khóa luận xác nhận độ chụm và độ đúng của phương pháp xét nghiệm định lượng ft4 tsh t3 huyết tương trên máy miễn dịch dxi 800 tại khoa sinh hóa bệnh viện e

Xác nhận ph°¡ng pháp khẳng đßnh các thông sá hiệu năng đã biết của ph°¡ng pháp công bá, đ°ợc thực hiện bái phòng xét nghiệm nh° mát phần của b°ớc đầu tiên trong kiểm tra chất l°ợng hệ th

Đ¾I HàC QUàC GIA HÀ NàI

TR¯àNG Đ¾I HàC Y D¯þC

Vi THÞ NHUNG

XÁC NH ÂN ĐÞ CHĀM VÀ ĐÞ ĐÚNG CĂA PH¯¡NG PHÁP XÉT NGHI âM ĐÞNH L¯þNG FT4, TSH, T3 HUY¾T T¯¡NG TRÊN MÁY

MI àN DÞCH DXI 800 T¾I KHOA SINH HÓA BâNH VIâN E

KHOÁ LU ÂN TÞT NGHIâP Đ¾I HàC NGÀNH K Ỹ THUÂT XÉT NGHIâM Y HàC

HÀ N ÞI – 2023

Đ¾I HàC QUàC GIA HÀ NàI

TR¯àNG Đ¾I HàC Y D¯þC

Vi THÞ NHUNG

XÁC NH ÂN ĐÞ CHĀM VÀ ĐÞ ĐÚNG CĂA PH¯¡NG PHÁP XÉT NGHI âM ĐÞNH L¯þNG FT4, TSH, T3 HUY¾T T¯¡NG TRÊN MÁY

MI àN DÞCH DXI 800 T¾I KHOA SINH HÓA BâNH VIâN E

KHOÁ LU ÂN TÞT NGHIâP Đ¾I HàC NGÀNH K Ỹ THUÂT XÉT NGHIâM Y HàC

Khoá: QH.2019.Y

Ng°ái h°ßng dÁn: ThS.BSNT Hán Minh Thăy

ThS.BSCKII Nguy án Thß Bình Minh

HÀ N ÞI – 2023

L àI CÀM ¡N

Lßi đầu tiên em xin gửi lßi cảm ¡n sâu sắc tới Ban Giám hiệu, Phòng ban bá môn, Tr°ßng Đ¿i hác Y D°ợc - Đ¿i hác Quác gia Hà Nái đã t¿o c¡ hái cho em đ°ợc hác tập, rèn luyện t¿i tr°ßng trong suát thßi gian hác tập

Em cũng xin gửi lßi cảm ¡n chân thành đến Ban Giám đác Bệnh viện E cùng tất cả các anh chß trong Khoa Sinh hóa, Bệnh viện E đã luôn nhiệt tình h°ớng dẫn, giúp đỡ để em có thể thực hiện và hoàn thành khóa luận

Em xin gửi lßi cảm ¡n sâu sắc nhất tới ThS.BSNT Hán Minh Thủy -

Giảng viên tr°ßng Đ¿i hác Y D°ợc - Đ¿i hác Quác gia Hà Nái và ThS.BSCKII Nguyễn Thß Bình Minh, Tr°áng Khoa Sinh Hóa - Bệnh viện E đã luôn tận tình

h°ớng dẫn, đáng viên và t¿o điều kiện giúp đỡ em trong suát thßi gian thực

ý kiến đóng góp quý báu của các thầy cô để khóa luận đ°ợc hoàn thiện h¡n

Em xin chân thành cảm ¡n !

Hà N ội, ngày 20 tháng 05 năm 2023

Sinh viên

Vj Thß Nhung

DANH M ĀC VI¾T TÄT

AMPPD 4 - methoxy - 4 - (3 - phosphatephenyl) - spiro - (1,2

dioxetane - 3,2 - adamantine) - chất hóa phát quang CLIA Chemiluminescence Immuno Assay - Miễn dßch hóa phát

quang CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute - Viện Tiêu

chuẩn Lâm sàng và Xét nghiệm y hác

CV Coefficient of Variation - Hệ sá biến thiên

DCLIA Direct Chemiluminescence Immuno Assay - Hóa phát

quang trực tiếp ELISA Enzym Linked Immuno Sorbent Assay - Miễn dßch gắn

enzym FIA Fluoro Immuno Assay - Miễn dßch huỳnh quang

FT3 Free Triiodothyronin

QC Quality Control - Kiểm tra chất l°ợng

RIA Radio Immuno Assay - Miễn dßch phóng x¿

RLU Relative Light Unit - Đ¡n vß ánh sáng t°¡ng đái

SD Standard Deviation - Đá lệch chuẩn

TSH Thyroid Stimulating Hormon - Hormon kích khích tuyến

giáp T3 Triiodothyronin - Hormon tuyến giáp

T4 Thyroxin - Hormon tuyến giáp

TV True value - Giá trß đúng

UVL Upper Verification Limit - Giới h¿n xác nhận trên

M ĀC LĀC

L àI CÀM ¡N

DANH M ĀC VI¾T TÄT

DANH M ĀC CÁC BÀNG

DANH M ĀC CÁC BIÞU Đà

DANH M ĀC CÁC HÌNH

ĐẶT VÂN ĐÀ 1

CH¯¡NG 1 TâNG QUAN 3

1.1 Th ¿m đßnh và xác nhÃn ph°¢ng pháp 3

1.1.1 Thẩm đßnh ph°¡ng pháp 3

1.1.2 Xác nhận ph°¡ng pháp (Xác nhận giá trß sử dụng) 4

1.1.3 So sánh giữa xác nhận và thẩm đßnh 5

1.2 H°ßng dÁn EP15-A3 căa CLSI 6

1.3 Các thu Ãt ngữ và khái niãm liên quan 8

1.3.1 Đá chụm (Precision) 8

1.3.2 Đá đúng (Trueness) 9

1.3.3 Các lo¿i sai sá 11

1.3.4 Khoảng tuyến tính (Linearity Range) 12

1.3.5 Khoảng tham chiếu 12

1.4 Các ph°¢ng pháp đßnh l°ÿng T3, FT4, TSH 13

1.5 H ã thßng máy xét nghiãm mián dßch tự đßng Unicel DxI 800 14

1.5.1 Giới thiệu về hệ tháng máy Unicel DxI 800 14

1.5.2 Ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng T3 trên máy Unicel DxI 800 .17

1.5.3.Ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng FT4 trên máy Unicel DxI 800 18

1.5.4 Ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng TSH trên máy Unicel DxI 800 18

CH¯¡NG 2 ĐÞI T¯þNG VÀ PH¯¡NG PHÁP NGHIÊN CĄU 20

2.1 Đßi t°ÿng nghiên cąu 20

2.2 V Ãt liãu nghiên cąu 20

2.3 Trang thi ¿t bß, dāng cā, hóa chÃt, thußc thử 20

2.3.1 Trang thiết bß, dụng cụ 20

2.3.2 Hóa chất, thuác thử 21

2.4 Đßa đißm và thái gian nghiên cąu 21

2.5 Đ¿o đąc trong nghiên cąu 21

2.6 B ß công cā nghiên cąu 21

2.7 S¢ đá nghiên cąu 22

2.8 Ph°¢ng pháp nghiên cąu 22

2.8.1 Thực nghiệm đánh giá đá chụm 22

2.8.2 Thực nghiệm đánh giá đá đúng 25

CH¯¡NG 3 K¾T QUÀ 27

3.1 Xác nh Ãn đß chām (Precision) căa ph°¢ng pháp xét nghiãm đßnh l°ÿng FT4, TSH, T3 trên máy mián dßch DxI 800 27

3.1.1 Đánh giá đá chụm của ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng FT4 27 3.1.2 Đánh giá đá chụm của ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng TSH 29 3.1.3 Đánh giá đá chụm của ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng T3 31

3.2 Xác nh Ãn đß đúng (Trueness) căa ph°¢ng pháp xét nghiãm đßnh l°ÿng FT4, TSH, T3 trên máy mián dßch DxI 800 33

3.2.1 Đánh giá đá đúng của ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng FT4 33

3.2.2 Đánh giá đá đúng của ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng TSH 34 3.2.3 Đánh giá đá đúng của ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng T3 35

CH¯¡NG 4 BÀN LUÂN 36

K ¾T LUÂN 40

KI ¾N NGHÞ 41 TÀI LI âU THAM KHÀO

PH Ā LĀC

DANH M ĀC CÁC BÀNG

Bảng 1.1 So sánh giữa thẩm đßnh và xác nhận ph°¡ng pháp 6 Bảng 1.2 Phân lo¿i đá chụm ngắn h¿n và đá chụm dài h¿n 8

Bảng 3.1 Bảng sá liệu thực nghiệm đánh giá đá chụm và đá đúng xét nghiệm đßnh l°ợng FT4 á mức nồng đá thấp 27

Bảng 3.2 Bảng sá liệu thực nghiệm đánh giá đá chụm và đá đúng xét nghiệm đßnh l°ợng FT4 á mức nồng đá cao 28 Bảng 3.3 Bảng kết quả thực nghiệm đánh giá đá chụm của ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng FT4 28

Bảng 3.4 Bảng sá liệu thực nghiệm đánh giá đá chụm và đá đúng xét nghiệm đßnh l°ợng TSH á mức nồng đá thấp 29

Bảng 3.5 Bảng sá liệu thực nghiệm đánh giá đá chụm và đá đúng xét nghiệm đßnh l°ợng TSH á mức nồng đá cao 30

Bảng 3.6 Bảng kết quả thực nghiệm đánh giá đá chụm của ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng TSH 30

Bảng 3.7 Bảng sá liệu thực nghiệm đánh giá đá chụm và đá đúng xét nghiệm đßnh l°ợng T3 á mức nồng đá thấp 31 Bảng 3.8 Bảng sá liệu thực nghiệm đánh giá đá chụm và đá đúng xét nghiệm đßnh l°ợng T3 á mức nồng đá cao 32

Bảng 3.9 Bảng kết quả thực nghiệm đánh giá đá chụm của ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng T3 32

Bảng 3.10 Bảng kết quả thực nghiệm đánh giá đá đúng của ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng FT4 33

Bảng 3.11 Bảng kết quả thực nghiệm đánh giá đá đúng của ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng TSH 34

Bảng 3.12 Bảng kết quả thực nghiệm đánh giá đá đúng của ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng T3 35

Biểu đồ 3.5 Biểu đồ đánh giá đá chụm và đá đúng ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng T3 á mức nồng đá thấp 31

Biểu đồ 3.6 Biểu đồ đánh giá đá chụm và đá đúng ph°¡ng pháp xét nghiệm đßnh l°ợng T3 á mức nồng đá cao 32

DANH M ĀC CÁC HÌNH

Hình 1.1 Mái liên hệ giữa đá chụm, đá đúng và đá chính xác 10 Hình 1.2 H¿t thuận từ phủ kháng thể 15 Hình 1.3 Quá trình phản ứng trong xét nghiệm miễn dßch c¿nh tranh 15 Hình 1.4 Phức hợp h¿t thuận từ phủ KT - KN trong mẫu phân tích và Phức hợp

h¿t thuận từ phủ KT - KN gắn chất phát quang AMPPD trong xét nghiệm miễn

dßch c¿nh tranh 16 Hình 1.5 Quá trình phản ứng trong xét nghiệm miễn dßch sandwich 16 Hình 1.6 Phức hợp H¿t thuận từ phủ KT - KN trong mẫu - KT gắn chất phát quang trong xét nghiệm miễn dßch sandwich 16 Hình 1.7 Máy xét nghiệm miễn dßch tự đáng Unicel DxI 800 17

ĐẶT VÂN ĐÀ

Ngày nay, xét nghiệm cận lâm sàng đóng vai trò và có ý nghĩa vô cùng quan tráng Mát kết quả xét nghiệm đáng tin cậy sẽ giúp chẩn đoán chính xác

bệnh, theo dõi diễn biến cũng nh° đánh giá hiệu quả điều trß và tiên l°ợng bệnh

Vì vậy, kết quả xét nghiệm đòi hßi phải có sự chính xác cao, bái mßi sai sót

của bất kì xét nghiệm nào cũng có thể dẫn đến hậu quả nghiêm tráng Bên c¿nh

đó, để đáp ứng yêu cầu ngày càng cao, các hệ tháng máy móc tiên tiến, các ph°¡ng pháp xét nghiệm mới, hiện đ¿i đ°ợc ra đßi, đồng thßi các phòng xét nghiệm cũng luôn không ngừng đổi mới và nâng cao chất l°ợng

Tuy nhiên, câu hßi cần đặt ra đó là những thiết bß, ph°¡ng pháp ấy liệu

có đ¿t đ°ợc chất l°ợng nh° mong đợi hay có phù hợp với các điều kiện t¿i mßi phòng xét nghiệm không? Trả lßi cho câu hßi này, nhà sản xuất sẽ tiến hành thẩm đßnh để đánh giá đặc tính kỹ thuật nhất đßnh khi xây dựng và phát triển

bất kì ph°¡ng pháp mới nào Theo đó, từng phòng xét nghiệm là n¡i tiến hành xác nhận ph°¡ng pháp tr°ớc khi đ°a vào sử dụng đái với thiết bß mới, kỹ thuật

mới đó để xác minh xem các tiêu chuẩn kỹ thuật mà nhà sản xuất đã công bá

có đúng và phù hợp với điều kiện phòng xét nghiệm của mình hay không [1,2] Kết quả của xác nhận giá trß sử dụng dùng để đánh giá sai sá có thể xảy ra và đảm bảo việc trả kết quả đáng tin cậy cho bệnh nhân và bác sĩ lâm sàng

T¿i khoa Sinh hóa Bệnh viện E, hệ tháng máy miễn dßch DxI 800 đ°ợc đ°a vào sử dụng trong thßi gian gần đây Đây là hệ tháng phân tích miễn dßch

tái °u với thßi gian phân tích đ°ợc rút ngắn Tr°ớc khi đ°a vào sử dụng, hệ tháng này cần xác nhận giá trß sử dụng ph°¡ng pháp hay nói cách khác là kiểm tra để xác nhận các thông sá kỹ thuật là đủ tin cậy và phù hợp với điều kiện của phòng xét nghiệm Nghiên cứu sẽ tập trung vào hai thực nghiệm xác nhận đá

chụm và đá đúng của ph°¡ng pháp Đây là hai thực nghiệm c¡ bản, yêu cầu tái thiểu để đ°a ph°¡ng pháp mới vào sử dụng Mặt khác, bá xét nghiệm FT4, TSH, T3 là mát trong những bá xét nghiệm th°ßng đ°ợc sử dụng trong xét nghiệm cận lâm sàng Bá xét nghiệm này có ý nghĩa quan tráng trong việc chẩn đoán và theo dõi điều trß các bệnh lý về tuyến giáp - bệnh gây rái lo¿n nái tiết th°ßng gặp

Vì vậy, chúng tôi thực hiện đề tài <Xác nhận độ chụm và độ đúng của

phương pháp xét nghiệm định lượng FT4, TSH, T3 huyết tương trên máy

T3 theo hướng dẫn EP15-A3 của Viện tiêu chuẩn Lâm sàng và Cận lâm sàng

T3 theo hướng dẫn EP15-A3 của Viện tiêu chuẩn Lâm sàng và Cận lâm sàng

CH¯¡NG 1 TâNG QUAN 1.1 Th ¿m đßnh và xác nhÃn ph°¢ng pháp

Ngày nay, nh° chúng ta đã biết, kết quả xét nghiệm đóng vai trò vô vùng quan tráng trong việc chẩn đoán, điều trß và tiên l°ợng bệnh Tuy nhiên, bất kì

mát xét nghiệm nào cũng có thể bß ảnh h°áng bái rất nhiều yếu tá: thay đổi về

vß trí, yếu tá thiết bß và điều kiện môi tr°ßng, yếu tá con ng°ßi, sự thay đổi hoặc má ráng về đái t°ợng áp dụng, [1,3] Chính vì vậy, tr°ớc khi đ°a mát ph°¡ng pháp vào sử dụng, cần phải chứng minh hoặc đánh giá ph°¡ng pháp

đó có đ¿t đ°ợc những yêu cầu, tiêu chuẩn nh° nhà sản xuất mong đợi không

hoặc những đặc điểm đó của ph°¡ng pháp có phù hợp với c¡ sá quản lý nó hay không Và sự xuất hiện của thẩm đßnh/xác nhận ph°¡ng pháp sẽ giúp phòng xét nghiệm giải quyết vấn đề này Hiện nay, t¿i mßi phòng xét nghiệm, khi đ°a vào sử dụng bất kì ph°¡ng pháp, xét nghiệm, máy móc, thiết bß nào đều yêu

cầu phải tiến hành thẩm đßnh/xác nhận giá trß sử dụng và điều này đ°ợc coi nh°

là mát quy đßnh th°ßng quy Vì vậy, dù là thẩm đßnh hay xác nhận ph°¡ng pháp thì đều là công việc vô cùng quan tráng của mßi phòng xét nghiệm, là trách nhiệm nghề nghiệp, là những quy đßnh của ngành mà chúng ta cần tuân thủ [3]

1.1.1.1 Định nghĩa

Thẩm đßnh (Validation) là khẳng đßnh bằng kiểm tra và cung cấp các

bằng chứng khách quan cho thấy các yêu cầu cụ thể mà mát ph°¡ng pháp đßnh

sử dụng có thể đáp ứng đ°ợc (ISO/IEC 17025:2005) Kết quả của thẩm đßnh ph°¡ng pháp có thể đ°ợc sử dụng để đánh giá chất l°ợng, đá tin cậy của kết

quả phân tích [1]

Thẩm đßnh sẽ thiết lập các thông sá hiệu năng bằng việc xác đßnh và mô

tả đá lớn của các sai sá kỹ thuật và đ°ợc thực hiện bái ng°ßi phát triển ph°¡ng pháp (VD: Nhà sản xuất, nhà nghiên cứu, ).Việc thẩm đßnh đòi hßi các thực nghiệm lớn để có thể phát hiện và đánh giá sai sá

Đái với thẩm đßnh ph°¡ng pháp, th°ßng tiến hành các thực nghiệm c¡ bản sau: (1) Xây dựng khoảng tuyến tính, (2) ¯ớc tính đá tập trung hay đá

chụm, (3) ¯ớc tính đá lệch hay đá chính xác, (4) Xác đßnh yếu tá nhiễu, (5) Xác đßnh các giới h¿n đßnh l°ợng, giới h¿n phát hiện và giới h¿n trắng, (6) Xác

đßnh đá thu hồi, (7) Thiết lập khoảng tham chiếu [4]

Việc lựa chán các thực nghiệm thẩm đßnh cũng phụ thuác vào kỹ thuật

áp dụng, yêu cầu của ph°¡ng pháp, điều kiện và nguồn lực của c¡ sá tiến hành

thẩm đßnh Mßi tr°ßng hợp thông sá thẩm đßnh có thể sẽ khác [1]

1.1.1.3 Các trường hợp cần thẩm định

Thẩm đßnh th°ßng đ°ợc áp dụng khi xây dựng và phát triển ra mát ph°¡ng pháp hoàn toàn mới, phải tự đánh giá các đặc tính kĩ thuật của nó, hoặc ph°¡ng pháp tiêu chuẩn nh°ng ph¿m vi áp dụng nằm ngoài ph¿m vi của nhà

sản xuất đ°a ra Trong tr°ßng hợp ph°¡ng pháp đã đ°ợc thẩm đßnh nh°ng nếu

có sự thay đổi hay cải biến ph°¡ng pháp thì cũng cần phải tiến hành thẩm đßnh [5]

1.1.2.1 Định nghĩa

Xác nhận (Verification) là kiểm tra các bằng chứng khách quan cho thấy các yêu cầu cụ thể của mát ph°¡ng pháp đßnh sử dụng có thể đáp ứng đ°ợc [6] Xác nhận ph°¡ng pháp khẳng đßnh các thông sá hiệu năng đã biết của ph°¡ng pháp công bá, đ°ợc thực hiện bái phòng xét nghiệm nh° mát phần của b°ớc đầu tiên trong kiểm tra chất l°ợng hệ tháng Xác nhận ph°¡ng pháp đòi hßi các

thực nghiệm để khẳng đßnh tuyên bá của nhà sản xuất

Thông th°ßng, xác nhận ph°¡ng pháp gồm 4 thực nghiệm: (1) Xác đßnh khoảng tuyến tính, (2) Đánh giá đá chụm, (3) Đánh giá đá đúng, (4) Chuyển đổi/ Xác nhận khoảng tham chiếu Ngoài ra, còn có thực nghiệm xác đßnh giới

h¿n phát hiện cũng có thể thực hiện khi có thể, không bắt buác [5]

1.1.2.3 Các trường hợp cần xác nhận phương pháp

Xác nhận ph°¡ng pháp là khẳng đßnh l¿i các đặc tính kĩ thuật đã đ°ợc nhà sản xuất công bá trong quá trình thẩm đßnh Vì vậy, xác nhận ph°¡ng pháp

áp dụng đái với những tr°ßng hợp các ph°¡ng pháp có sẵn, giữ nguyên nh°

những gì nhà sản xuất đã công bá, không có bất cứ thay đổi gì Ngoài ra, mát

sá tr°ßng hợp các ph°¡ng pháp đã dùng nh°ng có sửa chữa hßng hóc các bá phận của thiết bß hoặc di chuyển thiết bß thì cũng tiến hành xác nhận ph°¡ng

pháp sau đó để đảm bảo chất l°ợng và đá tin cậy [5]

Xác nhận ph°¡ng pháp là mát phần không thể thiếu nếu muán có mát

kết quả xét nghiệm đáng tin cậy Việc xác nhận ph°¡ng pháp phân tích cần đ°ợc tiến hành tr°ớc khi đ°a thiết bß mới, kỹ thuật xét nghiệm mới vào sử dụng nhằm xác nhận các tiêu chuẩn kỹ thuật mà nhà sản xuất đã công bá là đúng

trong điều kiện của phòng xét nghiệm [1,2,7] Việc thực hiện xác nhận ph°¡ng

pháp không phải chỉ cần thực hiện mát lần khi phát triển ph°¡ng pháp ban đầu

mà cần thực hiện trong suát quá trình áp dụng, th°ßng là đánh giá đßnh kỳ hàng năm vì đa sá các điều kiện thực hiện của ph°¡ng pháp có sự thay đổi trong suát quá trình áp dụng nh°: thay đổi về c¡ sá vật chất, về trang thiết bß (thay đổi hệ

tháng máy hoặc các thành phần của hệ tháng/quá trình sử dụng khiến máy móc già hóa), về con ng°ßi (kỹ năng ng°ßi vận hành khác nhau), hóa chất thuác thử

(điều kiện vận chuyển, bảo quản), [3]

Mặc dù xác nhận giá trß sử dụng và thẩm đßnh là hai khái niệm đôi khi đ°ợc dùng nh° nhau, nh°ng thẩm đßnh (Validation) th°ßng đ°ợc áp dụng với các ph°¡ng pháp mới hoàn toàn hoặc đ°ợc cải tiến, trong khi đó xác nhận (Verification) thì áp dụng để kiểm tra khả năng thực hiện của ph°¡ng pháp đã đ°ợc công bá hoặc ph°¡ng pháp không có cải biến [4]

Khẳng đßnh các thông sá hiệu năng

đã biết bái ng°ßi phát triển ph°¡ng pháp công bá

Đ°ợc thực hiện bái ng°ßi phát triển

ph°¡ng pháp (Ví dụ: nhà sản xuất,

nhà nghiên cứu)

Đ°ợc thực hiện bái phòng xét nghiệm nh° mát phần của b°ớc đầu tiên trong hệ tháng kiểm tra chất l°ợng

Đòi hßi các thực nghiệm lớn để phát

hiện và đánh giá sai sá

Đòi hßi các thực nghiệm phù hợp để

khẳng đßnh tuyên bá của nhà sản xuất

Khi phòng xét nghiệm sử dụng ph°¡ng pháp do nhà sản xuất cung cấp

với hiệu năng đã đ°ợc xác đßnh thì chỉ cần thực hiện xác nhận giá trß sử dụng

của ph°¡ng pháp Theo đó, áp dụng vào thực tế tr°ßng hợp này, khi đ°a máy

miễn dßch DxI 800 vào sử dụng t¿i phòng xét nghiệm t¿i Khoa Sinh hóa Bệnh

viện E theo h°ớng dẫn EP15-A3 của CLSI, chỉ cần thực hiện xác nhận ph°¡ng pháp Nghiên cứu sẽ tập trung vào xác nhận hai đặc tính c¡ bản là đá chụm và

đá đúng để đánh giá hai đặc tính này của ph°¡ng pháp khi ch¿y trên máy t¿i phòng xét nghiệm của Bệnh viện E có phù hợp và đảm bảo đ°ợc nh° những gì

mà hãng sản xuất đã công bá hay không; từ đó, đảm bảo và nâng cao chất l°ợng cũng nh° đá tin cậy cho xét nghiệm

1.2 H°ßng dÁn EP15-A3 căa CLSI

CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) - Viện Tiêu chuẩn Lâm sàng và Xét nghiệm y hác là mát tổ chức phi chính phủ, phi lợi nhuận, tập

hợp các quan điểm và chuyên môn khác nhau của cáng đồng trên toàn thế giới

về việc triển khai các tiêu chuẩn, h°ớng dẫn, nhằm hß trợ các phòng xét nghiệm trong việc xây dựng, phát triển, hoàn thành trách nhiệm của mình với hiệu quả,

hiệu lực và khả năng áp dụng toàn cầu Các h°ớng dẫn của CLSI khi xây dựng

và phát triển sẽ góp phần cải thiện chất l°ợng xét nghiệm và dßch vụ chăm sóc

ng°ßi bệnh, giúp nâng cao sức khße cũng nh° chất l°ợng đßi sáng cho cáng đồng [8] Các h°ớng dẫn này đ°ợc công nhận bái Viện Tiêu chuẩn Quác gia Hoa Kỳ (ANSI) và đ°ợc tham chiếu trong các tiêu chuẩn quác tế

CLSI có h¡n 20 tiêu chuẩn, h°ớng dẫn trong lĩnh vực thẩm đßnh ph°¡ng pháp, trong đó, mát sá đánh giá cần thực hiện tr°ớc khi báo cáo kết quả của

mát ph°¡ng pháp xét nghiệm mới, bao gồm: đá chụm, đá đúng hoặc đá chính xác, khoảng tuyến tính, các giới h¿n phát hiện, Trong các h°ớng dẫn của CLSI, h°ớng dẫn EP15 đ°ợc phát triển với hai mục tiêu chính: thứ nhất là phát triển mát quy trình xét nghiệm phù hợp để sử dụng trong phòng xét nghiệm lâm sàng lớn, nh°ng đủ đ¡n giản để có thể áp dụng trong phòng xét nghiệm khác nhau; thứ hai là phát triển mát quy trình đủ sự nghiêm ngặt để đ°a ra các kết luận có giá trß về mặt tháng kê cho xác nhận ph°¡ng pháp [8] H°ớng dẫn EP15-A3 là phiên bản cập nhật mới nhất của h°ớng dẫn EP15 H°ớng dẫn đ°ợc xây dựng để mô tả việc xác minh các tuyên bá về đá chụm và °ớc tính đá chệch đái với các ph°¡ng pháp đßnh l°ợng đ°ợc thực hiện trong phòng xét nghiệm, bao gồm các h°ớng dẫn về thßi l°ợng, thiết kế thử nghiệm, vật liệu, tóm tắt phân tích dữ liệu và diễn giải - các kỹ thuật có thể thích ứng với ph¿m vi ráng

nhất có thể của chất phân tích và đá phức t¿p của thiết bß Cụ thể, h°ớng dẫn

mô tả quy trình xác nhận đá chụm dựa trên việc phân tích lặp l¿i các nồng đá

mẫu thử nghiệm ít nhất 5 lần trong mát ngày và ch¿y trong ít nhất 5 ngày đái

với mßi mẫu (t¿o ra ít nhất 25 lần lặp); kết quả ch¿y xác nhận đá chụm này cũng đ°ợc sử dụng để đánh giá đá đúng của ph°¡ng pháp đó [8] Khi tiến hành

thực nghiệm theo h°ớng dẫn EP15-A3 thì yêu cầu ng°ßi thực hiện phải nắm rõ

hệ tháng xét nghiệm đang sử dụng và phải thực hiện nái kiểm đ¿t trong suát

thực nghiệm

Xác nhận giá trß sử dụng của ph°¡ng pháp là mát công việc khá khó khăn đôi khi nhàm chán và gây tán kém, tuy nhiên l¿i là mát công việc vô cùng quan

tráng ảnh h°áng đến đá chính xác và tin cậy của xét nghiệm [1] Vì vậy, khi áp

dụng h°ớng dẫn này, phòng xét nghiệm xác nhận đá chụm và đá đúng với quy trình kỹ thuật tái giản, đáp ứng nhu cầu thực tiễn đặt ra mà có thể tiết kiệm tái

đa các nguồn lực song vẫn đảm bảo tính nghiêm ngặt, có thể áp dụng đ°ợc

trong các phòng xét nghiệm với các điều kiện khác nhau về trang thiết bß, kỹ thuật và nhân lực [2,9]

1.3 Các thu Ãt ngữ và khái niãm liên quan

Mức đá gần nhau giữa các kết quả

thực hiện đác lập trên cùng mát mẫu,

cùng mát điều kiện thực hiện (cùng

mát nhân viên, cùng mát ph°¡ng

pháp, cùng đßa điểm, cùng trang thiết

bß) lặp l¿i trong mát khoảng thßi gian

Còn gái là đá lặp l¿i Còn gái là đá tái lặp

Phân tích mát mẫu 5 lần trong mát

Đá chụm của ph°¡ng pháp liên quan đến đánh giá sai sá ngẫu nhiên của ph°¡ng pháp đó [1] Vật liệu sử dụng th°ßng lựa chán sao cho giáng mẫu thật

nhất có thể Nói nh° vậy thì việc lựa chán mẫu bệnh phẩm là tát nhất có thể, tuy nhiên nếu sử dụng mẫu bệnh phẩm thì sẽ khó biết đ°ợc đá ổn đßnh của chất phân tích nh° thế nào để đánh giá Các lo¿i mẫu có thể sử dụng gồm: mẫu chuẩn, mẫu chứng, mẫu trán, Trên thực tế, ng°ßi ta th°ßng lựa chán QC làm

vật liệu để đánh giá đá chụm Đá chụm phải đ°ợc kiểm tra á ít nhất hai mức

nồng đá (Level Concentration), th°ßng thì các mức nồng đá sẽ liên quan đến các điểm quyết đßnh y khoa Mức nồng đá cần nằm trong khoảng tuyến tính để tránh sai sá không cần thiết

Theo EP15-A3, đá chụm ngắn h¿n và đá chụm dài h¿n đ°ợc đánh giá chung trong mát quy trình: phân tích lặp l¿i 5 lần hai mức nồng đá trong 5 ngày Thí nghiệm t¿o ra 25 lần lặp l¿i đ°ợc thu thập trong 5 ngày cho mßi vật liệu mẫu Tính giá trß trung bình, đá lệch chuẩn SD, hệ sá biến thiên CV từ đó tính toán SD, CV của phòng xét nghiệm Sau đó, đá lệch chuẩn hoặc CV phòng xét nghiệm đ°ợc so sánh với đá lệch chuẩn hoặc CV mà nhà sản xuất đã công

bá Nếu đá lệch chuẩn tính toán đ°ợc nhß h¡n so với giá trß đ°ợc công bá thì

đá chụm đ°ợc xác nhận [12]

1.3.2 Độ đúng (Trueness)

Đá đúng: chỉ mức đá gần nhau giữa kết quả trung bình đ¿t đ°ợc từ mát

lo¿t phép đo với giá trß quy chiếu đ°ợc chấp nhận [13] Giá trß quy chiếu á đây

là mát giá trß biết tr°ớc đ°ợc coi là đúng và giá trß quy chiếu này th°ßng sẽ đ°ợc lấy theo kết quả của các mẫu chuẩn đã biết tr°ớc nồng đá Thông th°ßng, các phòng xét nghiệm sẽ sử dụng QC (Quality Control) [1]

Mục đích của việc kiểm tra đá đúng của ph°¡ng pháp nhằm phát hiện và

lo¿i bß sai sá hệ tháng Sai sá hệ tháng luôn gây ra mát xu h°ớng cho các kết quả xét nghiệm: hoặc cao h¡n hoặc thấp h¡n giá trß quy chiếu đ°ợc cho là đúng

Mức đá cao h¡n hay thấp h¡n đ°ợc mô tả bằng đá chệch (Bias), đ°ợc tính bằng

sự chênh lệch giữa trung bình các giá trß của phòng xét nghiệm và giá trß quy chiếu đ°ợc coi là đúng [1] Đá chệch càng lớn thì sai khác giữa kết quả và giá

trß đúng càng lớn

B = |Xtb − µ |

µ × 100 Trong đó: B: Đá chệch (bias), %

Xtb: Giá trß trung bình của kết quả thử nghiệm µ: Giá trß thực hoặc giá trß đ°ợc chấp nhận là đúng Tr°ớc đây, theo mát sá tài liệu, đá đúng (Trueness) đ°ợc hiểu t°¡ng đ°¡ng nh° đá chính xác (Accuracy) Tuy nhiên, đá đúng chỉ mô tả sai sá hệ

tháng còn đá chính xác sẽ mô tả cả sai sá hệ tháng lẫn sai sá ngẫu nhiên Có

thể coi đá chính xác (Accuracy) là sự kết hợp giữa đá chụm (Precision) và đá đúng (Trueness) Vì vậy, mát ph°¡ng pháp đ°ợc đánh giá là xác thực khi cả đá

chụm và đá đúng của ph°¡ng pháp đó đều đ°ợc xác nhận

H°ớng dẫn EP15-A3 của CLSI h°ớng dẫn việc sử dụng cùng bá sá liệu

ch¿y thực nghiệm của đánh giá đá chụm để đánh giá đá đúng Dựa vào kết quả thực nghiệm đánh giá đá chụm tính giá trß trung bình, sai sá chuẩn của trung bình, giới h¿n xác nhận trên và d°ới Tiêu chuẩn chấp nhận của đá đúng là giá

trß trung bình quan sát đ°ợc nằm trong khoảng xác nhận Nếu giá trß trung bình quan sát đ°ợc nằm ngoài khoảng xác nhận thì tiến hành tính đá chệch Bias So sánh đá chệch tính toán đ°ợc với đá chệch cho phép (tham khảo đá lệch cho phép từ các nguồn tài liệu, h°ớng dẫn, theo biến thiên sinh hác t¿i Wesstgard),

nếu đá chệch tính toán đ°ợc nhß h¡n đá chệch cho phép thì đá đúng của ph°¡ng pháp đ°ợc xác nhận

Bất kì phép đo nào cũng sẽ có thể xảy ra sai sá Sai sá bao gồm: sai sá

ngẫu nhiên (Random Analytical Error - RE) và sai sá hệ tháng (Systematic analytical Error - SE) Sai sá ngẫu nhiên (RE) là sai sá làm kết quả xét nghiệm biến thiên về cả hai phía so với giá trß đúng, có thể tăng hoặc giảm; chiều h°ớng

và đá lớn chính xác không thể dự đoán chính xác đ°ợc Bất kể mát phép đo nào cũng có sai sá ngẫu nhiên, vấn đề là xem sai sá ngẫu nhiên có thể chấp nhận đ°ợc hay không Sai sá ngẫu nhiên th°ßng do yếu tá con ng°ßi (thao tác) hoặc hóa chất thuác thử không ổn đßnh; dòng điện không ổn đßnh…Còn sai sá hệ tháng (SE) là sai sá làm kết quả xét nghiệm lệch về mát phía so với giá trß đúng,

có thể dự đoán đ°ợc Nguyên nhân gây ra sai sá hệ tháng nh°: chất l°ợng thuác

thử không đảm bảo, kỹ thuật xét nghiệm không đặc hiệu, hóa chất chuẩn sai, thiết bß xét nghiệm không chính xác do không đ°ợc bảo d°ỡng hay hiệu chuẩn th°ßng xuyên,…Sai sá toàn bá (Total Analitycal Error) sẽ đ°ợc tính bằng tổng sai sá ngẫu nhiên và sai sá hệ tháng: TE = SE+RE, xác đßnh tổng biến thiên

của mát kết quả xét nghiệm so với giá trß đúng hoặc giá trß đ°ợc chấp nhận là đúng [5]

Sai sá toàn bá cho phép (Allowable Total Error - TEa) là tiêu chuẩn chất l°ợng về mặt kĩ thuật đ°a ra với sai sá ngẫu nhiên và sai sá hệ tháng mà mát phép đo/mát kết quả xét nghiệm đ°ợc xem nh° là chấp nhận đ°ợc: TE < TEa Trong đó:

TE: Tổng biến thiên của giá trß đo đ°ợc với giá trß đúng

TEa: xác đßnh biến thiên tái đa có thể chấp nhận khi so sánh với giá trß đúng

Sai sá toàn bá cho phép TEa xác đßnh sự biến thiên tái đa có thể chấp

nhận đ°ợc của mát kết quả xét nghiệm so với giá trß đúng (True value), là sai

sá có thể chấp nhận đ°ợc mà không làm ảnh h°áng đến ý nghĩa lâm sàng của xét nghiệm [5] Sai sá toàn bá cho phép TEa có thể tham khảo t¿i tiêu chuẩn

CLIA - Clinical Laboratory Improvement Amendments (Quy đßnh về cải tiến phòng xét nghiệm lâm sàng) hoặc dựa trên biến thiên sinh hác

Khoảng tuyến tính của mát ph°¡ng pháp là khoảng nồng đá á đó có sự

phụ thuác tuyến tính giữa đ¿i l°ợng đo đ°ợc và nồng đá chất phân tích [1] Khoảng tuyến tính còn đ°ợc gái là khoảng đo l°ßng phân tích (Analytical Measurement Range 3 AMR), là khoảng giá trß đo của thiết bß có thể sử dụng

để báo cáo trực tiếp, không đòi hßi phải pha loãng hay cô đặc mẫu xét nghiệm Đái với hầu hết các ph°¡ng pháp đßnh l°ợng, đều cần phải xác đßnh khoảng tuyến tính Tính tuyến tính đ°ợc đánh giá bằng cách quan sát đồ thß của tín hiệu ứng với nồng đá hoặc hàm l°ợng của chất phân tích Nếu có t°¡ng quan tuyến tính thì kết quả phải đ°ợc đánh giá bằng ph°¡ng pháp tháng kê thích hợp

Khoảng tham chiếu là khoảng phân bá đặc tr°ng của giá trß á mát quần

thể tham chiếu sinh hác Quần thể tham chiếu sinh hác này có thể là mát nhóm ng°ßi, đái t°ợng, mát quần thể hoàn toàn khße m¿nh nh°ng cũng có thể quần thể này mắc bệnh khác, không gây ảnh h°áng đến xét nghiệm cần đánh giá [11] Vật liệu sử dụng tát nhất là mẫu bệnh phẩm của ng°ßi khße m¿nh, nếu không thể thì dùng những mẫu bệnh phẩm của những ng°ßi mắc bệnh không gây ảnh h°áng đến kết quả xét nghiệm Tiến hành làm và phân tích kết quả trên khoảng 20 mẫu đ¿i diện Sau khi phân tích cần cân nhắc sử dụng khoảng tham chiếu đó hay không, nếu không thßa mãn yêu cầu thì phải sử dụng khoảng tham chiếu khác hoặc tự thiết lập khoảng tham chiếu cho phòng xét nghiệm

Tuy nhiên, nghiên cứu chỉ dừng l¿i á việc xác nhận hai đặc tính c¡ bản

là đá chụm và đá đúng để đánh giá hai đặc tính này khi ch¿y trên máy t¿i phòng xét nghiệm của Khoa Sinh hóa bệnh viện E để xác nhận hai đặc tính này có phù hợp và đảm bảo đ°ợc nh° những gì mà nhà sản xuất đã công bá hay không; góp phần đảm bảo chất l°ợng và đá tin cậy cho xét nghiệm

1.4 Các ph°¢ng pháp đßnh l°ÿng T3, FT4, TSH

Kỹ thuật miễn dßch phóng x¿ (RIA: Radio - Immuno Assay) ho¿t đáng

dựa trên nguyên lý: Kháng nguyên cần đßnh l°ợng (T3, T4, TSH) sẽ c¿nh tranh

với kháng nguyên đ°ợc đánh dấu chất phát phóng x¿ để có thể gắn đ°ợc với kháng thể đặc hiệu Mức đá gắn hai lo¿i kháng nguyên này với kháng thể tỷ lệ thuận với nồng đá ban đầu của chúng Đo phức hợp kháng nguyên gắn đồng vß phóng x¿ - kháng thể bằng máy đếm phóng x¿ rồi dựa vào đ°ßng cong chuẩn

ta có thể tính đ°ợc l°ợng chất cần đßnh l°ợng [15]

Về °u điểm, kỹ thuật này có đá nh¿y cao Tuy nhiên, tác đá phản ứng

chậm và cần nhiều thßi gian để đếm phóng x¿ phát ra H¡n nữa là các vấn đề liên quan đến nhiễm x¿, gây ảnh h°áng đến con ng°ßi và khó khăn trong việc

xử lý chất thải phóng x¿ [16]

Kỹ thuật miễn dßch huỳnh quang (FIA: Fluoro Immuno Assay) ho¿t đáng

dựa trên nguyên lý kết hợp kháng nguyên kháng thể, sử dụng chất đánh dấu là chất có khả năng phát ra ánh sáng huỳnh quang [17] Nh°ợc điểm của kỹ thuật này là dễ gặp các vấn đề nhiễu do các chất huỳnh quang có thể có mặt và hiện

diện trong tự nhiên

Kỹ thuật miễn dßch gắn enzym (ELISA: Enzym Linked Immuno Sorbent Assay) ho¿t đáng dựa trên nguyên lý chất cần đßnh l°ợng với vai trò kháng nguyên sẽ gắn kết với kháng thể có gắn chất đánh dấu là enzym, enzym phản ứng với c¡ chất đặc hiệu đ°ợc cho vào để làm đổi màu dung dßch [17] Sử dụng máy đo quang để đo mật đá quang của dung dßch Màu càng đậm thì l°ợng enzym càng nhiều và l°ợng enzym tỉ lệ thuận với kháng nguyên là chất cần đo

Hóa phát quang (Chemiluminescence) là hiện t°ợng phát ra ánh sáng do

kết quả của các phản ứng hóa hác Kỹ thuật miễn dßch hóa phát quang (CLIA: Chemiluminescense Immuno Assay) có nguyên lý ho¿t đáng dựa trên sự kết

hợp kháng nguyên kháng thể cùng với sự chuyển tr¿ng thái năng l°ợng Hiện t¿i, kỹ thuật hóa phát quang trực tiếp (DCLIA: Direct - Chemiluminescense Immuno Assay) th°ßng đ°ợc sử dụng chủ yếu Kỹ thuật này kích ho¿t phát quang bằng cách thay đổi pH môi tr°ßng từ axit sang kiềm [17] Nó sử dụng

chất đánh dấu là chất hóa hác d°ới d¿ng phân tử bền, đ°ợc t¿o ra bằng d¿ng không bền gắn thêm mát nhóm hóa hác Khi thay đổi về môi tr°ßng xảy ra, nhóm hóa hác sẽ bß cắt để chuyển chất đánh dấu từ d¿ng bền thành không bền

và t¿o ra năng l°ợng d°ới d¿ng phát quang [18] Đo c°ßng đá phát sáng để xác đßnh l°ợng chất cần đßnh l°ợng

Ph°¡ng pháp miễn dßch hóa phát quang có nhiều °u điểm: tăng diện tích

tiếp xúc kháng nguyên và kháng thể, đá nh¿y cao, giảm thßi gian phản ứng nên đ°ợc sử dụng ráng rãi hiện nay [16] Xét nghiệm đßnh l°ợng T3, FT4, TSH trên

hệ tháng DxI cũng đ°ợc thực hiện theo ph°¡ng pháp này

1.5 H ã thßng máy xét nghiãm mián dßch tự đßng Unicel DxI 800

1.5.1 Giới thiệu về hệ thống máy Unicel DxI 800

Máy xét nghiệm miễn dßch tự đáng UniCel DxI 800 với công suất xét nghiệm tái đa lên đến 400 xét nghiệm/giß, sử dụng công nghệ hóa phát quang, đßnh l°ợng dựa trên nguyên lý miễn dßch Ánh sáng do phản ứng t¿o ra sẽ cho

biết l°ợng chất phân tích trong mẫu à đây, trên hệ tháng máy DxI, chất hóa

hác phát quang đ°ợc sử dụng là AMPPD 4 - methoxy - 4 - (3 - phosphatephenyl) - spiro - (1,2 - dioxetane - 3,2 - adamantine) AMPPD sẽ đ°ợc kích ho¿t phát quang d°ới sự hiện diện của enzym alkaline phosphatase

Máy Unicel DxI 800 áp dụng các nguyên lý liên kết đái với xét nghiệm

miễn dßch của kháng thể d°ới các d¿ng sandwich hoặc c¿nh tranh, sử dụng chất hóa phát quang đ°ợc là AMPPD Để đo kháng nguyên trong mẫu phân tích, hệ

tháng sẽ sử dụng thuác thử là kháng nguyên hoặc kháng thể gắn với AMPPD nh°ng không làm ảnh h°áng đến khả năng liên kết với kháng nguyên của kháng

thể này Bên c¿nh đó, hệ tháng sử dụng h¿t thuận từ (bản chất là các tinh thể oxit sắt) đ°ợc phủ kháng thể [19]

Hình 1.2 H ạt thuận từ phủ kháng thể [19]

H¿t thuận từ phủ kháng thể liên kết với mát trong hai kháng nguyên: kháng nguyên trong mẫu phân tích hoặc kháng nguyên có gắn chất phát quang (trong thuác thử) đái với xét nghiệm miễn dßch c¿nh tranh Còn trong xét nghiệm miễn dßch sandwich, h¿t thuận từ phủ kháng thể và kháng thể gắn AMPPD (trong thuác thử) cùng liên kết với kháng nguyên cần đo trong mẫu phân tích t¿o phức hợp sandwich Cuvet chứa các hßn hợp trên đ°ợc ủ á nhiệt

đá thích hợp Tiếp theo, cuvet tiếp xúc với tr°ßng từ tính đồng thßi rửa để lo¿i

bß các thuác thử không liên kết Sau đó, dung dßch chứa enzym kích ho¿t c¡

chất phản ứng đ°ợc cho vào và phản ứng t¿o ra ánh sáng Ánh sáng phát ra đ°ợc đo bằng đ¡n vß ánh sáng t°¡ng đái (RLU) và đ°ợc chuyển đổi thành nồng

đá chất phân tích qua việc sử dụng đ°ßng chuẩn [19] à xét nghiệm miễn dßch

c¿nh tranh, l°ợng ánh sáng t¿o ra tỉ lệ nghßch với nồng đá chất cần đo trong

mẫu; ng°ợc l¿i với xét nghiệm miễn dßch sandwich, l°ợng ánh sáng t¿o ra tỉ lệ thuận với nồng đá chất cần đo

H¿t thuận từ phủ KT KN trong mẫu KN gắn AMPPD

H¿t thuận

Hình 1.4 Ph ức hợp hạt thuận từ phủ KT - KN trong mẫu phân tích và

Thực tế, với tình hình ngày càng phát triển, l°ợng bệnh nhân thăm khám, điều trß ngày càng cao, theo đó nhu cầu làm xét nghiệm ngày càng tăng và yêu

- KN trong mẫu

H¿t thuận từ phủ KT KN trong mẫu KT gắn chất phát quang AMPPD

cầu xét nghiệm cũng đa d¿ng Để đáp ứng về mặt nhu cầu cũng nh° đảm bảo nâng cao tác đá xét nghiệm và chất l°ợng, hệ tháng xét nghiệm miễn dßch Unicel DxI 800 đ°ợc ứng dụng để đ°a vào sử dụng Tuy nhiên tr°ớc đó, khoa Sinh hóa Bệnh viện E cần tiến hành các thực nghiệm cần thiết để xác nhận ph°¡ng pháp là phù hợp nh° hãng sản xuất đã công bá, đảm bảo vận hành phù

hợp với điều kiện t¿i khoa, từ đó đảm bảo chất l°ợng cũng nh° đá tin cậy cho xét nghiệm

Xét nghiệm Total T3 là xét nghiệm miễn dßch hóa phát quang, h¿t thuận

từ để đßnh l°ợng các mức triiodothyronine trong huyết thanh và huyết t°¡ng ng°ßi bằng các hệ tháng xét nghiệm miễn dßch DxI Xét nghiệm T3 là xét nghiệm enzym miễn dßch liên kết c¿nh tranh Mẫu đ°ợc thêm vào bình phản ứng có chất tẩy rửa để tách T3 khßi protein liên kết T3 trong mẫu c¿nh tranh

với analog T3 gắn biotin cho liên hợp photphataza kiềm kháng T3 Trong sá kháng nguyên thu đ°ợc các phức hợp kháng thể, analog T3: các phức hợp kháng thể đ°ợc liên kết với pha rắn phủ streptavidin Quá trình phân tách trong

từ tr°ßng và rửa sẽ lo¿i bß T3 trong mẫu: các phức hợp kháng thể và vật liệu khác không đ°ợc liên kết với pha rắn Sau đó, c¡ chất hóa phát quang đ°ợc thêm vào bình và ánh sáng do phản ứng t¿o ra đ°ợc đo bằng dụng cụ đo ánh sáng L°ợng ánh sáng t¿o ra tỉ lệ nghßch với nồng đá T3 toàn phần trong mẫu

L°ợng chất phân tích trong mẫu đ°ợc xác đßnh từ đ°ßng cong hiệu chuẩn đa điểm đã l°u trữ [20]

Xét nghiệm Free T4 là xét nghiệm miễn dßch hóa phát quang, h¿t thuận

từ để đßnh l°ợng các mức thyroxine tự do trong huyết thanh và huyết t°¡ng ng°ßi (heparin) bằng các hệ tháng xét nghiệm miễn dßch DxI

Xét nghiệm Free T4 là mát xét nghiệm enzym miễn dßch hai b°ớc Kháng

thể kháng Thyroxin (T4) đ¡n dòng gắn biotin, mẫu, dung dßch đệm protein và pha rắn phủ streptavidin đ°ợc thêm vào bình phản ứng Trong lần ủ đầu tiên này, kháng thể kháng T4 gắn biotin liên kết với pha rắn và T4 tự do trong mẫu Sau khi ủ trong bình phản ứng, vật liệu liên kết với pha rắn đ°ợc giữ l¿i trong tr°ßng từ tính, trong khi các vật liệu không liên kết đ°ợc rửa bß Tiếp theo, dung dßch đệm protein và liên hợp photphataza kiềm - triiodothyronine (T3) đ°ợc thêm vào bình phản ứng Liên hợp photphataza kiềm - T3 liên kết với các

vß trí liên kết kháng thể kháng T4 tự do

Sau khi ủ trong bình phản ứng, vật liệu liên kết với pha rắn đ°ợc giữ l¿i trong tr°ßng từ tính, trong khi các vật liệu không liên kết đ°ợc rửa bß Sau đó, c¡ chất hóa phát quang đ°ợc thêm vào bình và ánh sáng do phản ứng t¿o ra đ°ợc đo bằng dụng cụ đo ánh sáng L°ợng ánh sáng t¿o ra tỉ lệ nghßch với nồng

đá T4 tự do trong mẫu L°ợng chất phân tích trong mẫu đ°ợc xác đßnh từ đ°ßng cong hiệu chuẩn đa điểm đã l°u trữ [21]

1.5.4 Phương pháp xét nghiệm định lượng TSH trên máy Unicel DxI 800

Xét nghiệm TSH (3rd IS) là xét nghiệm miễn dßch hóa phát quang, h¿t thuận từ để đßnh l°ợng mức hormon kích thích tuyến giáp á ng°ßi (yếu tá h°ớng giáp, TSH, hTSH) trong huyết thanh và huyết t°¡ng ng°ßi bằng các hệ

tháng xét nghiệm miễn dßch DxI Xét nghiệm này có thể cung cấp kết quả TSH thế hệ 3

Xét nghiệm TSH (3rd IS) là xét nghiệm enzym miễn dßch hai điểm (sandwich) Mẫu đ°ợc thêm vào bình phản ứng có liên hợp photphataza kiềm

- kháng thể kháng hTSH á chuát, dung dßch đệm protein và các h¿t thuận từ

phủ kháng thể kháng hTSH đ¡n dòng ổn đßnh á chuát Lúc này, hTSH liên kết

với kháng thể kháng hTSH đ¡n dòng ổn đßnh trên pha rắn, trong khi đó, liên hợp photphataza kiềm - kháng thể kháng hTSH á chuát phản ứng với mát vß trí kháng nguyên khác trên hTSH

Sau khi ủ trong bình phản ứng, vật liệu liên kết với pha rắn đ°ợc giữ l¿i trong tr°ßng từ tính, trong khi các vật liệu không liên kết đ°ợc rửa bß Sau đó, c¡ chất hóa phát quang đ°ợc thêm vào bình và ánh sáng do phản ứng t¿o ra đ°ợc đo bằng dụng cụ đo ánh sáng L°ợng ánh sáng t¿o ra tỷ lệ thuận với nồng

đá TSH trong mẫu L°ợng chất phân tích trong mẫu đ°ợc xác đßnh từ đ°ßng cong hiệu chuẩn đa điểm đã l°u trữ [22]