Trang 1 ỨNG DỤNG REAL TIME PCR TRONG CHẨN ĐỐN VI KHUẨN GÂY BỆNH PHONGHướng dẫn khố học : TS.. Trương Quang Toản Sinh viên thực hiện : Ngơ Hồng Mai 21126405 Lê Thị Ngọc Loan 21136394 Nguy
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO MÔN HỌC ỨNG DỤNG REAL TIME PCR TRONG CHẨN ĐOÁN VI KHUẨN GÂY BỆNH PHONG Hướng dẫn khoá học : TS Huỳnh Văn Biết ThS Trương Quang Toản Sinh viên thực hiện : Ngô Hoàng Mai 21126405 Lê Thị Ngọc Loan 21136394 Nguyễn Minh Khôi 20126271 TP Thủ Đức, ngày 27 tháng 10 năm 2023 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ BỆNH PHONG 2 Thời kỳ ủ bệnh của bệnh phong rất lâu, trung bình 3-5 năm hoặc có trường hợp có thể 5 năm,10 năm Tỉ lệ mắc bệnh ở Việt Nam 2000 2010 Tỉ lệ mắc bệnh 42 tỉnh thành đã hoàn phong tính chung cả thành mục tiêu loại trừ nước < 10/10.000 hoàn toàn bệnh phong 3 01 leprae Vi khuẩn Mycobacterium 4 1.1 Phân loại khoa học - Giới (regnum) : Bacteria - Ngành (phylum) : Actinobacteria - Bộ (ordo) : Actinomycetales - Phân bộ (subordo) : Corynebacterineae - Họ (familia) : Mycobacteriaceae - Chi (genus) : Mycobacterium Hình 1.1 Mycobacterium leprae - Loài (species) : Mycobacterium leprae - Mycobacterium leprae một trực khuẩn hiếu khí, kháng axit - Dưới kính hiển vi quang học xếp thành cụm, khối tròn và dài từ 1 - 8 µm và đường kính 0,2 - 0,5 µm 5 02 phát hiện bệnh phong Ứng dụng qPCR để 6 2.1 Phương pháp Real time PCR Bảng 2.1 Trình tự, nồng độ và fluorophores của oligonucleotide có trong xét nghiệm multiplex qPCR Một xét nghiệm qPCR đã được phát triển với các primer và probe phát huỳnh quang để phát hiện các vùng từ gen RLEP và 16S rRNA của M.leprae, và gen 18S rRNA của người 7 7 Bước Nhiệt độ Thời gian Số chu kỳ Mục đích Tiền biến tính (oC) 10 phút Biến tính 95 15 giây 1 Làm biến tính toàn bộ DNA trong mẫu Bắt cặp 95 1 phút 45 Tách các sợi DNA mạch kép thành các sợi DNA mạch đơn Kéo dài 60 20 giây Hậu kéo dài 10 phút Các primer bắt cặp bổ sung với 72 45 các vùng đầu cuối của DNA mục 72 tiêu enzyme DNA polymerase chịu 45 kéo dài các sợi DNA mới từ các mồi 1 Kéo dài toàn bộ DNA chưa được kéo dài hết 8 2.2 Kết quả Độ đặc hiệu phân tích - Không có phản ứng chéo tác dụng với các vi khuẩn gây bệnh da khác hoặc các loài mycobacteria khác Hình 2.1 Độ đặc hiệu phân tích đối với các phản ứng ghép kênh 16S rRNA và RLEP 9 Hiệu suất chẩn đoán → Giá trị tiên lượng dương tính và âm tính (PPV và NPV) lần lượt → Phương pháp có độ nhạy 91% là 100% và 90% và độ đặc hiệu 100% Hình 2.4 Hiệu suất chẩn đoán của qPCR ghép kênh mới 10 10 Sự ổn định Phương pháp duy trì được hiệu suất trong ít nhất năm tháng Hình 2.5 Độ ổn định của các phản ứng trong 5 tháng sử dụng DNA tổng hợp làm mẫu 11 2002222 www.slidesgo.es Case report 2.3 Thảo luận Nghiên cứu này đã giải quyết những hạn chế trong chẩn đoán PCR bệnh phong Các dấu hiệu được sử dụng phổ biến nhất là RLEP và 16S rRNA, với giá trị độ nhạy PCR lên tới 80% Tuy nhiên, độ nhạy mục tiêu khác nhau tùy theo loại mẫu, bối cảnh lâm sàng và nghiên cứu Sử dụng nhiều điểm đánh dấu ở định dạng ghép kênh sẽ mang lại kết quả PCR dương tính cao hơn 12 2.4 Kết luận RT-PCR là một kỹ thuật đáng tin cậy để chẩn đoán lâm sàng và thường được sử dụng cho các bệnh nhiệt đới, đặc biệt là bệnh phong 13 THANK YOU FOR LISTENING!!!