Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên GiangNghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật tại tỉnh Kiên Giang
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành: Hóa hữu cơ Mã ngành: 9440114 HUỲNH KIM YẾN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ THỰC VẬT TẠI TỈNH KIÊN GIANG Cần Thơ, 2024 CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Người hướng dẫn chính: PGS TS Nguyễn Trọng Tuân Người hướng dẫn phụ: PGS TS Trần Thanh Mến Luận án được bảo vệ trước hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp trường Họp tại: Phòng Bảo vệ Luận án Tiến sĩ, Tầng 2, Nhà Điều hành, Trường Đại học Cần Thơ Vào lúc……giờ…….ngày…… tháng…… năm…………… Phản biện 1: Phản biện 2: Có thể tìm hiểu luận án tại thư viện: Trung tâm Học liệu, Trường Đại học Cần Thơ Thư viện Quốc gia Việt Nam DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ Tạp chí KH thuộc TC ISI-Q3-IF:2.0 1 Huynh, K Y., Tran, T M., Nguyen, T T., & Nguyen, Q C T (2023) Protective Effect of Syzygium jambos (L.) Leaf Extract and Its Constituents Against LPS- induced Oxidative Stress Records of natural products, 17(4), 678-688 Tạp chí KH thuộc TC Scopus-Q3-IF:1.03 2 Huynh Kim Yen, Nguyen Trong Tuan, Nguyen Quoc Chau Thanh, Truong Thi Tu Tran, Tran Thanh Men, 2024 Antioxidant activity and chemical composition of Spirolobium cambodianum Baill Vietnam Journal of Chemistry, 2024, 1-7 Tạp chí KH nước ngoài có phản biện 3 Huynh Kim Yen, Nguyen Trong Tuan, Tran Thanh Men, 2021 Antioxidant Activity of Ethanolic Extracts of Artemisia vulgaris, Pouzolzia zeylanica and Costus speciosus International Journal of Agriculture and Biological Sciences, ISSN (2522-6584) July & Aug 2021, 1-7 4 Tran Thanh Men, Huynh Kim Yen, Huynh Thi Cam Lan, Nguyen Hoang Son, Đo Tan Khang, Nguyen Trong Tuan, 2022 Phytochemical Screening and Evaluation of Antioxidant, Antibacterial Activities of Ethanol Extract from Combretum quadrangulare Collected in Vietnam International Journal of Pharma Medicine and Biological Sciences, 11(3), 59-64 Tạp chí KH trong nước 5 Huỳnh Kim Yến, Trần Thanh Mến, Nguyễn Trọng Tuân, Nguyễn Thành Tâm, Huỳnh Thị Cẩm Lan, Phạm Thị Khánh Linh, Trương Thị Tú Trân, 2021 Khảo sát khả năng kháng oxy hóa và kháng khuẩn của cây Muồng trâu và Mai dương tại Kiên Giang Tạp chí Khoa học và Công nghệ Đại học Thái Nguyên, 226(07), 166-174 6 Huỳnh Kim Yến, Ngô Thị Cẩm Tú, Nguyễn Trọng Tuân, Trần Thanh Mến, Nguyễn Quốc Châu Thanh, Vũ Thị Yến, Lê Bích Tuyền, Nguyễn Thị Yến Phượng, 2022 Một số hợp chất phân lập từ lá cây lý (Eugenia jambos L.) Tạp chí Công Thương, 2, 343-349 7 Huỳnh Kim Yến, Nguyễn Trọng Tuân, Nguyễn Quốc Châu Thanh và Trần Thanh Mến, 2023 Thành phần hóa học của lá cây Lý (Syzygium jambos (L.)) họ Sim (Myrtaceae) Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 59(5A), 88-92 8 Huỳnh Kim Yến, Nguyễn Trọng Tuân, Trần Thanh Mến, Nguyễn Quốc Châu Thanh, Dương Thị Minh Thơ, Trương Thị Tú Trân, 2023 Xác định hàm lượng polyphenol, flavonoid và đánh giá hoạt tính chống oxy hóa của một số thực vật tại tỉnh Kiên Giang Tạp chí phân tích Hóa, Lý và Sinh học, 29(2), 33-38, 2023 CHƯƠNG 1 GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề Thực vật vẫn là mối quan tâm hàng đầu trong nhiều lĩnh vực nghiên cứu, đặc biệt là thành phần hóa học và hoạt tính sinh học đang được chú ý, điều này sẽ giúp ích rất nhiều trong việc phát hiện ra các loại thuốc mới trong điều trị bệnh Ngoài ra, thực vật là nguồn cung cấp dồi dào các hợp chất có hoạt tính kháng oxi hóa có tác dụng quét sạch gốc tự do ROS và RNS Có rất nhiều công trình nghiên cứu tập trung vào việc sử dụng các kỹ thuật thử nghiệm để xác định các chất kháng oxi hóa tự nhiên từ thực vật để nhằm tổng hợp và điều trị các bệnh bởi “stress oxi hóa” gây ra như các bệnh về tim mạch, đái tháo đường, alzheimer, ung thư, [1] Do đó, việc tìm kiếm, nghiên cứu và sử dụng các hợp chất chiết xuất từ thực vật có khả năng kháng oxi hóa không gây tác dụng phụ cho sức khỏe là lựa chọn hàng đầu Các hợp chất này có thể là alkaloid, terpenoid, steroid, saponin và polyphenol, giúp cơ thể thực vật tự bảo vệ khỏi các tác nhân ô nhiễm môi trường, tia cực tím, stress, hạn hán và sự tấn công của mầm bệnh [2] Ngoài ra, chúng còn có các hoạt tính sinh học quý đối với động vật và con người như kháng oxi hóa, kháng ung thư, kháng khuẩn, kháng viêm và kích thích hệ thống miễn dịch [3] Hiện nay, việc nâng cao năng suất kết hợp với điều kiện biến đổi khí hậu đã làm gia tăng tình hình dịch bệnh Vì thế, các nghiên cứu tìm ra các hợp chất kháng oxi hóa, kháng khuẩn có nguồn gốc từ thực vật là giải pháp giúp tăng cường hệ miễn dịch là điều cần thiết Bên cạnh đó, thực vật với nhiều ưu điểm như rẻ, dễ chuẩn bị, hiệu quả phòng bệnh cao do dễ hấp thu, ít tác dụng phụ trong quá trình điều trị bệnh và không ảnh hưởng đến môi trường cũng như không nguy hiểm đến đối tượng sử dụng [4] Đồng thời, thực vật chứa các hợp chất chuyển hóa thứ cấp ngăn cản quá trình oxi hóa bằng cách khử các gốc tự do, kìm hãm sự oxi hóa Các hợp chất thứ cấp này được tìm thấy trong tất cả các bộ phận như lá, quả, hạt, rễ, thân và vỏ của các loài thực vật [5] Tại Việt Nam, việc nghiên cứu và sử dụng thực vật đã được tiến hành từ rất sớm, với thảm thực vật phong phú và đa dạng trên mọi miền đất nước Kiên Giang được xem như một Việt Nam thu nhỏ có địa hình rất đa dạng với nhiều hệ sinh thái khác nhau Khu dự trữ sinh quyển Kiên Giang chứa đựng sự phong phú, đặc sắc về đa dạng thành phần loài thực vật, có cả những loài đang nằm trong Sách đỏ Việt nam Chúng có giá trị vô cùng lớn về mặt bảo tồn, nghiên cứu và chiết xuất các hợp chất có hoạt tính sinh học Một số loài thực vật có hoạt tính kháng oxi hóa mạnh được nghiên cứu ở Kiên Giang như Dây mỏ quạ [6], Bí kỳ nam [7], Bên cạnh đó, một số loài như cây Lý (Syzygium jambos), Luân thùy cambot (Spirolobium cambodianum), Chùm đuông (Sphaerocoryne affinis) cũng được sử dụng làm thuốc cho động vật và con người Những kết quả nghiên cứu về cây Lý (Syzygium jambos), Chùm đuông (Sphaerocoryne affinis) trên thế giới phát hiện nhiều hoạt tính sinh học như kháng oxi hóa, gây độc tế bào ung thư, kháng 1 khuẩn, kháng viêm,… Tuy nhiên, thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài này chưa có nhiều công trình nghiên cứu tại Việt Nam Ngoài ra, Luân thùy cambot (Spirolobium cambodianum) là loài duy nhất trong chi Spirolobium phân bố giới hạn ở Việt Nam và Campuchia Hiện chưa có bất kỳ nghiên cứu nào về thành phần hóa học cũng như hoạt tính sinh học của loài này Trên cơ sở đó, đề tài tiến hành sàng lọc hoạt tính kháng oxi hóa của các loài thực vật bằng phương pháp DPPH, ABTS●+, RP và TAC Bên cạnh đó, đề tài tiếp tục phân lập (phương pháp sắc ký cột), xác định cấu trúc (dựa trên phân tích phổ NMR) và đánh giá hoạt tính chống tress oxi hóa của các hợp chất cô lập, làm cơ sở khoa học cho việc sử dụng thực vật hoặc phát hiện ra những hoạt tính mới Qua đó, đề tài góp phần nâng cao giá trị và kiến nghị bảo tồn loài thực vật này tại Kiên Giang Chính vì vậy luận án “Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số thực vật tại tỉnh Kiên Giang” được thực hiện Các kết quả của luận án sẽ góp phần giải thích về bản chất hóa học, sinh học và nâng cao giá trị sử dụng, của các loài thực vật được sử dụng làm thuốc cho động vật và con người 1.2 Mục tiêu của luận án Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật thu hái tại tỉnh Kiên Giang nhằm góp phần tạo cơ sở định hướng cho việc nghiên cứu sâu hơn tạo ra các sản phẩm ứng dụng trong lĩnh vực hóa dược Từ đó cung cấp cơ sở khoa học định hướng cho việc khai thác sử dụng và bảo tồn nguồn tài nguyên thực vật một cách hợp lý 1.3 Nội dung nghiên cứu - Nội dung 1: Sàng lọc một số loài thực vật có hoạt tính kháng oxi hóa in vitro Đồng thời, các loài thực vật cũng được đánh giá hoạt tính kháng khuẩn (gây bệnh trên động vật thuỷ sản) và định lượng hàm lượng tổng polyphenol, flavonoid - Nội dung 2: Phân lập và xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất phân lập được từ cây Lý (S jambos) Đánh giá hoạt tính sinh học của các cao chiết phân đoạn và một số hợp chất phân lập được với hàm lượng lớn - Nội dung 3: Phân lập và xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất phân lập được từ Luân thùy cambot (S cambodianum) Đánh giá hoạt tính sinh học của các cao chiết phân đoạn và một số hợp chất phân lập được với hàm lượng lớn - Nội dung 4: Phân lập và xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất phân lập được từ Chùm đuông (S affinis) Đánh giá hoạt tính sinh học của các cao chiết phân đoạn và một số hợp chất phân lập được với hàm lượng lớn 1.4 Phạm vi và đối tượng nghiên cứu 1.4.1 Đối tượng nghiên cứu Hai mươi ba loài thực vật được thu hái tại một số huyện An Biên, An Minh, Châu Thành, Gò Quao, Hòn Đất, Phú Quốc, Kiên Lương, U Minh Thượng của tỉnh Kiên Giang 2 1.4.2 Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu tập trung xác định thành phần hóa học và đánh giá hoạt tính sinh học của một số loài thực vật (3 loài) được chọn dựa theo hướng sàng lọc hoạt tính kháng oxi hóa in vitro thu hái tại tỉnh Kiên Giang 1.5 Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiển của nghiên cứu 1.5.1 Ý nghĩa khoa học Cung cấp thêm các thông tin về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của cây Lý (Syzygium jambos), Luân thùy cambot (Spirolobium cambodianum) và Chùm đuông (Sphaerocoryne affinis), làm giàu thêm kho tàng hợp chất thiên nhiên của thế giới nói chung và Việt Nam nói riêng Kết quả của nghiên cứu này là cơ sở cho việc nghiên cứu phân lập các hợp chất có hoạt tính sinh học từ các loài thực vật khác của địa phương 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn Kết quả nghiên cứu góp phần vào việc tìm kiếm các hợp chất tự nhiên có khả năng chữa bệnh từ các loài thực vật sẵn có ở địa phương, là một minh chứng khoa học hướng tới nghiên cứu các sản phẩm tự nhiên an toàn, hiệu quả 1.6 Tính mới của luận án Lần đầu tiên ở Việt Nam, lá cây Lý được nghiên cứu về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học Kết quả cho thấy ngoài các thành phần hóa thực vật đặc trưng cho chi và loài, loài S jambos ở Kiên Giang cũng xuất hiện 3 hợp chất mới trong loài Đồng thời, lần đầu tiên thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn gây bệnh trên động vật thủy sản và hoạt tính chống stress oxi hóa ở mức tế bào RAW264.7 của cao chiết Trong đó, các cao chiết và hợp chất phân lập từ cây Lý có khả năng tăng cường sự biểu hiện của gen kháng oxi hóa, thông qua việc thúc đẩy con đường truyền tín hiệu Nrf2/HO-1 Lần đầu tiên ở Việt Nam và trên thế giới thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của Luân thùy cambot (S cambodianum) được nghiên cứu Từ lá của cây Luân thùy cambot đã phân lập và xác định cấu trúc của 10 hợp chất tinh khiết, lần đầu tiên được phân lập trong chi Spirolobium Cao chiết và các hợp chất phân lập từ Luân thùy cambot có hoạt tính kháng khuẩn gây bệnh trên động vật thủy sản, kháng oxi hóa in vitro và chống stress oxi hóa in vivo trên mô hình ruồi giấm Lần đầu tiên ở Việt Nam thành phần hóa học và hoạt tính sinh học như kháng oxi hóa in vitro, chống stress oxi hóa in vivo trên mô hình ruồi giấm của cây Chùm đuông được nghiên cứu Đã phân lập và xác định cấu trúc của 13 hợp chất, trong đó có 11 hợp chất tinh khiết lần đầu được phân lập từ chi này 3 CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Một số loài thực vật được sử dụng trong nghiên cứu sàng lọc Kiên Giang là nơi có nguồn thực vật rất đa dạng và phong phú, có nhiều loài thực vật có tác dụng chữa bệnh như Trâm bầu (Comretum quadrangulare), Ngải cứu (Artemisia vulgaris), Chùm đuông (Sphaerocoryne affinis), … Đây chính là nguồn thực vật có tác dụng chữa bệnh theo kinh nghiệm của người dân Hai mươi ba loài thực vật được thu hái tại Kiên Giang gồm các bộ phận như lá, thân, vỏ, trái sử dụng trong nghiên cứu thể hiện ở Bảng 2.1 Bảng 2 1: Danh sách 23 loài thực vật được thu hái tại Kiên Giang Tên khoa học Tên thông thường Địa điểm thu Bộ phận mẫu nghiên cứu Acanthus ebracteatus Ô rô Toàn cây Acorus calamus Thủy xương bồ Gò Quao Lá Ananas comosus Khóm U Minh thượng Lá Artemisia vulgaris Ngải cứu Châu Thành Toàn cây Bidens pilosa Xuyến chi Châu Thành Toàn cây Costus speciosus Cát lồi Châu Thành Lá Combretum quadrangulare Trâm bầu Gò Quao Trái Glycosmis citrifolia Bưởi bung Châu Thành Lá Lumnitzera littorea Cóc đỏ Phú Quốc Lá Lumnitzera racemosa Cóc trắng Phú Quốc Lá Lycopodiella cenua Thông đất Kiên Lương Toàn cây Marsilea quadrifolia Rau bợ Phú Quốc Toàn cây Mimosa pigra Mai dương U Minh thượng Lá Pandanus tectorius Dứa gai An Minh Trái Pistia stratiotes Bèo cái Hòn Đất Toàn cây Pouzolzia zeylanica Bọ mắm U Minh thượng Toàn cây Rhizophora apiculata Đước đôi Hòn Đất Võ Senna alata Muồng trâu An biên Lá Sphaerocoryne affinis Chùm đuông An Minh Trái, lá Spirolobium cambodianum Luân thùy cambot Phú Quốc Lá Stachytarpheta jamaicensis Đuôi chuột Phú Quốc Toàn cây Syzygium jambos Lý Hòn Đất Lá Volkameria inermis Ngọc nữ biển Châu Thành Lá Kiên Lương 4 2.2 Tổng quan về chi Syzygium và loài Syzygium jambos 2.2.1 Giới thiệu về chi Syzygium 2.2.2 Tổng quan về Syzygium jambos Syzygium jambos (còn gọi là Lý, Mận, Gioi) còn được biết với tên khác là Eugenia jambos hoặc Jambosa [133] Lá được dùng để chữa đau mắt, hạ sốt, tiêu hóa, kiết lỵ [98] Chiết xuất thực vật từ các bộ phận của S jambos đã thể hiện các hoạt tính kháng viêm, kháng oxi hóa [135], kháng khuẩn [137], bảo vệ gan [134], và gây độc tế bào ung thư [146] Các nghiên cứu về thành phần hóa học của S jambos đã phân lập được 47 hợp chất thuộc các nhóm chất sau: flavonoid, tannin, triterpenoid, steroid, acid hữu cơ và các dẫn xuất khác [147‒154] 2.3 Tổng quan về chi Spirolobium và loài Spirolobium cambodianum 2.3.1 Giới thiệu về chi Spirolobium 2.3.2 Tổng quan về Spirolobium cambodianum Spirolobium cambodianum Baill (Luân thùy cambot) là loài duy nhất của chi Spirolobium S cambodianum là một loài đặc hữu của những vùng nhiệt đới như Việt nam, Lào, Cambodia, Thái Lan và Indonesia Theo kinh nghiệm dân gian, cây có thể dùng để trị các bệnh như đau thắt lưng, đau đầu, sưng chân tay hoặc sốt S cambodianum là một loài thực vật nằm trong sách đỏ Việt Nam, có những đặc tính của một loài thảo dược quý Tuy nhiên, các nghiên cứu và công bố về thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của loài này trên thế giới và Việt Nam còn rất hạn chế [156] 2.4 Tổng quan về chi Sphaerocoryne và loài Sphaerocoryne affinis 2.4.1 Giới thiệu về chi Sphaerocoryne 2.4.2 Tổng quan về Sphaerocoryne affinis Sphaerocoryne affinis (Chùm đuông) là một loài thực vật có hoa thuộc họ Na Trong y học cổ truyền Thái Lan, hoa được sử dụng làm thuốc giảm đau tim nhẹ và hạ sốt Ngoài ra, cao chiết từ lá và trái của S affinis có hoạt tính kháng oxi hóa và gây độc tế bào ung thư [163‒164] Các nghiên cứu hóa thực vật về loài này đã phân lập được 61 hợp chất như terpenoid, flavonoid, heptane và các dẫn xuất khác [167‒173] Qua nghiên cứu tài liệu cho thấy có rất ít hợp chất được phân lập từ S affinis ở Việt Nam và trên thế giới 2.5 Ruồi giấm và sử dụng mô hình ruồi giấm trong nghiên cứu khoa học 2.6 Tổng quan về tình hình sử dụng thực vật trong thủy sản 2.7 Tổng quan về kháng oxi hóa 5 CHƯƠNG 3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 3.1 Phương pháp nghiên cứu 3.1.1 Mẫu thực vật, hóa chất và thiết bị 3.1.2 Phương pháp điều chế cao tổng 3.1.3 Phương pháp định tính, định lượng thành phần hóa học - Định lượng polyphenol tổng (TPC): Hàm lượng polyphenol tổng được xác định bằng thuốc thử Folin-Ciocalteu theo mô tả của Singleton et al (1999) và Dewanto et al (2002) [215‒216] - Định lượng flavonoid tổng (TFC): Hàm lượng flavonoid tổng trong cao chiết được xác định theo phương pháp so màu nhôm clorua (AlCl3) của Bag et al (2015) [217] 3.1.4 Phương pháp phân lập các hợp chất 3.1.5 Phương pháp xác định cấu trúc Cấu trúc của các hợp chất được xác định bằng cách kết hợp các phương pháp phổ tử ngoại khả kiến, phổ khối, phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều và hai chiều đồng thời kết hợp phân tích, so sánh với tài liệu tham khảo 3.1.6 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học 3.1.6.1 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng oxi hóa in vitro a) Khảo sát hiệu quả trung hòa gốc tự do DPPH Khả năng kháng oxi hóa của mẫu thử được xác định theo phương pháp DPPH của Sharma & Bhat (2009) b) Khảo sát hiệu quả trung hòa gốc tự do ABTS●+ Hoạt tính kháng oxi hóa của mẫu thử được xác định bởi khả năng loại bỏ gốc tự do ABTS●+ theo mô tả của Nenadis et al (2004) [219] c) Khảo sát hiệu quả kháng oxi hóa bằng phương pháp khử sắt (reducing power) Hoạt tính kháng oxi hóa của cao chiết được xác định bởi năng lực khử sắt (Reducing power – RP) thực hiện theo phương pháp Padma et al (2013) [206] d) Xác định tổng khả năng kháng oxi hóa (total antioxidant capacity - TAC) Hoạt tính kháng oxi hóa của cao chiết được thực hiện theo phương pháp Prieto et al (1999) [220] 3.1.6.2 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng khuẩn Phương pháp pha loãng mẫu thử (broth dilution) trên đĩa 96 giếng và chất chỉ thị màu resazurin được sử dụng để xác định nồng độ ức chế tối thiểu theo mô tả của Sarkar et al (2007) [221] 3.1.6.3 Phương pháp đánh giá hoạt tính chống stress oxi hóa a) Mô hình đại thực bào 6 * Đánh giá khả năng gây độc tế bào: Đại thực bào RAW264.7 được tiến hành nuôi cấy trong môi trường DMEM Tế bào được nuôi trong đĩa elisa 25 cm2, được đặt trong tủ ấm với 5 % CO2 ở 37oC Mẫu thử ở các nồng độ khác nhau hoặc DMSO 1% được ủ với tế bào RAW264.7 trong đĩa 96 giếng (2 x 105 tế bào/giếng) ở 37oC trong 24 giờ Sau đó, tế bào trên tiếp tục được ủ với sự hiện diện của lipopolysaccharide (LPS) hoặc không có LPS (1 µg/mL) trong thời gian 16 giờ [222] * Đánh giá khả năng ức chế ROS và NO: Các tế bào được xử lý trước với nồng độ mẫu thử thích hợp trong môi trường DMEM trong 24 giờ Sau đó, tế bào được rửa với dung dịch đệm phosphate (PBS) và kích thích với LPS 1 µg/mL ở 37oC trong thời gian 16 giờ Cuối cùng, các tế bào được ủ với 10 µM 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate trong 45 phút * Reverse Transcription Quantitative PCR (RT-qPCR): Các tế bào RAW264.7 được nuôi cấy trên đĩa 6 giếng trong 24 giờ, sau đó được ủ với mẫu thử hoặc hợp chất được chỉ định Sau đó, các tế bào được rửa bằng PBS và được kích thích có hoặc không có LPS trong 16 giờ nữa Tổng số RNA của từng mẫu được chiết xuất bằng thuốc thử Qiazol, sau đó được tinh chế bằng Qiagen RNeasy Kit Cuối cùng, tác dụng của mẫu thử đối với biểu hiện mRNA được xác định bằng qRT-PCR [223] * Western Blotting: Các tế bào RAW264.7 được nuôi cấy trên đĩa 6 giếng trong 24 giờ, sau đó được ủ với các nồng độ mẫu thử đã chọn trong 24 giờ trước khi kích thích LPS (1 µg/mL) trong 16 giờ Tiếp theo, mỗi mẫu được tách thành SDS-PAGE (10%, v/v) và được chuyển sang màng PDVF Màng được loại bỏ bằng dung dịch sữa tách béo 5% trong 1 giờ Sau đó, mẫu được ủ với kháng thể sơ cấp (Nrf2) qua đêm ở nhiệt độ 4oC cho đến khi sử dụng Màng được rửa bằng nước muối đệm Tris và ủ với horseradish- peroxidase-conjugated trong TBST, bổ sung 3% albumin huyết thanh bò trong 1 giờ ở nhiệt độ phòng Cuối cùng, sự biểu hiện của màng được thực hiện bằng phương pháp ECL Western blotting Substrate [223] b) Mô hình ruồi giấm Khả năng chống stress oxi hóa của mẫu thử được kiểm tra thử nghiệm in vivo bằng mô hình ruồi giấm theo mô tả của Etuh et al (2019) và Wongchum et al (2021) [207‒ 208] * Trong điều kiện paraquat (PQ): Khả năng chống stress oxi hóa của mẫu thử được kiểm tra bằng phương pháp paraquat (PQ) ở nồng độ 20 mM * Trong điều kiện H2O2: Thí nghiệm được tiến hành tương tự như trên nhưng thay paraquat (PQ) bằng H2O2 ở nồng độ 10% 3.1.7 Phương pháp xử lý số liệu 3.2 Thực nghiệm 3.2.1 Sàng lọc các đối tượng nghiên cứu theo hướng kháng oxi hóa in vitro 3.2.2 Phân lập tinh chế các chất từ cây Lý 3.2.2.1 Điều chế cao phân đoạn cây Lý 3.2.2.2 Phân lập các hợp chất cây Lý a) Phân lập các hợp chất từ cao EJH (n-hexane) 7 3.2.3 Phân lập tinh chế các chất từ cây Luân thùy cambot 3.2.3.1 Điều chế cao phân đoạn cây Luân thùy cambot 3.2.3.2 Phân lập các hợp chất cây Luân thùy cambot a) Phân lập các hợp chất từ cao SCH (n-hexane) Cao SCH (100,15 g) CC silica gel n-hexane:EtOAc: MeOH (100:0:0, 75:25:0, 50:50:0, 25:75:0, 0:90:10 v/v/v) SCH.I SCH.II SCH.III SCH.IV SCH.V (15 g) (14 g) (21 g) (11 g) (10 g) CC silica gel CC silica gel n-hexane:EtOAc (100:0-0:100, n-hexane:EtOAc v/v) (100:0-0:100, v/v) SCH.III.2 SC1 (5 mg) CC silica gel CHCl3:MeOH (100:0-98:2, v/v) SC2 (15 mg) Hình 3.3: Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cao SCH (Cao n-hexane) b) Phân lập các hợp chất từ cao SCE (cao EtOAc) Cao SCE (250,06 g) CC silica gel n-hexane:EtOAc:MeOH (75:25:0, 50:50:0, 25:75:0, 0:100:0, 0:90:10, v/v/v) SCE.I SCE.II SCE.III SCE.IV SCE.V (35 g) (40 g) (40 g) (45 g) (35 g) CC silica gel CC silica gel CC silica gel n-hexane:EtOAc n-hexane:EtOAc n-hexane:EtOAc (98:2-60:40, v/v) (99:1-70:30, v/v) (98:2-60:40, v/v) SC3 SCE.II.2 SCE.III.2 SCE.III.3 (10 mg) (15 g) (12 g) (20 g) SC4 CC silica gel CC silica gel CC silica gel (23 mg) CHCl3:MeOH (100:0-95:5, v/v) CHCl3:MeOH CHCl3:MeOH (99:1-96:4, v/v) (99:1-90:10, v/v) SC5 SC6 SC7 SC8 SC9 SC10 (17 mg) (20 mg) (12 mg) (14 mg) (10 mg) (11 mg) Hình 3.4: Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cao SCE (Cao ethyl acetate) 9 3.2.4 Phân lập tinh chế các chất từ cây Chùm đuông 3.2.4.1 Điều chế cao phân đoạn từ cây Chùm đuông 3.2.4.2 Phân lập các hợp chất từ cây Chùm đuông a Phân lập các hợp chất từ trái cây Chùm đuông Cao SAE (200 g) CC silica gel n-hexane:EtOAc:MeOH (75:25:0, 50:50:0, 25:75:0, 0:100:0, 0:0:100, v/v/v) SAE.I SAE.II SAE.III SAE.IV SAE.V CC silica gel n-hexane:EtOAc (100:0-75:25, v/v) CC silica gel EtOAc:MeOH 100:0-0:100, v/v) SAE.I.2 SAE.I.4 SAE.V.1 CC silica gel CC silica gel CC silica gel CC silica gel CC silica gel CC silica gel n-hexane:EtOAc DC:EtOAc EtOAc:MeOH EtOAc:MeOH EtOAc:MeOH EtOAc:MeOH (80:20, v/v) (50:50, v/v) (70:30, v/v) (70:30, v/v) (80:20, v/v) (85:15, v/v) SA1 SA2 SA6 SA5 SA4 SA3 Hình 3.5: Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cao SAE (Cao ethyl acetate) b Phân lập các hợp chất từ lá cây Chùm đuông Cao SALE (275 g) CC silica gel n-hexane:EtOAc:MeOH (75:25:0, 50:50:0, 25:75:0, 0:100:0, 0:0:100, v/v/v) SALE.I SALE.II SALE.III SALE.IV SALE.V CC silica gel n-hexane:EtOAc CC silica gel n-hexane:EtOAc (100:0-0:100, v/v) (100:0-0:100, v/v) SALE.II.1 SALE.II.2 SALE.II.3 SALE.II.5 CC silica gel SAL4 EtOAc:MeOH (100:0-0:100, v/v) SAL1 SAL2 SAL3 SALE.III.1 SALE.III.2 SALE.V.3 SAL5 SAL6 CC silica gel EtOAc:MeOH (100:0-70:30, v/v) SAL7 SALE.V.3.1 Hình 3.6: Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cao SALE (Cao ethyl acetate) 10 CHƯƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết quả sàng lọc hoạt tính kháng oxi hóa của 23 loài thực vật 4.1.1 Kết quả sàng lọc hoạt tính kháng oxi hóa của 23 loài thực vật Hoạt tính kháng oxi hóa của 24 loại cao chiết (cao khô) từ 23 loài thực vật được đánh giá bằng phương pháp DPPH, ABTS●+, RP và TAC Gallic acid được sử dụng làm đối chứng dương trong các thử nghiệm (Olszowy-Tomczyk et al., 2021) Hiệu quả kháng oxi hóa của các cao chiết được xác định thông qua giá trị EC50 hoặc Abs0,5 của mẫu Hoạt tính kháng oxi hóa của 24 loại cao chiết được thể hiện ở Bảng 4.1 Bảng 4 1: Kết quả đánh giá hoạt tính kháng oxi hóa in vitro của các cao chiết Cao chiết DPPH ABTS●+ RP TAC (EC50 µg/mL) Ô rô 217,12 ± 9,89k (EC50 µg/mL) (Abs0,5) (Abs0,5) Thủy xương bồ 447,40 ± 8,62n 39,33 ± 0,94l 62,68 ± 2,78f 87,97 ± 4,40hj Khóm 387,70 ± 1,71m 112,49 ± 8,34q 149,67 ± 9,18k 146,32 ± 1,86o Ngải cứu 734,32 ± 2,58p 157,24 ± 1,08s 410,42 ± 4,67r 113,41 ± 0,83m Xuyến chi 786,94 ± 6,85q 43,87 ± 0,08mn 185,32 ± 0,05m 62,71 ± 0,32e Cát lồi 1158,24 ± 6,51s 256,57 ± 5,71y 215,60 ± 2,63n 176,79 ± 1,19p Trâm bầu 103,90 ± 0,40g 130,08 ± 0,33r 1011,87 ± 7,40t 90,27 ± 1,53k Bưởi bung 172,87 ± 3,39j 24,18 ± 0,06ef 128,58 ± 0,20j 79,30 ± 1,40f Cóc đỏ 76,89 ± 3,54de 37,92 ± 0,40kl 61,15 ± 0,90f 83,61 ± 0,57g Cóc trắng 81,73 ± 1,01ef 29,66 ± 0,12gh 46,42 ± 1,31e 51,86 ± 1,51d Thông đất 93,95 ± 1,24fg 20,46 ± 0,52de 113,11 ± 0,09h 86,94 ± 0,58h Rau bợ 574,13 ± 2,80o 191,06 ± 2,83t 98,48 ± 2,13g 177,98 ± 0,07p Mai dương 67,12 ± 2,18d 102,37 ± 0,64p 167,73 ± 0,61l 77,37 ± 2,05f Dứa gai 143,46 ± 4,19h 39,22 ± 1,19l 32,16 ± 0,24cd 65,32 ± 1,13e Bèo cái 1422,34 ± 6,26t 45,51 ± 0,55n 714,43 ± 1,27s 95,38 ± 1,91l Bọ mắm 1034,55 ± 2,82r 196,81 ± 6,05x 286,67 ± 2,75p 122,18 ± 2,81n Đước đôi 68,60 ± 1,70d 91,69 ± 1,00o 1196,47 ± 3,44x 257,64 ± 0,85r Muồng trâu 357,19 ± 2,06l 27,82 ± 0,97fg 37,64 ± 0,44d 65,46 ± 0,96e Chùm đuông-trái 54,18 ± 2,30c 40,39 ± 0,39lm 331,03 ± 14,32q 119,59 ± 1,10n Chùm đuông-lá 19,20 ± 0,23b 19,28 ± 0,47cd 27,01 ± 1,52bc 44,65 ± 0,29c Luân thùy 19,51 ± 0,77b 16,14 ± 0,11bc 26,36 ± 1,20bc 36,15 ± 1,03b cambot 4,89 ± 0,07a 20,80 ± 0,26b 38,80 ± 0,69b Đuôi chuột 206,38 ± 1,27k Lý 46,33 ± 0,33c 34,09 ± 0,53jk 56,29 ± 1,66f 88,10 ± 1,05hj Ngọc nữ biển 739,47 ± 7,51p 14,67 ± 0.27b 26,98 ± 0,22bc 35,97 ± 0,23b Gallic acid 4,10 ± 0,20a 33,28 ± 0,03hj 261,38 ± 5,77o 237,59 ± 5,63q 1,80 ± 0,08a 10,31 ± 0,10a 25,31 ± 0,12a Ghi chú: Các giá trị có mẫu tự theo sau trong cùng một cột giống nhau khác biệt không có ý nghĩa ở mức 5% 11 + Kết quả cho thấy 24 mẫu cao chiết đều thể hiện hoạt tính kháng oxi hóa ở phương pháp DPPH với giá trị EC50 trong khoảng 19,20 ‒ 1422,34 µg/mL Tương tự, trong thử nghiệm ABTS●+ có giá trị EC50 trong khoảng 4,89 ‒ 256,57 µg/mL Trong đó, mẫu cao chiết Luân thùy cambot (EC50 = 4,89 µg/mL) có hoạt tính kháng oxi hóa tương đương gallic acid (EC50 = 1,80 µg/mL), không có ý nghĩa khác biệt thống kê ở mức 5% + Trong phương pháp kháng oxi hóa tổng (TAC), 24 mẫu cao chiết có giá trị Abs0,5 trong khoảng 35,97 ‒ 257,64 µg/mL Tương tự, trong thử nghiệm khử sắt (RP), giá trị Abs0,5 trong khoảng 20,80 ‒ 1196,47 µg/mL Kết quả sàng lọc đã hứa hẹn tiềm năng to lớn của ba loài thực vật (Lý, Luân thùy cambot và Chùm đuông) có hoạt tính kháng oxi hóa mạnh thể hiện ở 4 phương pháp thử nghiệm DPPH, ABTS●+, RP và TAC 4.1.2 Kết quả đánh giá hoạt tính kháng khuẩn của 23 loài thực vật Kết quả cho thấy, các cao chiết Khóm, Ô rô, Thủy xương bồ, Cát lồi, Bưởi bung, Cóc đỏ, Thông đất, Rau bợ, Bọ mắm, Dứa gai, Bèo cái, Muồng trâu, Đuôi chuột, Ngọc nữ Biển không thể hiện hoạt tính kháng khuẩn Ngược lại, các cao chiết Ngải cứu, Xuyến chi, Trâm bầu, Cóc trắng, Mai dương, Đước đôi, Chùm đuông, Luân thùy cambot, Lý có khả năng kháng S agalactiae, A hydrophila, A dhakensis, E ictaluri Trong đó, ba loài thực vật gồm Lý, Luân thùy cambot và Chùm đuông có giá trị MIC thấp hơn các cao chiết còn lại trong khoảng 80 ‒ 640 μg/mL Điều này chứng tỏ hoạt tính kháng khuẩn gây bệnh ở động vật thủy sản tốt hơn các loài thực vật khác được khảo sát Nhiều nghiên cứu thực nghiệm cho thấy mối tương quan giữa hoạt động kháng khuẩn của các cao chiết thực vật với hoạt tính kháng oxi hóa và các hợp chất thứ cấp có trong thực vật (Ben Nour et al., 2015) 4.1.3 Kết quả định tính thành phần hóa học của 23 loài thực vật Các cao chiết của 23 loài thực vật sau khi điều chế được định tính sơ bộ thành phần hoá học của các nhóm hợp chất chính thông qua phản ứng màu được thực hiện trong ống nghiệm Từ kết quả trên cho thấy tất cả các loại cao chiết đều có chứa hợp chất flavonoid Bên cạnh đó, một số loại cao chiết có sự hiện diện của hợp chất alkaloid như Ô rô, Ngải cứu, Thủy xương bồ, Xuyến chi, Trâm bầu, Cóc trắng, Cóc đỏ, Thông đất, Mai dương, Bọ mắm, Muồng trâu, lá Chùm đuông, Luân thùy cambot, Lý Hợp chất steroid và triterpenoid không hiện diện trong 4 cao chiết như Ngải cứu, Thủy xương bồ, Thông đất, Bèo cái Hợp chất tannin không hiện diện trong 7 loại cao chiết như Khóm, Cát lồi, Thông đất, Rau bợ, Bọ mắm, Đuôi chuột, Ngọc nữ biển Hợp chất saponin không hiện diện trong 9 loại cao chiết như Khóm, Xuyến chi, Trâm bầu, Bưởi bung, Mai dương, Dứa gai, Bèo cái, Luân thùy cambot, Đuôi chuột Như vậy, nghiên cứu chứng minh các cao chiết từ 23 loài thực vật chứa nhiều hợp chất sinh học đầy tiềm năng ứng dụng 12 4.1.4 Kết quả định lượng tổng hàm lượng polyphenol và flavonoid của 23 loài thực vật Kết quả cho thấy, 24 loại cao chiết có tổng hàm lượng polyphenol từ 75,94 – 857,24 mg GAE/g cao chiết Tương tự, hàm lượng flavonoid từ 38,71 ‒ 798,71 mg QE/g cao chiết (Bảng 4.2) Bảng 4 2: Tổng hàm lượng polyphenol (TPC) và flavonoid (TFC) của 23 loài thực vật Tên khoa học Bộ phận TPC TFC A ebracteatus nghiên cứu (mg GAE/g cao chiết) (mg QE/g cao chiết) A calamus Toàn cây 82,88 ± 2,35q 324,43 ± 4,18g A comosus Lá 147,40 ± 2,26n 146,07 ± 4,43pq A vulgaris Lá 158,31 ± 1,51m 150,30 ± 0,26p B pilosa Toàn cây 103,08 ± 0,45p 287,65 ± 2,35j C speciosus Toàn cây 134,42 ± 1,03o 212,99 ± 2,07m C quadrangulare Lá 75,94 ± 0,86q 221,36 ± 2,65m G citrifolia Trái 230,89 ± 2,36j 165,35 ± 5,80o L littorea Lá 196,54 ± 4,25k 253,63 ± 2,03l L racemosa Lá 453,93 ± 0,87e 337,36 ± 9,05f L cenua Lá 138,53 ± 1,47o 182,01 ± 2,34n M quadrifolia Toàn cây 186,30 ± 1,64l 139,90 ± 4,93q M pigra Toàn cây 239,60 ± 1,20h 307,36 ± 5,03h P tectorius Lá 306,08 ± 5,67f 38,71 ± 5,78s P stratiotes Trái 179,06 ± 2,21l 382,34 ± 6,12e P zeylanica Toàn cây 100,69 ± 5,97p 182,99 ± 7,48n R apiculata Toàn cây 76,69 ± 1,78q 94,65 ± 3,32r S alata Võ 295,44 ± 1,35g 402,79 ± 2,70d S affinis Lá 203,57 ± 10,36k 46,31 ± 4,32s S affinis Trái 570,36 ± 3,19d 413,18 ± 3,11c S cambodianum Lá 671,83 ± 1,05b 563,93 ± 2,87b S jamaicensis Lá 661,12 ± 3,55c 798,71 ± 4,63a S jambos Toàn cây 185,61 ± 1,28l 279,10 ± 6,02kj V inermis Lá 857,24 ± 9,06a 559,81 ± 6,93b Lá 105,03 ± 1,82p 278,61 ± 4,23k Ghi chú: Các giá trị có mẫu tự theo sau trong cùng một cột giống nhau khác biệt không có ý nghĩa ở mức 5% 4.2 Đánh giá hoạt tính sinh học của cây Lý và một số hợp chất phân lập được 4.2.1 Hoạt tính kháng oxi hóa của cao phân đoạn từ lá Lý Các cao chiết từ lá Lý có giá trị EC50 hoặc Abs0,5 nằm trong khoảng 10,12 ‒ 92,40 µg/mL Hoạt tính kháng oxi hóa của cao chiết phân đoạn được sắp xếp theo hướng hoạt tính kháng oxi hóa giảm dần như sau: SJE > SJH > SJ > SJW (Bảng 4.3) 13 Bảng 4.3: Kết quả đánh giá hoạt tính kháng oxi hóa của các cao phân đoạn từ lá Lý và một số hợp chất phân lập được STT Mẫu DPPH ABTS●+ RP TAC (EC50 µg/mL) (EC50 µg/mL) (Abs0,5 µg/mL) (Abs0,5 µg/mL) 1 SJ 46,33 ± 0,33d 14,66 ± 0,27d 26,98 ± 0,22d 35,97 ± 0,23d 2 SJH 30,92 ± 0,94c 12,74 ± 0,24c 25,11 ± 0,65c 33,83 ± 0,22c 3 SJE 27,68 ± 4,87b 10,12 ± 0,04b 19,52 ± 0,51b 25,50 ± 1,92b 4 SJW 92,40 ± 4,51e 75,96 ± 1,42e 90,13 ± 0,34d 57,58 ± 0,22d 5 Gallic acid 4,10±0,20a 1,80±0,08a 10,31±0,10a 25,31±0,12a 6 Myricetin 18,83 ± 0,53 2,67 ± 0,12 - - 7 Quercetin 30,53 ± 1,68 8,10 ± 0,63 - - Ghi chú: (-) không thử nghiệm, các giá trị có mẫu tự theo sau trong cùng một cột giống nhau khác biệt không có ý nghĩa ở mức 5% 4.2.2 Hoạt tính chống stress oxi hóa trên mô hình đại thực bào Ở nồng độ 0 ‒ 200 µg/mL cho thấy tỉ lệ sống của tế bào không khác biệt so với đối chứng (Hình 4.1A) Vì vậy, nồng độ cao chiết tối ưu không gây độc tính đối với tế bào, an toàn cho quá trình thử nghiệm là 200 µg/mL Ngoài ra, cao chiết phân đoạn SJE không thể sự hiện khác biệt đáng kể về tỉ lệ sống của tế bào so với mẫu đối chứng ở các nồng độ khảo sát Do đó, cao chiết ethanol (SJ) và cao phân đoạn ethyl acetate (SJE) từ lá Lý được chọn để nghiên cứu khả năng chống stress oxi hóa Hình 4 1: Ảnh hưởng của các cao chiết từ lá Lý đến sự sống của tế bào RAW264,7 (A) Khả năng sống tế bào được xử lý ở các nồng độ khác nhau cao chiết SJ (B) Khả năng sống tế bào tiền xử lý với dãy nồng độ khảo sát của cao chiết SJ trong 24 giờ, sau đó kích thích LPS trong 16 giờ (C) Khả năng sống tế bào tiền xử lý với dãy nồng độ khảo sát của cao chiết SJE trong 24 giờ, sau đó kích thích LPS trong 16 giờ Số liệu được biểu thị dưới dạng trung bình ± SD; (n=6); n,s không đáng kể; # p < 0,05 (so với tế bào được nuôi trong điều kiện bình thường); **** p < 0,0001 (so với tế bào được kích thích với LPS) Các tế bào RAW264.7 đã được xử lý trước với nồng độ cao chiết đã được chọn của SJ hoặc SJE trong 24 giờ, sau đó kích thích bằng nội độc tố từ màng tế bào vi khuẩn gram âm (LPS) trong 16 giờ Kết quả cho thấy tỉ lệ sống của tế bào tiền xử lý với cao chiết không có sự khác biệt so với đối chứng Điều này chỉ ra rằng sự có mặt của cao chiết SJ và SJE đã ngăn chặn độc tính và bảo vệ tế bào khỏi tổn thương do LPS gây ra (Hình 4.1B, C) Kết quả cho thấy, cao chiết SJ và SJE đã ức chế đáng kể sự sản sinh ROS (Hình 4.2) Đồng thời, chứng minh rằng chiết xuất này không chỉ ngăn chặn stress oxi hóa 14 thông qua việc ức chế ROS nội bào và giảm sản sinh NO● liên quan đến hoạt tính chống viêm Hình 4 2: Ảnh hưởng của cao chiết SJ và SJE đến quá trình sản xuất ROS và NO (A) Mức ROS trong kích thích LPS đã được xử lý bằng SJ (B) Mức ROS trong kích thích LPS đã được xử lý bằng SJE (C) NO được sinh ra với nồng độ cao chiết SJE nối tiếp Dữ liệu được biểu thị dưới dạng trung bình ± SD; (n=6); n,s không đáng kể; # p < 0,05 (so với tế bào được nuôi trong điều kiện bình thường); **, p