu tiên, lҫn lѭӧt cân 0.2 g mүu chӃ phҭPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc YjSURWHLQÿұu nành rӗi ÿӇ vào ӕng ly tâmĈӕi vӟi thí nghiӋm ҧQKKѭӣng cӫa pH, tiӃn hành bә sung thêm 10 mL Qѭӟc cҩWÿmFKӍnh vӅ giá trӏ pH tӯ 2 -10 bҵng dung dӏch HCl 1M hoһc NaOH 1MĈӕi vӟi thí nghiӋm ҧQKKѭӣng cӫa nӗQJÿӝ muӕi, tiӃn hành bә sung dung dӏch muӕi NaCl có nӗQJÿӝ WKD\ÿәi tӯ 0 ± 1M (pH 7.0)
ĈiQKJLiWtQKFKҩt chӭFQăQJFӫDSKkQÿRҥQSURWHLQWDQWURQJQѭӟc
;iFÿӏQKÿLӇPÿҷQJÿLӋQFӫDGӏFKWUtFKSURWHLQ
Giá trӏ ÿҷQJ ÿLӋn cӫa dӏFK WUtFK SURWHLQ ÿѭӧF [iF ÿӏnh thông qua mӕi quan hӋ giӳDÿӝ truyӅn suӕW[iFÿӏnh ӣ Eѭӟc sóng 320 nm) và pH trong khoҧng tӯ ÿӃn 12 (Rezig và cӝng sӵ, 2013)
Dӏch trích nhóm thu ÿѭӧc tӯ phҫn 3.3.3 WKHRTX\WUuQKKuQKÿѭӧc pha loãng bҵng dung môi Qѭӟc cҩt sao cho kӃt quҧ ÿRÿӝ truyӅn suӕt tҥLEѭӟc sóng 320 nm nҵm trong giá trӏ phù hӧp pH cӫa dӏch trích pURWHLQÿѭӧc hiӋu chӍnh trong khoҧng tӯ 2-12 sӱ dөng NaOH 1M và dung dӏch HCl 1M vӟLEѭӟc nhҧ\S+YjEѭӟc nhҧ\ÿѭӧc chia nhӓ KѫQWҥi gҫn giá trӏ S,S+WѭѫQJӭng vӟi giá trӏ ÿӝ truyӅn suӕt nhӓ nhҩt cӫa dӏch trích protein là giá trӏ S,WѭѫQJӭng cӫDSKkQÿRҥQSURWHLQWDQWURQJQѭӟc
XiFÿӏnh giá trӏ ÿҷQJÿLӋn cӫa dӏFKWUtFKSURWHLQÿӇ hӛ trӧ cho quá trình thu nhұn chӃ phҭm protein
3.3.4.2 Xác ÿӏQKWtQKFKҩWFKӭFQăQJFӫDFKӃSKҭPSURWHLQ WӯURQJ
Ta tiӃn hành trích O\WKXÿѭӧc dӏch trích protein WѭѫQJWӵ QKѭӣ phҫn 3.3.3 Ta ghi nhұn tәng thӇ tích cӫa dӏFK WUtFK ÿy /ҩy 10mL dӏFK WUtFK [iF ÿӏnh KjP Oѭӧng protein có trong dӏch bҵQJSKѭѫQJSKiSKjeldahl ± Nessler
Song song ÿyÿHPSKҫn dӏch trích còn lҥi ÿLOjPOҥnh vӅ 2 0 C rӗi bә sung muӕi (dҥng hҥt) vào dung dӏFKFKRÿӃQNKLÿҥt nӗQJÿӝ muӕi (NH ) SO bão hòa là 70% và khuҩ\ÿӅu ӣ nhiӋWÿӝ phòng trong thӡi gian 10 phút6DXÿyO\WkP vӟi tӕFÿӝ 6000 vòng trong thӡi gian 10 phút WKXÿѭӧc kӃt tӫa Hoà tan kӃt tӫa vào nѭӟc rӗi tiӃn hành loҥi bӓ muӕi bҵQJSKѭѫQJSKiSWKҭm tích qua màng cellophane ӣ nhiӋWÿӝ phòng, tӕc ÿӝ khuҩy trong quá trình thҭm tích là 1000 vòng/phút trong thӡi gian 24 giӡ Sau khi loҥi bӓ muӕi amoni, pha lӓng sӁ ÿѭӧc cҩSÿ{QJ, ӣ nhiӋWÿӝ -45 o C rӗi sҩ\WKăQJKRD vӟi áp suҩt sҩy 8Pa trong thӡi gian 32 giӡ ÿӇ thu chӃ phҭP SURWHLQ &kQ Oѭӧng chӃ phҭPWKXÿѭӧc rӗL[iFÿӏnh KjPOѭӧng protein bҵQJSKѭѫQJSKiSKjeldahl ± Nessler
Khҧ QăQJhòa tan cӫa chӃ phҭP SURWHLQ ÿѭӧc xác ÿӏnh theo pKѭѫQJ SKiS Fӫa Ragab và cӝng sӵ (2004)
Mүu chӃ phҭPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc sӁ ÿѭӧc ÿiQKJLi song song vӟi mүXÿӕi chӭng là chӃ phҭm SURWHLQÿұu nành ÿұPÿһc Ĉҫu tiên, lҫQOѭӧt cân 0.2 g mүu chӃ phҭPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc YjSURWHLQÿұu nành rӗi ÿӇ vào ӕng ly tâm Ĉӕi vӟi thí nghiӋm ҧQKKѭӣng cӫa pH, tiӃn hành bә sung thêm 10 mL Qѭӟc cҩWÿmFKӍnh vӅ giá trӏ pH tӯ 2 -10 bҵng dung dӏch HCl 1M hoһc NaOH 1M Ĉӕi vӟi thí nghiӋm ҧQKKѭӣng cӫa nӗQJÿӝ muӕi, tiӃn hành bә sung dung dӏch muӕi NaCl có nӗQJÿӝ WKD\ÿәi tӯ 0 ± 1M (pH 7.0)
Hӛn hӧSÿHPÿLYRUWH[Yӟi tӕFÿӝ là 1500 vòng/ phút trong vòng 8 phút ӣ nhiӋt ÿӝ SKzQJYjÿHPÿLO\WkPYӟi tӕFÿӝ 5.000 vòng/ phút trong vòng 15 phút ÿӇ thu phҫn dӏch nәi có trong ӕng
Thành phҫn protein có trong phҫn dӏch nәi ÿѭӧF ÿR KjP Oѭӧng protein bҵng SKѭѫQJSKiS Kjeldahl ± Nessler
Giá trӏ pH cӫa dӏch protein tӯ 2 ± 10
;iFÿӏnh lѭӧng protein trong dӏch nәi sau khi ly tâm, tӯ ÿyVX\UDNKҧ QăQJhòa tan cӫa chӃ phҭm protein
3.3.4.4 ;iFÿӏQKNKҧQăQJWҥREӑWYjÿӝ EӅQEӑW
Khҧ QăQg tҥo bӑWYjÿӝ bӅn bӑt cӫa chӃ phҭPSURWHLQÿѭӧF[iFÿӏnh theo pKѭѫQJ pháp cӫa Nath và Rao (1981)
Mүu chӃ phҭPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc sӁ ÿѭӧc ÿiQKJLi song song vӟi mүXÿӕi chӭng là chӃ phҭm SURWHLQÿұu nành ÿұPÿһc Ĉҫu tiên, lҫn lѭӧt cân 0.2 g mүu chӃ phҭPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc YjSURWHLQÿұu nành rӗi ÿӇ vào ӕng ly tâmĈӕi vӟi thí nghiӋm ҧQKKѭӣng cӫa pH, tiӃn hành bә sung thêm 10 mL Qѭӟc cҩWÿmFKӍnh vӅ giá trӏ pH tӯ 2 -10 bҵng dung dӏch HCl 1M hoһc NaOH 1MĈӕi vӟi thí nghiӋm ҧQKKѭӣng cӫa nӗQJÿӝ muӕi, tiӃn hành bә sung dung dӏch muӕi NaCl có nӗQJÿӝ WKD\ÿәi tӯ 0 ± 1M (pH 7.0)
Trong ÿLӅu kiӋn nhiӋW ÿӝ phòng, chuyӇn mүu vào ӕng ly tâm có ghi giá trӏ thӇ tích Hӛn hӧSÿHPÿLYRUWH[YzQJSK~WWURQJSK~W rӗi ÿRWKӇ tích bӑt cӫa hӛn hӧSVDXÿyÿӇ yên mүu trong 30 phút rӗi ÿROҥi thӇ tích bӑt ÿӇ [iFÿӏnh khҧ QăQJbӅn bӑt cӫa hӛn hӧp
Giá trӏ pH cӫa dӏch protein tӯ 2 ± 10
+jPPөFWLrX ĈiQKJLiNKҧ QăQJWҥo bӑt và giӳ bӅn bӑt cӫDSKkQÿRҥQSURWHLQWDQWURQJQѭӟc
V 1 : thӇ tích cӫa dung dӏFKSURWHLQWUѭӟc khi vortex (mL)
V 2 : thӇ tích cӫa dung dӏch protein ngay sau khi vortex (mL)
V 3 : thӇ tích cӫa dung dӏch protein sau khi vortex và ÿӇ yên trong 30 phút (mL)
3.3.4.5 ;iFÿӏQKNKҧQăQJWҥRQKNJYjÿӝEӅQQKNJ
Khҧ QăQJ WҥR QKNJ Yj ÿӝ bӅQ QKNJ Fӫa chӃ phҭP SURWHLQ ÿѭӧF [iF ÿӏnh theo pKѭѫQJSháp cӫa Chavan và cӝng sӵ (2001)
Mүu chӃ phҭPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc sӁ ÿѭӧc ÿiQKJLi song song vӟi mүXÿӕi chӭng là chӃ phҭm SURWHLQÿұu nành ÿұPÿһc Ĉҫu tiên, lҫQOѭӧt cân 0.2 g mүu chӃ phҭPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc YjSURWHLQÿұu nành rӗi ÿӇ vào ӕng ly tâmĈӕi vӟi thí nghiӋm ҧQKKѭӣng cӫa pH, tiӃn hành bә sung thêm 10 mL Qѭӟc cҩWÿmFKӍnh vӅ giá trӏ pH tӯ 2 -10 bҵng dung dӏch HCl 1M hoһc NaOH 1MĈӕi vӟi thí nghiӋm ҧQKKѭӣng cӫa nӗQJÿӝ muӕi, tiӃn hành bә sung dung dӏch muӕi NaCl có nӗQJÿӝ WKD\ÿәi tӯ 0 ± 1M (pH 7.0) ĈӇ thӵc hiӋQ TXi WUuQK QKNJ KRi Kӛn hӧp bao gӗm dung dӏch protein/dҫX ÿұu nành (tӍ lӋ ÿѭӧFÿӗQJKRiFѫWURQJWKӡi gian 1 phỳt Lҩy 50àL mүu ӣ ÿi\ӕng ÿӗng hoá pha loãng trong 10 mL dung dӏFK'16ÿӝ hҩp thu cӫa mүu pha loãng ÿѭӧF[iFÿӏnh tҥLEѭӟc sóng 500 nm Lҩy mүXÿRÿӝ hҩp thu tҥi thӡLÿLӇm ngay sau ÿӗQJKRiYjVDXNKLÿӗng hoá 10 phút
Giá trӏ pH cӫa dӏch protein tӯ 2 ± 10
Khҧ Qăng tҥRQKNJÿѭӧc biӇu thӏ WK{QJTXDÿӝ hҩp thu cӫa mүu tҥi thӡLÿLӇm ngay VDXNKLÿӗng hoá Ĉӝ bӅQQKNJÿѭӧc tính theo công thӭc (Ogunwolu và cӝng sӵ, 2009): Ĉӝ bӅQQKNJSK~W = െ ࢄ
A 0 : Ĉӝ hҩp thu cӫa mүu ngay saXNKLÿӗng hoá
A 10 Ĉӝ hҩp thu cӫa mүu tҥi thӡLÿLӇPVDXÿӗng hoá 10 phút
Khҧ QăQJKҩp thu dҫu cӫa chӃ phҭPSURWHLQÿѭӧF[iFÿӏnh WKHRSKѭѫQJSKiSFӫa Deng và cӝng sӵ (2011)
Cân 0.5g mүu chӃ phҭm protein rӗi hoà vӟi 5g dҫX KѭӟQJ GѭѫQJ WUӝQ ÿӅu ӣ nhiӋWÿӝ phòng trong 1 giӡ6DXÿyÿHPFiFPүXÿLO\WkPYӟi tӕFÿӝ 4000 vòng/phút trong 30 phút Sau ly tâm, phҫn lӓQJÿѭӧc loҥi bӓFkQ[iFÿӏnh khӕLOѭӧng ӕng ly tâm và pha rҳn còn lҥi
Các mүu chӃ phҭPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc sӁ ÿѭӧc thӵc hiӋn song song vӟi mүu ÿӕi chӭQJOjSURWHLQÿұu nành
Hàm mөc tiêu ĈiQKJLiNKҧ QăQJKҩp thu dҫu cӫDSKkQÿRҥQSURWHLQWDQWURQJQѭӟc
M 1 : khӕi Oѭӧng cӫa ӕng và mүu khô WUѭӟc ly tâm (g)
M 2 : khӕi Oѭӧng cӫa ӕng và pha rҳn sau quá trình ly tâm tách pha lӓng (g) D: tӹ trӑng dҫu (g/mL)
3.3.4.7 ;iFÿӏQKNKҧQăQJKҩSWKX QѭӟF
Khҧ QăQJKҩp thu Qѭӟc cӫa chӃ phҭm protein ÿѭӧF[iFÿӏnh WKHRSKѭѫQJSKiS cӫa Deng và cӝng sӵ (2011)
Cân 0.5g mүu chӃ phҭm protein rӗi hoà vӟL J Qѭӟc cҩt, trӝQ ÿӅu ӣ nhiӋW ÿӝ phòng trong 1 giӡ6DXÿyÿHPFiFPүXÿLO\WkPYӟi tӕFÿӝ 4000 vòng/phút trong 30 phút Sau ly tâm, phҫn lӓQJÿѭӧc loҥi bӓFkQ[iFÿӏnh khӕLOѭӧng ӕng ly tâm và pha rҳn còn lҥi
Các mүu chӃ phҭPSURWHLQWDQWURQJQѭӟc sӁ ÿѭӧc thӵc hiӋn song song vӟi mүu ÿӕi chӭQJOjSURWHLQÿұu nành
HjPPөFWLrX ĈiQKJLiNKҧ QăQJKҩp thu Qѭӟc cӫDSKkQÿRҥn protein WDQWURQJQѭӟc
Khҧ QăQJKҩp thu Qѭӟc (mL/g)= ሺெ మ ିெ భ ሻ ெ బ ௫
M 1 : khӕi Oѭӧng cӫa ӕng và mүXNK{WUѭӟc ly tâm (g)
M 2 : khӕi Oѭӧng cӫa ӕng và pha rҳn sau quá trình ly tâm tách pha lӓng (g) D: tӹ trӑQJQѭӟc (g/mL)
Các thí nghiӋPÿѭӧc tiӃn hành lһp lҥi 3 lҫn KӃt quҧ ÿѭӧc trình bày bҵng giá trӏ trung bình േSD Sӱ dөng phҫn mӅm JMP Pro ÿӇ phân tích thӕng kê sӕ liӋu thí nghiӋm YjÿiQKJLiVӵ khác biӋt giӳa các mүu (p