NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG THÂN VÀ BẸ CHUỐI ĐỂ NUÔI TRỒNG NẤM BÀO NGƯ (PLEUROTUS OSTREATUS) ĐIỂM CAO

Luận văn, báo cáo, luận án, đồ án, tiểu luận, đề tài khoa học, đề tài nghiên cứu, đề tài báo cáo - Khoa học xã hội - Công nghệ TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUẢNG NAM KHOA: LÝ – HÓA – SINH ---------- PHAN THỊ THU TÂN NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG THÂN VÀ BẸ CHUỐI ĐỂ NUÔI TRỒNG NẤM BÀO NGƯ (PLEUROTUS OSTREATUS) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Quảng Nam, tháng 4 năm 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Quảng Nam, tháng 05 năm 2016 Tác giả khóa luận Phan Thị Thu Tân 2 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực hiện đề tài khóa luận tốt nghiệp, dưới sự hướng dẫn tận tình của giáo viên hướng dẫn và được phía nhà trường tạo điều kiện thuận lợi, em đã có một quá trình nghiên cứu, tìm hiểu và học tập nghiêm túc để hoàn thành đề tài. Kết quả thu được không chỉ do nỗ lực của cá nhân em mà còn có sự giúp đỡ của quý thầy cô, gia đình và các bạn. Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô Hồ Thị Kim Cúc đã tận tình hướng dẫn cho em suốt thời gian tiến hành làm khóa luận tốt nghiệp này. Em xin chân thần cảm ơn quý thầy cô trong khoa Lý – Hóa – Sinh, trường Đại Học, Quảng Nam đã tạo điều kiện thuận lợi và tận tình truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm của mình cho chúng tôi trong suốt thời gian học tập, quá trình làm khóa luận. Xin cảm ơn những lời động viên, khích lệ của gia đình, người thân và những lời chia sẽ, học hỏi của bạn bè đã góp phần lớn giúp tôi hoàn thành tốt bài khóa luận tốt nghiệp. Do trình độ còn hạn chế về kiến thức cũng như kinh nghiệm nên trong quá trình làm khóa luận tốt nghiệp khó tránh những thiếu sót, tôi rất mong được sự đóng góp ý kiến của quý thầy cô để bài khóa luận của tôi được hoàn chỉnh hơn. Một lần nữa, tôi xin chân thành cảm ơn và kính chúc quý thầy cô dồi dào sức khỏe, niềm tin để tiếp tục thực hiện sứ mệnh cao đẹp của mình là truyền đạt kiến thức cho thế hệ sau. Xin chân thành cảm ơn Quảng Nam, tháng 05 năm 2016 Sinh viên thực hiện Phan Thị Thu Tân 3 DANH MỤC BẢNG Số hiệu bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 Thành phần hóa học của thân cây chuối 14 Bảng 1.2 Thành phần hóa học sợi tơ chuối 14 Bảng 1.3 Diện tích, năng suất, sản lượng chuối cả nước từ năm 2008-2010 17 Bảng 3.1 Tốc độ lan truyền tơ nấm trên môi trường thạch. 25 Bảng 3.2 Tốc độ lan truyền tơ nấm trên môi trường hạt lúa 28 Bảng 3.3 Tốc độ lan truyền tơ nấm trên công thức 1 30 Bảng 3.4 Tốc độ lan truyền tơ nấm trên công thức 2 31 Bảng 3.5 Tốc độ lan truyền tơ nấm trên công thức 3. 32 Bảng 3.6 Khối lượng sinh khối quả thể nấm trên 3 công thức thử nghiệm 33 4 DANH MỤC HÌNH Số hiệu bảng Tên bảng Trang Hình 1.1 Hình thái nấm sò 3 Hình 1.2 Đại diện một số loại nấm sò 4 Hình 1.3 Chu trình phát triển của nấm sò 4 Hình 1.4 Các giai đoạn phát triển của quả thể nấm sò 5 Hình 2.1 Phân lập nấm từ tổ chức mô của nấm bào ngư 20 Hình 2.2 Nhân giống cấp 2 21 Hình 2.4 Cấy giống và làm nút bông 23 Hình 3.1 Ống giống nấm bào ngư trên môi trường thạch nghiêng 25 Hình 3.2 Biểu đồ sự lan truyền tơ nấm trên môi trường thạch 26 Hình 3.3 Phòng nuôi tơ nấm cấp 2. 28 Hình 3.4 Biểu đồ sự lan truyền tơ nấm trên môi trường hạt 28 Hình 3.5 Biểu đồ lan truyền tơ nấm trên 3 công thức thử nghiệm 33 Hình 3.6 Biểu đồ sinh khối nấm bào ngư trên 3 công thức thử nghiệm. 34 5 MỤC LỤC PHẦN I. MỞ ĐẦU ............................................................................................... 1 1.1. Lí do chọn đề tài ............................................................................................ 1 1.2. Mục đích nghiên cứu ..................................................................................... 2 1.3. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu ................................................................ 2 1.3.1. Đối tượng nghiên cứu................................................................................. 2 1.3.2. Phạm vi nghiên cứu .................................................................................... 2 1.3.3. Phương pháp nghiên cứu........................................................................... 2 PHẦN II. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU ............................................................... 3 CHƯƠNG I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU ............................................................. 3 1.1. Khái quát chung về nấm sò .......................................................................... 3 1.1.1. Đặc điểm hình thái của nấm sò ................................................................. 3 1.1.2. Chu trình sống của nấm sò ........................................................................ 4 1.1.3. Nguồn dinh dưỡng cho nấm sò ................................................................. 5 1.1.4. Các yếu tố môi trường ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của nấm sò ............................................................................................................. 7 1.1.5. Giá trị dinh dưỡng và dược liệu của nấm bào ngư ................................. 8 1.1.6. Một số lưu ý khi trồng nấm bào ngư ...................................................... 10 1.2. Vai trò, lợi ích của việc trồng nấm Bào Ngư ở Việt Nam ........................ 10 1.3. Tiềm năng phát triển nghề trồng nấm bào ngư ở Việt Nam ................... 11 1.4. Tình hình nghiên cứu nấm bào ngư hiện nay ........................................... 12 1.4.1. Tình hình sản xuất và tiêu thụ nấm bào ngư trong nước ..................... 12 1.4.2. Tình hình nghiên cứu nấm bào ngư trên thế giới ................................. 13 1.5. Giới thiệu chung về nguồn cơ chất là thân, bẹ chuối khô ....................... 14 1.5.1. Thành phần hóa học có trong thân chuối .............................................. 14 1.5.2. Giới thiệu sơ lược về các thành phần chính........................................... 14 1.5.3. Tình hình trồng chuối hiện nay ở nước ta ............................................. 16 1.6. Giới thiệu chung về điều kiện tự nhiên tại tỉnh Quảng Nam .................. 17 CHƯƠNG II. NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU18 2.1. Vật liệu, hóa chất và thiết bị....................................................................... 18 6 2.1.1. Dụng cụ và trang thiết bị ......................................................................... 18 2.1.2. Nguyên vật liệu và hóa chất .................................................................... 18 2.2. Phương pháp nghiên cứu............................................................................ 19 2.2.1. Phương pháp chọn mẫu ........................................................................... 19 2.2.2. Phương pháp chuẩn bị môi trường nuôi cấy ......................................... 19 2.2.3. Phương pháp phân lập nấm bào ngư từ tổ chức mô nấm bào ngư ..... 20 2.2.4. Phương pháp bảo quản và giữ giống ống nghiệm ................................. 21 2.2.5. Phương pháp nhân giống trên môi trường hạt (giống cấp 2) .............. 21 2.2.6. Phương pháp trồng thí nghiệm nấm bào ngư ....................................... 22 2.2.7. Phương pháp thu nhận, đánh giá kết quả ............................................. 24 2.2.8. Phương pháp xử lý số liệu ....................................................................... 24 2.2.9. Phương pháp tính hiệu suất sinh học ..................................................... 24 2.2.10. Phương pháp tính hiệu suất kinh tế ..................................................... 24 CHƯƠNG III. KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN ................................................... 25 3.1. Kết quả nhân giống ..................................................................................... 25 3.1.1. Kết quả sự lan truyền và đặc điểm của tơ nấm trên môi trường thạch nghiêng ................................................................................................................ 25 3.1.2. Kết quả lan truyền và đặc điểm của tơ nấm trên môi trường hạt lúa 28 3.2. Kết quả nuôi trồng thử nghiệm.................................................................. 30 3.2.1. Kết quả nuôi trồng khảo nghiệm trên công thức 1 ............................... 30 3.2.2. Kết quả nuôi trồng khảo nghiệm trên công thức 2 ............................... 31 3.2.3. Kết quả nuôi trồng khảo nghiệm trên công thức 3 ............................... 32 3.2.4. So sánh kết quả của các công thức nuôi trồng thủ nghiệm nấm bào ngư trên thân, bẹ chuối. ..................................................................................... 33 3.2.5. Quy trình trồng nấm bào ngư trên thân, bẹ chuối khô ........................ 35 3.2.6. Hiệu suất sinh học của nấm bào ngư trên cơ chất thân, bẹ chuối. ...... 35 PHẦN III. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ........................................................ 39 4.1. Kết luận ........................................................................................................ 39 4.2. Kiến nghị ...................................................................................................... 39 PHẦN IV. TÀI LIỆU THAM KHẢO .............................................................. 40 PHẦN V. PHỤ LỤC ........................................................................................... 42 VI. NHẬN XÉT, ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN........................ 45 1 PHẦN I. MỞ ĐẦU 1.1. Lí do chọn đề tài Ngành sản xuất nấm ăn đã hình thành và phát triển trên thế giới từ hàng trăm năm. Hiện nay có khoảng 2.000 loài nấm ăn được, trong đó có 80 loài nấm ăn ngon và được nghiên cứu nuôi trồng nhân tạo (UNESSCO - 2004). Việc nghiên cứu và sản xuất nấm ăn trên thế giới ngày càng phát triển mạnh mẽ và đã trở thành một ngành công nghiệp thực phẩm thực thụ. Nấm ăn là loại thực phẩm sạch được xem như là một loại rau cao cấp giàu dinh dưỡng được nhiều người ưa chuộng, thị trường nấm ăn trên thế giới rất lớn. Nấm thường trồng trên cơ chất giàu xenlulozo, lignin, có nhiều trong phế phẩm nông nghiệp, lâm nghiệp. Ở Việt Nam đang nuôi trồng 6 loại nấm phổ biến là: Nấm rơm, mộc nhĩ, nấm hương, nấm mỡ, nấm sò (bào ngư), nấm dược liệu (linh chi, vân chi, đầu khỉ). Với lợi thế là một nước nông nghiệp nên nguồn nguyên liệu trồng nấm nhiều và phong phú cùng với khí hậu nóng, ẩm rất thuận lợi cho việc nuôi trồng nấm đây là lí do nghề trồng nấm ở nước ta đang phát triển nhưng trong quy mô nhỏ lẻ hộ gia đình. Tổng sản lượng các loại nấm ăn và nấm dược liệu của Việt Nam là trên 150.000 triệu tấnnăm, kim ngạch xuất khẩu khoảng 60 triệu USDnăm. Hiện nay nhiều nguồn phế phẩm của nông nghiệp (rơm, rạ, muồn cưa, bã mía, thân ngô…) được sử dụng để trồng nấm đem lại hiệu quả và lợi nhuận cao. Nhưng cùng với đó thì nhiều phế phẩm nông nghiệp vẫn chưa được khai thác, sử dụng hợp lý và nếu xử lý không đúng cách sẽ gây nên ô nhiễm môi trường và lãng phí nguồn cơ chất này. Ở nước ta cây chuối là một loại nông sản trồng nhiều ở nông thôn, sau khi thu hoạch thân cây chuối ít được bà con quan tâm sử dụng, thường chặt bỏ để chúng phân hủy tự nhiên. Trong thân chuối chứa hàm lượng xenlulozo cao thích hợp dùng nuôi trồng nấm nếu biết xử lý và phối trộn đúng cách. Nấm bào ngư là một loại thực phẩm giàu dinh dưỡng, được sử chế biến nhiều món ăn ngon và bổ dưỡng, dễ nuôi trồng trên các môi trường giàu 2 xenlulozo, thị trường tiêu thụ lớn, ít bị cạnh tranh, đêm lại nguồn lợi kinh tế cao cho người trồng. Chính vì những lý do nêu trên, tôi chọn đề tài: “Nghiên cứu sử dụ ng thân và bẹ chuối để nuôi trồng nấm bào ngư (Pleurotus ostreatus)”. 1.2. Mục đích nghiên cứu  Trên cơ sở sử dụng thân, bẹ chuối chuyển hóa thành nguồn nguyên liệu nuôi trồng nấm.  Xác định tỉ lệ phối trộn thích hợp.  Tận dụng nguồn phế phẩm nông nghiệp nuôi trồng nấm, giảm ô nhiễm môi trường, nâng cao hiệu quả kinh tế, tăng thu nhập cho ngươi dân. 1.3. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 1.3.1. Đối tượng nghiên cứu  Đối tượng nghiên cứu là nấm sò (còn gọi là nấm bào ngư, nấm hương chân ngắn, nấm bình cô, Oyster Mushroom), gồm nhiều loại thuộc chi Pleurotus , họ Pleurotaceae.  Thân và bẹ chuối sau thu khi đã thu hoạch quả 1.3.2. Phạm vi nghiên cứu Sử dụng thân và bẹ chuối sau thu hoạch tại các vườn trồng chuối tỉnh Quảng Nam. 1.3.3. Phương pháp nghiên cứu  Phương pháp nghiên cứu tổng hợp tài liệu  Thực nghiệm, thí nghiệm  Phương pháp xử lý số liệu 3 PHẦN II. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU CHƯƠNG I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Khái quát chung về nấm sò 1.1.1. Đặc điểm hình thái của nấm sò - Nấm sò là tên dùng chung cho các loài nấm ăn thuộc giống Pleurotus. Tên khoa học: Pleurotus spp . Ở Việt Nam, nấm sò còn có các tên gọi khác như: Nấm tai lệch, nấm xoè, nấm bào ngư, nấm bèo, nấm dai…. - Nấm sò có đặc điểm chung là tai nấm dạng phễu lệch, mọc thành cụm tập trung, mỗi cánh nấm bao gồm 3 phần: Mũ, phiến và cuống (hình 1.1). Hình 1.1. Hình thái nấm sò 1. Mũ nấm 2. Phiến nấm 3. Cuống nấm 4. Hệ sợi nấm - Nấm sò được chia làm hai nhóm lớn: + Nhóm chịu lạnh: Hình thành quả thể ở nhiệt độ 10 – 20o C + Nhóm ưa nhiệt: Hình thành quả thể ở nhiệt độ 25 – 30 o C - Có đến 50 loài nấm sò, nhưng cho đến nay chỉ có 10 loại nấm sò được trồng phổ biến. Ở Việt Nam, chủ yếu trồng các loại nấm sò ưa nhiệt như: Nấm sò xám, nấm sò trắng. Vì vậy, nước ta có thể trồng nấm sò quanh năm nhưng thuận lợi nhất từ tháng 9 đến tháng 4 (dương lịch) năm sau. 1 4 Hình 1.2. Đại diện một số loại nấm sò 1.1.2. Chu trình sống của nấm sò - Khi trưởng thành, nấm sò sẽ phát tán bào tử, gặp điều kiện môi trường thích hợp bào tử sẽ nảy mầm hình thành hệ sợi sơ cấp. - Hệ sợi sơ cấp phát triển đầy đủ tạo nên hệ sợi thứ cấp, sau đó xảy ra sự kết hợp của hệ sợi nấm thứ cấp và hình thành quả thể nấm hoàn chỉnh. 2 Hình 1.3. Chu trình phát triển của nấm sò 1. Bào tử vô tính - 2. Sợi đơn bào - 3. Sợi đơn bào giao phối - 4. Sợi đa bào. 5. Bào tử hữu tính - 6. Quả thể nấm. Nấm sò trắng Nấm sò tím Nấm sò đùi gàNấm sò hồng 5  Quả thể nấm sò phát triển qua các giai đoạn như sau: - Dạng san hô: Quả thể mới tạo thành, dạng sợi mảnh hình chùm. - Dạng dùi trống: Mũ xuất hiện dưới dạng khối tròn, còn cuống phát triển cả về chiều ngang và chiều dài nên đường kính cuống và mũ không sai khác nhau nhiều. - Dạng phễu: Mũ mở rộng, cuống nằm ở giữa. - Dạng bán cầu lệch: Cuống lớn nhanh một bên và bắt đầu lệch so với vị trí trung tâm của mũ. - Dạng lá lục bình: Cuống ngừng tăng trưởng, trong khi mũ vẫn tiếp tục phát triển, bìa mép thẳng đến dợn sóng. Hình 1.4. Các giai đoạn phát triển của quả thể nấm sò a. Dạng san hô, b. Dạng dùi trống, c. Dạng phễ u, d. Dạng bán cầu lệch, e. Dạng lá lục bình 1.1.3. Nguồn dinh dưỡng cho nấm sò Nấm nói chung và các loại nấm ăn nói riêng chủ yếu sống dị dưỡng nhờ có hệ men phân giải tương đối mạnh, giúp chúng có thể sử dụng các dạng thức ăn phức tạp như chất xơ, chất đường, bột, chất mộc,.... Với cấu trúc dạng sợi, tơ nấm len lỏi sâu vào trong cơ chất (rơm rạ, mùn cưa, gỗ…) hấp thụ thức ăn để nuôi toàn bộ cơ thể nấm. 1.1.3.1. Nguồn cacbon - Trong quá trình sinh trưởng và phát triển, nấm cần nguồn cacbon chủ yếu là đường, bột rất lớn. Chúng thường bổ sung cho nấm sò dưới dạng bột bắp, cám gạo. 6 - Nấm sử dụng chất đường, bột để tổng hợp sinh khối, bao gồm các thành phần cấu tạo nên sợi nấm và các hợp chất liên quan đến hoạt động sống. Nói chung nấm cần chất đường, bột như là yếu tố bắt buộc không thể thiếu, nếu không có nó nấm không thể sinh trưởng và phát triển được. 1.1.3.2. Chất nitơ (đạm) Chất đạm cũng là nguồn dinh dưỡng không thể thiếu được ở nấm. - Nguồn đạm hữu cơ bổ sung trong trồng nấm sò ở các dạng như bánh dầu, bã đậu nành. - Nguồn đạm vô cơ dùng trong trồng nấm như phân urê, phân sunphat amôn (SA), diamôn phốt phát (DAP) 1.1.3.3. Chất khoáng và vitamin - Các vitamin để hệ sợi nấm phát triển: Vitamin B1, vitamin B6, vitamin H. - Các chất khoáng đa lượng: Nấm cần được cung cấp một số nguyên tố khoáng đa lượng như phốt pho (P), kali (K), canxi (Ca), lưu huỳnh (S), magie (Mg)… Ví dụ như: Phân lân cung cấp photpho, phân kali cung cấp nguyên tố kali, hoặc phân hỗn hợp NPK cung cấp cả đạm, photpho và kali. - Các nguyên tố vi lượng như: Sắt (Fe), kẽm (Zn), mangan (Mn), bor (Bo)… Nấm sò cần thành phần các nguyên tố vi lượng với một tỷ lệ rất nhỏ nhưng không thể thiếu được. 1.1.3.4. Nước - Nấm sò cần nước rất lớn trong quá trình sinh trưởng và phát triển, nước chiếm 80 – 85 tổng trọng lượng. Nếu thiếu nước, quả thể sẽ cằn cỗi, thậm chí teo cứng lại, nhẹ cân và rất dai. Nếu thừa nước, quả thể sẽ vàng nhũn và rũ xuống. - Nguồn nước tưới phải sạch, nếu nước quá bẩn sẽ lây nhiễm các mầm bệnh cho nấm, làm ức chế sự phát triển của quả thể, thậm chí làm chết quả thể. - Nguồn nước tưới không bị nhiễm phèn hoặc nhiễm mặn. nếu không quả thể hình thành sẽ bị dị dạng như bông cải, teo đầu, khô cứng hoặc bị chết non. - Nếu dùng nước máy thì phải để bay hết mùi clo. 310 7 1.1.4. Các yếu tố môi trường ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của nấm sò 1.1.4.1. Nhiệt độ Nấm bào ngư mọc ở nhiệt độ tương đối rộng. Ở giai đoạn ủ tơ, một số loài cần nhiệt độ từ 20 – 30o C, một số loài khác cần từ 27 – 32 o C, thậm chí 35o C như loài P.tuber-regium . Nhiệt độ thích hợp để nấm ra quả thể ở một số loài cần từ 15 – 25 o C, số loài khác cần từ 25 – 32o C. Nấm bào ngư được chia làm hai nhóm chịu nhiệt khác nhau: - Nhóm nấm sò chịu lạnh thích hợp ở nhiệt độ từ 13 – 20 0 C - Nhóm nấm sò chịu nhiệt thích hợp ở nhiệt độ từ 24 – 28 0 C 1.1.4.2. Độ ẩm - Độ ẩm cơ chất: Nấm sò yêu cầu độ ẩm cơ chất (giá thể) khoảng 60 – 70, nếu độ ẩm trên 70 hoặc dưới 30 không có lợi cho sinh trưởng hệ sợi và hình thành quả thể nấm. - Độ ẩm không khí: Trong thời kỳ tưới đón nấm, độ ẩm không khí không được dưới 70, tốt nhất là ở 75 - 90. Độ ẩm thấp hơn 70 quả thể bị vàng và khô mép. Ở độ ẩm 50, nấm ngừng phát triển và chết, dạng bán cầu lệch và dạng lá lục bình bị khô mặt và cháy vàng ở bìa mép mũ nấm. Ngược lại, độ ẩm cao (95) chưa hẳn đã tốt cho nấm, tai nấm dễ bị nhũn và rũ xuống. 1.1.4.3. Độ pH - Nấm sò có khả năng chịu đựng sự dao động của pH tương đối tốt, pH môi trường có thể giảm xuống 4,4 hoặc tăng lên 9, sợi tơ nấm vẫn mọc được. - pH thích hợp đối với hầu hết các loài nấm sò trong khoảng 6,0 – 7,0. Nếu pH thấp thì quả thể nấm không hình thành được và ngược lại, pH quá kiềm thì quả thể nấm bị dị hình. 1.1.4.4. Ánh sáng Ở các giai đoạn khác nhau trong chu kỳ sống, nấm sò yêu cầu ánh sáng khác nhau. - Giai đoạn sinh trưởng hệ sợi không cần ánh sáng 8 - Giai đoạn hình thành quả thể cần ánh sáng khuếch tán với cường độ trung bình 2000 lux, cường độ ánh sáng quá mạnh sẽ ngăn cản việc hình thành nụ nấm, còn ánh sáng yếu làm chân nấm dài ra, mũ hẹp. 1.1.4.5. Độ thông thoáng - Giai đoạn sinh trưởng: Nồng độ CO2 trong khoảng 15 – 20 hệ sợi nấm vẫn có thể sinh trưởng được, nếu vượt lên khoảng 30 sự sinh trưởng của hệ sợi giảm mạnh. - Giai đoạn hình thành quả thể: Nấm cần độ lưu thông không khí mạnh, nồng độ CO2 phải giảm và lượng oxy tăng lên. Nếu không mũ nấm sẽ hẹp lại trong khi chân dài ra, dẫn đến tai nấm bị dị hình. 12 1.1.5. Giá trị dinh dưỡng và dược liệu của nấm bào ngư 1.1.5.1. Giá trị dinh dưỡng của nấm bào ngư Nấm bào ngư rất phổ biến hiện nay vì không chỉ mang lại giá trị dinh dưỡng cao, mà còn nhiều tác dụng phòng chữa bệnh. Do đó nấm bào ngư được bán ngày càng nhiều trong các siêu thị, cửa hàng nông sản, các quầy chợ… Có hơn 10 loại nấm bào ngư khác nhau đang được nuôi trồng. Tại Việt Nam, có một số ít loại nấm bào ngư đang được bày bán. Chúng được phân loại theo màu sắc như nấm bào ngư xám, nấm bào ngư trắng, nấm bào ngư vàng. Hay được gọi với cái tên hết sức quyền lực như nấm bào ngư vua, nấm bào ngư Nhật. Nấm bào ngư có rất nhiều giá trị dinh dưỡng, chứa nhiều prôtêin, vitamin và các axít amin có nguồn gốc thực vật, dễ hấp thụ bởi cơ thể con người. Đặc biệt với hàm lượng prôtêin chiếm tới 33 – 43. Trong thành phần protein này có hầu hết các acid amin với tất cả 8 acid amin không thay thế, có lợi cho sức khỏe. Ngoài ra nấm bào ngư còn chứa một số vitamin C, B1, B2 và nhiều yếu tố vi lượng khác. Nấm sò hoàn toàn có thể thay thế lượng đạm từ thịt, cá… có nguồn gốc từ động vật. Do đó, nấm sò còn được gọi là “thịt chay”, “thịt sạch” khi được sử dụng như nguồn cung cấp prôtêin chủ yếu qua các bữa ăn. 67 Do đặc tính sinh học, các chất dinh dưỡng và vi chất có lợi cho sức khỏe con người dễ dàng được chuyển hóa thành năng lượng cho cơ thể, phù hợp với 9 các giải pháp “ăn kiêng” dành cho các bệnh nhân tiểu đường, gút, mỡ máu… cũng như người có thói quen ăn chay. Đối với người suy nhược cơ thể, các món ăn chế biến từ nấm giúp phục hồi sinh lực nhanh chóng. Việc chế biến các món ăn cũng không đòi hỏi cầu kì mà vẫn rất ngon miệng như nấu cháo, xào, nấu canh, luộc… vừa có tác dụng bổ dưỡng, vừa có tác dụng trị bệnh. Cũng trong một bữa ăn gia đình, nấm sò có thể xuất hiện trong nhiều món khác nhau mà không gây nhàm chán về khẩu vị, phù hợp với mọi người trong gia đình. Hiện nay, trên thị trường đang có bán rất nhiều loại nấm không rõ nguồn gốc, xuất xứ trong đó có nấm sò. Phần nhiều trong số đó có chứa các độc tố có hại cho cơ thể do người sản xuất chạy theo lợi nhuận, không tuân thủ đúng hoặc cố tình làm sai quy trình trồng nấm.17 1.1.5.2. Giá trị dược liệu của nấm sò Lợi ích của nấm bào ngư không chỉ nằm ở giá trị dinh dưỡng, mà còn có tác dụng phòng chữa bệnh. Đã có rất nhiều nghiên cứu cho biết nấm bào ngư có khả năng chống ung thư, giúp hạ huyết áp, làm giảm cholesterol trong máu. Ức chế sự phát triển của không ít loài vi khuẩn: Staphylococus aureus, Mycobackterium phlei …. Có một điều đặc biệt là vòng ức chế vi khuẩn ở nấm bào ngư non cao hơn nấm bào ngư trưởng thành. Các nhà khoa học cũng đã phân tích thành phần có trong nấm sò tươi: Prôtit 4, gluxit 3,4, vitamin C, vitamin PP, axit folic, các axit béo không no… Khi Nấm sò dưới dạng sinh khối khô, hàm lượng prôtêin chiếm tới 33 – 43, ngoài ra còn thấy các axít amin như glutamic, valin, isôluxin… Với các kết quả nghiên cứu dược lí người ta cho biết, trong nấm sò có chất plutôrin có công hiệu kháng khuẩn gram dương và kháng cả tế bào ung thư…. Các nghiên cứu khác có tác dụng làm giảm thiểu đối với cholesterol và đường máu cho kết quả khả quan. Đối với Đông y, nấm sò có vị ngọt, tính ấm, công năng tán hàn và thư cân… Nấm sò còn có nhiều đặc tính của biệt dược: – Có khả năng phòng và chữa các bệnh như làm hạ huyết áp 10 – Chống béo phì, chữa bệnh đường ruột, tẩy máu xấu…. – Làm giảm cholesterol trong máu – Hỗ trợ người bị bệnh gút trong chế độ dinh dưỡng – Đặc biệt là đã có một số công trình nghiên cứu còn cho rằng nấm sò có khả năng chống bệnh ung thư. Tác dụng chống ung thư của nấm sò do sự hiện diện của Lôvastatin trong tai nấm, tập trung ở phiến nấm và ở bào tử nấm.9 1.1.6. Một số lưu ý khi trồng nấm bào ngư – Nấm rất nhạy cảm với môi trường: Các tác nhân ảnh hưởng như nhiệt độ, pH, độ ẩm, ánh sáng,.... Còn đặc biệt nhạy cảm với tác nhân gây ô nhiễm môi trường như thuốc trừ sâu, các kim loại nặng, hóa chất, kể cả trong nguyên liệu cũng như không khí và môi trường xung quanh khu vực nuôi trồng nấm. Với những ô nhiễm kể trên, tai nấm sẽ bị biến dạng hoặc ngừng tạo quả thể. Vì thế, khi phát triển tốt thì nấm thu hoạch được chắc chắn sẽ là một loại ra sạch. – Dịch bệnh gây hại nấm: Chủ yếu là mốc xanh Trichoderma và ấu trùng ruồi nhỏ. Đối với nấm bào ngư bị mốc xanh, có thể hạn chế bằng cách khử trùng tốt nguyên liệu hoặc nâng pH. Đối với ấu trùng ruồi nhỏ, các nhà trồng cần có lưới chắn và vệ sinh nhà trại, không cho ổ dịch phát triển. – Dị ứng do bào tử: Nếu hít phải có triệu chứng khó thở, có nhiều vết đỏ ở tay, nhức đầu, ho và sốt. Khắc phục bằng cách đeo khẩu trang khi vào nhà nuôi trồng, tưới ẩm cho nhà trồng. 34 1.2. Vai trò, lợi ích của việc trồng nấm Bào Ngư ở Việt Nam Tăng thu nhập, tạo công việc làm cho nông dân. Việt Nam có nhiều đồi núi, ruộng đất, nhưng tài nguyên nấm lại lớn, nên phát triển nghề trồng nấm bào ngư nói riêng và nghề trồng nấm nói chung trở thành ngành trọng điểm ở nông thôn, mở ra con đường thoát nghèo, vươn lên làm giàu cho nông dân. Nghề nấm đã thúc đẩy nhiều ngành nghề khác phát triển, nhất là ngành dịch vụ xoay quanh trước, trong và sau sản xuất nấm, nghiên cứu khoa học và sản xuất gắn thành sợi chỉ đỏ và đa nguyên hóa, thể chế phục vụ xã hội hóa, từ đó thúc đẩy các ngành thương mại, vận tải, bưu điện, tiền tệ, chế biến thực phẩm, ăn uống cùng phát triển. Và một lượng lớn tiền tệ từ việc xuất khẩu nấm, tạo công 11 ăn việc làm cho nông thôn. Xúc tiến quá trình tuần hoàn hữu ích trong nông nghiệp như mùn cưa, rơm rạ, bã mía, vỏ hạt bông,…được tái sử dụng. Đồng thời bã nấm lại có thể chế biến thành phân hưu cơ rất hữu ích cho cây trồng. 6 1.3. Tiềm năng phát triển nghề trồng nấm bào ngư ở Việt Nam Nước ta có những điều kiện khí hậu, thời tiết, nền nhiệt độ thích hợp để phát triển nấm bào ngư. Lãnh thổ nước ta nằm trọng vẹn trong vùng nhiệt đới, có nền nhiệt độ cao trung bình năm từ 22 o C – 27o C. Hàng năm Việt Nam có 100 ngày mưa với lượng mưa trung bình năm từ 1500 - 2000mm. Độ ẩm không khí trên 80, thuận lợi cho sự sinh trưởng và phát triển của nấm bào ngư. Chính vì vậy mà nấm bào ngư có thể trồng trên hầu hết ở các khu vực và thích hợp trồng quanh năm. Là một nước có nền kinh tế đang phát triển với nền tảng là nông nghiệp nên Việt Nam có nguồn nguyên liệu phong phú, dồi dào cung cấp cho ngành trồng nấm như mùn cưa, rơm rạ, thân gỗ, vỏ cà phê, bã mía, thân chuối…các phế phẩm sau thu hoạch giàu xenlulozo. Ngoài việc sử dụng các nguyên liệu này tạo ra các sản phẩm có giá trị, vừa giải quyết được vấn đề về môi trường. Phế phẩm sau khi trồng nấm bào ngư còn có thể sử dụng trồng nấm rơm, làm phân bón, nuôi truồn đất phục vụ cho chăn nuôi và trồng trọt. Nguyễn Hữu Đống 2005. Lực lượng lao động dồi dào còn nhàn rỗi và giá lao công rẻ, tính trung bình 1 lao động nông nghiệp mới chỉ dung đến 30-40 quỹ thời gian. Mọi lao động đều có thể tham gia trồng nấm được. Trồng nấm thu hút một lượng lớn lao động bao gồm: Gia công chế biến meo giống, chất mô, xếp mô, chăm sóc, thu mua và chế biến sản phẩm nấm… tạo công ăn việc làm cho nhiều người, đồng thời mang lại thu nhập đáng kể. Vốn đầu tư ban đầu để trồng nấm bào ngư rất ít so với việc đầu tư cho các ngành sản xuất khác. Ngành chế biến và xuất khẩu nấm đang ở bước đầu với lợi nhuận tương đối. Kỹ thuật trồng nấm bào ngư không phức tạp, một người bình thường có thể tiếp thu công việc nghệ trồng nấm trong thời gian ngắn, bên cạnh đó một đội ngũ kỹ thuật được rèn luyện trong thực tế ngày càng nhiều, sẽ là hạt nhân đẩy nghề trồng nấm lan rộng. 12 Thị trường tiêu thụ nấm bào ngư trong nước và trên thế giới tăng nhanh do sự phát triển chung của xã hội và dân số. Hiệp hội nấm ăn thế giới đã đưa ra chỉ số bình quân lượng tiêu thụ nấm ăn cho một người trong năm để đánh giá sự phát triển kinh tế xã hội quốc gia. Chính vì vậy nghề trồng nấm phát triển là một điều tất yếu. 5 1.4. Tình hình nghiên cứu nấm bào ngư hiện nay 1.4.1. Tình hình sản xuất và tiêu thụ nấm bào ngư trong nước Việc tổ chức sản xuất nấm bào ngư của các đơn vi kinh doanh về nấm còn gặp nhiều thiếu sót. Chất lượng giống nấm chưa đảm bảo từ khâu sản xuất đến quá trình nuôi trồng, bảo quản, cách sử dụng. Các loại nấm đã và đang được trồng ở Việt Nam từ nhiều nguồn gốc khác nhau. Một số được nhập từ một số nước và vùng lãnh thổ: Hà Lan, Đài Loan, Trung Quốc, Nhật Bản,…. Một số khác sưu tầm trong nước, song việc kiểm tra để đánh giá tiềm năng về năng suất từng, chất lượng từng loại, từ đó nhân giống đại trà phục vụ cho sản xuất hầu như chưa có đơn vị nào đảm trách.19 Khâu hướng dẫn kỹ thuật nuôi trồng, chế biến nấm đạt chất lượng xuất khẩu đến từng hộ gia đình không đầy đủ, do thiếu cán bộ và kỹ thuật viên non kém. Đội ngủ cán bộ nghiên cứu và làm công tác về nấm chưa được đào tạo cơ bản tại các trường đại học, có kinh nghiệm lâu năm và chuyên tâm với nghề nghiệp còn quá ít. Hợp đồng xuất khẩu thường không đủ về số lượng, chất lượng còn thấp dẫn đến mất niềm tin với khách hàng nước ngoài. Các thiết bị, công nghệ trồng nấm nhập khẩu của nước ngoài không phù hợp Việt Nam về điều kiện tự nhiên, kinh tế, xã hội. Giá thành 1kg nấm sản xuất theo công nghệ Đài Loan và Italia cao hơn nhiều so với giá thành 1kg nấm sản xuất theo công nghệ Việt Nam. Thiết bị trồng nấm chủ yếu là máy băm rơm rạ, hệ thống quạt gió, hệ thống tưới nước, máy ủ nguyên liệu không đồng bộ, chủ yếu là sản xuất thủ công nên năng suất thấp. Công nghệ nuôi trồng và hệ thống thiết bị không phù hợp với Việt Nam. 13 Công tác nghiên cứu về công nghệ chọn tạo giống, công nghệ nuôi trồng nấm bào ngư đạt năng suất cao giá thành hạ, công nghệ bảo quản, chế biến nấm đạt chất lượng ở các trung tâm nghiên cứu, cơ sở sản xuất chưa được chú trọng đúng mức. Việc tuyên truyền, phổ biến, hướng dẫn về giá trị dinh dưỡng và cách ăn nấm trên các phương tiện thông tin đại chúng còn quá ít. Để thị trường tiêu thụ nội địa được tốt, mọi người đều biết sử dụng, xem nấm ăn như là một loại thực phẩm quý thì công tác tuyên truyền là rất cần thiết. 9 1.4.2. Tình hình nghiên cứu nấm bào ngư trên thế giới Các nước trên thế giới hiện nay tập trung nghiên cứu và sản xuất nấm mỡ, nấm hương nấm sò, nấm rơm là chủ yếu. Ở khu vực Bắc Mỹ và châu Âu chủ yếu trồng nấm theo phương pháp công nghiệp. Những nhà máy có công suất từ 200 - 1000 tấnnăm được cơ giới hóa cao. Từ khâu xử lý nguyên liệu đến khâu thu hái đều do máy móc thực hiện. Thị trường tiêu thụ nấm lớn nhất trên thế giới hiện nay là Mỹ, Nhật Bản, vùng lãnh thổ Đài Loan, các nước châu Âu,….Hàng năm các nước này nhập khẩu từ Trung Quốc (nấm muối và nấm đống hộp). Tại các nước này, do khó khăn nguồn nguyên liệu và giá công lao động rất đắt nên những nguồn nuôi trồng và kinh doanh mặt hàng này đang chuyển sang các nước chậm phát triển để mua nguyên liệu và đầu tư chế biến tại chổ. Nhiều hãng sản xuất của Mỹ, Nhật, Italia, Đức vùng lãnh thổ Đài Loan đã đến Việt Nam để tìm hiểu về tình hình sản xuất, đặt vấn đề mua hàng và hợp tác đầu tư vào ngành này. 9 Hiện này thị trường tiêu thụ nấm bào ngư trong nước đang tăng rất mạnh. Các tỉnh miền Trung và Nam Bộ tiêu thụ trung bình khoảng 50 tấnnăm. Thành phố Hồ Chí Minh và Hà Nội có những lúc cao điểm đã tiêu thụ trên 30 tấnnăm. 14 1.5. Giới thiệu chung về nguồn cơ chất là thân, bẹ chuối khô 1.5.1. Thành phần hóa học có trong thân chuối Bảng 1.1. Thành phần hóa học của thân cây chuối. 11 Thành phần Phòng thí nghiệm () Viện chăn nuôi () Vật chất khô 6,6 5,7 Protein thô 0,65 0,6 Lipit thô 0,15 0,2 Xơ thô 1,62 2 Dẫn xuất không chứa N 2,2 2,3 Khoáng tổng số 1,97 0,6 Ca 0,06 0,05 P 0,03 0,01 Bảng1.2. Thành phần hóa học sợi tơ chuối. 13 Thành phần Tỉ lệ () Xenlulozo 70,2 Pectin 0,6 Lignin 5,6 Khoáng 1,6 Chất béo 0,2 1.5.2. Giới thiệu sơ lược về các thành phần chính  Xenlulozo Thành phần chủ yếu của vách tế bào thực vật và chiếm 50 tổng lượng hidrocacbon trên trái đất. Ngoài ra thực vật là nguồn chủ yếu còn có ở trong giới động vật nhưng số lượng rất ít. 15 Xenlulozo là polisaccarid liên kết với nhau bằng liên kết 1,4 glucozit, mức độ polimer hóa của xenlulozo rất cao tới 10.000-14000 đơn vị glucozaphân tử. Số lượng liên kết hidro nội và ngoại phân tử làm cho glucose có độ cứng và vững chắc.  Lignin Lignin là một polimer gốc rượu, có cấu trúc 3 chiều rất phức tạp và có nhiệm vụ nâng đỡ cấu trúc tế bào. Sau polimer phong phú trong tự nhiên được thực vật tổng hợp và là phần lớn nguồn chất thơm đa dạng trên trái đất. Sự có mặt của lignin giúp cho tế bào thực vậy cứng rắng hơn và đồng thời giúp cho giúp cho thực vật tránh được sự xâm nhiễm của vi sinh vật. Lignin được tìm thấy trong vách tế bào ở dạng phức hợp với những polisaccharide như xenlulozo và hemiceluloses, nó cũng giúp bảo vệ những polisaccharide này khỏi sự phân hủy sinh học. Lignin được sinh tổng hợp bởi sự polimer hóa các tiền chất phenylpropanoid. Có ba loại tiền chất được phân loại tùy theo số lượng nhóm methoxy trên vòng thơm. Lignin gỗ mềm chứa hầu hết những đơn vị guaiacyl (1 nhóm methoxy), các lignin khác chứa cả số lượng cân bằng guaiacyl và suringyl (2 nhóm methoxy), các lignin khác chứa cả p- hidroxyphenyl (không có nhóm methoxy), và cả hai loại kia Nguyễn Thị Thanh Kiều, 2004; J.F.Kennedy, 1989.  Pectin Pectin, còn được gọi là polysaccharides pectic, rất giàu axit galacturonic. Một số polysaccharides biệt đã được xác định và được đặc trưng trong các nhóm pectic. Homogalacturonans là chuỗi tuyến tính của α- (1-4) -linked axit D- galacturonic.galacturonans thay thế, được đặc trưng bởi sự hiện diện của saccharide dư appendant (như D-xylose hoặc D-apiose trong các trường hợp tương ứng của xylogalacturonan và apiogalacturonan) phân nhánh từ một xương sống của dư lượng axit D-galacturonic Rhamnogalacturonan tôi pectin (RG-I) chứa một xương sống của disaccharide lặp đi lặp lại: (1,4) -α-D-galacturonic nội môi chịu acid (1,2) -α-L-rhamnose. Từ nhiều dư lượng rhamnose, sidechains của đường trung lập khác nhau chi nhánh tắt. Các đường trung chủ yếu là D- 16 galactose, L-arabinose và D-xylose, với các loại và tỷ lệ của đường trung tính khác nhau với nguồn gốc của pectin. Trong sinh học thực vật, pectin bao gồm một tập hợp các polysaccharides có mặt trong hầu hết các thành tế bào sơ cấp và đặc biệt phong phú trong các bộ phận không phải gỗ của thực vật trên cạn. Pectin là một thành phần chính của phiến kính giữa, tại đó nó giúp các tế bào kết nối với nhau, nhưng cũng được tìm thấy trong thành tế bào sơ cấp. Thành phần số lượng, cơ cấu và công thức hóa học của pectin khác nhau tùy từng thực vật, thay đổi theo thời gian sống ngay trong một thực vật, và ở các bộ phận khác nhau ...

NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

1.1.1 Đặc điểm hình thái của nấm sò

- Nấm sò là tên dùng chung cho các loài nấm ăn thuộc giống Pleurotus.Tên khoa học: Pleurotus spp Ở Việt Nam, nấm sò còn có các tên gọi khác như: Nấm tai lệch, nấm xoè, nấm bào ngư, nấm bèo, nấm dai…

- Nấm sò có đặc điểm chung là tai nấm dạng phễu lệch, mọc thành cụm tập trung, mỗi cánh nấm bao gồm 3 phần: Mũ, phiến và cuống (hình 1.1)

Hình 1.1 Hình thái nấm sò

1 Mũ nấm 2 Phiến nấm 3 Cuống nấm 4 Hệ sợi nấm

- Nấm sò được chia làm hai nhóm lớn:

+ Nhóm chịu lạnh: Hình thành quả thể ở nhiệt độ 10 – 20 o C

+ Nhóm ưa nhiệt: Hình thành quả thể ở nhiệt độ 25 – 30 o C

- Có đến 50 loài nấm sò, nhưng cho đến nay chỉ có 10 loại nấm sò được trồng phổ biến Ở Việt Nam, chủ yếu trồng các loại nấm sò ưa nhiệt như: Nấm sò xám, nấm sò trắng Vì vậy, nước ta có thể trồng nấm sò quanh năm nhưng thuận lợi nhất từ tháng 9 đến tháng 4 (dương lịch) năm sau [1]

NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU18 2.1 Vật liệu, hóa chất và thiết bị

Dụng cụ và trang thiết bị

‐ Cân và cân điện tử

‐ Dao dùng để phân lập và cây nấm

Nguyên vật liệu và hóa chất

- Môi trường PGA cải tiến (môi trường phân lập và nhân giống cấp một): + Glucozo 20g

+ Nước chiết gồm: Giá đỗ 75g, khoai tây 300g, chuối…

- Môi trường hạt lúa (môi trường nhân giống cấp 2, cấp 3):

- Môi trường ra quả thể: Bệ chuối khô, cám gạo, bột ngô, vôi bột, supe lân, đường saccarozo, mùn cưa tạp

Phương pháp nghiên cứu

Mẫu được chọn là các quả thể nấm sò còn nguyên vẹn không dập nát, không nhiễm bệnh, không quá già, cũng không quá non Chúng ta có thể thu mẫu bằng cách mua từ chợ hoặc thu hái tại các nhà trồng nấm

2.2.2 Phương pháp chuẩn bị môi trường nuôi cấy

2.2.2.1 Môi trường phân lập và nhân giống cấp 1

Môi trường môi trường PGA cải tiến dùng để phân lập và nhân giống cấp 1 được tiến hành như sau: Khoai tây, chuối, giá đỗ được gọt vỏ rửa rôi cắt lát, cho vào nồi đun chung với giá đỗ, nước, đun sôi 20 phút, lọc lấy nước chiết và bổ sung nước cất cho đủ 1 lit Sau đó bổ sung agar và cao nấm men, đun cho chất này hòa tan đều vào nhau, sau đó đợi nguội đến 70 0 C (áp vào má có thể chịu được) đem rót vào trong các ống nghiệm để phân lập, cấy truyền giữ giống và nhấn giống cấp 1 Ống nghiệm rót 1/3 chiều dài ống nghiệm, không đổ môi trường khi còn quá nóng vì hơi nước đọng lại trên thành, nắp sau đó rơi xuống làm ước bề mặt thạch Cũng không đổ môi trường khi đã nguội vì khi đổ môi trường đã bị vón lại Sau đó khử trùng ở nhiệt độ 121 0 C, 1atm trong 25 phút, hấp xong để nguội

2.2.2.2 Môi trường nhân giống cấp 2

Quá trình chuẩn bị môi trường hạt (giống cấp 2) được tiến hành như sau: Lúa ngâm trong nước lạnh khoảng 12 giờ, rửa thật sạch sau đó cho vào nồi nấu đến khi hạt thóc nở bung ra thì ngừng lại, để cho hạt thóc nguội trộn đều với 1% CaCO3, cho lúa vào chai thủy tinh Tiến hành hấp khử trùng ở nhiệt độ

121 0 C, 1 atm, trong 120 phút, hấp xong để nguội

2.2.3 Phương pháp phân lập nấm bào ngư từ tổ chức mô nấm bào ngư

Phương pháp phân lập nấm bào ngư từ tổ chức mô nấm được tiến hành như sau:

Hình 2.1 Các bước phân lập nấm từ tổ chức mô của nấm bào ngư

1.Que cấy; 2.Tổ chức sẽ cấy; 3 Nấm sò; 4 Đền cồn;

5 Ống nghiệm chứa môi trường thạch nghiêng

Những mẫu nấm được chọn, cắt bỏ phần gốc rửa sạch bằng HgCl2 0,1% hoặc cồn 70 o Tiếp tục rửa lại bằng nước cất vô trùng nhiều lần, thấm khô bằng giấy đã khử trùng Tách đôi mũ nấm, dùng dao lam đã khử trùng gọt một lát mỏng (lưỡi dao chỉ gọt một đường không quay lại để tránh nhiễm trùng) Dùng tiếp các lưỡi dao gọt cho đến khi được một miếng mô nấm đã sạch lớp bẩn phía ngoài Lỏt cắt mỏng khoảng 100àm, dựng phanh cấy đưa vào ống nghiệm đựng thạch nghiêng (tiến hành trên ngọn đèn cồn)

Các bước được tiến hành trong tủ cấy vô trùng Sau đó đặc ống nghiệm đã cấy vào trong tủ ấm ở điều kiện nhiệt độ 26 o C Theo dõi sự phát triển của mẫu cấy trong ba ngày đầu Nếu mẫu cấy bị nhiễm thì xung quanh mẫu sẽ thấy khuẩn lạc nấm mốc lạ và khuẩn ty sẽ phát triển rất chậm Còn mẫu cấy đạt chất lượng sẽ có khuẩn ty màu trắng phát triển nhanh và không có biểu hiện bị nhiễm bệnh Sau ba ngày, các mẫu cấy đạt sẽ được cấy truyền qua ống mới, thu được thu được giống nấm thuần khiết làm giống Các ống giống thu được một phần được giữ làm giống gốc, một phần cấy truyền làm giống cấy cấp 1 trên môi trường thạch

Các ống giống cấp một sẽ được ủ cho tơ nấm phát triển trong điều kiện nhiệt độ 26 o C - 30 o C, quá trình ủ được tiến hành trong môi trường ánh sáng khuếch tán nhẹ 600 - 1000 lux

Tiến hành quan sát và ghi nhận kết quả kể từ khi sợi nấm bắc đầu bám vào bề mặt môi trường

Xử lý số liệu và vẽ biểu đồ mô tả

2.2.4 Phương pháp bảo quản và giữ giống ống nghiệm

Các ống giống gốc thu được từ quá trình phân lập sẽ được ủ cho tơ nấm phát triển trong điều kiện nhiệt độ 26 o C - 30 o C, quá trình ủ được tiến hành trong môi trường ánh sáng khuếch tán nhẹ 600 - 1000 lux

Sau 7 - 10 ngày khi ống giống vừa lan kín mặt thạch thì cho các ống giống vào tủ lạnh bảo quản ở nhiệt độ 4 o C Cấy truyền định kì sau 1 tháng để giữ giống

2.2.5 Phương pháp nhân giống trên môi trường hạt (giống cấp 2)

Quá trình nhân giống cấp 2 được tiến hành như sau:

Cấy giống cấp 1 vào trong chai có môi trường hạt (tiến hành cấy trong phòng cấy vô trùng)

Các bình giống cấp hai sẽ được ủ cho tơ nấm phát triển trong điều kiện nhiệt độ phòng 26 – 30 0 C, quá trình ủ tiến hành trong môi trường ánh sáng khuếch tán nhẹ 500 – 1000 lux

Theo dõi sự phát triển, loại bỏ các bịch phôi có xuất hiện khuẩn lạc của nấm mốc Thu nhận các mẫu cấy có tơ nấm phát triển bình thường để làm giống cấp hai

Thu nhận kết quả từ khi tơ nấm bung ra và bám vào môi trường đến khi ăn toàn bộ chai, đo ngẫu nhiên trong thời gian từ 3 ngày trở lên

Nhận xét đặc điểm phát triển

Xử lý số liệu, vẽ biểu đồ miêu tả

2.2.6 Phương pháp trồng thí nghiệm nấm bào ngư

2.2.6.1 Xử lý nguyên liệu trồng

‐ Thu gom thân, bẹ chuối sau khi đã thu hoạch quả tại các vườn trồng chuối

‐ Loại bỏ các phần thân bị hư hỏng, thối, nhiễm bệnh

‐ Thân, bẹ sẽ chuối thái hoặc băm nhỏ (2 – 5 cm), sau đó đem phơi khô

‐ Trộn đều với 1% vôi, nước đủ ẩm 60 - 70%, ủ từ 25 - 30 ngày trong (tiến hành đảo trộn khi ủ)

Tiến hành phối trộn với ba công thức sau

- Lô 1: 100% thân, bẹ chuối khô; 40% mùn cưa tạp; 10% cám gạo; 1% vôi

- Lô 2: 100% thân, bẹ chuối khô; 30% cám gạo hay bột ngô; 1% đường; 1% vôi

- Lô 3: 100% thân, bẹ chuối khô; 1% vôi, 1% đường; 1% supe lân

2.2.6.3 Tiến hành nuôi trồng nấm trên 3 lô đối chứng Đóng bịch cả ba lô nguyên liệu:

Nguyên liệu sau khi ủ và phối trộn, được cho vào bịch PP (18×30) khoảng 1,1 - 1,2 kg Nén bịch xong, tiến hành làm cổ bịch và nuốt bông, nút bông làm bằng giấy bìa cứng hoặc ống nhựa, đường kính 2cm, chiều cao 4cm Miệng bịch được nhét vải bông không thấm Cuối cùng dùng giấy dầu bịch miệng lại

Nguyên liệu sau khi đóng bịch sẽ được khử trùng ngay bằng cách hấp khử trùng ở áp suất 1atm, nhiệt độ 121 0 C trong hai giờ Sau khi hấp xong lấy bịch nấm ra để nguội trong 24 giờ

Tiến hành cấy giống cấp 2 vào bịch, cấy khoảng từ 30 - 40 g/bịch meo giống Chú ý: Tiến hành cấy trên ngọn đèn cồn, các vật dụng cấy đã được khử trùng ở phòng vô trùng

Hình 2.3 Cấy giống và làm nút bông

Sau khi cấy xong chuyển bịch phôi vào trong trại ủ tơ nấm trong điều kiện nhiệt độ 26 – 30 0 C, quá trình ủ tiến hành trong môi trường ánh sáng khuếch tán nhẹ 500 – 1000 lux cho đến khi tơ nấm lan kín bịch

Tiến hành quan sát và nhận xét sự phát triển của tơ nấm trên cả ba lô

KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN

Kết quả nhân giống

3.1.1 Kết quả sự lan truyền và đặc điểm của tơ nấm trên môi trường thạch nghiêng

Hình 3.1 Ống giống nấm bào ngư trên môi trường thạch nghiêng

Bảng 3.1 Tốc độ lan truyền tơ nấm trên môi trường thạch

Thời gian (ngày) Chiều dài sợi nấm (mm)

Hình 3.2 Biểu đồ sự lan truyền tơ nấm trên môi trường thạch

Từ bảng 3.1 tính được tốc độ lan truyền trung bình của tơ nấm trên môi trường thạch

‐ Trong 5 ngày đầu tơ nấm có tốc độ lan tơ chậm trung bình: 3,8 mm/ngày

Vì khi nấm mới cấy vào môi trường từ 2 - 3 ngày đầu tơ giống bị tổn thương và bắt đầu thích nghi với môi trường mới nên chưa có sự bung tơ

‐ Trong 2 ngày tiếp theo (từ ngày thứ 5 đến ngày thứ 7) tốc độ lan tơ trung bình: 4,75 mm/ngày

‐ Trong 2 ngày (từ ngày thứ 7 đến ngày thứ 9) tốc độ lan truyền tơ khá nhanh trung bình: 6.55 mm/ ngày

‐ Trong 2 ngày (từ ngày 9 đến ngày 11) tốc độ lan truyền tơ trung bình: 5,2mm/ngày

Nh ậ n xét: Sau 2 - 3 ngày đầu kể từ khi cấy giống, mẫu cấy chưa bung sợi do chúng bị tổn thương và chưa thích ứng với môi trường mới Sau ngày thứ 3 các mẫu cấy bung tơ đồng loạt Tuy nhiên các các sợi tơ nấm chưa bám vào bề mặt môi trường, sau ngày thứ năm hầu hết các sợi nấm tiếp tục phát triển và ăn sâu lên bề mặt thạch, tới ngày thứ 7 chiều dài tơ nấm đã đạt 28,5 mm Về hình thái, sợi nấm mảnh, dày và có màu trắng, có hiện tượng các sợi nấm vươn dài ra phía trước và phân nhánh

Chiều dài sợi nấm (mm)

Thời gian sinh trưởng (ngày) Đường sinh trưởng

Sau ngày thứ 7 sự phát triển của tơ nấm khá ổn định và tốc độ lan tơ nhanh trung bình khoảng hơn 6,55 mm/ ngày Tổ chức tơ nấm khá chặt chẽ khi nấm ở 9 ngày tuổi, bề mặt khẩn lạc có màu trắng ngà, ít có sự phân hóa tơ nấm như trước, xuất hiện các gai nhọn mang dịch màu nâu cam Bên trong các dịch này chứa các bào tử vô tính (oidium), bào tử nảy mầm cho lại tơ thứ cấp

Tiếp tục theo dõi đến ngày 11 sợi nấm lan nhanh trung bình 5,2 mm/ngày, một số ống thạch nghiêng tơ nấm đã bắt đầu lan kín mặt thạch Sau thời gian này tốc độ lan của tơ nấm bắt đầu chậm lại Vì vậy, nên sử dụng ống giống trong thời gian 11 ngày khi ống giống vừa lan kín mặt thạch là tốt nhất, để cấy truyền làm giống cấp hai

Cần chú ý sợi nấm phát triển trong pha sợi rất kỵ ánh sáng và tính chất này thể hiện đặc biệt rõ khi phát triển ngoài sáng thì sợi nấm ngã váng rất nhanh, đây là một hình thức tự bảo vệ của sợi nấm trước các bức xạ nhiệt của ánh sáng mặt trời Nên khi nhân giống nấm bào ngư trên môi trường thạch cần thiết phải để trong môi trường có ánh sáng khuyết tán nhẹ Như vậy, sợi tơ nấm sẽ phát triển tốt trên môi trường PGA cải tiến

Môi trường thạch PGA cải tiến là một môi trường thích hợp để phân lập và nhân giống các giống nấm khác nhau, môi trường này chứa đầy đủ các chất dinh dưỡng cần thiết cho quá trình sinh trưởng và phát triển của nấm, chính vì vậy mà nấm có thể sinh trưởng nhanh, nhưng đồng thời môi trường này cũng rất thuận lợi cho các vi sinh vật và các loại nấm dại phát triển nên khi chuẩn bị môi trường Khi cấy giống chúng ta cần chú ý khâu vô trùng thật cẩn thận để tránh giống bị tạp nhiễm

3.1.2 Kết quả lan truyền và đặc điểm của tơ nấm trên môi trường hạt lúa

Bảng 3.2 Tốc độ lan truyền tơ nấm trên môi trường hạt lúa

Thời gian (ngày) Chiều dài sợi nấm (mm)

Hình 3.4 Biểu đồ tơ nấm trên môi trường hạt

Chiều dài sợi nấm (mm)

Thời gian sinh trưởng (ngày) đường sinh trưởng

Từ bảng 3.2 chúng ta có thể thấy được tốc độ lan truyền của tơ nấm trên môi trường hạt lúa như sau:

Trong 5 ngày đầu (từ ngày 2 đến ngày 5) tốc độ lan tơ trung bình là: 7,24 mm/ngày

Trong 2 ngày (từ ngày 5 đến ngày 7) tốc độ lan tơ rất nhanh trung bình là: 11,65 mm/ngày

Trong 3 ngày tiếp theo (từ ngày 7 đến ngày 10) tốc độ lan tơ trung bình là: 8,1 mm/ngày

Nhận xét: Môi trường hạt lúa được chọn làm môi trường nhân giống cho nấm bào ngư vì thành phần môi trường dễ kiếm, dễ thực hiện và môi trường này đã được sử dụng để nhân giống thành công cho rất nhiều loài nấm khác nhau Tương tự như trong môi trường hạt trong 5 ngày đầu tiên tốc độ lan tơ diễn ra chậm do sợi nấm bị tổn thương trong quá trình cấy và phải thích nghi với môi trường mới

Sự lan truyền của tơ diễn ra mạnh và ổn định ở những ngày tiếp theo

Chúng ta sẽ nhận thấy tốc độ lan tơ trên môi trường thạch diễn ra chậm hơn trên môi trường hạt lúa khi so sánh giá trị ở hai bảng 3.1 và 3.2 tại cùng một thời điểm là ngày thứ 7, chiều dài tơ nấm trên môi trường thạch là 28,5 mm, còn chiều dài tơ nấm trên môi trường hạt lúa ở ngày thứ 7 là 59,5 mm Ngoài ra khi quan sát hình thái sợi nấm trên môi trường thạch thì thấy sợi tơ nấm dày và trắng hơn trên môi trường hạt Điều này có thể giải thích như sau: Do môi trường thạch chứa nhiều chất dinh dưỡng, các chất ở dạng đơn chất nên dễ hấp thụ như acid amin, đường đơn (glucose),… Nên giúp sợi tơ nấm bung khẻo mạnh Nhưng khoảng không gian trong ống nghiệm hẹp nên hạn chế sự bung tơ của nấm, đồng thời môi trường thạch đặc nên sợi tơ nấm chỉ bám được trên bề mặt thạch, chính vì vậy nên làm cho sự bung tơ của sợi nấm trên môi trường thạch diễn ra chậm, sợi tơ bung nhiều, dày và chồng kên nhau, phân nhánh nhiều Môi trường hạt có không gian lan sợi rộng và độ thoáng khí cao, sợi tơ của môi trường hạt có tốc độ bung tơ nhanh hơn nhưng sợi tơ mảnh và thưa hơn môi trường thạch

3.2 Kết quả nuôi trồng thử nghiệm

3.2.1 Kết quả nuôi trồng khảo nghiệm trên công thức 1

Công th ứ c 1: 100% thân, bẹ chuối khô; 40% mùn cưa tạp; 10% cám gạo,

Bảng 3.3 Tốc độ lan truyền tơ nấm trên công thức 1

Thời gian (ngày) Chiều dài sợi nấm (mm)

Nh ậ n xét: Từ bảng số liệu trên tính được tốc độ lan tơ trung bình của tơ nấm trên công thức 1:

‐ Tốc độ sinh trưởng trung bình của sợi tơ nấm trong 6 ngày đầu là: 3.1 mm/ngày

Trong những ngày mới cấy vào tơ nấm bị tổn thương nên trong 2 - 3 ngày đầu tiên nấm chưa bung tơ, những ngày tiếp theo sợi nấm bắt đầu thích nghi với môi trường nuôi cấy và bung tơ mạnh tạo ra một lớp thưa mãnh, có màu trắng lợt, sợi nấm lúc này mới chỉ ăn lan trên bề mặt cơ chất

‐ Tốc độ sinh trưởng trung bình 3 ngày tiếp theo (từ ngày 6 đến ngày 9) là: 5.13 mm/ngày

‐ Tốc độ sinh trưởng trung bình của tơ nấm ở 7 ngày tiếp theo (từ ngày 9 đến ngày 16) là: 5,43 mm/ngày Tơ nấm bung có phần nhanh hơn so với 3 ngày trước, lúc này sợi nấm bắt đầu bệnh kết, sợi nấm có màu trắng đục hơn

‐ Tốc độ sinh trưởng trung bình của tơ nấm trong 4 ngày (từ ngày 16 đến ngày 20) là: 5.15 mm/ngày Lúc này sợi nấm bắt đầu phân nhánh và sự bệnh kết ngày càng nhiều hơn lúc trước, sợi tơ dày hơn tổ chức, kết cấu chặt chẽ

Tốc độ phát triển trung bình của sợi tơ nấm sau khi cấy trong 20 ngày đầu là: 4,6 mm/ ngày Nhìn chung tơ nấm bung khá đều và mạnh, sợi tơ bung mảnh

31 và có màu trắng đục, tổ chức sợi nấm chặt chẽ Đến ngày thứ 27 trở đi thì tơ nấm bắt đầu lan kín bịch

3.2.2 Kết quả nuôi trồng khảo nghiệm trên công thức 2

Công th ứ c 2: 100% thân, bẹ chuối khô; 30% cám gạo hay bột ngô; 1% đường; 1% vôi

Bảng 3.4 Tốc độ lan truyền tơ nấm trên công thức 2

Thời gian (ngày) Chiều dài sợi nấm (mm)

Nhận xét: Dựa vào bảng số liệu có thể tính được tốc độ lan truyền tơ trung bình của công thức 2

‐ Trong 3 ngày (từ ngày thứ 6 đến ngày thứ 9): 5 mm/ngày

‐ Trong 7 ngày (từ ngày thứ 9 đến ngày thứ 16): 4,77 mm/ngày

‐ Trong 4 ngày (từ ngày thứ 16 dến ngày thứ 20): 3,42 mm/ ngày

‐ Cũng tương tự như công thức 1 trong 2 ngày đầu tơ nấm khi mới cấy vào chưa bung tơ ngay, sau 2 - 3 ngày thì tơ nấm bắt đầu bung những sơi mảnh, trắng ngắn từ 10 – 13 mm trong 6 ngày đầu

‐ Những ngày tiếp theo sợi nấm tiếp tục phát triển nhưng tốc độ lan tơ khá chậm so với lô 1 và lô 3 Sợi nấm dày hơn và có màu trắng đục hơn so với công thức thử nghiệm 1 Giải thích sự lan truyền chậm của sợi tơ nấm ở công thức 1 chủ yếu là do cơ chất thiếu độ thoáng khí hơn 2 công thức còn lại Ở công thức 1 nguyên liệu phối trộn chủ yếu là cám gạo và cám bắp, sau khi phối trộn, hấp chín cám gạo, bắp sẽ nở ra quyện lại kết dính với nguyên liệu chính là chuối làm cho cơ chất trồng khá chặt Cơ chất trồng chặt sẽ cản trở tốc độ lan truyền của tơ nấm, nhưng trong cám gạo, bắp chứa nhiều chất dinh dưỡng cung cấp cho sự phát triển của sợi nấm nên sợi nấm bung chậm, kết cấu sợi nấm chắt khỏe, số

32 lượng sợi tơ nấm bung nhiều Đến khoảng ngày 29 thì các bịch phôi nấm bắt đầu kín bịch Tốc độ lan tơ trung bình 3.7 mm/ngày trong 20 ngày sau khi cấy

3.2.3 Kết quả nuôi trồng khảo nghiệm trên công thức 3

Công th ứ c 3: 100% thân, bẹ chuối khô; 1% vôi; 1% đường; 1% supe lân

Bảng 3.5 Tốc độ lan truyền tơ nấm trên công thức 3

Thời gian (ngày) Chiều dài sợi nấm (mm)

Nh ậ n xét: Từ số liệu của bảng tính được tốc độ lan truyền trung bình của tơ nấm công thức số 3

‐ Trong 3 ngày (từ ngày thứ 6 đến ngày thứ 9): 6,8 mm/ngày

‐ Trong 7 ngày (từ ngày thứ 9 đến ngày thứ 16): 6,2 mm/ngày

‐ Trong 4 ngày (từ ngày thứ 16 đến ngày thứ 20): 5,7 mm/ngày Ở công thức thứ 3 hệ sợi nấm phát triển nhanh nhất tốc độ trung bình trong