Luận án tiến sĩ Hóa học: Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài ngọc cẩu (Balanophora laxiflora Hemst) và loài vú bò (Ficus hirta Vahl.)

Kết quả thử hoạt tính kháng viêm của một số chất được tách ra từ loài loài B.. Với mục tiêu hiện đại hóa y học cổ truyền và kết hợp y học cổ truyền với y học hiện đại thì việc phát hiện

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC

VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM

HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

TRẦN ĐỨC ĐẠI

NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI LOÀI NGỌC CẨU

(BALANOPHORA LAXIFLORA HEMSL.) VÀ VÚ BÒ

(FICUS HIRTA VAHL.)

LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC

Hà Nội - 2018

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC

VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM

HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

TRẦN ĐỨC ĐẠI

NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI LOÀI NGỌC CẨU

(BALANOPHORA LAXIFLORA HEMSL.) VÀ VÚ BÒ

(FICUS HIRTA VAHL.)

LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC

LỜI CẢM ƠN

Luận án này được hoàn thành tại Phòng Nghiên cứu Hợp chất thiên nhiên và Phòng Nghiên cứu Hoạt chất sinh học,Viện Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Trịnh Thị Thủy và TS Nguyễn Quyết Tiến - những thầy cô đã dành cho tôi sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình trong suốt quá trình thực hiện luận án

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến các cô chú, anh chị Phòng Hợp chất thiên nhiên và Phòng Hoạt chất sinh học - Viện Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã hết lòng chỉ bảo và giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện luận án

Để hoàn thành luận án này, tôi đã nhận được sự giúp đỡ hết sức nhiệt tình của:

- Ban lãnh đạo, Thầy Cô giáo, các anh chị và các bạn đồng nghiệp tại Viện Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam

- Ban lãnh đạo, các đồng nghiệp Trường Đại học Tân Trào - Tuyên Quang

- Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn đối với sự động viên, giúp đỡ của gia đình, bạn bè

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi dưới sự hướng dẫn của PGS.TS Trịnh Thị Thủy và TS Nguyễn Quyết Tiến

Các số liệu và kết quả nêu trong luận án này là trung thực, được đồng tác giả cho phép sử dụng và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác

Tác giả

Trần Đức Đại

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 3

1.1 Giới thiệ về loài ngọc cẩ (Balanophora laxiflora Hemsl.) 3

1.1.1 Chi Balanophora 3

1.1.2 Loài ngọc cẩu B laxiflora 3

1.1.2.1 Tên gọi 3

1.1.2.2 Đặc điểm thực vật loài ngọc cẩu (B laxiflora) 4

1.1.2.3 Công dụng chữa bệnh của loài ngọc cẩu (B laxiflora) 5

1.1.2.4 Tổng quan của loài ngọc cẩu 6

1.2 Thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của các loài th ộc chi Ficus 15 1.2.1 Chi Ficus 15

1.2.1.1 Các nghiên cứu quốc tế 16

1.2.1.2 Các nghiên cứu trong nước 32

1.2.2 Loài vú bò F hirta 34

1.2.2.1 Mô tả thực vật 34

1.2.2.2 Công dụng 35

1.2.2.3 Thành phần hóa học loài vú bò 36

CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 38

2.1 Mẫ nghiên cứ 38

2.1.1 Mẫu cây ngọc cẩu 38

2.1.2 Mẫu cây vú bò 38

2.2 Phư ng pháp nghiên cứ 39

2.2.1 Phương pháp chiết mẫu thực vật 39

2.2.3 Phương pháp xác định cấu trúc 40

2.2.4 Phương pháp thử hoạt tính sinh học 40

2.2.4.1 Phương pháp nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào 40

2.2.4.2 Phương pháp gây độc tế bào thự hiện tại Đại học Y Perugia - Đại học tổng hợp Perugia nước Cộng hòa Italy 42

2.2.4.3 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính ức chế nitric oxide (NOs inhibition) thực hiện tại Viện Hóa học – Viện Hàn lâm và Khoa học Việt Nam43 2.3 Chiết tách và tinh chế các hợp chất từ hai loài nghiên cứ 45

2.3.1 Phân lập các hợp chất từ loài ngọc cẩu (B laxiflora) 45

2.3.1.1.Chiết tách, tạo cao chiết 45

2.3.1.2 Phân lập các hợp chất từ cặn chiết dichloromethane 46

2.3.1.3 Phân lập các hợp chất từ cặn chiết ethyl acetate 49

2.3.1.4 Phân lập các hợp chất từ cặn chiết methanol 52

2.3.2 Phân lập các hợp chất từ rễ cây vú bò (F hirta) 54

2.3.2.1 Chiết mẫu, tạo cao chiết 54

2.3.2.2 Thử hoạt tính các cao chiết 55

2.3.2.3 Phân lập các hợp chất từ cao ethyl acetate 56

2.3.2.4 Phân lập các hợp chất từ cao n-butanol 58

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ THẢO LUẬN 62

3.1 Cây ngọc cẩ (B laxiflora) 62

3.1.1 Hợp chất BL-1 (4-Hydroxy-3-methoxycinnamandehid) 62

3.1.2 Hợp chất BL-2 (methyl 4-hydroxycinnamate) 63

3.1.3 Hợp chất BL-3 (pinoresinol) 63

3.1.4 Hợp chất BL-4 (methyl 3,4-dihydroxycinnamate) 64

3.1.5 Hợp chất BL-5 (7-hydroxy-6-methoxycoumarin), scopoletin 65

3.1.6 Hợp chất BL-6 (+)-lariciresinol) 66

3.1.7 Hợp chất BL-7 (+)-isolariciresinol 68

3.1.8 Hợp chất BL-8 (quercetin) 68

3.1.9 Hợp chất BL-9 (methyl gallate) 70

3.1.10 Hợp chất BL-10 (chất mới)- balanochalcone 70

3.1.11 Hợp chất BL-11 (β-hydroxydihydrochalcone) 74

3.1.12 Hợp chất BL-12, dimethyl 6,9,10-trihydroxybenzo[kl]xanthene-1,2-dicarboxylate 76

3.1.13 Hợp chất BL-13 (p-cumaric acid) 77

3.1.14 Hợp chất BL-14 (isolariciresinol 4-O-β-D-glucopyranoside) 78

3.1.15 Hợp chất BL-15 (Daucosterol) 78

3.1.16 Hợp chất BL-16 (5-Hydroxymethylfurfural) 79

3.1.17 Hợp chất BL-17 (methyl β-D-glucopyranoside) 80

3.1.18 Hợp chất BL-18 (methyl 4-O-β-D-glucopyranosylconiferyl ether) 81

3.1.19 Hợp chất BL-19, 4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzoyl glucopyranoside 82

3.1.20 Hợp chất BL-20 (lariciresinol 4-O-β-D-glucopyranoside) 84

3.2 Các hợp chất phân lập từ loài vú bò 87

3.2.1 Hợp chất F-1 (6,7-Furano-hydrocoumaric acid ethyl ester) 87

3.2.2 Hợp chất F-2 (umbelliferon) 7-hydroxycoumarin 90

3.2.3 Hợp chất F-3 (bergapten) 92

3.2.4 Hợp chất F-4 (ethyl β-D-fructofuranoside) 94

3.2.5 Hợp chất F-5 (ethyl β-D-glucopyranoside) 94

3.2.6 Hợp chất F-6, 5-O-[β-D-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl]bergaptol (chất mới) 95

3.2.7 Hợp chất F-7 (adenosine) 101

3.2.8 Hợp chất F-8 (6-carboxy-umbelliferon) 104

3.2.9 Hợp chất F-9 (picraquassioside A) 104

3.2.10 Hợp chất F-10 (rutin) 105

3.2.11 Hợp chất F-11 (acid aspartic) 107

3.3 Kết q ả thử hoạt tính sinh học 109

3.3.1 Kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào loài ngọc cẩu (B laxiflora) 109

3.3.1.1 Kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào thực hiện thử nghiệm tại viện Hóa học 109

3.3.1.2 Kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào thực hiện thử nghiệm ở Đại học y Perugia - Đại học tổng hợp Perugia nước Cộng hòa Italy 109

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 113

1 Thành phần hóa học cây ngọc cẩ B laxiflora 113

2 Thành phần hóa học cây vú bò F hirta 113

3 Đánh giá bước đầ về hoạt tính sinh học 114

3.1 Hoạt tính sinh học loài ngọc cẩu B laxifloraError! Bookmark not defined 3.2 Hoạt tính sinh học loài vú bò F hirta Error! Bookmark not defined DANH MỤC CÁC CÔNG BỐ CỦA TÁC GIẢ CÓ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI LUẬN ÁN 116

TÀI LIỆU THAM KHẢO 1162

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

1H-NMR Proton Nuclear Magnetic

Resonance Spectrocopy

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton

DEPT Distortionless Enhancement by

Polarisation Transfer Phổ DEPT HMBC Heteronuclear Multiple Bond

HR-ESI-MS High Resolution Electron Spray

Ionization- Mass Spectrocopy

Phổ khối phân giải cao ion hóa bằng phun mù điện tử

NOESY Nuclear Overhauser Effect

IR Infrared Spectrocopy Phổ hồng ngoại

IC50 Inhibitory concentration 50% Nồng độ ức chế 50% tế bào thử

nghiệm

KB Human epidermic carcinoma Ung thư biểu mô ở người

HepG2 Human hepatocellular carcinoma Ung thư gan ở người

MCF-7 Human breast carcinoma Ung thư vú ở người

MKN7 Human gastric cancer Ung thư dạ dày ở người

LNCaP Human prostate edenocarcinoma Ung thư tuyến tiền liệt ở người HL-60 Human promyeloccytic leukemia Ung thư máu cấp tính ở người SK-Mel2 Human malignant melanoma Ung thư da ở người

SW626 Human ovarian adenocarcinoma Ung thư buồng trứng ở người SW480 Human colon adenocarcinoma Ung thư đại tràng ở người

RD Human rhabdomyosarcoma Ung thư cơ vân ở người

TNF-α Tumor necrosis factor alpha Yếu tố hoại tử khối u

HEPES Acid

4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-

diphenyltetrazolium bromide DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl

LPS Lipopolysaccharides

L-NMMA NG-methyl-L-arginine acetate

ATCC American Type Culture

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1 Bảng thử hoạt tính của các dịch chiết loài B.laxiflora [29] 6

Bảng 1.2 Các hợp chất hóa học thuộc nhóm tanin được tách ra từ loài ngọc cẩu (B laxiflora) 8

Bảng 1.3 Các hợp chất hóa học thuộc nhóm (C6 - C3)n (phenylpropanoid) được tách ra từ loài ngọc cẩu (B laxiflora Hemsl) 9

Bảng 1.4 Các hợp chất hóa học thuộc nhóm (C6 - C3)n (phenylpropanoid) được tách ra từ loài ngọc cẩu (B laxiflora Hemsl) 10

Bảng 1.5 Bảng thử hoạt tính chống oxi hóa của các dịch chiết loài B.laxiflora bằng các phương pháp khử gốc tự do DPPH, superoxyd, ngăn chặn sự tạo phức của ion sắt [35] 12

Bảng 1.6 Kết quả thử hoạt tính chống oxi hóa bằng phương pháp khử gốc tự do DPPH của 19 chất tách ra từ loài B.laxiflora [30] 13

Bảng 1.7 Kết quả thử hoạt tính chống oxi hóa của loài B laxiflora [32] 13

Bảng 1.8 Kết quả thử hoạt tính kháng viêm của một số chất được tách ra từ loài loài B laxiflora [33] 15

Bảng 1.9 Các hợp chất (46-51) phân lập từ quả của một số loài thuộc chi Ficus 18

Bảng 1.10 Các hợp chất (52-61) phân lập từ quả của một số loài thuộc chi Ficus 19

Bảng 1.11 Các hợp chất (62-65) phân lập từ quả của một số loài thuộc chi Ficus 20

Bảng 1.12 Các hợp chất (66-75) thuộc nhóm chất alkaloid phân lập từ lá của một số loài thuộc chi Ficus Error! Bookmark not defined Bảng 1.13 Các hợp chất cumarin phân lập từ lá của một số loài thuộc chi Ficus 22

Bảng 1.14 Các hợp chất flavonoid phân lập từ thân của một số loài thuộc chi Ficus 25

Bảng 1.15 Các hợp chất sterol phân lập từ rễ của một số loài thuộc chi Ficus 29

Bảng 1.16 Các hợp chất phân lập từ rễ của loài F hirta Hemsl 37

Bảng 2.1 Khả năng ức chế sản sinh NO của các mẫu nghiên cứu 56

Bảng 2.2 Tác động của các mẫu nghiên cứu đến khả năng ức chế sự phát triển của tế bào RAW 264,7 55

Bảng 3.1 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất BL-5 và của scopoletin [131a] 65

Bảng 3.2 Dữ liệu phổ 1H và 13C-NMR của BL-6, BL-7 và các hợp chất tham khảo [CD3OD, δ ((ppm)), J (Hz)] 67

Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất BL-8 và quercetin [129a] 69

Bảng 3.4 So sánh số liệu phổ của hợp chất BL-12 với hợp chất dimethyl 6,9,10-trihydroxybenzo[kl]xanthene-1,2-dicarboxylate……….86

Bảng 3.5 So sánh số liệu phổ của hợp chất BLM-16 với hợp chất 5-hydroxymethylfurfural [123a] 80

Bảng 3.6 So sánh số liệu phổ của hợp chất BL-18 với hợp chất methyl

4-O-β-D-glucopyranosylconiferyl ether [125] 81

Bảng 3.7 Dữ liệu phổ 1 H- và 13C-NMR của hợp chất BL-14, BL-20 và các hợp chất tham khảo [CD3OD; DMSO-d 6 , δ((ppm)), J (Hz)] 83

Bảng 3.8 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất F-1 và hợp chất tham khảo [132] 90

Bảng 3.9 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất F-2 và hợp chất tham khảo [130] 92

Bảng 3.10 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất F-3 và hợp chất tham khảo [132] 103

Bảng 3.11 Dữ liệu 1H-, 13C-NMR (500 và 125 MHz, δ/(ppm), J/Hz, trong DMSO-d 6) và 1H, 13C, HMBC các tương tác xa tiêu biểu của hợp chất F-6

Bảng 3.12 So sánh tương quan phổ NMR của hợp chất F-7 với β-adenosine 102

Bảng 3.13 Hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất tách ra từ loài ngọc cẩu 109

Bảng 3.14 Các hợp chất phân lập từ loài ngọc cẩu Error! Bookmark not defined Bảng 3.15 Các hợp chất phân lập từ loài vú bò Error! Bookmark not defined

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

Hình 1.1 Cây ngọc cẩu (B laxiflora Hemsl.) 4

Hình 1.2 Cây vú bò (F hirta Vahl.) 34

Hình 2.1 Hình ảnh cây ngọc cẩu cái (B laxiflora Hemsl.) 41

Hình 2.2 Hình ảnh cây vú bò (Ficus hirta Vahl.) 41

Hình 2.3 Sơ đồ phân lập các cao chiết từ cây ngọc cẩu 48

Hình 2.4 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cặn chiết dichloromethane 50

Hình 2.5 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cặn chiết ethyl acetate 53

Hình 2.6 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cặn chiết methanol 56

Hình 2.7 Sơ đồ tổng quan phân lập các cặn chiết từ rễ cây vú bò 58

Hình 2.8 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cặn chiết EtOAc rễ cây vú bò 60

Hình 2.9 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cặn chiết n-butanol 62

Hình 3.1 Cấu trúc hóa học hợp chất BL-1 62

Hình 3.2 Cấu trúc hóa học hợp chất BL-2 63

Hình 3.3 Cấu trúc hóa học hợp chất BL-3 63

Hình 3.4 Cấu trúc hóa học hợp chất BL-4 64

Hình 3.5 Cấu trúc hóa học hợp chất BL-5 65

Hình 3.6 Cấu trúc hóa học hợp chất BL-6 66

Hình 3.7 Cấu trúc hóa học hợp chất BL-7 68

Hình 3.8 Cấu trúc hóa học hợp chất BL-8 68

Hình 3.9 Cấu trúc hóa học hợp chất BL-9 70

Hình 3.10 Cấu trúc hóa học hợp chất BL-10 70

Hình 3.11 Phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS của hợp chất BL-10 71

Hình 3.12 Phổ 1 H-NMR/CD3OD của hợp chất BL-10 72

Hình 3.13 Phổ 1H-, 13C-NMR của hợp chất BL-10 (chất mới) 72

Hình 3.14 Các tương tác HMBC chính (H →C) của hợp chất BL-10 72

Hình 3.15 Phổ HSQC của hợp chất BL-10 (chất mới) 73

Hình 3.16 Phổ HMBC-NMR của hợp chất BL-10 (chất mới) 73

Hình 3.17 Cấu trúc hóa học của hợp chất BL-11 75

Hình 3.18 Cấu trúc hóa học của hợp chất BL-12 76

Hình 3.19 Cấu trúc hóa học của hợp chất BL-13 77

Hình 3.20 Cấu trúc hóa học của hợp chất BL-14 78

Hình 3.21 Cấu trúc hóa học của hợp chất BL-15 78

Hình 3.22 Cấu trúc hóa học của hợp chất BL-16 79

Hình 3.23 Cấu trúc hóa học của hợp chất BL-17 80

Hình 3.24 Cấu trúc hóa học của hợp chất BL-18 81

Hình 3.25 Cấu trúc hóa học của hợp chất BL-19 82

Hình 3.26 Cấu trúc hóa học của hợp chất BL-20 84

Hình 3.27 Cấu trúc hợp hóa học chất F-1 và các tương tác chính (H -> C) HMBC.97 Hình 3.28 Phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS [M+Na]+ của hợp chất F-1 87

Hình 3.29 Phổ FT-IR hợp chất F-1……….……… 98

Hình 3.30 Phổ 1H-NMR/CDCl3 của hợp chất F-1 88

Hình 3.31 Phổ 13C-NMR/CDCl3 của hợp chất F-1 88

Hình 3.32 Phổ HSQC của hợp chất F-1 89

Hình 3.33 Phổ HMBC của hợp chất F-1……….100

Hình 3.34 Cấu trúc hóa học hợp chất F-2 91

Hình 3.35 Cấu trúc hóa học hợp chất F-3 92

Hình 3.36 Cấu trúc hóa học hợp chất F-4 94

Hình 3.37 Cấu trúc hóa học hợp chất F-5 94

Hình 3.38 Cấu trúc hóa học của hợp chất F-6 và các tương tác (H -> C) HMBC chính 95

Hình 3.39 Phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS hợp chất F-6 95

Hình 3.40 Phổ FT-IR/KBr hợp chất F-6 96

Hình 3.41 Phổ 1H-NMR/(DMSO-d6) của hợp chất F-6 97

Hình 3.42 Phổ 13C-NMR của hợp chất F-6 97

Hình 3.43 Phổ HSQC của hợp chất F-6 98

Hình 3.44 Các tương tác HMBC của hợp chất BL-6 98

Hình 3.45 Các tương tác HMBC của hợp chất BL-6 100

Hình 3.46 Cấu trúc hóa học của hợp chất F-7 101

Hình 3.47 Cấu trúc hóa học của hợp chất F-8 104

Hình 3.48 Cấu trúc hóa học của hợp chất F-9 104

Hình 3.49 Cấu trúc hóa học của hợp chất F-10 105

Hình 3.50 Cấu trúc hóa học của hợp chất F-11 107

Biểu đồ 3.1 Số lượng của các tế bào OCI-AML sau 24 giờ khi thử nghiệm với các thanh đen (các thanh trắng là MeOH làm đối chứng) 110

Biểu đồ 3.2 Số lượng của các tế bào OCI-AML chết theo chương trình (apoptosis) sau 24 giờ khi thử nghiệm với các thanh đen (các thanh trắng là MeOH làm đối chứng) 110

Biểu đồ 3.3 Số lượng các tế bào OCI-AML trong các pha trong chu trình của tế bào khi được xử ở các nồng độ khác nhau thanh đen (thanh trắng là chất đối chứng) 111

MỞ ĐẦU

Tài nguyên cây thuốc đóng vai trò quan trọng trong chăm sóc sức khoẻ, chữa bệnh cho con người, đặc biệt ở các nước nghèo, đang phát triển và có truyền thống sử dụng cây cỏ làm thuốc Theo báo cáo của Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), ngày nay có khoảng 80% dân số ở các nước đang phát triển với dân số khoảng 4,5 đến 5 tỉ người trên thế giới có nhu cầu chăm sóc sức khoẻ ban đầu phụ thuộc vào nền y học cổ truyền Việt Nam nằm trong vùng khí hậu cận nhiệt đới, có nguồn tài nguyên cây thuốc phong phú và đa dạng Theo kết quả điều tra nguồn tài nguyên dược liệu ở Việt Nam giai đoạn 2001-2005 của Viện Dược liệu Việt Nam, hiện Việt Nam có khoảng 10.500 loài thực vật bậc cao, nằm trong 2.275 chi, 305 họ trong đó có 3.950 loài được dùng làm thuốc (17% số cây thuốc của thế giới), không kể cây thuốc dân tộc (Ethno-medicinal plants) còn ít biết [1]

Y dược cổ truyền Việt Nam có nhiều loại cây thuốc quý, nhiều bài thuốc hay được sử dụng từ hàng ngàn năm trước đến nay vẫn còn nguyên giá trị chữa bệnh, cứu người Đặc biệt, những bài thuốc bồi bổ cơ thể được nhiều người sử dụng, đã góp phần nâng cao thể trạng, phát triển giống nòi người Việt Nam Trong nhiều năm qua, Việt Nam đã từng bước lồng ghép Y dược cổ truyền vào hệ thống Y tế quốc gia, phát huy được vai trò to lớn của Y dược cổ truyền Đường lối phát triển Y dược học cổ truyền Việt Nam đã được khẳng định nhất quán trong nhiều năm qua là: kế thừa, phát huy, phát triển y dược học cổ truyền, kết hợp với y học hiện đại, xây dựng nền y dược học

cổ truyền Việt Nam khoa học dân tộc và đại chúng Hiện đại hóa y dược cổ truyền và kết hợp y dược cổ truyền với y dược hiện đại đang là mục tiêu và yêu cầu phát triển của thời đại Thực hiện tốt công việc này sẽ góp phần đưa sự nghiệp chăm sóc sức khỏe nhân dân lên tầm cao mới Với mục tiêu hiện đại hóa y học cổ truyền và kết hợp

y học cổ truyền với y học hiện đại thì việc phát hiện các vị thuốc mới, các hợp chất có hoạt tính sinh học cao, các hợp chất mới trong các cây thuốc truyền thống là nhiệm vụ hàng đầu của các nhà khoa học

Việt Nam có khoảng 54 dân tộc cùng sinh sống như dân tộc Kinh, Tầy, Dao, Sán Chay, Mông, Nùng, Sán Dìu, Ê đe Một số dân tộc có những cây thuốc quý, những bài thuốc gia truyền có giá trị chữa, trị bệnh có hiệu quả được người dân tin dùng và được hội Đông Y Việt Nam công nhận tuy nhiên những bài thuốc của người dân ít được chứng

minh bằng khoa học Cây ngọc cẩu (Balanophora laxiflora Hemsl.), cây vú bò (Ficus

hirta Vahl.) là những cây thuốc quý trong kho tàng cây thuốc, vị thuốc Việt Nam, hai loài

này đã được người dân dùng trị, chữa bệnh thông thường và trị nhiều chứng bệnh nan y có hiệu quả như: bổ máu, phục hồi sức khỏe phụ nữ sau sinh, kích thích ngon miệng, chữa đau bụng, nhức mỏi chân tay….[1, 10, 11, 12] Trên thế giới đã công bố những chất được tách ra từ hai loài trên có hoạt tính sinh học tốt như hoạt tính kháng viêm, kháng ung thư, chống oxi hóa Việc nghiên cứu thành phần hóa học và khảo sát hoạt tính sinh học của loài ngọc cẩu và loài vú bò góp phần làm cơ sở khoa học cho việc xây dựng chiến lược quản lý, bảo tồn, phát triển bền vững tính đa dạng sinh học của rừng đặc dụng của Việt Nam, làm sáng tỏ những công dụng loài vú bò và loài ngọc cẩu mà nhân dân vẫn đang sử

dụng Do đó tôi chọn đối tượng đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt sính sinh học của hai loài ngọc cẩu (Balanophora laxiflora Hemsl.) và vú bò (Ficus hirta Vahl.)”

Theo hướng nghiên cứu này, luận án có các nội dung sau:

1 Nghiên cứu được thành phần hóa học của hai loài: loài ngọc cẩu (B laxiflora Hemsl.) và loài vú bò (F hirta Vahl.)

2 Xác định cấu trúc hóa học các hợp chất phân lập được bằng các phương pháp phổ

IR, MS, 1D-NMR, 2D-NMR

3 Đánh giá một số hoạt tính độc tế bào, hoạt tính kháng viêm, hoạt tính chống tăng sinh trên dòng tế bào tủy xương cấp tính (OCI-AML) của các cao chiết và của một số hợp chất phân lập được nhằm định hướng cho các nghiên cứu ứng dụng tiếp theo

Việc nghiên cứu thành phần hóa học và khảo sát hoạt tính sinh học của loài ngọc cẩu và loài vú bò làm sáng tỏ những công dụng dân gian đã dùng và tìm ra những chất mới, hoạt chất mới góp phần làm phong phú thêm những nghiên cứu về loài ngọc cẩu và loài vú bò

Chư ng 1 TỔNG QUAN

1.1 Giới thiệ về loài ngọc cẩ (B laxiflora Hemsl.)

1.1.1 Chi Balanophora

Chi Balanophora có khoảng 120 loài thuộc họ Balanophoraceae phân bố trên

khắp thế giới Nhiều loài trong số chúng phân bố ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới

ở Châu Á, Châu Đại Dương và gần 20 loài được phân bố rộng rãi ở Tây Nam Trung

Quốc [2, 3] Những loài thuộc chi Balanophora thường sống ký sinh trên rễ cây lá

rộng thường xanh, đặc biệt là trong họ Leguminosae, Ericaceae, Urticaceae, và Fagaceae [2,4-5]

Ở Việt Nam hiện có khoảng 6 loài thuộc chi Balanophora: B.laxiflora Hemsl, B.latisepala Tiegh, B.fungosa J.R Foster & G Foster, B.polyandra Griff, B cucphuongensis, B.abbreviata trong đó loài B cucphuongensis là loài đặc hữu chỉ có ở

Khu Bảo tồn Thiên nhiên Quốc gia Cúc Phương [6-10]

Những nghiên cứu về thực vật các loài thuộc họ Balanophoraceae cho thấy

trong chi Balanophora có thành phần hóa học rất đa dạng, bao gồm các hợp chất lignan, phenylpropanoid, tanin, flavonoid, terpenoid, acid amin Chi Balanophora có

rất nhiều loại tanin thủy phân (tanin pyrogallic), đặc biệt là chất ellagitannin Thành phần cấu tạo đặc trưng của các tanin này là các dẫn xuất của acid cinamic và có thêm một dẫn xuất của acid phenylacrylic [caffeoyl, coumaroyl, feruloyl hoặc cinnamoyl), trong đó ở vị trí C-1 liên kết glucosid dưới dạng R–O–glycosidic (R: galloyl, caffeoyl

và hexahydroxydiphenoyl (HHDP)], ở các vị trí C-3, C-4 hoặc C-6 liên kết theo kiểu

ester R-CO-O-glycosidic [11] Các hợp chất được tách ra từ chi Balanophora có hoạt

tính chống oxy hóa [2, 5, 12], ức chế HIV [13], hạ đường huyết [14, 15], chống viêm, giảm đau [16, 17], kháng ung thư [18]

Các loài thuộc chi Balanophora được sử dụng trong Y học cổ truyền Trung

Quốc, Nhật Bản, Ấn Độ, Nepan, Thái Lan, Việt Nam làm thuốc bổ sinh lý nam nữ, giải độc rượu, chữa bệnh trĩ, đau dạ dày, ho gà, bệnh lậu, giang mai…[5-10, 19, 21-22]

1.1.2 Loài ngọc cẩu (B laxiflora)

1.1.2.1 Tên gọi

Tên khoa học: Balanophora laxiflora

Tên thông thường: ngọc cẩu, tỏa dương, củ gió đất, củ ngọt núi, hoa đất, cu chó,

xà cô, nấm đất, dó đất hoa thưa, dương đài hoa thưa [6-10]

Phân loại khoa học [2-10]

Ngọc cẩu là loại cây cỏ mập, trông như một cây nấm, sống ký sinh trên rễ cây

lá rộng thường xanh, đặc biệt là trong họ Leguminosae, Ericaceae,Urticaceae, và Fagaceae, màu đỏ nâu sẫm, không diệp lục Cấu tạo bởi một cán hoa lớn, trên mang hoa dày đặc, có mô bao bọc, màu tím, mùi hôi Cán hoa nạc và mềm, dạng thay đổi, sần sùi, không có lá Củ hình trứng, đường kính 2 - 2,5 cm, bề mặt sần sùi và có mụn hình sao nổi rõ Thân ký sinh (là cuống cụm hoa) mang năm đến mười lá dạng vảy ở phía gốc; phiến lá hình mũi mác, cỡ 2 - 2,5 x 1 - 1,5 cm [2-10]

Hoa đơn tính khác gốc, hợp thành nột cụm hoa dạng bông nạc Hoa đực và hoa cái riêng Cụm hoa đực hình trụ, gồm những hoa gần như không cuống, dài từ 10 - 15

cm, bao gồm sáu mảnh, trong đó hai mảnh giữa (đối diện nhau) lớn hơn và cụt đầu, các mảnh bên hình trái xoan tròn đầu, khối phấn bị ép ngang Cụm hoa cái hình bầu dục thuôn, dài từ 2-3 cm không có bao hoa, mọc ở quanh chân của vảy bảo bệ Vảy hình trứng lõm ở đỉnh, một vòi nhụy [2-10]

Hình 1.1 Cây ngọc cẩu (B laxiflora Hemsl.)

1.1.2.3 Công dụng chữa bệnh của loài ngọc cẩu (B laxiflora)

* Theo Y học cổ truyền

Cây ngọc cẩu dùng làm thuốc bổ máu, phục hồi sức khỏe phụ nữ sau sinh, kích thích ngon miệng, chữa đau bụng, nhức mỏi chân tay… Ở Trung Quốc, toàn cây ngọc cẩu dùng trị hư lao, xuất huyết, chữa đau lưng, lở trĩ, giải độc rượu, thuốc bổ sinh lý nam nữ… [2-10]

* Một số bài thuốc dân gian dùng cây ngọc cẩu chữa bệnh:

+ Bài thuốc giúp phục hồi sức khỏe phụ nữ sau sinh

Ngọc cẩu 15 - 20 g, ích mẫu thảo khô 30 g, cho vào 3 bát nước sắc còn 1 bát Sau

đó sắc nước 2, nước 3 Đổ lẫn 3 bát thuốc của 3 lần, sắc lại còn 1 bát, chia 2 - 3 lần uống sau khi ăn trong ngày Cần uống liền 30 ngày sẽ cho kết quả rất tốt

+ Bài thuốc chữa nam sinh lý yếu

Ngọc cẩu 100g, rễ đinh lăng 100g, ba kích 80g, dâm dương hoắc (sao với mỡ dê) 50g, đương quy 50g, hà thủ ô đỏ 50g, câu kỷ tử 50g, thục địa 50g, bạch truật 50g, trần bì 30g Tất cả ngâm với 5 lít rượu gạo có độ cao, sau 20 ngày là sử dụng Ngày uống 2 lần vào trước hoặc sau bữa ăn hay trước lúc ngủ, mỗi lần 30 ml

+ Bài thuốc chữa liệt dương

Ngọc cẩu 12g, thục địa 15g, sơn thù 15g, sơn dược 15g, phục linh 12g, câu kỷ tử 15g, nhục thung dung 12g, dâm dương hoắc 30g, ba kích 12g, bạch nhân sâm 12g, lộc nhung 6g, táo nhân (sao) 12g, thỏ ty tử 12g, thiên môn đông 9g, cam thảo 9g Tán bột mịn, làm hoàn, ngày uống 3 lần, mỗi lần 1 hoàn 9g, chiêu với nước trắng, kiêng ăn các thức tanh lạnh trong thời gian sử dụng thuốc

+ Bài thuốc bổ thận tráng dương

Ngọc cẩu 15 g, nhân sâm 12 g, hoàng kỳ 16 g, đỗ trọng 16 g, nhục thung dung 8 g,

thỏ ty tử 12 g, xa sàng tử 12 g, phúc bồn tử 12 g, đương quy 12 g, bạch truật 12 g, thục địa

16 g, ba kích 12 g, dâm dương hoắc 12 g, lộc nhung 12 g, câu kỷ tử 12 g, đại táo 5 quả, long nhãn 10 g, cam thảo 6 g, xuyên khung 8 g, hà thủ ô đỏ 12 g Sắc ngày 1 thang lấy 3 lần nước thuốc rồi làm lại còn 250 ml, chia 3 lần uống trong ngày Cần uống liền 7 thang Nếu uống được rượu thì có thể dùng phương trên nhưng mỗi vị cần gấp 5 lần cho cả thang thuốc, ngâm với 5 lít rượu trong 30 ngày rồi mới gạn rượu và cho vào 500 ml mật ong trộn đều để uống dần Ngày uống 3 lần trước bữa ăn, mỗi lần 25 - 30 ml

1.1.2.4 Các kết quả nghiên cứu về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của loài ngọc cẩu

a Tình hình nghiên cứu trong nước

Năm 2014, tác giả Cầm Thị Ính và cộng sự đã phân lập được hai hợp chất

pinoresinol (1), daucosterol (2), từ loài ngọc cẩu (B laxiflora) [23]

Năm 2015, tác giả Nguyễn Thanh Hương và cộng sự nghiên cứu về tác dụng androgen (Androgen là hormon sinh dục nam, đóng vai trò quan trọng trong chức năng sinh sản của nam giới), nó cần thiết để hình thành và duy trì các đặc tính sinh dục nam thứ phát, ảnh hưởng đến khả năng sinh sản và hoạt tính tình dục của nam giới) của

cao lỏng ngọc cẩu (B laxiflora) trên chuột cống đực non thiến và chuột cống đực

trưởng thành Kết quả cho thấy cao lỏng tỏa dương thể hiện hoạt tính androgen rõ rệt thông qua việc tăng nồng độ testosteron máu và khối lượng các cơ quan sinh dục phụ Tác dụng androgen của cao lỏng tỏa dương phụ thuộc liều, liều thấp (0,28 g/kg) làm tăng khối lượng tinh hoàn và nồng độ testosteron trên chuột cống đực trưởng thành, nhưng không làm tăng khối lượng các cơ quan sinh dục phụ trên chuột cống đực non thiến Ở liều cao (1,4 g/kg) cao lỏng tỏa dương làm tăng cả khối lượng tinh hoàn và bao quy đầu trên chuột cống đực trưởng thành và cả cả khối lượng túi tinh, tuyến cowper, cơ nâng hậu môn trong chuột cống đực non thiến [24]

Năm 2016, tác giả Nguyễn Thanh Hương và cộng sự nghiên cứu đánh giá ảnh

hưởng của dịch chiết nước tỏa dương (B laxiflora) lên hành vi tình dục của chuột cống

đực thực nghiệm với liều ngọc cẩu 0,28 g/kg; 1,4 g/kg; 2,8 g/kg trọng lượng cơ thể chuột Kết quả cho thấy đã có một sự thay đổi đáng kể trong các hành vi tình dục của chuột cống đực thực nghiện, như tăng thời gian và số lần xâm nhập, tăng tỉ lệ xuất tinh

và rút ngắn thời gian nhảy lại Các tác dụng quan sát được giống như hiệu ứng của testosteron [25]

Bảng 1.2 Kết quả thử hoạt tính của các dịch chiết loài B.laxiflora [26]

Chống oxi hóa Ức chế tyrosinase Kháng ung thư

Dịch

chiết

IC50(µg/ml) Dịch chiết IC50

(µg/ml) Dịch chiết IC50

(µg/ml)

n-Hexane 75,89 n-Hexane 31,81 n-Hexane 3,45

Acid

ascorbic 18,53 Acid kojic 2,6 Ellipticine 0,31

Năm 2016, tác giả Trần Thị Hằng cùng cộng sự đã thử nghiệm hoạt tính của các

cao chiết cây ngọc cẩu B laxiflora và nhận thấy các cao chiết B laxiflora có hoạt tính

chống oxy hóa cao tương đương với acid ascorbic và quercetin, cao ethyl acetate có hoạt tính mạnh nhất Cao ethyl acetate có hoạt tính ức chế mạnh phản ứng tyrosinase trong tổng hợp melanin, hoạt tính mức độ trung bình đối với vi khuẩn Gram (+), Gram (-) và dòng tế bào ung thư phổi Lu-1 Các kết quả cho thấy ứng dụng mới của

chiết xuất từ B laxiflora trong chăm sóc sức khoẻ và chăm sóc da Với đặc tính độc tính cấp trên chuột, B laxiflora trích xuất sẽ là tiềm năng lớn cho sản xuất các thực phẩm bổ sung (Bảng 1.2)[26]

b Tình hình nghiên cứu trên thế giới

* Những kết quả nghiên cứu thành phần hóa học

Loài B laxiflora có thành phần hóa học rất đa dạng, bao gồm các hợp chất

lignan, phenylpropanoid, tanin, flavonoid, terpenoid, các acid amin

Ngọc cẩu đã được nghiên cứu khá và được nghiên cứu nhiều ở châu Á đặc biệt

là Trung Quốc nhiều trên thế giới đến nay có khoảng trên năm mươi chất được tìm thấy ở loài này

- Các hợp chất tanin

Các dẫn xuất acid cinnamic là thành phần đặc trưng của loài B.laxiflora Chúng

thường có một nhóm caffeoyl, feruloyl, coumaroyl hoặc cinnamoyl liên kết ở vị trí C-1

trong nhóm glucosyl bằng liên kết acyl O-glycosidic trong khi vị trí C-3 và C-4 trong

nhóm glucosyl thường gắn với galloyl, cùng với nhóm HHDP (hexahydroxydiphenoyl) thường liên kết với các vị trí C-4 và C-6 và C-2 thường có một nhóm hydroxyl (OH) không thế Ngoài các kiểu liên kết nêu trên, các hợp chất 1,

2-di-; 1, 3-di- và 1, 2, 6-tri- được coi là chất dẫn xuất của acid cinnamic Các hợp chất

22-34, thuộc loại này [27-31]

Các hợp chất có cấu tạo (C 6 - C 3 ) n bao gồm các hợp chất phenylpropanoid đơn

giản, lignan và coumarin Các chất 16, 20 - 27 [27, 31], 17-19 [31], 28, 29 [29], thuộc

dẫn xuất acid phenylacrylic

Các hợp chất 22 với bộ khung bisepoxy là một glycoside lignan [27, 31]

Các hợp chất 23, 24, 32 là glucoside monoepoxylignan [19, 27, 31]

Các hợp chất 20, 21 là cyclolignan với bộ khung được hình thành bởi liên kết

trực tiếp giữa hai nguyên tử carbon của hai đơn vị C6-C3 thuộc khung lignan và hai vị trí liên kết [27, 31]

Cinnamic acid (33) Methylconiferin (34)

- Một số chất khác

Vanillin (38) Monoglyceryl stearate (39) Gallic acid (40)

* Những kết quả nghiên cứu hoạt tính sinh học

Cao chiết và các hợp chất cô lập từ loài B laxiflora có hoạt tính chống oxi hóa,

giảm acid uric, chống viêm… [27, 28]

Nhiều nghiên cứu đã chứng minh rằng rất nhiều hợp chất tách ra từ loài này có hoạt tính chống oxy hóa mạnh trong đó các hợp chất tannin có khả năng thủy phân có hoạt tính cao hơn so với các hợp chất khác Đặc biệt, các dẫn xuất phenol có nhiều nhóm hydroxyl (OH) lân cận (galloyl, pyrogallol, hoặc nhóm catechol) có hoạt tính diệt gốc tự do DPPH cao hơn [30-32]

Năm 2008, Kai-Chung Cheng cùng cộng sự đã công bố kết quả nghiên cứu về khả năng chống oxi hóa của các cao chiết B laxiflora (cao tổng, cao EtOAc, cao n-

BuOH, cao nước) thông qua khả năng tiêu diệt gốc tự do DPPH Kết quả cho thấy cao

chiết EtOAc và n-BuOH của loài B laxiflora diệt gốc tự do DPPH mạnh nhất với giá trị

IC50 lần lượt là 5,6 và 5,7 (μg/ml) (Bảng 1.6); diệt gốc superoxide 4,3 và 2,5 (μg/ml) cao

hơn chất so sánh là (+)-catechin 11,7 (μg/ml); khả năng ngăn chặn sự tạo phức của các

ion sắt của các dịch chiết từ loài B laxiflora là yếu so với chất so sánh [32]

Bảng 1.6 Kết quả thử hoạt tính chống oxi hóa của các dịch chiết loài B.laxiflora bằng các

phương pháp khử gốc tự do DPPH, superoxide, ngăn chặn sự tạo phức của ion sắt [32]

Năm 2009, Gai-Mei She cùng cộng sự đã nghiên cứu thành phần hóa học và

hoạt tính chống oxy hóa của các hợp chất phân lập được từ loài B laxiflora Kết quả

đã phân lập được 19 hợp chất từ loài B laxiflora và thử hoạt tính chống oxi hóa thông

qua khả năng diệt gốc tự do DPPH Tất cả các chất đã được thử nghiệm đều có hoạt tính diệt gốc tự do DPPH, trong đó nhóm các hợp chất tanin thủy phân có hoạt tính cao hơn hẳn các hợp chất khác Trong cùng một nhóm hợp chất acid phenolic hợp chất

càng nhiều nhóm hydroxyl (OH) thì hoạt tính càng mạnh (Bảng 1.7) [27]

Bảng 1.7.Kết quả thử hoạt tính chống oxi hóa bằng phương pháp khử gốc tự do DPPH

của 19 chất tách ra từ loài B.laxiflora [27].

Năm 2010, Shang-Tse Ho cùng cộng sự đã công bố kết quả nghiên cứu xác

định và định lượng các chất chống oxy hóa từ loài B laxiflora Kết quả cho thấy khả

năng chống oxi hóa của cây đực mạnh hơn cây cái Các chất 5, 11, 26, 30, 31 đều có hoạt tính chống oxy hóa mạnh trong đó chất 5, 11 có hoạt tính chống oxy hóa rất mạnh

với khả năng diệt gốc tự do DPPH có giá trị IC50 lần lượt là 2,7 và 3,2 (μg/ml) và khả

năng diệt gốc superoxyd lần lượt là 2,8 và 9,4 (μg/ml) mạnh hơn chất so sánh là

(+)-catechin (Bảng 1.8) [29]

Bảng 1.8 Kết quả thử hoạt tính chống oxi hóa của loài B laxiflora [29]

Kết quả thử hoạt tính chống oxi hóa của các dịch chiết

từ cây đực và cây cái loài B laxiflora [29]

Năm 2011, Wen Fei Chiou cùng cộng sự đã công bố kết quả nghiên cứu về

khả năng chống viêm của các chất tách ra từ loài B laxiflora Chất 19, 20, 27, có

khả năng kháng viêm, thông qua khả năng ức chế quá trình sản xuất NO gây viêm,

trong đó chất 20, 27 có khả năng ức chế rất mạnh với giá trị IC50 lần lượt là 0,81 và 7,29 (μg/ml) có khả năng kháng viêm rất mạnh, mạnh hơn chất so sánh AMG

(Bảng 1.9) [30]

Năm 2012, Shang-Tse Ho cùng cộng sự đã công bố kết quả thử nghiệm về khả

năng giảm acid uric của các cao chiết loài B laxiflora Kết quả cho thấy cao chiết

EtOAc làm giảm mạnh acid uric trên chuột [28]

Bảng 1.9 Kết quả thử hoạt tính kháng viêm của một số chất được tách ra từ loài B laxiflora [30]

- Loài ngọc cẩu được chứng minh có tác dụng cẩu bổ thận tráng dương

- Các hợp chất tanin là thành phần chính của loài ngọc cẩu có hoạt tính chống

oxi hóa mạnh với khả năng diệt gốc tự do DPPH như hợp chất 5 và 11 có giá

trị IC50 lần lượt là 2,7 và 3,2 (μg/ml) và khả năng tiêu diệt gốc superoxyd lần lượt là 2,8 và 9,4 (μg/ml) mạnh hơn cả chất so sánh (+)-catechin, các cao

chiết và các hợp chất tách ra từ loài này chống ung thư cao n-hexane có hoạt

tính mạnh với giá trị IC50 = 3,45 (μg/ml)

- Thành phần hóa học chủ yếu là các hợp chất tanin, terpenoid, flavonoid…

- Việt Nam có ít công trình công bố về thành phần hóa học của loài B laxiflora

1.2 Thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của các kết q ả nghiên cứ trong

và ngoài nước chi Ficus

1.2.1 Chi Ficus

Chi Sung (Ficus L.) là một chi lớn trong họ Dâu tằm (Moraceae), gồm các cây gỗ

lớn, gỗ nhỏ, bụi và cả dây leo, phân bố rộng rãi khắp các vùng nhiệt đới Nam và Bắc bán cầu Người ta ước tính có khoảng hơn 950 loài thuộc chi này phân bố ở các nơi trên

thế giới Các loài thuộc chi Ficus có khả năng thích nghi cao với nhiều điều kiện khí hậu

và thổ nhưỡng khác nhau, chúng có thể mọc trên các kẽ đá, khe nứt của các tòa nhà,

mọc trên các cây vật chủ, rễ mọc dần cho tới khi chạm đất và bao quanh cây vật chủ cuối cùng làm chết cây vật chủ Các nước vùng Đông Nam Á và Nam Á là nơi tập trung

nhiều loài nhất [33] Theo tác giả Nguyễn Tiến Bân và cộng sự thì ở Việt Nam chi Ficus

có khoảng từ 100 đến 200 loài [34, 35]

Theo Y học cổ truyền Hy Lạp và Trung Đông các loài thuộc chi Sung được sử dụng để chống sưng tấy bằng cách đắp lá giã nhỏ lên các khối viêm [36] Ở một số

nước Đông Nam Á người ta coi một số loài thuộc chi Ficus như một biểu tượng văn

hóa tâm linh mang đến cho con người sự sung túc, hạnh phúc Ở Thái Lan vỏ cây loài

F hirta, được sử dụng chữa bệnh tiêu chảy Rễ được sử dụng để tạo ra aspirin và là thuốc giải các loại chất độc [37] Theo Y học cổ truyền Trung Quốc, một số loài Ficus

được sử dụng để điều trị táo bón, hạ đường huyết sau sinh, viêm gan và khối u [38] Ở

Việt Nam, các loài thuộc chi Ficus được người dân địa phương ở nhiều nơi sử dụng để

điều trị vết thương, chỗ bầm giập, mụn nhọt, viêm thấp khớp, chữa ho và tiêu chảy cho kết quả tốt [39]

1.2.1.1 Các nghiên cứu quốc tế

a Quả

Quả của các loài thuộc chi Sung (Ficus) thuộc loại quả giả, do đế hoa tự tạo thành, mặt quả phủ lông mịn, cuống ngắn Quả của các loài thuộc chi Sung (Ficus)

thường có các nhóm hợp chất steroid, flavonoid, các triterpene, saponin, megastigman,

amino acid, các hợp chất phenol và một số hợp chất dễ bay hơi [34, 35, 39] Theo Y

học cổ truyền Trung Quốc, quả của loài F microcarpa dùng chữa ho, viêm họng, viêm

thành phần chủ yếu của lá loài F carica [41]

Các anthocyanin (flavonoid) được phát hiện từ loài F carica có khả năng kháng khuẩn, do đó quả của loài này rất thích hợp để lên men thành rượu Loài F carica đã được dùng làm chất nền để cố định nấm men trong quá trình lên men phân

hủy glucose [42] Theo một bằng sáng chế của Trung Quốc (Fang, 2007), các hỗn hợp

lên men có tính chất giống như của nước ép trái nho và nước quả F carica tạo ra rượu

vang có tác dụng tốt thúc đẩy hiệu quả quá trình trao đổi chất, chất dinh dưỡng phong

phú, màu sắc tươi và hương vị đặc trưng Dịch lên men của quả loài này có có tác

dụng kích thích tiêu hoá, hỗ trợ điều trị bệnh trĩ, giảm táo bón, làm chậm quá trình lão

hóa, phòng ngừa và điều trị ung thư, tăng cường miễn dịch [43]

. Cyanidin 3-O-rhamnoglucoside (41) Cyanidin (42)

Cyanidin 3-O-glucoside (43)

Năm 2007, Singha và cộng sự đã tách ra từ hạt quả của cây đa F benghalensis

các lectin, F benghalensis Agglutinin (FBA) Lectin là một loại protein không có

nguồn gốc miễn dịch có khả năng liên kết thuận nghịch, phi hóa trị với carbohydrate

mà không thay đổi cấu trúc của carbohydrate được liên kết Hầu hết các lectin là

oligomer bao gồm hai đến bốn chuỗi polypeptide với mỗi chuỗi có một vị trí nhận diện

carbohydrate Một số có liên kết hóa trị với các gốc đường (glycoprotein lectin),

nhưng một số không liên kết với gốc đường nào, ví dụ concanavalin A [44] Lectin hỗ

trợ cho hệ thống miễn dịch của con người phục hồi hệ thống tim mạch sau những cơn

nhồi máu cơ tim, chống vi trùng, chống ung thư, lectin có thể được sử dụng trong hỗ

trợ điều trị bệnh bạch cầu và chống ung thư của loài F benghalensis [45]

Serotonin (44) Fumonisin B1 (FB1) (45)

Năm 1968, Bliebtrau và cộng sự đã phân lập lần đầu tiên hợp chất serotonin

(44) từ loài F religiosa [46] Hợp chất serotonin có chức năng truyền dẫn tín hiệu

thần kinh điều chỉnh một loạt cơn co giật trong mô hình thử nghiệm chứng động kinh ở một số loài động vật [47] Năm 2008, Mpiana và cộng sự cũng đã phân lập

được hợp chất serotonin từ quả của loài F capensis có tác dụng chống lại sự suy

giảm chức năng trong bệnh thiếu máu hồng cầu lưỡi liềm [48] Năm 2009, Singh và

công sự cũng đã phân lập được chất serotonin từ quả của loài F religiosa có tác

dụng điều hòa huyết áp, chống co giật [49] Chất serotonin cũng đóng một vai trò quan trọng trong việc ức chế vết loét thông qua điều tiết hệ thống histamine [50]

Năm 2009, Karbancioglu-Güler và cộng sự đã nghiên cứu thành phần hóa học của quả sung khô và phát hiện hợp chất Fumonisin B1 (FB1) Chất FB1 là chất độc thuộc loại các chất độc sinh ra do nấm mốc (mycotoxin) được tìm thấy trong một số loại quả khô Chất FB1 là chất gây ung thư, có độc đối với lợn và gia cầm, gây ra bệnh eucoencephalomalacia (ELEM) một loại bệnh gây tử vong ở ngựa [51]

Năm 2017, Yui Akihara và cộng sự đã phân lập được 5 hợp chất từ quả loài F nipponica trong đó chất 46, 49 là chất mới [52]

Bảng 1.10 Các hợp chất (46-51) phân lập từ quả của một số loài thuộc chi Ficus

Năm 2017, Chunpeng Wan và cộng sự đã phân lập được 11 hợp chất từ quả loài

Năm 2017, Jung Wha Kim và cộng sự đã phân lập được 4 hợp chất flavonoid từ

quả của loài F indica trong đó chất (+)-taxifolin (63) có hoạt tính bảo vệ tế bào gan

chống lại những tổn thương của tế bào gan do stress và do rượu gây ra [54]

Năm 2005, Damu và cộng sự đã phân lập từ lá loài F septica các hợp chất (66-70)

thuộc nhóm alkaloid phenanthroindolizidine [55, 56] Các alkaloid thuộc nhóm tylophorine có hoạt tính ức chế sự tăng trưởng khối u, hoạt tính các alkaloid thuộc nhóm này tương đương với các chất hóa học kháng ung thư hiện đại [57-60]

R1 R2 R3 R4 R1 R2

Năm 2009, tác giả Damu cùng cộng sự đã phân lập được các chất (71-75),

thuộc nhóm phenanthroindolizidine alkaloid tylophorine từ rễ loài F septica, có độc

tính đối với tế bào ung thư nhưng không gây độc đối với tế bào thường [55, 61]

Bảng 1.13 Các hợp chất (66-74) phân lập từ lá của loài F septica

10S,13aS-isotylocrebrine N-oxide (75)

* Các hợp chất cumarin

Năm 1996, Meng và cộng sự đã phân lập được coumarin (76) và warfarin

(77) từ dịch chiết nước của lá cây F carica và phát hiện thấy hoạt tính chống u não

hiệu quả [62]

Năm 2005, Chang và cộng sự đã tách được 5 hợp chất (78-82) thuộc

nhóm furocoumarin glucoside được từ chiết methanol của lá loài F ruficaulis

* Các hợp chất flavonoid

Trong lá các loài thuộc chi Ficus có chứa ít nhất 4 loại flavonoid glycoside khác nhau: genistin; rutin; isoquercitrin và kaempferitrin Các flavonoid trong lá loài Ficus

đều có hoạt tính chống oxy hóa

Năm 2008, Lansky và cộng sự đã phân lập được hợp chất genistin (83), rutin (84), isoquercitrin (85) và kaempferitrin (86) từ loài F cordata [60]

acetate, β-amyrin, β-glutinol (87), taraxerol (88), oleanolic acid (89), lupeol (90), amyrin (91), acid ursolic và acid betulinic (92) cũng đã được phân lập từ lá loài F

α-thunbergii [65, 66]

β-glutinol (87) Taraxerol (88) Oleanolic acid (89)

Lupeol (90) α-amyrin (91) Acid betulinic (92)

* Hoạt tính sinh học

Năm 2002, Bhaskara và cộng sự công bố các chiết xuất từ loài F racemosa có

tác dụng hỗ trợ điều trị bệnh đái tháo đường [67], các chất mới được tách ra từ vỏ loài

F benghalensis có hoạt tính bảo vệ gan khỏi tác nhân gây bệnh carbon tetrachloride trong cơ thể (F benghalensis) [68] Các chất được tách ra từ loài F racemosa có hoạt tính chống động kinh [69], hạ sốt [70], kháng khuẩn [71], Các chất tách ra từ loài F citrifolia hỗ trợ điều trị ung thư [72], thuốc chống sốt rét [73] Musabayane và công sự nghiên cứu loài F thonningii cho thấy rằng các chất được tách ra từ loài này có khả

năng làm giảm lượng đường trong máu, bổ thận và có tác dụng bảo vệ tim và thận [74], kháng virut [75] Chindo và cộng sự (2009) đã công bố một dẫn chất có hoạt tính

mạnh đối với thuốc chống co giật được tách ra từ loài F platyphylla [76]

c Thành phần hóa học của thân một số loài thuộc chi Ficus

Các nghiên cứu thân các loài thuộc chi Ficus chứa các hợp chất polyphenol, bao

gồm các hợp chất flavonoid và glycosid của chúng, triterpenoid, coumarin, phytosterol, các acid phenolic và một số thành phần hóa học khác

Năm 2008, tác giả Lansky đã tách được các hợp chất isoflavonon (93 - 99) từ

một số loài thuộc chi Ficus [60]

Bảng 1.15 Một số hợp chất flavonoid phân lập từ thân của một số loài thuộc chi Ficus

Năm 2008, Kuether và cộng sự đã thu được hợp chất alpinum isoflavone

(100) từ loài F chlamydocarpa và F cordata (Moraceae) [77] Năm 2009, Kuether

và cộng sự cũng đã tách được hợp chất luteolin (101) từ loài Ficus ovata [78] và lá

của nó còn chứa 7-methoxycoumarin (102) [79] Luteolin, 7-methoxycoumarin,

indole-3-carboxaldehyde, lupeol acetate, vitamin K1, lanosterol, stigmasterol 108) [80]

Alpinum isoflavone (100) Luteolin (101)

7-methoxycoumarin (102) Indole-3-carboxaldehyde (103)

Lupeol acetate (104) Vitamin K1 (105)

Lanosterol (106) Stigmasterol (107)

d Nhựa

Theo Y học cổ truyền của nhiều nước trên thế giới, nhựa của các loài thuộc

chi Ficus sử dụng điều trị các bệnh ngoài da như: chữa mụn cơm, nhọt và viêm da,

bằng cách đắp lên những chỗ khớp đau của những người bị bệnh thấp khớp, bệnh gout và dùng làm thuốc nhỏ mắt, chữa bọ cạp đốt, bôi lên vết thương do chó cắn, trị sỏi thận, đắp lên những chỗ đau do ngã, bầm tím, chữa sâu răng, chữa bệnh phong,

tàn nhang và còn được sử dụng để tẩm đầu mũi tên của các thợ săn [60]

Theo những nghiên cứu hiện đại, trong nhựa của các loài thuộc chi Ficus có

chứa các acid amin, vitamin, carbohydrate, lipid, glycoside tim, alkaloid [81] Các

enzyme bao gồm diastase, esterase và lipase [82] Các hợp chất khác đã được phân lập

từ nhựa các loài Ficus có khả năng ức chế sự phát triển của các tế bào ung thư Trong

số này có một nhóm chất 6-O-acyl-β-D-glucosyl-β-sitosterol (108-111) được phát hiện

từ loài F carica bởi Mechoulam và các cộng sự Trong nhóm chất này, nhóm acyl (R)

có thể bao gồm palmitoyl, linoleoyl, stearoyl hoặc các phân tử oleoyl trong đó nhóm palmitoyl và linoleoyl phổ biến nhất [83, 84]

Feleke và Brehane năm 2005, đã phân lập được hai hợp chất triterpenoid thuộc

khung oleanane và ursane từ nhựa của loài F sur [85] Oleanane terpenoid và saponin

của chúng là chất gây độc tế bào đối với tế bào ung thư [86] Coumarin, α-amyrin và

bergapten (112), đã được tìm thấy trong nhựa của loài F sycomorus, F benjamina, F elastica, còn imperatorin (113) chỉ tìm thấy trong các loài F sycomorus và F benjamina

và xanthotoxin (114) chỉ có ở loài F sycomorus [87, 88] Bergenin (115) là một hợp

chất chống ung thư hiệu quả được tách ra từ nhựa loài Ficus [44] Orlacchio và cộng sự

đã phân lập chất N-acethyl-β-hexosaminidase (116) từ loài F glabrata [89]