luận án tiến sĩ trích ly các hợp chất có hoạt tính sinh học từ vỏ mãng cầu ta annona squamosa l và ứng dụng trong thực phẩm

Định tính các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học, ánh giá khÁ năng kháng khuẩn cao chiÁt và bột sÃy phun dịch chiÁt vß mãng cầu ta .... Tuy nhiên, hiáu quÁ bÁo quÁn các hÿp chÃt polyphenol p

NGUY àN THà TRANG

TR¯äNG Đ¾I HâC NÔNG LÂM TP Hè CHÍ MINH

NGUY àN THà TRANG

Chuyên ngành: Công ngh ã thăc phÇm

Mã s ç: 9.54.01.01

LU ÊN ÁN TI¾N S) NGÀNH CÔNG NGHâ THĂC PHÆM

Cán b á h°ãng dÉn: PGS.TS PHAN T¾I HUÂN

TP.HCM- Năm 2023

L äI CAM ĐOAN

Tôi xin cam oan kÁt quÁ căa à tài: <Trích ly các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh hãc

tć vå mãng cÅu ta (Annona Squamosa L.) và ąng dāng trong thăc phÇm” là công

trình nghiên cąu căa cá nhân tôi d°ới sự h°ớng d¿n PGS.TS Phan T¿i Huân Các sá liáu, kÁt quÁ nêu trong luÁn án là trung thực, không sao chép từ bÃt kỳ một ngußn nào

và ch°a từng °ÿc ai công bá trong bÃt kỳ công trình nào khác cho tới thßi iểm này

Tác giÁ luÁn văn

Nguy án Thá Trang

L äI CÀM ¡N

Trong quá trình thực hián à tài <Trích ly các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh hãc tć vå

mãng cÅu ta (Annona Squamosa L.) và ąng dāng trong thăc phÇm= Tôi ã nhÁn

°ÿc rÃt nhiÃu sự giúp ỡ và t¿o iÃu kián căa tÁp thể lãnh ¿o, các nhà khoa học, cán bộ, giÁng viên, chuyên viên Khoa Công nghá Hóa học và Thực phẩm - Tr°ßng Đ¿i học Nông Lâm TP.HCM; tÁp thể Ban Giám hiáu, Ban chă nhiám Vián Công nghá sinh học và Thực phẩm -Tr°ßng Đ¿i học Công nghiáp TP.HCM; tÁp thể Ban Giám hiáu, Phòng Sau Đ¿i học, cán bộ các phòng, ban chąc năng Tr°ßng Đ¿i học Nông Lâm TP.HCM Tôi xin bày tß lòng cÁm ¢n chân thành và sự giúp ỡ ó

Tôi xin bày tß lòng biÁt ¢n sâu sắc tới Thầy Phan T¿i Huân ã trực tiÁp h°ớng d¿n, góp ý, hỗ trÿ tôi hoàn thành luÁn án

Tôi xin chân thành cÁm ¢n Quý ßng nghiáp, sinh viên ¿i học ngành Công nghá Thực phẩm, ngành Ám bÁo chÃt l°ÿng các khóa Tr°ßng Đ¿i học Công nghiáp TP.HCM và gia ình ã ộng viên, khích lá, t¿o iÃu kián giúp ỡ tôi trong suát quá trình thực hián và hoàn thành luÁn án

Cuái cùng, Tôi xin gửi lßi biÁt ¢n Án gia ình ã luôn ßng hành, ộng viên, khích

lá, ăng hộ và tài chính và thßi gian trong suát chặng °ßng khó khăn ể hoàn thành

luÁn án nghiên cąu này Đặc biát, Tôi xin tặng ba mẹ các thành quÁ mà con ã ¿t

°ÿc

Nguy ễn Thị Trang

TÓM T ÌT Tên lu Ën án: <Trích ly các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh hãc tć vå mãng cÅu ta

(Annona Squamosa L.) và ąng dāng trong thăc phÇm=

Tác gi Á: Nguyán Thá Trang

Chuyên ngành: Công ngh ã thăc phÇm Mã sç: 9.54.01.01

Nghiên cąu °ÿc thực hián với māc tiêu xác ịnh ph°¢ng pháp trích ly tái °u ể thu nhÁn dịch chiÁt có hàm l°ÿng polyphenol và ho¿t tính kháng oxy hóa cao từ vß mãng cầu ta (Annona Squamosa L.) Đßng thßi, ịnh danh các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học sinh học, ánh giá khÁ năng kháng khuẩn, tính an toàn căa dịch chiÁt và ąng dāng dịch chiÁt trong bÁo quÁn tôm thẻ chân trắng á iÃu kián l¿nh Bên c¿nh ó, xác ịnh nßng ộ chÃt mang phù hÿp ể sÃy phun dịch chiÁt vß mãng cầu ta, xác ịnh các chỉ tiêu hóa lý, ánh giá khÁ năng kháng khuẩn và xây dựng mô hình dự oán shelf 3 life căa dịch chiÁt và bột sÃy phun

KÁt quÁ nghiên cąu cho thÃy, vß mãng cầu sÃy á nhiát ộ khoÁng 600C trong 8 giß s¿ thu °ÿc bột vß mãng cầu có hàm ẩm khoÁng 12%, có hàm l°ÿng polyphenol và ho¿t tính sinh học cao h¢n so với các chÁ ộ sÃy khác Trích ly polyphenol từ vß mãng cầu

ta có hỗ trÿ vi sóng với nßng ộ ethanol 60%, tỷ lá nguyên liáu/dung môi là 1/25 (g/mL), thßi gian 5 phút, công suÃt 214 W thu °ÿc dịch chiÁt có hàm l°ÿng TPC 100,15 mg GAE/g CK, ho¿t tính kháng oxy hóa 673,0 mol TE/g CK (DPPH) và 1409,6 mol TE/g CK (ABTS) cao nhÃt so với các ph°¢ng pháp khác Dịch chiÁt, bột sÃy phun vß mãng cầu ta có nhiÃu hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học nh° tanin, saponin, steroid, terpenoid, coumarin v.v có khÁ năng kháng l¿i vi khuẩn

sung dịch chiÁt mãng cầu với hàm l°ÿng polyphenol 300 mg GAE/l, bÁo quÁn á 40C sau 12 ngày sÁn phẩm có ộ giÁm khái l°ÿng tôm nhß nhÃt, chỉ sá PV là 4,93 meq/kg,

chỉ sá TBARs là 1,73 mg MDA/kg, táng hàm l°ÿng nit¢ bay h¢i TVB-N ¿t 28,39

mg N/100g, m¿u giữ °ÿc màu sắc và cÃu trúc tát h¢n so với các m¿u còn l¿i

Nghiên cąu cho thÃy, sÃy phun dịch chiÁt vß mãng cầu với gum arabic 10%, bột sÃy phun có hàm l°ÿng polyphenol cao h¢n so với các nßng ộ khác, có ộ ẩm 4,73%,

Nghiên cąu cũng ã xác ịnh dịch chiÁt vß mãng cầu ta không t¿o ra tác dāng phā

ái với hành vi và bánh lý táng quát căa chuột á nghiên cąu ộc tính mãn và ộc tính cÃp (LD50 7000 mg/kg) và có khÁ năng phòng viêm khớp d¿ng thÃp

H¯âNG DÈN KHOA HâC

PGS.TS Phan T ¿i Huân

NGHIÊN C ĄU SINH

Nguy án Thá Trang

ABSTRACT

Extraction of bioactive compounds from custard apple (Annona Squamosa L.)

peel and its application in food Ph.D candidate: Nguyen Thi Trang

Major: Food Technology Major code: 9.54.01.01

The study aimed to optimize the extraction of the custard apple, Annona Squamosa

L (AS), peel to obtain extracts with high polyphenol content and antioxidant activity With that, phytochemical screening of the extract was performed Antibacterial activities and the acute and chronic toxicity of the extract were also determined Custard apple peel extract was tested as a natural additive for the preservation of

Pacific white shrimps (Litopenaeus vannamei) during cold storage Besides, the

spray-dried encapsulation of AS peel extract was conducted at different concentrations of carrier agents The physical properties, antioxidant, and antibacterial properties of the spray-dried product were evaluated Then, modeling was used to predict the shelf-life of the extracts and encapsulated powders

The study results showed that the extraction pretreatment of AS peels with hot-air drying at 60°C for 8 hours led to a moisture content of f 12% and the best total polyphenol content (TPC) and biological activities Microwave-assisted extraction (MAE) can be successfully used to extract polyphenols from the AS peel The optimum condition was found at an ethanol concentration of 60%, extraction time of

5 min, a solvent-solid ratio of 25 mL/g, and microwave power of 214 W Under these conditions, the extract of custard apple peel achieved a TPC of 100.15 mg GAE/g d.w, an antioxidant activity of 673.0 µmol TE/g in the DPPH assay, and 1409.6 µmol TE/g in the ABTS assay

The bioactive compounds in the AS peel extracts and powder products showed the presence of tannins, saponins, steroids, terpenoids, and coumarins Antimicrobial activity of the AS peel extract was proven against six bacterial strains possibly

Bacillus cereus (ATCC 10876), Escherichia coli (ATCC 25922), Salmonella

Shrimps treated with a 1,5% chitosan-AS extract coating solution had lower increases

in weight loss, pH, PV (4.93 meq/kg), TBARs (1.73 mg MDA/kg), TVB-N (28.39

mg N/100g), and improved color and texture properties, compared with the control samples during 12 days of cold storage (4°C) The best quality was obtained from shrimps coated with chitosan-incorporated AS extract at a concentration of 300 mg GAE/L

A concentration of 10% gum arabic (GA) was considered proper to obtain the AS peel extract encapsulation with the highest TPC The spray-dried powder was obtained at a very low moisture content of 4.73%, water solubility index of 87.25 %, hygroscopicity of 34.57 g/100 g, and bulk density of 371.81 g/L

The shelf life of the product was assessed by using the Q10 value It showed that the TPC and TEAC degradation rates of the AS peel extract are greater than those obtained with the spray-dried powder The TPC and TEAC retentions of 85% of the

AS peel extracts were 30.79 days, 15.54 days (according to DPPH assay), and 14.4 days (according to ABTS assay), respectively While those obtained with the 10%

GA spray-dried powder were 13.17 days, 18.27 days (DPPH assay), and 24.73 days (ABTS assay), respectively The degradations of TPC and TEAC according to the DPPH and ABTS assays were correlated well with the developed second-order models by a correlation coefficient (R2) greater than 0.95

The study also showed that AS peel extract demonstrated no adverse effects on the general behavior and pathology determinations of mice in chronic and acute toxicity testing (LD50 7000 mg/kg), and proved potential prevention and treatment of rheumatoid arthritis

MĀC LĀC

CH¯¡NG 1 1

TàNG QUAN 1

1.1 Táng quan và polyphenol 1

1.1.1 Phân lo¿i polyphenol 1

1.1.2 Ho¿t tính sinh học căa polyphenol 3

1.2 Táng quan và mãng cầu ta 5

1.2.1 Ngußn gác 5

1.2.2 Đặc iểm 5

1.2.3 Ho¿t tính sinh học mãng cầu 6

1.2.4 Một sá nghiên cąu và mãng cầu ta trong và ngoài n°ớc 6

1.3 Táng quan và trích ly 8

1.3.1 Nguyên lý quá trình trích lytrích ly 8

1.3.2 Các yÁu tá Ánh h°áng Án quá trình trích ly 8

1.3.3 Các ph°¢ng pháp trích ly 9

1.4 Kỹ thuÁt sÃy phun t¿o sÁn phẩm bột hòa tan 13

1.5 Nghiên cąu và ộc tính và kháng viêm căa nguyên liáu thực vÁt 14

1.6 Ąng dāng dịch chiÁt trong bÁo quÁn thăy hÁi sÁn 15

CH¯¡NG 2 18

VÀT LIàU VÀ PH¯¡NG PHÁP NGHIÊN CĄU 18

2.1 Nguyên liáu và hóa chÃt sử dāng trong nghiên cąu 18

2.1.1 Nguyên liáu 18

2.1.2 Hóa chÃt và thiÁt bị 19

2.2 Ph°¢ng pháp bá trí thí nghiám 20

2.2.1 KhÁo sát Ánh h°áng nhiát ộ sÃy Án hàm l°ÿng polyphenol và ho¿t tính

kháng oxy hóa 22

2.2.2 Trích ly vß mãng cầu ta có hỗ trÿ enzyme (pectinase, cellulase, hỗn hÿp pectinase/ cellulase) với dung môi n°ớc 22

2.2.3 Trích ly vß mãng cầu ta bằng ph°¢ng pháp khuÃy từ 23

2.2.4 Trích ly các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học có hỗ trÿ vi sóng 24

2.2.5 SÃy phun dịch chiÁt vß mãng cầu, xác ịnh tính chÃt hóa lý bột sÃy phun 26

2.2.6 Xây dựng mô hình dự oán thßi h¿n (shelf-life) bÁo quÁn dịch chiÁt, bột sÃy phun 26

2.2.7 KhÁo sát ho¿t tính kháng khuẩn và nßng ộ ąc chÁ tái thiểu căa dịch chiÁt và bột sÃy phun dịch chiÁt vß quÁ mãng cầu ta 27

2.2.8 Đánh giá tính an toàn dịch chiÁt vß mãng cầu 29

2.2.9 Ąng dāng dịch chiÁt mãng cầu trong iÃu trị viêm khớp d¿ng thÃp á chuột 30

2.2.10 Ąng dāng dịch chiÁt bÁo quÁn tôm thẻ chân trắng á iÃu kián l¿nh 31

2.3 Các ph°¢ng pháp phân tích 32

2.3.1 Xác ịnh phenolic táng theo ph°¢ng pháp Folin- Ciocalteu 32

2.3.2 Xác ịnh ho¿t tính cháng oxy hóa căa polyphenol theo ph°¢ng pháp DPPH 33 2.3.3 Xác ịnh ho¿t tính cháng oxy hóa căa polyphenol theo ph°¢ng pháp ABTS 33 2.3.4 Định tính một sá hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học 33

2.3.5 Xác ịnh thßi h¿n bÁo quÁn (Shelf - life) cao chiÁt, bột sÃy phun vß mãng cầu 34

2.3.6 Xác ịnh một sá chỉ tiêu hóa lý tôm thẻ chân trắng 35

2.3.7 Xác ịnh một sá tính chÃt hóa lý căa bột sÃy phun từ vß mãng cầu ta 37

2.3.8 Các thông sá ánh giá tính an toàn căa dịch chiÁt vß mãng cầu ta 38

2.3.9 Phân tích huyÁt học và sinh hóa máu 39

2.3.10 Xác ịnh khái l°ÿng c¢ quan t°¢ng ái 39

2.3.11 Phân tích n°ớc tiểu 40

2.3.12 Đánh giá mô học 40

2.3.13 Đánh giá các thông sá thực nghiám mô hình trị viêm khớp d¿ng thÃp á chuột bằng dịch chiÁt vß mãng cầu ta 40

2.4 Ph°¢ng pháp xử lý sá liáu 41

CH¯¡NG 3 42

KÀT QUÀ VÀ THÀO LUÀN 42

3.1 Ành h°áng nhiát ộ sÃy Án TPC và TEAC căa vß mãng cầu ta 42

3.2 KhÁo sát quá trình trích ly polyphenol từ vß mãng cầu với sự hỗ trÿ căa enzyme với dung môi n°ớc 44

3.2.1 Ành h°áng tỷ lá enzyme pectinase/cellulase 44

3.2.2 Ành h°áng tỷ lá nguyên liáu/dung môi 45

3.2.3 KhÁo sát Ánh h°áng thßi gian trích ly 47

3.2.4 KhÁo sát Ánh h°áng pH 49

3.2.5 KhÁo sát Ánh h°áng nßng ộ enzyme 52

3.3 KhÁo sát quá trình trích ly có hỗ trÿ khuÃy từ với dung môi ethanol 55

3.3.1 Ành h°áng thßi gian trích ly 55

3.3.2 KhÁo sát Ánh h°áng nßng ộ ethanol 56

3.3.3 KhÁo sát Ánh h°áng tỷ lá NL/DM 56

3.3.4 KhÁo sát Ánh h°áng nhiát ộ 57

3.4 KhÁo sát quá trình trích ly có hỗ trÿ vi sóng 58

3.4.1 KhÁo sát Ánh h°áng nßng ộ ethanol 58

3.4.2 KhÁo sát Ánh h°áng tỷ lá nguyên liáu/dung môi 59

3.4.3 KhÁo sát Ánh h°áng thßi gian trích ly 60

3.4.4 KhÁo sát Ánh h°áng công suÃt trích ly 61

3.4.5 Tái °u hóa trích ly TPC, TEAC từ vß mãng cầu ta có hỗ trÿ vi sóng 62

3.5 Tính chÃt hóa lý bột sÃy phun vß mãng cầu ta với chÃt mang khác nhau 68

3.5.1 Độ ẩm, TPC, TEAC căa bột sÃy phun với gum arabic và maltodextrin 68

3.5.2 Độ màu, hiáu suÃt thu hßi bột sÃy phun từ vß mãng cầu ta 70

3.5.3 Tỷ trọng, ộ hút ẩm, ộ hòa tan và góc nghỉ căa bột sÃy phun dịch chiÁt vß mãng cầu ta 71

3.5.4 Đặc iểm hình d¿ng và kích th°ớc phân bá h¿t căa bột sÃy phun 73

3.6 Xây dựng mô hình dự oán thßi gian bÁo quÁn (shelf-life) dịch chiÁt và bột sÃy phun dịch chiÁt vß quÁ mãng cầu ta 76

3.6.1 Xây dựng mô hình dự oán thßi gian bÁo quÁn dịch chiÁt vß mãng cầu ta 76

3.6.2 Xây dựng mô hình shelf 3 life (mô hình dự oán thßi gian bÁo quÁn) cho bột sÃy phun GA 10% 80

3.7 Định tính các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học, ánh giá khÁ năng kháng khuẩn cao chiÁt và bột sÃy phun dịch chiÁt vß mãng cầu ta 83

3.7.1 Định tính các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học 83

3.7.2 Đánh giá khÁ năng kháng khuẩn và nßng ộ ąc chÁ tái thiểu căa cao chiÁt và bột sÃy phun vß mãng cầu ta 85

3.8 Ąng dāng dịch chiÁt trong bÁo quÁn tôm thẻ chân trắng á iÃu kián l¿nh 91

3.8.1 Ành h°áng nßng ộ polyphenol dịch chiÁt Án khái l°ÿng tôm 91

3.8.2 Ành h°áng căa nßng ộ polyphenol dịch chiÁt Án giá trị pH 92

3.8.3 Ành h°áng căa nßng ộ polyphenol dịch chiÁt Án chỉ sá PV 93

3.8.4 Ành h°áng căa nßng ộ polyphenol dịch chiÁt Án chỉ sá TVB3N 95

3.7.5 Ành h°áng căa nßng ộ polyphenol dịch chiÁt Án chỉ sá TBARs 96

3.7.6 Ành h°áng căa nßng ộ polyphenol dịch chiÁt Án giá trị màu sắc 97

3.7.7 Ành h°áng căa nßng ộ polyphenol dịch chiÁt Án cÃu trúc theo thßi gian bÁo quÁn 101

3.9 Đánh giá tính an toàn dịch chiÁt vß mãng cầu ta và ąng dāng dịch chiÁt vß mãng cầu ta trong iÃu trị viêm khớp d¿ng thÃp á chuột 103

3.9.1 Đánh giá tính an toàn dịch chiÁt vß mãng cầu ta 103

3.9.2 Ąng dāng dịch chiÁt vß mãng cầu ta trong iÃu trị viêm khớp d¿ng thÃp á chuột 110

CH¯¡NG 4 120

KÀT LUÀN VÀ ĐÂ XUÂT 120

4.1 KÁt luÁn 120

4.2 ĐÃ xuÃt 121

DANH MĀC CÔNG TRÌNH CÔNG Bà CĂA TÁC GIÀ 122

TÀI LIàU THAM KHÀO 123

PHĀ LĀC 151

DANH M ĀC CÁC KÝ HIâU, CHĀ VI¾T TÌT

ABTS 2,2-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate) BDE Bond dissociation enthalpy

HLA Human leucocyte antigen

LYM B¿ch cầu lympho

MAE Microwvave assisted extraction

TBARs Các chÃt phÁn ąng acid thiobarbituric

TCA Acid tricloacetic

TCVN Tiêu chuẩn Viát Nam

TPA Texture profile analysis

TVB-N Táng hàm l°ÿng nit¢ bay h¢i

TNF Tumor necrosis factor nk: natural killer cell

WBC White Blood Cell NEU

M ĀC LĀC BÀNG

BÁng 1.1 Một sá hÿp chÃt polyphenol và khÁ năng kháng khuẩn, kháng mác 4

BÁng 1.2 BÁc phân lo¿i căa mãng cầu ta 5

BÁng 3.1 Ành h°áng tỷ lá enzyme pectinase/cellulase Án TPC và TEAC 44

BÁng 3.2 Ành h°áng tỷ lá NL/DM Án TPC và TEAC 47

BÁng 3.3 Ành h°áng thßi gian trích ly Án TPC và TEAC 48

BÁng 3.4 Ành h°áng pH Án TPC và TEAC 50

BÁng 3.5 Ành h°áng căa nhiát ộ trích ly Án TPC và TEAC 51

BÁng 3.6 Ành h°áng căa nßng ộ enzyme Án TPC và TEAC 54

BÁng 3.7 KÁ ho¿ch thực nghiám RSM tái °u hóa TPC, TEAC theo DPPH, ABTS 63 BÁng 3.8 Há sá căa ph°¢ng trình hßi quy căa 3 hàm māc tiêu Y1, Y2, Y3 66

BÁng 3.9 Độ ẩm, TPC, TEAC căa dịch chiÁt và bột sÃy phun 70

BÁng 3.10 Độ màu và hiáu suÃt thu hßi bột sÃy phun từ vß mãng cầu ta 71

BÁng 3.11 Tỷ trọng, ộ hút ẩm, ộ hòa tan, góc nghỉ căa chÃt mang và bột sÃy phun 72

BÁng 3.12 Ph°¢ng trình hßi quy và thßi gian bÁo quÁn TPC, TEAC căa dịch chiÁt giÁm còn 85% so với ban ầu 77

BÁng 3.13 Đánh giá ộ tin cÁy căa mô hình shelf 3 life căa dịch chiÁt 79

BÁng 3.14 Ph°¢ng trình hßi quy và thßi gian bÁo quÁn TPC, TEAC căa bột sÃy phun suy giÁm còn 85% 82

BÁng 3.15 Đánh giá ộ tin cÁy căa mô hình shelf 3 life bột sÃy phun GA 10% 83

BÁng 3.16 Các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học có trong dịch chiÁt và bột sÃy phun 84 BÁng 3.17 Đ°ßng kính vòng kháng khuẩn căa cao chiÁt vß quÁ mãng cầu ta 86

BÁng 3.18 Đ°ßng kính vòng kháng khuẩn căa bột sÃy phun MD 12% 87

BÁng 3.19 Đ°ßng kính vòng kháng khuẩn căa bột sÃy phun GA 10% 88

BÁng 3.20 Ành h°áng căa dịch chiÁt mãng cầu Án l°ÿng thąc ăn, n°ớc uáng tiêu thā và khái l°ÿng c¢ thể chuột 104 BÁng 3.21 Ành h°áng căa dịch chiÁt Án thành phần huyÁt học máu ngo¿i vi chuột

BÁng 3.22 Ành h°áng căa dịch chiÁt mãng cầu Án thành phần sinh hóa máu ngo¿i

vi chuột 107BÁng 3.23 Ành h°áng căa dịch chiÁt mãng cầu Án khái l°ÿng c¢ quan chuột 108BÁng 3.24 Ành h°áng dịch chiÁt mãng cầu Án thành phần n°ớc tiểu chuột 109BÁng 3.25 Thay ái l°ÿng b¿ch cầu trong máu ngo¿i vi căa chuột bình th°ßng 113BÁng 3.26 Thay ái l°ÿng b¿ch cầu máu ngo¿i vi căa chuột bình th°ßng và viêm khớp d¿ng thÃp 113BÁng 3.27 Ành h°áng căa chiÁt xuÃt vß mãng cầu ta trên táng sá b¿ch cầu ngo¿i vi

á chuột viêm khớp d¿ng thÃp 114BÁng 3.28 Ành h°áng căa dịch chiÁt xuÃt lên các lo¿i b¿ch cầu ngo¿i biên á chuột viêm khớp d¿ng thÃp 114BÁng 3.29 Nhiát ộ khớp cá chân căa chuột bình th°ßng và viêm khớp d¿ng thÃp 115BÁng 3.30 Nhiát ộ khớp cá chân á chuột viêm khớp d¿ng thÃp 116

M ĀC LĀC HÌNH

Hình 1.1 QuÁ mãng cầu ta 6

Hình 2 1 Nguyên liáu vß mãng cầu 18

Hình 2.2 S¢ ß nghiên cąu 21

Hình 2.3 S¢ ß kháng khuẩn 28

Hình 3.1 Độ ẩm nguyên liáu theo thßi gian sÃy á những nhiát ộ khác nhau 42

Hình 3.2 TPC và TEAC căa vß mãng cầu theo nhiát ộ sÃy 43

Hình 3.3 Ành h°áng căa thßi gian trích ly Án TPC và TEAC 55

Hình 3.4 Ành h°áng căa nßng ộ ethanol 56

Hình 3.5 Ành h°áng căa tỷ lá NL/DM 57

Hình 3.6 Ành h°áng căa nhiát ộ 58

Hình 3.7 Ành h°áng căa nßng ộ ethanol 59

Hình 3.8 Ành h°áng tỷ lá NL/DM 60

Hình 3.9 Ành h°áng căa thßi gian trích ly 61

Hình 3.10 Ành h°áng căa công suÃt 61

Hình 3.11 Ành h°áng căa công suÃt 67

Hình 3.12 Mô hình dự oán và viác tái °u hóa chiÁt xuÃt polyphenol 68

Hình 3.13 Gum arabic 10% 74

Hình 3.14 Maltodextrin 12% 74

Hình 3.15 Đ°ßng cong phân bá kích th°ớc h¿t căa GA (a) và GA 10% (b) 75

Hình 3.16 Đ°ßng cong phân bá kích th°ớc h¿t căa MD (a) và MD 12% (b) 75

Hình 3.17 Sự giÁm TPC căa dịch chiÁt theo nhiát ộ 77

Hình 3.18 Sự giÁm DPPH căa dịch chiÁt theo nhiát ộ 77

Hình 3.19 Sự giÁm ABTS căa dịch chiÁt theo nhiát ộ 77

Hình 3.20 Sự giÁm TPC căa GA 10% theo nhiát ộ 81

Hình 3.21 Sự giÁm DPPH căa GA 10% theo nhiát ộ 81

Hình 3.22 Sự giÁm DPPH căa GA 10% theo nhiát ộ 81

Hình 3.23 Đ°ßng kính vòng kháng khuẩn dịch chiÁt vß mãng cầu 86

Hình 3.24 Đ°ßng kính vòng kháng khuẩn căa bột sÃy phun MD 12% 88

Hình 3.25 Đ°ßng kính vòng kháng khuẩn căa bột sÃy phun GA 10% 89

Hình 3.26 Sự thay ái khái l°ÿng căa các m¿u theo thßi gian bÁo quÁn 91

Hình 3.27 Sự thay ái giá trị pH căa các m¿u theo thßi gian bÁo quÁn 93

Hình 3.28 Sự thay ái chỉ sá PV căa các m¿u theo thßi gian bÁo quÁn 94

Hình 3.29 Chỉ sá TVB-N căa các m¿u theo thßi gian bÁo quÁn 95

Hình 3.30 Sự thay ái chỉ sá TBARs căa các m¿u theo thßi gian bÁo quÁn 97

Hình 3.31 Sự thay ái giá trị L* căa các m¿u theo thßi gian bÁo quÁn 98

Hình 3.32 Sự thay ái giá trị a* căa các m¿u theo thßi gian bÁo quÁn 99

Hình 3.33 Sự thay ái giá trị b* căa các m¿u theo thßi gian bÁo quÁn 99

Hình 3.34 Sự thay ái giá trị E* căa các m¿u theo thßi gian bÁo quÁn 100

Hình 3.35 Độ chắc các m¿u theo thßi gian bÁo quÁn 101

Hình 3.36 Độ àn hßi căa các m¿u theo thßi gian bÁo quÁn 102

Hình 3.37 Hình thái ngoài tim, gan, thÁn và d¿ dày căa chuột thí nghiám 110

Hình 3.38 Trọng l°ÿng c¢ thể á chuột ái chąng và chuột tiêm CFA trong 12 ngày 112

Hình 3.39 Ành h°áng dịch chiÁt Án trọng l°ÿng chuột 112

Hình 3.40 Đ°ßng kính mắt cá chân căa chuột viêm khớp d¿ng thÃp (FCA) và chuột bình th°ßng 116

Hình 3.41 Đ°ßng kính mắt cá chân căa chuột viêm khớp d¿ng thÃp (FCA) và chuột bình th°ßng 117

Hình 3.42 Hình thái ngoài khớp cá chân chuột bị viêm khớp d¿ng thÃp do FCA sau 2 tuần 119

Hình 3.43 Hình thái ngoài khớp cá chân chuột bị viêm khớp d¿ng thÃp với tác dāng căa AS sau 10 tuần 119

M æ ĐÄU

Viác ąng dāng dịch chiÁt thô từ thực vÁt có nhiÃu thành phần có ho¿t tính sinh học trong chÁ biÁn thực phẩm hián ang là một xu h°ớng trong nghiên cąu ąng dāng t¿i Viát Nam và ThÁ giới Và nhiÃu nghiên cąu cho thÃy, dịch chiÁt chąa polyphenol có tác dāng cháng oxy hóa, ôi hóa trong bÁo quÁn các sÁn phẩm thịt cá nhằm kéo dài thßi gian bÁo quÁn (Maqsood và ctv, 2015) Trong công nghá bÁo quÁn rau quÁ, polyphenol kÁt hÿp với màng bao ăn °ÿc nh° alginate, carragenan, gum arabic làm giÁm mÃt n°ớc, thay ái cÃu trúc, giÁm hóa nâu trái cây khi cắt lát và tăng thßi gian tßn trữ rau quÁ (Azarakhsh và ctv, 2012) Đặc biát h¢n nữa, một sá polyphenol

có tác dāng kháng khuẩn, kháng mác cao nh° flavonoids, tannin, phenolic acid, saponin, coumarin, stilbenes (Daglia, 2012) Tuy nhiên, hiáu quÁ bÁo quÁn các hÿp chÃt polyphenol phā thuộc vào sự án ịnh và tính khÁ dāng căa các thành phần hóa học này Trong thực tÁ, nßng ộ polyphenol sau trích ly khá cao và có h°¢ng vị cÁm quan thÃp Do ó, polyphenol th°ßng à xuÃt sử dāng á d¿ng bột sÃy phun nâng cao tính tián dāng sÁn phẩm và h¿n chÁ °ÿc nh°ÿc iểm trên (Ersus và Yurdagel, 2007) Mãng cầu ta trong y học cá truyÃn Viát Nam ã °ÿc sử dāng làm thuác cháng viêm, chữa lành vÁt th°¢ng, thuác cháng sát rét, iÃu trị tiêu chÁy và kiÁt lỵ Dầu từ lá mãng cầu có khÁ năng cháng muỗi (Saxena và ctv, 2009), cao từ lá mãng cầu có khÁ năng

cháng nÃm mác (Kalidindi và ctv, 2015) Dịch chiÁt từ vß cây mãng cầu có khÁ năng kháng khuẩn tát ái với các vi khuẩn gây bánh thông th°ßng nh° Bacillus coagulans,

l°ÿng cao còn phÁi có ho¿t tính sinh học cao, quá trình này phā thuộc nhiÃu vào ph°¢ng pháp trích ly Hián nay, quÁ mãng cầu ta °ÿc tiêu thā d°ới d¿ng quÁ t°¢i á thị tr°ßng trong n°ớc hoặc chÁ biÁn d°ới d¿ng r°ÿu vang hay n°ớc ép trái cây lên men Vß mãng cầu °ÿc xem là phā phẩm căa ngành công nghiáp sÁn xuÃt thực phẩm r°ÿu vang, n°ớc ép lên men, thịt quÁ óng hộp Thành phần chính căa vß mãng cầu

ta gßm carbohydrate, protein, amino acid, glycosidice, alkaloid, flavonoid, phenolic, steroid, saponin, các chÃt béo và chÃt béo no (Linn và ctv, 2013) Nên tÁn dāng ngußn

thực phẩm, d°ÿc phẩm s¿ t¿o ra các sÁn phẩm có giá trị gia tăng và h¿n chÁ sự ô nhißm môi tr°ßng Viác lựa chọn ph°¢ng pháp trích ly ể thu nhÁn dịch chiÁt có hàm l°ÿng polyphenol và ho¿t tính sinh học cao phā thuộc vào iÃu kián kinh tÁ, d¿ng nguyên liáu, lo¿i hÿp chÃt polyphenol, bÁn chÃt dung môi & (Wang và Weller, 2006) Tuy nhiên, viác nghiên cąu trích ly và ąng dāng các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học từ vß mãng cầu ta trong công nghá thực phẩm còn khá h¿n chÁ Do ó, nghiên cąu ph°¢ng pháp trích ly các hÿp chÃt polyphenol từ vß mãng cầu ta ể ¿t hiáu quÁ cao nhÃt và ąng dāng dịch chiÁt sau khi trích ly trong quá trình bÁo quÁn, chÁ biÁn thực phẩm có ý nghĩa khoa học rÃt quan trọng và mang tính cÃp thiÁt trong viác cung cÃp thực phẩm an toàn Vì những lý do trên, Ã tài <Trích ly các hÿp chÃt có ho¿t

tính sinh hãc tć vå mãng cÅu ta (Annona squamosa L.) và ąng dāng trong thăc

ph Çm= ã °ÿc thực hián

M āc tiêu căa luËn án

Nghiên cąu các thông sá tái °u ể trích ly các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học có trong

vß mãng cầu ta, từ ó ánh giá khÁ năng kháng khuẩn in vitro, ánh giá ộc tính, kháng viêm khớp d¿ng thÃp in vivo á chuột; ąng dāng dịch chiÁt trong bÁo quÁn tôm

thẻ chân trắng và xây dựng mô hình shelf-life dịch chiÁt và bột sÃy phun dịch chiÁt

Ý ngh*a khoa hãc và thăc tián căa luËn án

- Tính cÃp thi¿t: ĐÃ tài nghiên cąu khai thác các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học từ

vß quÁ mãng cầu ta (Annona squamosa L.), má ra triển vọng ąng dāng các hÿp chÃt này một cách hiáu quÁ trong bÁo quÁn và chÁ biÁn thực phẩm

- Ý ngh*a khoa hãc: ĐÃ tài ã sử dāng các kỹ thuÁt khác nhau nh° enzyme, vi

sóng ể thu dịch chiÁt từ vß quÁ mãng cầu ta, sÃy phun thu sÁn phẩm d¿ng bột và

ánh giá các tính chÃt sinh học căa chúng (khÁ năng kháng oxy hóa và khÁ năng kháng khuẩn in vitro, ộc tính cÃp và bán mãn tính, khÁ năng kháng viêm khớp in

thẻ chân trắng

- Ý ngh*a thăc tián: KÁt quÁ căa à tài là c¢ sá ể tÁn dāng một lo¿i phā phẩm

nông nghiáp là vß mãng cầu ta ể thu các sÁn phẩm có hàm l°ÿng polyphenol cao,

có thể ąng dāng nh° một chÃt cháng oxy hóa tự nhiên có ngußn gác thực vÁt có thể thay thÁ các chÃt bÁo quÁn hóa học, cũng nh° sử dāng ể phát triển các sÁn phẩm thực phẩm chąc năng

- Nhāng đißm mãi căa luËn án

Đây là công trình nghiên cąu có tính há tháng trên một ái t°ÿng nguyên liáu mới

là vß quÁ mãng cầu ta (Annona Squamosa L.) cā thể nh° sau:

• Xác inh nhiát ộ sÃy phù hÿp ể sÃy vß mãng cầu ta v¿n giữ °ÿc hàm l°ÿng polyphenol và ho¿t tính kháng oxy hóa cao

• Tái °u hóa iÃu kián trích ly làm giàu hàm l°ÿng polyphenol táng và ho¿t tính kháng oxy hóa từ vß mãng cầu

• ĐÃ tài ã vi bao sÃy phun dịch chiÁt vß mãng cầu với chÃt mang gum arabic

• Xây dựng mô hình shelf-life dịch chiÁt, bột sÃy phun dịch chiÁt vß mãng cầu

• Ąng dāng dịch chiÁt trong bÁo quÁn tôm thẻ chân trắng á iÃu kián l¿nh

• Đánh giá tính an toàn và khÁ năng kháng viêm khớp d¿ng thÃp á chuột căa dịch chiÁt vß mãng cầu ta

CH¯¡NG 1 TêNG QUAN 1.1 Tëng quan vÁ polyphenol

Hÿp chÃt polyphenol là những hÿp chÃt trong phân tử chąa một hoặc nhiÃu vòng benzen, trong ó có một hoặc nhiÃu nhóm hydroxyl (-OH) gắn với vòng benzen và một sá chÃt có ho¿t tính kháng oxy hóa cao h¢n cÁ vitamin Polyphenol phân bá rộng rãi trong giới thực vÁt, ¿i dián cho một nhóm lớn có nhiÃu h¢n 10.000 hÿp chÃt khác nhau (Kuppusamy và ctv, 2015)

1.1.1 Phân lo¿i polyphenol

Polyphenol °ÿc phân thành 3 nhóm chính nh° sau: flavonoids (flavones, flavanones, flavonols, flavanonols, flavan-3-ols, isoflavones, neoflavonoids, chalcones, anthocyanidins); stilbenoids; phenolic acids (benzoic acids, hydroxycinnamic acids) (Papuc và ctv, 2017)

Flavonoid: là một nhóm hÿp chÃt tự nhiên lớn th°ßng gặp trong thực vÁt, còn gọi là

những hÿp chÃt màu phenol thực vÁt, t¿o màu cho nhiÃu rau, quÁ, hoa Phần lớn có màu vàng (flavus nghĩa là màu vàng), một sá có màu xanh, tím, ß, không màu cũng

°ÿc xÁp vào nhóm này vì và mặt hóa học, chúng có cùng bộ khung (Ajila và ctv, 2011)

VÃ mặt hóa học, flavonoid là một chuỗi polyphenolic gßm 15 nguyên tử cacbon và 2 vòng benzen, có cÃu trúc c¢ bÁn là 1,3-diphenylpropan, nghĩa là 2 vòng benzen A và

B nái nhau qua một dây có 3 cacbon, nên th°ßng °ÿc gọi là C6-C3-C6 Vòng th¢m bên trái gọi là vòng A, vòng th¢m bên phÁi gọi là vòng B, vòng trung gian chąa nguyên tử oxy gọi là vòng pyran (Fantini và ctv, 2015)

Flavonoid là chÃt cháng oxi hóa bÁo vá tÁ bào, ngăn ngừa nguy c¢ x¢ vữa ộng m¿ch, tai biÁn m¿ch máu, lão hóa, ung th°, cháng dị ąng, cháng huyÁt khái và cháng giãn m¿ch máu (Huntley, 2009) Ho¿t tính cháng oxi hóa căa flavonoid m¿nh h¢n nhiÃu

so với vitamin C, E, selenium và k¿m Flavonoid có tác dāng cháng co thắt những c¢

quan c¢ tr¢n nh°: túi mÁt, áng d¿n mÁt, phÁ quÁn và một sá c¢ quan khác NhiÃu flavonoid thuộc nhóm flavon, flavanon, flavonol có tác dāng thông tiểu rõ rát

Acid phenolic

Acid phenolic thuộc lo¿i non-flavonoid, °ÿc chia thành hai nhóm chính: acid benzoid và các d¿n xuÃt acid cinnamic, dựa trên cÃu trúc bộ khung carbon t°¢ng ąng hydroxybenzoic acid (C1-C6) và hydroxycinamic (C3-C6) Hydroxybenzoic acid gßm có: acid gallic, p-hydroxybenzoic, protocatechuic, vanillic, acid xyringic Acid hydroxycinamic gßm có: acid caffeic, ferulic, p-coumaric, sinapic,&(Gallardo và ctv, 2006)

Acid phenolic trong thực vÁt có chąc năng rÃt a d¿ng nh° hÃp thā dinh d°ỡng, táng hÿp protein, quang hÿp &

Acid caffeic ngăn chặn có chọn lọc quá trình sinh táng hÿp leukotrienes, liên quan

Án các bánh iÃu hòa mißn dịch, hen suyßn và dị ąng (Yasuko và ctv, 1984) Acid caffeic và một sá ester căa chúng có ho¿t tính cháng khái u, cháng l¿i chÃt sinh ung th° ruột kÁt (Yasuko và ctv, 1984) và ho¿t ộng nh° chÃt ąc chÁ vi-rút suy giÁm mißn dịch á ng°ßi (King và ctv, 1999) Acid chlorogenic có thể ąc chÁ quá trình peroxyd hóa lipid trong gan chuột do carbon tetrachloride - chÃt gây ung th° gan Acid caffeic và acid ferulic có thể giÁi ộc các chÃt chuyển hóa hydrocacbon th¢m

a vòng gây ung th° (Huang và ctv, 1996)

Stilbene là phytoalexins (C6-C2-C6) có trong thực vÁt có thể cháng l¿i mầm bánh, các tán th°¢ng gây ra á ng°ßi Thành phần chính stilbene là resveratrol (3,5,4'-trihydroxystilbene) có khÁ năng cháng oxy hóa, cháng viêm, cháng ung th° và cháng lão hóa (Crozier và ctv, 2009)

Ligans thực vÁt là một trong nhiÃu lo¿i phytoestrogen, có hiáu quÁ nh° chÃt cháng oxy hóa, giÁm nguy c¢ ung th° và các bánh tim m¿ch (Vanharanta và ctv, 1999) Các polyphenol khác: ¿i dián chính là curcumin (1,7-bis-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,6-heptadiene-3,5-dione) có trong că nghá, có ho¿t tính kháng u,

cháng viêm, cháng oxy hóa, iÃu hòa mißn dịch và kháng khuẩn á loài gặm nhÃm và con ng°ßi (Masuelli và ctv, 2013)

1.1.2 Ho¿t tính sinh hãc căa polyphenol

Polyphenol là những chÃt chuyển hóa thą cÃp do thực vÁt tự sÁn xuÃt ể bÁo vá tr°ớc

sự tÃn công căa các sinh vÁt khác dựa trên ặc tính kháng khuẩn và kháng dinh d°ỡng

Sử dāng nhiÃu thực phẩm giàu polyphenol nh° trái cây, rau, quÁ và ngũ các nguyên cám s¿ giÁm các nguy c¢ và bánh m¿n tính nh° tim m¿ch, ung th°, tiểu °ßng v.v (Mierziak và ctv, 2014)

Hoạt tính kháng oxy hóa của polyphenol

Ho¿t tính sinh học căa các hÿp chÃt phenolic gßm lo¿i bß các gác tự do, ąc chÁ quá trình oxy hóa lipid, giÁm sự hình thành hydroperoxide (Sato và ctv, 1996)

Hoạt tính chống ung thư

NhiÃu polyphenol nh° proanthocyanidins, flavonoid, resveratrol, tannin, epigallocatechin-3-gallate, acid gallic và anthocyanin có tác dāng cháng ung th° á d¿ dày, tá tràng, ruột kÁt, gan, phái, tuyÁn vú hoặc da (Johnson và ctv, 1994) Proanthocyanidins có khÁ năng cháng ung th° vú và ąc chÁ di căn ung th° (Mantena

và ctv, 2006) Anthocyanin giÁm sự suy giãn tĩnh m¿ch và hình thành khái u máu (Bagchi và ctv, 2004) Resveratrol, epigallocatechin-3-gallate cháng ung th° tuyÁn tiÃn liát, gây chÁt các tÁ bào khái u (Landis-Piwowar và ctv, 2007) Acid gallic, flavone có khÁ năng ngăn chặn hình thành ung th° ruột bằng cách ąc chÁ DNA (Giftson và ctv, 2010)

Hoạt tính chống viêm

Resveratrol có trong nho có ặc tính cháng viêm, giÁm viêm, ngăn chặn các cytokine tiÃn viêm và ngăn chặn gen có khÁ năng gây viêm mãn tính (Chuang và McIntosh, 2011)

Hoạt tính kháng khuẩn của polyphenol

Polyphenol có khÁ năng kháng khuẩn, kháng nÃm và kháng vi-rút Các nhóm hÿp chÃt nh° flavan-3-ols, flavanol, tanins có tính kháng khuẩn cao do ąc chÁ sự hình thành màng tÁ bào sinh học, trung hòa ộc tá vi khuẩn Ho¿t tính kháng khuẩn căa

polyphenol °ÿc ąng dāng nhiÃu trong bÁo quÁn thực phẩm, chữa bánh nhằm h¿n chÁ sử dāng chÃt bÁo quÁn hóa học và kháng sinh táng hÿp (Daglia, 2012)

BÁng 1.1 Một sá hÿp chÃt polyphenol và khÁ năng kháng khuẩn, kháng mác Lo¿i polyphenol Lo¿i vi khuẩn Lo¿i nÃm mác/ nÃm men Flavonoid V.cholerae, S.mutans, C.jejuni

C.perfringes, E.coli, B.Cereus H.pylori, S.aureus, L.acidophilus A.naeslundii, P.oralis,

P.gingivalis, P.melaninogenica, F.nucleatum, C.pneumonia

Candida albicans Microsporum gypseum Trichophyton

mentagrophytes Trichophyton rubrum

Tannin Salmonella, Staphylococcus

Helicobacter, E.coli, Bacillus Clostridium, Campylobacter Listeria

Saponin S.mutans, E.coli, S.aureus

Coumarin Salmonella, Staphylococcus

mutans, S aureus, E.coli

Candida albicans, Cadida parapsilosis

Stilbene Pseudomonas aeruginosa, S

aureus, B subtilis

C herbarum, M

aucupariae, A niger, B cinerea

(Daglia, 2012)

1.2 T ëng quan vÁ mãng cÅu ta

1.2.1 Nguén gçc

Mãng cầu ta có tên khoa học là Annona squamosa Linn, thuộc họ Annonaceae,

khoÁng 135 chi với 2300 loài, chi iển hình là Annona (Bhardwaj và ctv, 2014) Mãng cầu ta là một lo¿i thực vÁt có hoa, thân

gỗ, °ÿc phân bá á vùng nhiát ới Nam Mỹ và

Tây Ân Ngày nay, mãng cầu °ÿc trßng á các

vùng nhiát ới và cÁn nhiát ới trên toàn thÁ giới

(Bhardwaj và ctv, 2014) Mãng cầu ta °ÿc

phân bÁc nh° trong BÁng 1.2

T¿i Viát Nam, á miÃn Nam, mãng cầu ta °ÿc

trßng nhiÃu nhÃt á tỉnh Tây Ninh (khu vực

quanh núi Bà Đen) và một sá tỉnh khác nh° Bà

Rịa-Vũng Tàu, An Giang à miÃn Bắc, mãng

cầu ta °ÿc trßng chă yÁu á các tỉnh có rừng

nh° L¿ng S¢n, Lào Cai, S¢n La

1.2.2 Đặc đißm

Mãng cầu ta mọc á ộ cao 1000 m so với mực n°ớc biển, phát triển và sinh tr°áng tát trong iÃu kián nhiát ộ 10-200C và tái a là 22-280C

QuÁ có d¿ng hình tròn, hình oval hoặc hình nón, °ßng kính khoÁng 6-10 cm, vß dày

có vÁy hoặc những mắt nhß, khái l°ÿng khoÁng 100-230 g/quÁ, thịt quÁ có màu trắng kem, ngọt và ngon Phần ăn °ÿc chiÁm 28-37% táng trọng l°ÿng quÁ và h¿t chiÁm với 23-40% H¿t mãng cầu ta có hình bầu dāc, màu nâu en, cąng

Vß quÁ chąa nhiÃu hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học, có khÁ năng kháng oxy hóa và kháng khuẩn, ây là ngußn nguyên liáu tiÃm năng rÃt áng ể nghiên cąu và khai thác (SVGK Dowluru và ctv, 2015) và các hÿp chÃt sinh học có trong vß quÁ mãng cầu với tỷ lá nh° sau: 15,78% alkaloid; 20,05% tannin; 5,86% saponin và 23,87% flavonoid (Roy và Sasikala, 2016)

BÁng 1.2 BÁc phân lo¿i căa mãng

cầu ta BÁc phân lo¿i Giới Plantae Ngành Magnoliophyta Lớp Magnoliopsida

Bộ Magnoliales

Họ Annonaceae Chi Annona Loài Annona squamosa

1.2.3 Ho¿t tính sinh hãc mãng cÅu

Trong các loài Annona, ho¿t tính d°ÿc lý cây mãng cầu ta v°ÿt trội h¢n các loài

còn l¿i Các ho¿t tính d°ÿc lý từ các bộ phÁn căa cây mãng cầu ta nh° cháng oxy hóa, giÁm au, cháng viêm, kháng khuẩn và gây ộc tÁ bào ung th°, h¿ °ßng huyÁt, cháng ái tháo °ßng, bÁo vá gan v.v (Pandey và ctv, 2011) Trong nông nghiáp, dịch chiÁt xuÃt từ lá, h¿t mãng cầu ta có thể diát côn trùng, sâu bánh (Ashok Sharma và ctv, 2013) Do ó, viác khai thác tái °u các bộ phÁn căa cây mãng cầu

ta °ÿc các nhà khoa học quan tâm, nghiên cąu hián nay

1.2.4 Mát sç nghiên cąu vÁ mãng cÅu ta trong và ngoài n°ãc

Phan và Nguyßn, (2019) ã tái °u hoá quá trình lên men r°ÿu dịch quÁ mãng cầu

ta với nÃm men Saccharomyces cerevisiae bằng ph°¢ng pháp bà mặt áp ąng với thông sá hàm l°ÿng chÃt khô hòa tan là 19°Bx, tỉ lá men 2%, thßi gian lên men là

44 giß, sÁn phẩm có ộ cßn 5,10% (v/v)

Dũng & H°ßng, (2019) ã ánh giá Ánh h°áng căa nhiát ộ, thßi gian, tỷ lá enzyme celluclast 1,5L, dung môi Án ly hÿp chÃt polyphenol từ vß mãng cầu ta có hỗ trÿ enzyme KÁt quÁ cho thÃy, dịch trích có hàm l°ÿng polyphenol cao nhÃt với thßi gian

Hình 1.1 QuÁ mãng cầu ta

trích ly 67,69 phút, nhiát ộ 510C và tỷ lá enzyme celluclast 1,5L/dung môi là 1,8% (v/w), dịch chiÁt thu °ÿc có hàm l°ÿng polyphenol táng sá là 48,23 mg GAE/g CK Kothari và ctv, (2009) ã trích ly h¿t quÁ mãng cầu có hỗ trÿ vi sóng tỷ lá nguyên liáu/ dung môi là 1/50 (g/mL), thßi gian trích ly từ 50 giây Án 5 phút ngắn h¢n nhiÃu

so với ngâm chiÁt bằng soxhlet, hỗn hÿp dung môi chloroform/ methanol, chloroform/ hexane cho hiáu quÁ trích ly cao h¢n so với hỗn hÿp dung môi n°ớc/metanol và ethanol

Deng và ctv, (2015) ã tái °u hóa hàm l°ÿng polyphenol táng và ho¿t tính kháng oxy hóa dịch chiÁt vß mãng cầu ta có hỗ trÿ siêu âm bằng ph°¢ng pháp áp ąng bà mặt KÁt quÁ hàm māc tiêu hàm l°ÿng polyphenol táng, ho¿t tính kháng oxy hóa có mô hình bÁc 2 và t°¢ng thích với thực nghiám á iÃu kián tái °u nßng ộ dung môi (13,2%-46,8%), thßi gian siêu âm (33,2-66,8 phút) và nhiát ộ (43,2-76,80C), tỷ lá dung môi trên chÃt rắn là 20/1 (mL/g), aceton 32,68% và 67,230C trong 42,54 phút dịch chiÁt có táng hàm l°ÿng phenolic là 26,81 mg GAE/g CK

HemLatha và Satyanarayana, (2015) ã trích ly rß mãng cầu ta bằng dung môi cßn ể

iÃu trị viêm khớp d¿ng thÃp á chuột với tác nhân gây phù nà chân chuột là carrageenan KÁt quÁ cho thÃy với liÃu 200 và 400 mg/kg thể trọng chuột, dịch chiÁt

rß mãng cầu có khÁ năng ąc chÁ viêm tát h¢n thuác diclofenac natri (100 mg/kg) (P<0,01)

Tóm l¿i, ã có nhiÃu nghiên cąu và thành phần các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học,

trích ly có hỗ trÿ vi sóng á h¿t, siêu âm vß mãng cầu (Annona squamosa L.), khÁ

năng kháng viêm á rß mãng cầu Tuy nhiên, ch°a có nghiên cąu ầy ă, so sánh giữa các ph°¢ng pháp trích ly, ánh giá ộc tính căa dịch chiÁt vß mãng ta và ąng dāng trong bÁo quÁn thực phẩm, d°ÿc phẩm Từ ó, nội dung nghiên cąu chính căa luÁn

án °ÿc tiÁn hành nh° sau:

Nội dung 1: Nghiên cąu iÃu kián sÃy và Ánh h°áng căa ph°¢ng pháp trích ly Án hàm l°ÿng polyphenol (TPC) và ho¿t tính kháng oxy hóa (TEAC) Xác ịnh iÃu kián trích ly tái °u

Nội dung 2: SÃy phun dịch chiÁt vß mãng cầu ta

Nội dung 3: Ąng dāng dịch chiÁt vß mãng cầu ta trong bÁo quÁn tôm thẻ chân trắng

(Litopenaeus vannamei) á iÃu kián l¿nh (4±10C)

Nội dung 4: Đánh giá tính an toàn và ąng dāng dịch chiÁt mãng cầu trong iÃu trị viêm khớp d¿ng thÃp á chuột

1.3 Tëng quan vÁ trích ly

Trích ly là quá trình một hÿp chÃt chuyển từ pha này sang pha khác bằng cách cho hai pha tiÁp xúc với nhau Māc tiêu là tách biát và cô lÁp các hÿp chÃt cā thể từ một hỗn hÿp căa nhiÃu hÿp chÃt hay tách chÃt māc tiêu ra khßi t¿p chÃt Hai pha Ãu có thể á tr¿ng thái lßng gọi là kỹ thuÁt trích ly lßng - lßng Trích ly cũng có thể thực hián giữa một pha rắn và một pha lßng (kỹ thuÁt trích ly rắn - lßng), hoặc giữa pha khí với pha lßng còn gọi là hÃp thā (Roy và Sasikala, 2016)

1.3.1 Nguyên lý quá trình trích lytrích ly

Ph°¢ng pháp trích ly bằng dung môi là cho dung môi tiÁp xúc với m¿u trích ly (hai pha lßng- rắn tiÁp xúc với nhau một phần hoặc toàn bộ) Hÿp chÃt cần trích ly s¿ hòa tan vào dung môi cho Án khi ¿t sự cân bằng và nßng ộ

Nhiãt đá trích ly: nhiát ộ trích ly tăng, ộ nhớt dung môi giÁm, tác ộ khuÁch tán

các phân tử hòa tan vào dung môi tăng

Thåi gian trích ly: thßi gian trích ly tăng, l°ÿng chÃt khuÁch tán tăng nh°ng thßi

gian trích ly kéo dài s¿ không mang l¿i hiáu quÁ kinh tÁ

Kích th°ãc nguyên liãu: kích th°ớc nguyên liáu quá to, dung môi khó thÃm °ớt

nguyên liáu d¿n Án ho¿t chÃt khó trích hÁt Ng°ÿc l¿i, kích th°ớc nguyên liáu càng nhß, thßi gian ể chÃt tan i từ không bào ra bà mặt tiÁp xúc giữa nguyên liáu và dung môi càng ngắn do ó <quãng °ßng= trích ly ã °ÿc thu hẹp, dián tích bà mặt tiÁp xúc căa nguyên liáu với dung môi cũng tăng lên, nhß ó rút ngắn thßi gian và nâng cao hiáu quÁ trích ly

1.3.3 Các ph°¢ng pháp trích ly

Các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học từ thực vÁt có thể trích ly bằng các ph°¢ng pháp

cá iển, phần lớn là dựa trên khÁ năng chiÁt xuÃt căa dung môi kÁt hÿp với các yÁu

tá nh°: nhiát ộ, thßi gian& iển hình ph°¢ng pháp này là trích ly soxhlet, trích ly

lßng - lßng có áp lực (Azmir và ctv, 2013) Tuy nhiên, các ph°¢ng pháp trích ly cá

iển có các nh°ÿc iểm thßi gian kéo dài, ộ chọn lọc trích ly thÃp, dung môi phÁi có

ộ tinh khiÁt cao Do ó, các ph°¢ng pháp trích ly mới nh° trích ly có hỗ trÿ siêu âm,

vi sóng, enzyme ã khắc phāc °ÿc các h¿n chÁ trên và an toàn với môi tr°ßng do tuân thă các tiêu chuẩn hián hành căa các c¢ quan môi tr°ßng toàn cầu và c¢ quan quÁn lý (Wong-Paz và ctv, 2017)

1.3.3.1.Ph°¢ng pháp trích ly ngâm chi¿t

Ph°¢ng pháp này dựa trên nguyên tắc sử dāng dung môi thích hÿp ể hòa tan các hÿp chÃt polyphenol trong nguyên liáu ã °ÿc xử lý thành d¿ng phù hÿp, á nhiát ộ phòng hoặc °ÿc gia nhiát Dung môi ngÃm qua thành tÁ bào nguyên liáu, các hÿp chÃt trong tÁ bào s¿ hòa tan vào dung môi Sau ó, dịch chiÁt °ÿc lọc thô, cô quay

uái dung môi Đây là ph°¢ng pháp th°ßng °ÿc thực hián trích ly các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học

Quá trình trích ly ngâm chiÁt phā thuộc vào cÃu t¿o bà mặt, kích th°ớc căa nguyên liáu trích ly Nhiát ộ trích ly càng cao càng tát vì nhiát ộ cao làm tăng ộ hòa tan căa chÃt cần chiÁt vào dung môi, làm giÁm ộ nhớt dung môi, tăng há sá khuÁch tán

và tăng quá trình trích ly Tuy nhiên, nhiát ộ quá cao có thể hòa tan một sá chÃt không mong muán và làm giÁm ho¿t tính sinh học

¯u đißm: ph°¢ng pháp trích ly ngâm chiÁt là một ph°¢ng pháp ¢n giÁn, không cần

thiÁt bị phąc t¿p ắt tiÃn và có thể thực hián với sá l°ÿng m¿u lớn

Nh°ÿc đißm: sử dāng nhiÃu dung môi hữu c¢ ộc h¿i, gây ô nhißm môi tr°ßng, Ánh

h°áng Án sąc khße Thßi gian trích ly dài, hÿp chÃt trích ly bị biÁn ái, giÁm hiáu quÁ trích ly Ngoài ra, quá trình trích ly còn chịu sự Ánh h°áng căa các yÁu tá bên ngoài nh° ánh sáng, nhiát ộ, không khí, pH v.v

M át sç nghiên cąu trích ly ngâm chi¿t

Tái °u hóa trích ly polyphenol từ Thymus serpyllum L có hỗ trÿ khuÃy từ không gia nhiát với kích th°ớc nguyên liáu 0,3 mm, tỷ lá nguyên liáu/dung môi 1/30, ethanol 50%, dịch chiÁt có hàm l°ÿng polyphenol táng 26,6 mg GAE/L và thßi gian trích ly không có sự khác biát có ý nghĩa tháng kê (Jovanovi và ctv, 2017)

Nghiên cąu tái °u hóa trích ly polyphenol từ Chokeberry bằng ph°¢ng pháp ngâm

chiÁt với iÃu kián trích ly tái °u: kích th°ớc h¿t 0,75 mm, ethanol 50%, tỷ lá nguyên liáu/dung môi là 1/20, dịch chiÁt thu °ÿc có hàm l°ÿng polyphenol táng 27,7 mg GAE/g và anthocyanin chiÁm khoÁng 0,27% hàm l°ÿng polyphenol táng (uji và ctv, 2016)

Trích ly các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học từ vß h¿t và vß quÁ Corylus avellana L

bằng ph°¢ng pháp ngâm chiÁt á nhiát ộ phòng trong thßi gian dài, hiáu quÁ trích ly

vß căa Corylus avellana L cao h¢n nguyên h¿t (khoÁng 30%) và hàm l°ÿng polyphenol 502 mg GAE/g CK (Contini và ctv, 2008)

Nh° vÁy, ph°¢ng pháp ngâm chiÁt ã °ÿc ąng dāng nhiÃu trong trích ly các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học và hiáu quÁ căa ph°¢ng pháp này phā thuộc vào kích th°ớc h¿t, tỷ lá nguyên liáu/ dung môi, nßng ộ dung môi, thßi gian trích ly v.v

1.3.3.2 Trích ly có hß trÿ enzyme

VÃ mặt sinh học, thành tÁ bào thực vÁt °ÿc cÃu t¿o nhiÃu polysaccharide liên kÁt với nhau nh° tinh bột, cellulose, hemicellulose và pectin t¿o thành hàng rào ngăn cÁn sự giÁi phóng các chÃt nội bào Trong ó, các hÿp chÃt phenolic °ÿc bao quanh bái các chuỗi polysaccharide căa thành tÁ bào nh° cellulose, hemicellulose, pectin bằng các

kÁt glycosidic với các gác °ßng thông qua nhóm OH (O- glycosidic) hoặc thông qua liên kÁt cacbon-cacbon (C-glycosidic) (Acosta-Estrada và ctv, 2014) Quá trình trích

ly sử dāng hỗn hÿp các enzyme thăy phân carbohydrate nh° cellulase, hemicellulase

và pectinase s¿ xúc tác tát h¢n ể phá vỡ cÃu trúc thành tÁ bào, ẩy nhanh quá trình giÁi phóng các phân tử sinh học nội bào, giÁi phóng polyphenol nâng cao hiáu quÁ trích ly polyphenol

Trích ly bằng enzyme có nhiÃu °u iểm nh°: hiáu quÁ trích ly cao, thân thián môi tr°ßng và thực hián dß dàng Các chÃt °ÿc trích ly có ộ tinh khiÁt cao, có họat tính sinh học cao do quá trình trích ly °ÿc thực hián trong iÃu kián ôn hòa so với các ph°¢ng pháp trích ly không enzyme (Puri và ctv, 2012)

Enzyme pectinasecó pH tái °u từ 4,0 3 5,0; nhiát ộ tái °u từ 40 3 600C và cellulase

có pH tái °u từ 4,5 3 6,0; nhiát ộ tái °u từ 50 3 600C Nhìn chung, hai enzyme này

có pH/nhiát ộ tái °u gần nhau nên viác trích ly các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học bằng hỗn hÿp enzyme s¿ tăng hiáu quÁ trích ly

M át sç nghiên cąu trích ly có hß trÿ enzyme

Với nßng ộ enzyme 2% (cellulase, pectinase và hỗn hÿp cellulase/pectinase) hỗ trÿ trích ly polyphenol từ vß táo trong 12 giß dịch chiÁt thu °ÿc có hàm l°ÿng polyphenol táng (mg/mL) lần l°ÿt là 0,30±0,02; 0,16±0,01; 0,33±0,02 á 300C; 0,34±0,01; 0,19±0,01; 0,35±0,02 á 400C và 0,34±0,01; 0,22±0,01 và 0,38±0,02 á

500C KÁt quÁ cho thÃy enzyme cellulase có kÁt quÁ cao h¢n pectinase và hỗn hÿp enzyme pectinase và cellulase dịch chiÁt có hàm l°ÿng polyphenol cao nhÃt (Park và Kim, 2009)

Sử dāng enzyme th°¢ng m¿i (celluclast 1,5L, pectinex ultra và novoferm ) thăy phân

bã nho ể thu °ÿc dịch chiÁt giàu phenolic Ho¿t tính cháng oxy hóa lần l°ÿt là 86,8±0,81; 82,9±0,31 và 90±0,37% sau 12 giß ái với celluclast 1,5 L, pectinex ultra

và novoferm á nßng ộ enzyme pha loãng 1/10 (v/v) so với nguyên liáu García và ctv, 2012)

(Gómez-1.3.3.3 Trích ly có hß trÿ vi sóng

Vi sóng là một d¿ng năng l°ÿng ián từ không ion hóa á những tần sá khác nhau, có giá trị từ 300MHz Án 300GHz Trích ly có hỗ trÿ vi sóng là quá trình sử dāng năng l°ÿng vi sóng nhằm t¿o iÃu kián thuÁn lÿi cho quá trình phân tách các chÃt cần trích

ly khßi gian bào thực vÁt, di chuyển vào dung môi (Camel, 2001) D°ới tác dāng vi sóng, n°ớc trong tÁ bào nguyên liáu nóng lên, áp suÃt bên trong tÁ bào tăng ột ngột làm các mô vỡ ra và polyphenol là hÿp chÃt l°ỡng cực (nhóm hydroxyl) có thể hÃp thā năng l°ÿng vi sóng Dung môi th°ßng sử dāng ể trích ly các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học có hỗ trÿ vi sóng là aceton, ethanol hoặc hỗn hÿp chúng Do ó, trích ly

có hỗ trÿ vi sóng là một kỹ thuÁt có thể °ÿc sử dāng cho viác trích ly các hÿp chÃt

polyphenol (Mandal và ctv, 2007)

Trích ly có hỗ trÿ vi sóng là một ph°¢ng pháp nhanh, kỹ thuÁt tự ộng nên có thể thay thÁ các ph°¢ng pháp thông th°ßng Ąng dāng ph°¢ng pháp trích ly có hỗ trÿ vi sóng là tách chiÁt các hÿp chÃt thą cÃp á thực vÁt nh° flavonoid, quinon, pheninpropanoid, terpenoid, ankaloid (Zhang và ctv, 2008)

C¢ chÁ trích ly các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học có hỗ trÿ vi sóng gßm ba b°ớc: ầu tiên là phân tách các phân tử chÃt tan ra khßi vị trí ã cá ịnh trong tÁ bào thực vÁt d°ới tác ộng căa nhiát ộ và áp suÃt, thą hai là khuyÁch tán dung môi vào bên trong thành tÁ bào thực vÁt và cuái cùng là khuyÁch tán phân tử chÃt tan từ bên trong tÁ bào sang dung môi chiÁt (Alupului và ctv, 2012)

Quá trình trích ly polyphenol trong nguyên liáu có hỗ trÿ vi sóng khi nhiát ộ cao c°ßng ộ khuÁch tán dung môi vào gian bào thực vÁt tăng, khÁ năng trích ly tăng và các hÿp chÃt không mong muán cũng tăng Do ó, các mąc năng l°ÿng phÁi °ÿc lựa chọn một cách chính xác ể tránh nhiát ộ tăng quá cao có thể d¿n tới sự suy giÁm hàm l°ÿng polyphenol và ho¿t tính sinh học (Camel, 2001) ¯u iểm căa ph°¢ng pháp vi sóng là giÁm thßi gian trích ly, giÁm l°ÿng dung môi sử dāng, cÁi thián hiáu suÃt chiÁt trích ly, thích hÿp với các thành phần kém bÃn với nhiát và có khÁ năng tự

ộng hóa và có ộ chính xác cao (Cravotto và ctv, 2008)

M ột số nghiên cứu trích ly có hỗ trợ vi sóng

Tái °u hóa trích ly xanthone từ vß quÁ măng cāt (Garcinia mangostana L.) có hỗ trÿ

vi sóng bằng ph°¢ng pháp áp ąng bà mặt với thông sá tái °u nh°: thßi gian 2,24 phút, tỷ lá dung môi/nguyên liáu là 25 mL/g và nßng ộ ethanol 71% Dịch chiÁt thu

°ÿc có hàm l°ÿng TPC 320,31 mg GAE/g CK, ho¿t tính kháng oxy hóa theo DPPH, ABTS và FRAP lần l°ÿt 83,63%, 93,77% và144,56 mg Trolox equivalent/g CK (Mohammad và ctv, 2019)

Tái °u hóa trích ly các hÿp chÃt phenolic từ quÁ cây Melastoma sanguineum bằng ph°¢ng pháp bà mặt áp ąng có hỗ trÿ vi sóng với ethanol 31,33%, tỷ lá dung môi/nguyên liáu 32,21 mL/g, thßi gian 45 phút, nhiát ộ 52,240C và công suÃt 500

W, hàm l°ÿng phenolic táng là 39,02 ± 0,73 mg GAE/g CK Ph°¢ng pháp trích ly có

hỗ trÿ vi sóng hiáu quÁ cao h¢n so với ph°¢ng pháp ngâm n°ớc (25,79 ± 1,03 mg GAE/g CK) và trích ly bằng soxhlet (18,40 ± 1,34 mg GAE/g CK); nhiát ộ trích ly, thßi gian và l°ÿng dung môi ít h¢n (Zhao và ctv, 2018)

Tái °u hóa trích ly các hÿp chÃt phenolic từ vß Carob Pods bằng ph°¢ng pháp bà mặt áp ąng với thiÁt kÁ thí nghiám Box3 Behnken bán yÁu tá, 5 iểm trung tâm KÁt qăa cho thÃy với nhiát ộ 800C, ethanol 35% (v/v), tỷ lá MD/NL 35 mL/g và thßi gian 29,5 phút dịch chiÁt thu °ÿc có TPC 33,6 mg GAE/g CK và hàm l°ÿng polysaccharide 345,4 mg glucose/g CK (Quiles-Carrillo và ctv, 2019)

Tóm l¿i, hiáu quÁ quá trình trích ly các hÿp chÃt có ho¿t tính sinh học có hỗ trÿ vi sóng phā thuộc vào nhiÃu yÁu tá nh° tỷ lá NL/DM, thßi gian, nßng ộ dung môi, công suÃt v.v

1.4 K ỹ thuËt sÃy phun t¿o sÁn phÇm bát hòa tan

SÃy phun là một trong những ph°¢ng pháp hiáu quÁ cho viác chuyển sÁn phẩm d¿ng lßng thành sÁn phẩm d¿ng bột SÃy phun có thể áp dāng với cÁ các sÁn phẩm có thành phần nh¿y cÁm với nhiát (polyphenols) và sÁn phẩm chịu nhiát nên °ÿc sử dāng nhiÃu trong ngành d°ÿc phẩm và thực phẩm (Goula và Adamopoulos, 2004)

SÃy phun là sự bao bọc siêu nhß trong lớp polymer/lớp phă polymer có tác dāng làm giÁm ộ ẩm, h¿n chÁ tiÁp xúc oxy và các enzyme làm giÁm chÃt l°ÿng thực phẩm

(Wang và ctv, 2009) H¢n nữa, tùy thuộc vào các polymer sử dāng, có thể làm tăng tác ộ hòa tan căa sÁn phẩm và kiểm soát các biÁn ái và cÁm quan (Goubet và ctv, 1998) Thực phẩm và phā gia sau sÃy phun có d¿ng bột khô, kích th°ớc và trọng l°ÿng giÁm h¢n so với ban ầu, họat tính sinh học án ịnh, giúp cho quá trình vÁn chuyển và xử lý dß dàng h¢n

C¢ sá khoa học căa quá trình sÃy phun là quá trình bác h¢i n°ớc ra khßi vÁt liáu d°ới tác dāng căa nhiát N°ớc tách khßi vÁt liáu do chênh lách ộ ẩm giữa bà mặt và bên trong vÁt liáu; chênh lách áp suÃt h¢i riêng phần căa n°ớc t¿i bà mặt vÁt liáu và môi tr°ßng xung quanh

Sự thay ái và thành phần hóa học trong các sÁn phẩm bột sÃy phun phā thuộc vào nhiÃu yÁu tá nh°: nhiát ộ ầu vào/ầu ra, tác ộ dòng nhÁp liáu, tác ộ dòng khí, lo¿i chÃt mang, áp suÃt ầu phun v.v (Chiou và Langrish, 2007) Mỗi lo¿i chÃt mang

Ãu có °u và nh°ÿc iểm riêng và thành phần, tính chÃt, chi phí và hiáu quÁ sÃy phun Hián nay, gum arabic và maltodextrin °ÿc sử dāng rộng rãi nhÃt do bÁo vá tát polyphenol và tiÁt kiám °ÿc chi phí

1.5 Nghiên c ąu vÁ đác tính và kháng viêm căa nguyên liãu thăc vËt

Nghiên cứu độc tính

Độc tính (toxicity) là thuÁt ngữ dùng ể mô tÁ những tác ộng xÃu căa chÃt ộc lên c¢ thể sinh vÁt Tùy thuộc vào mąc ộ căa ộc tính, chÃt ộc có thể gây chÁt hoặc gây tác h¿i lên từng c¢ quan căa c¢ thể Độc tính căa thuác th°ßng xÁy ra á liÃu v°ÿt quá hiáu quÁ iÃu trị căa một lo¿i thuác, lúc ó tác dāng ộc h¿i và iÃu trị

có thể xÁy ra ßng thßi

Độc tính là một khái niám ịnh l°ÿng, miêu tÁ tính chÃt gây ộc căa chÃt ộc ái với c¢ thể sáng Biên ộ gây hiáu ąng ộc căa một chÃt ộc dao ộng rÃt lớn: từ liÃu gây hiáu ąng ộc mãn tính Án liÃu gây chÁt tąc khắc

Mô hình ộc tính cÃp LD50 căa dịch chiÁt h¿t A squamosa L bằng ethanol á liÃu uáng 5000 mg/kg thể trọng (Banna và ctv., 2016) KhÁ năng gây ộc cÃp tính qua

°ßng miáng căa chiÁt xuÃt bằng n°ớc lá A squamosa L không tìm thÃy LD50 á liÃu

5000 mg/kg thể trọng trên chuột thí nghiám (Utami, 2018) Nh° vÁy, ch°a có nghiên cąu khÁo sát ộc tính chiÁt xuÃt từ vß quÁ A squamosa L Do ó, trong nghiên cąu này chúng tôi ánh giá ộc tính cÃp và bán mãn tính qua °ßng miáng căa chiÁt xuÃt

n°ớc vß quÁ A squamosa L trên chuột nhằm khẳng ịnh tính an toàn căa chiÁt xuÃt

Nghiên c ứu kháng viêm

Những thÁp kỷ gần ây, sự gia tăng các bánh viêm mãn tính nh° tiểu °ßng, bánh tim m¿ch, hen suyßn, viêm khớp d¿ng thÃp, bánh thoái hóa thần kinh ĐiÃu quan trọng

là các bánh viêm mãn tính cũng làm tăng nguy c¢ phát triển ung th° nên cần phÁi tìm các lo¿i thuác cháng viêm mới Đó là các hÿp chÃt polyphenolic tự nhiên, chÁ phẩm trích chiÁt từ thực phẩm giàu polyphenol, có ặc tính cháng oxy hóa m¿nh Các chÃt chiÁt xuÃt tự nhiên giàu polyphenol có khÁ năng cháng viêm và khÁ năng iÃu chỉnh các chÃt trung gian gây viêm quan trọng nh° cyclooxygenase-2, prostaglandin E2, chÃt táng hÿp oxit nitric cÁm ąng và oxit nitric, trong các tÁ bào ¿i thực bào (Chojnacka và Lewandowska, 2021)

Dịch chiÁt từ Pleurotuseryngii có hàm l°ÿng phenolic là 0,11±0,02 μmol GAE/mg

CK, gßm nhiÃu hÿp chÃt nh° acid galic monohydrat, 3-(3,4-dihydroxyphenyl)- propionic acid, methyl galat, acid ellagic, acid syringic, và catechin&có tác dāng cháng viêm trong các ¿i thực bào RAW264.7 do ąc chÁ sÁn xuÃt quá mąc các chÃt trung gian gây viêm bao gßm oxit nitric và các lo¿i oxy phÁn ąng (Hu và ctv, 2018) ChiÁt xuÃt hoa houblon ã sử dāng trong quá trình lên men bia (Humulus lupulus L.) làm giÁm áng kể tác nhân gây tiÃn viêm cyclooxygenase -2 á mRNA (47%) và mąc protein (32%) sau 24 giß iÃu trị ¿i thực bào căa chuột do dịch chiÁt có nhiÃu thành phần có ho¿t tính kháng viêm nh° flavonol, proanthocyanidin, acid hydroxycinnamic

và flavanol monome cao (Caban và ctv, 2020)

1.6 Ąng dāng dách chi¿t trong bÁo quÁn thăy hÁi sÁn

Thăy sÁn là một trong những ngành kinh tÁ mũi nhọn căa n°ớc ta, ặc biát, ngành tôm (tôm thẻ chân trắng) óng vai trò quan trọng trong xuÃt khẩu thăy sÁn Viát Nam Tôm có nhiÃu chÃt ¿m, ít chÃt béo, ặc biát ít cholesterol là thực phẩm tát sąc khße (Pan và ctv, 2019) Tuy nhiên, tôm sau thu ho¿ch dß bị biÁn ái màu sắc, phân hăy

do các enzyme thăy phân protein, oxy hóa lipid và vi sinh vÁt Một sá ph°¢ng pháp bÁo quÁn thăy hÁi sÁn hián nay nh° kiểm soát nhiát ộ, ộ ẩm và sử dāng chÃt bÁo quÁn ể duy trì, kéo dài thßi gian sử dāng nh° acid ethylenediaminetetraacetic, acid benzoic, polyphosphat, acid ascorbic và natri clorua (Pan và ctv, 2019) Trong sá ó, sulfite là chÃt bÁo quÁn °ÿc sử dāng ể kiểm soát sự hình thành melanosis á tôm có thể gây dị ąng, thÁm chí rái lo¿n nghiêm trọng á những ng°ßi bị hen suyßn (Pardio

và ctv, 2011) Do ó, các ph°¢ng pháp bÁo quÁn mới, an toàn ng°ßi sử dāng, v¿n giữ

°ÿc mùi vị, màu sắc và cÃu trúc sÁn phẩm luôn °ÿc quan tâm ChÃt kháng khuẩn

tự nhiên nh° các hÿp chÃt phenolic từ thực vÁt ngày càng °ÿc chú ý nh° các chÃt phā gia tự nhiên có ho¿t tính cháng oxy hóa và kháng khuẩn có thay thÁ chÃt bÁo quÁn táng hÿp

Trong những năm gần ây, viác nghiên cąu màng bao kÁt hÿp bá sung dịch chiÁt chąa polyphenol trong bÁo quÁn l¿nh tôm và các lo¿i thăy hÁi sÁn khác khá phá biÁn

Sử dāng màng chitosan có bá sung dịch chiÁt lá chanh (Citrus aurantiifolia) bÁo quÁn l¿nh chÁ cá thác lác (Chitala chitala) ã h¿n chÁ °ÿc tác ộ oxy hoá lipid, duy trì

giá trị cÁm quan và mÁt ộ vi sinh căa sÁn phẩm v¿n nằm trong mąc cho phép sau 15 ngày bÁo quÁn l¿nh (Thăy và Th¢m, 2018)

Với dịch chiÁt cây diáp h¿ châu 0,02% (Phyllanthus amrus Schum.et Thonn) ã cÁi

thián giá trị cÁm quan, sự oxi chÃt béo cá bóp phi lê (Rachycentron canadum) trong

iÃu kián bÁo quÁn l¿nh (Phú và ctv, 2020)

Sử dāng màng polyethylen phă chitosan/acid gallic °ÿc xử lý bằng plasma ể bÁo

quÁn phi lê cá rô phi (Orechromis niloticus) Màng polyethylen phă chitosan và acid

gallic °ÿc xử lý bằng plasma có khÁ năng cháng oxy hóa tát h¢n màng chitosan phă polyethylen và chitosan hoặc acid galic riêng lẻ KÁt quÁ cá rô phi °ÿc bao phă màng

có bá acid agalic/chitosan/polyethylen có thể ąc chÁ vi sinh vÁt, làm chÁm quá trình t¿o các hÿp chÃt nit¢ dß bay h¢i sau 14 ngày bÁo quÁn Chỉ sá TBARs căa các m¿u

°ÿc bao bái các màng acid galic/polyethylen là 0,26mg MDA/kg; galic acid/chitosan/polyethylen là 0,24mg MDA/kg thÃp h¢n m¿u ái chąng là 0,30mg MDA/kg vào ngày thą 14 (Wong và ctv, 2020)

Nghiên cąu Ánh h°áng căa lớp phă chitosan-carvacrol có hoặc không bá sung caprylic Án chÃt l°ÿng tôm thẻ chân trắng Thái Bình D°¢ng (Litopenaeus vannamei) trong 10 ngày bÁo quÁn á KÁt quÁ tôm so lớp phă chitosan-carvacrol ąc chÁ áng

kể sự phát triển vi sinh vÁt hiÁu khí, pH và táng hàm l°ÿng nit¢ c¢ bÁn dß bay h¢i (TVB-N) căa với ái chąng chỉ phă lớp chitosan Lớp phă chitosan-carvacrol cũng làm chÁm quá trình hình thành sắc tá en và tính cÁm quan căa tôm Viác bá sung acid caprylic vào lớp phă chitosan-carvacrol giúp sÁn phẩm tôm có cÃu trúc tát (Wang

và ctv, 2018)

Nh° vÁy, viác kÁt hÿp dịch chiÁt giàu polyphenol với màng bao chitosan ã kéo dài thßi gian bÁo quÁn sÁn phẩm, các chỉ tiêu th°ßng °ÿc sử dāng ể nghiên cąu và bÁo quÁn thăy hÁi sÁn nh°: pH, táng nit¢ dß bay h¢i, các chÃt phÁn ąng acid thiobarbituric,

ộ cąng, cÁm quan, sá l°ÿng vi sinh vÁt

CH¯¡NG 2

V ÊT LIâU VÀ PH¯¡NG PHÁP NGHIÊN CĄU 2.1 Nguyên liãu và hóa chÃt sÿ dāng trong nghiên cąu

2.1.1 Nguyên liãu

QuÁ mãng cầu ta (Annona squamosa L.) từ vùng trßng thuộc núi Bà Đen (Tây Ninh),

°ÿc thu ho¿ch từ tháng 8 Án tháng 11 QuÁ chín °ÿc rửa s¿ch d°ới vòi n°ớc chÁy,

ể ráo, tách vß TiÁn hành sÃy nguyên liáu với các thông sá nh° sau: chiÃu cao nguyên

liáu trong khay sÃy 5-10 mm, sÃy á 55 - 600C Án ộ ẩm khoÁng 12% em nghiÃn (h¿t có kích th°ớc f 0,5mm) và óng gói chân không bằng túi PE và bÁo quÁn á nhiát

ộ phòng trong bóng tái

Tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei) °ÿc lựa chọn có cÃu trúc nguyên vẹn, còn sáng, kích cỡ 50-55 con/kg Tôm °ÿc ựng trong hộp xáp có chąa chąa á bào với tỷ lá với tỷ lá tôm/á là 1/2 (w/w) và °ÿc chuyển Án phòng thí nghiám trong vòng 30 phút T¿i phòng thí nghiám, các túi m¿u °ÿc tiÁp tāc ặt trong thùng xáp

và giữ l¿nh á 00-40C bằng tă l¿nh

Chuột nhắt trắng Swiss albino (23 - 25g), mua Vián Pasteur Tp HCM Chuột °ÿc nuôi t¿i nhà ộng vÁt, v°ßn thực nghiám Vián Công nghá Sinh học 3 Thực phẩm, Tr°ßng ¿i học Công nghiáp Tp.HCM, °ÿc duy trì á nhiát ộ (29 ± 20C), ộ ẩm t°¢ng ái (50 ± 10%), chu kỳ sáng/tái là 12 giß/12 giß (Han và ctv, 2019) Lßng nuôi chuột °ÿc làm bằng kính, kích th°ớc 15cm x 30cm Máng treo bằng inox móc vào thành lßng ể ựng thąc ăn và n°ớc uáng N°ớc uáng s¿ch chąa trong bình có vòi

Hình 2 1 Nguyên liáu vß mãng cầu